CN111758485A

CN111758485A - 一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法

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Publication number: CN111758485A
Application number: CN202010672588.0A
Authority: CN
Inventors: 陈帅; 刘新平; 姚丽华
Original assignee: Jiangxi Juncao Biotechnology Co ltd
Current assignee: Jiangxi Juncao Biotechnology Co ltd
Priority date: 2020-07-14
Filing date: 2020-07-14
Publication date: 2020-10-13

Abstract

本发明提供了一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法。该技术方案针对蛹虫草菌种设计了全新的培养基，并改进了培养工艺，使蛹虫草子实体的虫草酸含量得到显著提高。具体来看，该培养基包括：小麦45‑65份，葡萄糖1‑2份，蛋白胨0.5‑1份，水65‑95份，磷酸二氢钾0.01‑1份，硫酸镁0.005‑0.05份，甘露醇0.01‑1份；培养基经配制、灭菌后，向其中接入蛹虫草液体菌种，首先在避光条件下培养菌丝，而后进行出草管理，待蛹虫草子实体达到一定长度、具有孢子粉的品种出现细密的子囊壳时，执行采收。本发明操作简便，所得的子实体产量高、培养周期短、虫草酸含量高，而且可进行规模化的工业生产。

Description

一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法

技术领域

本发明涉及蛹虫草栽培技术领域，具体涉及一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法。

背景技术

蛹虫草，又名北虫草，北冬虫夏草。学名Cordyceps militaris(L.)link。属子囊菌亚门，核菌纲，球壳目，麦角菌科，虫草属。是一种名贵的食药用菌。现代药学研究表明，蛹虫草中含有核苷类、多糖类、虫草素、甾醇类等成分与冬虫夏草相同。对免疫系统、神经系统及心血管系统等疾病具有治疗效果，并有抗肿瘤和抗癌作用，应用前景广阔。

虫草酸，即D-甘露醇，化学分子式C₇H₁₂O₆。虫草酸含量的高低是衡量蛹虫草质量的主要标准之一，一般认为虫草酸含量高的蛹虫草药用价值也高。世界卫生组织将D-甘露醇列为重要医药列表中重要的基本药物。虫草酸能抑制各种病菌的成长，具有利尿脱水、提高血浆渗透压、镇喘祛痰、抗自由基等药理作用，虫草酸能保肺益肾、止血化痰、明显增强支气管纤毛活动的能力，调节支气管平滑肌，虫草酸能降低血液中胆固醇、甘油三脂的含量，预防血栓的形成，并对多种疾病有一定的疗效。

在这种情况下，如果能通过工艺改进来提高蛹虫草子实体中的虫草酸含量，则有望提升蛹虫草的营养价值和经济价值，然而，蛹虫草有着自身的生长代谢规律，很难使其定向累积某种特定成分；那么，如何通过外界干预手段来提升蛹虫草子实体中的虫草酸含量，成为了本领域中有待解决的技术问题。目前，在此方面尚无可以借鉴的现有技术。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，以解决常规栽培方法所得的蛹虫草子实体，其中虫草酸含量较低的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是，如何通过营养条件及栽培方法的改进，提高蛹虫草子实体中的虫草酸含量。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，在该栽培方法中，用于培养蛹虫草菌种的培养基包括以下重量份的成分：小麦45～65份，葡萄糖1～2份，蛋白胨0.5～1份，水65～95份，磷酸二氢钾0.01～1份，硫酸镁0.005～0.05份，甘露醇0.01～1份。

作为优选，所述培养基包括以下重量份的成分：小麦50份，葡萄糖1份，蛋白胨0.5份，水70份，磷酸二氢钾0.1份，硫酸镁0.05份，甘露醇0.1份。

作为优选，该方法包括以下步骤：

1)配制所述培养基，而后在121～125℃条件下灭菌20～30min；

2)待培养基自然冷却至20～30℃时，在无菌条件下接入蛹虫草菌种；

3)以温度18～22℃、空气湿度65％以上的条件，避光培养；

4)菌丝生长完成后，以温度18～22℃、空气湿度85％以上的条件，继续培养，每日通风，每日光照时长10～12h；

5)当蛹虫草子实体长度达8～10cm时，采收。

作为优选，步骤1)中，先将配制好的所述培养基分装于栽培瓶中，封口，再在121～125℃条件下灭菌20～30min。

作为优选，步骤4)中所述继续培养的时长为55～65d。

作为优选，所述蛹虫草菌种为具有孢子粉的品种；步骤5)中，当蛹虫草出现细密的子囊壳时，采收。

作为优选，还包括以下步骤6)：对步骤5)所得产物，采用55～60℃热风干燥。

作为优选，步骤2)中所述的蛹虫草菌种，是通过以下方法制备的：在无菌条件下，将蛹虫草菌接种至固体斜面培养基上，在18～22℃下避光培养7～10d；而后，转接至液体培养基中，在18～20℃下避光、震荡培养5～7d；震荡培养的频率为130～150转/min。

作为优选，所述固体斜面培养基包括以下成分：200g马铃薯的去皮、煮汁产物，葡萄糖15～20g，蛋白胨5～7g，磷酸二氢钾0.5～1g，硫酸镁0.2～0.5g，琼脂粉18～20g，水1000mL。

作为优选，所述液体培养基包括以下成分：200g马铃薯的去皮、煮汁产物，葡萄糖15～20g，蛋白胨5～7g，磷酸二氢钾0.5～1g，硫酸镁0.2～0.5g，水1000mL。

本发明提供了一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法。该技术方案针对蛹虫草菌种设计了全新的培养基，并改进了培养工艺，使蛹虫草子实体的虫草酸含量得到显著提高。具体来看，该培养基包括：小麦45-65份，葡萄糖1-2份，蛋白胨0.5-1份，水65-95份，磷酸二氢钾0.01-1份，硫酸镁0.005-0.05份，甘露醇0.01-1份；培养基经配制、灭菌后，向其中接入蛹虫草液体菌种，首先在避光条件下培养菌丝，而后进行出草管理，待蛹虫草子实体达到一定长度、具有孢子粉的品种出现细密的子囊壳时，执行采收。本发明操作简便，所得的子实体产量高、培养周期短、虫草酸含量高，而且可进行规模化的工业生产。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

实施例1

一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，包括：

(一)菌种准备

低温保藏蛹虫草菌种：常规蛹虫草菌种。

蛹虫草液体菌种：培养步骤如下：

(1)试管斜面菌种活化

培养基配制：马铃薯200g(去皮煮汁)、葡萄糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.5g、琼脂粉20g、水1000ml。分装于试管中，121℃高温灭菌20min，摆放斜面。然后将保藏的蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，18-20℃，避光培养7-10d。

(2)三角品液体种子培养

培养基配制：马铃薯200g(去皮煮汁)、葡萄糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.5g、甘露醇1g、水1000ml。将配制好的培养基分装入三角瓶中，用棉塞或双层聚丙烯薄膜封口。放入高压灭菌锅中，121℃灭菌20min。培养基制备完成后，在无菌条件下接入斜面试管菌种，培养温度18-20℃，避光震荡培养5-7d，震荡频率为130-150转/min。

(二)甘露醇培养基制备

其配方组分按重量份为：小麦40g、葡萄糖1g、蛋白胨0.5g、甘露醇0.1g、磷酸二氢钾0.1g、硫酸镁0.05g、水55ml。

(三)培养基配制灭菌

按配方将各组分精准称量，然后混合，分装于栽培瓶中，封口，在121-125℃条件下灭菌20-30min。

(四)接种

培养基自然冷却至20-30℃时，在无菌条件下接入蛹虫草菌种。每瓶3-5ml。

(五)菌丝培养

将培养室温度控制在18-22℃，空气湿度65％以上，避光培养。使菌丝充分生长。

(六)出草管理

菌丝生长完成后，人工不光每天10-12h，温度18-22℃，空气湿度85％以上，按时通风。55-65d后子实体成熟。

(七)采收

子实体长至8-10cm时采收。

(八)烘干

55-60℃热风干燥。

实施例2

一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，包括培养基制备，灭菌，接种，培养，采收，烘干步骤，具体工艺步骤为：

(1)甘露醇培养基制备

其配方组分按重量份为：小麦45-65份，葡萄糖1-2份，蛋白胨0.5-1份，水65-95份，磷酸二氢钾0.01-1份，硫酸镁0.005-0.05份，甘露醇0.01-1份。

(2)培养基配制与灭菌

(3)接种

培养基自然冷却至20-30℃时，在无菌条件下接入蛹虫草菌种。

(4)菌丝培养

将培养室温度控制在18-22℃，空气湿度65％以上，避光培养。

(5)出草管理

(6)采收

蛹虫草子实体长至8cm左右时，具有孢子粉的品种出现细密的子囊壳时，采收。

以上步骤3中接入的蛹虫草菌种为蛹虫草液体菌种，该菌种通过试管斜面菌种培养和三角瓶液体菌种培养而成，具体工艺步骤为：

试管斜面菌种培养：

配制培养基：其各组分比例为：马铃薯200g(去皮煮汁)、葡萄糖15-20g、蛋白胨5-7g、磷酸二氢钾0.5-1g、硫酸镁0.2-0.5g、琼脂粉18-20g、水1000ml。斜面培养基制备完成后，在无菌条件下接入蛹虫草菌种，在18-22℃，条件下避光培养7-10d。

三角瓶液体菌种培养：配制培养基：其各组分比例为：马铃薯200g(去皮煮汁)、葡萄糖15-20g、蛋白胨5-7g、磷酸二氢钾0.5-1g、硫酸镁0.2-0.5g、0.5-1g、水1000ml。将配制好的培养基分装入三角瓶中，用棉塞或双层聚丙烯薄膜封口。放入高压灭菌锅中，121℃灭菌20min。培养基制备完成后，在无菌条件下接入斜面试管菌种，培养温度18-20℃，避光震荡培养5-7d，震荡频率为130-150转/min。

实施例3

该方法包括以下步骤：

1)配制所述培养基，而后在121～125℃条件下灭菌20～30min；

3)以温度18～22℃、空气湿度65％以上的条件，避光培养；

5)当蛹虫草子实体长度达8～10cm时，采收。

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于，在该栽培方法中，用于培养蛹虫草菌种的培养基包括以下重量份的成分：小麦45～65份，葡萄糖1～2份，蛋白胨0.5～1份，水65～95份，磷酸二氢钾0.01～1份，硫酸镁0.005～0.05份，甘露醇0.01～1份。

2.根据权利要求1所述的一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于，所述培养基包括以下重量份的成分：小麦50份，葡萄糖1份，蛋白胨0.5份，水70份，磷酸二氢钾0.1份，硫酸镁0.05份，甘露醇0.1份。

3.根据权利要求1所述的一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)配制所述培养基，而后在121～125℃条件下灭菌20～30min；

3)以温度18～22℃、空气湿度65％以上的条件，避光培养；

5)当蛹虫草子实体长度达8～10cm时，采收。

4.根据权利要求3所述的一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于，步骤1)中，先将配制好的所述培养基分装于栽培瓶中，封口，再在121～125℃条件下灭菌20～30min。

5.根据权利要求3所述的一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于，步骤4)中所述继续培养的时长为55～65d。

6.根据权利要求3所述的一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于，所述蛹虫草菌种为具有孢子粉的品种；步骤5)中，当蛹虫草出现细密的子囊壳时，采收。

7.根据权利要求3所述的一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于，还包括以下步骤6)：对步骤5)所得产物，采用55～60℃热风干燥。

8.根据权利要求3所述的一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于，步骤2)中所述的蛹虫草菌种，是通过以下方法制备的：在无菌条件下，将蛹虫草菌接种至固体斜面培养基上，在18～22℃下避光培养7～10d；而后，转接至液体培养基中，在18～20℃下避光、震荡培养5～7d；震荡培养的频率为130～150转/min。

9.根据权利要求8所述的一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于，所述固体斜面培养基包括以下成分：200g马铃薯的去皮、煮汁产物，葡萄糖15～20g，蛋白胨5～7g，磷酸二氢钾0.5～1g，硫酸镁0.2～0.5g，琼脂粉18～20g，水1000mL。

10.根据权利要求8所述的一种富含虫草酸蛹虫草子实体的培养方法，其特征在于，所述液体培养基包括以下成分：200g马铃薯的去皮、煮汁产物，葡萄糖15～20g，蛋白胨5～7g，磷酸二氢钾0.5～1g，硫酸镁0.2～0.5g，水1000mL。