CN111757893A - 抗mct1抗体及其用途 - Google Patents

抗mct1抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN111757893A
CN111757893A CN201980007427.5A CN201980007427A CN111757893A CN 111757893 A CN111757893 A CN 111757893A CN 201980007427 A CN201980007427 A CN 201980007427A CN 111757893 A CN111757893 A CN 111757893A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
antigen
mct
polypeptide
binding fragment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201980007427.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111757893B (zh
Inventor
J·罗斯坦
C·卡里尔
S·谢廖金
P·戈贝伊
G·K·J·李
K·P·希格纳卡
M·戈登
K·库翁
Y·王
R·D·莱威
J·K·王
R·钱伯斯
D·F·塔克
B·A·斯克伦奇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Amgen Inc
Immunext Inc
Original Assignee
Amgen Inc
Immunext Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Amgen Inc, Immunext Inc filed Critical Amgen Inc
Publication of CN111757893A publication Critical patent/CN111757893A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111757893B publication Critical patent/CN111757893B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)

Abstract

本发明总的涉及抗体及其抗原结合片段，例如，人源化的、嵌合的和人的抗体及其抗原结合片段，融合蛋白，和包含这类抗体及其抗原结合片段和融合蛋白的组合物，其中这类抗体及其抗原结合片段和融合蛋白特异性地结合MCT1，例如，人或非人类的MCT1，并在体外和/或体内拮抗、抑制或阻断一种或多种MCT相关功能。本发明还涉及这些抗MCT1抗体、抗原结合片段、融合蛋白和包含其的组合物的治疗或诊断用途，可选地其中这些抗MCT1抗体、抗原结合片段、融合蛋白和包含其的组合物用于治疗方案，所述治疗方案还包括施用其他治疗剂例如线粒体抑制剂和/或二甲双胍或小分子MCT1抑制剂。

Description

抗MCT1抗体及其用途
相关申请
本申请要求2018年1月4日提交的美国临时申请No.62/613,447、2018年6月14日提交的美国临时申请No.62/684,870和2018年9月25日提交的美国临时申请No.62/736,025以及2018年11月30日提交的美国临时申请No.62/773,630的优先权。这些临时申请中的每一件的内容通过引用以其整体并入本文。
序列表
在2019年1月4日创建的具有xxxxxx字节大小的名为“43260.4213.txt”的文件中的序列表，通过引用以其整体并入本文。
发明领域
本发明大体上涉及抗MCT1抗体及其抗原结合片段，例如，人源化、嵌合的、和人抗体，及其抗原结合片段，例如拮抗性抗MCT1抗体及其抗原结合片段，以及含有此类抗体及其抗原结合片段的组合物。这样的抗体和抗原结合片段包括那些抗体和片段，其特异性结合MCT1，例如，在内源性表达MCT1的人细胞或经工程改造表达MCT1的重组细胞的表面表达的MCT1，并且拮抗与MCT1有关的一种或多种功能，例如促进乳酸运输的能力。本发明还涉及包含一种或多种抗MCT1抗体结合序列的融合或多特异性蛋白，例如多特异性和双特异性抗体。本发明进一步涉及此类抗体、抗原结合片段、融合和多特异性多肽以及包含它们的组合物的治疗和诊断用途。本发明具体地涉及这些抗体及其抗原结合片段作为预防剂或治疗剂的用途，例如，用于治疗自身免疫，炎症，变态反应，移植，GVHD，癌症，和其他治疗上期望抑制MCT1活性和/或增加TR1细胞数目/活性和/或减少T效应细胞的数目/活性的病况。
发明背景
单羧酸营养转运蛋白SLC16A1(MCT1)是一种多次跨膜蛋白，负责关键代谢物(包括糖酵解产物)的易化转运。MCT1是被称为溶质通道蛋白(SLC)的最大表面膜蛋白家族的成员之一，其功能涉及关键细胞营养物质、代谢物、离子、激素和脂质的跨膜运输。MCT1属于SLC16转运蛋白家族，其中5种已被证明以pH依赖性和双向的易化方式转运单羧酸，诸如丙酮酸，乳酸和酮类(参考文献34-36)。SLC16A1(MCT1)，SLC16A7(MCT2)，SLC16A8(MCT3)和SLC16A3(MCT4)都已被证明能以1-40mM的Km运输单羧酸类物质(参考文献37)。MCT1，MCT3和MCT4与含有免疫球蛋白结构域的表面蛋白CD147(Basigin)共表达，后者是多种细胞中对于正确的细胞表面表达至关重要(参考文献38、37)。除了这些MCT之外，其他乳酸转运蛋白包括最近表征的SLC16A11(参考文献39)和钠依赖性的SLC5A8和SLC5A12(参考文献40)、AQP9(参考文献41，42)以及在红细胞上表达的SLC4A1(Band 3)。因此，九种独立的蛋白质可以控制和调节乳酸在全身细胞内、细胞间和细胞外的运输。MCT1与T细胞和B细胞中乳酸的运输特别相关(参考文献43)。
免疫细胞在整个生长过程中代谢需求发生变化，并需要特定的代谢状态用于其发挥效应功能。在炎症性疾病模型中阻断糖酵解已显示出功效(参考文献53)。例如，当阻断淋巴细胞在激活后使用糖酵解途径时，可防止易患病小鼠中狼疮的发展(参考文献53)。事实上，在这些模型中缺乏IFNγ生成与之前的报道显示IFNγ生产需要糖酵解是一致的(参考文献54)。阻止乳酸的输出会减少通过糖酵解途径的通量(参考文献55)，并且可以通过改变Myc而使T细胞偏离效应子功能(参考文献56)。在几种疾病的动物模型中，包括胶原诱导的关节炎、同种异体移植排斥和GVHD，抑制MCT1功能可以阻断效应T细胞活性(参考文献45，47，50，57-59)。
然而，这些途径在非免疫细胞中的普遍性和免疫特异性靶点的缺乏阻碍了治疗干预。鉴于MCT在许多组织中的广泛表达，打击多种MCT的小分子方式造成了包括组织毒性在内的特殊的挑战。例如，AZ3965是一种结合MCT1和MCT2的小分子(参考文献45，46)。这种MCT1/2的小分子抑制剂在自身免疫性疾病/移植的治疗中具有潜在的应用(参考文献47)，但是在临床前模型中，混杂的结合导致对视网膜，心脏和睾丸的毒性(参考文献48、85)。
缺乏MCT1的成年人是健康的(参考文献49，68)。纯合性MCT1功能丧失(LOF)突变的个体仅在压力(感染，饥饿)下由于酮利用和代谢发生变化才被识别出来。婴儿出现酮利用缺陷，并有时不耐运动。这些各种症状随着年龄的增长而消失，这可能是由于青春期骨骼肌质量的增长所致。具有纯合MCT1突变的个体的杂合家庭成员没有酮症酸中毒的病史，这表明LOF突变仅与其他遗传/环境因素一起导致酮症酸中毒(参考文献68)。在免疫系统之外，MCT1与其他MCT一同在其他多个器官中表达，包括骨骼肌，肾脏，肝脏，睾丸，心脏和大脑。在具有MCT1突变的个体内没有出现广泛的毒性可能是由于MCT的大量冗余。例如，MCT1，MCT2和MCT4都在视网膜中表达(参考文献69)，在MCT1缺乏型个体中未观察到视网膜缺陷，提示功能冗余。目前，在MCT1缺乏型个体中未观察到明显的免疫缺陷。此外，缺乏MCT1的人不出现任何RBC功能障碍。
癌细胞与正常细胞之间存在代谢差异：尤其是，肿瘤细胞依靠高速率的有氧糖酵解而不是氧化磷酸化来产生维持细胞功能的能量。实际上，癌细胞相对于正常细胞可以具有多达60倍增强的糖酵解率，甚至在氧气足够时。这种对糖酵解的依赖，及其后果，被称为"Warburg效应"(参考文献94，95)。恶性细胞是高度合成代谢的，需要非常高的水平的营养物质，ATP，和砌块来合成它们的成长和生存所需要的组件。使用糖酵解途径提供了ATP，但同时也驱动了乳酸的产生，其是在糖酵解途径的末端由丙酮酸产生的。肿瘤细胞产生的大量乳酸需要有效的消耗或消除手段，以防止癌细胞的细胞内酸化。
维持乳酸稳态的一种方法是通过单羧酸转运蛋白。表达谱研究已经确定，大多数侵袭性肿瘤类型表达水平明显升高的MCT1，MCT4或两者(参考文献96)。MCT1和MCT4的表达分别受两个主要的致癌转录因子MYC和缺氧诱导因子la(hypoxia inducible factor-la，HIF-1a)的调控(参考文献96、97)，引导支持有氧糖酵解的关键蛋白的产量显著增加，包括氨基酸转运蛋白和谷氨酰胺和葡萄糖分解代谢中涉及的酶(参考文献98)。有MYC参与的恶性肿瘤和缺氧性肿瘤对当前的一线治疗通常是抵抗的，高治疗失败率、复发率，患者死亡率高(参考文献99、100)。重要的是，抑制MCT1可离体(ex vivo)杀死肿瘤细胞，在体内(invivo)引起肿瘤消退，并且其效力可以被诸如二甲双胍等迫使癌细胞产生糖酵解表型的药物所增强(参考文献96、100)。
在胰岛尤其是β细胞中，MCT1通常以非常低的水平表达(参考文献101、102)。这可能解释了这些细胞对乳酸的摄取非常缓慢。运动诱发的高胰岛素血症(exercise-inducedhyperinsulinism,EIHI)的标志是剧烈体育活动后不适当的胰岛素分泌，其导致低血糖症(参考文献103)。EIHI与β细胞中MCT1的表达升高相关联，工程化过表达MCT1的转基因小鼠部分地显示了EIHI的许多标志特征(参考文献104)。
如上所描述，已经开发了各种小分子MCT抑制剂，但是许多这些小分子抑制剂缺乏对MCT1的特异性，从而导致脱靶毒性。尽管有这些缺点，小分子MCT1抑制剂已经证明在高表达MCT1的肿瘤中会抑制肿瘤细胞的代谢、增殖和存活，并削弱其体内的致瘤潜力(参考文献96)。此类小分子MCT1抑制剂的抗肿瘤作用可通过共同施用双胍类的二甲双胍得到增强，其被认为可进一步增强肿瘤细胞对有氧糖酵解的依赖性，从而增加对MCT1介导的乳酸外排的需求(参考文献96)。然而，迄今为止，尚未报道与表面表达的MCT1结合的抗体，例如，与内源性或经改造表达MCT1的人类或非人类细胞表面表达的MCT1结合的抗体。此外，据申请人所知，还没有文献报道功能性抗体，即那些与MCT1结合从而拮抗、抑制或阻断MCT1作用的抗体。
发明内容
本发明首次提供了特异性结合于内源性或重组MCT1表达细胞，例如人细胞表面表达的人MCT1的抗体及其抗原结合片段，而且该抗体是功能性的，即该抗体拮抗MCT1相关功能。
更具体地说，本发明提供了特异性结合人MCT1的新型抗体及其抗原结合片段，该抗体拮抗MCT1相关功能，如抑制MCT1介导的乳酸运输。
本发明还提供了MCT1结合性融合蛋白和MCT1结合性多特异性多肽，其包含一个或多个MCT1结合性抗体可变结构域和可选的其他部分，例如其它多肽，诸如其它抗原结合可变结构域、细胞因子或受体。
本发明还提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，其与人或非人MCT1的胞外结构域或区域中包含的一个或多个残基结合。
本发明还提供了一种分离的与人或非人MCT1结合的抗体或其抗原结合片段，其拮抗、抑制或阻断一种或多种MCT1相关功能，例如在体外和/或体内。
本发明还提供了一种分离的与非人MCT1，例如啮齿动物诸如小鼠或大鼠MCT1结合的抗体或抗原结合片段，其可选地拮抗，抑制或阻断一种或多种MCT1相关功能，例如在体外和/或体内，例如其任选地还与人MCT1结合。
本发明还提供了一种分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其与抗人MCT1抗体Ab1-Ab95中的任何一种竞争结合人或非人MCT1。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其与抗人MCT1抗体Ab1-Ab95中的任一种结合人MCT1上的相同或重叠的表位。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其结合到选自以下的人MCT1上的表位：
(i)包含残基T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，K297，G417，I47和D418中的一个或多个的表位；
(ii)包含最少三个残基的表位，其中至少一个，两个或所有三个所述残基包含选自T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，G417，I47和D418的残基；
(iii)包含三个残基的表位，其中三个残基中至少一个，两个或所有三个所述残基包含T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，G417，I47和D418；
(iv)包含三至六个残基的表位，其中一个，两个，三个，四个，五个或六个所述残基包括T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，G417，I47和D418；
(v)包含残基T41，S285和S286的至少一个，两个或全部三个的表位；
(vi)包含T41的表位；
(vii)包含S286的表位；
(viii)包含S285的表位；
(ix)包含H292的表位；
(x)包含残基T41、S285、S286、Y287、G417和D418的表位；
(xi)包含残基T41、S285和S286的表位；
(xii)包含残基T41、I47、S285、S286、G417和D418的表位，
(xiii)包含残基E46、K289和H292的表位；
(xiv)包含残基K297、Y293和H292的表位；
(xv)包含一个或多个非人MCT1相应残基的表位，例如，非人MCT1选自啮齿动物(例如小鼠、大鼠、豚鼠)，兔，鸡，非人灵长类动物(例如食蟹猴、黑猩猩、猩猩(Orangutan))，牛，绵羊，犬和猫MCT1；
其中可选地，存在于所述表位中的残基通过使用丙氨酸扫描来鉴定。
本发明还提供了与根据权利要求7的选择的人MCT1上的表位结合的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段还与下列一个或多个残基相互作用：
(i)残基P37、I40、K45、E48和T55(环1)中的一个或多个；
(ii)残基Q111(环2)；
(iii)残基Q166(环3)；
(iv)残基L284、E296、S298(环4)中的一个或多个；
(v)残基Y353(环5)；
(vi)残基Y419、T422(环6)中的一个或两个；和/或
(vii)上述的任意组合。
本发明还提供了与非人MCT1上的表位结合的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，该非人MCT1任选地选自啮齿类(例如，小鼠，大鼠，豚鼠)，兔，禽类(例如鸡，火鸡，鹅)，非人类灵长类动物(例如食蟹猴，黑猩猩，猩猩)，牛，绵羊，犬科动物，猫科动物，其中可选地所述非人类MCT1上的表位包含非人MCT1中与人MCT1的T41、S285、S286、Y287、G417、I47和D418中的一个或多个相应的一个或多个残基，例如，所述抗体或片段拮抗、抑制或阻断所述非人MCT1的一种或多种活性，例如在体外和/或体内。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其是人的、人源化的、非人灵长类的、灵长类化的、鸡的、啮齿类的或嵌合的。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段可抑制人MCT1介导的乳酸运输，例如，在体外和/或体内。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其结合到内源性MCT1表达细胞和/或结合到重组或工程化的MCT1表达细胞，例如，表达人MCT1的293细胞。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段选自由以下组成的组：人或人源化单克隆抗体；单特异性抗体；多特异性抗体；多特异性抗体样多肽，人源化抗体；人或人源化的四聚体抗体；人或人源化的四价抗体；人或人源化多特异性抗体；单链抗体；结构域特异性抗体；单结构域抗体；结构域缺失的抗体；scFc融合蛋白；嵌合抗体；合成抗体；重组抗体；杂合抗体；多特异性抗体，双特异性抗体，ByTE，一种突变的抗体；CDR移植抗体；抗体片段；Fab；F(ab′)2；Fab′片段；Fv片段；单链Fv(scFv)片段；Fd片段；dAb片段；diabody；纳米抗体；双价抗体；VHH抗体；和微型抗体。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含人源化抗体或其抗原结合片段。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含抗MCT1抗体Ab1-Ab95中任一种的至少1、2、3、4、5或全部6个CDR，其中可选地，所述CDR是根据Kabat或根据Chothia和Lesk定义的；或分离的抗体或抗原结合片段，其与MCT1抗体Ab1-Ab95任一种竞争结合MCT1，或结合相同的表位；或任何前述的亲和成熟变体。
本发明还提供了人源化的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含与抗MCT1抗体Ab1-Ab95任一种的相同CDR，其中可选地，所述CDR根据Kabat或根据Chothia和Lesk定义。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含与选自Ab1-Ab95的抗MCT1抗体中所包含的VH多肽相同的VH多肽，或其人源化变体。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含与选自Ab1-Ab95抗MCT1抗体中所包含的VL多肽相同的VL多肽、或其人源化变体。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含与选自Ab1-Ab95的抗MCT1抗体中所包含的VH多肽和VL多肽完全一致的VH多肽和VL多肽、或其人源化变体。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，所述抗体或片段包含可变重多肽和/或可变轻链多肽，其分别与抗MCT1抗体Ab1-Ab95之任一中所包含的可变重链多肽和/或可变轻链多肽具有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含VH CDR1,2和3多肽，分别具有SEQ ID NO:4-6的氨基酸序列，以及VL CDR1,2和3多肽，分别具有SEQ ID NO:7-9的氨基酸序列。
本发明还提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其是衍生自Ab1-Ab95任一种的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，可选地含有与Ab1-Ab95任一种相同的CDR，其中可选地，所述CDR根据Kabat或根据Chothia和Lesk定义。
本发明还提供了衍生自Ab1-Ab95任一种的亲和力成熟的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其中，最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个CDR残基相对于Ab1-Ab95中任一种的6个CDR多肽的CDR残基发生了突变，其中可选地，所述亲和力成熟的抗MCT1抗体以相同于或高于其所衍生自的抗MCT1抗体的亲和力与人MCT1结合，和/或亲和力成熟的抗体或抗原结合片段拮抗人MCT1，例如，在体外和/或体内，其中可选地，所述CDR根据Kabat或根据Chothia和Lesk定义，其中可选地最多1、2、3、4、5、6或7个CDR残基相对于Ab1-Ab95中任一种的CDR多肽发生了突变，或最多1、2、3或4个CDR残基相对于Ab1-Ab95中任一种的CDR多肽发生了突变，或最多1或2个CDR残基相对于Ab1-Ab95中任一种的CDR多肽发生了突变。
本发明还提供了根据任意前述的抗人MCT1抗体或抗原结合片段，其进一步与非人MCT1，可选地与啮齿动物、兔、鸡或非人灵长类的MCT1结合。
本发明还提供了抗MCT1抗体，其包含SEQ ID NO:2和3；SEQ ID NO:12和13；SEQ IDNO:14和15；SEQ ID NO:16和17的VH和VL多肽；或包含抗体Ab5-Ab95任一种的VL和/或VH多肽；或包含抗体Ab5-Ab95任一种的VL和/或VH多肽的人源化或亲和力成熟的变体。
本发明还提供了抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含具有选自SEQ ID NO:2、12、14、16、19-32、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153和155的氨基酸序列的可变重链多肽或重链多肽；和具有选自SEQ ID NO:3、13、15、17、33-44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154和156的氨基酸序列的可变轻链多肽或轻链多肽。
本发明还提供了抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含分别具有选自以下的氨基酸序列的可变重链多肽和可变轻链多肽：SEQ ID NO:2和3；SEQ ID NO:12和13；SEQ ID NO:14和15；SEQ ID NO:16和17；SEQ ID NO:45和46；SEQ ID NO:47和48；SEQ ID NO:49和50；SEQID NO:51和52；SEQ ID NO:53和54；SEQ ID NO:55和56；SEQ ID NO:57和58；SEQ ID NO:59和60；SEQ ID NO:61和62；SEQ ID NO:63和64；SEQ ID NO:65和66；SEQ ID NO:67和68；SEQID NO:69和70；SEQ ID NO:71和72；SEQ ID NO:73和74；SEQ ID NO:75和76；SEQ ID NO:77和78；SEQ ID NO:79和80；SEQ ID NO:81和82；SEQ ID NO:83和84；SEQ ID NO:85和86；SEQID NO:87和88；SEQ ID NO:89和90；SEQ ID NO:91和92；SEQ ID NO:93和94；SEQ ID NO:95和96；SEQ ID NO:97和98；SEQ ID NO:99和100；SEQ ID NO:101和102；SEQ ID NO:103和104；SEQ ID NO:105和106；SEQ ID NO:107和108；SEQ ID NO:109和110；SEQ ID NO:111和112；SEQ ID NO:113和114；SEQ ID NO:115和116；SEQ ID NO:117和118；SEQ ID NO:119和120；SEQ ID NO:121和122；SEQ ID NO:123和124；SEQ ID NO:125和126；SEQ ID NO:127和128；SEQ ID NO:129和130；SEQ ID NO:131和132；SEQ ID NO:133和134；SEQ ID NO:135和136；SEQ ID NO:137和138；SEQ ID NO:139和140；SEQ ID NO:141和142；SEQ ID NO:143和144；SEQ ID NO:145和146；SEQ ID NO:147和148；SEQ ID NO:149和150；SEQ ID NO:151和152；SEQ ID NO:153和154和SEQ ID NO:155和156。
本发明还提供了根据任意前述实施方案的人源化和/或亲和力成熟的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含具有选自SEQ ID NO:3、13、15、17和33-44的氨基酸序列的VL多肽或抗体Ab5-Ab60中任一种的VL多肽。
本发明还提供了根据任意前述实施方案的人源化的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含具有选自SEQ ID NO:2、12、14、16和19-32的氨基酸序列的VH多肽或抗体Ab5-Ab60中任一种的VH多肽。
本发明还提供了根据任意前述的人源化的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含具有选自SEQ ID NO:13、15、17和33-44的氨基酸序列的VL多肽和具有选自SEQ ID NO:12、14、16和19-32的氨基酸序列的VH多肽，或抗体Ab5-Ab60中任一种的VL多肽和VH多肽。
本发明还提供了根据任意前述的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含VL多肽，所述VL多肽具有与SEQ ID NO:3、13、15、17、33-44中的任何一项或与抗体Ab5-Ab95任一项中包含的VL多肽具有至少80、85、90、95、96、97、98或99％序列同一性的序列。
本发明还提供了根据任意前述的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含VH多肽，所述VH多肽具有与SEQ ID NO:2、12、14、16、19-32中任何一项或与抗体Ab5-Ab95任一项中包含的VH多肽具有至少80、85、90、95、96、97、98、99％或100％序列同一性的序列。
本发明还提供了根据任意前述的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含：具有与SEQ ID NO:3、13、15、17、33-44中的任何一项或与抗体Ab5-Ab95任一项中包含的VL多肽至少80、85、90、95、96、97、98或99％序列同一性的序列的VL多肽；和/或具有与SEQ IDNO:2、12、14、16、19-32中的任何一项或与抗体Ab5-Ab95任一项中包含的VH多肽至少80、85、90、95、96、97、98、99％或100％序列同一性的序列的VH多肽。
本发明还提供了根据任意前述的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其中重链CDR3序列包含18、19、20、21、22、23或24个氨基酸残基。
本发明还提供了根据任意前述的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其中重链CDR3序列包含21、22、23或24个氨基酸残基。
本发明还提供了根据任意前述的分离的抗MCT1人抗体或抗原结合片段，其中重链CDR3序列与SEQ ID NO:6一致或与之相差最多5、4、3、2或1个残基，可选地，所述差异如果存在则包含保守的氨基酸取代、或包含在包含相同长度CDR3的人或啮齿类抗体的重链CDR3中的相同位置上普遍存在的取代氨基酸。
本发明还提供根据任意前述的分离的抗MCT1人或人源化抗体或其抗原结合片段，其与参照抗体竞争结合MCT1，其中参照抗体选自Ab1-Ab95。
本发明还提供了抗人MCT1抗体或其抗原结合片段，包含与选自Ab1-Ab95的抗人MCT1抗体相同的可变重和/或可变轻CDR多肽。
本发明还提供了抗MCT1抗体，包含选自Ab1-Ab95的抗体的可变重和/或可变轻多肽。
本发明还提供了根据任意前述的人或人源化抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含重链和/或轻链恒定区，任选地人IgG1，IgG2，IgG3或IgG4重链和/或轻链恒定区，所述恒定区可选地被突变以削弱或增强至少一种效应子功能，例如，其中所述效应子功能包括FcR结合，补体结合，ADCC功能，FcRN结合和糖基化。
本发明还提供了根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段的CDR形成与Ab1相似或相同的三维抗体结构，如通过结构比对所确定的，相应CDR中的α-碳原子的位置偏差的平均均方根偏差(RMSD)小于
Figure BDA0002570801830000091
小于
Figure BDA0002570801830000092
或小于
Figure BDA0002570801830000093
本发明还提供了人源化抗体或其抗原结合片段，包含Ab1的可变重链CDR序列(SEQID NOS:4、5、6)和Ab1的可变轻链CDR序列(SEQ ID NOS:7、8、9)。
本发明还提供了抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含与MCT1 Ab1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的VH结构域；并且包含与MCT1 Ab1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ IDNO:3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VL结构域。
本发明还提供了根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含人恒定结构域，可选地IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，进一步可选地经修饰以增强至少一种选自糖基化、FcR结合、FcRN结合、补体结合和ADCC功能的Fc效应子功能。
本发明还提供了根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含人IgG1恒定区，可选地经修饰以减弱FcR结合和/或补体结合，进一步可选地包含E269R和/或K322A突变和/或所述人IgG1恒定区包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。
本发明还提供了包含至少一个根据任意前述的抗MCT1抗体或抗原结合片段的融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽。
本发明还提供了根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽，其降低了T效应细胞的活性和/或T效应细胞的数量，例如CD3+、CD4+或CD8+ T效应细胞。
本发明还提供了根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，其增加了Tr1细胞的活性和/或数量。
本发明还提供了根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，其降低了T效应细胞的活性和/或T效应细胞的数量，例如CD3+、CD4+或CD8+ T效应细胞，并且进一步增加了Tr1细胞的活性和/或数量。
本发明还提供了表达至少一种根据任意前述的抗MCT1抗体或抗原结合片段、融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽的细胞，例如，人、非人哺乳动物、酵母、细菌、两栖动物、植物、昆虫或爬行动物的细胞、或人细胞，可选地人免疫细胞，例如，T细胞、NK细胞、单核细胞、调节性T细胞或巨噬细胞。
本发明还提供了针对任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段产生的抗独特型抗体，可选地其是人的、人源化的和/或亲和力成熟的。
本发明还提供了针对如上所述的抗独特型抗体产生的抗抗独特型抗体，其任选地结合MCT1并进一步任选地阻断或拮抗一种或多种MCT1活性。
本发明还提供融合蛋白，所述融合蛋白包含根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段、或SEQ ID NO:6的VH CDR3多肽或与之具有至少80％序列同一性的变体，其直接或间接地连接到另一多肽，如：抗体多肽或抗体结构域、血清白蛋白、人或其他灵长类动物血清白蛋白、adnectin、affibody、DARPin、anticalin、乙二醇(PEG)、单甲氧基聚乙二醇(mPEG)、XTEN分子、rPEG分子，或任意前述的片段或变体，例如，其中抗体多肽或结构域包含Fc多肽或其片段，例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区或其片段。
本发明还提供了根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，或表达任意前述的细胞，其在与细胞，例如活化的T细胞或B细胞，进一步任选地人细胞，表面上的MCT1结合后，引起下列一种或多种性质：
(i)抑制乳酸的转运；
(ii)抑制溴丙酮酸的转运；
(iii)抑制单羧酸、丙酮酸、衍生自亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸的支链含氧酸、酮体、乙酰乙酸、β-羟基丁酸、乙酸、乳酸、细胞营养物、代谢物、离子、激素、脂质和酮类物质中的一种或多种的转运；
(iv)抑制CD3/CD28刺激的T细胞的增殖；
(v)抑制活化T细胞或B细胞的增殖；
(vi)抑制一种或多种炎性细胞因子的产生；
(vii)降低T效应细胞的活性和/或数量，例如CD3+、CD4+或CD8+ T效应细胞；
(viii)增加调节性T(Treg)细胞的比例或活性；
(ix)抑制混合淋巴细胞反应中的同种异体活化；
(x)或任意前述的组合。
本发明还提供了根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，或表达任意前述的细胞，例如，根据任意前述的实施方案，其在与MCT1结合后抑制一种或多种炎性细胞因子的产生。
本发明还提供了根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，或表达任意前述的细胞，其中所述一种或多种炎性细胞因子中的至少一种选自FGF2、FLT-3L、Fractilkine、G-CSF、GM-CSF、GRO、IFNα2、IFNγ、IL-3、IL-5、IL-9、IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-13、IL-17a、IP-10、MCP-1、MDC、MIP-1a、MIP-1b、sCD40L、TNFα和TNFβ。
本发明还提供了根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，或表达任意前述的细胞，其中所述一种或多种炎性细胞因子中的至少一种选自IFNγ、GM-CSF、TNFα、IL-10和IL-6。
本发明还提供了根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，或表达任意前述的细胞，其以通过乳酸FLIPR测定法测定的小于100nM、小于50nM或小于10nM的Kd抑制活化T细胞中MCT1介导的乳酸转运。
本发明还提供了根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，或表达任意前述的细胞，其：
(i)经由流式细胞术测量，不与MCT2、MCT3、MCT4和/或CD147结合；
(ii)不抑制MCT2、MCT3和/或MCT4的转运；
(iii)不抑制IL-2的产生；
(iv)不抑制单核细胞中的乳酸转运；
(v)不抑制初始、静息和/或调节性T细胞的增殖；
(vi)不抑制RBC中的乳酸转运；
(vii)不改变一种或多种T细胞活化标志物的表达，所述标志物可选地选自CD25、CD54、CD69、CD95、CD98、CD147、CD154、CD278、CD279和HLA-DR/DP/DQ。
本发明还提供了任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽，或表达任意前述的细胞，其包含人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区，可选地Fc区已被修饰以改变效应子功能、半衰期、蛋白水解或糖基化中的至少一种，其中可选地Fc区包含改变或消除N-和/或O-糖基化的一个或多个突变。
本发明还提供了根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CARs)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽，或表达任意前述的细胞，其与人MCT1结合的亲和力(KD)小于100nM、小于50nM或小于10nM。
本发明还提供了根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽，或表达任意前述的细胞，其还具有以下一种或多种修饰：
(i)与细胞毒性剂缀合；
(ii)包含在双特异性抗体中；
(iii)包含在多特异性抗原结合蛋白中；
(iv)与标签缀合；以及
(v)与另一种治疗剂，任选的免疫抑制剂或化疗剂，缀合。
本发明还提供了抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或根据任意前述的多特异性或双特异性抗体多肽，或表达任意前述的细胞，其中标签是化学发光标签、顺磁标签、MRI造影剂、荧光标签、生物发光标签、或放射性标签，或抑制DNA、RNA或蛋白质合成的细胞毒性剂；放射性核素；或核糖体抑制蛋白。
本发明还提供了根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽，或根据任意前述表达任意前述的细胞，其适用于治疗患有自身免疫性、炎症性或变应性疾病；代谢性疾病(例如，糖尿病)、多囊肾病(ADPKD)、癌症；移植受者或EIHI或任何其它病症的人受试者，其中减少T效应细胞的数量和/或活性，例如CD3+T细胞、CD4+T细胞和/或CD8+T细胞，和/或提升Tr1或T抑制细胞的活性和/或数量是治疗上期望的。
本发明还提供了针对任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段产生的抗独特型抗体或其抗原结合片段，其可选地中和它所结合的抗MCT1抗体或其抗原结合片段的一种或多种生物学效应。
本发明还提供了针对前述的抗独特型抗体或其抗原结合片段产生的抗抗独特型抗体或其抗原结合片段，可选地其中所述抗抗独特型抗体或其抗原结合片段中和其结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段。
本发明还提供了使用如上描述的抗独特型抗体在受试者体内监测所述抗MCT1抗体或其抗原结合片段的体内水平或在受试者体内中和所述抗MCT1抗体或其抗原结合片段的体内效应的方法。
本发明还提供了编码根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽、或抗抗MCT1抗体或抗原结合片段、或抗-抗-抗MCT1抗体或抗原结合片段的多核苷酸，含有它的表达载体和包含所述多核苷酸或表达载体的宿主细胞，任选人类免疫细胞，例如，T细胞、B细胞或NK细胞。
本发明还提供了包含有效量的根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽或抗抗MCT1抗体或抗原结合片段或抗抗抗MCT1抗体或抗原结合片段或表达任意前述的细胞的药物或诊断组合物，例如，其适合用于人或非人的治疗或预防的用途。
本发明还提供了生产分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段的方法，包含在允许抗体或其抗原结合片段表达的条件下培养如上所述的宿主细胞；以及从培养基或宿主细胞中回收抗体或其抗原结合片段。
本发明还提供了包含药学有效量的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段、抗独特型抗体、融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽或表达任意前述的细胞的药物组合物，例如，其包含药物稀释剂、载体或赋形剂，并且可选地，其可包含另一种治疗剂，例如线粒体抑制剂和/或双胍类和/或另一种单羧酸转运蛋白(MCT抑制剂)，例如，SLC16A1、SLC16A2、SLC16A3、SLC16A4、SLC16A5、SLC16A6、SLC16A7、SLC16A8、SLC16A9、SLC16A10、SLC16A11、SLC16A12、SLC16A13或SLC16A14抑制剂或MCT1、MCT2、MCT3、MCT4、MCT5、MCT6、MCT7、MCT8、MCT9或MCT10抑制剂，其中所述抑制剂可抑制一种或多种前述转运蛋白，所述抑制剂还可选地包含小分子、RNAi、抗体、抗体片段或融合蛋白，或其中所述其他活性剂选自二甲双胍(Metformin)、苯乙双胍(Phenformin)、阿来西定(Alexidine)、二双胍(Bisbiguanide)、Buformim、氯己定(Chlorohexidine)、氯丙胍(Chlorproguanil)、苯基双胍(Phenylbiguanide)、聚氨基丙基双胍(Polyaminopropylbiguanide)、聚己缩胍(Polyhexanide)、吗啉胍(Moroxydine)、格列吡嗪(Glipizide)、格列本脲(Glyburide)、瑞格列奈(Repaglinide)、沙格列汀(Saxagliptin)、西格列汀(Sitagliptin)、Pyrvinum Pamoate、氯胍(Proguanil)、多西环素(Doxycycline)、阿托伐醌(Atovaquone)、卡格列净(Canagliflozin)、格列酮类(Glitazones)(例如曲格列酮(Troglitazone),吡格列酮(Pioglitazone),罗格列酮(Rosiglitazone))，替加环素(Tigecycline)、Thiazolides(例如，硝唑尼特(Nitazoxanide))、水杨酰苯胺类(Salicylanilides)(如氯生太尔(Closantel)、氯羟柳胺(Oxyclozanide)、氯硝柳胺(Niclosamide))、派克昔林(Perhexiline)、普萘洛尔(Propronolol)、非诺贝特(Fenofibrate)、咪康唑(Miconazole)、奈法唑酮(Nefazodone)、喷他脒(Pentamidine)、氢化可的松(Hydrocortisone)、间位碘代苄胍(Metaiodobenzylguanidine)、氯尼达明(Lonidamine)、α-生育酚琥珀酸酯(维生素E的主要形式)、碳酸酐酶(Carbonicanhydrase)、ME344(MEI Pharma)、HIF1a抑制剂(例如，白杨素(Chrysin)、Chetomin、二甲双酚A(Dimethy-bisphenol A)、BAY84-2243)、SR13800、二甲基草酰甘氨酸(Dimethyloxaloylglycine,DMOG)、羰基氰化物对三氟甲氧基苯腙(FCCP)、羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)、抗霉素A(Antimycin A)、寡霉素(Oligomycin)、沙利霉素(Salinomycin)、二硝基苯酚(Dinitrophenol)、鱼藤酮(Rotenone)、苯乙双胍(Phenformin)、Tyrphostin 9、Atpenin A5、小檗碱(Berberine)、叠氮化物(Azide)、氰化物(Cyanide)、氧化亚氮(Nitrousoxide)、三氧化二砷(Arsenic trioxide)、pyrvinium、卡格列净(Canagliflozin)、罗格列酮(Rosiglitazone)、异戊巴比妥(Amobarbital)、和厚朴酚(Honokiol)、牛蒡子苷元(Arctigenin)、咖啡酸苯基酯(Caffeic acid phenyl ester)、Perhenazine、Triflouroperazine、丙酮醛(Methylglyoxal)、以及包含任意前述的组合。
本发明还提供了在有需要的受试者中抑制T效应细胞例如CD3+、CD4+和/或CD8+T效应细胞的活性和/或数量的方法，其包括给受试者施用治疗性或预防性有效量的根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达前述至少一种的细胞、或包含治疗性或预防性有效量的任意前述物质的药物组合物。
本发明还提供了在有需要的受试者中提升T抑制细胞或Tr1细胞的活性和/或数量的方法，包括向受试者施用治疗性或预防性有效量的根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达前述至少一种的细胞、或包含治疗性或预防性有效量的任意前述物质的药物组合物。
本发明还提供了在有需要的受试者中抑制T效应细胞，例如CD3+、CD4+和/或CD8+T效应细胞的活性和/或数量、以及提升T抑制细胞或Tr1细胞的活性和/或数量的方法，包括向受试者施用治疗性或预防性有效量的根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达前述至少一种的细胞、或包含治疗性或预防性有效量的任意前述物质的药物组合物，例如，其中受试者患有自身免疫病症、变应性病症、炎性病症、代谢障碍、癌症、移植受者、细胞治疗受者、EIHI病症、多囊肾病(ADPKD)，其特性为升高的T效应细胞(例如CD3+、CD4+或CD8+)活性，和/或减弱的T抑制细胞或Tr1细胞活性和/或减少的T抑制细胞或Tr1细胞数量。
本发明还提供了预防或治疗自身免疫性病症、变应性病症、炎性病症、代谢障碍、癌症、移植受者、细胞治疗接受者、EIHI病症、多囊肾病(ADPKD)或与上述任何一种病症相关的症状的方法，包括向有需要的受试者施用治疗性或预防性有效量的根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达前述至少一种的细胞、或包含治疗性或预防性有效量的任意前述物质的药物组合物，例如，其中，自身免疫性病症、变应性病症、炎性病症、代谢障碍、癌症、移植受者、细胞治疗接受者、EIHI病症、多囊肾病(ADPKD)，其特性为升高的T效应细胞(例如CD3+、CD4+或CD8+)活性，和/或减弱的T抑制细胞或Tr1活性和/或减少的T抑制细胞或Tr1细胞数量，或者可选地，其中代谢障碍包括Danon病、糖尿病、Duarte半乳糖血症、MDP综合征、代谢性肌病、亚甲基四氢叶酸还原酶缺乏、Winchester综合征、水杨酸敏感(salicylate sensitivity)、X-连锁低磷酸盐血症、酒精性酮症酸中毒、酒精脸红反应(alcohol flush reaction)、α-氨基己二酸和α-酮己二酸尿症、高阴离子间隙代谢性酸中毒(High anion gap metabolic acidosis)、痛风、再喂养综合征(refeedingsyndrome)、运动相关的低钠血症、胰腺炎、胰腺炎和Metab-L，或者可选地，其中病症至少部分地由活化的T细胞或B细胞和/或表达MCT1的细胞介导。
本发明还提供了根据任意前述的方法，其中施用抗体或其抗原结合片段或融合蛋白具有以下一种或多种作用：
(i)抑制活化的T细胞或B细胞中的乳酸转运；
(ii)抑制活化的T细胞或B细胞中溴丙酮酸毒素的转运；
(iii)抑制CD3/CD28刺激的T细胞的增殖；
(iv)抑制活化T细胞的增殖；
(v)抑制一种或多种炎性细胞因子的产生和/或分泌；
(vi)不抑制IL-2的产生和/或分泌；
(vii)增加尿酮的产生；
(viii)增加存活时间；
(ix)减少移植排斥；
(x)增加调节性T(Treg)细胞的比例或活性；
(xi)增加是Treg的CD4+T细胞的比例；
(xii)降低IgG1+B细胞的比例；
(xiii)降低生发中心B细胞的比例；
(xiv)不抑制人RBC中的乳酸转运；
(xv)减少T细胞的活化；以及
(xvi)降低细胞毒性T细胞的活性。
本发明还提供了根据任意前述的方法，其用于治疗或预防狼疮、移植物排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、1或2型糖尿病或肥胖中的至少一种。
本发明还提供了根据任意前述的方法，其中经由测量尿酮、TR1细胞数量的增加、选自炎性细胞因子、IFNγ、GM-CSF、TNFα、IL-10、IL-6、IL-2、TIGIT、PD1、颗粒酶B的生物标志物的表达减少或增加、通过效应T细胞和/或hCD3+细胞数量的减少、PMBC增殖的抑制、或任意前述的组合来监测治疗效果。
本发明还提供了评估抗MCT1拮抗剂抗体的治疗效果的方法，其包含检测其在任何前述上的体外或体内影响：尿酮、TR1细胞的数量、选自炎性细胞因子、IFNγ、GM-CSF、TNFα、IL-10、IL-6、IL-2、TIGIT、PD1、颗粒酶B的生物标志物的表达、效应T细胞和/或hCD3+细胞数量的减少、PMBC增殖的抑制、或任意前述的组合。
本发明还提供了根据任意前述的方法，用于治疗或预防癌症复发，包括向有需要的受试者施用治疗性或预防性有效量的根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达前述至少一种的细胞、或包含治疗性或预防性有效量的任意前述物质的药物组合物，例如，其中肿瘤细胞表达MCT1或受试者是哺乳动物或受试者是选自人、非人灵长类或啮齿类的哺乳动物。
本发明还提供了抑制或降低活化的T细胞或B细胞活性的方法，包含将所述活化的细胞与根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达前述至少一种的细胞接触。
本发明还提供了根据任意前述的方法，其中根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达前述至少一种的细胞作为单一疗法施用。
本发明还提供了根据任意前述的方法，其中根据任意前述的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达前述至少一种的细胞，与第二治疗剂联合施用，例如，其中该治疗剂选自免疫抑制药物、化疗剂、双胍类药物，例如，二甲双胍或另一种抗糖尿病药，或抗炎药，或所述其他治疗剂是线粒体抑制剂和/或双胍类药物，或所述其他治疗剂选自二甲双胍(Metformin)、苯乙双胍(Phenformin)、阿来西定(Alexidine)、二双胍(Bisbiguanide)、Buformim、氯己定(Chlorohexidine)、氯丙胍(Chlorproguanil)、苯基双胍(Phenylbiguanide)、聚氨基丙基双胍(Polyaminopropyl biguanide)、聚己缩胍(Polyhexanide)、吗啉胍(Moroxydine)、格列吡嗪(Glipizide)、格列本脲(Glyburide)、瑞格列奈(Repaglinide)、沙格列汀(Saxagliptin)、西格列汀(Sitagliptin)、PyrvinumPamoate、氯胍(Proguanil)、多西环素(Doxycycline)、阿托伐醌(Atovaquone)、卡格列净(Canagliflozin)、格列酮类(Glitazones)(例如曲格列酮(Troglitazone),吡格列酮(Pioglitazone),罗格列酮(Rosiglitazone))，替加环素(Tigecycline)、Thiazolides(例如，硝唑尼特(Nitazoxanide))、水杨酰苯胺类(Salicylanilides)(如氯生太尔(Closantel)、氯羟柳胺(Oxyclozanide)、氯硝柳胺(Niclosamide))、派克昔林(Perhexiline)、普萘洛尔(Propronolol)、非诺贝特(Fenofibrate)、咪康唑(Miconazole)、奈法唑酮(Nefazodone)、喷他脒(Pentamidine)、氢化可的松(Hydrocortisone)、间位碘代苄胍(Metaiodobenzylguanidine)、氯尼达明(Lonidamine)、α-生育酚琥珀酸酯(维生素E的主要形式)、碳酸酐酶(Carbonic anhydrase)、ME344(MEI Pharma)、HIF1a抑制剂(例如，白杨素(Chrysin)、Chetomin、二甲双酚A(Dimethy-bisphenol A)、BAY84-2243)、SR13800、二甲基草酰甘氨酸(Dimethyloxaloylglycine,DMOG)、羰基氰化物对三氟甲氧基苯腙(FCCP)、羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)、抗霉素A(Antimycin A)、寡霉素(Oligomycin)、沙利霉素(Salinomycin)、二硝基苯酚(Dinitrophenol)、鱼藤酮(Rotenone)、苯乙双胍(Phenformin)、Tyrphostin 9、Atpenin A5、小檗碱(Berberine)、叠氮化物(Azide)、氰化物(Cyanide)、氧化亚氮(Nitrous oxide)、三氧化二砷(Arsenic trioxide)、pyrvinium、卡格列净(Canagliflozin)、罗格列酮(Rosiglitazone)、异戊巴比妥(Amobarbital)、和厚朴酚(Honokiol)、牛蒡子苷元(Arctigenin)、咖啡酸苯基酯(Caffeic acid phenyl ester)、Perhenazine、Triflouroperazine、丙酮醛(Methylglyoxal)、以及包含任意前述的组合。
本发明还提供了根据任意前述的方法，其中抗MCT1抗体、其抗原结合片段、融合蛋白或药物组合物经肠内、胃肠外或局部施用。
本发明还提供了监测使用与MCT1结合并减少MCT1介导的乳酸转运的抗体或其抗原结合片段或融合蛋白治疗的疗效的方法，包括测量尿酮的水平。
本发明还提供了用于诊断选自以下的病症的方法：自身免疫性、炎性或变应性病症；癌症；EIHI；多囊肾病(ADPKD)；糖尿病或其它代谢障碍，和/或与MCT1上调相关的病症，所述方法包含：
(i)分离负责介导该病症的细胞；
(ii)将所述细胞与抗MCT1抗体或其抗原结合片段或MCT1结合性融合蛋白接触；并
(iii)检测与所述细胞结合的抗MCT1抗体或抗原结合片段或其MCT1结合性融合蛋白的水平。
本发明还提供了如上所描述的治疗和检测方法，其中病症是自身免疫、炎症、移植、GVHD、代谢障碍(例如糖尿病)、EIHI；多囊肾病(ADPKD)；或变应性病症，例如，其中病症是自身免疫、炎症、移植、GVHD、代谢障碍(如糖尿病)、多囊肾病(ADPKD)或变应性病症且细胞是活化的T细胞或B细胞，或病症是癌症且细胞是肿瘤细胞，或病症是EIHI且细胞是β细胞。
本发明还提供了如上所描述的治疗和检测方法，其中抗MCT1抗体或其抗原结合片段或MCT1结合性融合蛋白包含以下一种或多种：
(i)与选自Ab1-Ab95中任何一种的抗MCT1抗体、或包含与任意前述抗MCT1抗体相同的CDR的另一种抗MCT1抗体竞争；
(ii)与选自Ab1-Ab95的抗人MCT1抗体包含相同的CDR；
(iii)包含选自Ab1-Ab95的抗人MCT1抗体的亲和力成熟或人源化变体；
(iv)与如下抗体竞争，其中所述抗体包含相对于MCT1 Ab1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)或与Ab1-Ab59中任一种具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VH结构域；并且包含相对于MCT1 Ab1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)或与Ab2-Ab95任一种具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VL结构域；
(v)包含MCT1 Ab1的重链CDR序列(SEQ ID NO:.4、5、6)和MCT1 Ab1的轻链CDR序列(SEQ ID NO:7，8，9)、或Ab2-Ab95中的任何一种的重链CDR序列和轻链CDR序列；
(vi)与包含如下VH结构域和VL结构域的抗体竞争或本身包含如下VH结构域和VL结构域，其中所述VH结构域相对于MCT1 Ab1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)、或与Ab2-Ab60之任一，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；并且所述VL结构域相对于MCT1 Ab1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)、或与Ab2-Ab60之任一，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；
(vii)与包含如下VH结构域的抗体竞争或本身包含如下VH结构域，其中所述VH结构域相对于选自SEQ ID NO:2,12,14,16,19-32的VH结构域的氨基酸序列、或与Ab5-Ab60之任一，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；和/或
(viii)与包含如下VL结构域的抗体竞争或本身包含如下VL结构域，其中所述VL结构域相对于选自SEQ ID NO:13,15,17或33-44的VH结构域的氨基酸序列、或与Ab5-Ab60之任一，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；和/或
(ix)包含至少一个肽，其包含与SEQ ID NO:6一致的序列，或包含与之相差最多5、4、3、2或1个残基的序列，其中所述肽直接或间接地连接到另一个多肽，例如，抗体多肽或抗体结构域、血清白蛋白、人或其它灵长类动物血清白蛋白、adnectin，亲和体(affibody)，DARPin，anticalin，乙二醇(PEG)，单甲氧基PEG(mPEG)，XTEN分子，rPEG分子，或任何前述物质的片段或变体。
检测MCT1，可选地功能性MCT1的细胞表达的本发明方法，包括确定根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体是否与所述细胞表达的MCT1结合，例如，该细胞是人或非人的，例如，其中所述细胞获自患有或疑似患有自身免疫性病症、变应性病症、炎性病症、代谢障碍、癌症、移植受者、细胞治疗接受者、EIHI病症、多囊肾疾病(ADPKD)的患者，或者其中所述检测方法使用从患者获得的细胞样本用于诊断或监测疾病或疾病预后，所述患者患有或疑似包含自身免疫性病症、变应性病症、炎性病症、代谢障碍、癌症、移植受者、细胞治疗接受者、EIHI病症、或多囊肾疾病(ADPKD)，其特征在于包含异常(增加的)MCT1表达或活性的细胞。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的组：单克隆抗体；单特异性抗体；多特异性(polyspecific)抗体；人源化抗体；四聚体抗体；四价抗体；多特异性(multispecific)抗体；单链抗体；结构域特异性抗体；单域抗体；结构域缺失的抗体；scFc融合蛋白；嵌合抗体；合成抗体；重组抗体；杂合抗体；突变抗体；CDR移植抗体；抗体片段；Fab；F(ab′)2；Fab′片段；Fv片段；单链Fv(scFv)片段；Fd片段；dAb片段；多特异性(multiplespecific)抗体、diabody；ByTEs、二价抗体、纳米抗体；二价纳米抗体；鲨鱼可变IgNAR结构域；VHH抗体；驼类抗体；和微型抗体。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是人的、人源化的或嵌合的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段是抗MCT1抗体，其与本文鉴定为Ab1-Ab95的抗体中的任一种竞争或结合到相同或重叠的表位，其中该抗体或抗原结合片段可选地拮抗一种或多种MCT1相关功能，例如，它抑制MCT1介导的乳酸转运。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段是抗MCT1抗体，其包含本文中鉴定为Ab1-Ab95的抗MCT1抗体中任何一种的至少1、2、3、4、5或全部6个CDR，其中该抗体或抗原结合片段可选地拮抗一种或多种MCT1相关功能，例如，它抑制MCT1介导的乳酸转运。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含本文鉴定为Ab1-Ab95的抗MCT1抗体中任何一种的人源化、嵌合、scFv或亲和力成熟衍生物，其中该抗体或抗原结合片段可选地拮抗一种或多种MCT1相关功能，例如，它抑制MCT1介导的乳酸转运。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是融合多肽或多特异性多肽，其包含至少一个抗MCT1抗原结合结构域，所述结构域与本文鉴定为Ab1-Ab95的抗MCT1抗体中任何一种包含相同的CDR或重链和/或轻链可变区，其中该融合多肽或多特异性多肽可选地拮抗一种或多种MCT1相关功能，例如，它抑制MCT1介导的乳酸转运。
在一些实施方案中，抗MCT1抗体或抗原结合片段将包含重链CDR3序列，所述重链CDR3序列包含19、20、21、22、23或24个氨基酸残基。在一些实施方案中，重链CDR3序列包含21、22或23个氨基酸残基。在一些实施方案中，重链CDR3序列与SEQ ID NO:6一致或与之相差最多5、4、3、2或1个残基。在一些实施方案中，所述替代如果存在则包含保守的氨基酸取代、或包含在人或啮齿类抗体的重链CDR3中的相同位置上普遍存在的取代氨基酸。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段与参考抗体竞争与MCT1结合，其中参考抗体包含：
i.MCT1 Ab1的重链CDR序列(SEQ ID NO:4,5,6)和MCT1 Ab1的轻链CDR序列(SEQID NO:7,8,9)；或
ii.与MCT1 Ab1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的VH结构域；以及与MCT1Ab1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的VL结构域。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含MCT1 Ab1的重链CDR序列(SEQ IDNO:4,5,6)、和MCT1 Ab1的轻链CDR序列(SEQ ID NO:7,8,9)。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与MCT1 Ab1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VH结构域；并且包含与MCT1 Ab1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的VL结构域。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含VH结构域，其中所述VH结构域与本文鉴定为Ab1-Ab95的抗MCT1抗体中的任何一种的VH结构域包含相同的CDR；和/或包含VL结构域，其中所述VL结构域与本文鉴定为Ab1-Ab83的抗MCT1抗体中的任何一种的VL结构域包含相同的CDR。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与本文鉴定为Ab1-Ab95的抗MCT1抗体中的任何一种的VH结构域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VH结构域；和/或包含与本文鉴定为Ab1-Ab83的抗MCT1抗体中的任何一种的VL结构域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VL结构域。
在一些实施方案中，抗MCT1抗体或抗原结合片段将结合到根据本发明的抗MCT1抗体，即Ab1-Ab95中的任何一个，所结合的表位的一个或多个下列残基上，可选地其中构成表位的残基通过丙氨酸扫描鉴定。
在一些实施方案中，抗MCT1抗体或其抗原结合片段的CDR将具有与MCT1 Ab1的CDR相似的三维结构，如通过结构比对所确定的，相应CDR中的α-碳原子的位置偏差的平均均方根偏差(RMSD)小于
Figure BDA0002570801830000201
小于
Figure BDA0002570801830000202
或小于
Figure BDA0002570801830000203
如图21所示。
本发明另外提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含：具有选自SEQID NO:2,12,14,16,19-32,45,47,49,51,53,55,57,59,61,63,65,67,69,71,73,75,77,79,81,83,85,87,89,91,93,95,97,99,101,103,105,107,109,111,113,115,117,119,121,123,125,127,129,131,133,135,137,139,141,143,145,147,149,151,153和155的氨基酸序列的可变重链多肽或重链多肽，以及具有选自SEQ ID NO:3,13,15,17,33-44,46,48,50,52,54,56,58,60,62,64,66,68,70,72,74,76,78,80,82,84,86,88,90,92,94,96,98,100,102,104,106,108,110,112,114,116,118,120,122,124,126,128,130,132,134,136,138,150,152,144,146,148,150,152,154和156的氨基酸序列的可变轻链多肽或轻链多肽。
本发明特别提供了分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含具有分别选自以下的氨基酸序列的可变重链多肽和可变轻链多肽：SEQ ID NO.2和3；SEQ ID NO:12和13；SEQ ID NO:14和15；SEQ ID NO:16和17；SEQ ID NO:45和46；SEQ ID NO:47和48；SEQ IDNO:49和50；SEQ ID NO:51和52；SEQ ID NO:53和54；SEQ ID NO:55和56；SEQ ID NO:57和58；SEQ ID NO:59和60；SEQ ID NO:61和62；SEQ ID NO:63和64；SEQ ID NO:65和66；SEQ IDNO:67和68；SEQ ID NO:69和70；SEQ ID NO:71和72；SEQ ID NO:73和74；SEQ ID NO:75和76；SEQ ID NO:77和78；SEQ ID NO:79和80；SEQ ID NO:81和82；SEQ ID NO:83和84；SEQ IDNO:85和86；SEQ ID NO:87和88；SEQ ID NO:89和90；SEQ ID NO:91和92；SEQ ID NO:93和94；SEQ ID NO:95和96；SEQ ID NO:97和98；SEQ ID NO:99和100；SEQ ID NO:101和102；SEQID NO:103和104；SEQ ID NO:105和106；SEQ ID NO:107和108；SEQ ID NO:109和110；SEQID NO:111和112；SEQ ID NO:113和114；SEQ ID NO:115和116；SEQ ID NO:117和118；SEQID NO:119和120；SEQ ID NO:121和122；SEQ ID NO:123和124；SEQ ID NO:125和126；SEQID NO:127和128；SEQ ID NO:129和130；SEQ ID NO:131和132；SEQ ID NO:133和134；SEQID NO:135和136；SEQ ID NO:137和138；SEQ ID NO:139和140；SEQ ID NO:141和142；SEQID NO:143和144；SEQ ID NO:145和146；SEQ ID NO:147和148；SEQ ID NO:149和150；SEQID NO:151和152；SEQ ID NO:153和154以及SEQ ID NO:155和156。
本发明还提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，包含与MCT1 Ab1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VH结构域；并且包含与MCT1 Ab1的VL结构域的氨基酸序列(SEQID NO:3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的VL结构域。
本发明还提供了一种融合蛋白，其包含至少一个肽，该肽包含与SEQ ID NO:6一致的序列，或包含与之相差最多5、4、3、2或1个残基的序列，其中所述肽直接或间接连接到另一多肽，例如，抗体多肽或抗体结构域、血清白蛋白、人或其它灵长类动物血清白蛋白、adnectin、affibody、DARPin、anticalin、乙二醇(PEG)、单甲氧基聚乙二醇(mPEG)、XTEN分子、rPEG分子、或任意前述的片段或变体。在一些实施方案中，抗体多肽或结构域包含Fc多肽或其片段，例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区或其片段。在一些实施方案中，所述取代如果存在则包含保守的氨基酸取代、或包含在人或啮齿类抗体的重链CDR3中的相同位置上普遍存在的取代氨基酸。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或融合蛋白在与活化的T细胞或B细胞表面的MCT1结合后具有以下一种或多种特性：
i.抑制乳酸的转运；
ii.抑制溴丙酮酸的转运；
iii.抑制单羧酸、丙酮酸、衍生自亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸的支链含氧酸、酮体、乙酰乙酸、β-羟基丁酸、乙酸、乳酸、细胞营养物、代谢物、离子、激素、脂类和酮类中的一种或多种的转运；
iv.抑制CD3/CD28刺激的T细胞的增殖；
v.抑制活化T细胞或B细胞的增殖；
vi.抑制一种或多种炎性细胞因子的产生；
vii.增加调节性T(Treg)细胞的比例或活性；以及
viii.抑制混合淋巴细胞反应中的同种异体活化。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或融合蛋白在与MCT1结合后抑制一种或多种炎性细胞因子的产生。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞因子中的至少一种，例如，炎性细胞因子，可以包括以下的任何细胞因子：FGF2、FLT-3L、Fractilkine、G-CSF、GM-CSF、GRO、IFNα2、IFNγ、IL-3、IL-5、IL-9、IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-13、IL-17a、IP-10、MCP-1、MDC、MIP-1a、MIP-1b、sCD40L、TNFα和TNFβ。在一些实施方案中，所述一种或多种炎性细胞因子中的至少一种选自IFNγ、GM-CSF、TNFα、IL-10和IL-6。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或融合蛋白，以通过乳酸FLIPR测定法测定的小于100nM、小于50nM或小于10nM的Kd，抑制活化T细胞中MCT1介导的乳酸转运。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或融合蛋白不会：
i.与MCT2、MCT3、MCT4和/或CD147结合，如流式细胞术测量的；
ii.抑制MCT2、MCT3和/或MCT4的转运；
iii.抑制IL-2的产生；
iv.抑制单核细胞中的乳酸转运；
v.抑制幼稚、静息和/或调节性T细胞的增殖；
vi.抑制RBC中的乳酸转运；
vii.改变一种或多种T细胞活化标志物的表达，可选地选自CD25、CD54、CD69、CD95、CD98、CD147、CD154、CD278、CD279和HLA-DR/DP/DQ。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或融合蛋白包含人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或融合蛋白包含已被修饰以改变效应子功能、半衰期、蛋白水解或糖基化中的至少一种的Fc区，其中可选地Fc区含有改变或消除N-和/或O-糖基化的一个或多个突变。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或融合蛋白以小于100nM、小于50nM或小于10nM的亲和力(KD)结合MCT1。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或融合蛋白还具有以下一种或多种修饰：
i.与细胞毒性剂结合；
ii.包含在双特异性抗体中；
iii.包含在多特异性抗原结合蛋白中；
iv.与标签缀合；以及
v.与另一治疗剂，任选的免疫抑制剂或化疗剂，缀合。
在一些实施方案中，标签是化学发光标签、顺磁标签、MRI造影剂、荧光标签、生物发光标签或放射性标签。
在一些实施方案中，细胞毒性剂是抑制DNA、RNA或蛋白质合成的结构部分；放射性核素；或核糖体抑制蛋白。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或融合蛋白适用于治疗患有自身免疫性、炎性或变应性病症；癌症或EIHI的人类受试者。
本发明还提供了一种针对任意前述实施方案的抗MCT1抗体或其抗原结合片段产生的抗独特型抗体或其抗原结合片段，其可选地中和它所结合的抗MCT1抗体或其抗原结合片段的一种或多种生物学效应。本发明还提供了针对抗独特型抗体或其抗原结合片段产生的抗抗独特型抗体或其抗原结合片段，可选地其中的抗抗独特型抗体或其抗原结合片段中和其所结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段。
此外，在一些实施方案中，本发明还涉及使用该抗独特型抗体的方法，所述方法用于在受试者中监测所述抗MCT1抗体或其抗原结合片段的体内水平、或用于在受试者中中和所述抗MCT1抗体或其抗原结合片段的体内效应。
本发明还提供了编码根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合蛋白的分离的多核苷酸。另外还提供了包含这种多核苷酸的表达载体。本发明还提供了包含该表达载体的宿主细胞。本发明还涉及一种生产分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段的方法，包括在允许该抗体或其抗原结合片段表达的条件下培养宿主细胞；以及从培养基或宿主细胞中回收抗体或其抗原结合片段。
本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上有效量的根据任意前述实施方案的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合蛋白、或表达其的分离的细胞，所述药物组合物可进一步包含药物稀释剂、载体或赋形剂。
本文还提供了一种治疗或预防自身免疫性、变应性或炎性病症的方法，包括向有需要的受试者施用治疗性或预防性有效量的根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体、或其抗原结合片段、或融合蛋白，或者如上所描述的药物组合物。
在一些实施方案中，该病症至少部分地由活化的T细胞或B细胞介导。
在一些实施方案中，抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合蛋白的施用具有以下一种或多种作用：
i.抑制活化的T细胞或B细胞中的乳酸转运；
ii.抑制活化的T细胞或B细胞中溴丙酮酸毒素的转运；
iii.抑制CD3/CD28刺激的T细胞的增殖；
iv.抑制活化T细胞的增殖；
v.抑制一种或多种炎性细胞因子的产生和/或分泌；
vi.不抑制IL-2的产生和/或分泌；
vii.增加尿酮的产生；
viii.增加存活时间；
ix.减少移植排斥；
x.增加调节性T(Treg)细胞的比例或活性；
xi.增加是Treg的CD4+T细胞的比例；
xii.降低IgG1+B细胞的比例；
xiii.降低生发中心B细胞的比例；
xiv.不抑制人RBC中的乳酸转运；
xv.减少T细胞的活化；以及
xvi.降低细胞毒性T细胞的活性。
在一些实施方案中，该方法用于治疗或预防狼疮。
在一些实施方案中，该方法用于治疗或预防移植物排斥。
在一些实施方案中，该方法用于治疗或预防移植物抗宿主病(GVHD)。
在一些实施方案中，该方法用于治疗或预防糖尿病。
在一些实施方案中，该方法用于治疗或预防肥胖症。
在一些实施例中，经由测量尿酮来监测治疗效果。
本发明还提供了一种治疗或预防癌症复发的方法，包括向有需要的受试者施用治疗性或预防性有效量的根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体、或其抗原结合片段、或融合蛋白，或者根据前述实施方案的药物组合物。
在一些实施方案中，肿瘤细胞表达MCT1。
在一些实施方案中，受试者是哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物是人。在一些实施方案中，哺乳动物是非人灵长类动物。在一些实施例中，哺乳动物是啮齿类动物。
本发明还提供了一种抑制或降低活化的T细胞或B细胞的活性的方法，包含将所述活化的细胞与根据任意前述实施方案的抗MCT1抗体，或其抗原结合片段，或融合蛋白接触。
在一些实施方案中，抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合蛋白作为单一疗法施用。
在一些实施方案中，抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合蛋白与第二治疗剂联合施用。
在一些实施方案中，治疗剂选自免疫抑制药物或化学治疗剂。
在一些实施方案中，抗MCT1抗体、其抗原结合片段、融合蛋白或药物组合物经肠内、胃肠外或局部施用。
本发明还提供了一种用于监测使用与MCT1结合并减少MCT1介导的乳酸转运的抗体或其抗原结合片段或融合蛋白治疗的疗效的方法，包括测量尿酮的水平。
在另一个方面，本发明提供了一种用于诊断选自以下的病症的方法：自身免疫性、炎性或变应性病症；癌症；EIHI；以及与MCT1上调相关的病症，所述方法包括：
i.分离负责介导该病症的细胞；
ii.将所述细胞与抗MCT1抗体或其抗原结合片段或MCT1结合性融合蛋白接触；并
iii.检测与所述细胞结合的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或MCT1结合性融合蛋白的水平。
在一些实施方案中，病症是自身免疫性、炎性或变应性病症，且细胞是活化的T细胞或B细胞。
在一些实施方案中，病症是癌症，并且细胞是肿瘤细胞。
在一些实施方案中，病症是EIHI，且细胞是β细胞。
在一些实施方案中，抗MCT1抗体或其抗原结合片段或MCT1结合性融合蛋白：
i.与包含MCT1 Ab1的重链CDR序列(SEQ ID NO:4,5,6)和MCT1 Ab1的轻链CDR序列(SEQ ID NO:7,8,9)的抗体或选自Ab1-Ab95中任何一种的抗MCT1抗体竞争；
ii.与包含如下VH结构域和VL结构域的抗体竞争，其中所述VH结构域与MCT1 Ab1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)或Ab1-Ab95任一种的VH结构域具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；并且其中所述VL结构域与MCT1 Ab1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)或Ab1-Ab95任一种的VL结构域具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；
iii.包含MCT1 Ab1的重链CDR序列(SEQ ID NO:4,5,6)和MCT1 Ab1的轻链CDR序列(SEQ ID NO:7,8,9)；
iv.包含与MCT1 Ab1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VH结构域；并且还包含与MCT1 Ab1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的VL结构域；或
v.包含至少一个肽，该肽包含与SEQ ID NO:6一致的序列，或包含与之相差最多5、4、3、2或1个残基的序列，其中所述肽直接或间接连接到另一多肽，例如，抗体多肽或抗体结构域、血清白蛋白、人或其它灵长类动物血清白蛋白、adnectin、affibody、DARPin、anticalin、乙二醇(PEG)、单甲氧基聚乙二醇(mPEG)、XTEN分子、rPEG分子或任意前述的片段或变体。
对附图的多个角度的详细描述
图1说明白细胞的代谢状态与不同的免疫学性质相关联(参考文献33)。静息、记忆和Treg细胞依赖于氧化磷酸化(Oxphos)(左)，而抗原活化后的效应T细胞增殖和效应子功能主要依赖于糖酵解(右)。
图2显示，CD3/CD28活化将诱导更高的MCT1和MCT4表达，并且在MCT4的表达水平高(供体1)或低(供体2)的情况下，AZ3965抑制增殖的IC50值没有变化(S＝刺激3天；NS＝未刺激；BSG＝Basigin/CD147)。供体1从左到右的柱形对应于未刺激的MCT2、MCT4和BSG的表达，随后是刺激的MCT1、MCT2、MCT4和BSG的表达。注意：供体1在未受刺激的细胞中没有MCT1的表达。供体2从左到右的柱形对应于未刺激的MCT1、MCT2、MCT4和BSG的表达，随后是刺激的MCT1，MCT2，MCT4和BSG的表达。
图3包含使用AZ3965的乳酸FLIPR检测结果。AZ3965抑制人CD4+T细胞(CD4)、CD8+T细胞(CD8)、B细胞淋巴瘤细胞(Daudi)和外周血单个核细胞(PBMC)中的乳酸转运，但不抑制单核细胞(Mono)中的乳酸转运。在100nM AZ3965，从上到下的曲线对应Daudi、CD4、CD8、PBMC和Mono。
图4包含了使用小分子MCT1抑制剂的人T细胞增殖试验的结果。MCT1的抑制会导致T细胞增殖的抑制，IC50为0.54nM。
图5包含了使用小分子MCT1抑制剂的人混合淋巴细胞反应(MLR)测定的结果。在该MLR测定中，T细胞增殖受到抑制，IC50为1.34nM。
图6显示了施用AZ3965后对T细胞体外分泌细胞因子的抑制。T细胞在给药前被CD3/CD28活化5天。图中的红色区域(表达较高)已用黑色虚线勾勒。所有其他区域为蓝色(表达较低)。阴影的强度也指示表达情况。AZ3965抑制IFNγ、GM-CSF、TNFα、IL-10和IL-6的分泌，但不抑制IL-2的分泌。
图7A-J显示了，与未染色的对照相比，用100nM小分子MCT1抑制剂处理4天或无处理，活化的T细胞上各种T细胞表面标志物的表达。在每个分图中，抗体未染色对照是最左边的峰。在每个分图中，处理和未处理条件之间的染色没有显著差异。未处理条件是所有分图中的稍高的曲线，除了图7H，其中处理条件下的曲线稍高。这里显示的是对于以下细胞表面标志物的结果：CD25(图7A)；CD54(图7B)；CD69(图7C)；CD95(图7D)；CD98(图7E)；CD147(图7F)；CD154(图7G)；CD278(图7H)；CD279(图7I)；以及HLA-DR,DP,DQ(图7J)。
图8显示了用AZ3965的异种-GVHD测定的结果。AZ3965可阻断GVHD发病直至停药，并优于JAK抑制剂。
图9显示，对于在AZ3965给药期间的异种GVHD实验(图8)，组织Tregs的频率呈剂量依赖性增加。
图10显示，MCT1小分子抑制剂对移植物排斥的效果。在第10天，无论是目测还是在移植物分析中，25mg/kg化合物给药2次/天都减少了移植物排斥。
图11A-B显示，在暴露于绵羊RBC的小鼠中，施用AZ3965降低了IgG1 B细胞和生发中心B细胞的比例。图11A显示AZ3965施用2.5mpk时IgG1 B细胞减少以及图11B显示了相同剂量下生发中心B细胞的减少。
图12A-D显示了经由流式细胞仪测量结合到不同物种的PBMCs表面的MCT1来评估MCT1 Ab1的交叉反应性。图12A显示，MCT1 Ab1与人类PBMC表面的MCT1结合，并且它以甚至更大程度与刺激后的细胞结合。图12B显示，MCT1 Ab1与食蟹猴MCT1结合。图12C显示，MCT1Ab1与兔MCT1结合。图12D显示，MCT1 Ab1不与大鼠MCT1结合。
图13A-B显示，MCT1 Ab1与活化的T细胞结合。MCT1 Ab1不染色幼稚细胞(图13A)，但在第3天染色CD3/CD28活化细胞的表面(图13B)。在图13A中唯一的染色对应于细胞核染色，证实幼稚T细胞的存在。
图14显示MCT1 Ab1在体外抑制活化T细胞中MCT1的乳酸转运。大鼠Ig对照和缓冲液对照曲线显示与对照相比没有变化，而MCT1 Ab1与对照相比导致了乳酸转运减少，Kd为7.6nM(右手侧底部曲线)。
图15显示MCT1 Ab1可以抑制溴丙酮酸毒素的转运，如通过使用ATPlite测量免于细胞死亡的MCT1 Ab1保护作用(Kd＝1.2nM)。
图16包含T细胞增殖测定的结果，其中MCT1 Ab1抑制了T细胞增殖，EC50为1.3nM。
图17显示MCT1 Ab1在人混合淋巴细胞反应中以剂量依赖性方式抑制同种异体活化。
图18A-B显示MCT1在5个不同物种的RBC表面的表达。在图18A中，纯化的食蟹猴RBC的MCT1 Ab1染色(右)显示了MCT1在质膜上的表达，与缺乏表达的纯化的人RBC(20个供体，左)形成对比。在左图中，仅加二抗的条件、对照条件、和MCT1 Ab1染色条件全都未显示MCT1的染色。图18B中，染色显示MCT1在兔RBC表面的表达(左)，但在大鼠(中)或比格犬(右)RBCs的表面则没有。
图19显示，人RBCs不需要MCT1用于乳酸转运。使用基于FLIPR的转运测定(参考文献1,2)，无论是MCT1 Ab1还是AZ3965对MCT1的抑制都没有阻断纯化的人RBC中的乳酸转运。无＝无抑制剂。
图20包含狼疮B细胞的流式细胞术分析结果。来自一个健康患者和两个狼疮患者的B细胞群的示例性MCT1染色表明，狼疮患者的MCT1染色显著增加。
图21包含MCT1 Ab1 Fab的晶体结构的图形渲染，与本申请一同保存为43260_4200-MCT1_Ab1.pdb。在图像中，可以看到VH CDR3延伸超出抗原结合表面的其余部分。
图22示意性地表明，MCT1参与了各种功能，在淋巴系统外存在避免毒性的冗余途径，但MCT1在淋巴样系统(如B、T细胞)中具有唯一的转运途径。
图23显示，食蟹猴红细胞(RBC)表达高水平的MCT1。
图24包含的实验表明，食蟹猴能耐受50mpk的抗MCT1抗体(Ab1)的重复施用。
图25包含在食蟹猴中观察到的PK数据，显示施用的抗MCT1抗体(Ab1)有良好的结合，并且结果进一步表明在Ab1剂量率>5mpk时，RBC漏槽(sink)是饱和的。
图26包含评价他莫昔芬诱导的MCT1基因敲除小鼠的靶组织(肌肉，睾丸和眼睛)的实验。
图27显示，MCT1基因敲除小鼠动物具有较小的睾丸，显微镜观察发现一些精子细胞退化。
图28显示，在各种测定的靶组织中，即胸腺、脾脏、淋巴结、睾丸和视网膜中，相对于对照管家基因(HPRT)的表达，MCT1 KO表型赋予稳健的他莫昔芬诱导性MCT1表达敲减(knockdown)。
图29显示了在敲除小鼠中观察到的睾丸的表型变化。如图所示，在所有MCT1基因敲除小鼠的睾丸中观察到精子细胞退化(缺乏晚期精子细胞和精母细胞，管状细胞结构(tubular cellularity)减少，空泡化和细胞碎片)。
图30进一步比较了WT和MCT1 KO小鼠睾丸的组织学，并显示相对于野生型，基因敲除小鼠中精子细胞退化增加。
图31总结了不同商购抗MCT1抗体的结合和功能结果的比较。本图包含使用Abcam出售的所有抗MCT1抗体(Mab和多克隆，图中列出了目录号)的MFI(上图，流式细胞术，活细胞的细胞结合)和溴丙酮酸功能测定结果(下图,RLU)。
图32包含检测本文公开的不同抗MCT1抗体，即INX420、INX444、INX356、INX352和INX453的拮抗活性的实验结果，所述结果基于它们在溴丙酮酸试验中阻断MCT1转运蛋白活性的相对能力。
图33包含本文公开的不同抗MCT1抗体，即INX420、INX444、INX356、INX352和INX453的可变重链区的比对。
图34包含本文公开的不同抗MCT1抗体，即INX420、INX444、INX356、INX352和INX453的可变轻链区的比对。
图35A和B分别显示了本文所公开的抗MCT1与MCT1+293细胞的结合以及它们在溴丙酮酸毒素转运试验中的相对功能性。
图36A-D包含实验数据，其比较了本文公开的两种抗MCT1抗体，即INX310和INX420，在抑制CD4+和CD8+T细胞增殖上的相对能力。
图37A-D包含实验数据，其显示本文公开的抗MCT1抗体，即INX420，与小分子MCT1抑制剂化合物相比，在体外增加了PD1+TIGIT+细胞的频率。
图38A-B包含实验数据，其显示PD1+TIGIT+Tr1细胞抑制PMBC的增殖。
图39包含实验数据，其显示用IL-10拮抗剂(抗IL-10RB)阻断IL-10信号转导并不影响本文所公开的抗MCT1抗体即INX420对PMBC增殖的抑制。
图40包含的实验数据显示，与用对照抗体处理的异种GvHD动物相比，用本文公开的抗MCT1抗体，即INX420和INX310处理异种GvHD动物，导致了CD3+、CD4+和CD8+效应T细胞的数量显著降低，以及Tr1细胞增加。
图41A-C包含的实验数据显示，与用对照抗体处理的异种GvHD动物相比，用本文公开的抗MCT1抗体，即INX420、INX413和INX310处理异种GvHD动物，导致CD3+、CD4+和CD8+效应T细胞的数量显著降低。
图42包含的实验结果显示，与对照抗体处理的动物相比，在异种-GvHD动物模型中施用抗MCT1抗体，即INX420和INX310，可使其存活率、长期保护和耐受诱导增加。
图43包含生物标志物表达数据，显示TIGIT和PD1在异种-GvHD动物模型中在大量(75％)的人T细胞上表达，并构成Tr1细胞的推定生物标志物。
图44包含生物标记物表达数据，显示TIGIT和PD1构成Tr1细胞的推定生物标记物，并且表达这些标记物的推定的Tr1细胞抑制T效应细胞的增殖。
图45包含生物标志物表达数据，显示Tr1细胞表达高水平的颗粒酶B(GranzymeB)，不表达FOXP3或Blimp1。
图46A-C包含的实验结果显示，与用对照抗体处理的动物相比，用抗MCT1抗体(INX420)处理的NSG小鼠包含减少的hCD3+T效应细胞数量。
图47A-B包含的实验结果显示，CD23/CD28刺激后Tr1细胞抑制hCD3+T效应细胞和PMBC的增殖。
图48示意性地描述了异种GvHD动物模型中Tr1生成的动力学，并显示用抗MCT1抗体处理可抑制效应阶段的增殖。
图49A-B包含了Tr1细胞与各种抗体、细胞因子和配体的离体培养的相关实验数据。观察到的结果表明，抗TIGIT和PVR配体并没有提高存活。相反，用IL-2、IL-17和IL-15处理则以剂量依赖性的方式实质性地提高Tr1细胞的离体存活(存活率高达约75％)。
图50A-B包含的实验数据显示，基于血酮和葡萄糖水平，在饥饿条件下8-24小时后小分子MCT1抑制剂对酮症的影响。
图51A-B包含的实验数据显示，小分子MCT1抑制剂在饥饿24小时后不引发酮症酸中毒，并且与没有小分子MCT1抑制剂的饥饿相比，只引起pH值极小的降低(约0.05)。
图52显示了，通过丙氨酸扫描确定，构成预测的被根据本发明的4种示例性抗人MCT1抗体所结合的表位的人MCT1残基。结果显示，全部4种抗体所结合的表位包含相同的人MCT1细胞外区域以及基本上相同的人MCT1残基。
图53和54进一步绘制了，通过丙氨酸扫描确定，构成预测的被根据本发明的4种抗人MCT1抗体所结合的表位的具体人MCT1残基。这些结果再次表明，全部4种抗体所结合的表位包含相同的人MCT1细胞外区域和基本上相同的人MCT1残基。
图55包含实验结果，其表明，还结合小鼠MCT1的根据本发明的抗人MCT1抗体，保护表达MCT1的小鼠转染子免于溴丙酮酸的毒性作用。
发明详述
本发明涉及与单羧酸转运蛋白1("MCT1")结合的抗体及其抗原结合片段，编码所述抗MCT1抗体及其抗原结合片段的核酸，包含所述抗MCT1抗体及其抗原结合片段的组合物，以及将所述抗MCT1抗体、抗体片段和组合物用于诊断和治疗的方法。
抗体靶标：MCT1
MCT1是一种多次跨膜蛋白，负责关键代谢物(包括糖酵解产物)的易化转运。本申请提供了新的抗MCT1抗体，特别是抗人MCT1抗体，包括与本申请鉴定为Ab1-Ab83的抗体中任一种包含相同CDR的那些抗体。在本发明之前，尚未报道过阻断MCT1功能的抗MCT1抗体或抗体片段。
根据本发明，抗MCT1抗体或抗体片段与MCT1的结合将减少、压制、缩减、或抑制MCT1的至少一种功能。由于MCT1与免疫有关，MCT1的这种结合和抑制可以在自身免疫，例如活化的T细胞、B细胞和/或炎性细胞因子的表达上具有至少一种抑制作用。重要的是，MCT1是唯一在T细胞和B细胞上表达的免疫学相关的乳酸转运蛋白。由于在效应T细胞活化期间向糖酵解的迁移，本发明的抗MCT1抗体特别可以靶向活化的T细胞，因此为控制自身免疫性、炎性和变应性病症提供了创新和有力的机会。如实施例中所示，本发明的抗MCT1抗体提供了对淋巴细胞代谢的选择性抑制和引人注目的安全特性，尤其是考虑到与人类中MCT1缺乏有关的数据。在炎性疾病模型中，例如在疾病易感小鼠的狼疮模型中，阻断淋巴细胞糖酵解阻止了这些模型中IFNγ的产生，进一步证明以安全有效的方式阻断淋巴细胞糖酵解的本发明抗体具有作为免疫调节药物的强大潜力。
阻断或抑制MCT1功能的抗MCT1抗体可用于减弱自身免疫。特别是，这些抗体可用于抑制不期望的人类免疫反应，诸如自身免疫、变应性、狼疮、GVHD、败血症或不期望的炎症免疫反应。
由于肿瘤细胞对能量的特殊需求和对糖酵解的依赖，MCT1的表达也已与癌症有牵连。因此，本发明抗体及其抗原结合片段适用于癌症治疗。在β细胞中的MCT1过度表达也是运动诱导的高胰岛素症(EIHI)的根本原因，这样，本发明的抗体也可应用于EIHI的治疗。
值得注意的是，虽然MCT蛋白的小分子抑制剂在临床前模型中与视网膜、心脏和睾丸的毒性有关联，但缺乏MCT1的人类在这些器官中没有任何毒性(参考文献49和实施例)，这支持本发明的MCT1特异性抗体有很强的安全性。此外，缺乏MCT1的个体已被证明是健康的，并且这些结论由实施例中的数据支持，表明MCT1不参与人RBC乳酸转运。
人类MCT1具有以下氨基酸序列(SEQ ID NO:1)，以标识符P53985-1保存在UniProt数据库中。
SEQ ID NO:1
MPPAVGGPVGYTPPDGGWGWAVVIGAFISIGFSYAFPKSITVFFKEIEGIFHATTSEVSWISSIMLAVMYGGGPISSILVNKYGSRIVMIVGGCLSGCGLIAASFCNTVQQLYVCIGVIGGLGLAFNLNPALTMIGKYFYKRRPLANGLAMAGSPVFLCTLAPLNQVFFGIFGWRGSFLILGGLLLNCCVAGALMRPIGPKPTKAGKDKSKASLEKAGKSGVKKDLHDANTDLIGRHPKQEKRSVFQTINQFLDLTLFTHRGFLLYLSGNVIMFFGLFAPLVFLSSYGKSQHYSSEKSAFLLSILAFVDMVARPSMGLVANTKPIRPRIQYFFAASVVANGVCHMLAPLSTTYVGFCVYAGFFGFAFGWLSSVLFETLMDLVGPQRFSSAVGLVTIVECCPVLLGPPLLGRLNDMYGDYKYTYWACGVVLIISGIYLFIGMGINYRLLAKEQKANEQKKESKEEETSIDVAGKPNEVTKAAESPDQKDTDGGPKEEESPV
与MCT1结合并抑制MCT1的功能。
本发明的抗MCT1抗体可以具有任何合适的对于MCT1的亲和力(affinity)和/或亲合力(avidity)。亲和力是指抗MCT1抗体或其它抗原结合蛋白与表位或抗原决定簇的结合强度。通常，亲和力从解离常数Kd的角度衡量，后者定义为[Ab]×[Ag]/[Ab-Ag]，其中[Ab-Ag]是抗体-抗原复合物的摩尔浓度，[Ab]是未结合抗体的摩尔浓度，[Ag]是未结合抗原的摩尔浓度。亲和力常数Ka定义为1/Kd。通过竞争性抑制、平衡透析等确定结合性肽的特异性和亲和力的适宜方法可参见，例如，Harlow,等,Antibodies:A Laboratory Manual,ColdSpring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1988)；Colligan等,eds.,Current Protocols in Immunology,Greene Publishing Assoc.和Wiley Interscience,N.Y.,(1992,1993),以及Muller,Meth.Enzymol.92:589-601(1983)。
亲和力可以通过本文中别处描述的任何方法或在本领域中的已知等同方式来确定。可用于确定亲和力的一种方法实例，提供在Scatchard analysis of Munson&Pollard,Anal.Biochem.107:220(1980)中。结合亲和力也可以通过KINEXA、平衡法(例如酶联免疫吸附测定(ELISA)或放射免疫测定(RIA))或动力学分析(例如BIAcoreTM分析)来确定。
在本发明的另一个实施方案中，抗MCT1抗体和抗原结合片段，例如，人的、人源化的或嵌合的抗MCT1抗体或抗体片段，可以以小于或等于5×10-5M,10-5M,5×10-6M,10-6M,5×10-7M,10-7M,5×10-8M,10-8M,5×10-9M,10-9M,5×10-10,10-10,5×10-11,10-11M,5×10-12,10- 12M,5×10-13M,或10-13M的结合亲和力(KD)与MCT1结合，例如，通过ELISA、生物膜干涉法("BLI")、KINEXA或表面等离子体共振在25°或37℃测定。典型地，本发明提供的抗MCT1抗体对MCT1的亲和力在约10-4至约10-12M(例如约10-7至约10-10M)的范围内。本文的术语免疫反应通常是指，抗MCT1抗体与MCT1以低于约10-4M的亲和力结合，例如，在一个特定方面，本发明提供了一种抗MCT1抗体，其与MCT1的结合亲和力(KD)约为7×10-9M或更低，如通过例如KINEXA确定。
此外，本发明的抗MCT1抗体和抗原结合片段，例如，人的、人源化的或嵌合的抗MCT1抗体或抗体片段，可以包括与MCT1结合的解离速率(koff)小于或等于5×10-4s-1,10-4s-1,5×10-5s-1,或10-5s-1的抗MCT1抗体或抗体片段。
亲合力是指结合性蛋白与抗原之间总的相互作用的全部强度(例如抗MCT1抗体与MCT1之间相互作用的总强度)。亲和力是指抗体或其他结合肽上的单个抗原结合位点与单个表位或抗原决定簇之间的总非共价相互作用的强度。亲合力通常由三个主要因素决定：结合性蛋白对其所结合的表位(一个或多个)或抗原决定簇(一个或多个)的内在亲和力，抗体或结合性蛋白与抗原的价位(例如：抗MCT1抗体的价位为3、4或更高，通常会比二价抗体表现出对抗原更高的亲合力，二价抗体对抗原可以比单价抗体具有更高的亲合力，尤其是在抗原中有重复的表位时)，和/或相互作用成分的几何排列。亲合力通常可以通过用于评估亲和力的相同类型的技术来测量。
抗MCT1抗体可以基于其与MCT1结合并从而抑制MCT1的一种或多种功能的能力来表征。这样的抗MCT1抗体可以以原生形式直接作为治疗剂使用。抑制性抗MCT1抗体可以部分或完全抑制MCT1的各种功能，诸如单羧酸、离子和各种其它分子例如毒素的转运。在一个具体的实施方案中，本发明的抗体抑制MCT1介导的乳酸转运。抑制作用可以通过任何适宜的方法来测量。在一个方面，抑制反映为：抑制性抗MCT1抗体引起MCT1介导的乳酸转运至少约20％，例如，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约75％或更大幅度(例如，约25-100％)的下降。当考虑抗MCT1抗体对乳酸转运的影响时，与对照组相比，例如，与来自不表达MCT1的细胞或未被抗体阻断的细胞的乳酸转运测定结果相比，可以确定在这方面的减少百分比。
抗MCT1抗体的生产
根据本发明的抗MCT1单克隆抗体(mAb)和抗原结合片段可以通过不同的方法生产，诸如单克隆抗体方法学，例如Kohler和Milstein(1975)Nature 256:495的标准体细胞杂交技术。此外，还可以采用其他可以用于生产单克隆抗体的技术，例如，B淋巴细胞的病毒或致瘤转化。
用于制备杂交瘤的一个优选动物系统是鼠类系统。在小鼠中产生杂交瘤是一种极其完善建立的程序。用于分离经免疫脾细胞供融合用的免疫方案和技术在本领域中是已知的。融合配偶体(例如鼠骨髓瘤细胞)和融合程序也是已知的。可基于如上所述制备的鼠类单克隆抗体的序列来制备本发明的嵌合或人源化抗体。可从目的鼠杂交瘤获得编码重链和轻链免疫球蛋白的DNA，并且使用标准分子生物学技术，将其工程改造成含有非鼠类(例如人)免疫球蛋白序列。例如，为产生嵌合抗体，可使用本领域中已知的方法来使鼠类可变区连接于人恒定区(参见例如颁给Cabilly等的美国专利No.4,816,567)。为产生人源化抗体，可使用本领域中已知的方法来将鼠类CDR区插入人框架中(参见例如颁给Winter的美国专利No.5,225,539以及颁给Queen等的美国专利No.5,530,101、No.5,585,089、No.5,693,762和No.6,180,370)。
根据本发明的至少一些实施方案，抗体是人单克隆抗体。可使用携带部分的人免疫系统而非小鼠系统的转基因或转染色体小鼠，例如HuMAb MouseTM、KM MouseTM(参见例如Lonberg,等(1994)Nature 368(6474):856-859)，来产生针对MCT1的人单克隆抗体。相应地，所述小鼠展现出降低的小鼠IgM或κ的表达，以及应答于免疫，引入的人重链和轻链转基因经历类别转换和体细胞突变以产生高亲和力人IgGκ单克隆(Lonberg，N.等(1994)，出处同上；综述于Lonberg,N.(1994)Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101；Lonberg,N.和Huszar,D.(1995)Intern.Rev.Immunol.13:65-93，以及Harding,F.和Lonberg,N.(1995)Ann.N.Y.Acad.Sci.764:536-546中)。在另一实施方案中，可使用在转基因和转染色体上携带人免疫球蛋白序列的小鼠，诸如携带人重链转基因和人轻链转染色体的小鼠，来产生根据本发明至少一些实施方案的人抗体。在本文中称为"KM小鼠TM"的小鼠详述于Ishida等的PCT公布WO02/43478中。
再有，表达人免疫球蛋白基因的替代性转基因动物系统在本领域中是可得的，并且可用于产生根据本发明至少一些实施方案的抗MCT1抗体。例如，可使用称为Xenomouse(Abgenix,Inc.)的替代性转基因系统；这种小鼠例如描述于Kucherlapati等的美国专利No.5,939,598、No.6,075,181、No.6,114,598、No.6,150,584和No.6,162,963中。
此外，表达人免疫球蛋白基因的替代性转染色体动物系统在本领域中是可得的，并且可用于产生根据本发明至少一些实施方案的抗MCT1抗体。例如，可使用称为“TC小鼠”的携带人重链转染色体和人轻链转染色体两者的小鼠；这种小鼠描述于Tomizuka等(2000)Proc.Natl.Acad Sci.USA 97:722-727中。此外，已在本领域中描述了携带人重链和轻链转染色体的母牛(Kuroiwa等(2002)Nature Biotechnology 20:889-894)，并且可用于产生根据本发明至少一些实施方案的抗MCT1抗体。
可使用噬菌体展示方法用于筛选人免疫球蛋白基因的文库，来制备根据本发明至少一些实施方案的人单克隆抗体。本领域中确立了用于分离人抗体的这种噬菌体展示方法。参见例如：颁给Ladner等的美国专利No.5,223,409、No.5,403,484和No.5,571,698；颁给Dower等的美国专利No.5,427,908和No.5,580,717；颁给McCafferty等的美国专利No.5,969,108和No.6,172,197；以及颁给Griffiths等的美国专利No.5,885,793、No.6,521,404、No.6,544,731、No.6,555,313、No.6,582,915和No.6,593,081。
也可使用已将人免疫细胞重构至其中以使得在免疫后可产生人抗体应答的SCID小鼠，来制备根据本发明至少一些实施方案的人单克隆抗体。这种小鼠例如描述于颁给Wilson等的美国专利No.5,476,996和No.5,698,767中。
在一些实施方案中，人Ig小鼠用于产生根据本发明的人抗MCT1抗体，例如通过用MCT1抗原和/或重组MCT1或MCT1融合蛋白的纯化或富集的制剂来免疫该小鼠，如由Lonberg,N.等(1994)Nature 368(6474):856-859；Fishwild,D.等(1996)NatureBiotechnology 14:845-851；以及PCT公布WO 98/24884和WO 01/14424所述。优选地，在首次输注时，小鼠将为6-16周龄。例如，MCT1抗原的纯化或重组的制剂(剂量范围为0.5-500μg)可用于经腹膜内免疫人Ig小鼠。
一般来说，用含抗原的完全弗氏佐剂腹膜内(IP)初始免疫，随后用含抗原的不完全弗氏佐剂每隔一周IP免疫(直至总计6次)后，转基因小鼠应答。然而，除弗氏佐剂以外的佐剂也发现是有效的。此外，发现完整细胞在佐剂不存在的情况下具有高度免疫原性。可以用眶后取血获得的血浆样品，在免疫方案过程中监测免疫反应。可通过ELISA来筛选血浆，可将具有足够抗MCT1人免疫球蛋白滴度的小鼠用于融合。可在处死以及移除脾之前3天，用抗原对小鼠经静脉内加强免疫。预期，对于每次免疫，可能需要进行2-3个融合。对于每个抗原，通常免疫6至24只的小鼠。
在某些实施方案中，生产根据本发明的人单克隆抗MCT1抗体的杂交瘤可以使用来自经免疫小鼠的脾细胞和/或淋巴结细胞来产生，其中所述细胞被分离并与适当永生化细胞系诸如小鼠骨髓瘤细胞系融合。可筛选产生抗原特异性抗体的所得杂交瘤。
在某些实施方案中，可使用例如本领域中所熟知的重组DNA技术和基因转染方法的组合，在宿主细胞转染瘤中产生根据本发明的抗MCT1抗体(例如Morrison,S.(1985)Science229:1202)。例如，为表达抗体或其抗体片段，可通过标准分子生物学技术(例如使用表达目的抗体的杂交瘤进行PCR扩增或cDNA克隆)来获得编码部分或全长轻链和重链的DNA，并且可将该DNA插入表达载体中以使得基因有效连接至转录和翻译控制序列。在该语境中，术语“有效连接”意指将抗体基因连接至载体中以使得所述载体内的转录和翻译控制序列发挥它们调节所述抗体基因的转录和翻译的预定功能。选择表达载体和表达控制序列以与所用表达宿主细胞相容。可将抗体轻链基因和抗体重链基因分别插入单独载体中，或更通常地，将两个基因插入同一表达载体中。通过标准方法(例如抗体基因片段和载体上的互补限制位点的连接，或如果不存在限制位点，则平末端连接)，将抗体基因插入表达载体中。本文所述的抗体的轻链和重链可变区可用于通过以下方式来产生任何抗体同种型的全长抗体基因：将抗体的轻链和重链可变区插入已编码所需同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中，使得VH区段有效连接至载体内的CH区段，并且VL区段有效连接至载体内的CL区段。另外地或作为另外一种选择，重组表达载体可编码有助于抗体链从宿主细胞分泌的信号肽。可将抗体链基因克隆至载体中以使得信号肽同框连接至抗体链基因的氨基末端。信号肽可为免疫球蛋白信号肽或异源性信号肽(即来自非免疫球蛋白的信号肽)。
在某些情况下，可以通过用在其表面表达完整的MCT1蛋白、MCT1片段、MCT1融合蛋白或MCT1多聚体的病毒样颗粒(VLPS)和任选的其它佐剂来免疫动物，例如，非人哺乳动物、非人灵长类动物、禽类或两栖类动物；例如，食蟹猴、啮齿动物、兔、豚鼠、牛、马、犬、猫、鸡、蛙，以获得拮抗性抗MCT1抗体。使用表达抗原的VLPs作为免疫原以产生针对VLP表面表达的抗原的细胞或体液(抗体)免疫反应，是本领域已知的。(参见例如,美国专利号10,138,277；10,130,696；10,125,175；10,086,056；10,080,796；10,072,058；10,046,026；10,040,830；9,969,986；9,957,300；9,833,504；9,803,189；9,637,532；9,566,327；9,617,321；9,585,954 9,518,096；9,517,261；9,381,239；9,481,875；9213027；9,296,792；9,216,229；8,980,275；8,889,144；8,852,604；8728985；8,691,209；8,680,244；8,574,590；8,529,9068,324,149；8,377,691；8,158,130；7,959,928；7,875,450；7,641,896；7,494,656；7,479,280；7,320,793；7,264,810；7229624；7,138,252；6,991,795；6,964,769；6,534,064和5,667,782等，这些专利在此通过引用以其整体并入本文)。
抗MCT1抗体的表达
合适的宿主细胞一般包括任何细胞，其中本发明抗MCT1抗体及其抗原结合片段可以利用易于得到的技术和材料重组生产。例如，本发明的抗MCT1抗体及其抗原结合片段可以根据常规技术在基因工程宿主细胞中生产。合适的宿主细胞是那些可以用外源DNA转化或转染并在培养中生长的细胞类型，并且包括细菌、真菌细胞(例如，酵母)和培养的高等真核细胞(包括多细胞生物的培养细胞)，特别是培养的哺乳动物细胞，例如人或非人哺乳动物细胞。在一个典型的实施方案中，这些抗体可以在CHO细胞或HEK-293细胞中表达。操作克隆DNA分子并将外源DNA引入各种宿主细胞的技术由Sambrook等Molecular Cloning:ALaboratory Manual,2nd ed.,Cold Spring Harbor,N.Y.:Cold Spring HarborLaboratory Press(1989),和Current Protocols in Molecular Biology,Ausubel etal,editors,New York,NY:Green and Wiley and Sons(1993)公开。
在一些示例性的实施方案中，抗体可以在有交配能力的酵母中表达，例如，可以在培养中生长的任何单倍体、二倍体或四倍体酵母。在发酵表达方法中有用的酵母可以以单倍体、二倍体或其它多倍体形式存在。给定染色体倍性的细胞在适当的条件下，可以以该形式以无限代数增殖。二倍体细胞也可以产孢以形成单倍体细胞。后续的交配可以通过二倍体株系的进一步交配或融合而形成四倍体株系。本发明考虑使用单倍体酵母，以及(例如通过交配或原生质球融合产生的)二倍体或其它多倍体酵母细胞。举例来说，酵母可以包括酿酒酵母科(Saccharomycetaceae)的成员，包括Arxiozyma；Ascobotryozyma；固囊酵母属(Citeromyces)；德巴氏酵母属(Debaryomyces)；德克酵母属(Dekkera)；假囊酵母属(Eremothecium)；伊萨酵母属(Issatchenkia)；哈萨克斯坦酵母属(Kazachstania)；克鲁维酵母属(Kluyveromyces)；Kodamaea；洛德酵母属(Lodderomyces)；管囊酵母属(Pachysolen)；毕赤酵母属(Pichia)；酿酒酵母属(Saccharomyces)；Saturnispora；Tetrapisispora；Torulaspora；Williopsis；和接合酵母属(Zygosaccharomyces)。潜在可用于本发明的其它类型的酵母包括耶氏酵母属(Yarrowia)；Rhodosporidium；假丝酵母属(Candida)；汉逊酵母属(Hansenula)；Filobasium；Sporidiobolus；Bullera；Leucosporidium和Filobasidella。
目的多肽编码序列可操作性地连接到转录和翻译调控序列，其支持了多肽在期望的宿主细胞，例如酵母或哺乳动物细胞中的表达。这些载体组件可包括但不限于以下一种或多种：增强子元件、启动子和转录终止序列。还可以包括用于分泌多肽的序列，例如信号序列，等等。复制起点，例如酵母复制起点，是可选的，因为表达载体经常整合到宿主细胞基因组中。在本发明的一个实施方案中，目的多肽与支持多肽从酵母二倍体细胞中优化分泌的序列有效连接或融合。
启动子是位于结构基因的起始密码子上游(5')(一般在约100至1000bp内)的非翻译序列，其控制与其可操作性连接的特定核酸序列的转录和翻译。这样的启动子可分为若干类：诱导性、组成性和阻遏性启动子(其响应阻遏因子的缺席而增加转录水平)。诱导性启动子可以响应培养条件的一些变化(例如存在或不存在营养物)或温度变化，而起始增加的自其控制下的DNA的转录水平。启动子片段也可以用作同源重组的位点，将表达载体整合到宿主细胞的相同位点中，例如酵母或哺乳动物细胞基因组中；或者，可选择的标志物可以用作同源重组的位点。
目的抗MCT1抗体多肽不仅可以直接重组生产，而且可以作为与异源多肽例如信号序列融合的多肽或在成熟蛋白或多肽的N-末端具有特定切割位点的其它多肽来产生。一般来说，信号序列可以是载体的一个组件，也可以是插入载体的多肽编码序列的一部分。所选择的异源信号序列例如可以是通过宿主细胞(例如哺乳动物细胞、昆虫细胞或酵母细胞)内可用的标准途径之一进行识别和处理的信号序列。此外，这些信号肽序列可以被工程改造以支持表达系统中增强的分泌。目的分泌信号还包括哺乳动物和酵母的信号序列，其可以是与被分泌的蛋白质异源的，或者可以是被分泌的蛋白质的原生序列。信号序列包括前肽(pre-peptide)序列，并且在某些情况下可包括原肽(propeptide)序列。许多这类信号序列是本领域已知的，包括在免疫球蛋白链上发现的信号序列，例如，K28前毒素原序列、PHA-E、FACE、人MCP-1、人血清白蛋白信号序列、人Ig重链、人Ig轻链，诸如此类。例如，参见Hashimoto等,Protein Eng.,11(2):75(1998)；和Kobayashi等,Therapeutic Apheresis,2(4):257(1998)。
可以通过插入转录激活因子序列到载体中来增加转录。这些激活因子是DNA顺式作用元件，通常约10～300bp，其作用于启动子以增加其转录。转录增强子是相对不依赖方向和位置的，在转录单元的5'和3'、内含子内以及编码序列本身内都有发现。增强子可以在编码序列5'或3'的位置上拼接到表达载体中，但是，也可以例如位于启动子5'方向的位点。
真核宿主细胞中使用的表达载体还可以包含终止转录和稳定mRNA所必需的序列。此类序列通常可得自转录终止密码子3'，真核或病毒DNA或cDNA的非翻译区域中。这些区域包含在mRNA的非翻译部分中转录为多聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。
含有一种或多种上述组件的合适载体的构建可以采用标准连接技术或PCR/重组方法。分离出的质粒或DNA片段，以期望产生所需质粒的形式或经由重组方法，被切割、修剪、和重新连接。为了分析以确认所构建的质粒中的正确序列，将连接混合物用于转化宿主细胞，并在适当情况下通过抗生素抗性(如氨苄西林或Zeocin)选择成功的转化体。制备转化体的质粒，通过限制性内切酶消化分析，和/或测序。
作为片段限制性酶切和连接的替代方法，可使用基于特异性附着("att")位点和重组酶的重组方法将DNA序列插入载体中。此类方法由，例如，Landy,Ann.Rev.Biochem.,58:913-949(1989)描述；并且对于本领域技术人员来说是已知的。这样的方法利用分子间DNA重组，其由lambda和大肠杆菌-编码的重组蛋白的混合物介导。重组发生在相互作用的DNA分子上的att位点之间。关于att位点的描述参见Weisberg and Landy,Site-SpecificRecombination in Phage Lambda,in Lambda II,p.21 1-250,Cold Spring Harbor,NY:Cold Spring Harbor Press(1983)。重组位点两侧的DNA片段被调换，这样重组后，att位点是由来自每个亲本载体的序列组成的杂交序列。重组可以发生在任何拓扑结构的DNA之间。
将att位点引入到目的序列中，可以通过：将目的序列连接到适当的载体中；通过使用特定的引物产生含有att B位点的PCR产物；产生克隆到含有att位点的适当载体中的cDNA文库；以及类似的方法。
如本文所用，折叠(folding)是指多肽和蛋白质的三维结构，其中氨基酸残基之间的相互作用起到稳定结构的作用。虽然非共价相互作用在确定结构中很重要，但通常目的蛋白质将具有由两个半胱氨酸残基形成的分子内和/或分子间共价二硫键。对于天然存在的蛋白质和多肽或其衍生物和变体，正确折叠通常是带来最佳生物活性的结构排布，并且可以方便地通过活性的测定来监测，例如配体结合、酶活性等。
在某些情况下，例如在期望的产品是合成来源的情况下，基于生物活性的检测将不那么有意义。这类分子的正确折叠可基于物理性质、能量考虑、建模研究等等来确定。
可以通过引入编码一种或多种增强折叠和二硫键形成的酶(即折叠酶、伴侣蛋白、蛋白质二硫键异构酶等)的序列，进一步修饰表达宿主。使用本领域已知的载体、标记物等，这样的序列可以在酵母宿主细胞中组成性表达或诱导性表达。优选地，这些序列，包括足以实现所需表达模式的转录调控元件，可以通过定向方法稳定地整合入宿主细胞基因组中。
例如，真核生物蛋白质二硫键异构酶("PDI")不仅是蛋白质半胱氨酸氧化和二硫键异构化的高效催化剂，而且还具有分子伴侣活性。PDI的共表达可以促进具有多个二硫键的活性蛋白的产生。此外，有意义的是，免疫球蛋白重链结合蛋白("BIP")；亲环蛋白；等等的表达。在本发明的一个实施方案中，单倍体亲本株中的每一个都表达一种独特的折叠酶，例如，一株可以表达BIP，其他株可以表达PDI或其组合。
培养的哺乳动物细胞也是生产本文公开的抗MCT1抗体及其抗原结合片段的优选示例性宿主。如前所述，CHO细胞特别适合于抗体的表达。本领域已知用于在哺乳动物细胞中制造单克隆抗体的许多程序。(参见，Galfre，G.和Milstein，C，Methods Enzym.，73:3-46，1981；Basalp等，Turk.J.Biol，24:189-196,2000；Wurm,F.M.,Nat.Biotechnol,22:1393-1398，2004；以及Li等，mAbs，2(5)：466-477,2010)。如下文进一步详细提到的，哺乳动物单克隆抗体制造方案中采用的常见宿主细胞系包括但不限于人胚胎视网膜母细胞系PER.
Figure BDA0002570801830000381
(Crucell N.V.,Leiden,The Netherlands)、NSO小鼠骨髓瘤细胞(MedicalResearch Council,London,UK)、CV1猴肾细胞系、293人胚肾细胞系、BHK幼仓鼠肾细胞系、VERO非洲绿猴肾细胞系、人宫颈癌细胞系HELA,MDCK犬肾细胞、BRL buffalo大鼠肝细胞、W138人肺细胞、HepG2人肝细胞、MMT小鼠乳腺肿瘤细胞、TRI细胞、MRC5细胞、Fs4细胞、骨髓瘤或淋巴瘤细胞或中国仓鼠(Cricetulus griseus)卵巢(CHO)细胞，等等。本领域已知的许多不同的CHO细胞亚克隆或亚细胞系可以用于和优化用于生产重组单克隆抗体，诸如DP12(CHO Kl dhfr-)细胞系。NSO细胞是NS-1细胞的无Ig分泌、无轻链合成的亚克隆，对氮杂鸟嘌呤有抗性。其他的中国仓鼠和CHO细胞可商购(来自ATCC等)，包括CHO-DXB11(CHO-DUKX),CHO-pro3,CHO-DG44,CHO 1-15,CHO DP-12,Lec2,M1WT3,Lec8,pgsA-745，以及诸如此类，其全部经基因改变以优化细胞系用于各种参数。单克隆抗体通常采用分批补料的方法生产，其中单克隆抗体链在哺乳动物细胞系中表达，并分泌到生物反应器的组织培养基中。培养基(或饲料)连续地供应给生物反应器，以将重组蛋白的表达量最大化。然后从收集的培养基中纯化重组单克隆抗体。在某些情况下，还需要额外的步骤，以通过还原二硫键等来重新组装抗体。这种生产方法的规模可以高达单批10000L或更多。现在，通过使用这样的细胞系和方法，常规获得多达20pg/细胞/天的量，提供高达10g/L或更多的滴度，从10kL至25kL的生物反应器中获得总计15至100kg(Li等，2010)。下文提供了这种生产方法的各种细节，包括将编码抗体的多核苷酸克隆到表达载体中，用这些表达载体转染细胞，选择转染细胞，以及从这些细胞中表达和纯化重组单克隆抗体。
为了在哺乳动物细胞中重组生产抗MCT1抗体或抗原结合片段，一般将编码抗体或其片段的核酸插入可复制的载体中，以便进一步克隆(扩增DNA)或表达。编码抗体的DNA使用常规程序(例如，通过使用能够特异性地与编码抗体的重链和轻链的DNA结合的寡核苷酸探针)方便地分离或合成。载体组件一般包括但不限于以下一种或多种：信号序列、复制起点、一个或多个标记基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。启动子、终止子、选择标记、载体和其它元件的选择是本领域普通技术人员水平内的常规设计。许多这样的元素是本领域已知的，并且可以通过商业供应商获得。
本发明的抗体不仅可以直接重组生产，而且可以作为与异源多肽例如信号序列融合的多肽、或在成熟蛋白或多肽的N-末端具有特定切割位点的其它多肽来生产。所选择的同源或异源信号序列例如可以是被宿主细胞识别和处理(即被信号肽酶切割)的信号序列。在哺乳动物细胞表达中，可以使用哺乳动物的信号序列以及病毒的分泌前导序列，例如单纯疱疹gD信号序列。
这样的表达载体和克隆载体一般将包含使载体能够在一种或多种选定的宿主细胞中复制的核酸序列。通常，在克隆载体中，这种序列是使载体能够不依赖宿主染色体DNA复制的序列，并且包括复制起点或自主复制序列。这种序列对于多种细菌、酵母和病毒来说都是公知的，例如，质粒pBR322的复制起点适合于大多数革兰氏阴性菌，2mu质粒起点适合于酵母，各种病毒起点(猿猴病毒("SV40")、多瘤病毒、腺病毒、水疱性口炎病毒("VSV")或牛乳头瘤病毒("BPV"))可用于哺乳动物细胞中的克隆载体。对于哺乳动物表达载体来说，一般不需要复制起点组件(通常会使用SV40起点，只因为它含有早期启动子)。
这些载体通常还将包含选择基因，也称为选择标记。典型的选择基因编码蛋白质，其(a)赋予抗性抵抗抗生素或其它毒素，例如，氨苄西林、新霉素、甲氨蝶呤或四环素，(b)补充营养缺陷型的缺损，或(c)提供无法从复合培养基中得到的关键营养物质，例如，编码D-丙氨酸消旋酶的基因用于芽孢杆菌。
选择方案的一个实例是利用药物来阻滞宿主细胞生长。一般通过药物选择，来选择已插入外来DNA的培养的哺乳动物细胞。这种细胞通常被称为"转染子"。已经在选择剂存在的情况下进行过培养并能将目的基因传给其后代的细胞称为"稳定转染子"。这种显性选择的实例包括使用药物新霉素、霉酚酸和潮霉素。一个典型的选择标记是编码对抗生素新霉素的抗性的基因。选择是在新霉素类药物诸如G-418等存在的情况下进行的。用异源基因成功转化的细胞会产生赋予抗药性的蛋白质，从而在选择方案中存活。
选择系统也可以用来增加目的基因的表达水平，这个过程被称为"扩增"。转染子的扩增通常是通过在低水平的选择剂的存在下培养细胞，然后增加选择剂的量以选择产生高水平的引入基因的产物的细胞。示例性的适合哺乳动物细胞的选择标记是那些允许识别有能力摄取抗体核酸的细胞的标记物，例如二氢叶酸还原酶("DHFR")、胸苷激酶、金属硫蛋白-I和-II，例如灵长类金属硫蛋白基因、腺苷脱氨酶、鸟氨酸脱羧酶等。
例如，哺乳动物细胞的一个可扩增的选择标记是二氢叶酸还原酶，其赋予甲氨蝶呤抗性。也可以使用其它药物抗性基因(如潮霉素抗性、多重药物抗性、嘌呤霉素乙酰转移酶)。用DHFR选择基因转化的细胞首先通过将所有转化体在含有DHFR的竞争性拮抗剂甲氨蝶呤("MTX")的培养基中培养来鉴定。当采用野生型DHFR时，合适的宿主细胞是缺乏DHFR活性的中国仓鼠卵巢("CHO")细胞系。
或者，用编码抗体、野生型DHFR蛋白和另一种选择标记诸如氨基糖苷3'-磷酸转移酶("APH")的DNA序列转化或共同转化的宿主细胞(特别是含有内源性DHFR的野生型宿主)，可以在含有选择标记的选择剂如氨基糖苷类抗生素(如卡那霉素、新霉素或G-418)的培养基中进行细胞生长来选择。参见美国专利号4,965,199。
这些载体可包含促进编码抗体的DNA转录的增强子序列。来自哺乳动物基因的许多增强子序列是已知的(例如，球蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、甲胎蛋白和胰岛素)。一个经常使用的增强子是来自真核细胞病毒的增强子。其实例包括复制起点后侧的SV40增强子(bp100-270)、巨细胞病毒早期启动子增强子、复制起点后侧的多瘤病毒增强子和腺病毒增强子(另见，Yaniv，Nature，297:17-18，1982，关于用于激活真核启动子的增强元件)。增强子可以在抗体编码序列5'或3'的位置上拼接到表达载体中，但是，也可以例如位于启动子的5'侧位置。
表达和克隆载体一般还将包括一个启动子，其可被宿主生物体识别并与抗体核酸有效连接。真核生物的启动子序列是已知的。几乎所有的真核生物基因都有一个富AT区，位于转录起始位点上游约25至30个碱基。CNCAAT区域是在许多基因的转录起始上游70至80个碱基处发现的另一个序列，其中N可以是任何核苷酸。在大多数真核生物基因的3'端是一个AATAAA序列，其可是将多聚A尾加到编码序列的3'端的信号。所有这些序列都适当地插入到真核表达载体中。
哺乳动物宿主细胞中自载体的抗体转录可以通过启动子来控制，所述启动子可以例如来自病毒的基因组(例如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(如腺病毒2)、BPV、禽肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、乙型肝炎病毒和大多数时候例如，SV40)，来自异源哺乳动物启动子，例如，肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子，来自热休克蛋白启动子，条件是所述启动子与宿主细胞系统相容。
SV40病毒的早期启动子和晚期启动子可以方便地以一个SV40限制性酶切片段获得，其还包含SV40病毒复制起点。人巨细胞病毒的立即早期启动子可以方便地以Hindlll E限制性酶切片段获得。在美国专利号4,419,446中公开了一种利用BPV作为载体在哺乳动物宿主中表达DNA的系统。美国专利号4,601,978中描述了该系统的一种修饰形式。也参见Reyes等，Nature，297:598-601(1982)，关于在来自单纯疱疹病毒的胸苷激酶启动子控制下在小鼠细胞中表达人β-干扰素cDNA。或者，劳斯肉瘤病毒长末端重复可用作启动子。
可以使用强转录启动子，例如来自SV40、巨细胞病毒或骨髓增生性肉瘤病毒(myeloproliferative sarcoma virus)的启动子。参见，例如，美国专利号4,956,288和美国专利公开号20030103986。其他合适的启动子包括来自金属硫蛋白基因的启动子(美国专利号4,579,821和4,601,978)以及腺病毒主要后期启动子。在哺乳动物细胞中使用的表达载体包括pZP-1、pZP-9和pZMP21(这些载体已存放在美国典型培养物保藏中心,10801University Blvd.,Manassas,VA.USA，保藏号分别为98669、98668和PTA-5266)、及其衍生物。
在真核宿主细胞(酵母、真菌、昆虫、植物、动物、人类或其它多细胞生物的有核细胞)中使用的表达载体一般也将包含终止转录和稳定mRNA所必需的序列。此类序列通常可从真核生物或病毒DNA或cDNA的5'和偶尔3'的非翻译区获得。这些区域包含了在编码抗体的mRNA的非翻译部分中转录为多聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。一个可用的转录终止组件是牛生长激素多聚腺苷酸化区域。参见WO 94/11026和其中公开的表达载体。
用于克隆或表达本发明抗体的适合的宿主细胞包括上文描述的原核细胞、酵母或高等真核细胞。然而，最有意义的是脊椎动物细胞，培养的脊椎动物细胞的繁殖已成为常规程序。可用的哺乳动物宿主细胞系的实例是由SV40转化的猴肾CV1系(COS-1(ATCC No.CRL1650)；和COS-7,ATCC CRL 1651)；人胚肾系(293细胞或亚克隆用于悬浮培养的293细胞，(ATCC No.CRL 1573；Graham等J.Gen.Virol,36:59-72(1977))；幼仓鼠肾细胞(BHK,ATCCCCL 10,ATCC No.CRL 1632；BHK 570,ATCC No.CRL 10314)；CHO细胞(CHO-K1,ATCC No.CCL61；CHO-DG44,Urlaub等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216-4220(1980))；小鼠Sertoli细胞(TM4,Mather,Biol.Reprod.,23:243-251(1980))；猴肾细胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；buffalo大鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人肺细胞(W138，ATCC CCL75)；人肝细胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺肿瘤(MMT060562，ATCC CCL51)；TRI细胞(Mather等,Annals N.Y.Acad.Sci.，383:44-68(1982))；MRC5细胞；FS4细胞；和人肝细胞瘤系(Hep G2)。其他合适的细胞系是本领域已知的，并可从公共保藏中心，如美国典型培养物保藏中心,Manassas,VA,获得。
宿主细胞可以用以上描述的用于生产抗体的表达或克隆载体转化并培养在常规营养培养基中，所述培养基可以酌情改良用于诱导启动子、选择转化体，或扩增编码所需序列的基因，见以上讨论。
用于生产本发明抗体的哺乳动物宿主细胞可以在各种培养基中培养。可商购的培养基如Ham's F10(Sigma-Aldrich Corporation，St.Louis，MO)、最小必需培养基(("MEM"(Sigma-Aldrich Corporation，St.Louis，MO)、Roswell Park Memorial Institute-1640培养基("RPMI-1640"，Sigma-Aldrich Corporation，St.Louis，MO)和Dulbecco改良的Eagle氏培养基(("DMEM"Sigma-Aldrich Corporation，St.Louis，MO)都适合于培养宿主细胞。此外，在Ham等,Meth.Era.,58:44(1979)；Barnes等,Anal.Biochem.,102:255(1980)；美国专利号4,767,704；4,657,866；4,927,762；4,560,655；或5,122,469；WO 90/03430；WO87/00195；或美国Patent Reexam No.30,985中描述的任何培养基均可用作宿主细胞的培养基。这些培养基都可按需补充激素和/或其它生长因子(诸如胰岛素、转铁蛋白或表皮生长因子)、盐类(诸如氯化钠、钙、镁和磷酸盐)、缓冲液(诸如HEPES)、核苷酸(诸如腺苷和胸苷)、抗生素(如庆大霉素药物)、微量元素(定义为通常以微摩尔范围内的最终浓度存在的无机化合物)和葡萄糖或等效的能量来源。如本领域技术人员已知的，也可以以适当浓度包括任何其它必要的补充剂。培养条件，如温度、pH值等，可以是先前与选择用于表达的宿主细胞一起使用的条件，并且对于普通技术人员来说将是显而易见的。培养基和培养条件的开发和优化方法是本技术中已知的。(参见，Gronemeyer等,Bioengineering,1(4):188-212,2014)。
在优化培养条件并选择了优选的细胞系克隆之后，培养这些细胞(无论贴壁细胞或是悬浮培养)，最通常是以分批补料工艺在生物反应器(许多模型可商购)中，其涉及用培养基和补料连续进料细胞培养物，并且可以针对所选的特定细胞系以及选择目的进行优化。(参见，Butler,M.,Appl.Microbiol.Biotechnol,68:283-291,2005；和Kelley,B.,mAb,l(5):443-452,2009)。灌注系统也是可用的，其中培养基和补料连续供应给培养物，同时从生物反应器中取出相同体积的培养基。(Wurm,2004)。合成培养基也可以商购，可以用于分批补料培养中生长细胞，避免了来自外部来源，诸如伴随使用动物成分，如牛血清白蛋白等，的污染可能。然而，不含动物成分的水解物是可商购的，有助于提高细胞密度、培养活力和产量。(Li等人，2010)。已经进行了许多研究以优化细胞培养基，包括仔细注意滚筒瓶中可用的顶部空间、生长和表达阶段期间的氧化还原电位、在生产过程中还原剂的存在以维持二硫键，等(参见，例如，Hutterer等,mAbs,5(4):608-613,2013；和Mullan等,BMCProceed.,5(Suppl 8):P110,2011)。已经开发了各种方法来解决重组单克隆抗体生产过程中有害氧化的可能性。(参见，例如，美国专利号8,574,869)。培养的细胞可以通过连续地或分量施用的营养物质补料来生长。通常，各种工艺参数，如细胞浓度、pH、温度、CO2、dO2、质量渗透摩尔浓度、代谢物如葡萄糖、乳酸、谷氨酰胺和谷氨酸的量等，在细胞生长期间使用探针监测，可以通过直接连接到校准的分析仪在线监测，也可以通过操作人员的干预离线监测。培养步骤还典型地涉及，通过本领域中已知的任何用于细胞选择的手段，确保培养中生长的细胞保持转染的重组基因。
在发酵之后，即在达到最大的细胞生长和重组蛋白表达量后，紧随该培养步骤的通常是收获步骤，由此将细胞从培养基中分离并收获细胞培养基。(参见，Liu等mAbs,2(5):480-499,2010)。通常在培养之后进行各种纯化步骤，涉及柱层析等等，以将重组单克隆抗体从细胞成分和细胞培养基成分中分离出来。生产重组单克隆抗体的这一阶段所需的确切纯化步骤取决于蛋白的表达部位，即在细胞本身的细胞液中，或更通常优选的蛋白排出到细胞培养基中的途径。各种细胞成分的分离可以使用本领域已知的技术，如差速离心技术、基于重力的细胞沉降，和/或大小排阻色谱/过滤技术，可以包括切向流微滤或深度过滤。(参见，Pollock等,Biotechnol.Bioeng.,110:206-219,2013,和Liu等,2010)。细胞成分的离心可通过使用连续Disk-stack离心机大规模实现，然后使用深度和膜过滤进行澄清。(参见,Kelley,2009)。大多数情况下，在澄清后，借助Protein A对抗体的Fc结构域的高亲和力，重组蛋白通过Protein A层析进一步纯化，并且通常使用低pH/酸化洗脱步骤(通常酸化步骤与预防性的病毒灭活步骤相结合)。也可采用使用酸性或阳离子聚电解质的絮凝和/或沉淀步骤以分离悬浮培养物中的动物细胞和可溶性蛋白质。(Liu等，mAbs，2(5):480-499，2010)。最后，阴离子和阳离子交换色谱、疏水相互作用色谱("HIC")、疏水电荷诱导色谱(HCIC)、使用陶瓷羟基磷灰石(Ca5(PO4)3OH)2的羟基磷灰石色谱、以及这些技术的组合，通常用于精加工重组单克隆抗体的溶液。所需单克隆抗体的最终配制和浓缩可通过使用超离心技术实现。纯化产率通常为70～80％。(Kelley，2009)。
抗独特型抗体
本发明的另一个方面是抗独特型抗体和抗抗独特型抗体。抗独特型抗体是识别另一抗体(靶抗体)的决定簇的抗体。一般来说，抗独特型抗体识别靶抗体的抗原结合位点的决定簇。通常，靶抗体是单克隆抗体。抗独特型抗体一般通过用靶单克隆抗体免疫与靶单克隆抗体来源相同的物种和遗传类型的动物(特别是，小鼠)来制备。免疫后的动物对靶单克隆抗体的独特型决定簇产生免疫反应，并产生针对靶单克隆抗体的独特型决定簇的抗体。经免疫动物的抗体生产细胞，如脾细胞，可用于产生抗独特型单克隆抗体。此外，也可使用抗独特型抗体免疫动物以产生抗抗独特型抗体。这些免疫的动物可用于使用标准技术产生抗抗独特型单克隆抗体。该抗抗独特型抗体可与用于制备抗独特型抗体的原始的、靶单克隆抗体结合到相同的表位上。抗抗独特型抗体是与原始靶单克隆抗体具有相同抗原特异性的其他单克隆抗体。
如果该抗独特型抗体与靶抗体的结合被靶抗体的相关抗原所抑制，并且如果该抗独特型抗体诱导出与靶抗体具有相同特异性的抗体应答，则该抗独特型抗体模拟靶抗体的抗原。这样的抗独特型抗体是一种"内映像抗独特型"，能够诱导出与原始抗原一样的抗体反应。(Bona和Kohler,Anti-Idiotypic Antibodies And Internal Image,in MonoclonalAnd Anti-Idiotypic Antibodies:Probes For Receptor Structure And Function,Venter J.C.,Frasser,C.M.,Lindstrom,J.(Eds.),Alan R.Liss,N.Y.,1984.pp 141-149)。纳入内映像抗独特型抗体的疫苗已被证明能诱导针对病毒、细菌和寄生虫的保护性应答(Kennedy等,(1986)Science,232:220-223；McNamara等(1985)Science 226:1325-1326)。内映像抗独特型抗体也已被证明能诱导对肿瘤相关抗原的免疫(Raychauhuri elal.(1986)J.Immunol.137:1743-1749；Raychauhuri等(1987)J.Immunol.139:3902-3910；Bhattacharya-Chatterjee等(1987)J.Immunol.139:1354-1360；Bhattacharya-Chatterjee等(1988)J.Immunol.141:1398-1403；Herlyn,D.等(1989)Intern.Rev.Immunol.4:347-357；Chen,Z.-J等(1990)Cell Imm.Immunother.Cancer 351-359；Herlyn,D.等(1991)In Vivo 5:615-624；Furuya等(1992)Anticancer Res.12:27-32；Mittelman A.等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 89:466-470；Durrant,L.G.等(1994)Cancer Res.54:4837-4840；Mittelman,A.等(1994)Cancer Res 54:415-421；Schmitt,H.等(1994)Hybridoma 13:389-396；Chakrobarty,M.等(1995)J.Immunother.18:95-103；Chakrobarty,M.等(1995)Cancer Res.55:1525-1530；Foon,K.A.等(1995)Clin.CancerRes.1:1205-1294；Herlyn,D,等(1995)Hybridoma 14:159-166；Sclebusch,H.等(1995)Hybridoma 14:167-174；Herlyn,D.等(1996)Cancer Immunol Immunother.43:65-76)。
例如，可以通过将包含MCT1或其免疫原性部分(含有MCT1的至少一个抗原表位)的组合物，以其免疫原性的量，免疫动物，诸如小鼠，来制备MCT1的抗独特型抗体。该组合物还可含有合适的佐剂、以及提供免疫原性所需的任何载体。识别MCT1的单克隆抗体可以如上所描述从被免疫动物的细胞制备。然后选择识别MCT1表位的单克隆抗体并用于制备包含免疫原性量的抗MCT1单克隆抗体的组合物。通常，在合适的佐剂中，纯化的MCT1单克隆的25至200μg剂量将是足够的。
动物可以免疫2-6次，剂量之间的间隔为14至30天。通常，动物通过任何合适的给药途径进行免疫，诸如腹膜内、皮下、静脉内或这些途径的组合。在免疫期间，可使用标准免疫测定方法，监测抗独特型抗体的产生。具有适合滴度的与靶单克隆抗体反应的抗体的动物，可以用该单克隆抗体作为免疫原进行再次免疫，三天后收获抗体生产细胞。优选使用脾细胞，尽管也可以选择其它抗体生产细胞。如上所描述，收获抗体生产细胞并与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤，并选择合适的抗独特型抗体生产细胞。
使用抗独特型单克隆抗体作为免疫原，通过另一轮免疫和杂交瘤生产，可以产生抗抗独特型抗体。
竞争、表位作图和结构相似性。
与本文所述的单克隆抗体结合基本上或本质上相同的表位的一种或多种抗体的鉴定，可以使用丙氨酸扫描容易地确定。另外，可以使用可评估抗体竞争的各种免疫筛选测定法中的任一种。许多此类测定法是常规实施并且在本领域中是公知的(参见例如1997年8月26日颁发的美国专利号5,660,827，其以引用的方式具体并入本文)。应了解，鉴定与本文所述的单克隆抗体结合相同或基本上相同或重叠的表位的抗体，在任何方面均实际上不需要确定本文所述的抗体结合的表位。
例如，当待检查的测试抗体是从不同来源动物获得的或甚至具有不同的Ig同种型时，可采用简单竞争测定，其中将对照抗体与测试抗体混合并且然后施加到含有MCT1的样品。基于ELISA、放射免疫测定、蛋白质印迹和使用
Figure BDA0002570801830000441
(GE Healthcare LifeSciences，Marlborough，MA)分析的方案，适用于此类简单竞争研究。
在某些实施方案中，在施加到MCT1抗原样品之前，将对照抗MCT1抗体与不同量的测试抗体(例如以约1:1、1:2、1:10或约1:100的比率)预混合一段时间。在其他实施方案中，对照和不同量的测试抗体可以简单地分开添加并在暴露于MCT1抗原样品期间混合。只要可区分结合抗体与游离抗体(例如通过使用分离或洗涤技术来消除未结合抗体)以及区分对照抗体与测试抗体(例如通过使用物种特异性或同种型特异性二抗或通过用可检测标记特异性标记对照抗体)，则能够确定测试抗体是否使对照抗体与MCT1抗原的结合降低，从而指示测试抗体与对照抗MCT1抗体识别基本上相同的表位。(标记的)对照抗体在完全无关抗体(其不结合MCT1)存在下的结合可充当对照高值。对照低值可通过将标记的对照抗体与相同但未标记的对照抗体一起孵育来获得，其中将发生竞争并降低标记的抗体的结合。在测试试验中，标记的抗体反应性在测试抗体存在下显著降低，指示测试抗体识别基本上相同的表位，即测试抗体与标记的对照抗体竞争。例如，以约1:1或1:10至约1:100之间的任何测试抗体比率，如果任何测试抗体使对照抗体与MCT1的结合降低至少约50％(诸如至少约60％、或更优选至少约70％(例如约65％-100％))，则所述测试抗体将被视为与对照抗体结合基本上相同或重叠的表位或决定簇的抗体。
优选地，此类测试抗体将使对照抗体与MCT1抗原的结合降低，例如，相对于在测试抗体不存在下观察到的对照抗体的结合，至少约50％、至少约60％、至少约80％或至少约90％(例如约95％)。
还可有利地采用简单竞争测定，其中测试抗体在饱和浓度下被施加到固定有MCT1(或其部分)的表面。在该简单竞争测定中所述表面可以是例如
Figure BDA0002570801830000442
(GE HealthcareLife Sciences，Marlborough，MA)芯片(或适于表面等离子体共振(“SPR”)分析的其他介质)。测量结合MCT1的对照抗体与MCT1包衣的表面的结合。将对照抗体单独与含有MCT1的表面的这种结合，与对照抗体在测试抗体存在下的结合进行比较。在测试抗体存在下对照抗体与含有MCT1的表面的结合显著降低，指示测试抗体与对照抗体识别基本上相同的表位，由此测试抗体与对照抗体“竞争”。使对照抗体的结合降低至少约20％或更多、至少约40％、至少约50％、至少约70％或更多的任何测试抗体，都可视为与对照抗体结合基本上相同的表位或决定簇的抗体。优选地，此类测试抗体将使对照抗体与MCT1的结合降低至少约50％(例如至少约60％、至少约70％或更多)。应了解，对照抗体和测试抗体的顺序可逆转；即在竞争测定中，对照抗体可首先结合在表面上并且然后使测试抗体与表面接触。可替代地，首先使对MCT1抗原具有较高亲和力的抗体结合到含有MCT1的表面，如预期，对第二抗体(假定抗体是竞争性的)所见的结合降低将具有较大量级。此类测定的其他实例提供在例如Saunal和Regenmortel,J.Immunol.Methods,183:33-41(1995)，所述文献的公开内容以引用的方式并入本文。
此外，抗体是否与另一种抗体结合MCT1上的相同或重叠的表位(一个或多个)或者结合测试抗体所结合的表位，尤其可以使用基于蛋白质印迹的测定法来确定。在这个测定中，制备对应于抗体所结合的抗原(MCT1蛋白)的肽的文库，包含蛋白质的重叠部分，长度通常为10-25、10-20或10-15个氨基酸。合成涵盖MCT1序列的这些不同的重叠氨基酸肽，并且使它们共价结合到PEPSPOTSTM硝酸纤维素膜(JPT Peptide Technologies,Berlin,Germany)。然后根据制造商建议制备印迹并进行探测。
基本上，然后免疫印迹测定通过荧光测定手段来检测文库中的哪些肽结合测试抗体，并且由此可鉴定抗原(即MCT1)上的哪些残基与测试抗体相互作用。(参见以引用的方式并入本文的美国专利号7,935,340)。
各种表位作图技术在本领域中是已知的。以举例的方式，抗原和抗体的X射线共晶体学；NMR；SPR(例如，在25℃或37℃下)；基于阵列的寡肽扫描(或“pepscan分析”)；定点诱变(例如丙氨酸扫描)；诱变作图；氢氘交换；噬菌体展示；以及有限蛋白水解都是本领域公知的表位作图技术(参见，例如Epitope Mapping Protocols:Second Edition,Methods inMolecular Biology,Mike Schutkowski和Ulrich Reineke编,第2版,New York,NY:HumanaPress(2009),和Epitope Mapping Protocols,Methods in Molecular Biology,GlennMorris编,第1版,New York,NY:Humana Press(1996)，二者都以引用的方式整体并入本文)。
与本文所述的单克隆抗体(例如MCT1 Ab1或其变体)结合基本上或本质上相同的表位的一种或多种抗体的鉴定，可以使用其中可评估抗体竞争的多种免疫筛选测定法中的任一种，容易地确定。许多此类测定是常规实施并且在本领域中是公知的(参见例如1997年8月26日颁发的美国专利号5,660,827，其以引用的方式并入本文)。应了解，鉴定与本文所述的单克隆抗体结合相同或基本上相同的表位的抗体，并不需要确定本文所述的抗体结合的表位。
例如，当待检查的测试抗体是从不同来源动物获得的或甚至具有不同的Ig同种型时，可采用简单竞争测定，其中将对照抗体(例如，MCT1 Ab1、或Ab1-Ab95任意一种、或任意前述抗体的片段或变体)与测试抗体混合，并且然后施加到含有MCT1的样品(已知结合MCT1Ab1和结合Ab1-Ab95任意一种)。基于ELISA、放射免疫测定、蛋白质印迹和
Figure BDA0002570801830000461
(GE Healthcare Life Sciences，Marlborough，MA)分析的方案(如本文实施例章节所述)，适用于此类简单竞争研究中。
在某些实施方案中，所述方法包括在施加到MCT1抗原样品之前，将对照抗体与不同量的测试抗体(例如以约1:1、1:2、1:10或约1:100的比率)预混合一段时间。在其他实施方案中，对照和不同量的测试抗体可分开添加并在暴露于MCT1抗原样品期间混合。只要可区分结合抗体与游离抗体(例如通过使用分离或洗涤技术来消除未结合抗体)以及区分对照抗体与测试抗体(例如通过使用物种特异性或同种型特异性二抗、或通过用可检测标记特异性标记对照抗体)，则所述方法可用于确定测试抗体使对照抗体与MCT1抗原的结合降低，从而指示测试抗体与对照抗体(例如MCT1 Ab1或Ab1-Ab95任一种)识别基本上相同的表位。(标记的)对照抗体在完全无关抗体(其不结合MCT1)存在下的结合可充当对照高值。对照低值可通过将标记的对照抗体与相同但未标记的对照抗体一起孵育来获得，其中将发生竞争并降低标记的抗体的结合。在测定试验中，标记的抗体反应性在测试抗体存在下的显著降低，指示测试抗体识别基本上相同的表位，即测试抗体与标记的对照抗体竞争。例如，在约1:1或1:10至约1:100之间的对照MCT1 Ab1与测试抗体的任何比率下，使MCT1 Ab1与MCT1抗原的结合降低至少约50％(诸如至少约60％、或更例如至少约70％(例如约65％-100％))的任何测试抗体，都视为与MCT1 Ab1或Ab1-Ab95任一种结合基本上相同或重叠的表位或决定簇的抗体。优选地，此类测试抗体将使MCT1 Ab1与MCT1的结合降低到在测试抗体不存在下观察到的MCT1Ab1结合的至少约50％、至少约60％、至少约80％或至少约90％(例如约95％)。可调整这些方法以鉴定和/或评价与其他对照抗体竞争的抗体。
也可有利地采用简单竞争测定，其中测试抗体在饱和浓度下被施加到其上固定了MCT1的表面。在该简单竞争测定中，所述表面可以是例如，适用于
Figure BDA0002570801830000462
和/或
Figure BDA0002570801830000463
的介质。测量对照抗体(例如，MCT1 Ab1或Ab2-Ab95中任一种)与MCT1包被的表面的结合。将对照抗体单独与含有MCT1的表面的这种结合，与对照抗体在测试抗体存在下的结合进行比较。在测试抗体存在下对照抗体与含有MCT1的表面的结合显著降低，指示测试抗体与对照抗体识别基本上相同的表位，由此测试抗体与对照抗体“竞争”。使对照抗体(例如，MCT1Ab1)与MCT1的结合降低至少约20％或更多、至少约40％、至少约50％、至少约70％或更多的任何测试抗体，都可视为与对照抗体(例如MCT1 Ab1)结合基本上相同的表位或决定簇的抗体。优选地，此类测试抗体将使对照抗体(例如MCT1 Ab1)与MCT1抗原的结合降低至少约50％(例如至少约60％、至少约70％或更多)。应了解，对照抗体和测试抗体的顺序可逆转；即在竞争测定中，对照抗体可首先结合到表面上并且然后使测试抗体与表面接触。优选地，首先将对MCT1具有较高亲和力的抗体结合到含有MCT1的表面上，如预期地，对第二抗体(假定抗体是竞争性的)所见的结合降低将具有较大量级。此类测定的其他实例提供在例如Saunal和Regenmortel,J.Immunol.Methods,183:33-41(1989)中，其公开内容以引用的方式并入本文。
可以以本领域技术人员已知的方式来确定抗体、其抗原结合片段或抗体衍生物是否结合在上文定义的表位区域之一中。在此类作图/表征方法的另一个实例中，抗MCT1抗体的表位区域可通过使用MCT1蛋白中暴露的胺/羧基的化学修饰，利用表位“足迹法”来确定。此类足迹技术的一个具体实例是使用由质谱法检测的氢氘交换(“HXMS”)，其中进行受体和配体蛋白质酰胺质子的氢/氘交换、结合和返交换(back exchange)，其中参与蛋白质结合的主链酰胺基团被保护免于返交换并因此将保持氘化。此时可通过肽的蛋白水解、快速微径高效液相色谱分离和/或电喷雾离子化质谱法来鉴定相关区域(参见，例如Ehring H.,Analytical Biochemistry,267(2):252-259(1999)和Engen,J.R.&Smith,D.L.,Anal.Chem.,73:256A-265A(2001))。合适的表位鉴定技术的另一个实例是核磁共振表位作图(“NMR”)，其中通常将在游离抗原与和抗原结合肽(诸如抗体)复合的抗原的二维NMR谱中的信号位置进行比较。抗原通常用15N选择性同位素标记，使得在NMR谱中仅看到对应于抗原的信号而看不到来自抗原结合肽的信号。源自参与和抗原结合肽相互作用的氨基酸的抗原信号，通常将在复合物谱中与游离抗原谱相比发生位置移动，并且可以用这种方式鉴定参与结合的氨基酸。参见，例如Ernst Schering Res.Found.Workshop,(44):149-67(2004)；Huang等人,J.Mol.Biol.,281(1):61-67(1998)；以及Saito和Patterson,Methods,9(3):516-24(1996)。也可以使用质谱(“MS”)方法执行表位作图/表征(参见，例如Downard,J.Mass Spectrom.,35(4):493-503(2000)以及Kiselar和Downard,Anal.Chem.,71(9):1792-801(1999))。
蛋白酶消化技术也可用于表位作图和鉴定的情况。抗原决定簇相关区域/序列可通过以下来确定：蛋白酶消化，例如通过在37℃和pH 7-8下使用与MCT1的比率约1:50的胰蛋白酶过夜(“o/n”)消化，接着进行用于肽鉴定的质谱(“MS”)分析。随后，可通过将经受胰蛋白酶消化的样品与和抗体一起孵育并经受例如胰蛋白酶的消化的样品进行比较，来鉴定通过抗MCT1抗体保护免受胰蛋白酶裂解的肽(从而揭示抗体的足迹)。其他酶(如胰凝乳蛋白酶或胃蛋白酶)可用于相似的表位表征方法。此外，酶消化可提供用于分析在MCT1结合多肽的情况下潜在的抗原决定簇序列是否在MCT1的一个区域内的快速方法。如果多肽未被表面暴露，则在免疫原性/抗原性方面最有可能是不相关的(参见，例如Manca,Ann.Ist.Super.Sanità.,27(1):15-9(1991)，关于相似技术的讨论)。
定点诱变是可用于表征结合表位的另一种技术。例如，在“丙氨酸扫描”定点诱变(也称为例如丙氨酸扫描、丙氨酸扫描诱变、丙氨酸扫描突变、组合丙氨酸扫描或产生丙氨酸点突变)中，蛋白质片段内的每个残基通过以下方法用丙氨酸残基(或其他残基诸如缬氨酸，当丙氨酸存在于野生型序列中)替代，所述方法为例如直接肽或蛋白质合成、定点诱变、GENEARTTM诱变服务(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA U.S.A.)或鸟枪诱变。由此，使用这种技术生成分子的一系列单点突变体；生成的突变体的数量等于分子中的残基数，每个残基被单个丙氨酸残基替代，一次一个。丙氨酸通常用于替代天然(野生型)残基，因为丙氨酸的体积不大、化学惰性的甲基官能团可模拟许多其他氨基酸可拥有的二级结构偏好。随后，可使用诸如但不限于SPR结合实验的方法来测量用丙氨酸替代天然残基对丙氨酸扫描突变体与其结合配偶体的结合亲和力的影响。如果突变导致结合亲和力的显著降低，则最有可能所述突变残基涉及结合。可将对结构表位特异性的单克隆抗体(即不结合未折叠蛋白质的抗体)用作结合亲和力实验的阳性对照，以验证丙氨酸替代不影响蛋白质的总体三级结构(因为蛋白质的总体折叠的变化可间接影响结合，并且由此产生假阳性结果)。参见，例如Clackson和Wells,Science,267:383-386(1995)；Weiss等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,97(16):8950-8954(2000)；以及Wells,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:1-6(1996)。
电子显微镜也可用于表位“足迹法”。例如，Wang等,Nature,355:275-278(1992)使用冷冻电子显微镜、三维图像重构和X射线晶体学的协调应用，在天然豇豆花叶病毒的衣壳表面上确定Fab片段的物理足迹。
用于表位评价的其他形式的“无标记”测定法包括SPR(以
Figure BDA0002570801830000487
系统(GEHealthcare Life Sciences，Marlborough，MA)商业出售)和反射干涉光谱(“RifS”)(参见，例如Fagerstam等,Journal of Molecular Recognition,3:208-14(1990)；Nice等,J.Chromatogr.,646:159-168(1993)；Leipert等,Angew.Chem.Int.Ed.,37:3308-3311(1998)；Kroger等,Biosensors and Bioelectronics,17:937-944(2002))。
在一些实施方案中，本发明的抗MCT1抗体可以与另一种抗MCT1抗体具有相同或相似的结构。在一个优选的实施方案中，本发明的抗MCT1抗体与MCT1 Ab1或Ab1-Ab95中的任一种具有相似的结构。结构相似性可经由通过X射线晶体学、NMR或其它已知方法获得的三维蛋白质结构的结构比对来评估。相似的结构可通过分析被比较的两个蛋白质的CDR的Cα碳原子之间的位置差异来确定。一般来说，一个或多个CDR中的平均RMSD小于
Figure BDA0002570801830000481
小于
Figure BDA0002570801830000482
小于
Figure BDA0002570801830000483
小于
Figure BDA0002570801830000484
小于
Figure BDA0002570801830000485
或小于
Figure BDA0002570801830000486
表明了相似的蛋白质结构。因而，在一个实施方案中，本发明的抗MCT1抗体与MCT1 Ab1具有采用相同结构的CDR，其中结构比对的平均RMSD小于
Figure BDA0002570801830000488
在另一个实施方案中，本发明的抗MCT1抗体在蛋白质表面理化性质上可以与MCT1Ab1相似。在一个特定的实施方案中，该抗体在抗体结合表面具有与MCT1 Ab1或Ab1-Ab95中任一个相同的表面电荷。在另一个实施方案中，它具有相同的静电势和/或疏水性。
示例性的抗MCT1抗体、抗体片段和融合蛋白
在一个实施方案中，本发明的抗体包含MCT1 Ab1的重链和轻链CDR。在一个实施方案中，本发明的抗体包含SEQ ID NO:4、5、6的重链CDR和SEQ ID NO:7、8、9的轻链CDR。
在一个实施方案中，本发明的抗体或抗体片段包含MCT1 Ab1或Ab2-Ab95中任一个的VH结构域和VL结构域。在一个实施方案中，本发明的抗体或抗体片段包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列或Ab2-Ab95任一种的VH结构域具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VH结构域。在一个实施方案中，本发明的抗体或抗体片段包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列或Ab1-Ab95任一种的VL结构域具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VL结构域。在一个实施方案中，本发明的抗体或抗体片段包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VH结构域和与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VL结构域。
在一个实施方案中，本发明的抗体或抗体片段包含与Ab2-Ab95任一种的VH结构域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VH结构域和与Ab1-Ab95任一种的VL结构域的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VL结构域，优选地，其中这些同源VH和VL结构域对应于相同抗体(即Ab2-Ab95之一)的VH和VL结构域。
在一个实施方案中，本发明的融合蛋白包含MCT1 Ab1的重链CDR3(SEQ ID NO:6)或其变体。在一个实施方案中，融合蛋白包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的肽。特别是，由于MCT1Ab1的重链CDR3比大多数CDR长，并且明显地延伸超出MCT1 Ab1上的抗原结合表面的平面之外，因此考虑包含具有该序列(SEQ ID NO:6)的肽或其变体的融合蛋白可以保留MCT1Ab1的一种或多种功能或结合能力。
其它修饰
抗体缀合物
在一些实施方案中，本发明涉及抗体-药物缀合物(ADC)，其由连接至有效载荷药物(常具有细胞毒性)的抗体(或抗体片段诸如单链可变片段(scFv))组成。抗体导致ADC结合至靶标癌细胞。通常，ADC接着由细胞内化，药物被释放至细胞中。由于具有靶向性，所以副作用较低，并且产生较宽的治疗窗。亲水性接头(例如PEG4Mal)有助于防止药物通过MDR(多重药物抗性)转运蛋白被泵出抗性癌细胞。
在另一个方面，本发明的特征在于免疫缀合物，其包含缀合至治疗剂诸如细胞毒素、药物(如免疫抑制剂)或放射性毒素的抗MCT1抗体或其片段。这种缀合物在本文中称为“免疫缀合物”。包括一种或多种细胞毒素的免疫缀合物称为“免疫毒素”。细胞毒素或细胞毒性剂包括对细胞有害(例如杀死细胞)的任何试剂。实例包括泰素(Taxol)、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐根碱、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、多柔比星、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、米托蒽醌、光辉霉素(mithramycin)、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质素、普鲁卡因、丁卡因(tetracaine)、利多卡因、普萘洛尔(propranolol)和嘌呤霉素以及它们的类似物或同系物。治疗剂也包括例如抗代谢剂(例如甲氨蝶呤、6-疏基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、达卡巴嗪(decarbazine))、烷化剂(例如二氯甲基二乙胺、塞替派、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素(streptozotocin)、丝裂霉素C和顺式二氯二胺合铂(II)(DDP)、顺铂)、蒽环霉素类(例如柔红霉素(先前称为道诺霉素)和多柔比星)、抗生素(例如更生霉素(先前称为放线菌素)、博来霉素、光神霉素和安曲霉素(AMC))、以及抗有丝分裂剂(例如长春新碱和长春花碱)。
可缀合至根据本发明至少一些实施方案的抗体的治疗性细胞毒素的其他实例包括倍癌霉素(duocarmycin)、卡奇霉素(calicheamicin)、美登素(maytansines)和澳瑞他汀(auristatins)以及它们的衍生物。卡奇霉素抗体缀合物的一个实例可商购获得(MylotargTMWyeth)。
可以使用本领域中可用的接头技术来使细胞毒素缀合至根据本发明至少一些实施方案的抗体。已用于使细胞毒素缀合至抗体的接头类型的实例包括但不限于腙、硫醚、酯、二硫化物和含肽接头。可选择例如易经由溶酶体区室内的低pH达成裂解或易经受蛋白酶裂解的接头，所述蛋白酶为诸如优先在肿瘤组织中表达的蛋白酶诸如组织蛋白酶(cathepsin)(例如组织蛋白酶B、C、D)。对于各种类型的细胞毒素、用于使治疗剂缀合至抗体的接头和方法的进一步讨论，还可参见Saito,G.等(2003)Adv.Drug Deliv.Rev.55:199-215；Trail,P.A.等(2003)Cancer Immunol.Immunother.52:328-337；Payne,G.(2003)Cancer Cell 3:207-212；Allen,T.M.(2002)Nat.Rev.Cancer 2:750-763；Pastan,I.和Kreitman,R.J.(2002)Curr.Opin.Investig.Drugs3:1089-1091；Senter,P.D.和Springer,C.J.(2001)Adv.Drug Deliv.Rev.53:247-264。
也可使本发明的抗体缀合至放射性同位素以产生细胞毒性放射性药物，也称为放射免疫缀合物。可缀合至抗体以进行诊断或治疗使用的放射性同位素的实例包括但不限于碘131、铟111、钇90和镥177。本领域中确立了用于制备放射免疫缀合物的方法。放射免疫缀合物可商购获得，包括
Figure BDA0002570801830000501
(BiogenlDEC)和
Figure BDA0002570801830000502
(Corixa Pharmaceuticals)，并且类似方法可用于使用根据本发明至少一些实施方案的抗体来制备放射免疫缀合物。
根据本发明至少一些实施方案的抗人MCT1抗体和缀合物可用于修饰给定的生物应答，并且药物部分不应理解为限于经典的化学治疗剂。例如，药物部分可为具有所需生物活性的蛋白质或多肽。这类蛋白质可包括例如酶活性毒素或其活性片段，诸如相思豆毒素(abrin)、篦麻毒素A(ricin A)、假单胞菌外毒素或白喉毒素；蛋白质诸如肿瘤坏死因子或干扰素-γ；或生物应答调节剂诸如像淋巴因子、白介素-1(“IL-1”)、白介素-2(“IL-2”)、白介素-6(“IL-6”)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)、粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”)或其他生长因子。
用于使治疗性部分缀合至抗体的技术是熟知的，参见例如Arnon等，“MonoclonalAntibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”，载于MonoclonalAntibodies And Cancer Therapy,Reisfeld等(编辑)，第243-56页(AlanR.Liss,Inc.1985)；Hellstrom等，“Antibodies For Drug Delivery”，载于ControlledDrugDelivery(第2版)，Robinson等(编辑)，第623-53页(MarcelDekker,Inc.1987)；Thorpe,“Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review”，载于MonoclonalAntibodies‘84:Biological And Clinical Applications,Pinchera等(编辑)，第475-506页(1985)；”Analysis,Results,And Future Prospective Of The Therapeutic Use OfRadiolabeledAntibody In Cancer Therapy”，载于Monoclonal Antibodies For CancerDetection And Therapy,Baldwin等(编辑)，第303-16页(Academic Press 1985)，以及Thorpe等，”The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-ToxinConjugates”,Immunol.Rev.,62:119-58(1982)。
对恒定域、Fc结构域和翻译后修饰的修饰
除在框架区或CDR区内进行的修饰之外另行地或替代性地，可对根据本发明至少一些实施方案的抗体进行工程改造以在Fc区内包括修饰，通常用以改变抗体的一种或多种功能性质，诸如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞细胞毒性。此外，可对根据本发明至少一些实施方案的抗体进行化学修饰(例如可使一个或多个化学部分附接至抗体)或修饰以改变其糖基化，同样用以改变抗体的一种或多种功能性质。下文进一步描述这类实施方案。Fc区中残基的编号方式是Kabat的EU索引的编号方式。
在一个实施方案中，修饰CH1的铰链区以使得铰链区中半胱氨酸残基的数目被改变，例如增加或减少。这个方法进一步描述于Bodmer等的美国专利No.5,677,425中。改变CH1的铰链区中半胱氨酸残基的数目以例如助于轻链和重链的装配或用以提高或降低抗体的稳定性。
在另一个实施方案中，使抗体的Fc铰链区突变以降低抗体的生物半衰期。更具体地讲，将一个或多个氨基酸突变引入Fc-铰链片段的CH2-CH3结构域界面区中以使得相对于天然的Fc-铰链结构域的葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal protein A,SpA)结合，抗体具有受损的SpA结合。这个方法进一步详细描述于Ward等的美国专利No.6,165,745中。
在另一个实施方案中，修饰抗体以增加其生物半衰期。各种方法是可能的。例如，可引入一个或多个以下突变：T252L、T254S和T256F，如Ward的美国专利No.6,277,375中所述。作为另一种选择，为增加生物半衰期，可在CH1区或CL区内改变抗体以含有取自IgG的Fc区CH2结构域的两个环区的补救受体结合表位，如Presta等的美国专利No.5,869,046和No.6,121,022中所述。
在其他实施方案中，通过用不同氨基酸残基置换至少一个氨基酸残基来改变Fc区以改变抗体的效应子功能。例如，可用不同氨基酸残基置换选自氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320和322的一个或多个氨基酸以使得抗体对效应子配体具有改变的亲和力，但保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和力被改变的效应子配体可为例如Fc受体或补体的Cl组分。这个方法进一步详细描述于Winter等的美国专利No.5,624,821和No.5,648,260中。
在一些实施方案中，可用不同氨基酸残基置换选自氨基酸残基329、331和322的一个或多个氨基酸以使得抗体具有改变的C1q结合和/或降低或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。这个方法进一步详细描述于Idusogie等的美国专利No.6,194,551中。
在另一个实施方案中，改变在氨基酸位置231和239内的一个或多个氨基酸残基以由此改变抗体固定补体的能力。这个方法进一步描述于Bodmer等的PCT公布WO 94/29351中。
在另一个实施方案中，通过修饰在以下位置处的一个或多个氨基酸来修饰Fc区以增加抗体对Fγ受体的亲和力：238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439。这个方法进一步描述于Presta的PCT公布WO 00/42072中。此外，已对人IgGl上FcγRI、FcγRII、FcγRIII和FcRn的结合位点进行作图，并且已描述了具有改善结合的变体(参见Shields，R.L.等(2001)J.Biol.Chem.276:6591-6604)。显示在位置256、290、298、333、334和339处的特定突变会改善与FcγRIII的结合。另外，显示以下组合突变体可改善FcγRIII结合：T256A/S298A、S298A/E333A、S298A/K224A和S298A/E333A/K334A。此外，诸如M252Y/S254T/T256E或M428L/N434S之类的突变可改善与FcRn的结合，并且可增加抗体循环半衰期(参见Chan CA和Carter PJ(2010)Nature Rev Immunol 10:301-316)。
在另一个实施方案中，可修饰抗体以消除体内Fab臂交换。具体来说，该方法涉及在其他IgG4抗体之间交换IgG4半分子(一个重链加一个轻链)，所述交换有效产生在功能上是单价的双特异性抗体。对重链的铰链区和恒定结构域的突变可消除这种交换(参见Aalberse,RC,Schuurman J.,2002,Immunology 105:9-19)。
在另一个实施方案中，修饰抗体的糖基化。例如，可制备无糖基化抗体(即抗体缺少糖基化)。可改变糖基化以例如增加抗体对抗原的亲和力。所述碳水化合物修饰可通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点来实现。例如，可进行一个或多个可氨基酸置换，导致一个或多个可变区框架糖基化位点消除，以由此消除在该位点处的糖基化。这种去糖基化可增加抗体对抗原的亲和力。这种方法进一步详细描述于Co等的美国专利No.5,714,350和6,350,861中。
另外地或作为另外一种选择，可制备具有改变类型的糖基化的抗体，诸如具有降低量的岩藻糖基残基的低岩藻糖基化抗体或具有增加的平分型GlcNac结构的抗体。已证明这种改变的糖基化样式会增加抗体的ADCC能力。这种碳水化合物修饰可通过例如在糖基化机制改变的宿主细胞中表达抗体来实现。糖基化机制改变的细胞已在本领域中描述并且可用作宿主细胞，在该宿主中表达根据本发明至少一些实施方案的重组抗体以由此产生具有改变的糖基化的抗体。例如，细胞系Ms704、Ms705和Ms709缺乏岩藻糖基转移酶基因FUT8(α-(1,6)岩藻糖基转移酶)，以致在Ms704、Ms705和Ms709细胞系中表达的抗体在它们的碳水化合物上缺乏岩藻糖。通过使用两种置换载体在CH0/DG44细胞中靶向破坏FUT8基因来产生Ms704、Ms705和Ms709FUT8细胞系(参见由Yamane等的美国专利公布No.20040110704以及Yamane-Ohnuki等(2004)Biotechnol Bioeng 87:614-22)。又如，Hanai等的EP 1,176,195描述了具有在功能上被破坏的FUT8基因(编码岩藻糖基转移酶)的细胞系，以致由于降低或消除了该α-1,6键相关的酶，在这种细胞系中表达的抗体展现低岩藻糖基化。Hanai等还描述了，具有向结合抗体Fc区的N-乙酰基葡萄糖胺添加岩藻糖的低酶活性，或不具有该酶活性的细胞系，例如大鼠骨髓瘤细胞系YB2/0(ATCC CRL1662)。Presta的PCT公布WO 03/035835描述了变体CHO细胞系Lecl3细胞，其具有降低的使岩藻糖附接于Asn(297)连接的碳水化合物的能力，从而也导致在该宿主细胞中表达的抗体具有低岩藻糖基化(还可参见Shields,R.L.等(2002)J.Biol.Chem.277:26733-26740)。Umana等的PCT公布WO 99/54342描述了经工程改造以表达糖蛋白修饰性糖基转移酶(例如P(l,4)-N-乙酰葡糖胺基转移酶III(GnTIII))的细胞系，在该工程细胞系中表达的抗体展现出增加的平分型GlcNac结构，这导致抗体的ADCC活性增加(还可参见Umana等(1999)Nat.Biotech.17:176-180)。作为另外一种选择，可使用岩藻糖苷酶来裂解掉抗体的岩藻糖残基。例如，岩藻糖苷酶-L-岩藻糖苷酶可从抗体移除岩藻糖基残基(Tarentino,A.L.等(1975)Biochem.14:5516-23)。
本发明所考虑的本文抗体的另一修饰是聚乙二醇化或添加其他水溶性部分，通常是聚合物，例如用以增强半衰期。可使抗体聚乙二醇化以例如，增加该抗体的生物(例如血清)半衰期。为使抗体聚乙二醇化，通常使抗体或其片段与聚乙二醇(PEG)诸如PEG的反应性酯或醛衍生物在其中一个或多个PEG基团可以附接于所述抗体或抗体片段的条件下反应。优选地，经由与反应性PEG分子(或类似反应性水溶性聚合物)的酰化反应或烷基化反应来进行聚乙二醇化。如本文所用，术语“聚乙二醇”旨在涵盖已用于衍生其他蛋白质的任何形式的PEG，诸如单(Ci-Cio)烷氧基聚乙二醇或芳氧基聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在某些实施方案中，待聚乙二醇化的抗体是无糖基化抗体。用于使蛋白质聚乙二醇化的方法在本领域中是已知的，并且可应用于根据本发明至少一些实施方案的抗体。参见例如Nishimura等的EP 0 154 316和Ishikawa等的EP 0 401 384。
核酸分子
本发明还提供编码根据本发明的抗MCT1抗体或其片段或缀合物的核酸。核酸可存在于完整细胞中、细胞溶解产物中，或呈部分纯化或基本上纯化的形式。当核酸通过标准技术(包括碱/SDS处理、CsCl分带、柱色谱法、琼脂糖凝胶电泳和本领域中熟知的其他技术)纯化而去除其他细胞组分或其他污染物例如其他细胞核酸或蛋白质后，核酸是“分离的”或“基本上纯的”。参见Ausubel等(编辑)(2011)Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,Inc.。根据本发明至少一些实施方案的核酸可为例如DNA或RNA，并且可含有或可不含有内含子序列。在一个优选的实施方案中，核酸是cDNA分子。
可以使用标准分子生物学技术来获得根据本发明至少一些实施方案的核酸。对于由杂交瘤(例如如下文进一步描述的，由携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤)表达的抗体，可通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术来获得编码由杂交瘤制备的抗体的轻链和重链的cDNA。对于从免疫球蛋白基因文库获得(例如，使用噬菌体展示技术)的抗体，可从文库回收编码抗体的核酸。
一旦获得编码VH区段和VL区段的DNA片段，即可进一步通过标准重组DNA技术来操作这些DNA片段，例如以使可变区基因转换成全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，使编码VL或VH的DNA片段有效连接至编码另一蛋白质诸如抗体恒定区或柔性接头的另一DNA片段。如先前所定义的，“有效连接”意指使两个DNA片段连接以致由所述两个DNA片段编码的氨基酸序列保持同框。
可通过使分离的编码VH区的DNA有效连接于编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一DNA分子来使编码VH区的DNA转换成全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如Kabat,E.A.等(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services，NIH出版号91-3242)，并且可通过标准PCR扩增来获得涵盖这些区域的DNA片段。重链恒定区可为IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但最优选是IgGl、IgG2或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因，可使编码VH的DNA有效连接至仅编码重链CH1恒定区的另一DNA分子。
可通过使编码VL的分离DNA有效连接于编码轻链恒定区CL的另一DNA分子来使分离的编码VL区的DNA转换成全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列在本领域中是已知的(参见例如Kabat,E.A.等(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services，NIH出版号91-3242)，并且可通过标准PCR扩增来获得涵盖这些区域的DNA片段。轻链恒定区可为κ或λ恒定区，但最优选是κ恒定区。
为了产生scFv基因，使编码VH和VL的DNA片段有效连接至编码柔性接头例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一片段，使得VH序列和VL序列可表达成连续单链蛋白质，其中VL区和VH区通过所述柔性接头接合(参见例如Bird等(1988)Science 242:423-426；Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 85:5879-5883；McCafferty等，(1990)Nature 348:552-554)。
载体
本发明还提供了插入本发明DNA的载体。衍生自逆转录病毒的载体是实现长期基因转移的合适工具，因为它们除了具有灵活的基因组外，还可以实现遗传稳定性和高表达。此外，使用逆转录病毒载体的临床经验为优化其使用的有效性和安全性提供了指导。
简而言之，编码抗体或其抗原结合片段的天然或合成核酸的表达通常是通过将编码抗体或其抗原结合片段或其部分的核酸有效连接到启动子上，并将构建体并入表达载体来实现的。该载体可以适合在真核生物中复制和整合。典型的克隆载体含有转录和翻译终止子、起始序列和启动子，用于调节所需核酸序列的表达。
核酸可被克隆到许多类型的载体中。例如，核酸可被克隆到包括但不限于以下的载体中：质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、动物病毒和粘粒。特别有意义的载体包括表达载体、复制载体、探针产生载体和测序载体。
此外，表达载体可以以病毒载体的形式提供给细胞。病毒载体技术为本领域公知的，并在例如Sambrook等(2001，Molecular Cloning:A Laboratory Manual，Cold SpringHarbor Laboratory，New York)以及其他病毒学和分子生物学手册中描述。可用作载体的病毒包括但不限于逆转录病毒、γ逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒和慢病毒。通常，合适的载体含有在至少一种生物体中有功能性的复制起点、启动子序列、合宜的限制性核酸内切酶位点和一种或多种选择标记物(例如WO 01/96584、WO 01/29058和美国专利号6,326,193)。
已经开发了许多基于病毒的系统用于基因转移到哺乳动物细胞中。例如，逆转录病毒为基因递送系统提供一种便利的平台。可使用本领域已知的技术将选择的基因插入到载体中并包装在逆转录病毒颗粒中。然后可将重组病毒分离并在体内或离体递送至受试者的细胞。许多逆转录病毒系统是本领域中已知的。在一些实施方案中，使用腺病毒载体。许多腺病毒载体是本领域中已知的。在一个实施方案中，使用逆转录病毒载体。
另外的启动子元件，例如增强子，可以调节转录起始的频率。一般地，这些位于起始位点上游30-110bp区域中，但最近已经正是许多启动子也在起始位点下游含有功能元件。启动子元件之间的间隔常是灵活的，以致当元件相对于彼此颠倒或移动时启动子功能被保持。在胸苷激酶(tk)启动子中，启动子元件之间的间隔可增加到50bp，之后活性才会开始下降。依启动子而定，看起来，各单个元件可协作地或独立地起作用以激活转录。
可以使用各种启动子序列，包括但不限于，立即早期巨细胞病毒(CMV)启动子、延伸生长因子-1α(EF-1α)、猿猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)长末端重复(LTR)启动子、MoMuLV启动子、禽白血病病毒启动子、Epstein-Barr病毒立即早期启动子、Rous肉瘤病毒启动子，以及人类基因启动子，诸如，但不限于，肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子和肌酸激酶启动子。此外，本发明不应限于组成型启动子的使用。诱导型启动子也可是本发明的一部分。诱导型启动子的使用提供一种分子开关，其能够在期望这样的表达时开启有效连接的多核苷酸序列的表达，或者在不期望表达时关闭表达。诱导型启动子的实例包括但不限于金属硫蛋白启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。
为了评估抗体、抗体的抗原结合片段或其部分的表达，待引入到细胞中的表达载体也可含有选择标记基因或报告基因或两者，以促进自病毒载体转染或感染的细胞群中鉴别和选择表达细胞。在其他方面，选择标记可携带在单独的DNA片段上并用于共转染过程。选择标记和报告基因两者可侧接合适的调控序列以使得在宿主细胞中表达。有用的选择标记包括例如抗生素抗性基因，比如neo等。
报告基因可以用于鉴定潜在的转染细胞和用于评价调控序列的功能性。通常，报告基因在接受者生物体或组织中不存在或者不表达，并且编码可通过一些易于检测的性质例如酶活性来展示其表达的多肽。在将DNA引入到接受者细胞后，于合适的时间测定报告基因的表达。合适的报告基因可包括编码萤光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶、分泌型碱性磷酸酶的基因或绿色荧光蛋白基因(例如Ui-Tei等,2000FEBS Letters 479:79-82)。合适的表达系统是公知的，并且可以使用已知技术制备或商购获得。一般来说，显示报告基因最高表达水平的具有最小5'侧翼区域的构建体被确定为启动子。这样的启动子区域可与报告基因相连接，并用于评价试剂调节启动子驱动的转录的能力。
转导
将基因引入到细胞中和表达的方法为本领域熟知的。在表达载体的情况下，载体可通过本领域的任何方法，容易地引入到宿主细胞例如哺乳动物、细菌、酵母或昆虫细胞中。例如，表达载体可通过物理、化学或生物学手段转移至宿主细胞中。
用于将多核苷酸引入到宿主细胞中的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂转染、粒子轰击、显微注射、电穿孔等。用于产生包含载体和/或外源性核酸的细胞的方法为本领域熟知的。例如，参见Sambrook等(2001，Molecular Cloning:A Laboratory Manual，Cold SpringHarbor Laboratory，New York)。将多核苷酸引入宿主细胞的优选方法是磷酸钙转染。
用于将目标多核苷酸引入到宿主细胞中的生物学方法包括使用DNA和RNA载体。病毒载体，并且尤其是逆转录病毒载体，已经成为用于将基因插入到哺乳动物细胞，例如人细胞中的最广泛使用的方法。其他病毒载体可源自慢病毒、痘病毒、I型单纯疱疹病毒、腺病毒、腺相关病毒等(参见例如美国专利号5350674和5585362)。
用于将核酸引入到宿主细胞中的化学手段包括胶体分散系统，比如大分子复合物、纳米囊、微球、珠和基于脂质的系统，包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。用作体外和体内递送载体的示例性胶体系统为脂质体(例如人工膜囊泡)。
在使用非病毒递送系统的情况下，示例性的递送载体为脂质体。考虑使用脂质制剂用于将核酸引入到宿主细胞中(体外、离体或体内)。另一方面，核酸可与脂质缔合。与脂质缔合的核酸可被包封在脂质体的水性内部、散布在脂质体的脂质双分子层内、经与脂质体和寡核苷酸两者缔合的连接分子连接于脂质体、俘获在脂质体中、与脂质体复合、分散在含有脂质的溶液中、与脂质混合、与脂质组合、作为悬浮液在脂质中、含有胶束或与胶束复合、或以其他方式与脂质缔合。脂质、脂质/DNA或脂质/表达载体相关的组合物不限于溶液中的任何特定结构。例如，它们可以以双分子层结构存在，如胶束，或具有“塌陷(collapsed)”结构。它们也可简单地散布在溶液中、可能形成大小或形状不均匀的聚集体。脂质是脂肪物质，可以是天然存在的或合成的脂质。例如，脂质包括自然存在于细胞质中的脂肪滴，以及含有长链脂肪烃及其衍生物的一类化合物，如脂肪酸、醇、胺、氨基醇和醛。
可以从商业来源获得适合使用的脂质。例如，能够从Sigma,St.Louis,Mo.获得二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(“DMPC”)；能够从K&K Laboratories(Plainview,N.Y.)获得磷酸二鲸蜡脂(“DCP”)；能够从Calbiochem-Behring获得胆固醇(“Choi”)；可以从Avanti PolarLipids公司(Birmingham,Ala.)获得二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(“DMPG”)和其他脂质。脂质的氯仿或氯仿/甲醇储存液能够在约-20℃下储存。可以将氯仿用作唯一的溶剂，因为它比甲醇更容易蒸发。“脂质体”是上位术语，其涵盖通过产生封闭的脂质双层或聚集体形成的各种单一和多层脂质载体。能够将脂质体表征为具有囊泡结构，所述囊泡结构有磷脂双层膜和内部水性介质。多层脂质体具有被水性介质分开的多个脂质层。当磷脂悬浮在过量的水性溶液中时，它们自发形成。脂质组分在形成封闭结构之前经历自重排，并在脂质双层之间夹带水和溶解的溶质(Ghosh等，1991Glycobiology 5:505-10)。然而，本发明也涵盖在溶液中具有与正常囊泡结构不同结构的组合物。例如，脂质可以呈现胶束结构或仅作为脂质分子的不均匀聚集体存在。还考虑了lipofectamine-核酸复合物。
无论用于将外源性核酸引入宿主细胞或以其它方式将细胞暴露于本发明的抑制剂的方法如何，为了证实宿主细胞中重组DNA序列的存在，可以进行多种测定。此类测定包括，例如，本领域技术人员熟知的“分子生物学”测定，诸如Southern和Northern印迹、RT-PCR和PCR；“生物化学”测定，诸如检测特定肽的存在或不存在，例如通过免疫学手段(ELISA和蛋白质印迹)、或通过本文所述的测定以鉴定落入本文所述范围内的试剂。
治疗应用
通过上述方法获得的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段、或包含其的组合物，可用作治疗受试者的疾病、障碍或病症的药物。在一些实施方案中，这样的药物可用于治疗自身免疫性、炎性或变应性病症。在一些实施方案中，该药物可用于治疗癌症。在一些实施方案中，该药物可用于治疗EIHI。
受试者
本文提到的受试者可以是任何活个体。在一个优选的实施方案中，受试者是哺乳动物。本文提及的哺乳动物可以是任何哺乳动物。如本文所用，术语"哺乳动物"是指任何哺乳动物，包括但不限于啮齿目的哺乳动物，诸如小鼠和仓鼠，以及兔形目(Logomorpha)的哺乳动物，诸如兔子。哺乳动物可来自食肉类(Carnivora)，包括猫科动物(猫)和犬科动物(狗)。哺乳动物可来自偶蹄目(Artiodactyla)，包括牛科动物(牛)和猪类(猪)，或来自奇蹄目(Perissodactyla)，包括马类(马)。哺乳动物可以是灵长类(Primates)、Ceboids或Simoids(猴)或类人猿目(Anthropoids)(人和类人猿)。
在一些实施方案中，接受抗体、抗体片段或组合物施用的受试者是灵长类动物，诸如人。在一些实施方案中，灵长类动物是猴或猿。受试者可以是男性或女性，并可以是任何合适的年龄，包括婴儿、少年、青少年、成人和老年受试者。在一些实例中，患者或受试者是用于疾病、抗体治疗和/或用于评估毒性结果的经验证的动物模型。
在一些实施方案中，受试者具有持续或复发的疾病，例如，在用另一种免疫疗法和/或其他疗法(包括化疗、放疗和/或造血干细胞移植(HSCT)，例如，同种异体HSCT)治疗之后。在一些实施方案中，尽管受试者已对另一疗法产生抗性，但本发明的施用有效地治疗受试者。在一些实施方案中，受试者尚未复发，但确定有复发的风险，例如有复发的高风险，因而预防性地施用本发明化合物或组合物，例如，以降低复发的可能性或防止复发。
在一些实施方案中，方法包括向受试者、组织或细胞施用抗MCT1抗体、抗体片段或含有其的组合物。待治疗的受试者，或所述组织或细胞的来源受试者，可以是患有、有风险或怀疑患有与MCT1表达相关的疾病、病症或障碍的受试者。在一些实施方案中，将抗体、抗体片段或组合物施用于具有待治疗的特定疾病或病症的受试者。在一些实施方案中，将抗体、抗体片段或组合物施用给受试者，例如患有或处于该疾病或病症的风险中的受试者。在某些方面，该方法由此治疗，例如改善疾病或病症的一种或多种症状，例如通过减少介导自身免疫病症的活化T细胞或B细胞的比例。
功能活动和/或评估
抑制MCT1可用于下调自身免疫反应。下调的形式可以是抑制或阻断已经在进展中的自身免疫反应，或者下调可以涉及阻止自身免疫反应的诱导。活化的免疫细胞的功能可以通过抑制MCT1介导的乳酸转运来抑制。例如，MCT1 Ab1可结合在活化的T细胞和B细胞上表达并是免疫学相关的MCT1，从而下调由这些细胞介导的自身免疫反应。如本文所公开的，其他抗MCT1抗体可以通过其抑制活化T细胞活性或增殖的能力和/或基于其免疫抑制作用，在体外或在炎性、变应性或自身免疫性疾病模型中予以鉴定。
许多本领域公认的细胞活化读出方式可用于在存在抗MCT1抗体或其抗原结合片段的情况下测量，例如，细胞增殖或效应子功能(例如抗体产生、细胞因子产生、吞噬作用)。测试抗体抑制MCT1的能力可容易地通过测量该抗体减少被测量的增殖或效应子功能的能力来确定。因此，测试抗体具有免疫抑制性的能力以及阻断自身免疫活化的能力可以通过测量不同抗原浓度下的细胞因子产生和/或增殖来测定。在一些实施方案中，炎性细胞因子的产生或分泌可用于监测本发明的治疗方法的疗效。
在一些实施方案中，用本发明的抗体治疗的疗效可以通过检测尿酮来测量。特别是，由于MCT1 Ab1不与啮齿动物MCT1发生交叉反应，小鼠研究的体内结果可表明酮尿症可直接从人白细胞诱导，因为这些是NSG小鼠中仅有的靶细胞。此外，所观察到的MCT1抑制的一些免疫调节作用可能是由酮的产生间接带来的，因为研究表明酮的血液水平的增加可以抑制炎性小体(参考文献.67)。
在某些方面，用本发明的抗体治疗的疗效通过评估临床结果来衡量。对于自身免疫性、炎性或变应性病症的治疗，治疗疗效可以通过病症的改善来衡量。例如，狼疮症状的减轻、GVHD的存活率的改善、移植排斥的减少、自身抗体浓度的降低等。在治疗癌症的情况下，可以包括肿瘤负担或负荷的减少、肿瘤的稳定、无进展生存期或总生存期。在治疗EIHI的情况下，这样的临床结果可包括身体活动后低血糖的减少。
免疫反应的下调
MCT1抑制可用于下调免疫反应。下调的形式可以是抑制或阻断已经在进展中的免疫反应，或者下调可以涉及阻止免疫反应的诱导。活化的免疫细胞的功能可以通过下调免疫细胞反应或通过在免疫细胞中诱导特异性无反应、或通过两者来抑制。例如，抗MCT1抗体可以与在活化T细胞上表达的MCT1结合，并从而下调免疫反应。该抗体可以是单特异性的或多特异性的，例如，其可以包含双特异性抗体诸如BiTE。例如，这种抗体可以包含MCT1抗原结合部分和另一种抗原结合部分，例如，其靶向免疫细胞(如活化T细胞或B细胞)上的细胞表面受体。除了包含MCT1抗原结合位点之外，这种抗体可还包含结合至B细胞抗原受体、T细胞抗原受体、或者Fc或其他受体的结合位点，以便使该分子靶向特定的细胞群。选择用于双特异性抗体的该第二抗原，可为选择待靶向的细胞群提供灵活性。如本文公开的，其它人MCT1结合抗体可以通过在体外或在炎性、变应性或自身免疫性疾病模型中其抑制T细胞或B细胞活性或增殖的能力和/或基于其免疫抑制作用来鉴定。
可以通过将抗原与根据本发明的抗MCT1抗体共同施用，诱导针对特定抗原的耐受性。例如，可以诱导对特定多肽的耐受性。可以抑制对变应原或外来多肽的免疫反应，其中所述外来多肽是不期望对其产生免疫反应的多肽。例如，接受因子VIII的患者经常产生针对该凝血因子的抗体。将根据本发明的抗MCT1抗体与重组因子VIII共同施用可以抑制这种不希望的免疫反应。
根据本发明的抗MCT1抗体可以与另一活性剂组合使用以下调免疫反应，其中所述活性剂阻断免疫细胞上的共刺激受体的活性或者激动免疫细胞上表达的免疫抑制受体或配体的活性。示例性的分子包括：PD-1、PDL-1激动剂、CTLA-4的可溶形式、抗B7-1抗体、抗B7-2抗体、靶向LAG-3、TIM-3、BTLA、B7-H4、B7H3等中的一者或多者的拮抗性抗体、和/或靶向CD40、CD137、OX40、GITR、CD27、CD28、ICOS或VISTA中的一者或多者的激动性抗体、或它们的组合。这些结构部分可以组合在单一组合物或化合物中，例如，含有根据本发明的抗MCT1抗体并且还包含免疫激动性抗体的双特异性抗体，或者其可以包含融合多肽，该融合多肽含有与另一免疫抑制性多肽或其他活性剂融合的根据本发明的抗MCT1抗体。作为另一种选择，可将这些结构部分作为单独的或离散的实体在相同或不同的组合物中(同时或相继)施用，以下调受试者中的免疫细胞介导的免疫反应。
可以与根据本发明的抗MCT1抗体组合的特定免疫抑制分子的实例包括，阻断共刺激信号(例如，针对CD28或ICOS)的抗体、经由CTLA4活化抑制性信号的抗体、和/或针对其他免疫细胞标志物(例如，针对CD40、CD40配体或细胞因子)的抗体、融合蛋白(例如CTLA4-Fc或PD-1-Fc)、和免疫抑制性药物(例如雷帕霉素、环孢菌素A或FK506)。
在另一个实施方案中，含有根据本发明的抗MCT1抗体的双特异性抗体可用于靶向特定细胞群体，例如，利用仅见于某种类型细胞，例如活化的T细胞或B淋巴细胞上的标志物。通过阻断MCT1来下调免疫反应可用于下调免疫反应，例如，在组织、皮肤和器官移植的情况下，在移植物抗宿主疾病(GVHD)、或变态反应、或自体免疫和炎性疾病诸如全身性红斑狼疮、IBD、RA、牛皮癣和多发性硬化症中。例如，MCT1功能的阻断可以导致组织移植中组织破坏减少。通常，在组织移植中，移植物的排斥通过免疫细胞识别移植物为外来物而起始，然后是破坏移植物的免疫反应。在移植前或移植时，单独或与其它下调剂一起施用抑制免疫细胞上的MCT1的分子，可以抑制共刺激信号的产生。此外，阻断MCT1也足以使免疫细胞无应答，从而在受试者中诱导耐受性。
为了在某些疾病或在某些受试者中获得足够的免疫抑制或耐受性，可能需要阻断其他分子的共刺激功能。例如，可能期望通过如下方式阻断B7-1和B7-2的功能：在移植之前或移植时，施用可溶形式的肽组合(具有这些抗原每一者的活性)或针对这些抗原的阻断性抗体(单独地或组合在单种组合物中)。或者，可能期望阻断MCT1并进一步抑制B7-1和/或B7-2的共刺激活性。
本发明抗MCT1抗体尤其可用于治疗自身免疫疾病。许多自身免疫疾病是免疫细胞的不适当活化的结果，其中所述免疫细胞对自身组织具有反应性，并且促进参与疾病病理学的细胞因子和自身抗体产生。防止自身反应性免疫细胞的活化可以减少或消除疾病症状。施用本发明抗MCT1抗体可以诱导自身反应性免疫细胞的抗原特异性耐受，这可以导致疾病的长期缓解。另外，共同施用可以通过破坏B7分子与共刺激受体的受体-配体相互作用来阻断免疫细胞共刺激的活性剂，可用于抑制免疫细胞活化，以防止产生可能涉及疾病过程的自身抗体或细胞因子。
经由本发明抗MCT1抗体来下调免疫反应也可用于治疗针对自体组织的自身免疫攻击。因此，对于由自身免疫攻击引起或加剧的病症(例如，心脏病、心肌梗死或动脉粥样硬化)，可以通过抑制MCT1来减轻或改善。因此，本发明的范围涵盖：通过使用本发明抗人MCT1抗体抑制MCT1，来调节由自体免疫攻击加剧的病症，诸如自身免疫病(以及诸如心脏病、心肌梗死和动脉粥样硬化之类的病症)。
如前所述，根据本发明的抗MCT1抗体用于预防或缓解自身免疫和炎性病症的功效可使用许多经充分表征的人自身免疫疾病和炎性疾病的动物模型来确定。实例包括鼠实验性自身免疫性脑炎、MRL/lpr/lpr小鼠或NZB杂交小鼠中的全身性红斑狼疮、鼠自身免疫胶原蛋白关节炎、NOD小鼠和BB大鼠中的糖尿病，以及鼠实验性重症肌无力。参见Paul(编辑)，Fundamental Immunology,Raven Press,New York,1989,第840-856页。
抑制免疫细胞活化进一步在治疗上可用于治疗变态反应和变应性反应，例如通过抑制IgE产生。可以将本发明抗MCT1抗体施用给变应性受试者，以抑制受试者中免疫细胞介导的变应性反应。对MCT1的抑制可与暴露于变异原(结合适宜的MHC分子结合)相伴。变应性反应在本质上可以是全身性或局部性的，这取决于变应原的进入途径以及IgE在肥大细胞或嗜碱性粒细胞上的沉积模式。因此，通过施用本发明抗人MCT1抗体，可以局部或全身抑制免疫细胞介导的变应性反应。
自身免疫性、炎性或变应性病症的治疗
根据本发明的抗体、抗体片段和药物组合物可用于抑制活化的T细胞或B细胞以及用于治疗其中在治疗上期望该抑制的病症，诸如自身免疫型、变应性或炎性病症。这些组合物将包含一定量的本发明抗体或抗体片段，所述量将在有需要的受试者中有效抑制B细胞活性或T细胞活化或增殖或细胞因子表达。此类自身免疫病症、炎性病症和变应性病症包括例如，关节炎病症，诸如类风湿性关节炎(RA)、牛皮癣性关节炎、牛皮癣、硬皮病、多发性硬化、狼疮、IBD、ITP、糖尿病、GVHD、肉样瘤病、变应性哮喘、肝炎相关的肝毒性。这些抗体也可以用于抑制针对移植细胞、组织或器官的不想要的T细胞免疫反应，诸如针对组织移植物、CAR-T细胞或基因治疗构建体或含有其的细胞等的免疫反应。
可单独或联合其他治疗剂(尤其是其他免疫抑制剂分子)使用本发明抗体治疗的具体病症包括：获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、获得性脾萎缩、急性前葡萄膜炎、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、急性痛风性关节炎、急性坏死性出血性脑白质炎、急性或慢性窦炎、急性化脓性脑膜炎(或其他中枢神经系统炎性病症)、急性严重炎症、阿狄森氏病(Addison’sdisease)、肾上腺炎、成人发作型糖尿病(II型糖尿病)、成人发作型特发性甲状旁腺机能减退(AOIH)、无γ球蛋白血症、粒细胞缺乏症、血管病，包括血管炎，任选地大血管血管炎，任选地风湿性多肌痛和巨细胞(高安氏(Takayasu’s))关节炎、变应性病症、变应性接触性皮炎、变应性皮炎、变应性肉芽肿性血管炎、变应性超敏性病症、变应性神经炎、变应性反应、斑秃、全秃、阿尔波特氏综合征(Alport’s syndrome)、肺泡炎(任选变应性肺泡炎或纤维性肺泡炎)、阿尔茨海默氏病、淀粉样变性、肌萎缩性侧索硬化(ALS；路格里克氏病(LouGehrig’s disease))、嗜酸性粒细胞相关障碍(任选嗜酸性粒细胞增多)、过敏症、僵直性脊椎炎、血管扩张、抗体介导的肾炎、抗GBM/抗TBM肾炎、抗原-抗体复合物介导的疾病、抗肾小球基底膜疾病、抗磷脂抗体综合征、抗磷脂综合征(APS)、口疮、口疮性口炎、再生障碍性贫血、心律不齐、动脉硬化、动脉硬化性病症、关节炎(任选类风湿性关节炎诸如急性关节炎或慢性类风湿性关节炎、慢性进行性关节炎、变形性关节炎)、蛔虫病、曲霉肿、含有嗜酸性粒细胞的肉芽肿、曲霉病、无精子发生(aspermiogenese)、哮喘(任选支气管哮喘(asthmabronchiale)、支气管哮喘(bronchial asthma)或自身免疫哮喘)、共济失调性毛细血管扩张症、运动失调性硬化、动脉粥样硬化、自闭症、自身免疫性血管性水肿、自身免疫再生障碍性贫血、自身免疫性萎缩性胃炎、自身免疫性糖尿病、睾丸和卵巢的自身免疫性疾病(包括自身免疫睾丸炎和卵巢炎)、与胶原性疾病相关的自身免疫障碍、自身免疫性自主神经异常(autoimmune dysautonomia)、自身免疫性耳病(任选自身免疫性内耳病(AGED))、自身免疫性内分泌疾病(包括甲状腺炎诸如自身免疫性甲状腺炎)、自身免疫性肠病综合征、自身免疫性腺衰竭(autoimmune gonadal failure)、自身免疫性听觉损失、自身免疫性溶血、自身免疫性肝炎、自身免疫性血液学障碍、自身免疫性高脂血症、自身免疫性免疫缺陷、自身免疫性内耳病(AIED)、自身免疫心肌炎、自身免疫嗜中性白细胞减少症、自身免疫胰腺炎、自身免疫多内分泌病变、I型自身免疫多腺性综合征、自身免疫视网膜病变、自身免疫血小板减少性紫癜(ATP)、自身免疫甲状腺疾病、自身免疫性荨麻疹、自身免疫介导的胃肠疾病、轴突和神经元神经病变、巴洛病(Balo disease)、贝塞特氏病(Behcet's disease)、良性家族性和缺血再灌注损伤、良性淋巴细胞性脉管炎、伯杰氏病(Berger’s disease)(IgA肾病变)、养鸟人肺病(bird-fancier’s lung)、失明、伯克氏病(Boeck’s disease)、闭塞性细支气管炎(非移植)vs NSIP、支气管炎、支气管肺炎曲霉病、布鲁顿氏综合征(Bruton’ssyndrome)、大疱性类天疱疮、卡普兰氏综合征(Caplan’s syndrome)、心肌病变、心血管性缺血、卡斯尔曼氏综合征(Castleman’s syndrome)、乳糜泻疾病(Celiac disease)、乳糜泻(celiac sprue)(麸质肠病)、大脑变性、脑缺血和伴随血管化的疾病、查加斯病(Chagasdisease)、通道病变(任选癫痫、CNS的通道病变)、脉络膜视网膜炎、脉络膜炎、自身免疫性血液学障碍、慢性活动性肝炎或自身免疫性慢性活动性肝炎、慢性接触性皮炎、慢性嗜酸性粒细胞性肺炎、慢性疲劳综合征、慢性肝炎、慢性超敏性肺炎、慢性炎性关节炎、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病变(CIDP)、慢性难治炎症、慢性粘膜皮肤念珠菌病、慢性神经病变(任选IgM多发性神经病变或IgM介导的神经病变)、慢性阻塞性气道疾病、慢性肺炎性疾病、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、慢性甲状腺炎(桥本氏甲状腺炎(Hashimoto’sthyroiditis))或亚急性甲状腺炎、车格-施特劳斯综合征、瘢痕性类天疱疮/良性粘膜类天疱疮、CNS炎性障碍、CNS血管炎、腹腔疾病、柯根氏综合征(Cogan’ssyndrome)、冷凝集素疾病、息肉状结肠炎、结肠炎诸如溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)、溃疡性结肠炎(colitis ulcerosa)、胶原性结肠炎，涉及T细胞浸润和慢性炎性反应的病症、先天性心脏传导阻滞、先天性风疹感染、库姆斯阳性贫血(Coombs positive anemia)、冠状动脉疾病、柯萨奇心肌炎(Coxsackie myocarditis)、CREST综合征(钙质沉着、雷诺氏现象)、克罗恩氏病、冷球蛋白血症、库兴氏综合征(Cushing’s syndrome)、睫状体炎(任选慢性睫状体炎、异时睫状体炎、虹膜睫状体炎或富克氏睫状体炎(Fuch’s cyclitis))、囊性纤维化、细胞因子诱导的毒性、耳聋、退变性关节炎、脱髓鞘性疾病(任选自身免疫脱髓鞘性疾病、脱髓鞘性神经病变)、登革热、疱疹样皮炎和异位性皮炎、皮炎(包括接触性皮炎)、皮肌炎、伴有急性炎性组分的皮肤病、德维克氏病(Devic’s disease)(视神经脊髓炎)、糖尿病性大动脉病症、糖尿病性肾病变、糖尿病性视网膜病变、戴阿蒙布粒凡贫血(Diamond Blackfan anemia)、弥漫性间质性肺纤维化、扩张心肌病变、盘状狼疮、涉及白细胞渗出的疾病、德雷斯勒氏综合征(Dressier’s syndrome)、迪皮特朗氏挛缩(Dupuytren’s contracture)、埃可病毒感染、湿疹(包括变应性或特应性湿疹)、脑炎诸如拉斯穆森氏脑炎(Rasmussen’sencephalitis)和边缘和/或脑干脑炎、脑脊髓炎(任选变应性脑脊髓炎(allergicencephalomyelitis)或变应性脑脊髓炎(encephalomyelitis allergica)和实验性变应性脑脊髓炎(EAE))、动脉内增生、心内膜炎、内分泌眼病、子宫内膜异位、心内膜心肌纤维化、晶状体蛋白过敏性眼内炎(enophthalmia phacoanaphylactica)、眼内炎、变应性肠炎、嗜酸粒细胞增多-肌痛综合征、嗜酸性筋膜炎、流行性角膜结膜炎、后天性大疱性表皮松解(EBA)、巩膜外层、巩膜外层炎、EB病毒(Epstein-Barr virus)感染、持久性隆起性红斑(erythema elevatum et diutinum)、多形性红斑、麻风结节性红斑、结节性红斑、胎儿成红细胞增多、食道运动功能障碍、原发性混合冷球蛋白血症(Essential mixedcryoglobulinemia)、筛骨炎(ethmoid)、埃文氏综合征(Evan’s syndrome)、实验性变应性脑脊髓炎(EAE)、因子VIII缺乏症、农民肺、风湿热、费尔提氏综合征(Felty’s syndrome)、纤维肌痛、纤维性肺泡炎、丝虫病、局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)、食物中毒、额叶萎缩、胃萎缩、巨细胞关节炎(颞叶关节炎)、巨细胞性肝炎、巨细胞多肌痛、肾小球肾炎、伴有和不伴有肾病综合征的肾小球性肾炎(GN)诸如慢性或急性肾小球性肾炎(如原发性GN)、古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture’s syndrome)、痛风性关节炎、粒细胞输注相关的综合征、肉芽肿病(包括类淋巴瘤肉芽肿病、肉芽肿病伴多血管炎(GPA)、肉芽肿性葡萄膜炎)、格雷福斯氏病(Grave’sdisease)、格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome)、滴状牛皮癣、阵发性血红蛋白尿、哈曼-里奇氏病(Hamman-Rich’s disease)、桥本氏病、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、血色素沉着病、溶血性贫血或免疫性溶血性贫血(包括自身免疫溶血性贫血(AIHA)、溶血性贫血)、甲型血友病、亨诺克-舍恩来因紫癜(
Figure BDA0002570801830000631
purpura)、妊娠疱疹、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、痛觉过敏、低γ球蛋白血症、性腺功能低下、甲状旁腺机能减退、特发性尿崩症、特发性面神经麻痹、特发性甲状腺功能不足、特发性IgA肾病变、特发性膜性GN或特发性膜性肾病变、特发性肾炎综合征、特发性肺纤维化、特发性口炎性腹泻、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病变、IgE介导的疾病(任选过敏反应(anaphylaxis)和变应性或特应性鼻炎)、IgG4相关的硬化性病、区域性回肠炎(ileitisregionalis)、免疫复合物性肾炎、与细胞因子和T淋巴细胞介导的急性和迟发性超敏反应、免疫介导的GN、免疫调节性脂蛋白相关的免疫反应(包括成人或急性呼吸窘迫综合征(ARDS))、包涵体肌炎、感染性关节炎、归因于抗精子抗体的不育症、全部或部分葡萄膜的炎症、炎性肠病(IBD)、炎性过度增生性皮肤疾病、炎性肌病变、胰岛素依赖性糖尿病(1型)、胰岛炎、间质性膀胱炎、间质性肺病、间质性肺纤维化、虹膜炎、缺血性再灌注障碍、关节炎症、青少年关节炎、青少年皮肌炎、青少年糖尿病、青少年发作型(I型)糖尿病(包括儿科胰岛素依赖性糖尿病(IDDM))、青少年发作型类风湿性关节炎、川崎综合征(Kawasaki syndrome)、干燥性角膜结膜炎、锥虫病(kypanosomiasis)、兰伯特-伊顿综合征(Lambert-Eatonsyndrome)、利什曼病(leishmaniasis)、麻风病、白细胞减少、白细胞粘附缺乏症、白细胞破裂性血管炎、白血球减少症、扁平苔癣(lichen planus)、硬化性苔癣、木样结膜炎、线性IgA皮肤病、线性IgA疾病(LAD)、吕弗勒氏综合征(Loffler’s syndrome)、狼疮样肝炎、狼疮(包括肾炎、脑炎、儿科狼疮、非肾性狼疮、肾外狼疮、盘状狼疮、脱发性)、狼疮(SLE)、播散性红斑狼疮、莱姆关节炎(Lyme arthritis)、莱姆病、淋巴性间质性肺炎、疟疾、男性和女性自身免疫性不育症、上颌血管血管炎、中等血管血管炎(包括川崎氏病和多发性结节性动脉炎)、膜或膜性增生性GN(MPGN)(包括I型和II型以及快速进行性GN、膜性GN(膜性肾病变))、美尼尔氏病(Meniere’s disease)、脑膜炎、显微性结肠炎、显微性多血管炎、偏头痛、微小变化肾病变、混合结缔组织疾病(MCTD)、传染性单核细胞增多症(mononucleosis infectiosa)、莫伦氏溃疡(Mooren’s ulcer)、慕夏-哈伯曼病(Mucha-Habermann disease)、多灶性运动神经病变、多内分泌腺衰竭、多器官损伤综合征诸如继发于败血病、创伤或出血的那些)、多器官损伤综合征、多发性硬化症(MS)诸如脊髓-眼MS、多发性硬化症、腮腺炎、肌肉病症、重症肌无力诸如胸腺瘤相关的重症肌无力、重症肌无力、心肌炎、肌炎、嗜睡病、坏死性小肠结肠炎和透壁性结肠炎以及自身免疫炎性肠病、坏死性血管炎、皮肤血管炎或超敏性血管炎、新生儿狼疮综合征(NLE)、肾变病、肾病综合征、神经疾病、视神经脊髓炎(德维克氏病(Devic's))、视神经脊髓炎、神经性肌强直、嗜中性白细胞减少症、非癌性淋巴细胞增多、非肉芽肿性葡萄膜炎、非恶性胸腺瘤、眼和眼眶炎性病症、眼瘢痕性类天疱疮、卵巢炎、交感性眼炎(ophthalmia symphatica)、斜视眼阵挛肌阵挛综合征(OMS)、斜视眼阵挛或斜视眼阵挛肌阵挛综合征(OMS)和感觉神经病变、视神经炎、肉芽肿性睾丸炎(orchitisgranulomatosa)、骨关节炎、复发性风湿病、胰腺炎、全血细胞减少症、PANDAS(与链球菌相关的儿科自身免疫性神经精神性障碍)、副肿瘤性小脑变性、副肿瘤综合征、副肿瘤综合征(包括神经副肿瘤综合征，任选兰伯特-伊顿肌无力综合征或伊顿-兰伯特综合征)、寄生虫性疾病诸如利什曼原虫病、阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)、帕里龙伯格综合征(ParryRomberg syndrome)、扁平部睫状体炎(外周葡萄膜炎)、帕森尼奇-特纳综合征(Parsonnage-Turner syndrome)、细小病毒感染、类天疱疮诸如大疱性类天疱疮和皮肤类天疱疮、天疱疮(包括寻常天疱疮)、红斑性天疱疮、落叶状天疱疮、天疱疮粘膜类天疱疮、天疱疮、消化性溃疡、周期性麻痹、外周神经病变、静脉周脑脊髓炎、恶性贫血(perniciousanemia)(恶性贫血(anemia perniciosa))、恶性贫血、晶状体抗原性葡萄膜炎、肺变硬、POEMS综合征、I、II和III型多发性结节性动脉炎、慢性原发性多发性关节炎、多软骨炎(如难治性或复发的多软骨炎)、多内分泌腺自身免疫性疾病、多内分泌腺衰竭、多腺性综合征(任选自身免疫多腺性综合征(或多腺性内分泌病变综合征))、风湿性多肌痛、多发性肌炎、多发性肌炎/皮肌炎、多发性神经病变、急性多神经根炎(polyradiculitis acuta)、心切开术后综合征、后葡萄膜炎或自身免疫性葡萄膜炎、心肌梗塞后综合征、心包切开术后综合征、链球菌感染后肾炎、疫苗接种后综合征、早老性痴呆、原发性胆汁性硬化、原发性甲状腺功能不足、原发性特发性粘液性水肿、原发性淋巴细胞增多(其包括单克隆B细胞淋巴细胞增多)、任选良性单克隆γ球蛋白病和意义未确定的单克隆γ球蛋白病，MGUS、原发性粘液性水肿、原发性进行性MS(PPMS)和复发缓解性MS(RRMS)、原发性硬化性胆管炎、孕酮皮炎、进行性全身性硬化、增生性关节炎、牛皮癣诸如斑块牛皮癣、牛皮癣、牛皮癣性关节炎)、肺泡蛋白沉着病、肺浸润嗜酸粒细胞增多、纯红细胞贫血或再生障碍(PRCA)、纯红细胞再生障碍、脓性或非脓性窦炎、脓疱性牛皮癣和指甲牛皮癣、肾盂炎、坏疽性脓皮病、奎尔万氏甲状腺炎(Quervain’s thyroiditis)、雷诺氏现象、反应性关节炎、反复流产、血压反应降低、反射交感性营养不良、难治性口炎性腹泻、莱特尔氏病(Reiter’sdisease)或综合征、复发性多软骨炎、心肌或其他组织的再灌注损伤、再灌注损伤、呼吸窘迫综合征、多动腿综合征、视网膜自身免疫、腹膜后纤维化、雷诺氏综合征(Reynaud’s syndrome)、风湿性疾病、风湿热、风湿病、类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、风疹病毒感染、桑普特氏综合征(Sampter’ssyndrome)、结节病、血吸虫病、施密特综合征(Schmidt syndrome)、SCID和艾伯斯坦-巴尔病毒相关的疾病、巩膜病、巩膜炎、指硬皮病、硬皮病(任选全身性硬皮病)、硬化性胆管炎、播散性硬化(sclerosis disseminata)、硬化诸如全身性硬化症、感觉神经性听力损失、血清反应阴性脊椎关节炎、席汉氏综合征(Sheehan’s syndrome)、舒尔曼氏综合征(Shulman’s syndrome)、硅肺病、休格连氏综合征(
Figure BDA0002570801830000641
syndrome)、精子和睾丸自身免疫、蝶窦炎、史蒂文斯-约翰逊综合症(Stevens-Johnson syndrome)、僵人(stiff-man/stiff-person)综合征、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、亚急性皮肤红斑狼疮、突发性耳聋、苏萨克氏综合征(Susac’s syndrome)、西登哈姆氏舞蹈病(Sydenham’s chorea)、交感性眼炎、全身性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)或全身性红斑狼疮(systemic lupuserythematodes)、皮肤SLE、全身性坏死性脉管炎、ANCA相关的血管炎(任选车格-施特劳斯血管炎或综合征(CSS))、脊髓痨(tabes dorsalis)、高安氏动脉炎、毛细血管扩张、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、闭塞性血栓性脉管炎(thromboangiitis ubiterans)、血小板减少症(包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和自身免疫或免疫介导的血小板减少症，诸如特发性血小板减少性紫癜(ITP)，包括慢性或急性ITP、血小板减少性紫癜(TTP))、甲状腺毒症、组织损伤、托洛萨-亨特综合征(Tolosa-Hunt syndrome)、中毒性表皮坏死溶解、中毒性休克综合征、输血反应、婴儿期短暂低γ球蛋白血症、横贯性脊髓炎、横穿脊髓炎(traversemyelitis)、热带性肺嗜酸粒细胞增多、结核病、溃疡性结肠炎、未分化结缔组织疾病(UCTD)、荨麻疹(任选慢性变应性荨麻疹和慢性特发性荨麻疹，包括慢性自身免疫性荨麻疹)、葡萄膜炎、前葡萄膜炎、葡萄膜视网膜炎、心瓣炎、血管功能异常、血管炎、脊椎关节炎、水疱大疱性皮肤病、白癜风、韦格纳氏肉芽肿病(肉芽肿病伴多血管炎(GPA))、维斯科特-奥尔德里奇综合症(Wiskott-Aldrich syndrome)或X染色体连锁的高IgM综合征。
应该理解的是，本文鉴定的疾病病症旨在是示例性的而非穷举性的。
根据至少一些实施方案，如本文所述的抗MCT1抗体、片段、其缀合物、或包含其的药物组合物，功能是降低MCT1介导的乳酸转运，可用于治疗免疫系统相关疾病。
可选地，免疫系统相关疾病包含免疫相关病症、本文所列举的自身免疫性疾病、狼疮、移植排斥和移植物抗宿主病和/或用于阻断活化的T细胞和B细胞、本文所列举的免疫相关疾病和/或用于免疫疗法(抑制免疫刺激)。
可选地，免疫病症选自自身免疫疾病、移植排斥、炎症性疾病、变应性病症或移植物抗宿主病。在一个特定的实施方案中，本发明的抗MCT1抗体可用于治疗狼疮。在一个实施方案中，本发明的抗MCT1抗体可用于治疗移植物抗宿主病(GVHD)。在另一个实施方案中，本发明的抗MCT1抗体可用于治疗移植排斥。在另一个实施方案中，本发明的抗MCT1抗体可用于治疗I型糖尿病。在一个实施方案中，本发明的抗MCT1抗体可用于治疗II型糖尿病。在另一个实施方案中，本发明的抗MCT1抗体可用于治疗肥胖症。
在一个特定的实施方案中，MCT1 Ab1可用于治疗狼疮。在一个实施方案中，MCT1Ab1可用于治疗移植物抗宿主病(GVHD)。在另一个实施方案中，MCT1 Ab1可用于治疗移植排斥。仍然在另一个实施方案中，MCT1 Ab1可用于治疗I型糖尿病。在一个实施方案中，MCT1Ab1可用于治疗II型糖尿病。在另一个实施方案中，MCT1 Ab1可用于治疗肥胖症。同样地，在这些实施方案的每一个中，可以使用包含MCT1 Ab1的一个或多个CDR的变体或融合蛋白。
可选地，该治疗与另一种对治疗免疫相关疾病有用的部分组合，例如，二甲双胍。
因而，使用本发明抗体的系统性红斑狼疮的治疗，可与例如任何已知的治疗系统性红斑狼疮(可选地如本文所述)的治疗剂或方法相结合。同样，使用本发明抗体的GVHD治疗可以与例如任何已知的治疗GVHD(可选地如本文所述)的治疗剂或方法相结合。使用本发明至少一些实施方案的活性剂的多发性硬化症治疗，可以与例如任何已知的治疗多发性硬化症(可选地如本文所述)的治疗剂或方法相结合。类似地，使用本发明抗体治疗类风湿性关节炎或其他关节炎病症，可与例如任何已知的治疗类风湿性关节炎的(可选地如本文所述)治疗剂或方法相结合。此外，使用本发明抗体治疗1型糖尿病可以与例如任何已知的治疗1型糖尿病的(可选地如本文所述)治疗剂或方法相结合。使用本发明抗体治疗银屑病可以与例如任何已知的治疗银屑病的(可选地如本文所述)治疗剂或方法相结合。
在上述疗法中，例如，患有其中一种以上提及的或其他自身免疫性病症或炎性病症的受试者将被施用根据本发明的本文公开的抗MCT1抗体或抗原结合片段，所述抗体抑制活化的T细胞和/或B细胞和/或参与疾病病理的促炎细胞因子的产生，由此预防或改善疾病症状，并且潜在导致疾病缓解延长，例如由于诱导了可引发T细胞耐受性或延长的免疫抑制的Treg。
根据本发明的至少一些实施方案，如本文所述的治疗剂和/或含有其的药物组合物可作为唯一活性成分施用或在免疫调节方案中连同其他药物或其他抗炎剂一起施用，例如用于治疗或预防同种异体移植物或异种移植物急性或慢性排斥或炎性病症或自身免疫性病症，或用于诱导耐受性。
癌症的治疗
可治疗的癌症包括未血管化的肿瘤，或尚未实质上血管化的肿瘤，以及血管化的肿瘤。癌症可以包括非实体肿瘤(如血液学肿瘤，例如，白血病和淋巴瘤)，或可以包括实体肿瘤。用本发明的抗体治疗的癌症类型包括但不限于癌、母细胞瘤和肉瘤，以及某些白血病或淋巴样恶性肿瘤、良性和恶性肿瘤，以及恶性肿瘤例如肉瘤、癌瘤和黑色素瘤。成人肿瘤/癌症和儿童肿瘤/癌症也包括在内。
血液癌症是血液或骨髓的癌症。血液学(或造血性)癌症的例子包括白血病，包括急性白血病(诸如急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性髓系白血病，和成髓细胞性、早幼粒细胞性、髓单核细胞性、单核细胞性白血病、和红白血病)、慢性白血病(诸如慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性髓系白血病，和慢性淋巴细胞白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金氏病、非霍奇金淋巴瘤(惰性和高级别形式)、多发性骨髓瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和脊髓发育不良。
实体瘤是组织的异常肿块，通常不包含囊肿或液体区。实体瘤可以是良性或恶性的。不同类型的实体瘤根据形成它们的细胞类型命名(如肉瘤、癌瘤和淋巴瘤)。实体肿瘤的例子，诸如肉瘤和癌瘤，包括纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤，和其他肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、淋巴恶性肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝细胞癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髓样癌、甲状腺乳头状癌、嗜铬细胞瘤、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、肾母细胞瘤(Wilms’tumor)、宫颈癌、睾丸肿瘤、精原细胞瘤、膀胱癌、黑色素瘤、中枢神经系统肿瘤(诸如胶质瘤(如脑干胶质瘤和混合性胶质瘤)、胶质母细胞瘤(又称多形性胶质母细胞瘤)、星形细胞瘤、中枢神经系统淋巴瘤、生殖细胞瘤、髓母细胞瘤、神经鞘瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、menangioma、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤及脑转移瘤)。
优选地，本发明的抗体用于治疗癌症，其中肿瘤细胞是MCT1表达阳性的。一般来说，MCT1阳性的肿瘤细胞可以通过已知的方法进行鉴定。例如，可以使用本发明的抗体经由免疫荧光或流式细胞术鉴定肿瘤细胞上的MCT1表达。可替代地，MCT1的表达可以通过观察本发明抗体对靶细胞的抑制作用而功能性地测定。
活检是从个体中取出组织和/或细胞。这种取出可以是为了收集个体的组织和/或细胞，以便对取出的组织和/或细胞进行实验。这种实验可以包括确定个体是否具有和/或正患有某种病症或疾病状态的实验。该病症或疾病可以是例如癌症。关于检测宿主中表达MCT1的肿瘤细胞的存在，包含宿主细胞的样品可以是包含全细胞、其裂解物或全细胞裂解物的一部分(例如细胞核或细胞质部分、全蛋白部分或核酸部分)的样品。如果样品包含全细胞，则细胞可以是宿主的任何细胞，例如，任何器官或组织的细胞，包括血细胞或内皮细胞。
治疗其他MCT1相关病症，例如EIHI
本发明的抗体和抗体片段还可用于治疗、预防或诊断涉及MCT1在健康或病变细胞中表达的任何其它病症、障碍或疾病。例如，本发明还考虑治疗或预防受试者中EIHI的方法，该方法包含施用根据本发明的抗体或抗体片段。
施用方式
本发明的组合物可根据所需的局部或全身治疗以多种方式施用。
一般来说，施用可以是局部、胃肠外或肠内施用。
本发明的组合物通常适合于胃肠外施用。如本文所使用的，药物组合物的"胃肠外施用"包括任何如下给药途径，其特征是物理性地破坏受试者的组织，并通过组织中的破损处施用，从而通常导致直接施用进入血流、进入肌肉或进入内部器官。胃肠外施用因而包括但不限于通过注射组合物、通过手术切口应用组合物、通过穿透组织的非手术创口应用组合物等等方式，施用组合物。特别是，考虑胃肠外施用包括但不限于皮下、腹膜内、肌肉内、胸骨内、静脉内、动脉内、鞘内、脑室内、尿道内、颅内、瘤内、滑膜内注射或输液；以及肾透析输注技术。在一个优选的实施方案中，本发明组合物的胃肠外施用包含皮下或腹膜内施用。
适合于胃肠外施用的药物组合物的制剂通常包含活性成分联合药学上可接受的载体，如无菌水或无菌等渗盐水。这种制剂可以以适合推注施用或持续施用的形式制备、包装或销售。可注射制剂可以以单位剂量形式制备、包装或销售，诸如安瓿或含防腐剂的多剂量容器。用于胃肠外施用的制剂包括但不限于悬浮剂、溶液、油性或水性介质中的乳剂、糊剂等。此类制剂可进一步包含一种或多种额外成分，包括但不限于悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于胃肠外施用的制剂的一个实施方案中，活性成分以干燥(即粉剂或颗粒剂)形式提供，以用于使用合适的媒介物(例如无菌无热原水)复原，之后肠外施用复原的组合物。胃肠外制剂还包括水溶液，其可含有赋形剂，诸如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选地达到pH为3至9)，但是，针对一些应用，它们可更合适地配制成无菌非水溶液或作为干燥的形式有待与合适的媒介物诸如无菌无热原水一起使用。示例性胃肠外施用形式包括在无菌水溶液中的溶液或混悬液，例如丙二醇水溶液或右旋糖溶液。如果希望，此类剂型可以合适地缓冲。有用的其他胃肠外可施用的制剂包括，包含微晶形式的活性成分的那些制剂或脂质体制备物形式的那些制剂。用于胃肠外施用的制剂可被配制成速释和/或调节释放。调节释放制剂包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控制释放、靶向释放和程序化释放。
术语“口服的”、“肠内的”、“肠内地”、“口服地”、“非胃肠外的”、“非胃肠外地”等，是指通过沿着消化道的途径或方式向个体施用化合物或组合物。组合物施用的“口服”途径的实例包括，但不限于从口腔吞咽液体或固体形式的组合物，通过鼻空肠管或胃造口术管施用组合物，十二指肠内施用组合物，以及直肠施用，例如使用栓剂用于消化道的下肠道。
优选地，包含分离的抗MCT1抗体或抗体片段的制剂组合物适合于经由注射施用。
用于局部施用的药物组合物和制剂可包括透皮贴剂、软膏、洗剂、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体、半固体、单相组合物、多相组合物(例如，水包油型、油包水型)、泡沫、微海绵、脂质体、纳米乳剂、气溶胶泡沫、聚合物、富勒烯和粉剂。常规的药物载体、水性、粉末性或油性基、增稠剂等可是必要的或希望的。
用于口服施用的组合物和制剂包括粉剂或颗粒剂、在水或非水性介质中的混悬液或溶液、胶囊、囊剂或片剂。增稠剂、调味剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或粘合剂可以是希望的。
用于胃肠外、鞘内或心室内施用的组合物和制剂可包括无菌水溶液，所述无菌水溶液还可包含缓冲剂、稀释剂和其他合适的添加剂，诸如但不限于渗透促进剂、carder化合物和其他药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明的药物组合物包括但不限于溶液、乳剂和含脂质体的制剂。这些组合物可从各种组分中生成，所述组分包括但不限于预制液体、自乳化固体和自乳化半固体。
可方便地以单位剂型给出的本发明药物制剂可根据制药工业中熟知的常规技术来制备。此类技术包括使活性成分与药物载体或赋形剂结合的步骤。通常，通过使活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀且密切地结合，并且然后，如果必要，使产物成形来制备制剂。
本发明的组合物可被配制成许多可能的剂型中的任何一种，诸如但不限于片剂、胶囊、液体糖浆、软凝胶、栓剂、气溶胶和灌肠剂。本发明的组合物还可被配制成水性、非水性或混合介质中的混悬液。水性混悬液还可包含增加混悬液粘度的物质，包括例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖。混悬液还可包含稳定剂。
在本发明的一个实施方案中，药物组合物可被配制为泡沫并作为泡沫使用。药物泡沫包括诸如但不限于乳剂、微乳剂、乳膏、果冻和脂质体的制剂。虽然本质上基本类似，但这些制剂在组分和最终产品的稠度上有所不同。在细胞水平上增强寡核苷酸摄取的试剂也可加入到本发明的药物组合物和其他组合物中。例如，阳离子脂质，诸如lipofectin(美国专利号5,705,188)、阳离子甘油衍生物、和聚阳离子分子，诸如聚赖氨酸(WO 97/30731)，也增强寡核苷酸的细胞摄取。
本发明的组合物可另外地包含药物组合物中常规存在的其他辅料组分。因此，例如，组合物可包含另外的、相容的药学活性材料，诸如止痒剂、收敛剂、局部麻醉剂或抗炎剂，或可包含有用于物理配制本发明组合物的各种剂型的另外材料，诸如染料、调味剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、增稠剂和稳定剂。然而，此类材料在加入时不应该过度干扰本发明组合物的组分的生物活性。制剂可以是灭菌的，并且如果希望，与助剂混合，例如润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂、调味剂和/或芳香物质等，所述助剂不会与制剂的核酸有害地相互作用。
包含抗MCT1抗体或其抗原结合片段的制剂可包括药学上可接受的赋形剂。包括在制剂中的赋形剂将具有不同的目的，取决于例如抗体和施用方式。一般使用的赋形剂的例子包括但不限于：生理盐水、缓冲生理盐水、右旋糖、注射用水、甘油、乙醇及其组合、稳定剂、增溶剂和表面活性剂、缓冲剂和防腐剂、张性剂、填充剂和润滑剂。含有抗MCT1抗体的制剂通常将在不含任何非人成分，诸如动物血清(例如牛血清白蛋白)的情况下制备和培养。
制剂或组合物还可以含有一种以上对正在用结合分子或细胞治疗的特定适应症、疾病或病症有用的活性成分，例如，那些具有与结合分子或细胞互补的活性的成分，其中各自的活性不会相互产生不利影响。这样的活性成分以对预期目的有效的量适当地存在于组合物中。因此，在一些实施方案中，药物组合物还包括其他的药学活性剂或药物，诸如化疗剂，例如，天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春花碱、长春新碱等。在一些实施方案中，药学活性剂或药物可以包含免疫检查点抑制剂，例如，靶向PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、CTLA4、KIR、CD244、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、TIM3和/或A2aR的药物。这些抑制剂的例子包括但不限于pidilizumab、纳武单抗、pembrolizumab、阿替利珠单抗、MDX-1105、BMS-936559、MEDI4736、MPDL3280A、MSB0010718C、tremelimumab和ipilimumab，它们可以单独或与其他药物(例如GM-CSF)联合施用。
抗体可与其他治疗剂联合，其可在相同或不同的组合物中、在相同或不同的时间以及以任一顺序施用。例如，本发明的抗体可以在包括施用PD-1或PD-L1激动剂、CTLA4-lg、细胞因子、细胞因子激动剂或拮抗剂或另一种受体激动剂或拮抗剂的治疗方案中施用。
药物组合物在某些方面可以采用时间释放、延迟释放和持续释放递送系统，使得组合物的递送发生在致敏要治疗的部位之前，并且有足够的时间来引起该部位的致敏。许多类型的释放递送系统是可用和已知的。这种系统可以避免组合物的重复施用，从而增加受试者和医生的便利性。
剂量
在一些实施方案中，药物组合物含有抗MCT1抗体或抗体片段，其量为治疗或预防疾病或病症的有效量，例如治疗有效或预防有效的量。在一些实施方案中，通过定期评估治疗对象来监测治疗或预防效果。对于几天或更长时间的重复施用，根据病症，重复治疗直到疾病症状出现期望的抑制为止。然而，其它剂量方案可能是有用的并且可确定的。可以通过组合物的单次推注施用、组合物的多次推注施用或组合物的持续输液给药来提供期望的剂量。
抗体或抗体片段可以以一个或多个剂量施用。在一些实施方案中，所述有效量的抗体可以作为单剂量施用。在一些实施方案中，所述有效量的抗体可以作为一个以上的剂量在一段时间内施用。施用的时间由管理医生判断，并取决于患者的临床状况。虽然个体需求各不相同，但针对特定疾病或病症，确定给定抗体的有效量的最佳范围是在本领域的技术范围内。有效量是指能提供治疗或预防效果的量。给予的剂量将取决于受者的年龄、健康状况、体重重、并行进行的治疗种类(如果有的话)、治疗的频率和期望效果的性质。在一些实施方案中，有效量的抗体或包含这些抗体的组合物由胃肠外施用。在一些实施方案中，施用可以是静脉施用。在一些实施例中，可以通过直接在疾病部位内注射进行施用。
为了本发明的目的，所施用的本发明抗体的量或剂量应足以在合理的时间范围内对受试者或动物产生治疗或预防响应。例如，本发明抗体的剂量应足以在从施用时间起约2小时或更长时间内，例如约12小时至约24小时或更长时间内与抗原结合，或检测、治疗或预防疾病。在某些实施方案中，时间段可以甚至更长。剂量将由特定抗体的功效和动物(例如，人)的状况以及待治疗的动物(例如，人)的体重确定。
可与载体材料组合以产生单一剂型形式的活性成分的量将根据治疗对象和特定的施用方式而变化。可与载体材料组合以产生单一剂型形式的活性成分的量一般将是产生治疗效果的组合物的量。一般来说，以百分比计算，该量在约0.01％到约99％的活性成分的范围内，例如，从约0.1％到约70％，大多数例如，约1％到约30％的活性成分，与药学上可接受的载体组合。
调整剂量方案以提供最佳的期望响应(例如，治疗响应)。例如，可以施用单次推注量，可以随着时间的推移施用数个分剂量，或者可以根据治疗情形的紧急状况按比例减少或增加剂量。为便于施用和剂量的均匀性，以剂量单位形式配制胃肠外组合物是特别有利的。本文所用的剂量单位形式是指适合作为单位剂量用于待治疗对象的物理上的离散单元；每个单元含有经计算产生期望治疗效果的预定量活性化合物以及所需的药物载体。根据本发明的至少一些实施方案的剂量单位形式的规格依赖于并直接取决于：(a)活性化合物的独特特征和要达到的特定治疗效果，以及(b)本领域将这种活性化合物复配用于治疗个体的敏感性时固有的限制。
对于本文公开的抗MCT1抗体或其抗原结合片段的施用，剂量范围为按宿主体重计约0.0001至100mg/kg、更通常为0.01至5mg/kg。例如，剂量可以是0.3mg/kg体重、1mg/kg体重、3mg/kg体重、5mg/kg体重或10mg/kg体重或在1-10mg/kg的范围内。示例性的治疗方案需要每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每三个月一次或每三至六个月一次施用。根据本发明的至少一些实施方案，本文所公开的抗体的优选剂量方案包括经由静脉施用1mg/kg体重或3mg/kg体重，其中本文所公开的抗体采用以下剂量方案之一：(i)每四周一次，共六剂，然后每三个月一次；(ii)每三周一次；(iii)3mg/kg体重一次，然后每三周一次，每次1mg/kg体重。
在一些方法中，同时施用两种或多种具有不同结合特异性的单克隆抗体，在这种情况下，施用本文所公开的每种抗体的剂量落在所示范围内。本文所公开的抗体通常可以在多种情况下施用。单剂量之间的间隔可以是，例如，每日、每周、每月、每三个月或每年。间隔也可以是不规则的，如通过测量患者中目标抗原的抗体的血液水平来指示。在一些方法中，调整剂量以达到约1-1000μg/ml的血浆抗体浓度，并且在一些方法中约25-300μg/ml。
另外，治疗剂可以作为持续释放制剂施用，在这种情况下需要更少的施用频率。剂量和频率根据治疗剂在患者体内的半衰期而变化。一般来说，人抗体显示出最长的半衰期，其次是人源化抗体、嵌合抗体和非人抗体。融合蛋白的半衰期可能差异很大。根据治疗是预防性的还是治疗性的，施用的剂量和频率可以不同。在预防性应用中，相对较低的剂量以相对不频繁的时间间隔长期施用。有些患者在余生中持续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要相对较高的剂量，以相对较短的时间间隔施用，直到疾病的进展减缓或终止，并且例如，直到患者显示疾病症状的部分或完全改善。此后，可对患者施用预防性方案。
本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以改变，以便针对特定患者、组合物和施用方式获得有效地达到所期望的治疗响应、而不对患者产生毒性的活性成分的量。所选择的剂量水平将取决于各种药代动力学因素，包括所采用的本发明的特定组合物或其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，所采用的特定化合物的排泄率，治疗持续时间，与所采用的特定组合物联合使用的其它药物、化合物和/或材料，接受治疗的患者的年龄、性别、体重、病症、一般健康状况和先前的病史，以及医学领域中公知的类似因素。
在一些实施方案中，抗体作为联合治疗的一部分施用，例如与另一种治疗干预措施，诸如另一种抗体或工程化的细胞或受体或药剂，如细胞毒性或治疗剂，同时或顺序地以任何顺序施用。在一些实施方案中，抗体与一种或多种额外的治疗剂共施用，或与另一种治疗干预措施联用，并且可以同时或顺序地以任何顺序施用。在一些情况下，抗体与另一种治疗共同施用，施用时间上足够接近，使得抗体增强一种或多种额外治疗剂的效果，或者反之亦然。在一些实施方案中，抗体在一种或多种额外治疗剂之前施用。在一些实施例中，抗体在一个或多个额外治疗剂之后施用。
变型形式
本发明的范围内包括本文所述的本发明抗体的功能性部分。术语"功能性部分"在涉及抗体使用时指的是本发明抗体的任何部分或片段，该部分或片段保留了包含它作为一部分的抗体(亲本抗体)的生物活性。功能性部分涵盖，例如，与亲本抗体相比，以相似、相同或更高程度，保留识别靶细胞或检测、治疗或预防疾病的能力的那些抗体部分。参照亲本抗体，功能部分可以包含例如亲本抗体的约10％、25％、30％、50％、68％、80％、90％、95％或更多。
功能性部分可以在该部分的氨基或羧基末端或在两端包含另外的氨基酸，所述另外的氨基酸在亲本抗体的氨基酸序列中不存在。期望地，另外的氨基酸不干扰功能性部分的生物功能，例如识别靶细胞、检测癌症、治疗或预防癌症等。更期望地，与亲本抗体的生物活性相比，另外的氨基酸增强生物活性。
包括在本发明内容的范围内的是本文中描述的本发明的抗体的功能性变体。本文中所用的术语“功能性变体”是指与亲本抗体具有实质上或显著的序列同一性或相似性的抗体、多肽或蛋白质，功能性变体保留该变体的亲本抗体的生物活性。功能性变体涵盖例如本文中所述抗体(亲本抗体)的变体，其与亲本抗体相比在类似程度上、相同程度上或更高程度上保持识别靶细胞的能力。参考亲本抗体，功能性变体可以例如与亲本抗体在氨基酸序列方面具有至少约30％、50％、75％、80％、90％、98％或更高同一性。
功能性变体可以例如包含具有至少一个保守性氨基酸替换的亲本抗体的氨基酸序列。作为替选或补充，功能性变体可以包含具有至少一个非保守性氨基酸替换的亲本抗体的氨基酸序列。在这种情况下，非保守性氨基酸替换优选不干扰或抑制功能性变体的生物活性。非保守性氨基酸替换可增强功能性变体的生物活性，使得与亲本抗体相比，功能性变体的生物活性提高。
本发明抗体的氨基酸取代是例如保守性氨基酸替换。保守性氨基酸替换是本领域已知的，并且包括这样的氨基酸替换，其中一个具有特定物理和/或化学特性的氨基酸交换为另一个具有相同或相似化学或物理特性的氨基酸。例如，保守性氨基酸替换可以是酸性/带负电荷的极性氨基酸替换另一个酸性/带负电荷的极性氨基酸(例如，Asp或Glu)、具有非极性侧链的氨基酸替换另一个具有非极性侧链的氨基酸(例如，Ala、Gly、Val、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Trp、Cys、Val等)、碱性/带正电荷的极性氨基酸替换另一个碱性/带正电荷的极性氨基酸(例如，Lys、His、Arg等)、具有极性侧链的不带电荷氨基酸替换另一个具有极性侧链的不带电荷的氨基酸(例如，Asn、Gln、Ser、Thr、Tyr等)、具有β分支侧链的氨基酸替换另一个具有β分支侧链的氨基酸(例如，Ile、Thr和Val)、具有芳香族侧链的氨基酸替换另一个具有芳香族侧链的氨基酸(例如，His、Phe、Trp和Tyr)，等。
另外，可以基于载体设计在序列中添加或去除氨基酸。
抗体可以基本上由指定的氨基酸序列或本文所述的序列组成，由此其他成分例如其他氨基酸不实质性地改变功能性变体的生物活性。
本发明实施方案的抗体(包括功能性部分和功能性变体)可以具有任意长度，即可以包含任意数目的氨基酸，只要抗体(或其功能性部分或功能性变体)保留其生物活性，例如与抗原特异性结合、在哺乳动物中检测患病细胞、或在哺乳动物中治疗或预防疾病等的能力即可。例如，抗体可以为约50至约5000个氨基酸长，例如长度为50、70、75、100、125、150、175、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或更多个氨基酸。
本发明实施方案的抗体(包括本发明的功能性部分和功能性变体)可以包含替代一个或多多个天然存在氨基酸的合成氨基酸。这样的合成氨基酸是本领域已知的，并且包括例如氨基环己烷羧酸、正亮氨酸、α-氨基正癸酸、高丝氨酸、S-乙酰氨基甲基-半胱氨酸、反式-3-羟脯氨酸和反式-4-羟脯氨酸、4-氨基苯丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、4-羧基苯丙氨酸、β-苯基丝氨酸、β-羟基苯丙氨酸、苯基甘氨酸、α-萘基丙氨酸、环己基丙氨酸、环己基甘氨酸、二氢吲哚-2-羧酸、1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸、氨基丙二酸、氨基丙二酸一酰胺、N’-苄基-N’-甲基-赖氨酸、N’，N’-二苄基-赖氨酸、6-羟赖氨酸、鸟氨酸、-氨基环戊烷羧酸、α-氨基环己烷羧酸、α-氨基环庚烷羧酸、α-(2-氨基-2-降冰片烷)-羧酸、α,γ-二氨基丁酸、α,β-二氨基丙酸、高苯丙氨酸和α-叔丁基甘氨酸。
本发明实施方案的抗体(包括功能性部分和功能性变体)可以被糖基化、酰胺化、羧化、磷酸化、酯化、N-酰化、环化(通过例如二硫桥)，或转化成酸加成盐，和/或任选地二聚或多聚化，或缀合。
本发明实施方案的抗体(包括功能性部分和其功能性变体)可以通过本领域已知的方法获得。抗体可通过任何制备多肽或蛋白质的合适方法来制备。从头合成多肽和蛋白质的合适方法在例如以下的参考文献中描述：Chan等，Fmoc Solid Phase PeptideSynthesis，Oxford University Press，Oxford，United Kingdom，2000；Peptide andProtein Drug Analysis，编辑.Reid，R.，Marcel Dekker，Inc.，2000；Epitope Mapping，编辑.Westwood等，Oxford University Press，Oxford，United Kingdom，2001；以及美国专利号5,449,752。另外，可以使用本文中所述的核酸使用标准重组方法重组产生多肽和蛋白质。参见例如Sambrook et al.，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，3rd ed.，ColdSpring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY 2001；和Ausubel等，Current Protocolsin Molecular Biology，Greene Publishing Associates and John Wiley&Sons，NY，1994。另外，一些抗体(包括其功能性部分和功能性变体)可以从例如植物、细菌、昆虫、哺乳动物(例如，大鼠、人等)的来源分离和/或纯化。分离和纯化的方法是本领域公知的。或者，本文中所述的抗体(包括其功能性部分和功能性变体)可以由公司商业化合成。在这方面，抗体可以是合成的、重组的、分离的和/或经纯化的。
具有本文公开的VH和VL序列的抗体可用于通过修饰VH和/或VL序列或附接上恒定区域而创建新的变体抗体。因此，本发明的变体抗体的结构特征可以用于创建结构相关的、保留本发明抗体的至少一种功能性质(例如与MCT1结合)的变体抗体。例如，如本文所述，一种抗MCT1变体抗体(例如Ab1-Ab95或其突变体之一)的一个或多个CDR区域，可以与已知的框架区域和/或其他CDR重组组合，以创建本发明的其它重组工程化的抗MCT1抗体(例如与MCT1结合的抗体)。工程化方法的起始材料可以是一个或多个本文提供的VH和/或VL序列，或其一个或多个CDR区域。为了创建工程化的抗体，不需要实际制备(即表达为蛋白质)具有本文提供的一个或多个VH和/或VL序列、或其一个或多个CDR区域的抗体。而是，可以将序列中包含的信息用作起始材料以创建自原始序列衍生的"第二代"序列，然后"第二代"序列可以被制备并表达为蛋白质。标准的分子生物学技术可用于制备和表达改变的抗体序列。
由改变的抗体序列(一个或多个)编码的抗体可以保留通过本发明方法和用本文提供的序列产生的抗MCT1抗体的一个、一些或全部功能性质，所述功能性质包括以特定的或更低的KD水平与变体MCT1或变体MCT1缀合物结合，和/或调节免疫细胞活性，和/或选择性地结合到期望的靶细胞，例如，活化的T细胞或B细胞。改变的抗体的功能性质可以使用本领域可获得的和/或本文所述的标准测定法来评估。
可以沿抗MCT1抗体编码序列的全部或部分随机地或选择性地引入突变，并且可以筛选所产生的经修饰的抗MCT1抗体的结合活性和/或其它期望的功能性质。
定义
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。虽然与本文所述的那些类似或等效的方法和材料均可用于本发明中或本发明的测试，但是本文描述了合适的方法和材料。这些材料、方法和实例仅为举例说明性的，并且无意进行限制。与本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学相结合使用的命名法以及其实验室程序和技术在本领域公知且常用。标准技术可用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者治疗。
如本文所使用的，"5'帽"(也称为RNA帽、RNA 7-甲基鸟苷帽或RNA m7G帽)是在转录开始后不久被添加到真核信使RNA的"前部"或5'端的修饰的鸟嘌呤核苷酸。5'帽由与第一个转录的核苷酸连接的端基组成。其存在对核糖体识别以及对抗RNA酶的保护作用至关重要。帽添加与转录偶联，并且以共转录方式出现，从而彼此相互影响。在转录起始后不久，正在合成的mRNA的5'末端被结合于RNA聚合酶的帽合成复合物结合。这种酶促复合物催化mRNA加帽需要的化学反应。合成过程作为多步骤生物化学反应推进。可以修饰加帽部分以调节mRNA的功能，如其稳定性或翻译效率。
如在本文说明书中以及在随后的整个权利要求中使用的，冠词“一个(a、an)”和“这(the)”的含义包括了对复数的提及，除非上下文另有明确规定。
如本文所用，“变应性疾病”在广义上指涉及变态反应的疾病。更具体而言，“变应性疾病”被定义为鉴别到其变应原的疾病，其中暴露于该变应原与病理变化的发生之间存在强相关性，并且其中该病理变化已证明具有免疫学机制。在本文中，免疫学机制意指白细胞显示出对变应原刺激的免疫反应。
术语"同种异基因的"或"供体来源的"是指任何这样的材料，其来自与有待引入所述材料的个体相同物种的不同动物。当两个或更多个体在一个或多个基因座上的基因不相同时，则这两个或更多个体被称作彼此为同种异基因的。在某些方面，来自同一物种的不同个体的同种异基因材料可在基因上充分不相似，从而在抗原性上相互作用。
如本文所用，“氨基酸”在广义上指天然存在的和合成的氨基酸、以及与天然存在的氨基酸以类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸、以及后来经修饰的那些氨基酸(如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸)。氨基酸类似物是指基本化学结构与天然存在的氨基酸相同(即，碳结合至氢、羧基、氨基)并且具有R基团(如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍)的化合物。类似物可具有经修饰的R基团(例如正亮氨酸)或经修饰的肽主链，但仍保留了与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指在结构上不同于氨基酸的一般化学结构，但以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的化合物。
如本文所用，术语"抗体"是指与抗原特异性结合的免疫球蛋白分子。在一个方面，抗原是MCT1。抗体可以是来源于天然来源或重组来源的完整免疫球蛋白，也可以是完整免疫球蛋白的免疫活性部分。该术语在最广泛的意义上使用，包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、单链抗体片段，包括单链可变片段(scFv)、ByTEs、多特异性抗体多肽、diabody、和单域抗体(例如sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。该术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化和/或其他修饰形式，诸如intrabody、peptibody、嵌合抗体、完全人抗体、人源化抗体和异源缀合抗体、多特异性抗体，例如双特异性抗体、diabody、triabody和tetrabody、串联双scFv和串联三scFv。除非另有说明，术语"抗体"应进一步理解为涵盖其功能性抗体片段。该术语还涵盖完整的或全长的抗体，包括任何类或亚类的抗体，包括IgG及其亚类、IgM、IgE、IgA和IgD。
术语"抗原结合片段"或"抗体片段"指完整抗体的一部分，并指完整抗体的抗原决定性可变区域。抗体片段的实例包括但不限于片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、单链抗体片段，包括单链可变片段(scFv)、单域抗体(例如sdAb、sdFv、纳米抗体)片段、diabody以及从抗体片段形成的多特异性抗体。此外，尽管Fv片段的两个结构域(VL和VH)由单独的基因编码，但它们可以利用重组方法通过合成接头连接，使得它们能够作为单个蛋白质链制备，其中VL和VH区配对而形成单价分子(称为单链Fv(scFv))。参见例如Bird等(1988)Science242:423-426；Huston等(1988)ProcNatl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；以及Osbourn等(1998)Nat.Biotechnol.16:778。单链抗体也旨在涵盖在术语抗体的“抗原结合部分”内。也可以将特异性scFv的任何VH和VL序列与人免疫球蛋白恒定区cDNA或基因组序列连接以产生编码完整IgG分子或其他同种型的表达载体。VH和VL也可以利用蛋白质化学或重组DNA技术用于产生免疫球蛋白的Fab、Fv或其他片段。本发明还涵盖其他形式的单链抗体，诸如diabody(双链抗体)。双链抗体是二价的双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单条多肽链上表达，但使用的接头太短，因此不允许同一链上的两个结构域之间配对，从而迫使这些结构域与另一链的互补结构域配对，由此产生两个抗原结合位点。参见例如Holliger等(1993)Proc Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Poljak等(1994)Structure 2:1121-1123。更进一步地，抗体或其抗原结合部分(抗原结合片段、抗体片段、抗体部分)可以是较大免疫粘附分子的一部分，所述免疫粘附分子通过抗体或抗体部分与一种或多种其他蛋白质或肽的共价或非共价缔合而形成。免疫粘附分子的实例包括使用链霉亲和素核心区来制备四聚体scFv分子(Kipriyanov等(1995)Hum.Antibodies Hybridomas 6:93-101)以及使用半胱氨酸残基、标记肽和C端多组氨酸标签来制备二价和生物素化的scFv分子。Kipriyanov等(1994)Mol.Immunol.31:1047-1058。抗体部分，诸如Fab和F(ab’)2片段，可以使用常规技术(诸如分别对完整的抗体进行木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化)从完整抗体制备。此外，如本文所述，可以使用标准的重组DNA技术获得抗体、抗体部分和免疫粘附分子。抗体可以是多克隆抗体、单克隆抗体、异种抗体、同种异体抗体、同基因抗体或它们经修饰的形式，例如人源化抗体、嵌合型抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。
本文所用的"抗体重链"是指，所有的抗体分子在其天然存在的构象形式中存在的两类多肽链中的较大者。
本文中，"抗体轻链"是指所有的抗体分子在其天然存在的构象形式中存在的两类多肽链中的较大者。Kappa和lambda轻链指的是两种主要的抗体轻链同种型。本文所用的术语"合成抗体"是指使用重组DNA技术产生的抗体，例如，如本文所描述的通过噬菌体表达的抗体。该术语也应被解释为意指通过合成编码抗体的DNA分子(该DNA分子表达抗体蛋白)、或合成定义该抗体的氨基酸序列而产生的抗体，其中所述DNA或氨基酸序列已经利用本领域中可获得且公知的合成DNA或氨基酸序列技术获得。
术语"抗原"或"Ag"指的是激发免疫反应的分子，例如，在(体液)自身免疫的情况下的自身抗原或在移植的情况下的同种异体抗原或在变应性疾病症况下的变应原。这种免疫反应可以涉及抗体的产生，或特定免疫功能细胞的活化，或两者兼有。本领域技术人员将理解，任何大分子，包括几乎所有的蛋白质或肽，都可以作为抗原。此外，抗原可以源自重组或基因组DNA。本领域技术人员将理解，包含编码引发免疫反应的蛋白质的核苷酸序列或部分核苷酸序列的任何DNA，因此可以编码"抗原"(如该术语在本文中所使用的)。此外，本领域技术人员将理解，抗原无需仅由基因的全长核苷酸序列编码。易于明了的，本发明包括但不限于，使用一个以上基因的部分核苷酸序列，其中这些核苷酸序列可以以各种组合方式排列，以编码引起期望的免疫反应的多肽。此外，本领域技术人员将理解，抗原可以不需要由"基因"编码。易于明了的，抗原可以是生成的、合成的，或者可以从生物样品获得，或者可以是多肽以外的大分子。这样的生物样品可以包括但不限于组织样品、肿瘤样品、细胞或具有其它生物成分的体液。在一个方面，抗原是MCT1。
如本文所用，“自身免疫”或“自身免疫疾病或病症”泛指，由个体自身组织引起或针对个体自身组织而产生的疾病或病症，或其共分离或表现形式、或由其产生的病症。本文中的自身免疫病症包括炎性或变应性病症，例如，特征在于潜在地与组织破坏相关的针对自身抗原的宿主免疫反应的慢性疾病，诸如类风湿性关节炎。
术语"自体"是指任何这样的材料，所述材料来自之后其将被重新引入的同一个体。
"AZ3965"在本文用于指AZ3965及其具有相同结合亲和力、PK和MCT1/2选择性的类似物。(参考文献.50)
术语"结合"指的是两个分子之间的吸引性相互作用，这种作用带来稳定的缔合，其中两个分子相互紧靠。分子结合的结果有时是形成分子复合物，其中使各组分靠在一起的吸引力一般是非共价的，并因而通常比共价键在能量上较弱。
如本文所用，“癌症”泛指，以异常和不受控制的细胞分裂为特征的任何赘生性疾病(无论是浸润性的还是转移性的)，其中所述细胞分裂导致恶性生长或肿瘤(例如细胞生长不受调节)。本文所用的术语“癌症”或“癌”应理解为涵盖，以引起恶性生长或肿瘤的异常和不受控制的细胞分裂为特征的任何赘生性疾病(无论是浸润性的、非浸润性的还是转移性的)，本文描述了其非限制性实例。这包括哺乳动物中通常表征为不受调节的细胞生长的任何生理状况。癌症的例子包括但不限于：癌瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。这类癌症的更具体的实例包括：鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌或肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种类型的头颈癌，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞性(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞NHL；高级淋巴母细胞性NHL；高级小无核裂细胞NHL；肿块性NHL；套细胞淋巴瘤；艾滋病相关淋巴瘤；和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症)；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞性白血病；多发性骨髓瘤和移植后淋巴增生性障碍(PTLD)。适合于通过本发明治疗的其他癌症包括但不限于：癌瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴性恶性肿瘤。可接受本发明治疗的癌性病症包括表达MCT1的癌症。
如本文所用，“互补决定区”、“高变区”或“CDR”泛指见于抗体轻链或重链可变区中的高变区或互补决定区(CDR)中的一者或多者。参见Kabat等(1987)Sequences ofProteinsof Immunological Interest National Institutes of Health,Bethesda,Md。这些表述包括如Kabat等(1983)在Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Dept.of Health and Human Services中定义的高变区，或抗体3维结构中的高变环。Chothia和Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917。各链中的CDR通过框架区而紧靠在一起，并且与来自另一条链的CDR一起促成抗原结合位点形成。在CDR内，存在被称为选择性决定区(SDR)的选定氨基酸，其是在抗体-抗原相互作用中被CDR使用的关键接触残基。(Kashmiri(2005)Methods 36:25-34).
术语"竞争"，关于抗体如本文所用，是指第一抗体或其抗原结合片段(或部分)与第二抗体或其抗原结合部分以足够相似的结合方式与表位结合，由此使得在第二抗体存在的情况下第一抗体与其同源表位的结合结果，与在没有第二抗体的情况下的第一抗体结合相比，可检测地下降。另一种情形，即在第一抗体存在时第二抗体与其表位的结合也可检测地下降，可以但不是必要发生。也就是说，第一抗体可以抑制第二抗体与它的表位的结合，而该第二抗体不抑制第一抗体与它的相应表位的结合。然而，当每个抗体均可检测地抑制另一个抗体与其同源表位或配体的结合(无论是以相同的、更大的或是更小的程度)时，这些抗体被称为相互"交叉竞争"以结合其相应表位。竞争和交叉竞争的抗体都涵盖在本发明的范围内。无论这种竞争或交叉竞争是通过何种机制发生的(例如，空间位阻、构象改变、或与共同表位或其部分结合)，本领域技术人员基于本文所提供的教导，将理解，这种竞争和/或交叉竞争性抗体是被涵盖的，并且可以用于本文公开的方法。在一些实施方案中，本发明的抗体可以与MCT1Ab1竞争或交叉竞争以结合MCT1。
术语"互补决定区"和"CDR"，与"超变区"或"HVR"同义，是本领域已知的，指抗体可变区内的氨基酸非连续序列，其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。一般来说，每个重链可变区有三个CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，以及每个轻链可变区有三个CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。"框架区"和"FR"是本领域已知的，指重链和轻链可变区域的非CDR部分。一般来说，每个全长重链可变区有四个FR(FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4)，以及每个全长轻链可变区有四个FR(FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4)。
术语"细胞因子"是指参与细胞信号传导的一大类小蛋白。一般来说，它们的释放对周围细胞的行为有一些影响。细胞因子可作为免疫调节剂，参与自分泌信号传导、旁分泌信号传导和/或内分泌信号传导。细胞因子包括趋化因子、干扰素、白细胞介素、淋巴因子和肿瘤坏死因子。细胞因子由广泛多种细胞产生，包括巨噬细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞和肥大细胞等免疫细胞，以及内皮细胞、成纤维细胞和各种基质细胞。"趋化因子"是一个细胞因子家族，一般参与介导趋化作用。
短语"与MCT1的表达相关的疾病"包括但不限于与MCT1的表达相关的疾病或与表达MCT1的细胞相关的病症，包括例如，自身免疫病诸如狼疮；或与表达MCT1的细胞相关的癌性或非癌性适应症。
本文使用的术语"EC50"是指试验化合物，例如抗MCT1抗体或其抗原结合片段的剂量，该剂量在测定中产生所述化合物的最大反应或效果的50％。
“有效量”或"治疗有效量"是指足够预防或治疗个体的疾病、病症或障碍的剂量。对于治疗或预防使用而言有效的量将取决于，例如，被治疗的疾病或障碍的阶段和严重程度，患者的年龄、体重和一般健康状态，以及处方医师的判断。剂量的大小还由所选择的活性、施用方法、施用时间和频率、可能伴随特定活性的施用的任何不良副作用的存在与否、性质和程度，以及所希望的生理效果来决定。本领域的技术人员将理解，多种疾病或障碍可能需要涉及多次施用的长期治疗，可以在每一次或多个轮次的施用中使用发明的抗体。
"表位"或"结合位点"是抗原上与抗原结合性肽(如抗体)特异性结合的部位或区域。蛋白质表位可以包含直接参与结合的氨基酸残基(也称为表位的免疫显性成分)和不直接参与结合的其他氨基酸残基，例如可以被特异性抗原结合肽有效阻断的氨基酸残基(换言之，该氨基酸残基在特异性抗原结合肽的"足迹"内)。本文的术语表位包括在MCT1的任何如下特定区域中的两种类型的氨基酸结合位点，所述区域与抗MCT1抗体特异性结合。MCT1可包含许多不同的表位，其可包括但不限于(1)线性肽抗原决定簇；(2)构象抗原决定簇，其由成熟MCT1构象中位于彼此附近的一个或多个非连续氨基酸组成；以及(3)翻译后抗原决定簇，其全部或部分地由可以共价连接到MCT1蛋白的分子结构组成，例如碳水化合物基团。特别是，术语"表位"包括蛋白质或肽(例如MCT1)中的如下具体残基，其中如由已知和公认的方法如丙氨酸扫描技术所确定的，这些残基参与抗体与该蛋白质或肽的结合。这样的方法在此被示例。
本文的"表达载体"是指这样的DNA载体，其含有便于操纵用于在目标宿主细胞(例如，细菌、昆虫、酵母、植物、两栖动物、爬行动物、禽类或哺乳动物细胞，最通常是酵母或哺乳动物细胞，例如，CHO细胞)内表达外来蛋白的元件。方便的是，首先在细菌宿主，例如大肠杆菌中进行序列的操作和生产用于转化的DNA，并且通常载体将包括便于此类操作的序列，包括细菌复制起点和适当的细菌选择标记。选择标记编码在选择性培养基中生长的转化宿主细胞生存或生长所必需的蛋白质。没有转化含有选择基因的载体的宿主细胞将不能在培养基中存活。典型的选择基因编码的蛋白质：(a)赋予对抗生素或其它毒素的抗性，(b)补充营养缺陷型的缺损，或(c)提供无法从复合培养基中得到的关键营养物质。例如，在Burke,D.,Dawson,D.,&Stearns,T.,Methods in yeast genetics:a Cold Spring HarborLaboratory course manual,Plainview,NY:Cold Spring Harbor Laboratory Press(2000)中，描述了用于转化酵母的示例性载体和方法。用于本发明方法的表达载体可包括酵母或哺乳动物的特定序列，包括用于识别转化宿主株的可选择的营养缺陷型或药物标记。药物标记物还可用于在酵母宿主细胞中扩增载体的拷贝数。
术语"表达"和"产生"在本文同义地使用，并指基因产物的生物合成。这些术语涵盖了将基因转录成RNA。这些术语还涵盖了将RNA翻译成一种或多种多肽，并进一步涵盖所有天然发生的转录后和翻译后修饰。抗体或抗原结合片段的表达/产生可以在细胞的细胞质内，和/或进入细胞外环境，诸如细胞培养物的生长培养基。
术语"Fc受体"和"FcR"描述与抗体的Fc区结合的受体。优选的FcR是天然序列的人FcR。此外，优选的FcR是结合IgG抗体的受体(γ受体)，包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和可选拼接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA("活化受体")和FcγRIIB("抑制受体")，其具有相似的氨基酸序列，主要在其胞质域上有所不同。FcRs在Ravetch和Kinet,Ann.Rev.Immunol.,9:457-92(1991)；Capel等,Immunomethods,4:25-34(1994)；以及de Haas等,J.Lab.Clin.Med.,126:330-41(1995)中综述讨论。"FcR"还包括新生儿受体FcRn，其负责将母体IgG转移给胎儿(Guyer等，J.Immunol.，117:587(1976)；和Kim等，J.Immunol.，24:249(1994))，并且其主要功能是调节和/或延长循环中抗体的半衰期。在所公开的抗MCT1抗体由于表达系统和/或序列的原因而无糖基化的情况下，预计抗体将结合FcRn受体，但不结合(或最低程度地结合)Fcγ受体。
术语"Fc区域"用于定义免疫球蛋白重链的C端区域。"Fc区域"可以是天然序列Fc区域或变体Fc区域。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可能不同，但人IgG重链Fc区通常被定义为从Cys226位置的氨基酸残基，或从Pro230延伸到其羧基末端。Fc区中残基的编号方式是如Kabat的EU索引。Kabat et al,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,5th edition,Bethesda,MD:U.S.Dept.of Health and Human Services,PublicHealth Service,National Institutes of Health(1991)。免疫球蛋白的Fc区一般包括两个恒定区域，即CH2和CH3。
"框架区"或"FR"指抗体的轻链和重链的可变区内的框架区中的一个或多个。(参见Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,4th edition,Bethesda,MD:U.S.Dept.of Health and Human Services,Public Health Service,National Institutes of Health(1987))。这些表达方式包括插入在抗体的轻链和重链的可变区域内CDR之间的那些氨基酸序列区域。
"功能性Fc区"具有天然序列Fc区的至少一个效应子功能。示例性的"效应子功能"包括C1q结合；补体依赖的细胞毒作用("CDC")；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性("ADCC")；吞噬作用；下调细胞表面受体(例如B细胞受体("BCR"))等。这样的效应子功能一般需要Fc区与结合域(例如抗体可变域)结合，并且可以使用本领域已知的用于评价这样的抗体效应子功能的各种测定法进行评估。"天然序列Fc区"包含与自然发现的Fc区的氨基酸序列一致的氨基酸序列。“变体Fc区”包含由于至少一个氨基酸修饰而与天然序列Fc区的氨基酸序列不同的氨基酸序列，但保留天然序列Fc区的至少一个效应子功能。优选的是，与天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区相比，变体Fc区具有至少一个氨基酸取代，例如约一个至约十个氨基酸取代，并且例如在天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区中约一个至约五个氨基酸取代。本文的变体Fc区将例如与天然序列Fc区和/或与亲本多肽的Fc区具有至少约80％的序列同一性，并且大多数例如与之具有至少约90％的序列同一性，更多例如与之具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的序列同一性。
"移植物抗宿主病"(GVHD)：如本文所用，是指同种异体骨髓移植或造血干细胞移植的常见并发症，其中移植骨髓中的功能性免疫细胞将受体识别为“外来的”并产生针对宿主组织的免疫反应。根据1959年的Billingham标准，发生GVHD必须满足三个标准：1)施用免疫活性移植物，其具有活的且有功能的免疫细胞；2)受体在免疫学上是组织不相容的；3)受体免疫受损，因此不能破坏所移植的细胞或使之失活。临床上，移植物抗宿主病分为急性和慢性两种形式。该疾病的急性或暴发性形式(aGVHD)通常在移植后的前100天内观察到，并且由于相关的发病率和死亡率，其为移植有效性的主要挑战。移植物抗宿主病的慢性形式(cGVHD)通常在100天后发生。中度至重度cGVHD病例的出现对长期存活产生不利影响。在骨髓移植后，作为污染物或有意引入宿主中的、存在于移植物中的T细胞将宿主组织视为抗原外来物并攻击移植受体的组织。T细胞产生过量的细胞因子，包括TNFα和干扰素γ(IFNγ)。多种宿主抗原可引发移植物抗宿主病，其中包括人白细胞抗原(HLA)。然而，即使当HLA相同的兄弟姐妹是供体时，也可能发生移植物抗宿主病。典型的是，急性移植物抗宿主病的特征在于对肝脏、皮肤和粘膜以及胃肠道的选择性损害。其他研究表明，移植物抗宿主病靶向器官，包括免疫系统(诸如骨髓和胸腺)本身以及肺(以特发性肺炎的形式)。慢性移植物抗宿主病也会攻击上述器官，但在其长期过程中也会对结缔组织和外分泌腺造成损害。
如本文所用，“宿主细胞”泛指已引入了本发明的核酸分子诸如本发明的重组表达载体的细胞。宿主细胞可为原核细胞(如大肠杆菌)，或真核细胞诸如酵母、昆虫(如SF9)、两栖动物或哺乳动物细胞诸如CHO、HeLa、HEK-293，例如培养的细胞、外植体和体内细胞。术语“宿主细胞”和“重组宿主细胞”在本文中可互换使用。应了解，这些术语不仅指特定的主题细胞，而且还指这种细胞的子代或潜在子代。因为后代中可能因突变或环境影响而出现某些改变，所以子代实际上可能不与亲本细胞相同，但仍然被包括在如本文所用的该术语的范围内。
如本文所用，"人抗体"是指，具有与人产生的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列的抗体、和/或已经使用本领域技术人员已知的或本文公开的任何制造人抗体的技术制成的抗体。人抗体的这一定义包括包含至少一个人重链多肽或至少一个人轻链多肽的抗体。一个这样的例子是包含鼠轻链和人重链多肽的抗体。人抗体可以使用本领域已知的各种技术生产。在一个实施方案中，人抗体选自噬菌体文库，其中该噬菌体文库表达人抗体(Vaughan等，Nature Biotechnology，14:309-314，1996；Sheets等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95:6157-6162，1998；Hoogenboom和Winter，J.Mol.Biol.，227:381，1991；Marks等，J.Mol.Biol.，222:581，1991)。也可以通过免疫动物来制造人抗体，其中所述动物中已经转基因地引入了人免疫球蛋白基因座以代替内源性基因座，例如，内源性免疫球蛋白基因已部分或完全失活的小鼠。这种方法描述在美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；和5,661,016中。另外，人抗体可以通过将产生针对靶抗原的抗体的人B淋巴细胞(这种B淋巴细胞可以从个体或从cDNA的单细胞克隆中回收，或者可以已经在体外免疫)进行永生化来制备。参见，例如，Cole等Monoclonal Antibodies and CancerTherapy,Alan R.Liss,p.77,1985；Boerner等,J.Immunol.,147(1):86-95,1991；以及美国专利号5,750,373。
"人单克隆抗体"是指显示单一结合特异性的抗体，其具有其中框架区与CDR区两者均源于人种系免疫球蛋白序列的可变区。在一个实施方案中，由杂交瘤产生人单克隆抗体，所述杂交瘤包括与永生化细胞融合的B细胞，所述B细胞从转基因非人动物例如转基因小鼠获得，具有包含人重链转基因和轻链转基因的基因组。这包括完全人单克隆抗体及其缀合物和变体，例如与效应试剂诸如治疗剂或诊断剂结合。
本文所用的"人源化抗体"，广义上包括通过非人细胞产生的抗体，所述抗体具有可变区和恒定区，所述可变区和恒定区已发生改变从而与通过人细胞产生的抗体更加密切相似。例如，通过改变非人抗体氨基酸序列以并入人种系免疫球蛋白序列中的氨基酸。本发明的人源化抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在CDR中。如本文所用，术语“人源化抗体”也包括这样的抗体，在所述抗体中已将来源于另一种哺乳动物物种诸如小鼠的种系的CDR序列移植于人框架序列上。本文使用的术语"人源化抗体"还包括亲和力成熟的抗体，该抗体既是人源化的又是亲和力成熟的，例如，为了增强抗体与MCT1或另一靶抗原的结合。
本文所用的术语"IC50"是指试验化合物，例如抗MCT1抗体或其抗原结合片段的剂量，该剂量在生化测定中产生50％的抑制作用。
如本文所用，可互换使用的“炎性障碍”、“炎性病症”和/或“炎症”泛指慢性或急性的炎性疾病，并且明确包括炎性自身免疫性疾病和炎性变应性病症。这些病症包括例如，具有如下特征的炎性异常：对有害刺激诸如病原体、受损细胞或刺激物的免疫反应失调。炎性病症是种类繁多的人类疾病的因素。具有在炎性过程中的病因起源的非免疫疾病包括癌症、动脉粥样硬化和缺血性心脏病。与炎症相关的病症的实例包括：慢性前列腺炎、肾小球性肾炎、超敏反应、骨盆炎性疾病、再灌注损伤、类肉瘤病、血管炎、间质性膀胱炎、正常补体血症性荨麻疹性血管炎、心包炎、肌炎、抗合成酶综合征、巩膜炎、巨噬细胞活化综合征、贝塞特氏综合征、PAPA综合征、布劳氏综合征(Blau’s Syndrome)、痛风、成人和青少年斯蒂尔氏病(Still’s disease)、冷吡啉病(cryropyrinopathy)、马克尔-韦尔斯综合征(Muckle-Wellssyndrome)、家族性寒冷诱发的自体炎性综合征、新生儿发作型多系统炎性疾病、家族性地中海热、慢性婴儿神经、皮肤和关节综合征、全身性青少年特发性关节炎、高IgD综合征、史尼兹勒氏综合征(Schnitzler’s syndrome)、TNF受体相关的周期综合征(TRAPSP)、齿龈炎、牙周炎、肝炎、肝硬化、胰腺炎、心肌炎、血管炎、胃炎、痛风、痛风性关节炎、以及炎性皮肤病，选自牛皮癣、特应性皮炎、湿疹、红斑痤疮、荨麻疹和粉刺。
如本文所用，术语"抑制剂"是指与靶标结合并使其生物性地失活或降低活性的化合物。在一个特定的实施方案中，该化合物是抗MCT1抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，化合物的抑制作用是经由抑制MCT1介导的乳酸转运来测量的。
"分离的"生物成分(诸如分离的抗体或细胞或载体或蛋白质或核酸)是指，已经从其天然存在的环境或生物体细胞的其他生物成分(例如其他染色体和染色体外的DNA和RNA、蛋白质和细胞器)中基本分离或纯化出来的成分。已"分离"的核酸和蛋白质包括通过标准纯化方法纯化的核酸和蛋白质。该术语还包括通过重组技术以及化学合成制备的核酸和蛋白质。分离的核酸或蛋白质可以以基本上纯化的形式存在，也可以存在于非天然环境，诸如，例如，宿主细胞中。
如本文所用，“分离的抗体”意指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合MCT1的分离的抗体基本上不含特异性结合除MCT1以外的抗原的抗体)。此外，分离的抗体可基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
如本文所用，“标记”或“可检测部分”泛指可通过光度法、光化学、生物化学、免疫化学、化学或其他物理手段检测的组合物。
如本文所用，“狼疮”旨在包括所有类型的狼疮。狼疮有4种类型，将在下面讨论。如本文所用，“狼疮样病症”旨在包括具有与狼疮类似的症状，诸如肾炎、蛋白尿增加和脾肿大，的炎症性病症。“全身性红斑狼疮”或(“SLE”)是最常见的狼疮形式，其可以是轻度或严重的并且可以影响主要器官系统。大多数人将“狼疮”与之关联。其为一种原因不明的自身免疫病症，可导致肾脏炎症(称为狼疮性肾炎)，该炎症可影响身体从血液中过滤废物的能力，和/或者如果严重的话，可导致肾脏损害从而需要透析或肾移植。SLE也可导致肺部血压升高(称为肺动脉高压)，可导致呼吸困难。另外SLE可导致神经系统和脑的炎症，这可导致记忆问题、混乱、头痛和中风。另外SLE可导致脑血管的炎症，这可导致高烧、癫痫和行为改变。SLE也可导致动脉硬化或冠状动脉疾病-冠状动脉壁上沉积物的积聚-可导致心脏病发作。“皮肤狼疮”在本文中是指仅影响皮肤的狼疮病症。有三种类型的狼疮影响皮肤：慢性皮肤型红斑狼疮(CCLE)(也称为盘状红斑狼疮[DLE])、亚急性皮肤型红斑狼疮(SCLE)和肿胀性狼疮(tumid lupus)。皮肤型红斑狼疮或盘状红斑狼疮可引起多种类型的皮疹和病变(疮)，最常见的称为盘状皮疹，其凸起、呈鳞状和红色，但不发痒。皮疹区域显示为圆盘或圆圈样。皮肤型狼疮的另一个常见实例是面颊和鼻梁上的皮疹，称为蝶形皮疹。其他皮疹或疮可能出现在面部、颈部或头皮(暴露在阳光或荧光灯下的皮肤区域)，或出现在口腔、鼻或阴道中。脱发和皮肤色素或颜色的变化也是皮肤型狼疮的症状。大约10％患有皮肤型狼疮的人会发展全身性狼疮。然而，这些人很可能已患有全身性狼疮，以皮疹为其主要症状。“药物诱导的红斑狼疮”是由某些药物引起的病症，这些药物可以在未患有SLE的人中引起狼疮样症状。通常，这种形式的狼疮是暂时的，并且通常在药物停止的几个月内消退。已知可诱导狼疮样症状的药物包括降压药物肼苯哒嗪和甲基多巴、称为普鲁卡因酰胺的心脏药物、以及用于金属中毒的称为D-青霉胺的药物。药物诱导的狼疮的其他原因包括米诺环素(用于治疗痤疮)、异烟肼(治疗结核病)和抗TNF(用于治疗类风湿性关节炎)。药物诱导的狼疮的症状与全身性狼疮相似，然而与SLE不同，其很少影响主要器官。新生儿狼疮不是真正的狼疮形式。这是一种罕见的疾病，其影响患有狼疮的女性的婴儿，并且是由来自母亲的抗体作用于子宫内的婴儿引起。在出生时，婴儿可能具有皮疹、肝脏问题或低血细胞计数，但这些症状通常在几个月后完全消失，没有持久影响。一些患有新生儿狼疮的婴儿也可能有严重的心脏缺陷。
"MCT1"是一种质子偶联的单羧酸转运蛋白。MCT1是一种多次跨膜蛋白，负责关键代谢物包括糖酵解产物的易化转运。它催化许多单羧酸化合物，诸如乳酸、丙酮酸、衍生自亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸的支链含氧酸、和酮体乙酰乙酸、β-羟基丁酸盐、乙酸，跨质膜的快速转运。根据组织和环境，MCT1介导乳酸和酮体的输入或输出。MCT1是称为溶质通道蛋白(SLC)的最大表面膜蛋白家族的成员之一，其功能涉及关键细胞营养物质，代谢物，离子，激素和脂质的跨膜转运。MCT1属于SLC16转运蛋白家族，其中5种已被证明以pH依赖性和双向的易化方式转运单羧酸，诸如丙酮酸，乳酸和酮。MCT1也可以用以下任何一个名称来提及：单羧酸转运蛋白1，SLC16A1，HHF7，MCT，MCT1，MCT1D，溶质载体家族16成员1。在人类中，它由SLC16A1基因编码。
"MCT2"是一种质子偶联的单羧酸转运蛋白。它催化许多单羧酸化合物，诸如乳酸、丙酮酸、衍生自亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸的支链含氧酸、和酮体乙酰乙酸、β-羟基丁酸、和乙酸，跨质膜快速转运。它还具有高亲和力丙酮酸转运蛋白的功能。MCT2也可以用以下任何一个名称来提及：单羧酸转运蛋白2，SLC16A7，MCT2，溶质载体家族16成员7。在人类中，它由SLC16A7基因编码。
"MCT3"是一种质子偶联的单羧酸转运蛋白。它催化许多单羧酸化合物，诸如乳酸、丙酮酸、衍生自亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸的支链含氧酸、和酮体乙酰乙酸、β-羟基丁酸和乙酸，跨质膜快速转运。它还具有高亲和力丙酮酸转运蛋白的功能。MCT3的表达限于视网膜色素上皮和脉络丛上皮，其位于基底膜上，相对地MCT1位于顶端膜上。MCT3也可以通过以下任何一个名称来提及：单羧酸转运蛋白3，SLC16A8，MCT3，REMP，溶质载体家族16成员8。在人类中，它由SLC16A8基因编码。
"MCT4"是一种质子偶联的单羧酸转运蛋白。MCT4也可以用以下任何名称来提及：单羧酸转运蛋白4，SLC16A3，MCT 3，MCT 4，MCT-3，MCT-4，MCT3，MCT4，溶质载体家族16成员3。在人类中，它由SLC16A3基因编码。
"多特异性抗体"或"多特异性抗原结合蛋白"是指具有2个或更多个抗原结合区的多肽或抗体。这包括双特异性抗体。这些抗原结合区可结合至不同抗原或结合至同一抗原的不同表位。
术语"核酸"和"多核苷酸"指的是线性或支链、单链或双链的RNA或DNA，或其混合。该术语还涵盖RNA/DNA杂交体。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段、外显子、内含子、mRNA、tRNA、rRNA、核酶、cDNA、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离DNA、任何序列的分离RNA、核酸探针和引物。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物、尿嘧啶、其它糖和连接基团如氟核糖和硫醇，以及核苷酸分支。核苷酸的序列可以在聚合后进一步修饰，例如通过与标记组分的缀合。本定义中包括的其它修饰类型有：加帽，用类似物替代一个或多个天然存在的核苷酸，以及引入用于将多核苷酸连接到蛋白质、金属离子、标记成分、其它多核苷酸或固体支持物的手段。多核苷酸可以获自化学合成或衍生自微生物。术语"基因"广义地用于指与生物功能相关的任何多核苷酸片段。因而，基因可以包括如基因组序列中的内含子和外显子、或如cDNA中仅编码序列、和/或其表达所需的调控序列。例如，基因也指表达mRNA或功能性RNA、或编码特定蛋白质的核酸片段，其包括调节序列。
当与另一核酸序列置于功能关系中时，核酸是"有效连接"的。例如，如果信号序列的DNA作为前蛋白表达，参与多肽的分泌，则其与多肽的DNA有效连接；如果启动子或增强子影响编码序列的转录，则其与编码序列有效连接。一般来说，"有效连接"是指，连接的DNA序列是连续的，并且，如果是分泌前导序列的情况，则是连续的并且在读码框中。然而，增强子不一定是连续的。连接可以通过在方便的限制性位点处的连接反应或替代性地通过本领域技术人员熟悉的PCR/重组方法(GATEWAY11 Technology；Invitrogen,CarlsbadCalifornia)来完成。如果不存在这样的位点，则可以按照常规做法使用合成的寡核苷酸接头或连接子(adaptor)。
"药学上可接受的载体"或"赋形剂"是指，在配制过程中和/或为了允许储存，常规用于药物组合物中的化合物或材料。
"多肽"、"肽"和"蛋白质"可互换使用并且泛指任何长度的氨基酸残基的聚合物，而与修饰(例如磷酸化或糖基化)无关。该术语适用于以下氨基酸聚合物，在该聚合物中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的类似物或模拟物；以及适用于天然存在的氨基酸聚合物。该术语适用于以下氨基酸聚合物，在该聚合物中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物；以及适用于天然存在的氨基酸聚合物、和非天然存在的氨基酸聚合物。多肽可以被修饰，例如通过添加碳水化合物残基以形成糖蛋白。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”明确包括糖蛋白以及非糖蛋白。
本文使用的术语"启动子"定义为，由细胞的合成机器或引入的合成机器所识别的、启动多核苷酸序列的特异性转录所需的DNA序列。
如本文所用，“预防有效量”泛指，当向患者施用以预防疾病或防止疾病复发时，化合物足以对疾病或复发实现这种预防的量。预防有效量可为有效预防体征和/或症状的发生的量。“预防有效量”可视疾病及其严重性、以及待治疗患者的年龄、体重、病史、病症易感性和先前存在的病症而变化。
如本文所用，“重组”泛指产物，例如细胞或核酸、蛋白质或载体，指示所述细胞、核酸、蛋白质或载体已通过引入异源核酸或蛋白质或者改变天然核酸或蛋白质得到修饰，或所述细胞源于经如此修饰的细胞。因此，例如，重组细胞表达在该细胞的初始(非重组)形式中未见的基因，或表达原本为异常表达、表达不足或完全不表达的天然基因。
如本文所用，“重组人抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，诸如(a)从人免疫球蛋白基因的转基因或转染色体动物(例如小鼠)或由其制备的杂交瘤分离的抗体(以下进一步描述)，(b)从已转化表达人抗体的宿主细胞，例如转染瘤分离的抗体，(c)从重组组合人抗体文库分离的抗体，和(d)通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列上的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。所述重组人抗体具有框架区和CDR区源于人种系免疫球蛋白序列的可变区。然而，在某些实施方案中，可使所述重组人抗体经受体外诱变(或当使用人Ig序列的转基因动物时，经受体内体细胞诱变)，并且因此，重组抗体的VH区和VL区的氨基酸序列是这样的序列：尽管源于人种系VH和VL序列以及与人种系VH和VL序列相关，但可能并不天然存在于体内人抗体种系库(germlinerepertoire)。
本文中的“可选择标记物”是指基因或基因片段，其在(例如通过转化事件)接受所述基因的细胞上赋予生长表型(物理生长特征)。可选择标记物允许所述细胞在如下条件在选择性生长培养基中存活并生长，其中在所述条件下未接受所述可选择标记物基因的细胞不能生长。可选择标记物基因通常可以分为若干类型，包括正可选择标记物基因，诸如赋予细胞对抗生素或其他药物、温度(当两个温度敏感性(“ts”)突变体杂交或转化ts突变体时)的抗性的基因；负可选择标记物基因，诸如生物合成基因(其赋予细胞在不存在特定养分的培养基中生长的能力，其中所述特定养分是不具有所述生物合成基因的所有细胞所需要的)，或经诱变的生物合成基因(通过不具有野生型基因的细胞，其造成细胞无法生长)；等等。合适的标记物包括但不限于：ZEO；G418；LYS3；MET1；MET3a；ADE1；ADE3；URA3；等等。
在本文中，在治疗或诊断的情形下，“受试者”或“患者”或“个体”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、猫、马、母牛、鸡、两栖动物、爬行动物等，即适于根据本发明进行治疗的任何动物，包括但不限于禽类和哺乳动物受试者，并且优选地为哺乳动物。需要根据本发明进行治疗的任何哺乳动物受试者都是适合的。两种性别以及处于任何发育阶段(即新生儿、婴儿、少年、青少年和成人)的人受试者都可根据本发明进行治疗。本发明也可对动物受试者，特别是哺乳动物受试者诸如小鼠、大鼠、狗、猫、牛、山羊、绵羊和马进行以用于兽医学目的，以及用于药物筛选和药物开发目的。“受试者”可与“个体”和“患者”互换使用。
短语抗体(例如第一抗体)与另一种抗体(例如第二抗体)结合“基本上”或“至少部分”相同的表位，意指第一抗体的表位结合位点包含抗原上构成第二抗体的表位结合位点的氨基酸残基中的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。此外，第一抗体与第二抗体结合基本上或部分相同或重叠的表位意指，如上所述，第一抗体和第二抗体竞争结合抗原。因此，术语与单克隆抗体“结合基本上相同的表位或决定簇”意指，一个抗体与所述抗体“竞争”。短语与目的抗体“结合相同或重叠的表位或决定簇”意指，一个抗体与所述目的抗体“竞争”MCT1上由所述目的抗体所特异性结合的残基中的至少一个(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个)或全部残基。与本文所述的单克隆抗体结合基本上或本质上相同的表位的一种或多种抗体的鉴定，可以使用丙氨酸扫描容易地确定。另外，可以使用可评估抗体竞争的各种免疫筛选测定中的任一种。许多此类测定是常规实施并且在本领域中是公知的(参见例如1997年8月26日颁发的美国专利号5,660,827，其以引用的方式明确并入本文)。可以理解，为了鉴定与本文所述的单克隆抗体结合相同或基本上相同或重叠的表位的抗体，并不需要实际确定本文所述的抗体所结合的表位。
术语"转染"或"转化"或"转导"是指，用于将外源核酸转移或引入宿主细胞的过程。"转染"或"转化"或"转导"的细胞是指已经转染、转化或转导了外源核酸的细胞。该细胞包括原代受试细胞及其后代。
如本文所用，“疗法”、“治疗性”或“治疗”泛指治疗疾病、停滞或减轻疾病或其临床症状的发展、和/或解缓疾病，使疾病或其临床症状消退。治疗涵盖预防、治疗、补救、减少、减轻和/或使得疾病、疾病的征象和/或症状缓解。治疗涵盖在具有进行中的疾病征象和/或症状(例如炎症、疼痛)的患者中减轻征象和/或症状。治疗还涵盖“预防”。出于治疗的目的，术语“减轻”泛指征象和/或症状的临床显著的减轻。治疗包括治疗复发、或复发性征象和/或症状(例如炎症、疼痛)。治疗涵盖但不限于阻止任何时候出现征象和/或症状以及减轻现有征象和/或症状以及消除现有征象和/或症状。治疗包括治疗慢性疾病(“维持”)和急性疾病。例如，治疗包括治疗或预防征象和/或症状(例如炎症、疼痛)的复发。
如本文所用，“Treg细胞”(有时也被称为抑制性T细胞或诱导型Treg细胞或iTreg)指T细胞亚群，其调节免疫系统并维持对自身抗原的耐受性并且可消除自身免疫疾病。Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在正常生理条件下维持外周耐受性方面是关键性的。
本文的术语"Tr1细胞"指的是调节性T细胞的特定类型或群体，即1型调节性T细胞(Tr1)，它包含表达高水平IL-10的CD4+Foxp3-细胞，在科学文献中一般根据它们的CD49b和LAG-3的表达来表征。这些细胞可以通过其在没有IL-4和IL-17的情况下分泌IL-10、TGF-β和颗粒酶(Gz)B的能力进一步表征。据报道，Tr1细胞控制免疫反应的主要机制包括分泌IL-10和TGF-β，以及经由GzB杀伤髓细胞。Tr1细胞最初是在HLA不匹配的胎儿肝脏造血干细胞移植后产生耐受性的患者的外周血中被观察到的，据报道，Tr1细胞在一些免疫介导的疾病中调节炎性和效应T细胞应答。这些细胞可在体外以Ag特异性的方式产生和扩增，这带来了对它们潜在的临床用途的评价，评价在治疗自身免疫性病症诸如1型糖尿病和多发性硬化症患者的细胞疗法中的临床应用。
本文所用的“可变区”或“VR”泛指抗体中各对轻链和重链内直接涉及所述抗体结合抗原的结构域。每个重链在一端具有可变结构域(VH)，继之为多个恒定结构域。每个轻链在一端具有可变结构域(VL)和在其另一端具有恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链可变结构域与重链的可变结构域对齐。
"载体"是复制子，诸如质粒、噬菌体、粘粒或病毒，其中可操作地插入核酸区段，以实现该区段的复制或表达。载体可包含一个或多个其它序列，诸如但不限于调控序列(如启动子、增强子)、选择标记和多聚腺苷酸化信号。用于转化多种宿主细胞的载体对于本领域的技术人员来说是公知的。它们包括但不限于质粒、噬菌粒、粘粒、杆状病毒、bacmid、细菌人工染色体(BAC)、酵母人工染色体(YAC)、以及其它细菌、酵母和病毒载体。本文所描述的载体可以整合到宿主基因组中，或独立地维持在细胞或细胞核中。
术语"异种基因"是指源自不同物种的动物的移植物。
已经描述了本发明，现提供以下实施例以进一步说明本发明及其固有的优点。提供以下实施例以阐明而非限制所要求保护的发明。
实施例
实施例1.MCTs在T细胞上的差异表达。
材料和方法
可商购的SM化合物AZ3965(MedChem Express,NJ)及其相关的类似物用于帮助揭示MCT1通路在免疫细胞中的独特生物学。为明确起见，我们将把AZ3965及其具有相同结合亲和力、PK和MCT1/2选择性的类似物共同称为"AZ3965"。
在来自两个不同供体的未受刺激和受刺激的白细胞中测量MCT1、MCT2、MCT4和BSG(CD147)的表达。对于"刺激"条件，细胞经CD3/CD28激活3天。测试AZ3965对刺激细胞增殖的抑制。
结果
MCT1促进代谢物(包括糖酵解的产物)的转移，这在活化的T/B细胞中更为重要(图1)。图2中显示了两个供体的MCT1、MCT2、MCT4和BSG(CD147)的表达水平，证明活化的T细胞上调MCT1(也见图13B)但不上调MCT2；无论静息还是活化T细胞均不高水平表达MCT2；而且在不同个体中，活化T细胞中MCT4的表达是变化的。AZ3965抑制测定(结果在图2上表示)显示，在MCT4高表达(0.59nM)相对于MCT4低表达(0.43nM)的个体中，T细胞增殖抑制的IC50不可区分。这些结果表明，MCT4对活化T细胞的乳酸转运没有显著贡献，即使在MCT4存在的情况下，MCT1特异性靶向也将抑制T细胞功能。
另外的数据显示，CD3/CD28活化后，小鼠MCT4缺陷的T细胞与WT T细胞相同。
实施例2:使用AZ3965抑制剂验证对于炎症/自身免疫性病症在体外和体内靶向MCT1的可行性。
体外
对乳酸转运的影响。用乳酸FLIPR测定表明，AZ3965抑制人T细胞(CD4+和CD8+两者)、B细胞淋巴瘤(Daudi)和PBMC中的乳酸转运，但不抑制单核细胞中的乳酸转运(图3)。AZ3965在受影响的细胞中抑制乳酸转运高达80％，但不影响单核细胞中的转运，这对保护所治疗个体的先天免疫反应是重要的。
人T细胞增殖。在人T细胞增殖测定中，MCT1抑制剂的施用以0.54nM的IC50减少T细胞增殖(图4)。
人混合淋巴细胞反应(MLR)。在人MLR测定中，MCT1抑制剂的施用以1.34nM的IC50减少T细胞增殖(图5)。
T细胞细胞因子的分泌。T细胞在体外由CD3/CD28活化5天。随后施用AZ3965抑制了以下细胞因子的分泌：IFNγ、GM-CSF、TNFα、IL-10和IL-6(图6)。
活化标志物。用100nM小分子MCT1抑制剂处理CD3/CD28活化的T细胞4天，或无处理4天(无处理对照)。这些条件与阴性(抗体不染色)对照进行比较。经由流式细胞仪染色评估了200多种CD标志物。如通过TCR刺激之后流式细胞术染色观察到的，MCT1的抑制不阻止T细胞表达细胞表面标志物(例如，CD25、CD44、CD69、CD4、CD8、LFA、I/II类等；见图7A-J)，除了表面PD1和CTLA4的表达略有增加。AZ3965处理淋巴细胞对细胞活力也没有影响。
体内
GVHD抑制和Treg频次增加。在GVHD的小鼠模型中，将人类PBMCs转移到免疫缺陷的NSG小鼠中。AZ3965的施用在异种GVHD期间以优于JAK抑制剂CP-690550的方式延长了小鼠的生存期，并降低了GVHD的发病率，直至停药(图8)。在此异种GVHD实验的第20天，观察到是作为调节性T(Treg)细胞的CD4+T细胞的百分比的AZ3965剂量依赖性增加，从2mg/kg(2.5％Tregs)到50mg/kg(10％)(图9)。在这一模型中，Treg细胞典型地在转移到淋巴减少的环境中之后不能长期存活，部分原因是炎性微环境(参考文献60-62)。在另一个GVHD实验中，如通过CFSE标记的T细胞增殖所测量的，AZ3965减弱了小鼠GVHD(BALB/c->C57BL/6)。
移植物排斥。在小鼠同种异体移植测定中，施用25mg/kg化合物减少了移植排斥(图10)。
抑制B细胞IgG1反应。施用AZ3965(2.5mpk/天)也抑制了B细胞免疫球蛋白的产生，如通过对绵羊RBC的IgG1反应所测定的(图11A)。该施用还使生发中心B细胞的比例降低了约30％(图11B)。
尿酮的增加。与人体中失去MCT1一致(参考文献49)，用AZ3965给药的小鼠表现出了可测量的，但非不利的，尿酮增加，没有相关的酮症酸中毒。
结论
这些研究证明了抑制MCT1在降低T细胞和B细胞反应中的功效，这一特点对于诸如狼疮等自身免疫性疾病中的治疗性靶向是重要的。因而，MCT1是一个可行的控制炎症的药物靶点，其抑制对先天免疫没有影响，但对适应性/体液免疫有深刻的影响。
实施例3:抗人MCT1抗体的开发和结合表征
MCT1 Ab1 mAb的选择。MCT1 Ab1是一种大鼠抗人MCT1单克隆抗体，是在基于细胞的啮齿动物免疫和使用MCT1表达和MCT1敲除(KO)细胞系进行结合筛选后选择的。
结合亲和力和MCT1交叉反应性。动力学排除测定(KinExA)分析显示，MCT1 Ab1与人MCT1结合的Kd为6.3nM。MCT1 Ab1与食蟹猴(cyno)和兔MCT1也具有高度交叉反应性，但与啮齿动物MCT1则无(图12A-D)。
结合的特异性。通过RT-PCR测得HEK-293WT细胞只表达MCT1/CD147，而没有其他MCT。为了测量本发明抗体的结合特异性，可以使用HEK-293MCT1/CD147双敲除细胞系作为阴性对照。此外，该双敲除细胞系被工程改造以表达单个转运蛋白(MCT1，MCT2，MCT3，MCT4，CD147)。使用流式细胞术，这些工程化的细胞系可以经由检测Flag标记的蛋白来测量每种蛋白的表达，以及经由表面染色来测定抗MCT1抗体的结合。
MCT1 Ab1与活化T细胞结合。MCT1 Ab1与MCT1特异性结合，并证实了人CD3/CD28活化T细胞在第3天升高的细胞表面表达(图13B)，但在静息的幼稚T细胞上显示出低至无染色(图13A)。此结合确认了图2中所呈的表达数据，并确认了基于mRNA分析的预测。
结论
MCT1 Ab1是一种高度特异的大鼠抗人MCT1抗体。
实施例4.体外表征抗MCT1抗体对MCT1的抑制作用
乳酸转运的抑制。使用FLIPR
Figure BDA0002570801830000891
和pH敏感染料BCECF(参考文献63-65)进行的基于细胞的乳酸转运测定试验证明，MCT1 Ab1能以剂量依赖性的方式阻断活化T细胞中的乳酸转运(Kd＝7.6nM)(图14)。
溴丙酮酸毒性的抑制。由于MCT1是抗癌毒素溴丙酮酸(参考文献66)体外功效所必需的唯一转运蛋白，因此开发了第二种基于细胞的功能测定法，以测量在150μM的浓度下使用该毒素对细胞的体外杀伤。用该测定法，通过使用ATPlite测量免于细胞死亡的保护作用，观察到溴丙酮酸毒性的剂量依赖性抑制(Kd＝1.2nM)(图15)。
抑制T细胞增殖、炎性细胞因子产生和同种异体激活。MCT1 Ab1以1.3nM的EC50抑制CD3/CD28刺激的培养物中T细胞的增殖(图16)。也可以测试本发明的抗MCT1抗体或抗体片段在刺激后第3天相对于对照组在刺激的T细胞中抑制炎性细胞因子产生的能力。与CD3/CD28活化一样，MCT1 Ab1在人混合淋巴细胞反应中抑制了同种异体活化达50-60％(参见，例如，图17)。
实施例5.抗MCT1抗体施用的体内免疫调节作用
保护免于致死性GVHD。可以按以一次/周施用药物或对照，使用每组n＝8只小鼠，进行3周的异种-GVHD研究(使用人类PBMC->NSG小鼠)。可以针对各种剂量的抗MCT1抗体，在整个测试期间每天观察MCT1 Ab1提供的免于致死性GVHD的保护作用。可以在施用两剂MCT1Ab1抗MCT1抗体或对照后，在第14天测量T细胞群(由绝对淋巴细胞计数(ALC)指示)和炎性细胞因子。观察血液CD4+T细胞扩增的减少和炎性细胞因子的减少。如果这些数据表明在低剂量下的高效力，那么在一些实施方案中，MCT1 Ab1该抗MCT1抗体或抗体片段可作为自身免疫性疾病的治疗剂由皮下施用。
尿酮增加。可在异种-GVHD(xeno-GVHD)研究的第4天针对三个实验测量酮尿，并可分析剂量依赖性。MCT1 Ab1此药物诱导的酮升高可提供一个接近于中靶MCT1抑制的药效动力学(PD)生物标志物，用于临床研究。
此外，初步的代谢组学研究显示，在MCT1 Ab1处理的人T细胞中，ATP和NADH的生成改善，连同氧化代谢和活力增加。
实施例6.用抗MCT1特异性抗体靶向人MCT1的安全性
MCT1在人RBC上不表达。MCT1 Ab1用于染色cyno RBC和人RBC(20个供体)，并设有对照条件和仅有二抗条件。结果清楚地表明，MCT1在人RBC上不表达，与高水平表达MCT1的cyno RBC形成鲜明对比(图18A)。MCT1也在兔RBC上表达，但大鼠或比格犬RBC则无(图18B)。
MCT1 Ab1和AZ3965不影响人RBC的乳酸转运。使用基于FLIPR的转运测定(参考文献1，2)，在10mM乳酸的存在下，MCT1 Ab1和AZ3965用于抑制在纯化的人RBC中的MCT1乳酸转运。将此乳酸转运水平与无乳酸对照条件以及乳酸存在下的无抑制剂条件进行比较。结果表明，人RBCs的乳酸转运不受AZ3965或MCT1 Ab1处理的影响(图19)，证实MCT1和MCT2都不是RBC中的乳酸转运所必需的。
条件性MCT1 KO小鼠株确认MCT1抑制的毒性有限。为了评估毒理学问题，开发了一个条件性MCT1 KO小鼠株。这些小鼠出生后使用他莫昔芬在所有组织中诱导了两个MCT1等位基因缺失，并且在缺失后4个月没有发现严重的不良发现。在精子形成之前观察到精子细胞退化，但这种损失被认为是可逆的，因为精子生成的这个阶段是糖酵解的(参考文献82)，且事实上是新的一类可逆性避孕药的靶标(参考文献83,84)。在免疫学上，小鼠显示了无免疫区室细胞结构(immune compartment cellularity)的改变，支持正常的造血。然而，与观察到的SM和mAb抑制剂对淋巴细胞增殖和活化的影响一致，如通过OTII(OVA特异性转基因TCR)T细胞转移研究所测量的，所有组织中MCT1条件性缺失的小鼠表现出抗原特异性免疫反应的显著减弱，对T细胞记忆几无影响。因此，在这些研究中以及在MCT1缺陷个体中提出的有限毒性问题(参考文献49)提供了证据，特异性抗MCT1 mAb将具有强大的免疫调节活性，且无毒性或毒性有限。
结论
在人类中用抗MCT1 mAb靶向MCT1是安全的。现有数据强烈表明了良好的安全性。缺少MCT1的成年人类是健康的(参考文献49，68)；在MCT1缺陷个体中未观察到明显的免疫缺陷；而且MCT1缺陷的成年人类此外也没有神经学上受损(参考文献49)，提示MCT1失去后对人脑缺乏影响。MCT1突变的个体没有出现广泛的毒性可能是由于MCT的大量冗余所致。
此外，我们的数据证实，MCT1不是人红细胞(RBCs)上的主要乳酸转运蛋白，MCT1缺失的人不会出现任何RBC功能障碍。
实施例7.用抗MCT1抗体经由抑制B细胞治疗狼疮
狼疮患者的浆细胞上MCT1的表达量大大增加。用MCT1 Ab1对来自狼疮患者和健康患者的浆细胞进行染色，并通过流式细胞仪测定。图20显示了健康B细胞相比于狼疮B细胞MCT1表达的示例性流式细胞术数据，揭示了疾病细胞的MCT1表达大量增加。
结论
关于B细胞——参与狼疮发病机理的关键适应性免疫细胞——结果显示，MCT1在狼疮患者的浆细胞上的表达高得多(图20)。因此，抗MCT1抗体不仅靶向效应细胞代谢，而且有可能在狼疮患者的所有致病性淋巴细胞中发挥此作用。
实施例8.抗MCT1抗体的人源化和选择
人源化
抗MCT1抗体MCT1 Ab1是一种大鼠/人嵌合体。MCT1 Ab1的人源化与免疫原性试验(又称"去免疫化")(参考文献87)协同进行。人源化和去免疫化相结合，从而保留功能、亲和力和特异性，同时递送低免疫原性谱。去除T细胞表位使免疫原性的风险最小化，从而使患者可以接受整个疗程的治疗。该方法联合了对结合结构域的仔细分析、对合适的人类序列区段的选择、和计算机工具的应用，以生成建议的人源化抗体序列，产生一组人源化抗体。基于亲和力选择了三种抗体。
对三种mAb的评价包括使用EpiScreenTM技术进行免疫原性评估，其使用时间过程树突状细胞：T细胞共培养测定，用来自20个以上健康志愿者供体的血液样本。免疫原性(表示为阳性应答者的百分比)是以已知临床免疫原性的各种临床级生物药的数据库为基准评定的。目标是阳性反应者<10％。
三种mAb与作为对照的MCT1 Ab1一起，转换为全IgG格式。在IgG1上选择"沉默"的Fc域。将已知的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的沉默突变，诸如ala/ala，添加到Fc域上，降低了潜在的毒性，同时保留了MCT1的抗炎功效。这些mAb的表达和纯化的规模为每种200毫克，且此材料被用于选择单个先导候选物。
亲和力测量
对于工程化表达MCT1(但没有其他MCTs)的CD147-/-HEK-293细胞使用基于细胞的测定试验，并使用Sapidyne的基于免疫传感器的Kinetic Exclusion Assay(KinExa)测量亲和力。也将MCT1 cDNA引入CD147-/-MCT1-/-细胞中，伴随或不伴随CD147，以估计该伙伴蛋白对MCT1 Ab1结合亲和力的影响，因为已知CD147会影响MCT1表面表达(参考文献88).
体外功能测试
使用典型的T细胞活化分析对Mab排序。通过阴性选择从人PBMC中分离出CD4+T细胞，然后与三种人源化MCT1 mAb的每一种或同型对照在冰上孵育30分钟。将T细胞和抗体置于抗CD3/CD28包被的96孔平底板上，培养72小时，之后收集上清液，用于通过Luminex分析细胞因子的产生。单独地，将氚化胸腺嘧啶(3H)添加到培养物中8小时，通过3H掺入量来测量增殖。
使用独特的供体在三个独立的实验中测试mAb以确认活性。每种抗体以半对数稀释(0.01→30μg/ml)进行测试，并计算IC50值以确定哪种抗体最有效(最低浓度下的最高功效)。
非人灵长类(NHP)交叉反应性
通过使用抗CD3克隆SP34、以及CD28(其驱动食蟹猴中的强T细胞增殖)，使用与人类T细胞活化测定试验相同的测定试验，筛选相关tox物种食蟹猴(cyno)中的功能活性的保留。来自cyno的全血获自World Wide Primates(Florida)，并通过阴性选择分离T细胞。将T细胞与抗体孵育，并在CD3包被的板上培养72小时。用非人灵长类动物(NHP)特异性的Luminex测定法分析细胞因子的产生，并通过3H掺入法测量增殖。IC50分数与人类进行比较。
体内功能测试
异种-GVHD是由异种人T细胞过继转移到经辐照的小鼠宿主中介导的系统性疾病。MCT1 Ab1以不同的剂量进行测试，以确定异种-GVHD的NSG模型中T细胞扩增的减少和细胞因子水平的降低。三种mAb中的每一种都另外进行测试，连同MCT1 Ab1和对照IgG1，以确认体内功能。每组8只小鼠用于两个重复实验，其中每种抗体在人PBMC转移时以及在转移后的第2天和第4天以10，3，1或0.3mpk施用。在第14天，对小鼠取血，绝对淋巴细胞计数(ALC)和细胞因子水平分别由流式细胞术和Luminex分析确定。追踪每只小鼠的体重，任何失去其初始体重20％以上的小鼠都被处死。用统计学对数秩检验比较每个抗MCT1抗体与对照，对于每个实验生成Kaplan-Meier曲线。
进一步的修饰
如所描述的人源化经常保持结合性、特异性和效力而不增加免疫原性。为了进一步改善这些特征，可以引入CDRs周围的回复突变以增加结合力和效力。另外，可以通过保持CDRs附近的序列并通过突变消除可变域中任何预测的免疫原性T细胞表位来将抗体人源化。FcRn结合突变可以被引入以改进抗体的半衰期。
人源化抗体的特征
本发明的一些人源化抗体具有：
a.MCT1特异性结合，如与仅表达MCT1的HEK-293细胞结合所示；
b.在体外CD3/CD28试验中，相对于人T细胞，与cynos的交叉反应效力大于90％；
c.在>20名健康志愿者供体中<10％的阳性应答者的免疫原性；
d.在xeno-GVHD模型中体内效力的确认。
结论
人源化mAb抗MCT1抗体Ab4是通过满足上述标准，并通过使用体外CD3/CD28试验对IC50值进行排序而选择的，抗MCT1抗体Ab4具有高效力和低变异性(在实验内和实验间)。人源化抗MCT1抗体Ab4以及Ab3和Ab2(均来自ab1)的人源化可变重链序列和可变轻链序列包含在权利要求书之前的序列表中。
实施例9.亲和力成熟
人源化抗体MCT1 Ab4利用噬菌体展示技术进行亲和力成熟。
该抗体被转换为单链Fv(scFv)格式(可溶或连接到M13噬菌体)，并测试与人源化过程中使用的MCT1+HEK-293细胞系的结合，以确保可变域与所选格式兼容，并建立基线。为了实现这种scFv格式，编码可变重链结构域(VH)和可变轻链结构域(VL)的基因经由15-氨基酸接头连接(参考文献89)。然后，鉴定起始抗体的CDR内的特定氨基酸，并将其作为随机突变的目标。此外，特定的框架残基可有意或随机突变。由此产生的突变体用于生成呈现在M13噬菌体表面的scFv噬菌体展示文库(具有约1×108个成员)。使用MCT1+细胞系进行三轮选择，通过降低每轮的抗原浓度来识别亲和成熟的scFv。
对亲和力成熟的scFvs进行测序，选择<10个独特的scFvs，并扩大规模进行可溶性表达和IMAC纯化。根据亲和力选择三种，并将其转化为沉默的IgG格式。
由(a)在体外T细胞测定中的IC50效力和(b)在异种GVHD模型中的体内功能，对这三种进行排序。排序合并了效力和变异性，理想的候选物具有高效力和低变异性。排名最好的mAb被定为MCT1 Ab5.01，其他为MCT1 Ab5.02和MCT1 Ab5.03。
可以进行额外的几轮亲和力成熟。Ab1的示例性人源化、亲和力成熟变体，即Ab5-Ab60的序列可在本文权利要求书之前的序列表中。
结论
本发明的亲和力成熟的人源化抗体可具有用于优化的皮下给药的<2mg/kg的效力。对目的抗体MCT1 Ab1的异种GVHD数据可用于确定低剂量的功效。
实施例10.抗MCT1抗体的物理化学评估
对MCT1 Ab5.01进行了适当的稳健性、溶解性和稳定性评估。特别是对(a)高温下的物理化学稳定性，(b)溶解性，以及(c)见于典型生产工艺环境中的物理和低pH值压力，进行测试。
在不同缓冲剂、pH值和赋形剂的四种制剂中进行物理化学稳定性评估。每种制剂都以长达4周的高温(40℃)胁迫处理，然后评估(a)聚集成二聚体或高分子量物质的倾向(通过SEC-HPLC、cGE和吸光度)，以及(b)任何潜在的由异构化、脱酰胺和/或氧化引起的降解(通过观察iCE测得的电荷变异体的变化)。
为了评估皮下给药的适宜性，MCT1 Ab5.01以150mg/mL的浓度制备在两个单独的制剂中。这些样品与4周稳定性评估所用的相同的测试组进行分析，然后进行如上的分析评估。
使用强制降解的物理和化学手段进行的胁迫研究，评估MCT1 Ab5.01在多次冻融、搅拌和低pH值条件之后对降解的敏感性。低pH值研究模拟抗体制造过程中通常用于灭活潜在病毒的条件。
此外，使用CHO-DG44 DHFR迷你池制造2.5克纯化抗体。通过SDS-PAGE、SEC-HPLC分析该材料的纯度，通过LAL分析内毒素，通过流式细胞术分析结合。
在一些实施方案中，本发明的抗体可以具有：
a.在4周的稳定性研究期间，最小的(<10％)聚集、纯度损失和电荷变异体的变化。
b.在强制降解胁迫研究中，最小(<5％)的相同特征的变化。
c.溶解度>100mg/mL
实施例11:细胞系开发
使用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系，开发高表达细胞系，以使得能够cGMP商业化制造MCT1 Ab5.01。
生成序列进行密码子优化、基因合成和插入表达载体。总计制备6个不同的密码子优化的变体，并通过先导性蛋白生产(<1mg)确认。使用六个抗体变体序列转染宿主细胞系(CHO-M)，并生成稳定池。选择其中一个稳定池，并再转染，以增强细胞系的生产力。经过两次克隆步骤，10-12个最高滴度的克隆被扩增，并作为研究细胞库(RCB)进行低温保存。这些克隆的进一步评估是在补料分批培养中进行，并根据滴度和生产力选择前三个克隆。为了确认克隆的稳定性，通过对细胞系进行长达60代的连续传代，进行表型稳定性研究，监测抗体的产生和生产力。如上所述验证体外效力和体内功能后选择最高滴度的克隆。为了确认产品质量，对纯化后的抗体进行聚集和片段化(通过SEC-HPLC)以及电荷异质性(通过icIEF)评估。使用RP-UPLC MS/MS对最高表达者进行肽作图，以确认预期的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的克隆可产生至少1g/L。最高的克隆可以再转染以增加mAb基因的拷贝数。
实施例12:生物标志物发现&疾病相关性
药效动力学(PD)生物标志物的发现
酮类可作为PD生物标志物。这些代谢物(a)容易在尿液或血液中测量，(b)可由抗MCT1抗体施用诱导，(c)在作用机制(MOA)中起着合理的作用，其本身显示出显著的免疫调节功能(参考文献67)。MCT1 Ab5.01进一步用于体外T/B细胞试验(这两种细胞类型均参与狼疮)和体内试验，以扩展PD生物标志物。
代谢物。代谢组学研究用于评估约12,000个小分子实体的相对浓度谱，其包括内源性化合物、异源生物质(xenobiotics)及其代谢物，以及对1,100种以上的脂质物质进行完全定量测量。从异种GVHD模型(经MCT1 Ab5.01和对照处理)中分离血浆和人细胞，连同来自体外T细胞和B细胞测定的细胞。对于异种GVHD，实验用10个不同的健康供体，1个剂量，和多个血液采集时间点进行。对于体外研究，来自10名健康志愿者(分别用抗CD3/CD28或CD40L/IL4刺激)或10名狼疮患者(没有另外刺激)的人T和B细胞，用MCT1 Ab5.01或对照处理。分析采用基于质谱的代谢组学，使用全局代谢组学和脂质组学技术来识别和测量每个样品中存在的分析物。生化变化分析包括代谢途径分析，以指示每个检测中的额外MOA，并使用后续MS分析对新的代谢物进行解卷积。
细胞因子。Luminex研究的数据可用于比较嵌合MCT1 Ab1和对照处理的白细胞，以产生几种细胞因子作为推测的生物标志物，包括如IFNγ和IL10。MCT1 Ab5.01也用于确定细胞因子生物标志物。从异种GVHD模型和体外T和B细胞测定中，比较处理和未处理的细胞群之间的差异。异种GVHD实验用5个不同的供体进行，动物至少用2个MCT1 Ab5.01剂量处理，并在4个不同的时间点收集血浆。对与临床终点(移植接受或排斥延迟)的相关性进行评分，并鉴定额外的细胞因子生物标志物。
转录本。在异种GVHD模型(10个健康供体)中和在体外T和B细胞测定中使用健康志愿者(分别用抗CD3/CD28或CD40L/IL-4刺激)或狼疮患者(没有进一步刺激)，通过RNA-seq的转录组学用于识别与MCT1 Ab5.01处理细胞有关的差异表达基因和通路。细胞沉淀用于RNA分离，制备聚(A)-富集的文库，并在Illumina仪器上进行双端测序。原始数据以fastq格式递送，并使用可公开获得的差异表达管线(STAR比对工具和R/Bioconductor中的DESeq2)进行生物信息学分析。差异化表达的转录物在体内和体外系统中进行验证，如下所述。
人T和T/B细胞测定试验。除了上述的T细胞和PBMC测定，还在共同培养系统中测量对T细胞和B细胞的影响。通过阴性选择从人PBMC分离T细胞，并与CD19纯化的B细胞在抗CD3/CD28包被的96孔平底板上共培养5天。收集上清液以测量Ig的产生(IgM和总IgG)以及B细胞活化标志物(CD80、CD83、CD86、II类MHC和细胞内Ig)。在开始培养时，以浓度范围(0.1至10μg/mL)加入MCT1 mAb或同型对照。为了测量对B细胞活化的直接影响，CD19纯化的B细胞用激动性CD40L(100ng/ml megaCD40L,Enzo Life Sciences)、IL-2(50U/mL)和IL-4(400U/mL)培养。为期5天评估B细胞增殖、活化和Ig的产生。在开始培养时加入MCT1 Ab5.01或对照。
PD生物标志物的选择和确认
尿酮可以是一个强候选生物标志物。也检查其他试样(血清/血浆/细胞)，并分析以识别改变的分子成分(例如丙酮、乙酰乙酸(acetoacidic acid)、β-羟基丁酸和/或更广泛的类别，如环状、饱和或不饱和酮)。这是在代谢组学部分完成的，通过RNA-seq和/或流式或磷酸化流式细胞术发现潜在的相应(或新的)基因/蛋白质变化。基于与病理终点的相关性选择PD生物标志物。也可以使用其他的模型诸如NSG-SGM3小鼠(人类干细胞重构的)和/或人类-MCT1敲入小鼠,验证异种GVHD中的数据。
SGM3小鼠(干细胞重构)。NOD/scid/IL2受体γ敲除小鼠(NSG)是用于人血细胞移植的标准小鼠株，特别是使用CD34+造血干细胞的长期移植。这种移植在血液中产生大量的人淋巴细胞，而髓细胞的数量要少得多。最近，一组人类细胞因子基因已被纳入该模型，(steel因子、GM-CSF和IL-3，又称"SGM3")。SGM3模型既支持高水平的淋巴细胞，也支持高水平的人类髓细胞，提供更完整的人类血细胞的移植。
人MCT1敲入(KI)小鼠。生成KI/KO小鼠模型，其中人SLC16A1(MCT1)cDNA在第1外显子中敲入，终止子阻止小鼠基因的表达，从而产生了小鼠SLC16A1基因的敲除。该模型提供了一个啮齿动物株，允许MCT1 Ab5.01结合内源性MCT1靶点。该小鼠株用于进行额外的狼疮相关研究，如将CD8耗竭的脾细胞从MCT1 KI小鼠转移到(B6 x DBA)F1小鼠中，该小鼠近似于在人类狼疮中观察到的许多表型(B细胞活化、抗ds DNA抗体、肾小球肾炎、干扰素-α基因标签)(参考文献90,91)。在一些实施方案中，本发明的抗MCT1 mAbs可抑制许多这些狼疮样表型。
MCT1健康对照和患者样品的人类狼疮疾病相关性
小鼠和人类的数据表明，MCT1的表达在慢性炎症的部位增加。例如，与健康供体相比，狼疮患者外周血中人浆细胞的MCT1细胞表面表达急剧增加(图20)。使用MCT1 Ab5.01和谱系分析研究狼疮患者细胞中MCT1的表达。对至少3名健康志愿者和3名狼疮患者进行研究。
确定MCT1在健康和狼疮细胞中的表达。为了确定MCT1在健康捐赠者和狼疮患者血液白细胞中的组成性表达，通过对MCT1(MCT1 Ab5.01)、CD45、CD16、CD56、CD14、CD138、CD8、CD19、CD4和CD3的流式染色，来表征各种免疫群体，包括T细胞、B细胞和NK细胞。抗Ki67和Cell Trace Violet用于此处和下文的细胞增殖。
测量MCT1 Ab5.01抑制T/B细胞增殖。为了确定MCT1 Ab5.01是否抑制T和B细胞增殖，纯化的T或B细胞分别用抗CD3/CD28珠+IL-2，或megaCD40L+IL-4+IL-2刺激。用CD3、CD4、CD8、CCR7、CD45RA、CD127和CD25(对于T细胞)以及CD19、CD20、CD38、CD27、IgD和IgG(对于B细胞)，鉴定各种细胞亚群。MCT1用商品抗体检测，其可以结合MCT1上的细胞内表位(这些抗体不与MCT1 Ab5.01竞争)。
MCT1 Ab5.01抑制狼疮中的淋巴细胞增殖。使用来自狼疮患者的PBMCs进行MCT1Ab5.01对淋巴细胞增殖的抑制。通过对MCT1(商品的)、CD3、CD4、CD8、CCR7、CD45RA、CD127、CD25和CD56的染色或单独地对CD19、CD20、CD38、CD27和IgG的染色，来鉴定各种T和B细胞群。
鉴于图20中呈现的数据，MCT1的表达可能与疾病严重程度、类型和/或进展阶段相关。可以对其他患者进行评价，以及研究其他细胞类型。
实施例13:食蟹猴中的非GLP Tox/PK/PD
测试材料的制造。生产6克MCT1 Ab5.01，分析该材料的纯度(SDS-PAGE，SEC-HPLC)和内毒素水平(LAL)。
非GLP Tox/PK/PD。在食蟹猴中进行4个阶段的研究，如表1所总结，包括剂量升级靶标介导的药物处置(TMDD)研究，然后是重复剂量毒性、单剂量PK和PD/TDAR研究。可进行睾丸和视网膜的生物分布和组织分析。
表1.NHP研究设计
Figure BDA0002570801830000971
研究1—靶标介导的药物处置(TMDD)的剂量升级评价。虽然MCT1不存在于人类红细胞(RBCs)上，但它存在于食蟹猴的RBC上(图18A)。因此，在2只动物上进行第一cyno研究，以确定克服RBC漏槽所需的剂量，并估计在没有RBC(食蟹猴但非人类血液中的一个大TMDD靶标)时的准确PK和毒性。在抗体结合RBC的NHP研究中，引起短暂性贫血并不罕见(参考文献92)。在这种贫血状态下，动物被再给药，将MCT1 Ab5.01的血清水平与典型抗体的预测PK进行比较。食蟹猴接受递增剂量的MCT1 Ab5.01，免疫表型/受体占用分析将建议在随后的食蟹猴研究中去除所有MCT1结合性RBC的最佳剂量。该分析的时间点是基于早期研究选择的(参考文献92)。这使得可以进行剂量的评估，估计MCT1 Ab5.01与人体中白细胞的结合。
TMDD评估确定剂量，以允许在食蟹猴中进行合理的、可实现的给药用于其他研究。由于MCT1在食蟹猴而非人RBC上的不寻常表达，在进行毒性和PK研究之前，首先进行在食蟹猴的RBC区室中的任何TMDD的评估。这通过如下方式实现：测量MCT1 Ab5.01的血清水平并将这些值与典型抗体的预测PK比较，同时监测贫血。
研究2-毒性。对于毒性测试，对3只动物进行为期2周的先导研究，以估计为1mpk的低剂量，这高于该药物的最低预期生物效应水平(MABEL)。此后，在4只动物上进行>10倍的更高剂量研究，以测量毒性。如果制剂允许，可以选择更大的剂量，如50mpk。取血时间表：第1天用药前、用药后10分钟、1小时和24小时、紧邻下一次用药前、和释放时(at release)或尸检时。每天进行临床测量和健康观察，每周进行总结。在标准时间点评价血液学、凝血、血清化学、胰岛素、生物标志物和受体占用率。对较高剂量处理的动物进行尸检，并用组织病理学进行组织分析。
在食蟹猴中确定MCT1 Ab5.01的NOAEL(未观察到损害作用水平)。NOAEL基于标准毒理学标准，或者，如果在毒性研究中没有观察到，则最高配制剂量水平作为NOAEL。在一些实施方案中，根据本发明的抗MCT1抗体不产生显著的毒性，以及不刺激显著的炎性细胞因子释放。
研究3-PK。为了确定MCT1 Ab5.01的清除率，在第1天给药前、给药后10分钟、1、24和168小时、以及3和4周，在给药1剂量后从3只食蟹猴中收集血样进行PK分析。用ELISA测定血清PK，检查数据的线性、Cmax、AUC、CL和Vd以及末端t1/2测定。抗药物抗体(ADA)反应也被评估。是在如描述的使用MCT1 Ab5.01对食蟹猴(CRL)进行超免疫后，产生夹心ELISA ADA测定所需的抗MCT1 Ab5.01抗体工具(参考文献93)。使用合格的ADA测定法比较用药前和用药后4周的血清。
本发明的抗体可具有正常的PK，对于人IgG约20天。如果PK较短，则探索已知的FcRn结合突变以改善mAb半衰期。
研究4--PD/TDAR。为了评价MCT1 Ab5.01的免疫调节作用，在两个剂量水平上进行T细胞依赖性抗体反应(TDAR)。共有8只动物(每个剂量2只雄性，2只雌性)接受单剂量的MCT1 Ab5.01静脉注射。另外4只动物(2雄，2雌)接受阴性对照。动物在第0天用KLH和MCT1Ab5.01免疫。在研究开始前和第7、10、14、21和28天采集血液样本，并通过ELISA分析抗KLH滴度。在一些实施方案中，这些滴度被本发明的抗MCT1抗体抑制在25-90％之间。
本发明的抗体可以具有支持皮下(SC)施用的效力。用人白细胞的NSG模型在1mpk时显示效果，对于SC，该靶标是≤2mpk。MCT1 Ab1在异种GVHD中具有～1mpk的MABEL。TDAR可以用于提供MCT1 Ab5.01在人类中更准确的MABEL。
实施例14.临床前和临床项目规划
以上描述的实验提供了关于MOA、功效和安全性的大量数据。
基于MCT1 Ab5.01在非人灵长类动物和人体组织中效果的汇编数据，开发使用抗MCT1抗体的治疗剂，包括用于狼疮的治疗剂。在健康志愿者中进行1期单次递增剂量试验，在狼疮患者中进行多次递增剂量试验。第二项研究计划包括多剂量安慰剂对照的随机化部分，以评估在有活动性(非肾脏)系统疾病的狼疮患者中治疗的临床疗效。
实施例15.体外MCT1功能测定：溴丙酮酸敏感性
HEK293T细胞用抗MCT1抗体或小分子MCT1抑制剂在37℃下预处理1小时。然后细胞与细胞毒性试剂3-溴丙酮酸(3-BrPy)在25到500μM的浓度孵育2到6小时。来自濒死细胞的ATP将使用商品活力试剂盒(ATPlite，PerkinElmer)在96孔板中定量，并使用发光测量活力。ATP的产生减少表示出抗体的功能性。阳性对照抗体是人源化前的小鼠或嵌合抗体。阴性对照细胞系是MCT1/CD147双敲除293T细胞。
使用此测定可鉴定功能性的，即拮抗性的抗MCT1抗体。
实施例16.在非人灵长类动物中的体内研究确认抗MCT1抗体的治疗效果和安全性
据报道，不表达MCT1的人类(无效突变体)没有表现出重大毒性。唯一已知的与不表达MCT1有关的异常包括诱导性酮症酸中毒，这只在青春期前的患者中观察到，在年长受试者中则无。没有明显的免疫表型的报道。此外，基于MCT1对免疫力的影响，本发明人推测这些受试者甚至可能有一些保护作用，免于发展为自身免疫性疾病或自身免疫。
为了进一步印证抗MCT1抗体用于人类治疗的安全性和有效性，我们给食蟹猴注射了剂量为50mpk的抗人MCT1抗体。如本实施例中所公开的，并由本文引用的附图所证实，30天后没有观察到毒性。
如图22所示，虽然MCT1参与各种功能，但有冗余的途径，避免了淋巴系统外的毒性。相比之下，MCT1在淋巴系统(B、T细胞)中具有唯一的转运途径，这允许本发明拮抗性MCT1抗体用于阻断该转运途径的功效及其在淋巴系统中的相关活动。
如图23所示，食蟹猴红细胞(RBC)表达高水平的MCT1。基于此，我们测试了拮抗性抗MCT1抗体在食蟹猴中的效果，特别是观察了抗MCT1抗体给药后对RBC的任何影响。同时，我们还确定了食蟹猴是否能耐受该抗体的治疗有效剂量。
由图24中的结果可证明的，食蟹猴能耐受Ab1以50mpk的重复给药，虽然给药后RBC的量会有一个初始的减少，但短时间后这会消除。这些结果表明，拮抗性抗MCT1抗体在灵长类动物中应该是安全和有效的。
如图25进一步显示，在食蟹猴中观察到的PK数据，尽管是初步的，但进一步表明抗MCT1抗体有充分的暴露，并且结果表明在Ab1剂量率>5mpk时，RBC漏槽是饱和的。
此外，进一步观察到，在施用抗MCT1抗体后30天，在良好暴露的情况下，具体而言是在以50mpk施用拮抗性抗MCT1抗体(Ab1)4个周剂量之后，没有观察到显著的的活体(in-life)毒性。特别是在我们用H&E评估的所有器官(心脏、肌肉、睾丸和眼睛)中没有看到不良组织学发现。
实施例17.小鼠条件性KO的毒理学评估
为了进一步评估拮抗性抗MCT1抗体作为治疗剂的潜在安全性和有效性，我们研究了小鼠MCT1条件性敲除的效果。
如图26所示，我们评估了他莫昔芬诱导的MCT1基因敲除小鼠的靶组织(肌肉，睾丸和眼睛)。我们研究的所有器官(除了睾丸例外)被发现是正常的，没有基因型相关的变化。如图27所示，MCT1基因敲除小鼠动物的睾丸较小，显微镜观察表明有一些精子细胞退化。
如图28中进一步显示的，在测定的各种靶组织中，即胸腺、脾脏、淋巴结、睾丸和视网膜，相对于对照管家基因(HPRT)的表达，MCT1 KO表型赋予了稳健的他莫昔芬诱导的MCT1表达的敲减。图29进一步显示了在敲除小鼠中观察到的睾丸的表型变化。如图所示，在所有MCT1基因敲除小鼠的睾丸中均观察到精细胞退化(缺乏晚期精细胞和精母细胞，管状细胞结构减少、空泡化和细胞碎片)。图30进一步比较了WT和MCT1 KO小鼠睾丸的组织学，并显示出敲除小鼠相对于野生型小鼠的精细胞退化增加。
实施例18.以前报道的抗MCT1抗体没有显示拮抗活性
有许多据称与MCT1结合的可商购抗体。基于申请人对这些抗体的筛选，没有一种抗体能与细胞表面表达的MCT1结合，而且就发明人知识之所及，这些可商购的抗MCT1抗体都不能调节或阻断MCT1的作用。
图31总结了不同的商购抗MCT1抗体的这些结果。图中包含使用所有可商购Abcam抗MCT1抗体(Mab和多克隆)的MFI(上图，流式细胞术，活细胞的细胞结合)和溴丙酮酸功能测定结果(下图，RLU)。(图中列出了产品目录号)。
从这些结果可以看出，这些可商购的抗MCT1抗体不能与表达MCT1的细胞结合，结果是对MCT1相关的活性没有引起任何影响。相比之下，在这些相同的检测中，本发明的抗MCT1抗体与MCT1细胞表面表达的MCT1结合(在不同的细胞上)，并有力地阻断MCT1的转运蛋白功能(即，其转运溴丙酮酸的能力)。对于发明人迄今测试过的每一种其它可商购的抗MCT1抗体，均已经观察到类似的结果(未示出)。
实施例19.示例性抗MCT1抗体(Ab1)的人源化
前述实施例中使用的大鼠抗MCT1抗体(Ab1或INX310)的可变重链和轻链多肽，使用已知方法进行人源化，以便提供用于人类治疗的人源化抗MCT1抗体。示例性的人源化重链和轻链如下所示。在所描述的序列中，可变的重链或轻链多肽用下划线标示，与之相关的恒定区域(IgG1恒定区域)用粗体标示。示例性序列包括Fc沉默的人IgG1/kappa骨架(人IgG1)(Uniprot P01857)，其经修饰以包含消除C1q和FcR结合的突变(E269R/K322A突变)。可变区域用下划线标示，恒定区域用粗体标示。在所描述的示例性人源化轻链和重链序列中没有显示信号序列。
人源化重链
>aMCT1_人源化_VH1_hIgG1_INXsilent_HC
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTI SRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>aMCT1_人源化_VH2_hIgG1_INXsilent_HC
QVQLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTI SRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>aMCT1_人源化_VH3_hIgG1_INXsilent_HC
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTI SRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>aMCT1_人源化_VH4_hIgG1_INXsilent_HC
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTI SRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>aMCT1_人源化_VH_AmbCons_hIgG1_INXsilent_HC
QVQLQESGPGLVQPTQTLSITCTVSGFSLTNYHLQWVRQTPGKGLEWMGFIRSSGNTEYNSEFKSRLSI SRDTSKNQVFLKMNSLKTEDTGVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>aMCT1_人源化_VH_AmbMod_hIgG1_INXsilent_HC
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWMGFIRSSGNTEYNSEFKSRLSI SRDTSKNQVYLQMNSLKTEDTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>aMCT1_人源化_VH_AmbAgg_hIgG1_INXsilent_HC
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWMGFIRSSGNTEYNSEFKSRLTI SKDTSKNQVYLQMNSLKTEDTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人源化轻链
>aMCT1_人源化_VL1_hKappa_LC
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPKLLIYNRHNLQSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>aMCT1_人源化_VL2_hKappa_LC
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPKLLIYNRHNLQSGVPSRFSGSGSGT DYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>aMCT1_人源化_VL3_hKappa_LC
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGT DFTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>aMCT1_人源化_VL4_hKappa_LC
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGT DYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>aMCT1_人源化_VL_AmbCons_hKappa_LC
NIQMTQSPSLLSASVGDRVTLSCKGSQNINNYLAWFQQKFGETPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGT DYTLTINSLQPEDVATYFCYQYSDGYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>aMCT1_人源化_VL_AmbMod_hKappa_LC
NIQMTQSPSLLSASVGDRVTISCKGSQNINNYLAWFQQKFGETPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGT DYTLTISSLQPEDVATYFCYQYSDGYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>aMCT1_人源化_VL_AmbAgg_hKappa_LC
NIQMTQSPSLLSASVGDRVTISCKGSQNINNYLAWFQQKFGQPPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGT DYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
根据本发明的示例性人源化抗MCT1抗体进一步列于下文。这些示例性人源化抗体包含共同轻链。序列中粗体标示的残基是预测的CDR(使用IMGT DomainGapAlign鉴定)。
大鼠Anti-MCT1抗体(Ab1或INX310)
>Rat Anti-MCT1 Ab_VH
Figure BDA0002570801830001031
>大鼠Anti-MCT1 Ab_VL
Figure BDA0002570801830001032
人源化Anti-MCT1抗体1(Ab2或INX352)
>人源化Anti-MCT1抗体1_VH
Figure BDA0002570801830001033
>人源化Anti-MCT1抗体1,2和3_VL
Figure BDA0002570801830001034
人源化Anti-MCT1抗体2(Ab3或INX356)
>人源化Anti-MCT1抗体2_VH
Figure BDA0002570801830001035
>人源化Anti-MCT1抗体1,2和3_VL
Figure BDA0002570801830001041
人源化Anti-MCT1抗体3(Ab4或INX364)
>人源化Anti-MCT1抗体3_VH
Figure BDA0002570801830001042
>人源化Anti-MCT1抗体1,2和3_VL
Figure BDA0002570801830001043
沉默IgG1(恒定)
·E269R/K322A
>IgG1_INX_Silent
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
实施例20.亲和力成熟的人源化抗MCT1抗体
前述实施例中公开的大鼠抗MCT1抗体的可变重链和轻链多肽(Ab1或INX310)经过人源化和亲和力成熟，以提供适合于人类治疗的人源化、亲和力成熟的抗MCT1抗体。这些抗体以高亲和力与人MCT1结合，在人类受试者中应当实质上是无免疫原性的。这些人源化且亲和力成熟的抗MCT1抗体(Ab5-Ab60)的VH和VL序列包含在紧邻在本申请权利要求之前的序列表中。与Ab1(INX310)一样，这些抗体可用于拮抗MCT1在体外或体内的作用，并且基于它们增加的亲和力，它们应当比Ab1(INX310)更有效力。图32包含比较根据本发明的不同抗MCT1抗体在溴丙酮酸功能测定中的拮抗活性的实验结果，即INX420、INX356、INX364、INX444和INX453。
图33和图34包含比较本文公开的不同抗MCT1抗体的可变重链区和可变轻链区序列的比对。特别地，这些图分别比对了Ab1(INX310)和3个由此衍生的人源化抗体，即Ab2(INX352),Ab3(INX356)和Ab4(INX364)，与衍生自Ab1的人源化的、亲和力成熟的抗MCT1抗体，即Ab23(INX420)、Ab47(INX444)和Ab56(INX453)的VH和VL序列。这些比对中的方框标示区域显示了框架残基的序列差异。CDR为粗体标示，并且显示与亲本抗体Ab1及其人源化变体，即Ab2(INX352)、Ab3(INX356)和Ab4(INX364)的CDR相比，这些亲和力成熟的抗体的CDR变化。
实施例21:其他高亲和力、功能性抗MCT1抗体的分离
在鸡中产生了额外的抗人MCT1抗体。用在其表面表达人MCT1蛋白的重组细胞对鸡进行免疫，以潜在地引发功能性抗人MCT1结合抗体的产生。从这些动物中获得血清并筛选出抗MCT1结合抗体。然后将编码所述抗体的核酸克隆并在宿主细胞中表达。这样的方法已经分离出超过100种推定的人MCT1结合抗体，包括具有包含在权利要求之前的序列表中的序列的抗人MCT1抗体Ab61至Ab95。
这些抗体被进一步筛选，以鉴定那些特异性结合表达MCT1的293细胞的抗体。图35A显示了抗MCT1抗体与MCT+293细胞的结合，其中一些序列包含在权利要求之前的序列表中。这些抗体在序列表中被标识为抗MCT1抗体Ab61至Ab95，并通过替代命名法("LM-XXX"或"MCT"名称)鉴定，其中一些标识在图35A和图35B中。从图35A中的结合结果可以看出，这些抗体中的许多抗体与表达MCT1的293细胞结合的亲和力与Ab1(INX310)相当。
被证明与293细胞表面表达的人MCT1特异性结合的相同抗MCT1抗体在功能测定中进一步筛选，筛选在前述溴丙酮酸毒素转运测定中阻断或拮抗MCT1作用的那些MCT1结合性抗体。如图35B中进一步显示的，这些功能筛选方法表明，许多这些抗人MCT1抗体在该测定中是功能性的，即，如由ATP-lite测定的，它们提供了免于细胞死亡的保护作用。这些另外的抗人MCT1抗体，与Ab1及从其衍生的在本文被鉴定为Ab2-Ab60的人源化亲和力成熟的变体的序列相比，具有序列多样性，即这些另外的抗MCT1抗体都不包含与Ab1-Ab60相同的CDR。
被称为Ab61-Ab95的这35种其它抗人MCT1抗体的序列可在本申请权利要求之前的序列表中找到。序列表包含重链和轻链CDR、可变重链和轻链多肽、重链和轻链多肽的氨基酸序列，并还包含编码这35种抗人MCT1抗体每一种的核酸序列。基于它们与Ab1相当的人MCT1结合亲和力、以及它们在溴丙酮酸毒素测定中的功能活性，可以预期这些抗体中的许多可用于开发其它治疗性抗MCT1抗体，例如，通过人源化和/或亲和力成熟。
由此产生的抗体将以高亲和力与人MCT1结合，并进一步应该在人类受试者中实质上是无免疫原性的。与Ab1(INX310)及从其衍生的人源化或亲和力成熟变体(Ab2-Ab60)一样，衍生自Ab61-Ab95的人源化和/或亲和成熟的抗MCT1抗体潜在地可用于拮抗MCT1在体外或体内的作用，并潜在地可用于治疗疾病，诸如炎性、自身免疫性和变应性病症、癌症、移植和GVHD以及其他病症，其中所述疾病中TR1细胞增加和/或T效应细胞减少、或MCT1活性降低是治疗上期望的。
此外，考虑可以将本文所公开的人源化或人源化亲和成熟的重链多肽和轻链多肽的不同组合联合起来以产生其它功能性(拮抗性)抗MCT1抗体。另外本文所公开的任何示例性人源化或人源化亲和成熟的重链和轻链多肽也可以进一步人源化，或可以通过已知的人源化方法从Ab1(INX310)或Ab2-Ab95中的任一种衍生出含有其他人源化可变重链和轻链多肽的其他人源化抗MCT1抗体，以获得适合于人类治疗的其他人源化抗MCT1抗体。另外这些人源化序列还可以进一步亲和力成熟，以获得具有增加的结合亲和力的抗MCT1抗体。此外这些人源化或亲和力成熟的抗体多肽可以被整合到多特异性结合多肽中，其可以是不同的形式，诸如双特异性抗体、BsAbs、双可变结构域-IgG(DVD-Ig)diabody抗体、以及其它公知的多特异性抗体形式。
这些人源化的重链多肽和轻链多肽可进一步结合不同的人IgG恒定域，例如，人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定域或其结构域或片段。如果需要，这些恒定域可以被修饰以削弱或增强至少一种效应子功能，诸如FcR结合，例如,FcγR(IgG),FcεRI(IgE),FcαRI(IgA),FcμR(IgM)和FcδR(IgD)结合、补体结合、ADCC活性、CDC活性、FcRN结合，等等。示例性的"效应子功能"包括但不限于Clq结合；补体依赖性细胞毒作用(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)；吞噬作用；下调细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)，等等。这样的效应子功能通常需要Fc区与结合结构域(例如，抗体可变域)的结合，并且可以使用本领域已知的用于评估这样的抗体效应子功能的各种检测方法进行评估。
这些示例性的人源化和人源化亲和力成熟的序列旨在作为示例，因为其它人源化或亲和力成熟方法可以用于从本文所公开的Ab1或其它抗MCT1抗体衍生替代性人源化重和轻链多肽，其可用于产生用于人类或动物治疗的人源化抗MCT1抗体。本发明特别涵盖与Ab1-Ab95中任一种包含相同CDR的抗MCT1抗体。
实施例22.根据本发明的不同抗MCT1抗体的效力
根据本发明的两种抗MCT1抗体，即INX420和INX310的效力在测定中进行了比较，确定不同抗体浓度下这些抗体对CD4+和CD8+T细胞增殖的影响。如图36A-D所示，这两种抗体均抑制了CD4+和CD8+T细胞的增殖。在这两种抗体中，亲和力成熟的抗体INX420更强效地抑制CD4+和CD8+T细胞的增殖，并且在这些功能检测中具有个位数nM的效力。
这些结果表明，这种源自Ab1亲和力成熟而得到的抗MCT1抗体与亲本抗体Ab1一样，能够强效地抑制CD4+和CD8+T细胞的增殖，与根据本发明的另一种抗MCT1抗体(Ab1)相当。
实施例23.抗MCT1抗体对Tr1细胞的体外效应
根据本发明的抗MCT1抗体在体外试验中进一步评价其对Tr1细胞的影响。用于生成Tr1细胞的方法和使用Tr1细胞的测定试验描述如下。
Tr1细胞的体外生成和Tr1功能测定
在体外使用CD3/CD28刺激(+INX420)新鲜总hPBMC，产生Tr1细胞，用抗MCT1抗体在体外功能测定试验中测试这些细胞，使用的方法和材料如下。
试剂
1. 96孔组织培养平底板(Falcon，目录号353072)
2. 50mL试剂储液槽(Costar，目录号4870)
3.PBS(Corning，目录号21-040-CV)
4.培养基-RPMI 1640(HyClone，目录号SH30096.01)，10％人血清，1x青霉素/链霉素/谷氨酰胺，10mM HEPES
5.Jurkat培养基-RPMI 1640(HyClone，目录号SH30096.01)，10％FBS，1x青霉素/链霉素/谷氨酰胺，10mM Hepes
6.抗CD3-克隆OKT3(Bio X Cell.目录号：BE0001-2)
7.抗CD28-克隆15E8(Miltenyi Biotec,目录号130-093-375)
8.单采血液成分术Cone Blood
9.Histopaque 1077
10.INX420 lot 17069-8129269
11.Versene 1x(Gibco,目录号15040-066)
试剂 贮存浓度 终浓度(1X)
a-CD3(OKT3) 5.46mg/ml,lot 5480/1215 1ug/ml
a-CD28 6.16mg/ml 2ug/ml
INX420 10.03mg/ml 10ug/ml
第-1/0天：用抗CD3包被板
1.OKT3储存液在PBS中稀释到1ug/ml
2.向96孔平底板的每孔中加入100ul的1ug/ml OKT3
3.4℃孵育过夜或37℃孵育1小时。
第0天：新鲜人PBMC的刺激
1.从Cone Blood中准备新鲜的PBMC
·在无菌条件下，将血液转移到50ml falcon，用PBS稀释到30ml。
·慢慢将13毫升Histopaque 1077层铺到稀释的血液下方。
·室温850xg离心20分钟，温和加速(1/5或3/9)并不制动。
·从血浆/ficoll界面收集单核细胞并重悬在50毫升的PBS中，400xg离心5分钟。
·计数细胞(1:10稀释)，并以200K/100ul(2*106/ml)制备hPBMC
2.在RPMI中清洗OKT3包被板2次
·从板中移去PBS
·立即向孔中加入200ul的RPMI。
·移去培养基，向孔中加入200ul的RPMI。
3.取OKT3包被板，并移除剩余的RPMI。在无菌纱布覆盖的纸巾上吸干板，确保移除任何剩余的培养基。
4.在RPMI中以2X准备所有试剂和mAb，每孔加入100ul。
5.在100ul中加入200k细胞，并在37℃/5％CO2下孵育多达7天。
如果细胞的培养时间超过7天，则用20ul的含有10X mAb(CD28，INX420)的培养基补充培养。
Tr1表型分析
源自动物血清中的Tr1细胞经根据本发明的抗MCT1抗体处理，进行如下表型分析：
材料和方法：
-取100的总血量用于分析
-血液使用Stain-1wash protocol进行染色以允许用下面的Ab组进行绝对细胞计数，然后加入1x FACS裂解缓冲液(BD Bioscience，#349202)；全血用10x抗体(如下所示)孵育，30分钟后，按照制造商的说明，在大体积(至少6倍)的1x裂解缓冲液中进行血液裂解；或者血液先用ACK(10分钟)进行裂解，用PBS洗涤，并用抗体混合液进行染色，具体如下表所示。
流式组如下(用于血液ALC)
FACS
Figure BDA0002570801830001081
FACS(用于人Tr1表型分析)
Figure BDA0002570801830001082
Figure BDA0002570801830001091
下面列出的流式抗体另外用于表面表征推定的Tr1细胞表面表达的标志物。
Figure BDA0002570801830001092
下面列出的流式抗体另外用于推定的Tr1细胞在细胞内表达的标记物的细胞内表征。
Figure BDA0002570801830001093
第7天：收集细胞进行FACS和抑制测定
1.从200ul培养基(池孔)中收集细胞
2.通过每孔加入150ul无菌Versene，在37℃下孵育10分钟，与之前收集的培养基合并，从板上解离剩余的细胞。
3.细胞在50ul的抗体混合物(用于Tr1纯度检查的组)中室温下摇动(400rpm)染色30分钟，或继续进行抑制测定。
使用生成的Tr1细胞进行体外测定
根据本发明的抗MCT1抗体的作用可以在体外试验中使用如上所产生的T1r1细胞，在测定试验中，例如下面列出的测定试验中，进行评价。
1.％活力
2.TIGIT+PD1+细胞的数量和％
3.用人CD3+(或TIGIT+PD1+)细胞进行抑制测定。
4.第6/7天：抑制新鲜人PBMC或T细胞(包括Jurkat)的增殖。
可用于所述测定试验的示例性试剂和材料描述如下。
试剂和材料
·CD3/CD28 Dynabeads(Life Technologies,目录#11131D)
·Cell Trace Violet(Invitrogen#C34557)
·应答细胞：PBMC、T细胞、Jurkat细胞。
试剂 储存浓度 最终浓度(1x)
Cell Trace Violet 5mM 5uM
Dynabeads 2.5ul/孔
结果
如图37A-D中的结果所示，在CD3/CD28刺激后，用示例性的抗MCT1抗体INX420对PMBC进行体外处理，引起PD1+TIGIT+细胞的数量实质性增加。观察到的结果也与小分子MCT1抑制剂在相同的体外试验中引起的结果相当。
如另外由图38中的结果所示，这些体外实验进一步揭示了，作为用相同的示例性抗MCT1抗体INX420处理的结果而产生的PD1+TIGIIT+Tr1细胞，能强力地抑制PMBCs的增殖。
由图39中的体外实验结果进一步表明，该实验评价了在抗MCT1抗体和IL-10拮抗剂存在下PMBC的增殖情况，证明了用IL-10拮抗剂(如抗IL10RB)阻断IL-10信号传导并不干扰Tr1介导的对PMBC增殖的抑制，这种抑制是由抗MCT1抗体处理引起。
上述实验结果具有临床意义，因为Tr1细胞频次/功能及其数量的缺陷已在一些自身免疫性和炎症性疾病中被证明(在临床前和临床模型中)，表明产生IL-10的Tr1细胞与疾病保护相关，并且导致体内Tr1细胞提升的药物在治疗/预防T细胞介导的疾病(例如，自身免疫性和炎症性病症)和同种异体移植中具有潜在的应用。
实施例24.抗-MCT1抗体在异种-GvHD测定中的效果
根据本发明的示例性抗MCT1抗体，即INX420、INX413和INX310在GVHD的体内模型，即异种GvHD模型中进一步评价。
异种GvHD模型
在此GvHD动物模型中，雄性NSG小鼠用亚致死性照射(250rad)处理，之后这些小鼠接受2.5x106个新鲜人PBMC(第0天)。第一剂量的抗人MCT1与细胞组合并通过静脉注射。后续处理时间表是每周(第7天，14天和21天，IP)。抗MCT1(INX420或其他)和人IgG1对照的剂量均为10mg/Kg(或按规定)。
对于再挑战实验，之前用抗MCT1处理的(第0,7,14,21天)NSG小鼠接受同一供体的先前冷冻的人PBMC的2.5x106的第二剂量(第42天)。监测这些小鼠的生存和体重下降，没有额外的抗体处理，并与接受相同供体PBMCs的NSG小鼠新队列进行比较。
绝对淋巴细胞计数(ALC)
100ul的总血用于分析：血液使用Stain-1wash protocol进行染色以允许用下面的Ab组进行绝对细胞计数，然后加入1x FACS裂解缓冲液(BD Bioscience，#349202)；全血用10x抗体(如下所示)孵育，30分钟后，按照制造商的说明，在大体积(至少6倍)的1x裂解缓冲液中进行血液裂解；或者血液先用ACK(10分钟)进行裂解，用PBS洗涤，并用抗体混合液进行染色，具体如下表所示。
离体抑制实验
人源化NSG小鼠(用抗MCT1处理)在第67天或指定的其他日期处死，从脾脏中制备单细胞悬液，随后是基于珠子的hCD3+细胞富集。将分离出的细胞与或不与不同供体的新鲜人PBMC一起铺板，在经典的抗CD3/抗CD28刺激(dynabeads，Life Technologies，#11131D)条件下72-96小时，随后氚化胸腺嘧啶脉冲16小时以评估增殖。
表：抗体混合物
Figure BDA0002570801830001111
另外，新鲜PBMC增殖的抑制是按照Cell TraceTMViolet染料稀释液的减少来测量的。为此，用Cell TraceTMViolet细胞增殖试剂盒(C34557,Thermo Fisher)对应答者PBMC进行细胞标记，用于流式细胞术。然后将应答者PBMC与不同数量的Tr1细胞共培养96小时。Tr1细胞被定义为TIGIT+PD1+细胞，使用磁珠技术(Miltenyi Biotech)分离。
离体Tr1存活
人源化NSG小鼠(用抗MCT1处理)在第32天或指定的其他日期处死，从脾脏中制备单细胞悬液，随后是基于珠子的hCD3+细胞富集。将分离出的细胞与分析物(见上表)一起铺板，以评估Tr1的存活。
结果
如图40A-D和图41A-C中的结果所示，这些实验显示，与用对照抗体处理的NSG小鼠相比，在异种GvHD模型中用根据本发明的示例性抗MCT1抗体即INX420、INX413和INX310处理导致了CD3+,CD4+和CD8+效应T细胞的数量显著减少。进一步地这两种抗MCT1抗体都引起了Tr1细胞数量的显著增加。
进一步如图42A-B中的实验结果所示，当这些动物在第42天用来自同一供体的PMBC再挑战时，这些相同的示例性测试抗MCT1抗体进一步在异种GvHD模型中引起了长期保护和耐受。
如图43和图44中包含的生物标志物结合结果进一步显示的，TIGIT和PD1是Tr1细胞的推定生物标志物，因为这些生物标志物在异种GvHD模型中超过75％的人类T细胞上表达。如图45中的实验结果进一步显示，Tr1细胞表达高水平的颗粒酶B，但不表达FOXP3或Blimp1。
图46A-C中的实验进一步表明，在第14天这些NSG小鼠含有许多效应细胞，还表明hCD3+细胞的增殖被示例性的抗MCT1抗体(INX420)抑制。图47A-B中的实验结果也显示，Tr1细胞能强力抑制hCD3+细胞和总PMBC的增殖。
图48示意性地显示了异种GvHD模型中Tr1细胞生成的动力学。具体地该图显示抗MCT1抗体可减少T效应期。图49A-B显示离体Tr1生存因素。图49B进一步显示，杀伤靶细胞并不是Tr1细胞引起这种抑制的机制，并且Tr1细胞与靶细胞共培养后可以存活，但如果单独培养则会死亡。图49A所示的实验结果显示，抗TIGIT和PVR配体不改善离体Tr1的存活。相反如图49A中进一步显示，IL-2、IL-7和IL-15以剂量依赖性的方式增强了Tr1的离体存活，Tr1细胞存活率升高至约75％。
实施例25:小分子MCT1拮抗剂对酮症的影响
基于MCT1抑制剂对酮症的影响，进一步进行实验评估MCT1抑制剂对安全性的影响。由图50A-B中的实验结果可知，小分子MCT1抑制剂(SMi)加强了饥饿8-24小时引发的酮症；SMi驱动的酮症在饥饿时进展为低血糖，SMi处理可加强饥饿驱动的酮症和低血糖。
相反，图51A-B中的实验结果显示，在SMi存在和不存在的情况下，24小时的饥饿并没有引发酮症酸中毒。相反，本发明人只观察到轻微的饥饿依赖性pH值降低(从7.3到7.1)，并且只有在高剂量的SMi下才有轻微的额外降低(约0.05)。
实施例26.通过丙氨酸扫描实验对功能性抗MCT1抗体的表位进行表征
为了确定构成本发明功能性抗MCT1抗体结合的表位(一个或多个)的MCT1残基，进一步进行了丙氨酸扫描实验。具体地，在靶蛋白MCT1的模型结构上可视化了4种示例性功能性抗人MCT1抗体(INX444、INX420、LM183和LM186)所结合的表位。这4种抗体被选择为本文所鉴定的代表性抗体。特别是这些抗体中的2个是小鼠抗人MCT1抗体INX310(Ab1)的亲和力成熟变体，另外2个是鸡抗人MCT1抗体。这4种抗体都是功能性的，即都能阻断人MCT1功能。
通过高通量流式细胞术，确定每个测试Fab与构建的丙氨酸扫描文库中的每个突变克隆的结合，一式两份。对于每个点，从原始数据中减去背景荧光，然后相对于与WT靶蛋白的Fab反应性将其归一化。对于每个突变克隆，平均结合值被绘制为表达的函数(由对照反应性表示)。为了确定初步的主要关键克隆，>70％WT结合到对照MAb或Fab以及<15％WT结合到测试Fabs被应用为阈值。没有达到设定的阈值但其结合活性降低和接近关键残基的二级克隆，进一步提示突变的残基可能是抗体的一部分。
下表包含了用于从所有4个测试的抗人MCT1抗体衍生的Fab(s)与靶标(人MCT1蛋白)结合的确定的关键残基。关键残基是指其突变后与特异性抗体反应性最低的残基。经过验证的关键残基代表了其侧链对抗体-表位相互作用作出最大能量贡献的氨基酸(Bogan,A.A.和Thorn,K.S.(1998).“Anatomy of hot spots in protein interfaces”.J.Mol.Biol.280,1-9.；Lo Conte,L.,Chothia,C.,和Janin,J.(1999).The atomicstructure of protein-protein recognition sites.J.Mol.Biol.285,2177-2198.,1999)；因此，这些残基可能是结合表位的主要能量贡献者。
Figure BDA0002570801830001131
下表进一步包含了已确定的构成这4种抗体的MCT1表位的关键残基的平均结合反应性(和范围)。Fab结合的关键残基(用红色勾勒)是其突变对于与测试Fabs的结合为阴性，但对于与对照Fabs的结合为阳性的残基。额外的次要残基(用蓝色勾勒)被鉴定为不符合阈值准则，但其降低的结合活性以及与关键残基的接近性表明它们可能是抗体表位的一部分。
Figure BDA0002570801830001141
在目标MCT1蛋白的模型结构上，进一步可视化了参与这4种示例性功能性抗人MCT1抗体(INX444、INX420、LM183和LM186)结合的关键残基和次要残基。图52显示了包含通过丙氨酸扫描鉴定的这4种不同抗体的预测抗MCT1表位的残基。可以看出，构成所有这4种抗体的表位的残基都包含在人MCT1的相同胞外区域中，这提示本文所公开的许多或所有功能性抗人MCT1抗体可能结合人MCT1上相同或重叠的表位。图53和图54进一步绘制了由4种测试的示例性抗MCT1抗体结合的特定人MCT1残基。
基于表位分析，本发明至少包括任何分离的抗体或其抗原结合片段，其与选自以下的人MCT1上的表位结合：
(x)包含残基T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，K297，G417，I47和D418中的一个或多个的表位；
(xi)包含最少三个残基的表位，其中至少一个，两个或所有三个所述残基包含选自T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，G417，I47和D418的残基；
(xii)包含三个残基的表位，其中至少一个，两个或所有三个所述残基包含T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，G417，I47和D418；
(xiii)包含三至六个残基的表位，其中一个，两个，三个，四个，五个或六个所述残基包括T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，G417，I47和D418；
(xiv)包含残基T41，S285和S286的至少一个，两个或全部三个的表位；
(xv)包含T41的表位；
(xvi)包含S286的表位；
(xvii)包含S285的表位；
(xviii)包含H292的表位；
(xix)包含残基T41、S285、S286、Y287、G417和D418的表位；
(xx)包含残基T41、S285和S286的表位；
(xxi)包含残基T41、I47、S285、S286、G417和D418的表位，
(xxii)包含残基E46、K289和H292的表位；
(xxiii)包含残基K297、Y293和H292的表位；
(xxiv)包含一个或多个非人MCT1上相应残基的表位，所述非人MCT1选自啮齿动物(例如小鼠、大鼠、豚鼠)，兔，鸡，非人灵长类动物(例如食蟹猴、黑猩猩、猩猩)，牛，绵羊，犬和猫；
其中可选地，存在于所述表位中的残基通过使用丙氨酸扫描来鉴定。
基于同样的表位分析，本发明至少还包括任何分离的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段与上述人MCT1上的表位结合，所述表位可进一步包含以下人MCT1残基中的任何一个，所述残基包含在人MCT1的1-6环中，或包含在非人MCT1的1-6环区域中的相应残基，所述非人MCT1为例如啮齿动物或非人灵长类MCT1：
(i)残基P37、I40、K45、E48和T55(环1)中的一个或多个；
(ii)残基Q111(环2)；
(iii)残基Q166(环3)；
(iv)残基L284、E296、S298(环4)中的一个或多个；
(v)残基Y353(环5)；
(vi)残基Y419、T422(环6)中的一个或两个；和/或
(vii)上述的任意组合。
实施例27.抗人MCT1抗体(INX444)与小鼠MCT1的结合
本文公开的至少功能性的一种抗人MCT1抗体(INX444)也与小鼠MCT1结合。这进一步表明，与本发明抗人MCT1抗体相互作用的、人MCT1中的区域或人MCT1蛋白上的表位或残基，可能在不同物种的MCT1蛋白中是保守的，例如，人和小鼠以及可能地其他物种如非人灵长类动物。
而且这种与小鼠MCT1结合的抗人MCT1抗体还进一步被证明，可以保护表达小鼠MCT1的转染子免受溴丙酮酸的毒性作用。具体如图55中所示，当以2种不同的抗体浓度(低者10ug/ml；高者100ug/ml)测试时，该相同的抗体保护表达小鼠MCT1的转染子免受溴丙酮酸的毒性作用，类似于阳性对照AZ3965(小分子MCT1抑制剂，绿色)。
相比之下，2种其他测试的功能性抗人MCT1抗体，即INX420和INX438在相同的实验中没有阻断小鼠MCT1功能(基线)。(注意，单独的培养基对照没有达到零，因为在150uM的溴丙酮酸，转染子细胞不会在该溴丙酮酸浓度被全部杀死)。
这一结果进一步证实了，人MCT1蛋白上与主题抗人MCT1抗体相互作用的功能表位或残基可能在不同物种的MCT1蛋白中是保守的，这提示主题抗人MCT1抗体可用于竞争性结合试验，以筛选其他功能抗MCT1抗体，即，那些拮抗、抑制或阻断人MCT1的一种或多种活性的抗体，或那些拮抗、抑制或阻断其直系同源物(例如，啮齿动物或非人灵长类MCT1蛋白)的一种或多种活性的抗体。
参考文献
本列表中的参考文献通过引用并入，并且在以上说明书中通过参考文献编号引用。
1.Carpenter L,Halestrap AP.The kinetics,substrate and inhibitorspecificity of the lactate transporter of Ehrlich-Lettre tumour cells studiedwith the intracellular pH indicator BCECF.The Biochemical Journal.1994；304(Pt3):751-60.Epub 1994/12/15.PubMed PMID:7818477；PMCID:PMC1137398.
2.Jackson VN,Halestrap AP.The kinetics,substrate,and inhibitorspecificity of the monocarboxylate(lactate)transporter of rat liver cellsdetermined using the fluorescent intracellular pH indicator,2',7'-bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein.The Journal of BiologicalChemistry.1996；271(2):861-8.Epub 1996/01/12.PubMed PMID:8557697.
3.Araki K,Myers DK.Aerobic Glycolysis of X-Irradiated Thymocytes.CanJ Biochem Physiol.1963；41:2157-69.Epub 1963/10/01.PubMed PMID:14083980.
4.Ardawi MS,Newsholme EA.Glutamine metabolism in lymphocytes of therat.The Biochemical Journal.1983；212(3):835-42.Epub 1983/06/15.PubMed PMID:6882397；PMCID:PMC1153161.
5.Frauwirth KA,Riley JL,Harris MH,Parry RV,Rathmell JC,Plas DR,Elstrom RL,June CH,Thompson CB.The CD28 signaling pathway regulates glucosemetabolism.Immunity.2002；16(6):769-77.PubMed PMID:12121659.
6.Pearce EJ,Everts B.Dendritic cell metabolism.Nature ReviewsImmunology.2015；15(1):18-29.doi:10.1038/nri3771.PubMed PMID:25534620；PMCID:PMC4495583.
7.Takeshima Y,Iwasaki Y,Okamura T,Fujio K,Yamamoto K.The metabolicregulation in immune cells and pathogenesis of systemic lupus erythematosusapproximately toward new therapeutic applications approximately.Nihon RinshoMeneki Gakkai Kaishi.2017；40(1):12-20.Epub 2017/05/26.doi:10.2177/jsci.40.12.PubMed PMID:28539549.
8.Pucino V,Bombardieri M,Pitzalis C,Mauro C.Lactate at the crossroadsof metabolism,inflammation,and autoimmunity.European Journal ofImmunology.2017；47(1):14-21.Epub 2016/11/25.doi:10.1002/eji.201646477.PubMedPMID:27883186.
9.Mak TW,Grusdat M,Duncan GS,Dostert C,Nonnenmacher Y,Cox M,BinsfeldC,Hao Z,Brustle A,Itsumi M,Jager C,Chen Y,Pinkenburg O,Camara B,Ollert M,Bindslev-Jensen C,Vasiliou V,Gorrini C,Lang PA,Lohoff M,Harris IS,Hiller K,Brenner D.Glutathione Primes T Cell Metabolism forInflammation.Immunity.2017；46(4):675-89.Epub 2017/04/20.doi:10.1016/j.immuni.2017.03.019.PubMed PMID:28423341.
10.Ma EH,Bantug G,Griss T,Condotta S,Johnson RM,Samborska B,MainolfiN,Suri V,Guak H,Balmer ML,Verway MJ,Raissi TC,Tsui H,Boukhaled G,Henriques daCosta S,Frezza C,Krawczyk CM,Friedman A,Manfredi M,Richer MJ,Hess C,JonesRG.Serine Is an Essential Metabolite for Effector T Cell Expansion.CellMetab.2017；25(2):345-57.Epub 2017/01/24.doi:10.1016/j.cmet.2016.12.011.PubMedPMID:28111214.
11.Jellusova J,Cato MH,Apgar JR,Ramezani-Rad P,Leung CR,Chen C,Richardson AD,Conner EM,Benschop RJ,Woodgett JR,Rickert RC.Gsk3 is ametabolic checkpoint regulator in B cells.Nature Immunology.2017；18(3):303-12.Epub 2017/01/24.doi:10.1038/ni.3664.PubMed PMID:28114292；PMCID:PMC5310963.
12.Gnanaprakasam JNR,Sherman JW,Wang R.MYC and HIF in shaping immuneresponse and immune metabolism.Cytokine Growth Factor Rev.2017；35:63-70.Epub2017/04/02.doi:10.1016/j.cytogfr.2017.03.004.PubMed PMID:28363691.
13.Mah AY,Cooper MA.Metabolic Regulation of Natural Killer Cell IFN-gamma Production.Critical reviews in immunology.2016；36(2):131-47.Epub 2016/12/03.doi:10.1615/CritRevImmunol.2016017387.PubMed PMID:27910764；PMCID:PMC5335907.
14.Loftus RM,Finlay DK.Immunometabolism:Cellular Metabolism TurnsImmune Regulator.The Journal of Biological Chemistry.2016；291(1):1-10.Epub2015/11/05.doi:10.1074/jbc.R115.693903.PubMed PMID:26534957；PMCID:PMC4697146.
15.Keating SE,Zaiatz-Bittencourt V,Loftus RM,Keane C,Brennan K,FinlayDK,Gardiner CM.Metabolic Reprogramming Supports IFN-gamma Production byCD56bright NK Cells.Journal of Immunology.2016；196(6):2552-60.Epub 2016/02/14.doi:10.4049/jimmunol.1501783.PubMed PMID:26873994.
16.Cretenet G,Clerc I,Matias M,Loisel S,Craveiro M,Oburoglu L,KinetS,Mongellaz C,Dardalhon V,Taylor N.Cell surface Glut1 levels distinguishhuman CD4 and CD8 T lymphocyte subsets with distinct effector functions.SciRep.2016；6:24129.Epub 2016/04/14.doi:10.1038/srep24129.PubMed PMID:27067254；PMCID:PMC4828702.
17.Adamia N,Jorjoliani L,Khachapuridze D,Katamadze N,ChkuaseliN.Allergic Diseases and Asthma in Adolescents.Georgian Med News.2015(243):58-62.PubMed PMID:26087732.
18.Yang Z,Matteson EL,Goronzy JJ,Weyand CM.T-cell metabolism inautoimmune disease.Arthritis Research&Therapy.2015；17:29.Epub 2015/04/19.doi:10.1186/s13075-015-0542-4.PubMed PMID:25890351；PMCID:PMC4324046.
19.Pollizzi KN,Patel CH,Sun IH,Oh MH,Waickman AT,Wen J,Delgoffe GM,Powell JD.mTORC1 and mTORC2 selectively regulate CD8(+)T celldifferentiation.The Journal of Clinical Investigation.2015；125(5):2090-108.Epub 2015/04/22.doi:10.1172/JCI77746.PubMed PMID:25893604；PMCID:PMC4463194.
20.Medzhitov R.Bringing Warburg to lymphocytes.Nature ReviewsImmunology.2015；15(10):598.Epub 2015/09/26.doi:10.1038/nri3918.PubMed PMID:26403193.
21.Chen H,Yang T,Zhu L,Zhao Y.Cellular metabolism on T-celldevelopment and function.International Reviews of Immunology.2015；34(1):19-33.Epub 2014/04/09.doi:10.3109/08830185.2014.902452.PubMed PMID:24708060.
22.Matarese G,Colamatteo A,De Rosa V.Metabolic fuelling of proper Tcell functions.Immunology Letters.2014；161(2):174-8.Epub 2013/12/25.doi:10.1016/j.imlet.2013.12.012.PubMed PMID:24365064.
23.Kugelberg E.Dendritic cells:TLR agonists trigger rapid metabolicchanges.Nature Reviews Immunology.2014；14(4):209.Epub 2014/03/26.doi:10.1038/nri3652.PubMed PMID:24662378.
24.Green DR,Rathmell J.Sweet nothings:sensing of sugar metabolitescontrols T cell function.Cell Metab.2013；18(1):7-8.Epub 2013/07/05.doi:10.1016/j.cmet.2013.06.009.PubMed PMID:23823473；PMCID:PMC3749232.
25.Wang R,Green DR.Metabolic checkpoints in activated T cells.NatureImmunology.2012；13(10):907-15.Epub 2012/09/20.doi:10.1038/ni.2386.PubMedPMID:22990888.
26.Marko AJ,Miller RA,Kelman A,Frauwirth KA.Induction of glucosemetabolism in stimulated T lymphocytes is regulated by mitogen-activatedprotein kinase signaling.PloS One.2010；5(11):e15425.Epub 2010/11/19.doi:10.1371/journal.pone.0015425.PubMed PMID:21085672；PMCID:PMC2978105.
27.Jacobs SR,Michalek RD,Rathmell JC.IL-7 is essential forhomeostatic control of T cell metabolism in vivo.Journal of Immunology.2010；184(7):3461-9.Epub 2010/03/03.doi:10.4049/jimmunol.0902593.PubMed PMID:20194717；PMCID:PMC2980949.
28.Maciver NJ,Jacobs SR,Wieman HL,Wofford JA,Coloff JL,RathmellJC.Glucose metabolism in lymphocytes is a regulated process with significanteffects on immune cell function and survival.Journal of LeukocyteBiology.2008；84(4):949-57.Epub 2008/06/26.doi:10.1189/jlb.0108024.PubMedPMID:18577716；PMCID:PMC2638731.
29.Fox CJ,Hammerman PS,Thompson CB.Fuel feeds function:energymetabolism and the T-cell response.Nature Reviews Immunology.2005；5(11):844-52.Epub 2005/10/22.doi:10.1038/nri1710.PubMed PMID:16239903.
30.Cham CM,Gajewski TF.Glucose availability regulates IFN-gammaproduction and p70S6 kinase activation in CD8+effector T cells.Journal ofImmunology.2005；174(8):4670-7.Epub 2005/04/09.PubMed PMID:15814691.
31.Rathmell JC,Elstrom RL,Cinalli RM,Thompson CB.Activated Aktpromotes increased resting T cell size,CD28-independent T cell growth,anddevelopment of autoimmunity and lymphoma.European Journal of Immunology.2003；33(8):2223-32.Epub 2003/07/29.doi:10.1002/eji.200324048.PubMed PMID:12884297.
32.Brand K,Netzker R,Aulwurm U,Hermfisse U,Fabian D,Weigert C,Schaefer D,Hamm-Kuenzelmann B.Control of thymocyte proliferation via redox-regulated expression of glycolytic genes.Redox Rep.2000；5(1):52-4.Epub 2000/07/25.doi:10.1179/rer.2000.5.1.52.PubMed PMID:10905547.
33.Finlay DK.Regulation of glucose metabolism in T cells:new insightinto the role of Phosphoinositide 3-kinases.Frontiers in Immunology.2012；3:247.Epub 2012/08/15.doi:10.3389/fimmu.2012.00247.PubMed PMID:22891069；PMCID:PMC3413010.
34.Halestrap AP,Meredith D.The SLC16 gene family-from monocarboxylatetransporters(MCTs)to aromatic amino acid transporters and beyond.PflugersArch.2004；447(5):619-28.doi:10.1007/s00424-003-1067-2.PubMed PMID:12739169.
35.Halestrap AP.Monocarboxylic acid transport.Compr Physiol.2013；3(4):1611-43.doi:10.1002/cphy.c130008.PubMed PMID:24265240.
36.Halestrap AP.The SLC16 gene family-structure,role and regulationin health and disease.Mol Aspects Med.2013；34(2-3):337-49.doi:10.1016/j.mam.2012.05.003.PubMed PMID:23506875.
37.Halestrap AP.The monocarboxylate transporter family--Structure andfunctional characterization.IUBMB Life.2012；64(1):1-9.doi:10.1002/iub.573.PubMed PMID:22131303.
38.Halestrap AP,Wilson MC.The monocarboxylate transporter family--role and regulation.IUBMB Life.2012；64(2):109-19.doi:10.1002/iub.572.PubMedPMID:22162139.
39.Rusu V,Hoch E,Mercader JM,Tenen DE,Gymrek M,Hartigan CR,DeRan M,von Grotthuss M,Fontanillas P,Spooner A,Guzman G,Deik AA,Pierce KA,Dennis C,Clish CB,Carr SA,Wagner BK,Schenone M,Ng MCY,Chen BH,Consortium M,ConsortiumSTD,Centeno-Cruz F,Zerrweck C,Orozco L,Altshuler DM,Schreiber SL,Florez JC,Jacobs SBR,Lander ES.Type 2 Diabetes Variants Disrupt Function of SLC16A11through Two Distinct Mechanisms.Cell.2017；170(1):199-212 e20.Epub 2017/07/01.doi:10.1016/j.cell.2017.06.011.PubMed PMID:28666119.
40.Frank H,Groger N,Diener M,Becker C,Braun T,Boettger T.Lactaturiaand loss of sodium-dependent lactate uptake in the colon of SLC5A8-deficientmice.The Journal of Biological Chemistry.2008；283(36):24729-37.doi:10.1074/jbc.M802681200.PubMed PMID:18562324；PMCID:PMC3259809.
41.Lewis IA,Campanella ME,Markley JL,Low PS.Role of band 3 inregulating metabolic flux of red blood cells.Proceedings of the NationalAcademy of Sciences of the United States of America.2009；106(44):18515-20.Epub 2009/10/23.doi:10.1073/pnas.0905999106.PubMed PMID:19846781；PMCID:PMC2773988.
42.Akashi A,Miki A,Kanamori A,Nakamura M.Aquaporin 9 expression isrequired for l-lactate to maintain retinal neuronal survival.NeuroscienceLetters.2015；589:185-90.Epub 2015/02/01.doi:10.1016/j.neulet.2015.01.063.PubMed PMID:25637697.
43.Fischer K,Hoffmann P,Voelkl S,Meidenbauer N,Ammer J,Edinger M,Gottfried E,Schwarz S,Rothe G,Hoves S,Renner K,Timischl B,Mackensen A,Kunz-Schughart L,Andreesen R,Krause SW,Kreutz M.Inhibitory effect of tumor cell-derived lactic acid on human T cells.Blood.2007；109(9):3812-9.Epub 2007/01/27.doi:10.1182/blood-2006-07-035972.PubMed PMID:17255361.
44.Michne WF,Schroeder JD,Guiles JW,Treasurywala AM,Weigelt CA,Stansberry MF,McAvoy E,Shah CR,Baine Y,Sawutz DG,et al.Novel inhibitors ofthe nuclear factor of activated T cells(NFAT)-mediated transcription of beta-galactosidase:potential immunosuppressive and antiinflammatory agents.J MedChem.1995；38(14):2557-69.Epub 1995/07/07.PubMed PMID:7629796.
45.Pahlman C,Qi Z,Murray CM,Ferguson D,Bundick RV,Donald DK,EkbergH.Immunosuppressive properties of a series of novel inhibitors of themonocarboxylate transporter MCT-1.Transpl Int.2013；26(1):22-9.doi:10.1111/j.1432-2277.2012.01579.x.PubMed PMID:23137339.
46.Ovens MJ,Davies AJ,Wilson MC,Murray CM,Halestrap AP.AR-C155858 isa potent inhibitor of monocarboxylate transporters MCT1 and MCT2 that bindsto an intracellular site involving transmembrane helices 7-10.The BiochemicalJournal.2010；425(3):523-30.doi:10.1042/BJ20091515.PubMed PMID:19929853；PMCID:PMC2811425.
47.Bueno V,Binet I,Steger U,Bundick R,Ferguson D,Murray C,Donald D,Wood K.The specific monocarboxylate transporter(MCT1)inhibitor,AR-C117977,anovel immunosuppressant,prolongs allograft survival in themouse.Transplantation.2007；84(9):1204-7.doi:10.1097/01.tp.0000287543.91765.41.PubMed PMID:17998878.
48.Murray C.Targeting MCT1:Targeting MCT1:Role inimmunosuppression.Nat.Chem Biol.,1(7):371-6 2009.
49.van Hasselt PM,Ferdinandusse S,Monroe GR,Ruiter JP,Turkenburg M,Geerlings MJ,Duran K,Harakalova M,van der Zwaag B,Monavari AA,Okur I,SharrardMJ,Cleary M,O'Connell N,Walker V,Rubio-Gozalbo ME,de Vries MC,Visser G,HouwenRH,van der Smagt JJ,Verhoeven-Duif NM,Wanders RJ,van HaaftenG.Monocarboxylate transporter 1 deficiency and ketone utilization.The NewEngland Journal of Medicine.2014；371(20):1900-7.Epub 2014/11/13.doi:10.1056/NEJMoa1407778.PubMed PMID:25390740.
50.Guile SD,Bantick JR,Cheshire DR,Cooper ME,Davis AM,Donald DK,EvansR,Eyssade C,Ferguson DD,Hill S,Hutchinson R,Ingall AH,Kingston LP,Martin I,Martin BP,Mohammed RT,Murray C,Perry MW,Reynolds RH,Thorne PV,Wilkinson DJ,Withnall J.Potent blockers of the monocarboxylate transporter MCT1:novelimmunomodulatory compounds.Bioorg Med Chem Lett.2006；16(8):2260-5.doi:10.1016/j.bmcl.2006.01.024.PubMed PMID:16455256.
51.Kim Y,Choi JW,Lee JH,Kim YS.Expression of lactate/H(+)symportersMCT1 and MCT4 and their chaperone CD147 predicts tumor progression in clearcell renal cell carcinoma:immunohistochemical and The Cancer Genome Atlasdata analyses.Human Pathology.2015；46(1):104-12.doi:10.1016/j.humpath.2014.09.013.PubMed PMID:25456395.
52.Hong CS,Graham NA,Gu W,Espindola Camacho C,Mah V,Maresh EL,AlaviM,Bagryanova L,Krotee PA,Gardner BK,Behbahan IS,Horvath S,Chia D,MellinghoffIK,Hurvitz SA,Dubinett SM,Critchlow SE,Kurdistani SK,Goodglick L,Braas D,Graeber TG,Christofk HR.MCT1 Modulates Cancer Cell Pyruvate Export and Growthof Tumors that Co-express MCT1 and MCT4.Cell Reports.2016；14(7):1590-601.Epub2016/02/16.doi:10.1016/j.celrep.2016.01.057.PubMed PMID:26876179；PMCID:PMC4816454.
53.Yin Y,Choi SC,Xu Z,Perry DJ,Seay H,Croker BP,Sobel ES,Brusko TM,Morel L.Normalization of CD4+ T cell metabolism reverses lupus.Sci TranslMed.2015；7(274):274ra18.Epub 2015/02/13.doi:10.1126/scitranslmed.aaa0835.PubMed PMID:25673763；PMCID:PMC5292723.
54.Buck MD,O'Sullivan D,Pearce EL.T cell metabolism drivesimmunity.The Journal of Experimental Medicine.2015；212(9):1345-60.Epub 2015/08/12.doi:10.1084/jem.20151159.PubMed PMID:26261266；PMCID:PMC4548052.
55.Doherty JR,Yang C,Scott KE,Cameron MD,Fallahi M,Li W,Hall MA,Amelio AL,Mishra JK,Li F,Tortosa M,Genau HM,Rounbehler RJ,Lu Y,Dang CV,KumarKG,Butler AA,Bannister TD,Hooper AT,Unsal-Kacmaz K,Roush WR,ClevelandJL.Blocking lactate export by inhibiting the Myc target MCT1 Disablesglycolysis and glutathione synthesis.Cancer Research.2014；74(3):908-20.Epub2013/11/29.doi:10.1158/0008-5472.CAN-13-2034.PubMed PMID:24285728；PMCID:PMC3946415.
56.Wang R,Dillon CP,Shi LZ,Milasta S,Carter R,Finkelstein D,McCormickLL,Fitzgerald P,Chi H,Munger J,Green DR.The transcription factor Myc controlsmetabolic reprogramming upon T lymphocyte activation.Immunity.2011；35(6):871-82.Epub 2011/12/27.doi:10.1016/j.immuni.2011.09.021.PubMed PMID:22195744；PMCID:PMC3248798.
57.Cho KS,Yamada T,Wynn C,Behanna HA,Hong IC,Manaves V,Nakanishi T,Hirose J,Abe Y,Jiang H,Tamura K,Saita Y.Mechanism analysis of long-term graftsurvival by monocarboxylate transporter-1 inhibition.Transplantation.2010；90(12):1299-306.Epub 2010/11/16.doi:10.1097/TP.0b013e3181ff8818.PubMed PMID:21076380.
58.Ekberg H,Qi Z,Pahlman C,Veress B,Bundick RV,Craggs RI,Holness E,Edwards S,Murray CM,Ferguson D,Kerry PJ,Wilson E,Donald DK.The specificmonocarboxylate transporter-1(MCT-1)inhibitor,AR-C117977,induces donor-specific suppression,reducing acute and chronic allograft rejection in therat.Transplantation.2007；84(9):1191-9.doi:10.1097/01.tp.0000287541.53389.be.PubMed PMID:17998876.
59.Durrbach A,Francois H.Intracellular lactate flux:a new regulatorof the allogenic immune response.Transpl Int.2013；26(1):20-1.Epub 2012/12/15.doi:10.1111/tri.12035.PubMed PMID:23237578.
60.Rubtsov YP,Niec RE,Josefowicz S,Li L,Darce J,Mathis D,Benoist C,Rudensky AY.Stability of the regulatory T cell lineage in vivo.Science.2010；329(5999):1667-71.Epub 2010/10/12.doi:10.1126/science.1191996.PubMed PMID:20929851；PMCID:PMC4262151.
61.Sakaguchi S,Vignali DA,Rudensky AY,Niec RE,Waldmann H.Theplasticity and stability of regulatory T cells.Nature ReviewsImmunology.2013；13(6):461-7.Epub 2013/05/18.doi:10.1038/nri3464.PubMed PMID:23681097.
62.Hoeppli RE,Wu D,Cook L,Levings MK.The environment of regulatory Tcell biology:cytokines,metabolites,and the microbiome.Frontiers inImmunology.2015；6:61.Epub 2015/03/06.doi:10.3389/fimmu.2015.00061.PubMedPMID:25741338；PMCID:PMC4332351.
63.Vetter I.Development and optimization of FLIPR high throughputcalcium assays for ion channels and GPCRs.Advances in Experimental Medicineand Biology.2012；740:45-82.Epub 2012/03/29.doi:10.1007/978-94-007-2888-2_3.PubMed PMID:22453938.
64.Manning Fox JE,Meredith D,Halestrap AP.Characterisation of humanmonocarboxylate transporter 4 substantiates its role in lactic acid effluxfrom skeletal muscle.The Journal of Physiology.2000；529 Pt 2:285-93.Epub2000/12/02.PubMed PMID:11101640；PMCID:PMC2270204.
65.Murray CM,Hutchinson R,Bantick JR,Belfield GP,Benjamin AD,BrazmaD,Bundick RV,Cook ID,Craggs RI,Edwards S,Evans LR,Harrison R,Holness E,Jackson AP,Jackson CG,Kingston LP,Perry MW,Ross AR,Rugman PA,Sidhu SS,Sullivan M,Taylor-Fishwick DA,Walker PC,Whitehead YM,Wilkinson DJ,Wright A,Donald DK.Monocarboxylate transporter MCT1 is a target forimmunosuppression.Nat Chem Biol.2005；1(7):371-6.PubMed PMID:16370372.
66.Birsoy K,Wang T,Possemato R,Yilmaz OH,Koch CE,Chen WW,Hutchins AW,Gultekin Y,Peterson TR,Carette JE,Brummelkamp TR,Clish CB,Sabatini DM.MCT1-mediated transport of a toxic molecule is an effective strategy for targetingglycolytic tumors.Nature Genetics.2013；45(1):104-8.doi:10.1038/ng.2471.PubMedPMID:23202129；PMCID:3530647.
67.Youm YH,Nguyen KY,Grant RW,Goldberg EL,Bodogai M,Kim D,D'AgostinoD,Planavsky N,Lupfer C,Kanneganti TD,Kang S,Horvath TL,Fahmy TM,Crawford PA,Biragyn A,Alnemri E,Dixit VD.The ketone metabolite beta-hydroxybutyrateblocks NLRP3 inflammasome-mediated inflammatory disease.Nature Medicine.2015；21(3):263-9.Epub 2015/02/17.doi:10.1038/nm.3804.PubMed PMID:25686106；PMCID:PMC4352123.
68.Balasubramaniam S,Lewis B,Greed L,Meili D,Flier A,Yamamoto R,BilicK,Till C,Sass JO.Heterozygous Monocarboxylate Transporter 1(MCT1,SLC16A1)Deficiency as a Cause of Recurrent Ketoacidosis.JIMD Rep.2016；29:33-8.Epub2015/11/27.doi:10.1007/8904_2015_519.PubMed PMID:26608392；PMCID:PMC5059203.
69.Philp NJ,Ochrietor JD,Rudoy C,Muramatsu T,Linser PJ.Loss of MCT1,MCT3,and MCT4 expression in the retinal pigment epithelium and neural retinaof the 5A11/basigin-null mouse.Investigative Ophthalmology&VisualScience.2003；44(3):1305-11.Epub 2003/02/26.PubMed PMID:12601063.
70.Vaihkonen LK,Poso AR.Interindividual variation in total andcarrier-mediated lactate influx into red blood cells.The American Journal ofPhysiology.1998；274(4 Pt 2):R1025-30.Epub 1998/05/12.PubMed PMID:9575965.
71.Merezhinskaya N,Fishbein WN,Davis JI,Foellmer JW.Mutations in MCT1cDNA in patients with symptomatic deficiency in lactate transport.Muscle&Nerve.2000；23(1):90-7.Epub 1999/12/11.PubMed PMID:10590411.
72.Koho NM,Vaihkonen LK,Poso AR.Lactate transport in red blood cellsby monocarboxylate transporters.Equine Veterinary Journal Supplement.2002(34):555-9.Epub 2002/10/31.doi:10.1111/j.2042-3306.2002.tb05482.x.PubMedPMID:12405750.
73.Koho NM,Raekallio M,Kuusela E,Vuolle J,Poso AR.Lactate transportin canine red blood cells.Am J Vet Res.2008；69(8):1091-6.Epub 2008/08/05.doi:10.2460/ajvr.69.8.1091.PubMed PMID:18672976.
74.Koho NM,Hyyppa S,Poso AR.Monocarboxylate transporters(MCT)aslactate carriers in equine muscle and red blood cells.Equine VeterinaryJournal Supplement.2006(36):354-8.Epub 2007/04/04.doi:10.1111/j.2042-3306.2006.tb05568.x.PubMed PMID:17402447.
75.Deuticke B.Monocarboxylate transport in red blood cells:kineticsand chemical modification.Methods Enzymol.1989；173:300-29.Epub 1989/01/01.PubMed PMID:2674614.
76.Dubinsky WP,Racker E.The mechanism of lactate transport in humanerythrocytes.The Journal of Membrane Biology.1978；44(1):25-36.Epub 1978/12/08.PubMed PMID:32398.
77.Pattillo RE,Gladden LB.Red blood cell lactate transport in sickledisease and sickle cell trait.Journal of Applied Physiology.2005；99(3):822-7.Epub 2005/05/14.doi:10.1152/japplphysiol.00235.2005.PubMed PMID:15890755.
78.Poole RC,Cranmer SL,Holdup DW,Halestrap AP.Inhibition of L-lactatetransport and band 3-mediated anion transport in erythrocytes by the novelstilbenedisulphonate N,N,N',N'-tetrabenzyl-4,4'-diaminostilbene-2,2'-disulphonat e(TBenzDS).Biochimica et Biophysica Acta.1991；1070(1):69-76.Epub 1991/11/18.PubMed PMID:1751540.
79.Lengacher S,Nehiri-Sitayeb T,Steiner N,Carneiro L,Favrod C,Preitner F,Thorens B,Stehle JC,Dix L,Pralong F,Magistretti PJ,PellerinL.Resistance to diet-induced obesity and associated metabolic perturbationsin haploinsufficient monocarboxylate transporter 1 mice.PloS One.2013；8(12):e82505.Epub 2013/12/25.doi:10.1371/journal.pone.0082505.PubMed PMID:24367518；PMCID:PMC3867350.
80.Lee Y,Morrison BM,Li Y,Lengacher S,Farah MH,Hoffman PN,Liu Y,Tsingalia A,Jin L,Zhang PW,Pellerin L,Magistretti PJ,RothsteinJD.Oligodendroglia metabolically support axons and contribute toneurodegeneration.Nature.2012；487(7408):443-8.Epub 2012/07/18.doi:10.1038/nature11314.PubMed PMID:22801498；PMCID:PMC3408792.
81.Morrison BM,Tsingalia A,Vidensky S,Lee Y,Jin L,Farah MH,LengacherS,Magistretti PJ,Pellerin L,Rothstein JD.Deficiency in monocarboxylatetransporter 1(MCT1)in mice delays regeneration of peripheral nerves followingsciatic nerve crush.Experimental Neurology.2015；263:325-38.doi:10.1016/j.expneurol.2014.10.018.PubMed PMID:25447940.
82.Yan W.Male infertility caused by spermiogenic defects:lessons fromgene knockouts.Mol Cell Endocrinol.2009；306(1-2):24-32.Epub 2009/06/02.doi:10.1016/j.mce.2009.03.003.PubMed PMID:19481682；PMCID:PMC5438260.
83.Murdoch F,Goldberg E.Male contraception:another Holy Grail.BioorgMed Chem Lett 2014；24(2):419-24.Epub Epub 2013 Dec 7.doi:doi:10.1016/j.bmcl.2013.12.004.
84.Sexton JZ,Danshina PV,Lamson DR,Hughes M,House AJ,Yeh LA,O'BrienDA,Williams KP.Development and Implementation of a High Throughput Screen forthe Human Sperm-Specific Isoform of Glyceraldehyde 3-Phosphate Dehydrogenase(GAPDHS).Curr Chem Genomics.2011；5:30-41.Epub 2011/07/16.doi:10.2174/1875397301105010030.PubMed PMID:21760877；PMCID:PMC3134944.
85.Halford SER,Jones P,Wedge S,Hirschberg S,Katugampola S,Veal G,Payne G,Bacon C,Potter S,Griffin M,Chenard-Poirier M,Petrides G,Holder G,KeunHC,Banerji U,Plummer ER.A first-in-human first-in-class(FIC)trial of themonocarboxylate transporter 1(MCT1)inhibitor AZD3965 in patients withadvanced solid tumours.Journal of Clinical Oncology.2017；35(15_suppl):2516-.doi:10.1200/JCO.2017.35.15_suppl.2516.
86.Smith AJ.New horizons in therapeutic antibody discovery:opportunities and challenges versus small-molecule therapeutics.J BiomolScreen.2015；20(4):437-53.Epub 2014/12/17.doi:10.1177/1087057114562544.PubMedPMID:25512329.
87.Jones TD,Crompton LJ,Carr FJ,Baker MP.Deimmunization of MonoclonalAntibodies.In:Dimitrov AS,editor.Therapeutic Antibodies:Methods andProtocols.Totowa,NJ:Humana Press；2009.p.405-23.
88.Kirk P,Wilson MC,Heddle C,Brown MH,Barclay AN,Halestrap AP.CD147is tightly associated with lactate transporters MCT1 and MCT4 and facilitatestheir cell surface expression.The EMBO Journal.2000；19(15):3896-904.doi:10.1093/emboj/19.15.3896.PubMed PMID:10921872；PMCID:306613.
89.Toleikis L,Frenzel A.Cloning single-chain antibody fragments(ScFv)from hyrbidoma cells.Methods in Molecular Biology.2012；907:59-71.Epub 2012/08/22.doi:10.1007/978-1-61779-974-7_3.PubMed PMID:22907345.
90.Gleichmann E,Van Elven EH,Van der Veen JP.A systemic lupuserythematosus(SLE)-like disease in mice induced by abnormal T-B cellcooperation.Preferential formation of autoantibodies characteristic ofSLE.European journal of Immunology.1982；12(2):152-9.Epub 1982/02/01.doi:10.1002/eji.1830120210.PubMed PMID:6978818.
91.Chu YW,Gress RE.Murine models of chronic graft-versus-hostdisease:insights and unresolved issues.Biol Blood Marrow Transplant.2008；14(4):365-78.Epub 2008/03/18.doi:10.1016/j.bbmt.2007.12.002.PubMed PMID:18342778；PMCID:PMC2376050.
92.Liu J,Wang L,Zhao F,Tseng S,Narayanan C,Shura L,Willingham S,Howard M,Prohaska S,Volkmer J,Chao M,Weissman IL,Majeti R.Pre-ClinicalDevelopment of a Humanized Anti-CD47 Antibody with Anti-Cancer TherapeuticPotential.PloS One.2015；10(9):e0137345.doi:10.1371/journal.pone.0137345.PubMed PMID:26390038；PMCID:PMC4577081.
93.Kelley M,Ahene AB,Gorovits B,Kamerud J,King LE,McIntosh T,YangJ.Theoretical considerations and practical approaches to address the effectof anti-drug antibody(ADA)on quantification of biotherapeutics incirculation.AAPS J.2013；15(3):646-58.Epub 2013/04/02.doi:10.1208/s12248-013-9468-4.PubMed PMID:23543601；PMCID:PMC3691419.
94.Warburg,O.On the origin of cancer cells.Science 1956,723,309-314.
95.Koppenol,W.H.；Bounds,P.L；Dang,C.V.Otto Warburg's contributions tocurrent concepts of cancer metabolism.Nature Rev.Cancer 2011,77,325-327.
96.Doherty,J.R.；Yang,C；Scott,K.；Cameron M.D.；Fallahi,M.；Li,W；Hall,M.A.；Amelio,A.L.；Mishra,J.K.；Li,F；Tortosa,M.；Genau,H.M.；Rounbehler,R.J.；Yungi,L.；Dang,C.V.；Kumar,K.G.；Butler,A.A.；Bannister,T.D.；Hooper,A.T.；Unsal-Kacmaz,K.；Roush,W.R.；and Cleveland,J.L.Blocking lactate export by inhibitingthe myc target MCT1 disables glycolysis and glutathione synthesis.CancerRes.2014,74,908-920.
97.Ullah,M.S.；Davies,A.J.；Halestrap,A.P.The plasma membrane lactatetransporter MCT4,but not MCT1,is up-regulated by hypoxia through a HIF-1a-dependent mechanism.J.Biol.Chem.2006,287,9030-9037.
98.Dang,C.V.The interplay between MYC and HIF in the Warburgeffect.Ernst Schering Found Symp.Proc.2007,35-53.
99.Vaupel,P.；Mayer,A.Hypoxia in cancer:significance and impact onclinical outcome.Cancer Metastasis Rev.2007,26,225-239.
100.Kizaka-Kondoh,S.；Inoue,M.；Harada,H.；Hiraoka,M.Tumor hypoxia:atarget for selective cancer therapy.Cancer Sci.2003,94,1021-1028.
101.Otonkoski,T；Jiao,H；Kaminen-Ahola,N；et al.Physical exercise-induced hypoglycemia caused by failed silencing of monocarboxylatetransporter 1 in pancreatic beta cells.Am J Hum Genet 2007；87,467-474.
102.Zhao,C；Wilson,M.C；Schuit,F,；Halestrap,A.P.；Rutter,G.A.Expressionand distribution of lactate/monocarboxylate transporter isoforms inpancreatic islets and the exocrine pancreas.Diabetes 2001；50,361-366.
103.Otonkoski,T.；Kaminen,N,；Ustinov,J,；et al.Physical exercise-induced hyperinsulinemic hypoglycemia is an autosomal-dominant traitcharacterized by abnormal pyruvate-induced insulin release.Diabetes 2003；52,199-204.
104.Pullen T.J,；Sylow,L,；Sun,G.；Halestrap,A.P.；Richter,E.A.；Rutter,G.A.Overexpression of Monocarboxylate Transporter-1(Slc16a1)in MousePancreatic beta-Cells Leads to Relative Hyperinsulinism DuringExercise.Diabetes 2012,61,1719-1725.
105.Roncarolo MG,Yssel H,Touraine JL,Betuel H,De Vries JE,SpitsH.Autoreactive T cell clones specific for class I and class II HLA antigensisolated from a human chimera.J Exp Med.1988 May 1；167(5):1523–1534
106.Bacchetta R,Bigler M,Touraine JL,Parkman R,Tovo PA,Abrams J,deWaal Malefyt R,de Vries JE,Roncarolo MG.High levels of interleukin 10production in vivo are associated with tolerance in SCID patientstransplanted with HLA mismatched hematopoietic stem cells.The Journal ofExperimental Medicine.1994；179(2):493-502.
107.Winfried Barchet,Jeffrey D.Price,Marina Cella,Marco Colonna,Sandra K.MacMillan,J.Perren Cobb,Paul A.Thompson,Kenneth M.Murphy,JohnP.Atkinson,and Claudia Kemper.Complement-induced regulatory T cells suppressT-cell responses but allow for dendritic-cell maturation.Blood.2006 Feb 15；107(4):1497–1504.
MCT1和抗MCT1抗体的序列
人MCT1氨基酸序列
SEQ ID NO:1
MPPAVGGPVGYTPPDGGWGWAVVIGAFISIGFSYAFPKSITVFFKEIEGIFHATTSEVSWISSIMLAVMYGGGPISSILVNKYGSRIVMIVGGCLSGCGLIAASFCNTVQQLYVCIGVIGGLGLAFNLNPALTMIGKYFYKRRPLANGLAMAGSPVFLCTLAPLNQVFFGIFGWRGSFLILGGLLLNCCVAGALMRPIGPKPTKAGKDKSKASLEKAGKSGVKKDLHDANTDLIGRHPKQEKRSVFQTINQFLDLTLFTHRGFLLYLSGNVIMFFGLFAPLVFLSSYGKSQHYSSEKSAFLLSILAFVDMVARPSMGLVANTKPIRPRIQYFFAASVVANGVCHMLAPLSTTYVGFCVYAGFFGFAFGWLSSVLFETLMDLVGPQRFSSAVGLVTIVECCPVLLGPPLLGRLNDMYGDYKYTYWACGVVLIISGIYLFIGMGINYRLLAKEQKANEQKKESKEEETSIDVAGKPNEVTKAAESPDQKDTDGGPKEEESPV
MCT1 Ab1(INX310) VH
SEQ ID NO:2
QVQLKATGPGLVQPTQTLSITCTVSGFSLTNYHLQWVRQTPGKGLEWMGFIRSSGNTEYNSEFKSRLSISRDTSKNQVFLKMNSLKTDDTGVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGASVTVSS
MCT1 Ab1(INX310) VL
SEQ ID NO:3
NIHLTQSPSLLSASVGDRVTLSCKGSQNINNYLAWFQQKFGETPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGTDYTLTINSLQPEDVATYFCYQYSDGYTFGAGTKLELK
MCT1 Ab1(INX310) VH CDR1
SEQ ID NO:4
GFSLTNYH
MCT1 Ab1(INX310) VH CDR2
SEQ ID NO:5
IRSSGNT
MCT1 Ab1(INX310) VH CDR3
SEQ ID NO:6
ARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWG
MCT1 Ab1(INX310) VL CDR1
SEQ ID NO:7
QNINNY
MCT1 Ab1(INX310) VL CDR2
SEQ ID NO:8
NRH
MCT1 Ab1(INX310) VL CDR3
SEQ ID NO:9
YQYSDGYT
Ab1(INX310)
>INX310_VH
SEQ ID NO:10
QVQLKATGPGLVQPTQTLSITCTVSGFSLTNYHLQWVRQTPGKGLEWMGFIRSSGNTEYNSEFKSRLSISRDTSKNQVFLKMNSLKTDDTGVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGASVTVSS
>INX310_VL
SEQ ID NO:11
NIHLTQSPSLLSASVGDRVTLSCKGSQNINNYLAWFQQKFGETPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGTDYTLTINSLQPEDVATYFCYQYSDGYTFGAGTKLELK
Ab2(INX352)
>INX352_VH
SEQ ID NO:12
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>INX352|INX356|INX364_VL
SEQ ID NO:13
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab3(INX356)
>INX356_VH
SEQ ID NO:14
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSS
>INX352|INX356|INX364_VL
SEQ ID NO:15
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab4(INX364)
>INX364_VH
SEQ ID NO:16
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>INX352|INX356|INX364_VL
SEQ ID NO:17
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
沉默IgG1(恒定)
E269R/K322A
>IgG1_INX_Silent
SEQ ID NO:18
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人源化的Ab1(INX310)可变重链多肽
SEQ ID NO:19
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGT
人源化的Ab1(INX310)重链多肽
aMCT1_Humanized_VH1_hIgG1_INXsilent_HC
SEQ ID NO:20
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTI SRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人源化的Ab1(INX310)可变重链多肽
SEQ ID NO:21
QVQLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSS
人源化的Ab1(INX310)重链多肽
aMCT1_Humanized_VH2_hIgG1_INXsilent_HC
SEQ ID NO:22
QVQLKESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTI SRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人源化的Ab1(INX310)可变重链多肽
SEQ ID NO:23
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
人源化的Ab1(INX310)重链多肽
aMCT1_Humanized_VH3_hIgG1_INXsilent_HC
SEQ ID NO:24
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTI SRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人源化的Ab1(INX310)可变重链多肽
SEQ ID NO:25
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
人源化的Ab1(INX310)重链多肽
aMCT1_Humanized_VH4_hIgG1_INXsilent_HC
SEQ ID NO:26
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTI SRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人源化的Ab1(INX310)可变重链多肽
SEQ ID NO:27
QVQLQESGPGLVQPTQTLSITCTVSGFSLTNYHLQWVRQTPGKGLEWMGFIRSSGNTEYNSEFKSRLSISRDTSKNQVFLKMNSLKTEDTGVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTTVTVSS
人源化的Ab1(INX310)重链多肽
>aMCT1_Humanized_VH_AmbCons_hIgG1_INXsilent_HC
SEQ ID NO:28
QVQLQESGPGLVQPTQTLSITCTVSGFSLTNYHLQWVRQTPGKGLEWMGFIRSSGNTEYNSEFKSRLSI SRDTSKNQVFLKMNSLKTEDTGVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人源化的Ab1(INX310)可变重链多肽
SEQ ID NO:29
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWMGFIRSSGNTEYNSEFKSRLSISRDTSKNQVYLQMNSLKTEDTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTTVTVSS
人源化的Ab1(INX310)重链多肽
aMCT1_Humanized_VH_AmbMod_hIgG1_INXsilent_HC
SEQ ID NO:30
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWMGFIRSSGNTEYNSEFKSRLSI SRDTSKNQVYLQMNSLKTEDTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人源化的Ab1(INX310)可变重链多肽
SEQ ID NO:31
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWMGFIRSSGNTEYNSEFKSRLTISKDTSKNQVYLQMNSLKTEDTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTTVTVSS
人源化的Ab1(INX310)重链多肽
aMCT1_Humanized_VH_AmbAgg_hIgG1_INXsilent_HC
SEQ ID NO:32
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWMGFIRSSGNTEYNSEFKSRLTI SKDTSKNQVYLQMNSLKTEDTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHRDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人源化的Ab1(INX310)可变轻链多肽
SEQ ID NO:33
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPKLLIYNRHNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGQGTKLEIK
人源化的Ab1(INX310)轻链多肽
aMCT1_Humanized_VL1_hKappa_LC
SEQ ID NO:34
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPKLLIYNRHNLQSGVPSRFSGSGSGT DFTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
人源化的Ab1(INX310)可变轻链多肽
SEQ ID NO:35
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
人源化的Ab1(INX310)轻链多肽
aMCT1_Humanized_VL3_hKappa_LC
SEQ ID NO:36
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGT DFTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
人源化的Ab1(INX310)可变轻链多肽
SEQ ID NO:37
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
人源化的Ab1(INX310)轻链多肽
>aMCT1_Humanized_VL4_hKappa_LC
SEQ ID NO:38
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGT DYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
人源化的Ab1(INX310)可变轻链多肽
SEQ ID NO:39
NIQMTQSPSLLSASVGDRVTLSCKGSQNINNYLAWFQQKFGETPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGTDYTLTINSLQPEDVATYFCYQYSDGYTFGGGTKVEIK
人源化的Ab1(INX310)轻链多肽
aMCT1_Humanized_VL_AmbCons_hKappa_LC
SEQ ID NO:40
NIQMTQSPSLLSASVGDRVTLSCKGSQNINNYLAWFQQKFGETPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGT DYTLTINSLQPEDVATYFCYQYSDGYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
人源化的Ab1(INX310)可变轻链多肽
SEQ ID NO:41
NIQMTQSPSLLSASVGDRVTISCKGSQNINNYLAWFQQKFGETPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYFCYQYSDGYTFGGGTKVEIK
人源化的Ab1(INX310)轻链多肽
aMCT1_Humanized_VL_AmbMod_hKappa_LC
SEQ ID NO:42
NIQMTQSPSLLSASVGDRVTISCKGSQNINNYLAWFQQKFGETPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGT DYTLTISSLQPEDVATYFCYQYSDGYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
人源化的Ab1(INX310)可变轻链多肽
SEQ ID NO:43
NIQMTQSPSLLSASVGDRVTISCKGSQNINNYLAWFQQKFGQPPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGGGTKVEIK
人源化的Ab1(INX310)轻链多肽
aMCT1_Humanized_VL_AmbAgg_hKappa_LC
SEQ ID NO:44
NIQMTQSPSLLSASVGDRVTISCKGSQNINNYLAWFQQKFGQPPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGT DYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ab5(INX402)
>VH SEQ ID NO:45
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSS
>LC SEQ ID NO:46
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab6(INX403)
>VH SEQ ID NO:47
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:48
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab7(INX404)
>VH SEQ ID NO:49
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWRHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:50
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab8(INX405)
>VH SEQ ID NO:51
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRFVHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:52
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab9(INX406)
>VH SEQ ID NO:53
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNKWIHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:54
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab10(INX407)
>VH SEQ ID NO:55
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYMMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:56
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab11(INX408)
>VH SEQ ID NO:57
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:58
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab12(INX409)
>VH SEQ ID NO:59
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWIHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:60
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab13(INX410)
>VH SEQ ID NO:61
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYWSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:62
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab14(INX411)
>VH SEQ ID NO:63
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVHGTWYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSS
VL SEQ ID NO:64
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab15(INX412)
>VH SEQ ID NO:65
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVQGWWYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO:66
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab16(INX413)
>VH SEQ ID NO:67
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYFSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:68
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab17(INX414)
>VH SEQ ID NO:69
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARKRWVHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:70
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab18(INX415)
>VH SEQ ID NO:71
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWMHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:72
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab19(INX416)
>VH SEQ ID NO:73
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARERWVHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:74
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab20(INX417)
>VH SEQ ID NO:75
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVQGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:76
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab21(INX418)
>VH SEQ ID NO:77
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:78
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab22(INX419)
>VH SEQ ID NO:79
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVQGSYYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO:80
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab23(NX420)
>VH SEQ ID NO:81
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRFVHGTWYSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:82
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab24(INX421)
>VH SEQ ID NO:83
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWIHGTWYSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:84
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab25(INX422)
>VH SEQ ID NO:85
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVHGTWYSPGYYLMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO:86
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab26(INX423)
>VH SEQ ID NO:87
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVQGWWYSPGYYLMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO:88
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab27(INX424)
>VH SEQ ID NO:89
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWMHGTWYSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:90
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab28(INX425)
>VH SEQ ID NO:91
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARERWVHGTYFSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:92
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab29(INX426)
>VH SEQ ID NO:93
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVHGTWYSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:94
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab30(INX427)
>VH SEQ ID NO:95
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVQGSYYSPGYYLMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO:96
DIQMTQSPSSLSASVGDKVTITCRGSQNINNYLAWFQQKPGKTPALLIYNRHNLQSGVPSRFRGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCYQYSDGYTFGPGTKVDIK
Ab31(INX428)
>VH SEQ ID NO:97
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:98
EIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVFYNSYNRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPSFTFGPGTKVDIK
Ab32(INX429)
>VH SEQ ID NO:99
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:100
AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDSPPYTFGLGTKLEIK
Ab33(INX430)
>VH SEQ ID NO:101
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:102
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab34(INX431)
>VH SEQ ID NO:103
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:104
EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTINGLQPEDFATYYCQQTDSLPYTFGQGTKLEIK
Ab35(INX432)
>VH SEQ ID NO:105
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO106
NIHLTQSPSLLSASVGDRVTLSCKGSQNINNYLAWFQQKFGETPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGTDYTLTINSLQPEDVATYFCYQYSDGYTFGAGTKLELK
Ab36(INX433)
>VH SEQ ID NO:107
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:108
NIHLTQSPSLLSASVGDRVTLSCKGSQNINNYLAWFQQKFGETPKLLIYNRHNLQTGIPSRFSGSGSGTDYTLTINSLQPEDVATYFCYQYSDGYTFGAGTKLELK
Ab37(INX434)
>VH SEQ ID NO:109
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWRHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:110
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab38(INX435)
>VH SEQ ID NO:111
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRFVHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:112
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab39(INX436)
>VH SEQ ID NO:113
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNKWIHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:114
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab40(INX437)
>VH SEQ ID NO:115
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYMMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:116
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab41(INX438)
>VH SEQ ID NO:117
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYYSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:118
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab42(INX439)
>VH SEQ ID NO:119
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWIHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:120
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab43(INX440)
>VH SEQ ID NO:121
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYWSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:122
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab44(INX441)
>VH SEQ ID NO:123
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVHGTWYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO:124
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab45(INX442)
>VH SEQ ID NO:125
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVQGWWYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO:126
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab46(INX443)
>VH SEQ ID NO:127
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNSWYHGTYFSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:128
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab47(INX444)
>VH SEQ ID NO:129
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARKRWVHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:130
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab48(INX445)
>VH SEQ ID NO:131
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWMHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:132
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab49(INX446)
>VH SEQ ID NO:133
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARERWVHGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:134
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab50(INX447)
>VH SEQ ID NO:135
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVQGTYYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:136
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab51(INX448)
>VH SEQ ID NO:137
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVHGTWYSPGYYVMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:138
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab52(INX449)
>VH SEQ ID NO:139
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVQGSYYSPGYYVMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO:140
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab53(INX450)
>VH SEQ ID NO:141
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRFVHGTWYSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:142
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab54(INX451)
>VH SEQ ID NO:143
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWIHGTWYSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:144
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab55(INX452)
>VH SEQ ID NO:145
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVHGTWYSPGYYLMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO:146
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab56(INX453)
>VH SEQ ID NO:147
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVQGWWYSPGYYLMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO:148
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab57(INX454)
>VH SEQ ID NO:149
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWMHGTWYSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:150
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab58(INX455)
>VH SEQ ID NO:151
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARERWVHGTYFSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:152
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab59(INX456)
>VH SEQ ID NO:153
QVQLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYHLQWVRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVHGTWYSPGYYLMDAWGQGTLVTVSS
>VL SEQ ID NO:154
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab60(INX457)
>VH SEQ ID NO:155
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTNYHLQWIRQPPGKGLEWIGFIRSSGNTEYNPSLKSRVTISRDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNRWVQGSYYSPGYYLMDAWGQGTMVTVSS
>VL SEQ ID NO:156
DIQLTQSPSAMSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVASRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSDILPYTFGQGTKVEIK
Ab61(MCT1 3303A07或LM-183)
CDR1-HC(SEQ ID NO:161)
GFDFSNY
CDR2-HC(SEQ ID NO:162)
GDSASYCDR3-HC(SEQ ID NO:163)
ASEGSYWYYEAGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:164)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:165)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:166)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:167)
DNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:168)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:169)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGGGSYGWYQQKSPGSAPVTVIYDNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYYCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:170)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTATCAGCAGAAGTCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATGACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAGTCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTTCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTACTGTGGCAGTGCAGGCAATAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab62(LM-185或MCT1 3303B04-1)
CDR1-HC(SEQ ID NO:171)
GFDFSNY
CDR2-HC(SEQ ID NO:172)
GDSASYCDR3-HC(SEQ ID NO:173)
ASEGSYWYYEAGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:174)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:175)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:176)
SGGSSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:177)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:178)
GSRDSSGADL
LC蛋白(SEQ ID NO:179)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGSSYGWFQQKSPGSALVTLIYYNDKRPSNIPSRFSGSKSGSTGILTISGVQAEDEAVYYCGSRDSSGADLFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:180)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGCAGCAGTTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCTTGTCACTCTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCGAACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCATTTTGACCATCTCTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTACTGTGGGAGCAGGGACAGCAGTGGTGCTGATCTATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab63(LM-186或MCT1 3308B04-2)
CDR1-HC(SEQ ID NO:181)
GFSFSSR
CDR2-HC(SEQ ID NO:182)
DNDGGYPCDR3-HC(SEQ ID NO:183)
GAYGGGWYAASSIDA
HC蛋白(SEQ ID NO:184)
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFSFSSRGMFWVRQAPGKGLEYVAGIDNDGGYPNYGSAVKGRATISRDNRQSTVRLQLNNLRADDTGTYYCAKGAYGGGWYAASSIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:185)
GTCACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGGGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCTCCTTCAGCAGCCGGGGCATGTTCTGGGTGCGACAGGCACCTGGCAAGGGGCTGGAATACGTTGCGGGTATTGATAATGATGGTGGTTACCCAAACTACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACAGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGACGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAGGGTGCTTATGGTGGTGGTTGGTATGCCGCTAGTAGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:186)
SGGVGQWYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:187)
DNTNRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:188)
ANTYSDGNDAP
LC蛋白(SEQ ID NO:189)
ALTQPSSVSANPGEAVKITCSGGVGQWYGWFQQKAPGSAPVTVIHDNTNRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQAEDEAVYFCANTYSDGNDAPFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:190)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCGGGAGAAGCCGTCAAGATCACCTGCAGTGGAGGTGTCGGCCAGTGGTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGGCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCCATGACAACACCAACAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGCGAATACATACAGCGACGGTAATGATGCTCCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab64(LM-188或MCT13308E08)
CDR1-HC(SEQ ID NO:191)
GFTFSSR
CDR2-HC(SEQ ID NO:192)
DNDGGYPCDR3-HC(SEQ ID NO:193)
GAYGGGWYAASSIDA
HC蛋白(SEQ ID NO:194)
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFTFSSRGMFWVRRAPGKGLEYVAGIDNDGGYPNYGSAVKGRATISRDNRQSTVRLQLNNLRADDTGTYYCAKGAYGGGWYAASSIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:195)
GTCACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGGGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCACCTTCAGCAGCCGGGGCATGTTCTGGGTGCGACGGGCACCTGGCAAGGGGCTGGAATACGTTGCGGGTATTGATAATGATGGTGGTTACCCAAACTACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACAGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGACGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAGGGTGCTTATGGTGGTGGTTGGTATGCCGCTAGTAGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:196)
SGGVGQWYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:197)
DNTNRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:198)
ANTYSDGNDAP
LC蛋白(SEQ ID NO:199)
ALTQPSSVSANPGEAVKITCSGGVGQWYGWFQQKAPGSAPVTVIYDNTNRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQAEDEAVYFCANTYSDGNDAPFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:200)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCGGGAGAAGCCGTCAAGATCACCTGCAGTGGAGGTGTCGGCCAGTGGTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGGCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATGACAACACCAACAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGCGAATACATACAGCGACGGTAATGATGCTCCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab65(LM-189或MCT13308G12)
CDR1-HC(SEQ ID NO:201)
GFSFSSR
CDR2-HC(SEQ ID NO:202)
DNDGGYPCDR3-HC(SEQ ID NO:203)
GAYGGGWYAASSIDA
HC蛋白(SEQ ID NO:204)
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFSFSSRGMFWVRQAPGKGLEYVAGIDNDGGYPNYGSAVKGRATISRDNRQSTVRLQLNNLRADDTGTYYCAKGAYGGGWYAASSIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:205)
GTCACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGGGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCTCCTTCAGCAGCCGGGGCATGTTCTGGGTGCGACAGGCACCTGGCAAGGGGCTGGAATACGTTGCGGGTATTGATAATGATGGTGGTTACCCAAACTACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACAGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGACGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAGGGTGCTTATGGTGGTGGTTGGTATGCCGCTAGTAGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:206)
SGGGGGWYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:207)
DNTNRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:208)
ANTDSDGNDAP
LC蛋白(SEQ ID NO:209)
ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGGGWYGWYQQKSPGSAPVTVIYDNTNRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQAEDEAVYFCANTDSDGNDAPFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:210)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCGAACCCGGGAGAAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCGGCTGGTATGGCTGGTATCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATGACAACACCAACAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGCGAATACAGACAGCGACGGTAATGATGCTCCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab66(LM-190或MCT1 3308H02)
CDR1-HC(SEQ ID NO:211)
GFSFSSR
CDR2-HC(SEQ ID NO:212)
DNDGGYP
CDR3-HC(SEQ ID NO:213)
GAYGGGWYAASSIDA
HC蛋白(SEQ ID NO:214)
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFSFSSRGMFWVRQAPGKGLEYVAGIDNDGGYPNYGSAVKGRATISRDNRQSTVRLQLNNLRADDTGTYYCAKGAYGGGWYAASSIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:215)
TCCGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGGGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCTCCTTCAGCAGCCGGGGCATGTTCTGGGTGCGACAGGCACCTGGCAAGGGGCTGGAATACGTTGCGGGTATTGATAATGATGGTGGTTACCCAAACTACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACAGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGACGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAGGGTGCTTATGGTGGTGGTTGGTATGCCGCTAGTAGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:216)
SGGVGQWYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:217)
DNTKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:218)
ANTYSDGNDAP
LC蛋白(SEQ ID NO:219)
ALTQPSSVSANLGEAVKITCSGGVGQWYGWYQQKAPGSAPVTVIYDNTKRPSNIPSRFSGSASGSTATLTITGVRAEDEAVYFCANTYSDGNDAPFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:220)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGAAGCCGTCAAGATCACCTGCAGTGGAGGTGTCGGCCAGTGGTATGGCTGGTACCAGCAGAAGGCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATGACAACACCAAGAGACCCTCAAACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCGCATCCGGCTCCACAGCCACACTAACCATCACTGGAGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGCGAATACATACAGCGACGGTAATGATGCTCCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab67(LM-193或MCT1 3310A07)
CDR1-HC(SEQ ID NO:221)
GFDFSNY
CDR2-HC(SEQ ID NO:222)
GDSASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:223)
ASEGSYWYYEAGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:224)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:225)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:226)
SGGSGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:227)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:228)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:229)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGSGSYGWFRQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYFCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:230)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACAGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTAGTGGCAGCTATGGCTGGTTCCGGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGCAGGCAACAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab68(LM-194或MCT1 3310B07-1)
CDR1-HC(SEQ ID NO:231)
GFDFSSY
CDR2-HC(SEQ ID NO:232)
GDGASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:233)
ASEGSYWYYETGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:234)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSSYEMLWVRQAPGKGLAYVAGIGDGASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCAKASEGSYWYYETGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:235)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAGCTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGCATACGTCGCTGGTATCGGCGACGGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGAGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAACTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:236)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:237)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:238)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:239)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGGGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYFCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:240)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGCAGGCAACAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab69(LM-195或MCT1 3310B07-2)
CDR1-HC(SEQ ID NO:241)
GFDFSSY
CDR2-HC(SEQ ID NO:242)
GDGASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:243)
ASEGSYWYYETGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:244)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSSYEMLWVRQAPGKGLAYVAGIGDGASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCAKASEGSYWYYETGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:245)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAGCTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGCATACGTCGCTGGTATCGGCGACGGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAACTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:246)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:247)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:248)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:249)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGGGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYFCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:250)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGCAGGCAACAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab70(LM-197或MCT1 3310E01)
CDR1-HC(SEQ ID NO:251)
GFDFSSY
CDR2-HC(SEQ ID NO:252)
GNSASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:253)
PSDGSYWYYEAGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:254)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSSYEMLWVRQAPGKGLEFVAGIGNSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTVRLKLNNLRAEDTGTYYCAKPSDGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:255)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAGCTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATTCGTCGCTGGTATTGGCAACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGAAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAACCTTCCGATGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:256)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:257)
DNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:258)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:259)
ALTQPSSVSANPGGTVKITCSGGGGSYGWYQQKSPGSAPVTVIYDNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYYCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:260)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTATCAGCAGAAGTCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATGACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAGTCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTTCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTACTGTGGCAGTGCAGGCAATAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab71(LM-198或MCT1 3310E03)
CDR1-HC(SEQ ID NO:261)
GFDFSNY
CDR2-HC(SEQ ID NO:262)
GDSASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:263)
ASEGSYWYYEAGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:264)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSALRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:265)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCGCACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:266)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:267)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:268)
GSGDSSGGI
LC蛋白(SEQ ID NO:269)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGGGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQVDDEAVYFCGSGDSSGGIFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:270)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGCTCCAAATCCGGCTCCACGGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGTCGACGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGGAGACAGCAGTGGTGGTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab72(LM-199或MCT1 3310E04)
CDR1-HC(SEQ ID NO:271)
GFDFSNY
CDR2-HC(SEQ ID NO:272)
GDSASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:273)
ASEGSYWYYEAGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:274)
AVTLDESGGGLRTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:275)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCGGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:276)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:277)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:278)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:279)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGGGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYFCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:280)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCAGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGCAGGCAACAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab73(LM-201或MCT1 3310H09)
CDR1-HC(SEQ ID NO:281)
GFDFSSY
CDR2-HC(SEQ ID NO:282)
GDGASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:283)
ASEGSYWYYETGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:284)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSSYEMLWVRQAPGKGLAYVAGIGDGASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCAKASEGSYWYYETGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:285)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAGCTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGCATACGTCGCTGGTATCGGCGACGGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGAGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAACTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:286)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:287)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:288)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:289)
ALTQPSSVSANLGETVKITCSGGGGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYFCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:290)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTAGGAGAAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGCAGGCAACAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab74(LM-202或MCT1 3310H12)
CDR1-HC(SEQ ID NO:291)
GFDFSSY
CDR2-HC(SEQ ID NO:292)
GDGASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:293)
ASEGSYWYYETGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:294)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSSYEMLWVRQAPGKGLAYVAGIGDGASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCAKASEGSYWYYETGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:295)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAGCTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGCATACGTCGCTGGTATCGGCGACGGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGAGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAACTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:296)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:297)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:298)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:299)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGGGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVRAEDEAVYFCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:300)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGCAGGCAACAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab75(LM-203或MCT13311A07)
CDR1-HC(SEQ ID NO:301)
GFDFSNY
CDR2-HC(SEQ ID NO:302)
GDSASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:303)
ASEGSYWYYEAGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:304)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:305)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:306)
SGGSGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:307)
ANTNRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:308)
GSADSTGAGM
LC蛋白(SEQ ID NO:309)
ALTQPSSVSLNLGGTVKITCSGGSGSYGWFQQKSPGSAPVTLIYANTNRPSDIPSRFSGSKSGSTNTLTITGVQAEDEAIYYCGSADSTGAGMFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:310)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCACTAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTAGTGGCAGCTACGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTCTGATCTATGCTAATACCAACAGACCCTCAGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCTGGCTCCACAAACACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTATCTATTACTGTGGGAGTGCAGACAGCACTGGTGCTGGTATGTTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab76(LM-204或MCT1 3311B11)
CDR1-HC(SEQ ID NO:311)
GFDFSNY
CDR2-HC(SEQ ID NO:312)
GDSASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:313)
ASEGSYWYYEAGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:314)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:315)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:316)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:317)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:318)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:319)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGGGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYFCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:320)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGCAGGCAACAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab77(LM-205或MCT1 3311C05)
CDR1-HC(SEQ ID NO:321)
GFDFSNY
CDR2-HC(SEQ ID NO:322)
GDSASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:323)
ASEGSYWYYEAGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:324)
AVTLDESGGGLRTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:325)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCGGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:326)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:327)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:328)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:329)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGGGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYFCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:330)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCAGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGCAGGCAACAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab78(LM-206或MCT1 3311F10)
CDR1-HC(SEQ ID NO:331)
GFDFSNY
CDR2-HC(SEQ ID NO:332)
GDSASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:333)
ASEGSYWYYEAGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:334)
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:335)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:336)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:337)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:338)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:339)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGGGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYFCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:340)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGCAGGCAACAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab79(LM-207或MCT1 3311G09)
CDR1-HC(SEQ ID NO:341)
GFDFSNY
CDR2-HC(SEQ ID NO:342)
GDSASY
CDR3-HC(SEQ ID NO:343)
ASEGSYWYYEAGGIDT
HC蛋白(SEQ ID NO:344)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:345)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:346)
SGGGGSYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:347)
YNDKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:348)
GSAGNSGA
LC蛋白(SEQ ID NO:349)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGGGSYGWFQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVRAEDEAVYFCGSAGNSGAFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:350)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCGAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGCAGGCAACAGTGGTGCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab80(LM-208或MCT1 3312H10)
CDR1-HC(SEQ ID NO:351)
GFSFSSR
CDR2-HC(SEQ ID NO:352)
DNDGGY
CDR3-HC(SEQ ID NO:353)
GAYGGGWYAASSIDA
HC蛋白(SEQ ID NO:354)
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFSFSSRGMFWVRQAPGKGLEYVAGIDNDGGYPNYGSAVKGRATISRDNRQSTVRLQLNNLRADDTGTYYCAKGAYGGGWYAASSIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:355)
GTCACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGGGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCTCCTTCAGCAGCCGGGGCATGTTCTGGGTGCGACAGGCACCTGGCAAGGGGCTGGAATACGTTGCGGGTATTGATAATGATGGTGGTTACCCAAACTACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACAGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGACGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAGGGTGCTTATGGTGGTGGTTGGTATGCCGCTAGTAGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:356)
SGGGSSSYYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:357)
DNNKRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:358)
ANTYSDGNDAP
LC蛋白(SEQ ID NO:359)
ALTQPSSVSAKSGETVKITCSGGGSSSYYGWYQQKSPGSAPVTVIYDNNKRPSNIPSQFSGSKSGSTSTLTITGVQADDEAVYFCANTYSDGNDAPFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:360)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAAGTCAGGAGAAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTAGCAGCAGCTACTATGGCTGGTATCAGCAGAAGTCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATGACAACAACAAGAGACCCTCGAACATCCCTTCACAATTCTCCGGTTCCAAATCTGGCTCCACAAGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGACGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGCGAATACATACAGCGACGGTAATGATGCTCCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab81(LM-209或MCT1 3313A11)
CDR1-HC(SEQ ID NO:361)
GFSFSSR
CDR2-HC(SEQ ID NO:362)
DNDGGY
CDR3-HC(SEQ ID NO:363)
GAYGGGWYAASSIDA
HC蛋白(SEQ ID NO:364)
AVTLDESGGGLQTPGGALSLICKASGFSFSSRGMFWVRQAPGKGLEYVAGIDNDGGYPNYGSAVKGRATISRDNRQSTVRLQLNNLRADDTGTYYCAKGAYGGGWYAASSIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:365)
GTCACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCTCTCAGCCTCATCTGCAAGGCCTCCGGGTTCTCCTTCAGCAGCCGGGGCATGTTCTGGGTGCGACAGGCACCTGGCAAGGGGCTGGAATACGTTGCGGGTATTGATAATGATGGTGGTTACCCAAACTACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACAGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGACGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAGGGTGCTTATGGTGGTGGTTGGTATGCCGCTAGTAGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:366)
SGGVGQWYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:367)
DNTNRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:368)
ANTYSDGNDAP
LC蛋白(SEQ ID NO:369)
ALTQPSSVSANPGEAVKITCSGGVGQWYGWYQQKAPGSAPVTVIYDNTNRPSDIPSRFSGSKSGSTNTLTITGVQAEDEAVYFCANTYSDGNDAPFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:370)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCGGGAGAAGCCGTCAAGATCACCTGCAGTGGAGGTGTCGGCCAGTGGTATGGCTGGTACCAGCAGAAGGCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATGACAACACCAACAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACAAACACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGCGAATACATACAGCGACGGTAATGATGCTCCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab82(LM-210或MCT1 3313B10)
CDR1-HC(SEQ ID NO:371)
GFSFSSR
CDR2-HC(SEQ ID NO:372)
DNDGGY
CDR3-HC(SEQ ID NO:373)
GAYGGGWYAASSIDA
HC蛋白(SEQ ID NO:374)
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFSFSSRGMFWVRQAPGKGLEYVAGIDNDGGYPNYGSAVKGRATISRDNRQSTVRLQLNNLRADDTGTYYCAKGAYGGGWYAASSIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:375)
GTCACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGGGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCTCCTTCAGCAGCCGGGGCATGTTCTGGGTGCGACAGGCACCTGGCAAGGGGCTGGAATACGTTGCGGGTATTGATAATGATGGTGGTTACCCAAACTACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACAGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAATAACCTCAGGGCTGACGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAGGGTGCTTATGGTGGTGGTTGGTATGCCGCTAGTAGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:376)
SGGVGQWYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:377)
DNANRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:378)
ANTYSDGNDAP
LC蛋白(SEQ ID NO:379)
ALTQPSSVSANPGEAVKITCSGGVGQWYGWYQQKAPGSAPVTVIYDNANRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQAEDEAVYFCANTYSDGNDAPFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:380)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCGGGAGAAGCCGTCAAGATCACCTGCAGTGGAGGTGTCGGCCAGTGGTATGGCTGGTACCAGCAGAAGGCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATGACAACGCCAACAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGCGAATACATACAGCGACGGTAATGATGCTCCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab83(LM-211或MCT1 3309B01)
CDR1-HC(SEQ ID NO:381)
GFSFSSR
CDR2-HC(SEQ ID NO:382)
DNDGGY
CDR3-HC(SEQ ID NO:383)
GAYGGGWYAASSIDA
HC蛋白(SEQ ID NO:384)
AVTLDESGGGLQTPGGALSLICKASGFSFSSRGMFWVRQAPGKGLEYVAGIDNDGGYPNYGSAVKGRATISRDNRQSTVRLQLNNLRADDTGTYYCAKGAYGGGWYAASSIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:385)
GTCACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCTCTCAGCCTCATCTGCAAGGCCTCCGGGTTCTCCTTCAGCAGCCGGGGCATGTTCTGGGTGCGACAGGCACCTGGCAAGGGGCTGGAATACGTTGCGGGTATTGATAATGATGGTGGTTACCCAAACTACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACAGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGACGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAGGGTGCTTATGGTGGTGGTTGGTATGCCGCTAGTAGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC(SEQ ID NO:386)
SGGVGQWYG
CDR2-LC(SEQ ID NO:387)
DNTNRPS
CDR3-LC(SEQ ID NO:388)
ANTYSDGNDAP
LC蛋白(SEQ ID NO:389)
ALTQPSSVSANPGEAVKITCSGGVGQWYGWYQQKAPGSAPVTVIYDNTNRPSDIPSRFSGSKSGSTNTLTITGVQAEDEAVYFCANTYSDGNDAPFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:390)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCGGGAGAAGCCGTCAAGATCACCTGCAGTGGAGGTGTCGGCCAGTGGTATGGCTGGTACCAGCAGAAGGCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATGACAACACCAACAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACAAACACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGCGAATACATACAGCGACGGTAATGATGCTCCATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab84(LM-184或MCT1 3303C03)
CDR1-HC GFDFSNY(SEQ ID NO:391)
CDR2-HC GDSASY(SEQ ID NO:392)
CDR3-HC ASEGSYWYYEAGGIDT(SEQ ID NO:393)
HC蛋白(SEQ ID NO:394)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:395)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC SGGTYSYG(SEQ ID NO:396)
CDR2-LC QNDKRPS(SEQ ID NO:397)
CDR3-LC GSGDTTGGI(SEQ ID NO:398)
LC蛋白(SEQ ID NO:399)
ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGTYSYGWFQQKSPGSAPVTVIYQNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQAEDEAVYFCGSGDTTGGIFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:400)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCAGGAGAAACCGTCAAGATCACCTGCTCTGGGGGCACCTATAGTTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATCAAAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGGAGACACCACCGGTGGTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab85(LM-187或MCT1 3308B07)
CDR1-HC GFGFTNY(SEQ ID NO:401)
CDR2-HC SSGGAY(SEQ ID NO:402)
CDR3-HC APCGSWCGWGYTGVDNIDA(SEQ ID NO:403)
HC蛋白(SEQ ID NO:404)
AVTLDESGGGLQTPGGLVSLVCKASGFGFTNYEIHWVRQAPGKGLEWVGFVSSGGAYADYAPAVKGRATITRDNGQSTVRLQLVNLRAEDTGTYYCTRAPCGSWCGWGYTGVDNIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:405)
GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGACTGGTCAGTCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGGCTTCACCAATTATGAGATCCACTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGTTTTGTTAGTAGTGGTGGTGCTTACGCAGATTACGCGCCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCACGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGGTCAACCTCAGGGCGGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAGAGCTCCTTGTGGTAGTTGGTGTGGTTGGGGTTATACTGGTGTCGATAACATCGACGCGTGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC SGGGRGSHYG(SEQ ID NO:406)
CDR2-LC ANNQRPS(SEQ ID NO:407)
CDR3-LC GGYDSGAT(SEQ ID NO:408)
LC蛋白(SEQ ID NO:409)
ALTQPSSVSANPGGIVKITCSGGGRGSHYGWYQQKSPGSAPVTLIYANNQRPSDIPSRFSGSESGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGGYDSGATFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:410)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCGAACCCAGGAGGAATCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTCGCGGCAGCCACTATGGCTGGTATCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTCTGATCTATGCTAACAACCAGAGACCCTCGGACATCCCTTCGCGATTCTCCGGTTCCGAATCCGGCTCCACGGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGTGGCTACGACAGCGGTGCTACATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab86(LM-191或MCT1 3310A01)
CDR1-HC GFDFSNY(SEQ ID NO:411)
CDR2-HC GDSASY(SEQ ID NO:412)
CDR3-HC ASEGSYWYYEAGGIDT(SEQ ID NO:413)
HC蛋白(SEQ ID NO:414)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:415)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC SGSSGSYG(SEQ ID NO:416)
CDR2-LC YNDKRPS(SEQ ID NO:417)
CDR3-LC GSYGSTDAAI(SEQ ID NO:418)
LC蛋白(SEQ ID NO:419)
ALTQPSSVSASPGGTVKITCSGSSGSYGWYQQKSPGSAPVTVIYYNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQAEDEAVYFCGSYGSTDAAIFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:420)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCCGCGAGCCCAGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGAGTAGTGGCAGCTATGGCTGGTATCAGCAGAAGTCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGCTACGGCAGCACTGATGCTGCTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab87(LM-192或MCT1 3310A02-1)
CDR1-HC GFDFSNY(SEQ ID NO:421)
CDR2-HC GDSASY(SEQ ID NO:422)
CDR3-HC ASEGSYWYYEAGGIDT(SEQ ID NO:423)
HC蛋白(SEQ ID NO:424)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:425)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC SGGYSSYG(SEQ ID NO:426)
CDR2-LC YNAKRPS(SEQ ID NO:427)
CDR3-LC GTADRSSTAL(SEQ ID NO:428)
LC蛋白(SEQ ID NO:429)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGYSSYGWYQQKSPGSAPVTLIYYNAKRPSNIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQAEDEAVYFCGTADRSSTALFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:430)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTTACAGCAGCTATGGCTGGTATCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCTCCTGTCACTCTGATCTATTACAACGCCAAGAGACCCTCGAACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGACTGCAGACAGGAGCAGTACTGCTTTATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab88(LM-196或MCT1 3310 C01)
CDR1-HC GFDFSSY(SEQ ID NO:431)
CDR2-HC GDGASY(SEQ ID NO:432)
CDR3-HC ASEGSYWYYETGGIDT(SEQ ID NO:433)
HC蛋白(SEQ ID NO:434)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSSYEMLWVRQAPGKGLAYVAGIGDGASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCAKASEGSYWYYETGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:435)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAGCTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGCATACGTCGCTGGTATCGGCGACGGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGAGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAACTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC SGGSGSYG(SEQ ID NO:436)
CDR2-LC YNDKRPS(SEQ ID NO:437)
CDR3-LC GSGDRSYDGM(SEQ ID NO:438)
LC蛋白(SEQ ID NO:439)
ALTQPSSVSANPGETVEITCSGGSGSYGWYQQKSPGSAPVTVIHYNDKRPSDIPSRFSGSASGSTATLTITGVQVEDEAVYFCGSGDRSYDGMFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:440)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCGGGAGAAACCGTCGAGATCACCTGCTCCGGGGGTAGTGGCAGCTACGGCTGGTACCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCCATTACAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCGCATCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGTCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGTGGAGACAGGAGTTATGATGGTATGTTCGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab89(LM-200或MCT1 3310F12)
CDR1-HC GFDFSNY(SEQ ID NO:441)
CDR2-HC GDSASY(SEQ ID NO:442)
CDR3-HC ASEGSYWYYEAGGIDT(SEQ ID NO:443)
HC蛋白(SEQ ID NO:444)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKASGFDFSNYEMLWVRQAPGKGLEYVAGIGDSASYSAYGVAVKGRATISRDNGQSTLRLQLNGLRAEDTGTYYCTKASEGSYWYYEAGGIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:445)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCAACTACGAAATGCTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTGGTATTGGCGACAGTGCTAGTTACTCAGCATACGGGGTGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACACTGAGGCTGCAGCTGAACGGCCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCACCAAAGCTTCCGAGGGTTCCTACTGGTATTATGAAGCTGGTGGTATCGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC SGGSSTYG(SEQ ID NO:446)
CDR2-LC RNDNRPS(SEQ ID NO:447)
CDR3-LC GSADSSGAI(SEQ ID NO:448)
LC蛋白(SEQ ID NO:449)
ALTQPSSVSANLGGTVEITCSGGSSTYGWYQQKSPGSAPVTVIYRNDNRPSNIPSRFSGSKYGSTGTLTITGVQAEDEAVYLCGSADSSGAIFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:450)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCGAGATCACCTGCTCCGGGGGTAGCAGCACCTATGGCTGGTACCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATAGGAACGACAACAGACCCTCAAACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATACGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTTATGTGGGAGTGCAGACAGCAGTGGTGCTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab90(MCT1 3308A05)
CDR1-HC GFSFSGF(SEQ ID NO:451)
CDR2-HC DDGGSS(SEQ ID NO:452)
CDR3-HC DTAACTYPCGSYVHTIDT(SEQ ID NO:453)
HC蛋白(SEQ ID NO:454)
AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFSFSGFSMGWVRQTPGKGLEWVAGIDDGGSSTYYGAAVKGRATISRDNGQSTVRLQLSNLRAEDTGIYYCARDTAACTYPCGSYVHTIDTWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:455)
TCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCGCTCAGTCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCTCCTTCAGTGGTTTCAGCATGGGTTGGGTGCGCCAGACGCCCGGCAAAGGGCTGGAATGGGTCGCTGGTATTGATGATGGTGGCAGTAGCACCTACTACGGGGCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAGCAACCTCAGGGCTGAGGACACCGGCATCTACTACTGCGCCAGAGATACTGCTGCTTGTACTTATCCTTGTGGTTCTTATGTGCATACGATAGACACATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC SGGGGDYG(SEQ ID NO:456)
CDR2-LC YSDKRPP(SEQ ID NO:457)
CDR3-LC GGWDDTNGGI(SEQ ID NO:458)
LC蛋白(SEQ ID NO:459)
ALTQPSSVSANLGGTVKITCSGGGGDYGWFQQKSPGSAPVTVIYYSDKRPPNIPSRFSGSLSGSTATLTITGVQAEDEAVYYCGGWDDTNGGIFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:460)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGTGGCGACTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATTACAGCGACAAGAGACCCCCGAACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCCTATCCGGCTCCACAGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTACTGTGGTGGCTGGGACGATACTAATGGTGGTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab91(MCT1 3309D07)
CDR1-HC GFSFSSY(SEQ ID NO:461)
CDR2-HC RSSGSS(SEQ ID NO:462)
CDR3-HC AGCSDCWRSTPGRIDA(SEQ ID NO:463)
HC蛋白(SEQ ID NO:464)
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFSFSSYGMGWVRQAPGKGLEFIAGIRSSGSSTYYGAAVKGRATITRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKAGCSDCWRSTPGRIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:465)
ACGAATTCGGCCGTGACGTTGGACGAGTCTGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGGGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCTCCTTCAGCAGTTATGGCATGGGCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATTCATCGCGGGTATTAGAAGCAGTGGTAGTAGCACATACTACGGGGCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCACGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGCCACCTACTACTGCGCCAAAGCTGGTTGTAGTGATTGTTGGCGTAGTACTCCTGGTAGGATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCG
CDR1-LC SGSSSGYGYG(SEQ ID NO:466)
CDR2-LC TNTNRPS(SEQ ID NO:467)
CDR3-LC GSYDSNTYLGL(SEQ ID NO:468)
LC蛋白(SEQ ID NO:469)
ALTQPSSVSANLGGTVEITCSGSSSGYGYGWYQQKSPGSAPVTLIYTNTNRPSDIPSRFSGSTSGSTNTLTIAGVQAEDEAVYYCGSYDSNTYLGLFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:470)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGGAACCGTCGAGATCACCTGCTCCGGGAGTAGCAGTGGCTATGGTTATGGCTGGTATCAGCAGAAGTCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTCTGATCTATACTAACACCAACAGACCCTCGGACATCCCTTCGCGATTCTCCGGTTCCACATCCGGCTCCACAAACACATTAACGATCGCTGGGGTCCAAGCCGAGGACGAGGCTGTCTATTATTGTGGGAGCTACGACAGCAACACTTATCTTGGTCTATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTTAb92(MCT1 3310A05)
CDR1-HC GFTFSSY(SEQ ID NO:471)
CDR2-HC SKDGGSD(SEQ ID NO:472)
CDR3-HC GIGVGNIDA(SEQ ID NO:473)
HC蛋白(SEQ ID NO:474)
AVTLDESEGGLHTPGGGLSLVCKASGFTFSSYAMYWIRQAPGKGLEWVAYISKDGGSDTAYETAVKGRATISRDDGQSTVRLQLNNLRAEDTATYYCARGIGVGNIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:475)
GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGAGGGCGGCCTCCATACACCCGGAGGAGGGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCACCTTCAGCAGTTATGCCATGTACTGGATCCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTCGCCTATATTAGCAAGGATGGTGGTAGTGACACAGCATACGAGACAGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACGACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGCCACCTACTACTGCGCCAGAGGTATTGGTGTTGGTAACATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCC
CDR1-LC SGSSSGYGYG(SEQ ID NO:476)
CDR2-LC TNTNRPS(SEQ ID NO:477)
CDR3-LC GSYDSNTYLGL(SEQ ID NO:478)
LC蛋白(SEQ ID NO:479)
ALTQPSSVSANLGETVKITCSGTSDNNYFGWYQQKSPGSAPVTVIYGNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQADDEAVYFCGSYDTYVNDDIFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:480)
GCCCTGAcTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGGAGAAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGACTAGTGACAATAACTACTTTGGTTGGTATCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACGGTGATCTATGGCAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGACGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGCTATGACACCTATGTTAATGATGATATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTA
Ab93(MCT1 3310A12)
CDR1-HC GFDFSSY(SEQ ID NO:481)
CDR2-HC YKDGGSD(SEQ ID NO:482)
CDR3-HC GIGIGNIDA(SEQ ID NO:483)
HC蛋白(SEQ ID NO:484)
AVTLDESGGGLQTPGGGLSLVCKASGFDFSSYAMYWIRQAPGKGLEWVAYIYKDGGSDTAYETAVKGRATISRDDGQSTMRLQLNNLRAEDTATYYCARGIGIGNIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:485)
GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGGGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTTGACTTCAGCAGTTACGCCATGTACTGGATCCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTCGCCTATATTTACAAGGATGGTGGTAGTGACACAGCATACGAGACAGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACGACGGGCAGAGTACGATGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGCCACCTACTACTGTGCCAGAGGTATTGGTATTGGTAACATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCC
CDR1-LC SGNSDNNYFG(SEQ ID NO:486)
CDR2-LC GNDKRPS(SEQ ID NO:487)
CDR3-LC GSYDTYVNDDM(SEQ ID NO:488)
LC蛋白(SEQ ID NO:489)
ALTQPSSVSANPGGTVEITCSGNSDNNYFGWFQQKSPGSAPVTVIYGNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTATLTITGVQADDEAVYFCGSYDTYVNDDMFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:490)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCGGGAGGAACCGTCGAGATCACCTGCTCCGGGAATAGTGACAATAACTACTTTGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCAGTCACTGTGATCTATGGCAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGCCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGACGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGCTACGACACCTATGTCAATGATGACATGTTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTT
Ab94(MCT1 3311B04)
CDR1-HC GFTFSSF(SEQ ID NO:491)
CDR2-HC SNDGGG(SEQ ID NO:492)
CDR3-HC GGGASSIDA(SEQ ID NO:493)
HC蛋白(SEQ ID NO:494)
AVTLDESEGGLQTPGGTLSLVCKGSGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEFVAAVSNDGGGTWYATAVKGRATISKDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCARGGGASSIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:495)
GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGAGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGGCTCCGGGTTCACCTTCAGCAGCTTCAACATGTTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATTCGTCGCTGCTGTTAGCAATGATGGTGGTGGCACATGGTACGCGACGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAAGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAGAGGTGGTGGTGCCAGTAGTATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCC
CDR1-LC SGGSGRYG(SEQ ID NO:496)
CDR2-LC ANTKRPS(SEQ ID NO:497)
CDR3-LC GSIDNNYVGI(SEQ ID NO:498)
LC蛋白(SEQ ID NO:499)
ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGSGRYGWYQQKSPGSAPVTVIRANTKRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQVEDEAVYFCGSIDNNYVGIFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:500)
GCCCTGAcTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCAGGAGAAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTAGTGGCAGGTACGGCTGGTATCAGCAGAAGTCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCAGGGCTAACACCAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGTCGAGGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAGCATAGACAACAACTATGTTGGTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTA
Ab95(MCT1 3311B07)
CDR1-HC GFTISSY(SEQ ID NO:501)
CDR2-HC SGSGRY(SEQ ID NO:502)
CDR3-HC DGGGNYWNAAGGIDA(SEQ ID NO:503)
HC蛋白(SEQ ID NO:504)
AVTLDESGGGLQTPGGTLSLVCKGSGFTISSYTMQWVRQAPDKGLEYVASISGSGRYTGYGAAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYYCAKDGGGNYWNAAGGIDAWGHGTEVIVSS
HC DNA(SEQ ID NO:505)
GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAACGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGGCTCCGGGTTCACCATCAGCAGTTACACCATGCAGTGGGTGCGACAGGCGCCCGACAAGGGGTTGGAATATGTCGCCAGTATTAGCGGCAGTGGTAGATACACAGGCTACGGGGCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAAGATGGTGGTGGTAATTACTGGAATGCTGCTGGTGGTATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCC
CDR1-LC SGGSSTYG(SEQ ID NO:506)
CDR2-LC NDDERPS(SEQ ID NO:507)
CDR3-LC GNEDSSAGKGGI(SEQ ID NO:508)
LC蛋白(SEQ ID NO:509)
ALTQPSSVSANLGGTVEITCSGGSSTYGWYQQKSPGSAPVTLIYNDDERPSNIPSRFSGSTSDFTGTLTITGVQADDEAVYFCGNEDSSAGKGGIFGAGTTLTVL
LC DNA(SEQ ID NO:510)
GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCGAACCTGGGAGGAACCGTCGAGATCACCTGCTCCGGGGGTAGCAGCACCTATGGCTGGTACCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTCTGATTTATAATGATGATGAGAGACCCTCGAACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCACATCCGACTTCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGACGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGAATGAAGACAGCAGTGCTGGTAAAGGTGGCATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTA
Figure IDA0002570801910000011
Figure IDA0002570801910000021
Figure IDA0002570801910000031
Figure IDA0002570801910000041
Figure IDA0002570801910000051
Figure IDA0002570801910000061
Figure IDA0002570801910000071
Figure IDA0002570801910000081
Figure IDA0002570801910000091
Figure IDA0002570801910000101
Figure IDA0002570801910000111
Figure IDA0002570801910000121
Figure IDA0002570801910000131
Figure IDA0002570801910000141
Figure IDA0002570801910000151
Figure IDA0002570801910000161
Figure IDA0002570801910000171
Figure IDA0002570801910000181
Figure IDA0002570801910000191
Figure IDA0002570801910000201
Figure IDA0002570801910000211
Figure IDA0002570801910000221
Figure IDA0002570801910000231
Figure IDA0002570801910000241
Figure IDA0002570801910000251
Figure IDA0002570801910000261
Figure IDA0002570801910000271
Figure IDA0002570801910000281
Figure IDA0002570801910000291
Figure IDA0002570801910000301
Figure IDA0002570801910000311
Figure IDA0002570801910000321
Figure IDA0002570801910000331
Figure IDA0002570801910000341
Figure IDA0002570801910000351
Figure IDA0002570801910000361
Figure IDA0002570801910000371
Figure IDA0002570801910000381
Figure IDA0002570801910000391
Figure IDA0002570801910000401
Figure IDA0002570801910000411
Figure IDA0002570801910000421
Figure IDA0002570801910000431
Figure IDA0002570801910000441
Figure IDA0002570801910000451
Figure IDA0002570801910000461
Figure IDA0002570801910000471
Figure IDA0002570801910000481
Figure IDA0002570801910000491
Figure IDA0002570801910000501
Figure IDA0002570801910000511
Figure IDA0002570801910000521
Figure IDA0002570801910000531
Figure IDA0002570801910000541
Figure IDA0002570801910000551
Figure IDA0002570801910000561
Figure IDA0002570801910000571
Figure IDA0002570801910000581
Figure IDA0002570801910000591
Figure IDA0002570801910000601
Figure IDA0002570801910000611
Figure IDA0002570801910000621
Figure IDA0002570801910000631
Figure IDA0002570801910000641
Figure IDA0002570801910000651
Figure IDA0002570801910000661
Figure IDA0002570801910000671
Figure IDA0002570801910000681
Figure IDA0002570801910000691
Figure IDA0002570801910000701
Figure IDA0002570801910000711
Figure IDA0002570801910000721
Figure IDA0002570801910000731
Figure IDA0002570801910000741
Figure IDA0002570801910000751
Figure IDA0002570801910000761
Figure IDA0002570801910000771
Figure IDA0002570801910000781
Figure IDA0002570801910000791
Figure IDA0002570801910000801
Figure IDA0002570801910000811
Figure IDA0002570801910000821
Figure IDA0002570801910000831
Figure IDA0002570801910000841
Figure IDA0002570801910000851
Figure IDA0002570801910000861
Figure IDA0002570801910000871
Figure IDA0002570801910000881
Figure IDA0002570801910000891
Figure IDA0002570801910000901
Figure IDA0002570801910000911
Figure IDA0002570801910000921
Figure IDA0002570801910000931
Figure IDA0002570801910000941
Figure IDA0002570801910000951
Figure IDA0002570801910000961
Figure IDA0002570801910000971
Figure IDA0002570801910000981
Figure IDA0002570801910000991
Figure IDA0002570801910001001
Figure IDA0002570801910001011
Figure IDA0002570801910001021
Figure IDA0002570801910001031
Figure IDA0002570801910001041
Figure IDA0002570801910001051
Figure IDA0002570801910001061
Figure IDA0002570801910001071
Figure IDA0002570801910001081
Figure IDA0002570801910001091
Figure IDA0002570801910001101
Figure IDA0002570801910001111
Figure IDA0002570801910001121
Figure IDA0002570801910001131
Figure IDA0002570801910001141
Figure IDA0002570801910001151
Figure IDA0002570801910001161
Figure IDA0002570801910001171
Figure IDA0002570801910001181
Figure IDA0002570801910001191
Figure IDA0002570801910001201
Figure IDA0002570801910001211
Figure IDA0002570801910001221
Figure IDA0002570801910001231
Figure IDA0002570801910001241
Figure IDA0002570801910001251
Figure IDA0002570801910001261
Figure IDA0002570801910001271
Figure IDA0002570801910001281
Figure IDA0002570801910001291
Figure IDA0002570801910001301
Figure IDA0002570801910001311
Figure IDA0002570801910001321
Figure IDA0002570801910001331
Figure IDA0002570801910001341
Figure IDA0002570801910001351
Figure IDA0002570801910001361
Figure IDA0002570801910001371
Figure IDA0002570801910001381
Figure IDA0002570801910001391
Figure IDA0002570801910001401
Figure IDA0002570801910001411
Figure IDA0002570801910001421
Figure IDA0002570801910001431
Figure IDA0002570801910001441
Figure IDA0002570801910001451
Figure IDA0002570801910001461
Figure IDA0002570801910001471
Figure IDA0002570801910001481
Figure IDA0002570801910001491
Figure IDA0002570801910001501
Figure IDA0002570801910001511
Figure IDA0002570801910001521
Figure IDA0002570801910001531
Figure IDA0002570801910001541
Figure IDA0002570801910001551
Figure IDA0002570801910001561
Figure IDA0002570801910001571
Figure IDA0002570801910001581
Figure IDA0002570801910001591
Figure IDA0002570801910001601
Figure IDA0002570801910001611
Figure IDA0002570801910001621
Figure IDA0002570801910001631
Figure IDA0002570801910001641
Figure IDA0002570801910001651
Figure IDA0002570801910001661
Figure IDA0002570801910001671
Figure IDA0002570801910001681
Figure IDA0002570801910001691
Figure IDA0002570801910001701
Figure IDA0002570801910001711
Figure IDA0002570801910001721
Figure IDA0002570801910001731
Figure IDA0002570801910001741
Figure IDA0002570801910001751
Figure IDA0002570801910001761
Figure IDA0002570801910001771
Figure IDA0002570801910001781
Figure IDA0002570801910001791
Figure IDA0002570801910001801
Figure IDA0002570801910001811
Figure IDA0002570801910001821
Figure IDA0002570801910001831
Figure IDA0002570801910001841
Figure IDA0002570801910001851
Figure IDA0002570801910001861
Figure IDA0002570801910001871
Figure IDA0002570801910001881
Figure IDA0002570801910001891
Figure IDA0002570801910001901
Figure IDA0002570801910001911
Figure IDA0002570801910001921
Figure IDA0002570801910001931
Figure IDA0002570801910001941
Figure IDA0002570801910001951
Figure IDA0002570801910001961
Figure IDA0002570801910001971
Figure IDA0002570801910001981
Figure IDA0002570801910001991
Figure IDA0002570801910002001
Figure IDA0002570801910002011
Figure IDA0002570801910002021
Figure IDA0002570801910002031
Figure IDA0002570801910002041
Figure IDA0002570801910002051
Figure IDA0002570801910002061

Claims (122)

1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其与人或非人MCT1的胞外结构域或区域中包含的一个或多个残基结合。
2.一种分离的与人或非人MCT1结合的抗体或其抗原结合片段，其拮抗、抑制或阻断一种或多种MCT1相关功能，例如在体外和/或体内。
3.一种分离的与非人MCT1，例如啮齿动物诸如小鼠或大鼠MCT1结合的抗体或抗原结合片段，其可选地拮抗，抑制或阻断一种或多种MCT1相关功能，例如在体外和/或体内。
4.权利要求3的分离的抗体或抗原结合片段，其进一步与人MCT1结合。
5.一种分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其与抗人MCT1抗体Ab1-Ab95中的任何一种竞争结合人或非人MCT1。
6.一种分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其与抗人MCT1抗体Ab1-Ab95中的任一种结合人MCT1上相同或重叠的表位。
7.分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其结合选自以下的人MCT1表位：
(i)包含残基T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，K297，G417，I47和D418中的一个或多个的表位；
(ii)包含最少三个残基的表位，其中至少一个，两个或所有三个所述残基包含选自T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，G417，I47和D418的残基；
(iii)包含三个残基的表位，其中三个残基，其中至少一个，两个或所有三个所述残基包含T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，G417，I47和D418；
(iv)包含三至六个残基的表位，其中一个，两个，三个，四个，五个或六个所述残基包含T41，E46，S285，S286，Y287，K289，H292，Y293，G417，I47和D418；
(v)包含残基T41，S285和S286的至少一个，两个或全部三个的表位；
(vi)包含T41的表位；
(vii)包含S286的表位；
(viii)包含S285的表位；
(ix)包含H292的表位；
(x)包含残基T41、S285、S286、Y287、G417和D418的表位；
(xi)包含残基T41、S285和S286的表位；
(xii)包含残基T41、I47、S285、S286、G417和D418的表位，
(xiii)包含残基E46、K289和H292的表位；
(xiv)包含残基K297、Y293和H292的表位；
(xv)包含一个或多个非人MCT1的相应残基的表位，所述非人MCT1例如选自啮齿动物(例如小鼠、大鼠、豚鼠)，兔，鸡，非人灵长类动物(例如食蟹猴、黑猩猩、猩猩)，牛，绵羊，犬和猫；
其中可选地，存在于所述表位中的残基通过使用丙氨酸扫描鉴定。
8.根据权利要求7的与选择的人MCT1上表位结合的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段还与下列一个或多个残基相互作用：
(i)残基P37、I40、K45、E48和T55(环1)中的一个或多个。
(ii)残基Q111(环2)；
(iii)残基Q166(环3)；
(iv)残基L284、E296、S298(环4)中的一个或多个；
(v)残基Y353(环5)；
(vi)残基Y419、T422(环6)中的一个或两个；和/或
(vii)上述的任意组合。
9.与非人MCT1上的表位结合的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，该非人MCT1任选地选自啮齿类(例如，小鼠，大鼠，豚鼠)，兔，禽类(例如鸡，火鸡，鹅)，非人类灵长类动物(例如食蟹猴，黑猩猩，猩猩)，牛，绵羊，犬科动物，猫科动物，其中可选地所述非人MCT1上的表位包含与人MCT1上的T41、S285、S286、Y287、G417、I47和D418中的一个或多个相应的非人MCT1上的一个或多个残基。
10.权利要求8或9的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其拮抗、抑制或阻断所述非人MCT1的一种或多种活性，例如在体外和/或体内。
11.前述权利要求任一项的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其是人的、人源化的、非人灵长类的、灵长类化的、鸡的、啮齿类的或嵌合的。
12.前述权利要求任一项的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其抑制人MCT1介导的乳酸转运，例如，在体外和/或体内的。
13.前述权利要求任一项的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其结合到内源性MCT1表达细胞和/或结合到重组或工程化的MCT1表达细胞，例如，表达人MCT1的293细胞。
14.前述权利要求任一项的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段选自由以下组成的组：人或人源化单克隆抗体；单特异性抗体；多特异性抗体；多特异性抗体样多肽，一种人源化抗体；人或人源化的四聚体抗体；人或人源化的四价抗体；人或人源化多特异性抗体；单链抗体；结构域特异性抗体；单结构域抗体；结构域缺失的抗体；scFc融合蛋白；嵌合抗体；合成抗体；重组抗体；杂合抗体；多特异性抗体，双特异性抗体，ByTE，一种突变的抗体；CDR移植抗体；抗体片段；Fab；F(ab′)2；Fab′片段；Fv片段；单链Fv(scFv)片段；Fd片段；dAb片段；diabody抗体；纳米抗体；双价抗体；VHH抗体；和微型抗体。
15.前述权利要求任一项的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其是人源化抗体或其抗原结合片段。
16.前述权利要求任一项的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含抗MCT1抗体Ab1-Ab95中任一种的至少1、2、3、4、5或全部6个CDR，其中可选地，所述CDR是根据Kabat或根据Chothia和Lesk定义的；或分离的抗体或抗原结合片段，其与MCT1抗体Ab1-Ab95任一种竞争结合MCT1、或结合相同的表位，或任何前述的亲和成熟变体。
17.前述权利要求任一项的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其与抗MCT1抗体Ab1-Ab95任一种包含相同的CDR，其中可选地，所述CDR根据Kabat或根据Chothia和Lesk定义。
18.一种根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含与选自Ab1-Ab95或其人源化变体的抗MCT1抗体中所包含的VH多肽相同的VH多肽。
19.一种根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含与选自Ab1-Ab95或其人源化变体的抗MCT1抗体中所包含的VL多肽相同的VL多肽。
20.一种根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含与选自Ab1-Ab95或其人源化变体的抗MCT1抗体中所包含的VH多肽和VL多肽相同的VH多肽和VL多肽。
21.前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含可变重链多肽和/或可变轻链多肽，所述可变重链多肽和/或可变轻链多肽分别与抗MCT1抗体Ab1-Ab95任一种中所含的可变重链多肽和/或可变轻链多肽具有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。
22.前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含：VH CDR1,2和3多肽，分别具有SEQ ID NO:4-6的氨基酸序列；以及VL CDR1,2和3多肽，分别具有SEQ ID NO:7-9的氨基酸序列。
23.衍生自Ab1-Ab95任一种的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，可选地含有与Ab1-Ab95任一种相同的CDR，其中可选地，所述CDR根据Kabat或根据Chothia和Lesk定义。
24.衍生自Ab1-Ab95任一种的亲和力成熟的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其中，最多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个CDR残基相对于组成Ab1-Ab95中任一种的6个CDR多肽的CDR残基发生突变，其中可选地，所述亲和力成熟的抗MCT1抗体以相同于或高于其所衍生自的MCT1抗体的亲和力与人MCT1结合，和/或所述亲和力成熟的抗体或抗原结合片段拮抗人MCT1，例如，在体外和/或体内，其中可选地，所述CDR根据Kabat或根据Chothia和Lesk定义。
25.权利要求24的亲和力成熟的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其中最多1、2、3、4、5、6或7个CDR残基相对于Ab1-Ab95中任一种的CDR多肽发生了突变。
26.权利要求24的亲和力成熟的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其中最多1、2、3或4个CDR残基相对于Ab1-Ab95中任一种的CDR多肽发生了突变。
27.权利要求24的亲和力成熟的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其中最多1或2个CDR残基相对于Ab1-Ab95中任一种的CDR多肽发生了突变。
28.前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其进一步与非人MCT1，可选地与啮齿动物、兔、鸡或非人灵长类的MCT1结合。
29.抗MCT1抗体，包含SEQ ID NO:2和3；SEQ ID NO:12和13；SEQ ID NO:14和15；SEQ IDNO:16和17的VH和VL多肽；或包含抗体Ab5-Ab95任一种的VL和/或VH 多肽，或包含抗体Ab5-Ab95任一种的VL和/或VH多肽的人源化或亲和力成熟的变体。
30.抗MCT1抗体或抗原结合片段，包含具有选自SEQ ID NO:2、12、14、16、19-32、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153和155的氨基酸序列的可变重链多肽或重链多肽；和具有选自SEQ ID NO:3、13、15、17、33-44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154和156的氨基酸序列的可变轻链多肽或轻链多肽。
31.抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含分别具有选自以下的氨基酸序列的可变重链多肽和可变轻链多肽：SEQ ID NO:2和3；SEQ ID NO:12和13；SEQ ID NO:14和15；SEQ IDNO:16和17；SEQ ID NO:45和46；SEQ ID NO:47和48；SEQ ID NO:49和50；SEQ ID NO:51和52；SEQ ID NO:53和54；SEQ ID NO:55和56；SEQ ID NO:57和58；SEQ ID NO:59和60；SEQ IDNO:61和62；SEQ ID NO:63和64；SEQ ID NO:65和66；SEQ ID NO:67和68；SEQ ID NO:69和70；SEQ ID NO:71和72；SEQ ID NO:73和74；SEQ ID NO:75和76；SEQ ID NO:77和78；SEQ IDNO:79和80；SEQ ID NO:81和82；SEQ ID NO:83和84；SEQ ID NO:85和86；SEQ ID NO:87和88；SEQ ID NO:89和90；SEQ ID NO:91和92；SEQ ID NO:93和94；SEQ ID NO:95和96；SEQ IDNO:97和98；SEQ ID NO:99和100；SEQ ID NO:101和102；SEQ ID NO:103和104；SEQ ID NO:105和106；SEQ ID NO:107和108；SEQ ID NO:109和110；SEQ ID NO:111和112；SEQ ID NO:113和114；SEQ ID NO:115和116；SEQ ID NO:117和118；SEQ ID NO:119和120；SEQ ID NO:121和122；SEQ ID NO:123和124；SEQ ID NO:125和126；SEQ ID NO:127和128；SEQ ID NO:129和130；SEQ ID NO:131和132；SEQ ID NO:133和134；SEQ ID NO:135和136；SEQ ID NO:137和138；SEQ ID NO:139和140；SEQ ID NO:141和142；SEQ ID NO:143和144；SEQ ID NO:145和146；SEQ ID NO:147和148；SEQ ID NO:149和150；SEQ ID NO:151和152；SEQ ID NO:153和154；和SEQ ID NO:155和156。
32.根据前述权利要求任一项的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含具有选自SEQ ID NO:3、13、15、17和33-44的氨基酸序列的VL多肽或抗体Ab5-Ab60中任一种的VL多肽。
33.根据前述权利要求任一项的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含具有选自SEQ ID NO:2、12、14、16和19-32的氨基酸序列的VH多肽或抗体Ab5-Ab60中任一种的VH多肽。
34.根据前述权利要求任一项的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含具有选自SEQ ID NO:3、13、15、17和33-44的氨基酸序列的VL多肽和具有选自SEQ ID NO:2、12、14、16和19-32的氨基酸序列的VH多肽，或抗体Ab5-Ab60中任一种的VL多肽和VH多肽。
35.前述权利要求任一项的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含具有与SEQ IDNO:3、13、15、17、33-44中的任何一项或与抗体Ab5-Ab95任一项中包含的VL多肽具有至少80、85、90、95、96、97、98或99％序列同一性的序列的VL多肽。
36.前述权利要求任一项的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含具有与SEQ IDNO:2、12、14、16、19-32中的任何一项或与抗体Ab5-Ab95任一项中包含的VH多肽具有至少80、85、90、95、96、97、98、99％或100％序列同一性的序列的VH多肽。
37.前述权利要求任一项的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其包含具有与SEQ IDNO:3、13、15、17、33-44中的任何一项或与抗体Ab5-Ab95任一项中包含的VL多肽具有至少80、85、90、95、96、97、98或99％序列同一性的序列的VL多肽；和/或具有与SEQ ID NO:2、12、14、16、19-32中的任何一项或与抗体Ab5-Ab95任一项中包含的VH多肽具有至少90、95、96、97、98、99％或100％序列同一性的序列的VH多肽。
38.前述权利要求任一项的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其中重链CDR3序列包含18、19、20、21、22、23或24个氨基酸残基。
39.前述权利要求任一项的人源化抗MCT1抗体或抗原结合片段，其中重链CDR3序列包含21、22、23或24个氨基酸残基。
40.前述权利要求任一项的分离的抗MCT1抗体或抗原结合片段，其中重链CDR3序列与SEQ ID NO:6一致或与之相差最多5、4、3、2或1个残基，可选地，所述差异如果存在则包含保守的氨基酸取代或包含在包含相同长度CDR3的人或啮齿类抗体的重链CDR3中的相同位置上普遍存在的取代氨基酸。
41.根据前述权利要求任一项的分离的人或人源化抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其与参照抗体竞争结合MCT1，其中参照抗体选自Ab1-Ab95。
42.抗人MCT1抗体或其抗原结合片段，包含与Ab1-Ab95任一种相同的CDR和/或与选自Ab1-Ab95的抗人MCT1抗体相同的可变重链和/或可变轻链CDR多肽。
43.抗MCT1抗体，包含选自Ab1-Ab95的抗体的可变重链和/或可变轻链多肽。
44.根据前述权利要求任一项的人或人源化抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含重链和/或轻链恒定区，任选地人IgG1，IgG2，IgG3或IgG4重链和/或轻链恒定区，所述恒定区可选地被突变以削弱或增强至少一种效应子功能。
45.权利要求44的抗MCT1抗体，其中效应子功能包括FcR结合，补体结合，ADCC功能，FcRN结合和糖基化。
46.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其中由相应CDR中的α-碳原子的位置所示，该抗体或其抗原结合片段的CDR形成与Ab1相似或相同的三维抗体结构，其中通过结构比对确定，所述相应CDR中的α-碳原子的位置的差异小于
Figure FDA0002570801820000051
小于
Figure FDA0002570801820000053
或小于
Figure FDA0002570801820000052
的平均均方根偏差(RMSD)。
47.人源化抗体或其抗原结合片段，包含Ab1的可变重链CDR序列(SEQ ID NOS:4、5、6)和Ab1的可变轻链CDR序列(SEQ ID NOS:7、8、9)。
48.抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含与MCT1 Ab1的VH结构域的氨基酸序列(SEQID NO:2)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的VH结构域；并且包含与MCT1 Ab1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的VL结构域。
49.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含人恒定结构域，可选地IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，进一步可选地经修饰以增强至少一种选自糖基化、FcR结合、FcRN结合、补体结合和ADCC功能的Fc效应子功能。
50.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段，其包含人IgG1恒定区，所述人IgG1恒定区可选地经修饰以减弱FcR结合和/或补体结合，进一步可选地包含E269R和/或K322A突变，和/或所述人IgG1恒定区包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。
51.一种融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，其包含至少一个根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或抗原结合片段。
52.前述权利要求任一项的抗MCT1抗体、融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，其降低T效应细胞的活性和/或T效应细胞的数量，例如CD3+、CD4+或CD8+T效应细胞。
53.前述权利要求任一项的抗MCT1抗体、融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，其增加Tr1细胞的活性和/或数量。
54.前述权利要求任一项的抗MCT1抗体、融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽，其降低T效应细胞的活性和/或T效应细胞的数量(例如CD3+、CD4+或CD8+T效应细胞)，并且进一步增加Tr1细胞的活性和/或数量。
55.一种细胞，其表达至少一种根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段、融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽、或多特异性或双特异性抗体多肽。
56.权利要求55的细胞，其包含人、非人哺乳动物、酵母、细菌、两栖动物、植物、昆虫或爬行动物的细胞。
57.权利要求55的细胞，其包含人细胞，可选地人免疫细胞，例如，T细胞、NK细胞、单核细胞、调节性T细胞或巨噬细胞。
58.针对根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段产生的抗独特型抗体，可选地其是人的、人源化的和/或亲和力成熟的。
59.针对权利要求58的抗独特型抗体产生的抗抗独特型抗体，其结合MCT1。
60.权利要求59的抗抗独特型抗体，其阻断或拮抗一种或多种MCT1活性。
61.融合蛋白，其包含根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或SEQID NO:6的VH CDR3多肽或与之具有至少80％序列同一性的变体，其直接或间接地连接到另一多肽，如：抗体多肽或抗体结构域、血清白蛋白、人或其他灵长类动物血清白蛋白、adnectin、affibody、DARPin、anticalin、乙二醇(PEG)、单甲氧基聚乙二醇(mPEG)、XTEN分子、rPEG分子、或任意前述的片段或变体。
62.权利要求61的融合蛋白，其中抗体多肽或结构域包含Fc多肽或其片段，例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区或其片段。
63.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或根据前述权利要求任一项的表达任意前述的细胞，其在与细胞，例如活化的T细胞或B细胞，进一步任选地是人细胞表面的MCT1结合后，引起下列一种或多种性质：
(i)抑制乳酸的转运；
(ii)抑制溴丙酮酸的转运；
(iii)抑制单羧酸、丙酮酸、衍生自亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸的支链含氧酸、酮体、乙酰乙酸、β-羟基丁酸、乙酸、乳酸、细胞营养物、代谢物、离子、激素、脂质和酮类中的一种或多种的转运；
(iv)抑制CD3/CD28刺激的T细胞的增殖；
(v)抑制活化T细胞或B细胞的增殖；
(vi)抑制一种或多种炎性细胞因子的产生；
(vii)降低T效应细胞，例如CD3+、CD4+或CD8+T效应细胞，的活性和/或数量；
(viii)增加调节性T(Treg)细胞的比例或活性；
(ix)抑制混合淋巴细胞反应中的同种异体活化；
(x)或任意前述的组合。
64.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或根据前述权利要求任一项的表达任意前述的细胞，其在与MCT1结合后抑制一种或多种炎性细胞因子的产生。
65.根据权利要求64的根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达任意前述的细胞，其中所述一种或多种炎性细胞因子中至少一种选自FGF2、FLT-3L、Fractilkine、G-CSF、GM-CSF、GRO、IFNα2、IFNγ、IL-3、IL-5、IL-9、IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-13、IL-17a、IP-10、MCP-1、MDC、MIP-1a、MIP-1b、sCD40L、TNFα和TNFβ。
66.根据权利要求64或65的根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽，或表达任意前述的细胞，其中所述一种或多种炎症细胞因子中至少一种选自IFNγ、GM-CSF、TNFα、IL-10和IL-6。
67.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达任意前述的细胞，其中通过乳酸FLIPR测定法测定，其以小于100nM、小于50nM或小于10nM的Kd抑制活化T细胞中MCT1介导的乳酸转运。
68.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达任意前述的细胞，其不：
(i)与MCT2、MCT3、MCT4和/或CD147结合，如经由流式细胞术测量；
(ii)抑制MCT2、MCT3和/或MCT4的转运；
(iii)抑制IL-2的产生；
(iv)抑制单核细胞中的乳酸转运；
(v)抑制幼稚、静息和/或调节性T细胞的增殖；
(vi)抑制RBC中的乳酸转运；
(vii)改变一种或多种T细胞活化标志物的表达，可选地选自CD25、CD54、CD69、CD95、CD98、CD147、CD154、CD278、CD279和HLA-DR/DP/DQ。
69.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达任意前述的细胞，其包含人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区，可选地Fc区已被修饰以改变效应子功能、半衰期、蛋白水解或糖基化中的至少一种，其中可选地Fc区包含一种或多种改变或消除N-和/或O-糖基化的突变。
70.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达任意前述的细胞，其与人MCT1结合的亲和力(KD)小于100nM、小于50nM或小于10nM。
71.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达任意前述的细胞，其还具有以下一种或多种修饰：
(i)与细胞毒性剂缀合；
(ii)包含在双特异性抗体中；
(iii)包含在多特异性抗原结合蛋白中；
(iv)与标记物缀合；以及
(v)与另一治疗剂，任选的免疫抑制剂或化疗剂，缀合。
72.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达任意前述的细胞，其中所述标记物是化学发光标记物、顺磁标记物、MRI造影剂、荧光标记物、生物发光标记物、或放射性标记物，或作为抑制DNA、RNA或蛋白质合成的结构部分的细胞毒性剂；放射性核素；或核糖体抑制蛋白。
73.根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达任意前述的细胞，其适用于治疗患有如下疾病的人类受试者：自身免疫性、炎性或变应性疾病；代谢性疾病(例如，糖尿病)、多囊肾病(ADPKD)、癌症；移植受者或EIHI或任何其它病症，其中减弱T效应细胞数量和/或活性，例如CD3+T细胞、CD4+T细胞和/或CD8+T细胞，和/或提升Tr1或T抑制细胞活性和/或数量，是治疗上期望的。
74.针对在前权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段产生的抗独特型抗体或其抗原结合片段，其可选地中和它所结合的抗MCT1抗体或其抗原结合片段的一种或多种生物学效应。
75.针对根据权利要求74的抗独特型抗体或其抗原结合片段产生的抗抗独特型抗体或其抗原结合片段，可选地其中所述抗抗独特型抗体或其抗原结合片段中和其所结合的抗独特型抗体或其抗原结合片段。
76.使用权利要求74的抗独特型抗体的方法，用于在受试者中监测所述抗MCT1抗体或其抗原结合片段的体内水平，或在受试者中中和所述抗MCT1抗体或其抗原结合片段的体内效应。
77.编码前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或抗抗MCT1抗体或抗原结合片段、或抗抗MCT1抗体或抗原结合片段的多核苷酸。
78.表达载体，包含权利要求77的多核苷酸。
79.宿主细胞，包含权利要求77的多核苷酸或权利要求78的表达载体，任选人免疫细胞，例如，T细胞、B细胞或NK细胞。
80.药物或诊断组合物，包含有效量的根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或抗抗MCT1抗体或抗原结合片段、或抗抗MCT1抗体或抗原结合片段、或表达任意前述的细胞。
81.权利要求80的药物组合物，其适合用于人或非人的治疗或预防的用途。
82.生产分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段的方法，包括在允许抗体或其抗原结合片段表达的条件下培养权利要求79的宿主细胞；以及从培养基或宿主细胞中回收抗体或其抗原结合片段。
83.药物组合物，包含药学有效量的根据前述权利要求任一项的分离的抗MCT1抗体或其抗原结合片段、抗独特型抗体、融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达任意前述的细胞。
84.权利要求83的药物组合物，还包含药物稀释剂、载体或赋形剂。
85.权利要求83或84的药物组合物，还包含另一种治疗剂。
86.权利要求85的药物组合物，其中其他治疗剂是线粒体抑制剂和/或双胍类和/或另一种单羧酸转运蛋白(MCT抑制剂)，例如，SLC16A1、SLC16A2、SLC16A3、SLC16A4、SLC16A5、SLC16A6、SLC16A7、SLC16A8、SLC16A9、SLC16A10、SLC16A11、SLC16A12、SLC16A13或SLC16A14抑制剂或MCT1、MCT2、MCT3、MCT4、MCT5、MCT6、MCT7、MCT8、MCT9或MCT10抑制剂，其中所述抑制剂可抑制一种或多种前述转运蛋白，所述抑制剂还可选地包含小分子、RNAi、抗体、抗体片段或融合蛋白。
87.权利要求85或86的药物组合物，其中所述其他活性剂选自二甲双胍、苯乙双胍、阿来西定、二双胍、Buformim、氯己定、氯丙胍、苯基双胍、聚氨基丙基双胍、聚己缩胍、吗啉胍、格列吡嗪、格列本脲、瑞格列奈、沙格列汀、西格列汀、Pyrvinum Pamoate、氯胍、多西环素、阿托伐醌、卡格列净、格列酮类(例如曲格列酮,吡格列酮,罗格列酮)，替加环素、Thiazolides(例如，硝唑尼特)、水杨酰苯胺类(如氯生太尔、氯羟柳胺、氯硝柳胺)、派克昔林、普萘洛尔、非诺贝特、咪康唑、奈法唑酮、喷他脒、氢化可的松、间位碘代苄胍、氯尼达明、α-生育酚琥珀酸酯(维生素E的主要形式)、碳酸酐酶、ME344(MEI Pharma)、HIF1a抑制剂(例如，白杨素、Chetomin、二甲双酚A、BAY84-2243)、SR13800、二甲基草酰甘氨酸(DMOG)、羰基氰化物对三氟甲氧基苯腙(FCCP)、羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)、抗霉素A、寡霉素、沙利霉素、二硝基苯酚、鱼藤酮、苯乙双胍、Tyrphostin 9、Atpenin A5、小檗碱、叠氮化物、氰化物、氧化亚氮、三氧化二砷、pyrvinium、卡格列净、罗格列酮、异戊巴比妥、和厚朴酚、牛蒡子苷元、咖啡酸苯基酯、Perhenazine、Triflouroperazine、丙酮醛、以及包含任意前述的组合。
88.在有需要的受试者中抑制T效应细胞例如CD3+、CD4+和/或CD8+T效应细胞的活性和/或数量的方法，包括给受试者施用治疗性或预防性有效量的根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达至少一种任意前述的细胞、或包含治疗性或预防性有效量的任意前述的药物组合物。
89.在有需要的受试者中提升T抑制细胞或Tr1细胞的活性和/或数量的方法，包括向受试者施用治疗性或预防性有效量的根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达至少一种任意前述的细胞、或包含治疗性或预防性有效量的任意前述的药物组合物。
90.在有需要的受试者中抑制T效应细胞例如，CD3+、CD4+和/或CD8+T效应细胞的活性和/或数量以及提升T抑制细胞或Tr1细胞的活性和/或数量的方法，包括向受试者施用治疗性或预防性有效量的根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达至少一种任意前述的细胞、或包含治疗性或预防性有效量的任意前述的药物组合物。
91.权利要求88-90的方法，其中受试者患有自身免疫病症、变应性病症、炎性病症、代谢障碍、癌症、移植受者、细胞治疗受者、EIHI病症、多囊肾病(ADPKD)，其特性为升高的T效应细胞活性(例如CD3+、CD4+或CD8+T效应细胞)，和/或减弱的T抑制细胞或Tr1细胞活性和/或减少的T抑制细胞或Tr1细胞数量。
92.预防或治疗自身免疫性病症、变应性病症、炎性病症、代谢障碍、癌症、移植受者、细胞治疗接受者、EIHI病症、多囊肾病(ADPKD)、或与所述任何一种病症相关的症状的方法，包括向有需要的受试者施用治疗性或预防性有效量的根据前述权利要求任一项的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达至少一种任意前述的细胞、或包含治疗性或预防性有效量的任意前述的药物组合物。
93.权利要求92的方法，其中，自身免疫性病症、变应性病症、炎性病症、代谢障碍、癌症、移植受者、细胞治疗接受者、EIHI病症、多囊肾病(ADPKD)的特性为升高的T效应细胞活性，例如CD3+、CD4+或CD8+，和/或减弱的T抑制细胞或Tr1细胞活性和/或减少的T抑制细胞或Tr1细胞数量。
94.根据权利要求92，93或94的方法，其中代谢障碍包括Danon病、糖尿病、Duarte半乳糖血症、MDP综合征、代谢性肌病、亚甲基四氢叶酸还原酶缺乏、Winchester综合征、水杨酸敏感、X-连锁低磷酸血症、酒精性酮症酸中毒、酒精脸红反应、α-氨基己二酸和α-酮己二酸尿症、高阴离子间隙代谢性酸中毒、痛风、再喂养综合征、运动相关的低钠血症、胰腺炎、pansteatitis和Metab-L。
95.根据权利要求88-94的方法，其中所述病症至少部分地由活化的T细胞或B细胞和/或表达MCT1的细胞介导。
96.根据权利要求88-95任一项的方法，其中施用抗体或其抗原结合片段或融合蛋白具有以下一种或多种作用：
(i)抑制活化的T细胞或B细胞中的乳酸转运；
(ii)抑制活化的T细胞或B细胞中溴丙酮酸毒素的转运；
(iii)抑制CD3/CD28刺激的T细胞的增殖；
(iv)抑制活化T细胞的增殖；
(v)抑制一种或多种炎性细胞因子的产生和/或分泌；
(vi)不抑制IL-2的产生和/或分泌；
(vii)增加尿酮的产生；
(viii)增加存活时间；
(ix)减少移植排斥；
(x)增加调节性T(Treg)细胞的比例或活性；
(xi)增加是Treg的CD4+T细胞的比例；
(xii)降低IgG1+B细胞的比例；
(xiii)降低生发中心B细胞的比例；
(xiv)不抑制人RBC中的乳酸转运；
(xv)减少T细胞的活化；以及
(xvi)降低细胞毒性T细胞的活性。
97.根据权利要求88-96任一项的方法，其用于治疗或预防狼疮、移植物排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、1或2型糖尿病或肥胖中的至少一种。
98.根据权利要求88-97任一项的方法，其中通过如下来监测治疗效果：测量尿酮、TR1细胞数量的增加、选自炎性细胞因子、IFNγ、GM-CSF、TNFα、IL-10、IL-6、IL-2、TIGIT、PD1、颗粒酶B的生物标志物的表达减少或增加、效应T细胞和/或hCD3+细胞数量的减少、PMBC增殖的抑制、或任意前述的组合。
99.一种评估抗MCT1拮抗剂抗体的治疗效果的方法，其包括检测其在体外或体内对任何前述一项的影响：尿酮、TR1细胞的数量、选自炎性细胞因子、IIFNγ、GM-CSF、TNFα、IL-10、IL-6、IL-2、TIGIT、PD1、颗粒酶B的生物标志物的表达、效应T细胞和/或hCD3+细胞数量的减少、PMBC增殖的抑制、或任意前述的组合。
100.一种用于治疗或预防癌症复发的方法，包括向有需要的受试者施用治疗性或预防性有效量的根据任一前述权利要求的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达至少一种前述物质的细胞、或包含治疗性或预防性有效量的任意前述物质的药物组合物。
101.根据权利要求100的方法，其中肿瘤细胞表达MCT1。
102.根据权利要求88-101任一项的方法，其中受试者是哺乳动物。
103.根据权利要求102的方法，其中哺乳动物是人、非人灵长类动物或啮齿动物。
104.一种抑制或降低活化的T细胞或B细胞活性的方法，包括将所述活化的细胞与根据任一前述权利要求的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达至少一种前述物质的细胞接触。
105.根据权利要求88-104任一项的方法，其中根据任一前述权利要求的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达至少一种前述物质的细胞作为单一疗法施用。
106.根据权利要求88-105任一项的方法，其中根据任一前述权利要求的抗MCT1抗体或其抗原结合片段或融合多肽、嵌合抗原受体(CAR)、多特异性抗原结合多肽或多特异性或双特异性抗体多肽、或表达至少一种前述物质的细胞，与第二治疗剂联合施用。
107.根据权利要求106的方法，其中治疗剂选自免疫抑制药物、化疗剂、双胍类药物例如二甲双胍、或其它抗糖尿病药、或抗炎药。
108.根据权利要求106的方法，其中其他治疗剂是线粒体抑制剂和/或双胍类药物。
109.根据权利要求106-108任一项的方法，其中所述其他治疗剂选自二甲双胍、苯乙双胍、阿来西定、二双胍、Buformim、氯己定、氯丙胍、苯基双胍、聚氨基丙基双胍、聚己缩胍、吗啉胍、格列吡嗪、格列本脲、瑞格列奈、沙格列汀、西格列汀、Pyrvinum Pamoate、氯胍、多西环素、阿托伐醌、卡格列净、格列酮类(例如曲格列酮,吡格列酮,罗格列酮)，替加环素、Thiazolides(例如，硝唑尼特)、水杨酰苯胺类(如氯生太尔、氯羟柳胺、氯硝柳胺)、派克昔林、普萘洛尔、非诺贝特、咪康唑、奈法唑酮、喷他脒、氢化可的松、间位碘代苄胍、氯尼达明、α-生育酚琥珀酸酯(维生素E的主要形式)、碳酸酐酶、ME344(MEI Pharma)、HIF1a抑制剂(例如，白杨素、Chetomin、二甲双酚A、BAY84-2243)、SR13800、二甲基草酰甘氨酸(DMOG)、羰基氰化物对三氟甲氧基苯腙(FCCP)、羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)、抗霉素A、寡霉素、沙利霉素、二硝基苯酚、鱼藤酮、苯乙双胍、Tyrphostin 9、Atpenin A5、小檗碱、叠氮化物、氰化物、氧化亚氮、三氧化二砷、pyrvinium、卡格列净、罗格列酮、异戊巴比妥、和厚朴酚、牛蒡子苷元、咖啡酸苯基酯、Perhenazine、Triflouroperazine、丙酮醛、以及包含任意前述的组合。
110.根据权利要求88-109任一项的方法，其中抗MCT1抗体、其抗原结合片段、融合蛋白或药物组合物经肠内、胃肠外或局部给药。
111.一种监测使用与MCT1结合并减少MCT1介导的乳酸转运的抗体或其抗原结合片段或融合蛋白治疗的疗效的方法，包括测量尿酮的水平。
112.一种用于诊断选自以下的病症的方法:自身免疫性、炎性或变应性病症；癌症；EIHI；多囊肾病(ADPKD)；糖尿病或其他代谢障碍、和/或与MCT1的上调相关的病症，所述方法包括：
(i)分离负责介导该病症的细胞；
(ii)将所述细胞与抗MCT1抗体或其抗原结合片段或MCT1结合性融合蛋白接触；和
(iii)检测与所述细胞结合的抗MCT1抗体或抗原结合片段或其MCT1结合性融合蛋白的水平。
113.根据权利要求111或112的方法，其中所述病症是自身免疫性，炎症性，移植，GVHD，代谢障碍(例如，糖尿病)，EIHI；多囊肾病；或变应性病症。
114.权利要求112的方法，其中所述病症是自身免疫，炎症，移植，GVHD，代谢障碍(例如，糖尿病)，多囊肾病，或过敏性病症，并且细胞是活化的T细胞或B细胞。
115.根据权利要求112的方法，其中病症是癌症并且细胞是肿瘤细胞。
116.根据权利要求112的方法，其中病症是EIHI并且细胞是β细胞。
117.根据权利要求88-116任一项的方法，其中抗MCT1抗体或其抗原结合片段或MCT1结合性融合蛋白包含以下一种或多种：
(i)与选自Ab1-Ab95中任何一种的抗MCT1抗体或另一种包含与任意前述抗MCT1抗体相同的CDR的抗MCT1抗体竞争；
(ii)包含与选自Ab1-Ab95的抗人MCT1抗体相同的CDR；
(iii)包含选自Ab1-Ab95的抗人MCT1抗体的亲和力成熟或人源化变体；
(iv)与包含如下VH结构域和VL结构域的抗体竞争，其中所述VH结构域，相对于MCT1Ab1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)、或与Ab2-Ab95任一种相比，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；并且所述VL结构域，相对于MCT1 Ab1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)、或与Ab2-Ab95任一种相比，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；
(v)包含MCT1 Ab1的重链CDR序列(SEQ ID NO:.4、5、6)和MCT1 Ab1的轻链CDR序列(SEQID NO:7，8，9)、或Ab2-Ab95中任何一种的重链CDR序列和轻链CDR序列；
(vi)与包含如下VH结构域和VL结构域的抗体竞争或本身包含如下VH结构域和VL结构域，其中所述VH结构域，相对于MCT1 Ab1的VH结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)、或与Ab2-Ab60之任一，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；并且所述VL结构域，相对于MCT1 Ab1的VL结构域的氨基酸序列(SEQ IDNO:3)、或与Ab2-Ab60之任一，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；
(vii)与包含如下VH结构域的抗体竞争或本身包含如下VH结构域，其中所述VH结构域，相对于选自SEQ ID NO:2,12,14,16,19-32的VH结构域的氨基酸序列、或与Ab5-Ab60之任一，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；和/或
(viii)与包含如下VL结构域的抗体竞争或本身包含如下VL结构域，其中所述VL结构域，相对于选自SEQ ID NO:13,15,17或33-44的VH结构域的氨基酸序列、或与Ab5-Ab60之任一，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性；和/或
(ix)包含至少一个肽，其中所述肽包含与SEQ ID NO:6一致的序列，或包含与之相差最多5、4、3、2或1个残基的序列，其中所述肽直接或间接地连接到另一个多肽，例如，抗体多肽或抗体结构域、血清白蛋白、人或其它灵长类动物血清白蛋白、adnectin，亲和体(affibody)，DARPin，anticalin，乙二醇(PEG)，单甲氧基PEG(mPEG)，XTEN分子，rPEG分子，或任何前述物质的片段或变体。
118.一种检测细胞的MCT1，可选地功能性MCT1的表达的方法，包括测定根据任意前述权利要求的抗MCT1抗体是否与所述细胞表达的MCT1结合。
119.根据权利要求118的方法，其中细胞是非人的。
120.根据权利要求118的方法，其中细胞是非人的。
121.根据权利要求118的方法，其中所述细胞获自患有或疑似包含自身免疫性病症、变应性病症、炎性病症、代谢障碍、癌症、移植受者、细胞治疗接受者、EIHI病症、多囊肾疾病(ADPKD)的患者。
122.根据权利要求118的方法，其中该检测方法用于诊断或监测疾病或疾病预后，其中使用获自患者的细胞样本，所述患者患有或疑似包含自身免疫性病症、变应性病症、炎性病症、代谢障碍、癌症、移植受者、细胞治疗接受者、EIHI病症、多囊肾疾病(ADPKD)，其特征在于包含异常(增加的)MCT1表达或活性的细胞。
CN201980007427.5A 2018-01-05 2019-01-04 抗mct1抗体及其用途 Active CN111757893B (zh)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862614081P 2018-01-05 2018-01-05
US62/614,081 2018-01-05
US201862703223P 2018-07-25 2018-07-25
US62/703,223 2018-07-25
US201862717289P 2018-08-10 2018-08-10
US62/717,289 2018-08-10
US201862719364P 2018-08-17 2018-08-17
US62/719,364 2018-08-17
PCT/US2019/012415 WO2019136300A2 (en) 2018-01-05 2019-01-04 Anti-mct1 antibodies and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111757893A true CN111757893A (zh) 2020-10-09
CN111757893B CN111757893B (zh) 2024-08-16

Family

ID=67144294

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201980007427.5A Active CN111757893B (zh) 2018-01-05 2019-01-04 抗mct1抗体及其用途

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20190263931A1 (zh)
EP (1) EP3735427A4 (zh)
JP (2) JP7545897B2 (zh)
CN (1) CN111757893B (zh)
AU (2) AU2019205489A1 (zh)
BR (1) BR112020013314A2 (zh)
CA (1) CA3087259A1 (zh)
IL (1) IL275826A (zh)
MX (1) MX2020007033A (zh)
TW (1) TWI751398B (zh)
WO (1) WO2019136300A2 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114181945A (zh) * 2021-12-17 2022-03-15 中山大学附属第一医院 tRNA m7G修饰、WDR4、METTL1在机体发育的功能和应用
WO2024017383A1 (zh) * 2022-07-21 2024-01-25 佰舟生物科技(苏州)有限公司 抗mct1抗体及其用途

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019136300A2 (en) * 2018-01-05 2019-07-11 Immunext, Inc. Anti-mct1 antibodies and uses thereof
KR20220054689A (ko) 2019-10-15 2022-05-03 일라이 릴리 앤드 캄파니 재조합적으로 조작된, 리파제/에스테라제-결핍 포유동물 세포주
TWI745906B (zh) * 2020-03-27 2021-11-11 國立臺灣大學 烯丙胍聚合物及其製備方法與應用
AU2021246922A1 (en) * 2020-03-30 2022-10-20 Crystal Bioscience Inc. Anti-GIPR antibody and methods of use thereof
US12059435B2 (en) * 2020-08-31 2024-08-13 The Johns Hopkins University Method for accelerating nerve regeneration
JP2024526851A (ja) * 2021-07-19 2024-07-19 ユニバーシティ オブ ピッツバーグ － オブ ザ コモンウェルス システム オブ ハイヤー エデュケイション モノカルボン酸トランスポーター１１の阻害によるがんの細胞治療
TWI842088B (zh) * 2021-09-14 2024-05-11 美商伊穆諾米塔博立森發展公司 人類單羧酸鹽轉運蛋白1抗體及其用途

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040072746A1 (en) * 2001-10-16 2004-04-15 Michael Sullivan Inhibitors of monocarboxylate transport
CN102292106A (zh) * 2008-11-25 2011-12-21 奥尔德生物制药公司 Il-6抗体及其用途
CN103228799A (zh) * 2010-11-29 2013-07-31 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于检测神经变性疾病或病症的方法
WO2016063037A1 (en) * 2014-10-20 2016-04-28 Queen Mary University Of London Inhibitors of lactate transporters for use in the treatment of inflammatory diseases
CN107405398A (zh) * 2014-12-05 2017-11-28 伊穆奈克斯特股份有限公司 鉴定vsig8作为推定vista受体及其用以产生vista/vsig8激动剂和拮抗剂的用途

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040132813A1 (en) * 2001-05-30 2004-07-08 Brooks George A. Glycerol-lactate esters for use as an energy supplement during exercise and recovery
EP1543169A4 (en) * 2002-01-23 2007-09-12 Us Gov Health & Human Serv METHOD FOR DETERMINING SENSITIVITY TO BACTERIOPHAGE
WO2005056606A2 (en) * 2003-12-03 2005-06-23 Xencor, Inc Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
US7740856B2 (en) * 2005-12-20 2010-06-22 Isu Abxis Co., Ltd. Effect of BST2 on inflammation
KR101385886B1 (ko) * 2005-02-03 2014-04-24 안티토페 리미티드 인간 항체들과 단백질들
CA2713935C (en) * 2008-02-07 2016-11-01 Schering Corporation Engineered anti-tslpr antibodies
GB0904214D0 (en) * 2009-03-11 2009-04-22 Ucb Pharma Sa Biological products
WO2012178173A1 (en) * 2011-06-24 2012-12-27 Centrose, Llc Extracellular targeted drug conjugates
EP3192527A4 (en) * 2014-09-08 2018-04-11 National Cancer Center Cancer-cell-specific antibody, anticancer agent, and cancer testing method
MA42925A (fr) * 2015-09-25 2018-08-01 Hoffmann La Roche Anticorps anti-tigit et méthodes d'utilisation
WO2019136300A2 (en) * 2018-01-05 2019-07-11 Immunext, Inc. Anti-mct1 antibodies and uses thereof

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040072746A1 (en) * 2001-10-16 2004-04-15 Michael Sullivan Inhibitors of monocarboxylate transport
CN102292106A (zh) * 2008-11-25 2011-12-21 奥尔德生物制药公司 Il-6抗体及其用途
CN103228799A (zh) * 2010-11-29 2013-07-31 霍夫曼-拉罗奇有限公司 用于检测神经变性疾病或病症的方法
WO2016063037A1 (en) * 2014-10-20 2016-04-28 Queen Mary University Of London Inhibitors of lactate transporters for use in the treatment of inflammatory diseases
US20170355987A1 (en) * 2014-10-20 2017-12-14 Queen Mary University Of London Inhibitors Of Lactate Transporters For Use In The Treatment Of Inflammatory Diseases
CN107405398A (zh) * 2014-12-05 2017-11-28 伊穆奈克斯特股份有限公司 鉴定vsig8作为推定vista受体及其用以产生vista/vsig8激动剂和拮抗剂的用途

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114181945A (zh) * 2021-12-17 2022-03-15 中山大学附属第一医院 tRNA m7G修饰、WDR4、METTL1在机体发育的功能和应用
CN114181945B (zh) * 2021-12-17 2023-10-31 中山大学附属第一医院 tRNA m7G修饰、WDR4、METTL1在机体发育的功能和应用
WO2024017383A1 (zh) * 2022-07-21 2024-01-25 佰舟生物科技(苏州)有限公司 抗mct1抗体及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
JP2021509822A (ja) 2021-04-08
CN111757893B (zh) 2024-08-16
MX2020007033A (es) 2021-02-26
BR112020013314A2 (pt) 2020-12-01
TWI751398B (zh) 2022-01-01
WO2019136300A2 (en) 2019-07-11
AU2022215229A1 (en) 2022-10-06
TW201938200A (zh) 2019-10-01
IL275826A (en) 2020-08-31
KR20200106498A (ko) 2020-09-14
JP7545897B2 (ja) 2024-09-05
EP3735427A4 (en) 2021-09-15
WO2019136300A3 (en) 2019-09-26
CA3087259A1 (en) 2019-07-11
AU2019205489A1 (en) 2020-06-25
EP3735427A2 (en) 2020-11-11
JP2022160650A (ja) 2022-10-19
US20190263931A1 (en) 2019-08-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111757893B (zh) 抗mct1抗体及其用途
KR102564248B1 (ko) 항-인간 vista 항체 및 이의 용도
US11858990B2 (en) KIR3DL2 binding agents
WO2017181109A1 (en) Anti-human vista antibodies and use thereof
KR20140051272A (ko) 자가면역 질환을 치료하기 위한 항-cd83 효능제 항체의 용도
US20230400467A1 (en) Pvrl2 and/or pvrig as biomarkers for treatment
KR102703605B1 (ko) 항-mct1 항체 및 그의 용도
EA047714B1 (ru) Анти-мст1 антитела и их применение
EP4245374A2 (en) Pvrl2 and/or pvrig as biomarkers for treatment

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40038551

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant