CN111825564B - 一种从渣驯中提取的化合物、制备方法及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种从渣驯中提取的化合物、制备方法及其用途，属于药物化学领域，该化合物的制备方法包括制备渣驯浸膏，制备渣驯干膏，初步分离，硫酸‑乙醇法除杂，透析袋分级，有机溶剂淋洗法分级纯化，得到的化合物Ⅰ是一种有机弱酸，固体为黄色晶体，化学式为C55H43O28N，分子量为1165，易溶于水，易溶于乙醇，具有延缓肾脏衰竭，防治慢性心力衰竭的活性。

Description

一种从渣驯中提取的化合物、制备方法及其用途
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一种从渣驯中提取的化合物、制备方法及其用途。
背景技术
藏药渣驯是具有1300多年应用历史的药物，为向阳高山岩石缝中流出的汁液干涸的硬膏，意“岩精”，功能清热，用于痛风等多种疾病的治疗。传统藏药渣驯为藏医治疗热性疾病的常用药物，尤为治疗肝、肾、胃等热性疾病及痛风症的要药，在藏医学典籍《月王药诊》中记载：“岩精能干枯脓血，主治肝病，清诸热，诱发寒症”。藏医古籍《四部医典》中记载：“炮制好的渣驯，即金精、银精、铜精、铁精等，置于铁皿内，逐渐服用，会防病延年”。
渣驯药材的形态特征如下：呈不规则块状，大小不一。表面黑色或棕褐色，凹凸不平或平滑光亮，有的具油性光泽。质硬，断面黑褐色、棕褐色、黄棕色，镶嵌有或多或少的长椭圆形或小型类圆形粪粒，有的可见石块包裹其中。气微腥臭，味辛苦。遇热遇水溶化。不同渣驯主要区别在于颜色从棕褐色至黑色；粪粒的形状如小型球形或者是长的椭圆形，以及粪粒数量的多少。
《月王药诊》记载上品杂质少而轻，下品杂质多而重。藏医认为金、银、铜、铁、铅、锡分类也与质量评判有关，以金、银为佳；《晶珠本草》记载各分类相互混杂，又分上、中、下三品或黑、白分类，其中叙述共有115种。调查表明，目前国内外均使用“铁类”渣驯，其他分类少见。目前，印度使用的渣驯大量来自于国内，藏医医生、药师及国内药商均以药材以色黑、坚硬、质重，粪粒及石块少者为佳，这与《月王药诊》描述相反。藏医以红耳鼠兔粪粒凝结物为渣驯伪品，但仍有一些药厂和藏医院使用。
藏医临床使用的渣驯膏为药材水提取物收膏而成，有干膏和浸膏两种规格。不同文献对藏药渣驯炮制加工处理方法差异主要集中在：（1）是否打碎；（2）是否用热水溶化；（3）溶化时是否加热煎煮；（4）收为干膏还是浸膏。不同的加工方法影响药材的出膏率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从渣驯提取的化合物、制备方法及其用途，该化合物是一种有机弱酸，化学式为C55H43O28N，分子量为1165，结构式如式Ⅰ所示，收率较高，具有延缓肾脏衰竭，具有防治慢性心力衰竭的作用。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
提供一种从渣驯中提取的化合物Ⅰ，上述化合物Ⅰ的结构式如下：
Figure 692421DEST_PATH_IMAGE001
。
该化合物是一种有机弱酸，固体为黄色晶体，化学式为C55H43O28N，分子量为1165，易溶于水，易溶于乙醇，具有延缓肾脏衰竭，防治慢性心力衰竭的活性。
在本发明中，上述化合物Ⅰ以下述提取方法得到：
a、制备浸膏：将渣驯药材加水进行煎煮过滤，得到过滤药液，将上述药液进行搅拌浓缩，得到浸膏；
b、制备干膏：将上述浸膏进行煎煮浓缩，并根据上述浸膏的密度变化控制煎煮温度，得到干膏半成品，将所述干膏半成品静置后取出，进行干燥，得到渣驯干膏；
c、初步分离：向上述渣驯干膏加水，搅拌均匀，用12mol/L盐酸调节pH至2-2.8进行酸化，出现黄色絮状沉淀物，离心收集沉淀，60-65℃真空干燥，得到组分F；
d、提纯：将所述组分F利用硫酸-乙醇法除杂，然后用透析袋分级得到相对分子量800-1300的组分，之后利用有机溶剂淋洗法进行分级纯化，得到上述化合物Ⅰ。
提供一种从渣驯中提取化合物Ⅰ的方法，包括：
S1、制备浸膏：将渣驯药材加水进行煎煮过滤，得到过滤药液，将所述药液进行搅拌浓缩，得到浸膏；
S2、制备干膏：将所述浸膏进行煎煮浓缩，并根据所述浸膏的密度变化控制煎煮温度，得到干膏半成品，将所述干膏半成品静置后取出，进行干燥，得到渣驯干膏；
S3、初步分离：向所述渣驯干膏加水，搅拌均匀，用12mol/L盐酸调节pH至2-2.8进行酸化，出现黄色絮状沉淀物，离心收集沉淀，60-65℃真空干燥，得到组分F；根据不同有机酸在酸中的溶解度不同，可以通过调节pH将含有目标化合物的有机酸以沉淀的形式分离出去；
S4、硫酸-乙醇法除杂：取75-86wt%浓硫酸和含水10vol%的乙醇混合均匀，得到提取液，加入装有组分F的冷凝回流反应釜中，调节温度至36-40℃，打开冷凝水，加热搅拌反应30-35min，进行抽滤，滤液在60-65℃下旋蒸浓缩后，在60-65℃下干燥得到组分DF；渣驯中含有大量水溶性无机盐，得到的组分F中混入大量的杂质-水溶性无机盐，由于目标化合物中活性官能团较多，含有大量的羟基和羧基，络合能力较强，可以与金属离子形成络合物，由于目标化合物易溶于乙醇而无机盐难溶，因此采用硫酸乙醇法除去无机盐等杂质；
S5、透析袋分级：将干燥的DF溶于水中，依次用相对分子量800、1300、2000的透析袋进行透析分级，分别得到相对分子量800以下的组分SF1，相对分子量800-1300组分SF2，相对分子量1300-2000的组分SF3，相对分子量2000以上的组分SF4；
S6、有机溶剂淋洗法分级纯化：利用有机溶剂极性差异，将透析袋分级得到的相对分子量800-1300的组分SF2按照极性大小分级纯化，得到上述化合物Ⅰ。
优选地，上述步骤S4中浓硫酸溶液与组分F的质量比为0.05-0.07:1，含水10vol%的乙醇与组分F的体积质量比为8-10mL:1g。
优选地，上述步骤S4中的提取液还包括丙三醇和姜黄素。更为优选地，上述丙三醇为组分F的0.072-0.095wt%，姜黄素为组分F的0.017-0.028wt%。丙三醇和姜黄素的存在有利于目标化合物与络合的金属离子解离，与硫酸中的氢离子结合，促进无机盐的去除，缩短纯化时间和纯化温度，减少硫酸的使用量，降低成本，同时有利于除杂后的产物溶解在乙醇中，提高除杂后的产物收率，进一步提高化合物Ⅰ的产量。
在本发明中，上述有机溶剂淋洗法分级纯化的步骤具体包括：1）取组分SF2溶于乙醇中，将SF2的乙醇溶液与过100-200目的硬质玻璃砂混合均匀，放入60-65℃的水浴中，搅拌挥发乙醇，使得SF2均匀涂于玻璃砂上，进行干燥；2）先在玻璃柱中加入环己烷，然后均匀地将干燥后的SF2加入柱中，放出环己烷，保持45-55mL/h的速度；3）依次用体积比为2:1的石油醚和乙酸乙酯混合液、体积比为1:1的石油醚和乙酸乙酯混合液、体积比为1:2的石油醚和乙酸乙酯混合液、体积比为1:3的石油醚和乙酸乙酯混合液、乙酸乙酯、体积比为1:3的乙酸乙酯和乙醇混合液、体积比为1:5的乙酸乙酯和乙醇混合液淋洗至流出液无色，依次收集到流出液a、b、c、d、e、f、g，对流出液进行旋蒸干燥，分别得到GF1、GF2、GF3、GF4、GF5、GF6、GF7，GF4即为上述化合物Ⅰ。
提供一种渣驯干膏，上述渣驯干膏中含有化合物Ⅰ。
在本发明中，上述渣驯干膏的制备方法包括：
浸膏的制备：将渣驯药材加水进行煎煮过滤，得到过滤药液，将上述药液进行搅拌浓缩，得到浸膏；
干膏的制备：将上述浸膏进行煎煮浓缩，并根据上述浸膏的密度变化控制煎煮温度，得到干膏半成品，将上述干膏半成品静置后取出，进行干燥，得到渣驯干膏。
在一些实施方式中，上述渣驯干膏的制备方法包括：
浸膏的制备：将渣驯生药过筛80-120目，加入4-6倍质量的水100-120℃加热2-3h，静止沉淀后过滤得到提取液和滤渣，取滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并各次提取液，再在100-120℃下搅拌浓缩，得到密度为0.86-1.06g/mL的浸膏；
干膏的制备：第一加热段：将上述所得浸膏在100-120℃下煎煮浓缩至浸膏密度为1.16-1.21g/mL；第二加热段：将密度为1.16-1.21g/mL的浸膏在70-90℃下煎煮浓缩至浸膏密度为1.25-1.31g/mL；第三加热段：将密度为1.25-1.31g/mL的浸膏在在50-60℃下煎煮浓缩至密度为1.35-1.40g/mL，得到干膏半成品；将干膏半成品静置冷却后取出，真空干燥，得到渣驯干膏。
优选地，真空干燥的温度为50-55℃，压力为0.02-0.05MPa。本发明制备的渣驯干膏可以替代渣驯浸膏使用，对储存和运输的空间和环境条件的要求较低，方便储存运输，还可以避免储存、运输、配制药时的损失；同时渣驯干膏的质量较为可控和均一，可以精准控制用药量，提高药品的稳定性和有效性；此外，渣驯干膏中含有的化合物Ⅰ，具有增强代谢、强心、保护胃黏膜，保护肝脏损伤的功效，可根据需要单独或与其他药物配伍用药，开拓了渣驯的新的药理活性，具有更广泛的应用范围；该渣驯干膏的制备方法简单易推广，具有很强的实用性，适合工业化生产。
本发明还提供一种具有延缓肾脏衰竭作用的药物，所述药物的药效成分包含上述的化合物Ⅰ。
本发明还提供一种防治慢性心力衰竭作用的药物，所述药物的药效成分包含上述的化合物Ⅰ。
本发明由于采用一种制备渣驯干膏的方法，因而具有如下有益效果：
1）制备得到的渣驯干膏可以替代渣驯浸膏使用，对储存和运输的空间和环境条件的要求较低，方便储存运输，还可以避免储存、运输、配制药时的损失，同时渣驯干膏的质量较为可控和均一，可以精准控制用药量，提高药品的稳定性和有效性；
2）从渣驯干膏中提取到化合物Ⅰ，该化合物是一种有机弱酸，固体为黄色晶体，化学式为C55H43O28N，分子量为1165，结构式如式Ⅰ所示，易溶于水，易溶于乙醇，具有延缓肾脏衰竭，防治慢性心力衰竭的活性。
附图说明
图1为本发明试验例1中的红外光谱图；横坐标为波数Wavenumber（单位：cm-1），纵坐标为吸光度Absorbance；
图2为本发明试验例1中的1H NMR图谱；横坐标为化学位移（ppm）；
图3为本发明试验例1中的13C NMR图谱；横坐标为化学位移（ppm）；
图4为本发明试验例2中的DF的收率和GF4的收率的测定结果；A为实施例1，B为实施例2，C为实施例3，D为实施例4，a为DF的收率，b为GF4的收率；纵坐标为收率（单位：%）；
图5为本发明试验例3中的血清肌酐的测定结果；A为空白组，B为模型组，C为对照组，D为实验组；纵坐标为血清肌酐的含量（单位：umol/L）；
图6为本发明试验例3中的血清尿素氮的测定结果；A为空白组，B为模型组，C为对照组，D为实验组；纵坐标为血清尿素氮的含量（单位：mmol/L）；
图7为本发明试验例3中的尿酸的测定结果；A为空白组，B为模型组，C为对照组，D为实验组；纵坐标为尿酸的含量（单位：umol/L）；
图8为本发明试验例4中的脑钠肽的测定结果；A为空白组，B为模型组，C为对照组，D为实验组；纵坐标为脑钠肽的含量（单位：pg/mL）；
图9为本发明试验例4中的内皮素的测定结果；A为空白组，B为模型组，C为对照组，D为实验组；纵坐标为内皮素的含量（单位：pg/mL）；
图10为本发明试验例4中的血管紧张素Ⅱ的测定结果；A为空白组，B为模型组，C为对照组，D为实验组；纵坐标为血管紧张素Ⅱ的含量（单位：pg/mL）。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述：
实施例1：
1、一种从渣驯中提取的化合物Ⅰ的方法，包括：
1.1浸膏的制备：将4kg渣驯生药过筛80目，加入5倍质量的水100℃加热2h，静止沉淀后过滤得到提取液和滤渣，取滤渣按上述条件重复提取3次，合并各次提取液，再在110℃下搅拌浓缩，得到密度为1.03g/mL的浸膏。
1.2干膏的制备：第一加热段：将上述所得浸膏在100℃下煎煮浓缩至浸膏密度为1.17g/mL；第二加热段：将密度为1.17g/mL的浸膏在82℃下煎煮浓缩至浸膏密度为1.29g/mL；第三加热段：将密度为1.29g/mL的浸膏在在60℃下煎煮浓缩至密度为1.38g/mL，得到干膏半成品；将干膏半成品静置冷却后取出，在55℃、0.03MPa下真空干燥，得到渣驯干膏。
1.3初步分离：向所述渣驯干膏加5倍质量的水，搅拌均匀，用12mol/L盐酸调节pH至2.0进行酸化，出现黄色絮状沉淀物，离心收集沉淀，60℃真空干燥，得到组分F。
1.4硫酸-乙醇法除杂：取75wt%浓硫酸和含水10vol%的乙醇混合均匀，得到提取液，加入装有组分F的冷凝回流反应釜中，调节温度至38℃，打开冷凝水，加热搅拌反应32min，进行抽滤，滤液在60℃下旋蒸浓缩后，在60℃下干燥得到组分DF；其中，浓硫酸与组分F的质量比为0.06:1，含水10vol%的乙醇与组分F的体积质量比为8mL:1g。
1.5透析袋分级：将干燥的DF溶于蒸馏水中倒入相对分子量800的透析袋，以蒸馏水作为透析液，每次透析18h，更换透析液，透析三次，合并袋外透析液并浓缩干燥，得到相对分子量800以下的组分SF1，将袋内保留液加入相对分子量1300的透析袋，重复上述透析步骤，袋外透析液浓缩干燥后得到相对分子量800-1300的组分SF2，将袋内保留液加入相对分子量2000的透析袋，重复上述透析步骤，袋外透析液浓缩干燥后得到相对分子量1300-2000的组分SF3，将袋内保留液浓缩干燥后得到相对分子量2000以上的组分SF4。
1.6有机溶剂淋洗法分级纯化：将2g组分SF2溶于200mL乙醇中，将SF2的乙醇溶液与200g过100目的硬质玻璃砂混合均匀，放入60℃的水浴中，搅拌挥发乙醇，使得SF2均匀涂于玻璃砂上，进行干燥；先在玻璃柱中加入300mL环己烷，然后均匀地将干燥后的SF2加入柱中，放出环己烷，保持50mL/h的速度；依次用体积比为2:1的石油醚和乙酸乙酯混合液、体积比为1:1的石油醚和乙酸乙酯混合液、体积比为1:2的石油醚和乙酸乙酯混合液、体积比为1:3的石油醚和乙酸乙酯混合液、乙酸乙酯、体积比为1:3的乙酸乙酯和乙醇混合液、体积比为1:5的乙酸乙酯和乙醇混合液淋洗至流出液无色，依次收集到流出液a、b、c、d、e、f、g，对流出液进行旋蒸干燥，分别得到GF1、GF2、GF3、GF4、GF5、GF6、GF7，GF4即为化合物Ⅰ。
实施例2：
1.4硫酸-乙醇法除杂：取75wt%浓硫酸和含水10vol%的乙醇混合均匀，加入丙三醇和姜黄素搅拌均匀，得到提取液，加入装有组分F的冷凝回流反应釜中，调节温度至38℃，打开冷凝水，加热搅拌反应32min，进行抽滤，滤液在60℃下旋蒸浓缩后，在60℃下干燥得到组分DF；其中，浓硫酸与组分F的质量比为0.06:1，含水10vol%的乙醇与组分F的体积质量比为8mL:1g，丙三醇为组分F的0.078wt%，姜黄素为组分F的0.023wt%。其余部分和实施例1完全一致。
实施例3：
1.4硫酸-乙醇法除杂：取75wt%浓硫酸和含水10vol%的乙醇混合均匀，加入丙三醇搅拌均匀，得到提取液，加入装有组分F的冷凝回流反应釜中，调节温度至38℃，打开冷凝水，加热搅拌反应32min，进行抽滤，滤液在60℃下旋蒸浓缩后，在60℃下干燥得到组分DF；其中，浓硫酸与组分F的质量比为0.06:1，含水10vol%的乙醇与组分F的体积质量比为8mL:1g，丙三醇为组分F的0.078wt%。其余部分和实施例1完全一致。
实施例4：
1.4硫酸-乙醇法除杂：取75wt%浓硫酸和含水10vol%的乙醇混合均匀，加入姜黄素搅拌均匀，得到提取液，加入装有组分F的冷凝回流反应釜中，调节温度至38℃，打开冷凝水，加热搅拌反应32min，进行抽滤，滤液在60℃下旋蒸浓缩后，在60℃下干燥得到组分DF；其中，浓硫酸与组分F的质量比为0.06:1，含水10vol%的乙醇与组分F的体积质量比为8mL:1g，姜黄素为组分F的0.023wt%。其余部分和实施例1完全一致。
试验例1：
GF4的结构表征：
1.1元素分析及含氧官能团含量的测定：
碳、氢、氮、硫四种元素由Vario Macro Cube元素分析仪测出，O含量通过差减法得到。
酚羟基和羧基是化合物中主要的酸性含氧官能团，含氧官能团的含量使用化学滴定法来测算。总酸性官能团的含量使用Ba(OH)2法来测定，羧基的含量通过乙酸钙法来测定，总酸性官能团含量减去羧基含量得到的是酚羟基的含量。表1为GF4的元素分析结果，表2为GF4的酸性官能团含量的测定结果。
表1 GF4的元素分析结果
Figure 409841DEST_PATH_IMAGE002
表2 GF4的酸性官能团含量的测定结果
Figure 742733DEST_PATH_IMAGE003
HRESI-MS(m/z)给出GF4的准分子离子峰为：1165.20，根据表1的元素分析结果及表2的酸性官能团含量的测定结果，可以确定其分子式为C55H43O28N。
1.2红外光谱分析
按100:1的质量比例将无水溴化钾和1mg测试样品混合后研磨，用压片机压片后，用VERTEX 80v的傅里叶变换红外光谱仪在4000-500cm-1的波数范围内扫描得到红外光谱。红外光谱图见图1。
由图1可知，在3423.7cm-1处出现的强而宽的吸收峰为有氢键缔合的O-H伸缩振动峰，在2985.8cm-1和2932.4cm-1处出现的吸收峰为饱和碳的C-H伸缩振动峰，在1731.5cm-1处出现的强吸收带为羧基或羰基的C=O伸缩振动峰，在1622.1cm-1处出现的吸收峰为苯环C=C的伸缩振动峰，在1411.0cm-1处出现的吸收峰为羟基O-H面内弯曲振动峰，在1196.8cm-1处出现由酚羟基、醇羟基、醚类的C-O伸缩振动或脂肪酸酯C-O-C伸缩振动引起的吸收峰，在1044.9cm-1处出现由醇羟基的C-OH伸缩振动，在866.3cm-1处出现的较强的吸收峰主要为苯环四取代的C-H面外变形振动。
1.3 1H NMR分析
取0.5mL DMSO-d6溶液，将GF4加入溶液中直至不再溶解。在干燥的环境下，将溶液转移到核磁管中，用Bruker AVANCE III 600 MHz核磁共振谱仪测定1H NMR。1H NMR图谱见图2。GF4的1H NMR数据分析见表3。
表3 GF4的1H NMR数据分析
Figure 557105DEST_PATH_IMAGE004
其中，化合物中的质子归结为以下几类：化学位移为0.8~4.5ppm，归属于脂肪族中甲基、亚甲基和次甲基质子，在0.8~4.5ppm又可以细分为化学位移为0.8~1.4ppm的脂肪族终端的甲基质子、化学位移为1.4~1.8ppm的脂肪族中β位及β位以外连有芳环和羰基等极性官能团的质子、化学位移为1.8~3.3ppm的脂肪族中α位连有芳环和羰基等极性官能团的质子和化学位移为3.3~4.5ppm的α位连有O或N、S等杂原子等碳上的质子；化学位移为4.5~6.5ppm的酚羟基上的质子；化学位移为6.5~9.0ppm的芳香环或杂芳环上的质子；化学位移为9.5~14.0ppm的羧基质子；化学位移为4.0-6.5ppm的连接芳香环的氨基质子；化学位移为15.0~19.0ppm的烯醇质子。
1.4 13C NMR分析
取0.5mL DMSO-d6溶液，将GF4加入溶液中直至不再溶解。在干燥的环境下，将溶液转移到核磁管中，用Bruker AVANCE III 600 MHz核磁共振谱仪测定13C NMR。13C NMR图谱见图3。GF4的13C NMR数据分析见表4。
表4 GF4的13C NMR数据分析
Figure 317251DEST_PATH_IMAGE005
表4中，序号1、3、4碳原子归属于亚甲基碳和次甲基碳，序号2碳原子归属于氧接甲基碳，序号5、6、7碳原子归属于氧接次甲基碳，序号8、9碳原子归属于炔烃碳，序号10、18、31碳原子归属于烯烃碳，序号11、12、16、17、19、23、24、26、29碳原子归属于质子化芳碳，序号13、14、15、20、21、22、25、27、28、30、33碳原子归属于芳香桥碳，序号46碳原子归属于氧接烯烃碳，序号32、34、38、40、41碳原子归属于氧接芳碳，序号36、37、42、43、44、45碳原子归属于羧基碳，序号39、47、48、49、50碳原子归属于羰基碳，序号35碳原子归属于氨基接芳碳。
通过红外光谱、1H NMR、13C NMR确定该分子式为C55H43O28N的化合物GF4（化合物Ⅰ）的结构式为：
Figure 584284DEST_PATH_IMAGE006
。
试验例2：
收率的测定：
分别对上述实施例获得的组分F、DF、GF4进行称重，计算DF的收率和GF4的收率。DF的收率ηDF及GF4的收率ηGF4的计算公式如下：
ηDF=(mDF/mF)×100%
ηGF4=(mGF4/mF)×100%
式中，mDF为DF的质量；
mGF4为GF4的质量；
mF为F的质量。DF的收率和GF4的收率的测定结果见图4。
由图4可以看出，实施例2的DF的收率和GF4的收率明显高于实施例1、实施例3、实施例4，这说明，丙三醇和姜黄素的存在有利于目标化合物与络合的金属离子解离，与硫酸中的氢离子结合，促进无机盐的去除，缩短纯化时间和纯化温度，减少硫酸的使用量，降低成本，同时有利于除杂后的产物溶解在乙醇中，提高除杂后的产物收率，进一步提高化合物Ⅰ的产量。
试验例3：
3.1肾衰竭模型的制作：采用腺嘌呤灌胃联合UUO的方法建立大鼠肾衰竭模型。在实验开始的第1-14d进行腺嘌呤150mg/kg灌胃；第15d，行左侧输尿管结扎手术，腹腔注射氯胺酮和地西泮等体积混合液3mg/kg，麻醉后，将大鼠固定于手术板上，取仰卧位，常规消毒，左腹部切口1-1.5cm，逐层切开皮肤、肌肉，暴露左肾，钝性分离肾周脂肪，沿肾门部位寻找输尿管，在输尿管上、下段结扎，并于中间处剪断；分层缝合切口，予每只大鼠青霉素钠(20万U)腹腔注射，连续3d，将建模成功后的大鼠随机分为3组，每组20只：模型组、实验组、对照组。空白组20只大鼠在实验开始的第1-14d进行蒸馏水灌胃，第15d，手术时仅暴露左侧输尿管，缝合切口。
3.2给药：空白组和模型组大鼠给予蒸馏水20mL/kg灌胃，每日1次，连续3周。实验组大鼠给予化合物Ⅰ溶液灌胃（化合物Ⅰ溶液的制备方法为：取10mg化合物Ⅰ溶解于20mL蒸馏水中，配置成0.5g/L的化合物Ⅰ溶液），化合物Ⅰ给药量为每天10mg/kg，每日1次，连续3周。对照组给予EM悬浊液灌胃（EM悬浊液的制备方法为：取50mg购自扬子江药业集团江苏制药股份有限公司的马来酸依那普利溶解于50mL蒸馏水中，配置成1g/L的EM悬浊液），马来酸依那普利的给药量为每天20mg/kg，每日1次，连续3周。
3.3指标检测：药物干预后第3周末，经腹腔注射氯胺酮麻醉，心脏穿刺处死，采集血液样本和肾组织而进行各项指标的检测。采用全自动生化分析仪检测大鼠血清生化指标，包括血清肌酐Scr、血清尿素氮BUN、尿酸UA。血清肌酐的测定结果见图5，血清尿素氮的测定结果见图6，尿酸的测定结果见图7。
由图5、图6、图7可以看出，采用化合物Ⅰ给药的实验组的大鼠血清中血清肌酐、血清尿素氮、尿酸的含量与模型组相比均明显降低，且血清肌酐和尿酸含量的下降幅度高于马来酸依那普利给药的对照组，这说明，化合物Ⅰ具有较好的延缓肾衰竭的作用。
试验例4：
4.1慢性心衰模型的制作：采用给腹腔注射盐酸阿霉素(ADR)的方法复制心衰大鼠模型，按第1次和第2次剂量为每天1.0mg/kg，第3次和第4次剂量为每天2.0mg/kg，第5次和第6次剂量为每天1.0mg/kg，第7次和第8次剂量为每天2.0mg/kg，对大鼠进行隔日腹腔注射，共给药8次，累计给药剂量12mg/kg。给药期间，每两次给药结束后，即称体重1次，并和前次重量进行对比，同时观察大鼠的外表体征及行为方式的改变，15天后模型制作完成，随后将建模成功的大鼠进行随机分组，每组20只：模型组、实验组、对照组。空白组20只大鼠，则按照同样的规律每日注射2mL生理盐水。
4.2给药：空白组和模型组给予生理盐水30mL/kg灌胃，每日一次，共4周。实验组给予化合物Ⅰ溶液灌胃（化合物Ⅰ溶液的制备方法为：取80mg化合物Ⅰ溶解于30mL生理盐水中，配置成化合物Ⅰ溶液），化合物Ⅰ的给药量为80mg/kg，每日一次，共4周。对照组给予卡托普利溶液灌胃（卡托普利溶液的制备方法为：100mg取卡托普利溶解于30mL生理盐水中，配置成卡托普利溶液），卡托普利的给药量为100mg/kg，每日一次，共4周。观察整个过程中实验动物的一般情况，和用药前进行对比，药物干预疗程结束后，进行标本采集。各组大鼠药物干预疗程结束后，于末次给药后6小时后，以25wt%乌拉坦溶于生理盐水中，以5mL/kg的剂量，通过腹腔注射，麻醉大鼠，仰卧固定，经腹主动脉取血后，分装于抗凝管和非抗凝管，以待检测。
4.3指标检测：采用酶联免疫吸附试验法测定大鼠血浆中的血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素（ET）和脑钠肽（BNP）的含量。脑钠肽的测定结果见图8，内皮素的测定结果见图9，血管紧张素Ⅱ的测定结果见图10。
由图8、图9、图10可以看出，采用化合物Ⅰ给药的实验组的大鼠血浆中脑钠肽、内皮素、血管紧张素Ⅱ的含量与模型组相比均明显降低，且下降幅度与卡托普利给药的对照组相近，这说明，化合物Ⅰ能够降低BNP、ET、AngⅡ神经内分泌指标的含量，阻止神经内分泌的过度激活，具有防治慢性心力衰竭的作用。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

Claims (3)

1.一种从渣驯中提取有效成分GF4的方法，其特征在于，包括：
S1、制备浸膏：将渣驯药材加水进行煎煮过滤，得到过滤药液，将所述药液进行搅拌浓缩，得到浸膏；
S2、制备干膏：将所述浸膏进行煎煮浓缩，并根据所述浸膏的密度变化控制煎煮温度，得到干膏半成品，将所述干膏半成品静置后取出，进行干燥，得到渣驯干膏；
S3、初步分离：向所述渣驯干膏加水，搅拌均匀，用12mol/L盐酸调节pH至2-2.8进行酸化，出现黄色絮状沉淀物，离心收集沉淀，60-65℃真空干燥，得到组分F；
S4、硫酸-乙醇法除杂：取75-86wt%的浓硫酸溶液和含水10v/v%的乙醇混合均匀，得到提取液，加入装有组分F的冷凝回流反应釜中，调节温度至36-40℃，打开冷凝水，加热搅拌反应30-35min，进行抽滤，滤液在60-65℃下旋蒸浓缩后，在60-65℃下干燥得到组分DF；
S5、透析袋分级：将干燥的组分DF溶于水中，依次用相对分子量800、1300、2000的透析袋进行透析分级，分别得到相对分子量800以下的组分SF1，相对分子量800-1300组分SF2，相对分子量1300-2000的组分SF3，相对分子量2000以上的组分SF4；
S6、有机溶剂淋洗法分级纯化：利用有机溶剂极性差异，将透析袋分级得到的相对分子量800-1300的组分SF2按照极性大小分级纯化，得到所述有效成分；
所述S6具体包括：
1）取组分SF2溶于乙醇中，将组分SF2的乙醇溶液与过100-200目的硬质玻璃砂混合均匀，放入60-65℃的水浴中，搅拌挥发乙醇，使得组分SF2均匀涂于玻璃砂上，进行干燥；
2）先在玻璃柱中加入环己烷，然后均匀地将干燥后的组分SF2加入所述玻璃柱中，放出环己烷，保持45-55mL/h的速度；
3）依次用体积比为2:1的石油醚和乙酸乙酯混合液、体积比为1:1的石油醚和乙酸乙酯混合液、体积比为1:2的石油醚和乙酸乙酯混合液、体积比为1:3的石油醚和乙酸乙酯混合液、乙酸乙酯、体积比为1:3的乙酸乙酯和乙醇混合液、体积比为1:5的乙酸乙酯和乙醇混合液淋洗至流出液无色，依次收集到流出液a、b、c、d、e、f、g，对流出液进行旋蒸干燥，分别得到GF1、GF2、GF3、GF4、GF5、GF6、GF7，GF4即为所述有效成分。
2.一种具有延缓肾脏衰竭作用的药物，其特征在于：所述药物的药效成分包含权利要求1所述的有效成分GF4。
3.一种具有防治慢性心力衰竭作用的药物，其特征在于：所述药物的药效成分包含权利要求1所述的有效成分GF4。
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