CN112107679A - 一种大分子蛋白在抗rna病毒消毒剂中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种大分子蛋白在抗RNA病毒消毒剂中的应用，所述大分子蛋白为生物界中细菌、真菌、动物或植物分泌的天然免疫多肽和蛋白中的一种或多种，所述消毒剂作用于体表、体外环境或口鼻腔环境中，所述大分子蛋白为人RNase2和/或RNase3。该消毒剂中的RNase2和RNase3结构非常稳定，且活性持久，能在体外抑制病毒并能直接破坏病毒外膜，同时降解病毒基因组，减少体外环境中感染病毒载量；相对于现有小分子消毒剂，具有作用时间长、效率高、对人体无刺激作用、环保、可循环发挥作用等优点，有望在新型冠状病毒、流感病毒等呼吸道、胃肠道RNA病毒感染的预防方面有极大的应用前景。

Description

一种大分子蛋白在抗RNA病毒消毒剂中的应用

技术领域

本发明涉及消毒产品技术领域，特别涉及一种大分子蛋白在抗RNA病毒消毒剂中的应用，具体通过重组人天然免疫分子RNase产品用于人体表和外周环境来扩大人体先天免疫的空间和范围，达到疾病预防。

背景技术

核糖核酸酶(RNases)是一种先天生物界产生、分泌、自然界广泛存在的RNA水解酶，其中RNase A超家族是脊椎动物特异性的蛋白质家族，涵盖人类的八个功能成员。这些蛋白质由从骨髓细胞到上皮细胞的各种先天免疫细胞分泌，它们在我们体内的水平与感染和炎症过程有关，归因于分泌性RNase在身体细胞外间隙中的重要作用。这8个酶中，有的对多种普通细菌、真菌具有消毒或杀菌活性，有的对病毒具有破坏和灭活能力，它们参入应答各种损伤刺激的诱导而表达和分泌，细胞外RNase具有免疫调节和抗病菌特征，参与多种宿主防御任务，杀菌抗感染来维持体细胞和细胞环境的稳定。分泌的RNase能直接抑制和杀伤细菌、真菌和病毒，在先天免疫中起重要的作用。在试验室的条件下，人核糖核酸酶2(RNase2)和人核糖核酸酶3(RNase3)已经被证明具有直接抗RNA病毒作用。RNase2对5种亚型的呼吸道合胞病毒和副流感病毒有不同程度的破坏抑制作用，在10nM和50nM的浓度时可以减少呼吸道合胞病毒的分别为20和40倍活性；RNase3也显示出对这两类病毒灭活性能。这种抗病毒作用是通过RNase2和RNase3直接破坏RNA病毒包膜和降解RNA基因组的功能，是不可逆的。

目前新型冠状病毒(SARS-CoV-2)在全球爆发流行，导致数千万人感染，是RNA病毒的一种。目前已知有200多种人类致病的RNA病毒，这个数量还在迅速增加，常见的人类致病性RNA病毒有：艾滋病病毒(为逆转录病毒)，丙型肝炎病毒，乙型脑炎病毒，呼吸道合胞病毒、全部流感病毒、副流感病毒，鼻病毒，脊髓灰质炎病毒，柯萨奇病毒，登革热病毒，轮状病毒，SARS病毒，MERS病毒，埃博拉病毒(Ebola virus)，马尔堡病毒、新型冠状病毒等。

对于呼吸道RNA病毒的预防，主要采用使用防护装置、保持社交距离、隔离、封城以及接种疫苗等措施，这些措施的有效性不一，对疫情地区经济影响大。虽然有许多传统消毒剂，比如75％酒精、乙醚、氯仿、甲醛、含氯消毒剂、过氧乙酸和紫外线均可灭活病毒，但这些消毒剂普遍存在作用时间短、对人或物有腐蚀刺激作用等缺点，作为预防病毒感染的使用及有效性非常有限，对新冠肺炎这样的疫情难以控制，以至造成巨大生命财产的损失和经济衰退。目前尚没有任何特异、有效的RNA病毒预防产品。

从新冠疫情发病、重症和死亡的统计来看，老龄人和患有其他疾患的人由于免疫机能低下，是新冠肺炎的重灾人群，说明免疫力在个体的保护中起重要的作用。人类抗病毒依赖人体的免疫能力，有先天免疫和感染-疫苗后的获得免疫。先天免疫有细胞免疫和体液免疫，先天体液免疫由体内各种抗细菌、真菌、病毒感染的多肽、免疫因子和某些活性蛋白构成，其中就包含核糖核酸酶(RNases)。随人们老龄化，这种先天免疫能不断降低。人类核糖核酸酶的生物学特性及其在健康和疾病中作用，及其他脊椎动物核糖核酸酶家族成员享有共同的作用机制，这些作用机制以及它们的生理作用应有可能用于开发新的疗法。

尽管RNases在人类先天免疫中起重要作用，但重组RNases除了在生物医学研究方面的应用，在治疗和预防疾病的应用非常少，特别是在微生物感染和传染病的预防和消毒方面还没有任何应用。其原因在于现有技术中对这些RNases理化稳定性研究极少，加上常识观念认为酶蛋白需要在人类正常体温范围内来发挥酶的功能和活性，且蛋白在自然环境中不稳定，容易变性、腐败和降解。

发明内容

针对现有技术中的问题，本发明提供了一种大分子多肽蛋白在抗RNA病毒消毒剂中的应用，该消毒剂的有效成分为生物界中具有杀毒作用的天然免疫多肽和蛋白，其能够适用于体外环境或体表环境，有效灭活病毒，且具有作用时间长、效率高、无毒、环保等优点。

为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：

一种大分子蛋白在抗RNA病毒消毒剂中的应用，其特征在于，所述大分子蛋白为生物界中细菌、真菌、动物或植物分泌的天然免疫多肽和蛋白中的一种或多种。

在上述技术方案中，采用的是天然免疫多肽和蛋白的灭菌特征，因此，只要通过不同方法制取的大分子蛋白具有同样的结构和灭菌功能，均能够应用于消毒剂中。所述大分子蛋白的制取途径可以是从生物中直接提取蛋白、重组蛋白、纯化蛋白和合成蛋白中的一种或多种。

优选的，所述消毒剂作用于体外环境、体表环境或口鼻腔环境中。

优选的，所述消毒剂为液体制剂，或者干粉剂，所述干粉剂需要与作用环境中的水分或其他溶剂混合发挥杀毒作用；更加优选的，所述消毒剂可采用水作为溶剂。

优选的，所述大分子蛋白为人类天然免疫多肽-蛋白分子中的一种或多种。人源性的免疫多肽-蛋白分子对人体伤害更小，避免引起人体的过敏反应。

优选的，所述大分子蛋白为RNase酶家族蛋白中的一种或多种。更加优选的，所述大分子蛋白为RNase2和/或RNase3，所述RNase2和RNase3的制取途径为以下几种：从生物体内直接提取蛋白、采用重组技术制取蛋白，或者在体外通过物理、化学、生物技术合成蛋白。具体的，所述重组蛋白的制取方法为：由原核细胞或真核细胞通过重组DNA质粒表达、纯化的蛋白质，且蛋白质的纯度大于90％，浓度为1～200μM；所述真核细胞包括真菌细胞、昆虫细胞、动物细胞或人细胞；具体的，所述原核细胞可采用大肠杆菌(E.coli)，所述真核细胞可采用人293细胞。

优选的，所述消毒剂中大分子蛋白的浓度为0.01～5000nM。

优选的，所述消毒剂中还含有蛋白稳定剂、磷酸缓冲剂、防腐剂。

在上述技术方案中，所述蛋白稳定剂包括防腐和抗菌类蛋白质稳定剂、蛋白质和氨基酸类蛋白质稳定剂、抗氧化剂类蛋白质稳定剂和碳水化合物类蛋白质稳定剂中的一种或多种。具体的，所述防腐和抗菌类蛋白质稳定剂包括叠氮化钠、甘油、苯扎氯铵、苯扎溴铵和麝香草酚；所述蛋白质和氨基酸类蛋白质稳定剂包括β-丙氨酸、L-丙氨酸、L-丝氨酸、N,N-二甲基甘氨酸、L-异亮氨酸、牛磺酸、甘氨酸、白蛋白、L-精氨酸、肌氨酸、L-胱氨酸、L-脯氨酸、L-谷氨酸和L-赖氨酸；所述抗氧化剂类蛋白质稳定剂包括三羟丙基膦、三(2-羧乙基)膦盐酸盐、乙二胺四乙酸、DL-二硫苏糖醇和2-巯基乙醇；所述碳水化合物类蛋白质稳定剂包括α-乳糖一水合物、D-山梨醇和D-(+)-海藻糖二水合物。所述磷酸缓冲剂的pH为7～8，所述防腐剂为苯扎氯铵或/和山梨醇钾。

在上述技术方案中，所述RNA病毒包括而不限于呼吸道合胞病毒、全部流感病毒、副流感病毒，鼻病毒，脊髓灰质炎病毒，柯萨奇病毒，登革热病毒，轮状病毒，SARS病毒，MERS病毒，埃博拉病毒(Ebola virus)，马尔堡病毒、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)等呼吸道传染病毒，以及艾滋病病毒、丙型肝炎病毒、乙型脑炎病毒等其他RNA病毒中的一种或多种。

本发明的有益效果为：

(1)将生物界中具有灭菌、杀毒的天然免疫大分子蛋白用作体外的抗RNA病毒的消毒剂，所述大分子蛋白在体外环境中能稳定存在且具有单独或与其他物质配合抑制病毒活性的作用。通过发现RNase的天然稳定性和应用重组人RNase于人体表面和周围环境，扩大人体先天免疫的空间和范围，达到预防疾病的目的。

(2)本发明通过大量筛查生物体天然免疫蛋白，发现RNase2和RNase3在-20～37℃的环境中非常稳定，且活性能保持3个月以上；RNase2和RNase3在100℃热变性后，在室温环境下能迅速复性，恢复天然结构和功能且活性无显著差异。

(3)将含有重组RNase2或重组RNase3的消毒液喷雾至自然环境中、停留在物质表面，其活性保持时间大于3天，故反复使用会有累积效应。

(4)重组RNase2或重组RNase3在体外具有抑制病毒的作用，能直接破坏病毒外膜，同时降解病毒基因组，减少感染病毒载量，从而具有避免感染或减轻感染的临床表面。

(5)含有重组RNase2和/或重组RNase3的消毒剂能作用于众多RNA病毒，相对于现有小分子消毒剂，具有作用时间长、效率高、对人体无刺激作用、环保、可循环发挥作用等优点，消除病毒90％以上；既可以采用喷雾的形式，用于体表、体外环境中，破坏病毒外膜和基因组，能降解灭活病毒，减低病毒的感染性10倍以上，具有降低病毒载量和抗感染作用；还可以用于流感、当前的新冠病毒感染预防。

(6)这种消毒剂比目前的小分子消毒剂优越在于它可以用于人群聚集的地方，比如运用中的餐馆、影院、公交、办公室、门诊病房等，不会有气味、刺激、毒性和腐蚀等不良副作用。可以在人体体表、口鼻腔、甚至气管、肺泡、食管肠道(RNase的天然环境)发挥作用。特别适用于老年、有其他慢性疾患而先天免疫力低下的人群及其所在场所。

附图说明

图1为人RNase2分泌蛋白的3D结构示意图；

图2为重组RNase2和RNase3的蛋白分泌蛋白的氨基酸序列和比较图；

图3为重组RNase2在体外活性随温度变化图；

图4为消毒液中重组RNase2加热变性及复性后降解RNA的凝胶电泳图；

图5为不同保存状态下消毒液中重组RNase的SDS-PAGE图；

图6为保存3个月的消毒液中重组RNase降解RNA的凝胶电泳图；

图7为不同暴露时间下的消毒液中重组RNase2和重组RNase3降解RNA的凝胶电泳图；

图8为呼吸道合胞病毒的结构示意图；

图9为新型冠状病毒的结构示意图；

图10为重组RNase2灭活新型冠状病毒的示意图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。本发明中所用的实验材料如无特殊说明，均为市场购买得到。

Uniprot数据库中人源性RNase2和RNase3的记录见下表：

上述蛋白在人体内具有酶的作用，能够催化以下反应：

An(RNA)containing cytidine+H(2)O＝an(RNA)-3'-cytidine-3'-phosphate+a5'-hydroxy-ribonucleotide-3'-(RNA).

An(RNA)containing uridine+H(2)O＝an(RNA)-3'-uridine-3'-phosphate+a5'-hydroxy-ribonucleotide-3'-(RNA).

RNase2和RNase3是人体产生天然分泌蛋白(结构如图1所示)，分泌后的蛋白分子量分别为134和133个氨基酸(氨基酸序列如图2所示)。它们主要自然分布在全身各器官组织的细胞外，也通过泪液，唾液，粘液和汗液分泌到体表和口腔、肠道、尿道，作为先天免疫成分。

实施例1

一种作用于体外或体表的、针对RNA病毒的消毒剂，该消毒剂的有效成分为重组RNase2和/或RNase3。

重组RNase2和重组RNase3为重组人源性蛋白，具体可由E.coli(大肠杆菌)、Sf9昆虫细胞或人293细胞通过重组DNA表达、纯化的蛋白质，且蛋白质的纯度大于90％，浓度为1～200μM。重组RNase2和重组RNase3的制备为现有技术，在此不再做过多的赘述。

采用水做为溶剂，其中重组RNase2和/或RNase3的浓度为0.01～5000nM。

为了保持长期的活性、提高消毒剂的使用效果，还可以在消毒剂中添加蛋白稳定剂、磷酸缓冲剂、防腐剂。所述蛋白稳定剂包括防腐和抗菌类蛋白质稳定剂、蛋白质和氨基酸类蛋白质稳定剂、抗氧化剂类蛋白质稳定剂和碳水化合物类蛋白质稳定剂中的一种或多种，所述磷酸缓冲剂的pH为7～8，所述防腐剂为苯扎氯铵或/和山梨醇钾。

能被上述消毒液在体外或体表抑制的RNA病毒包括但不限于以下病毒：预防呼吸道合胞病毒、全部流感病毒、副流感病毒，鼻病毒，脊髓灰质炎病毒，柯萨奇病毒，登革热病毒，轮状病毒，SARS病毒，MERS病毒，埃博拉病毒(Ebola virus)，马尔堡病毒、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)等呼吸道传染病毒，或艾滋病病毒(为逆转录病毒)，丙型肝炎病毒，乙型脑炎病毒。

由于有效成分为重组的RNases，调整防腐剂、稳定剂以及溶剂的种类和用量，可以使得消毒液应用于任何场景，如食品、日常用品、体表等，甚至可以雾化状态(气溶胶的形式)进入人的口、鼻、眼等部分来降低病毒。

需要说明的是，本发明使用的重组RNase2和重组RNase3既有申请人自己按照现有技术制备的，又有部分购于多家公司的，检测出来的RNase2和RNase3性质并非针对于某一家某一种产品，不具备偶然性。

实施例2消毒液的稳定性验证

将实施例1中的抗RNA病毒消毒液应用于体表或体外时，首先应该保证重组RNase2和重组RNase3具有足够的稳定性、能够适当长期的保存，能在多种环境中不容易被自然环境和条件迅速破坏、降解、灭活，能与其他辅助成分混合。

(1)重组RNase2和重组RNase3的热稳定性

多种温度条件下，测试RNase2的核糖核酸酶活性变化。核糖核酸酶测定：催化反应将40mg酵母tRNA作为底物加入0.8mL反应液中(含40mM磷酸钠，pH 7.0和10mL rhRNase2，或rRNaseH，或缓冲液对照)。终止反应是通过在冰冷的3％高氯酸中加入40nM硝酸镧，在给定的时间点停止反应。之后，离心，分光光度法以260nM定量分析残留在上清液中的酸溶性核糖核苷酸。所有时间点均一式三份进行测试。计算包括以下近似值：tRNA的平均分子量(Mr)为Mr＝28,100(75-90核糖核苷酸/tRNA分子1Mr 341/核糖核苷酸)，在260nm处的吸光度为1.0，相当于40mg RNA。以0℃所测核糖核酸酶的活性为100％，后续各温度点所测核糖核酸酶的活性相对与0℃所测活性，均转换成百分比。

检测结果如图2所示，从0℃～80℃RNase2有良好的活性，而且活性随温度增高至50℃而提高，随后温度提高，活性下降。说明RNase2在人类日常的生活环境温度中，都能具有良好的活性功能。

(2)重组RNase2的复性

将含有RNase2的消毒液(RNase2浓度为2nM)，加热至100℃变性20min，在室温中复性后，降解真核细胞总RNA。检测结果如图4所示，其中，泳道1、2、3为未被RNase2消化的真核细胞总RNA放在室温10分钟，泳道4、5、6为真核细胞总RNA经RNase2在室温(25℃)消化10分钟，泳道7、8、9为总RNA经RNase2 100℃(变性后)消化10分钟，泳道10、11、12为总RNA经热变性-复性后的RNase2在室温(25℃)消化10分钟。由图可知，泳道1、2、3和泳道7、8、9中的RNA未被降解，说明加热至100℃的RNase2失去降解RNA的功能；泳道4、5、6和泳道10、11、12中的RNA已被降解，说明消毒液中的RNase2具备降解RNA的功能，且热变性后的RNase2可以自行恢复结构和功能。

(3)消毒液的保存稳定性

将含有RNase2或RNase3的消毒液，其中RNase2或RNase3的浓度为2-50nM，存放在不同温度下，保存一段时间后浓缩，进行检测，每条泳道加样量约为1μg。

如图5所示，泳道1-6为分别为RNase2存放于-80℃，-20℃，4℃，25℃，37℃，-80℃保存3个月；泳道7-11为分别为RNase3存放于-20℃，4℃，25℃，37℃，-80℃保存3个月。从图可知，RNase2和RNase3在上述温度中存放3个月后，其蛋白没有被降解，活性没有显著的差异。

将含有RNase2或RNase3的消毒液分别在不同温度存放3个月后，再消化真核细胞总RNA，反应条件为：37℃，30min，RNase用量约为0.5-1μg。

结果见图6，其中，泳道1-6中所用的重组RNase2依次为存放于-80℃，-20℃，4℃，25℃，37℃，-80℃中3个月的RNase2；泳道7-11所用的RNase3依次为存放于-20℃，4℃，25℃，37℃，-80℃保存3个月的RNase3。由图可知，重组RNase2和重组RNase3在上述温度下长期保存后，降解RNA的功能无明显差异。

上述检测结果说明消毒液中的重组RNase2和重组RNase3在常用温度下(-20～37℃)能长期保存，且保存期限大于3个月。

(4)消毒液暴露在自然环境中的活性

用移液器将5μL 5nM的重组RNase2或重组RNase3消毒液滴到组织学玻璃片表面，敞开放置在10人30平米大小的办公区，于0、0.5、2、8、24和72小时后回收RNases。在回收的管子里加入真核细胞总RNA，37℃反应1小时后，再进行凝胶电泳。

检测结果如图7所示，泳道R为未消化的真核细胞总RNA；泳道1、3、5、7、9和11分别为不同暴露时间的重组RNase2消化后的总RNA，且重组RNase2暴露放置时间依次为0、0.5、2、8、24和72小时；泳道2、4、6、8、10、12分别为不同暴露时间的重组RNase3消化后的总RNA，且重组RNase3暴露放置时间0、0.5、2、8、24、72小时；泳道C为暴露放置72小时的空白玻璃片用回收液清洗、消化的真核细胞总RNA。

重组人源性RNases能自然形成4个二硫键，稳定RNase的结构和功能。前面实验已证明RNase2和RNase3可以在37℃存放3个月以上，其蛋白的完整性和功能都保持良好。而本实验暴露放置24-72小时后有RNase的功能有所减弱。这种减弱，可能是由于暴露的水溶液蒸发后，RNases随气流飘散，也有可能小部分被环境中各种物理、化学、生物因素破坏降解，但飘散的和残留的可仍具有RNase的活性。因此，这些RNases能更长时间地、完整地保留在环境中，起到杀灭病毒的作用。

实施例3消毒液的抗RNA病毒能力

用不同剂量的重组RNase2处理相同量的呼吸道合胞病毒和副流感病毒(PIV)，再用处理后的病毒感染培养细胞，检测活性病毒数量，结果如下表所示(所有试验重复3次，每次2份，结果为平均数，±标准差)：

从上表可知，活性病毒的数量随RNase2用量的增加而降低，证明RNase2对两中病毒都有抑制破坏作用，但病毒对RNase2的敏感性不同。其推测原因为：呼吸道合胞病毒和副流感病毒在双层脂质膜下方均有Matrix Proteins(如图8所示)，是病毒结构组成的关键蛋白，在组装病毒、保护病毒外膜和基因组方面起重要的作用；呼吸道合胞病毒与副流感病毒有不同的Matrix protein，分别是195氨基酸和353氨基酸，可能导致了RNase2抗病毒效率不同。

研究表明，RNase2和RNase3对病毒的灭活作用与RNases的酶活性有关，且RNase2和RNase3的特殊氨基酸序列有破坏病毒细胞膜的作用，再加上RNases能够降解RNA基因组的作用，因此含有RNase2和RNase3的消毒液能够有效灭活RNA病毒。这种作用对于RNA病毒的种类是非特异性，具有广谱灭活RNA病毒的效果。然而，受各种病毒特殊结构的影响，RNase2和RNase3对它们的灭活效率有所不同。

实施例4消毒液与新型冠状病毒(SARS-CoV-2)

现有研究表明，在新冠肺炎患者体内，嗜酸性粒细胞减少，特别是在感染严重急性呼吸综合症新冠病毒感染期间，嗜酸性粒细胞显著减少，并与急性呼吸衰竭相关。而且，随着重症新冠病人的改善，嗜酸性粒细胞计数明显恢复。虽然目前尚不清楚SARS-CoV2及新冠肺炎与嗜酸性粒细胞减少因果关系，但这些现象指向嗜酸性粒细胞数量与新冠肺炎病情负相关的关系。

RNase2和RNase3在血液中主要分布在嗜酸性粒细胞中[ref.1,2]。它们具有直接抗病菌作用，还具有免疫调节和细胞趋化的作用。新冠肺炎嗜酸性粒细胞减少，表明RNase2和RNase3的减少，或指向RNase2和RNase3的减少与新冠病毒感染和新冠肺炎的病情加剧有关。

而且，鉴于呼吸道合胞病毒与副流感病毒对RNase2的抗病毒敏感性不同在于它们的Matrixprotein性质不同(实施例3)，即matrix protein的性质决定病毒对RNase2的耐受性。而冠状病毒，即SARS、MERS和SARS-CoV-2(结构如图9所示)，没有Matrix protein。因此，有可能使得这些冠状病毒对RNase2的作用非常敏感，即RNase2对冠状病毒可能会有较强的灭活作用。RNase2灭活新型冠状病毒的示意图可参考图10。

以上所述本发明的具体实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何根据本发明的技术构思所做出的各种其他相应的改变与变形，均应包含在本发明权利要求的保护范围内。

参考文献

[1]Domachowske JB,Bonville CA,Dyer KD,Rosenberg HF.Evolution ofantiviral activity in the ribonuclease A gene superfamily:evidence for aspecific interaction between eosinophil-derived neurotoxin(EDN/RNase 2)andrespiratory syncytial virus.Nucleic Acids Res.1998Dec 1；26(23):5327–5332.doi:10.1093/nar/26.23.5327.

[2]Domachowske JB,Dyer KD,Adams AG,Leto TL,Rosenberg HF.Eosinophilcationic protein/RNase 3is another RNase A-family ribonuclease with directantiviral activity.Nucleic Acids Res.1998；26(14):3358-3363.doi:10.1093/nar/26.14.3358.

Claims (10)

1.一种大分子蛋白在抗RNA病毒消毒剂中的应用，其特征在于，所述大分子蛋白为生物界中细菌、真菌、动物或植物分泌的天然免疫多肽和蛋白中的一种或多种，所述消毒剂作用于体外环境、体表环境或口鼻腔环境中。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述大分子蛋白为人类天然免疫多肽-蛋白分子中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述大分子蛋白为RNase酶家族蛋白中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述大分子蛋白为RNase2和/或RNase3，所述RNase2和RNase3的制取方法为：从生物中直接提取、采用重组技术制取蛋白，或在体外通过物理、化学、生物技术合成蛋白。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述重组制取RNase2和RNase3的方法具体为：由原核细胞或真核细胞通过重组DNA表达、纯化的蛋白质，且纯度大于90％；所述真核细胞包括真菌细胞、昆虫细胞、动物细胞或人细胞。

6.根据权利要求1或4所述的应用，其特征在于，所述消毒剂为液体制剂；或所述消毒剂为干粉剂，且所述干粉剂与作用环境中的溶剂混合后发挥作用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述消毒剂的溶剂为水。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述大分子蛋白的浓度为0.01～5000nM。

9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述消毒剂中还含有蛋白稳定剂、缓冲剂、防腐剂。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述蛋白稳定剂为叠氮化钠、甘油、苯扎氯铵、苯扎溴铵、麝香草酚、β-丙氨酸、L-丙氨酸、L-丝氨酸、N,N-二甲基甘氨酸、L-异亮氨酸、牛磺酸、甘氨酸、白蛋白、L-精氨酸、肌氨酸、L-胱氨酸、L-脯氨酸、L-谷氨酸、L-赖氨酸、三羟丙基膦、三(2-羧乙基)膦盐酸盐、乙二胺四乙酸、DL-二硫苏糖醇、2-巯基乙醇、α-乳糖一水合物、D-山梨醇、D-(+)-海藻糖二水合物中的一种或多种。

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