CN111602813A - 一种保健食品用葵花盘发酵原液的制备方法及其产品 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种保健食品用葵花盘发酵原液的制备方法。该制备方法包括：葵花盘干燥、粉碎、过筛、酶解；将葵花盘酶解液加入酵母菌发酵；发酵液过滤后得到成品。该方法将葵花盘先进行酶解后再进行发酵过程，既提高了发酵效率，同时可将葵花碱、黄酮、小分子肽和多糖等生物活性物质较好的富集和保留在发酵原液当中，原料利用率高，营养丰富，操作简单，使用方便。将葵花盘经过加工处理后，制备出葵花盘发酵原液，该原液能在一定程度上综合改善痛风症状，同时，也有利于加强葵花盘的综合利用。

Description

一种保健食品用葵花盘发酵原液的制备方法及其产品

技术领域

本发明涉及发酵技术领域，尤其是涉及一种保健食品用葵花盘发酵原液的制备方法及其产品。

背景技术

葵花盘为除葵花子后的向日葵盘。《中药大辞典》载：向日葵花盘，药性甘、寒，归肝经，功用清热平肝、止痛止血；主治高血压、头痛头晕、耳鸣、痛经、子宫出血、疮疹。《河北中草药》曰：“葵花盘清热燥湿，舒气散结，治头痛、头晕、风火牙痛，目赤云翳，颈前腹痛，外用于蜂窝组织炎。”具有明显消炎、利尿、降压的作用。《浙江药用植物志》介绍葵花盘一味中药可治疗尿路结石。现代药理研究表明，葵花盘粉可以起到抗炎、消肿、止痛、降低血尿酸、溶解尿酸钠的作用，从葵花盘粉中提取的生物碱、黄酮、多糖和小分子肽成分同样具有抗炎、消肿、止痛、降低血尿酸、溶解尿酸钠的作用。分析可能起作用的机理：葵花盘生物碱可以特异性结合尿酸形成葵花碱尿酸复合物，消除尿酸；能抑制嘌呤合成和嘌呤代谢，减少体内尿酸含量；同时抑制炎性细胞的趋化和减少炎症因子释放，对于急性发作的痛风关节炎具有独特的抗炎消肿作用。葵花盘黄酮，是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，阻止核酸的氧化，起到降低嘌呤含量的作用；可以降低血糖和甘油三酯，降低毛细血管脆性，增加通透性可以减轻肾脏细胞压力，透过更多尿酸。同时可以稳定肾蛋白小管，有利于肾脏代谢尿酸；黄酮可以抑制炎性生物酶的渗出，可以止痛。小分子肽是将大分子的蛋白质利用特制酶分解成小分子的物质，由2到10个氨基酸残基分子组成，小分子肽可以为微生物发酵过程中提供良好的氮源，另一方面小分子肽可以控制嘌呤合成的PRPP酰胺转移酶，从而抑制嘌呤的合成抑制嘌呤代谢。小分子肽可以干扰黄嘌呤氧化酶等嘌呤转化为尿酸的酶，从而控制体内尿酸含量。特别是对于遗传性痛风患者，由于基因缺失，缺乏嘌呤代谢的酶，导致尿酸积累，小分子肽可以起到一定的缺失酶的作用。葵花盘多糖也具有显著的抗氧化、降血糖、抗肿瘤、调节内分泌作用。向日葵属于一年生菊科类的植物，有广泛的种植率。葵花盘作为民间常用的药物，目前对其开发利用较少，且传统中药加工方法不能使葵花盘有效成分充分发挥药效。研究表明，发酵能够促进营养物质的生物转化，活性物质的含量更高，且更有利于人体吸收利用。

随着经济生活水平的提高，人们的保健意识不断增强，特发明了一种保健食品用葵花盘发酵原液的制备方法，能将葵花盘的有效成分集中富集并保留下来，因其保健价值而具有广阔的市场前景。

CN108434189A提供了一种向日葵花盘总黄酮及其提取工艺和应用，该方法仅对葵花盘中的单一成分黄酮进行了提取，忽略了葵花盘中其它有效成分，存在资源浪费的问题。

CN105878322B提供了一种用于治疗痛风疾病的葵花盘提取物，该方法首先将葵花盘用乙醇提取，然后对其浓缩液进行酶解，将酶解液超滤、浓缩后，加入适量赋形剂，喷雾干燥制成，该方法仅采用酶解方式对葵花盘进行处理，不能将葵花盘中的有效成分完全发挥出来。

CN108669539A公开了一种富硒葵花盘酵素及其制作方法，该方法经三次发酵后获得本酵素，发酵周期较长。

CN105920067A提供了一种含多糖、黄酮和生物碱的葵花盘提取物及其制备方法，该方法首先将葵花盘用乙醇提取，后过滤，其中滤液经强酸性阳离子交换树脂处理，先用蒸馏水洗再用5-10质量倍的50％-95％乙醇洗脱得到葵花盘总黄酮，再用含氨水1％-5％的50％-95％乙醇溶液洗脱得到葵花盘总生物碱，醇提后的药渣挥尽乙醇后，用4-10倍量的蒸馏水回流提取1-3次，水煎液经澄清剂处理后离心，上清液加入3-5质量倍的95％乙醇，得到葵花盘多糖，将所得的葵花盘总黄酮、葵花盘总生物碱和葵花盘多糖混合均匀，即得葵花盘提取物。该方法制备工艺复杂，且存在化学试剂残留的风险。

发明内容

为解决上述问题，本申请提出了一种保健食品用葵花盘发酵原液的制备方法，该方法制得的成品，葵花盘有效成分含量高、营养丰富，且操作简单、使用方便。本申请的技术方案具体涉及：

1.一种保健食品用葵花盘发酵原液的制备方法，其包括以下步骤：

将葵花盘干燥、粉碎、过筛，制成葵花盘粉；

在葵花盘粉中加入水、蛋白酶，酶解至终点，制成葵花盘酶解液；

在葵花盘酶解液中添加酵母菌，发酵至终点，制成发酵液；

对发酵液过滤，除去不溶物，得到成品。

2.根据项1所述的方法，其中，

在制成葵花盘粉的步骤中，将葵花盘在50～80℃下干燥，粉碎后过筛，过筛目数为80～100目。

3.根据项1所述的方法，其中，

在制成葵花盘酶解液的步骤中，添加相对于葵花盘粉重量1～10倍的水，而蛋白酶的总添加量为相对于葵花盘粉重量的0.01至1％，所述蛋白酶优选采用木瓜蛋白酶和/或中性蛋白酶，

优选同时使用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，

进一步优选木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的质量比为1:1-3，

进一步优选木瓜蛋白酶的比活力为150-250U/g，中性蛋白酶的比活力为400-800U/g。

4.根据项3所述的方法，其中，

在制成葵花盘酶解液的步骤中，当检测到间隔0.5h进行检测肽含量不再发生变化时，则判定为到达酶解终点。

5.根据项1所述的方法，其中，

在制成发酵液的步骤中，所述酵母为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，酵母种子液用量为相对于葵花盘酶解液总质量的0.01～2％wt。

6.根据项5所述的方法，其中，

当对发酵液取样检测发现无葡萄糖时，则判定为到达发酵终点。

7.一种葵花盘发酵原液，其包含：

0.8g/L至3.0g/L的黄酮；

13g/L至40g/L的多糖；

9g/L至37g/L的多肽；

其是由根据项1至6的任一项所述的方法制成的。

8.根据权利要求7所述的葵花盘发酵原液在保健食品中的应用。

本申请的技术方案所取得的有益技术效果包括：

本产品不是简单地对葵花盘粉进行酶解，而是在酶解工艺的基础上，对葵花盘酶解液进行发酵，由此得到了富含多种有效成分(它们由葵花盘粉降解得到)的发酵保健原液。

在发酵之前，葵花盘粉经过酶解处理，在此特别地使用蛋白酶，得到了富含各种氨基酸/小分子肽的酶解液，此富含氨基酸的酶解液可供给后面发酵步骤作为反应底物。经过酶解和发酵，本产品包括：较高含量的葵花碱、黄酮、小分子肽、多糖成分。

本申请的技术还有利于作为食品加工副产品的葵花盘的综合利用。

具体实施方式

需要说明的是，在本申请的说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定成分。本领域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个成分。本申请的说明书及权利要求并不以名词的差异来作为区分成分的方式，而是以成分在功能上的差异来作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本申请的保护范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。

本申请在第一方面提供了一种葵花盘发酵原液的制备方法。

在一个实施方式中，提供了一种葵花盘发酵原液的制备方法，其包括以下步骤：

将葵花盘干燥、粉碎、过筛，制成葵花盘粉；

在葵花盘粉中加入水、蛋白酶，酶解至终点，制成葵花盘酶解液；

在葵花盘酶解液中添加酵母菌，发酵至终点，制成发酵液；

对发酵液过滤，除去不溶物，得到成品。

在本说明书的上下文中，“葵花盘”即指：向日葵花盘、向日葵饼、葵房，它是菊科植物向日葵的花托。在中医药领域，葵花盘(或其提取物，如乙醇浸出液)被广泛应用于治疗风热挟湿头痛、眼蒙、牙痛、胃、腹痛、妇女经前或经期小腹痛等病症。本申请的技术方案中，发明的核心在于，并非简单地在发酵中掺入葵花盘(粉)，而是使经过酶解的葵花盘参与到后续的发酵步骤的生化反应中，从而得到有效成分含量高、营养丰富的发酵原液。

在又一实施方式中，在制成葵花盘粉的步骤中，将葵花盘在50～80℃下干燥，粉碎后过筛，过筛目数为80～100目。

在再一实施方式中，在制成葵花盘酶解液的步骤中，添加相对于葵花盘粉重量1～10倍的水，而蛋白酶的总添加量为相对于葵花盘粉重量的0.01至1％，所述蛋白酶优选采用木瓜蛋白酶和/或中性蛋白酶，优选同时使用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，进一步优选木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的质量比为1:1-3；进一步优选木瓜蛋白酶的比活力为150-250U/g，中性蛋白酶的比活力为400-800U/g。

具体地，添加的水的用量可以为相对于葵花盘粉重量的1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍；而蛋白酶的总添加量可以为相对于葵花盘粉重量的0.01％、0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％；而木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的质量比可以为1:1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3；而木瓜蛋白酶的比活力可以为150U/g、175U/g、200U/g、225U/g、250U/g；而中性蛋白酶的比活力可以为400U/g、500U/g、600U/g、700U/g、800U/g。

在一个实施方式中，在制成葵花盘酶解液的过程中，当检测到间隔0.5h肽含量都不再变化时，则判定为到达酶解终点。在此，肽含量的测定方法可以采用考马斯亮蓝法、双缩脲法、酚试剂法。

在本说明书的上下文中，“酶解”意指通过外加酶制剂(优选采用木瓜蛋白酶和/或中性蛋白酶)将葵花盘粉酶解为小分子(主要为氨基酸/小分子肽)的过程。因此，“酶解”在本说明书中出现时，一般应作狭义理解，除非另外说明。

在一个实施方式中，在制成发酵液的步骤中，所述酵母为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，酵母种子液的用量为相对于葵花盘酶解液总质量的0.01～2％wt。

在再一实施方式中，当对发酵液取样检测发现无葡萄糖时，则判定为到达发酵终点。

具体地，酵母种子液的用量为相对于葵花盘酶解液总质量的0.01％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％。所述百分比均为质量百分比。

在本说明书的上下文中，发酵是指：人们借助微生物在有氧或无氧条件下的生命活动来制备微生物菌体本身、或者直接代谢产物或次级代谢产物的过程。在本申请的技术方案中，如上所述，在发酵时与直接加入葵花盘粉相比，加入的是葵花盘酶解液，会提高后续发酵效率，则据申请人所知此前未有报道。

本申请在第二方面涉及一种葵花盘保健食品。

在一个实施方式中，提供了依上述方法制成的葵花盘发酵原液。

本申请在第三方面涉及上述葵花盘发酵原液的用途。

在又一实施方式中，提供了上述葵花盘发酵原液的用于痛风患者保健食品的用途。

在本申请的上下文中，“保健食品”符合本领域的一般定义。痛风是由于体内嘌呤代谢紊乱所引起的一类疾病。因其起病急骤，疼痛剧烈，多伴红肿，走时较快，不留踪影，故名痛风。该病的临床特点是高尿酸血症，及由此引起的痛风性急性关节炎反复发作、痛风石沉积、痛风石性慢性关节炎和关节畸形。常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和尿酸性肾结石，并引起肾功能损害，累及血管可以引起高血压，累及心脏可以引起冠心病，并且常常伴发高脂血症、糖尿病等疾病。痛风的发生多与营养过剩有关。一般来说，生活条件较为优越的人更加容易罹患痛风。痛风的典型标志是高尿酸血症。尿酸高的原因，既有可能是由于尿酸生产过多，又有可能是肾尿酸排泄过少。目前，将痛风保健食品与葵花盘发酵结合在现有技术中还未曾报道过。

下面将更详细地描述本申请的实施例。虽然在此显示了本申请的实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本申请的技术方案而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本申请的技术，并且能够将本申请的技术方案要求保护的范围完整地传达给本领域的技术人员。

实施例1：

(1)称取10.0kg葵花盘，置于80℃下烘干10h，粉碎为全部过100目筛的葵花盘粉，水分含量为5.1％，取8.0kg葵花盘粉，加20L水混为浆液，然后加入1：3的酶活250U/g木瓜蛋白酶和800U/g中性蛋白酶，60℃下酶解，每0.5h测蛋白质含量，至不再变化时，获得葵花盘酶解液；

(2)酿酒酵母细胞制备：酵母菌种接种于含有葡萄糖4-8％wt、蛋白胨0.5-1％wt、磷酸氢二钾0.1-0.5％wt的无菌种子培养液中，摇床转速200rpm，30℃下培养12h至对数生长期，以10000rpm离心40min后弃掉上清液获得。

(3)将步骤(2)中的酿酒酵母按照0.5％wt的接种量接入步骤(1)获得的酶解液中，在30℃温度下发酵20h，发酵过程中pH值维持在5.0～5.5之间，发酵终点为发酵液中无葡萄糖，发酵结束，获得发酵液；

(4)将步骤(4)获得的发酵液以5000rpm离心除去沉淀，上清液再以0.45μm滤芯过滤除菌后即可得到最终发酵原液。

实施例2：

(1)称取10.0kg葵花盘，置于50℃下烘干16h，粉碎为全部过80目筛的葵花盘粉，水分含量为6.8％，取8kg葵花盘粉，加80L水混为浆液，然后加入1：1的酶活250U/g木瓜蛋白酶和800U/g中性蛋白酶，30℃下酶解，每0.5h测蛋白质含量，至不再变化时，获得葵花盘酶解液；

(2)酿酒酵母细胞制备：酵母菌种接种于含有葡萄糖4-8％wt、蛋白胨0.5-1％wt、磷酸氢二钾0.1-0.5％wt的无菌种子培养液中，摇床转速200rpm，30℃下培养12h至对数生长期，以10000rpm离心40min后弃掉上清液获得。

(3)将步骤(2)中的酿酒酵母按照0.1％wt的接种量接入步骤(1)获得的酶解液中，在30℃温度下发酵20h，发酵过程中pH值维持在5.0～5.5之间，发酵终点为发酵液中无葡萄糖，发酵结束，获得发酵液；

(4)将步骤(3)获得的发酵液以5000rpm离心除去沉淀，上清液再以0.45μm滤芯过滤除菌后即可得到最终发酵原液。

实施例3：

(1)称取10.0kg葵花盘，置于60℃下烘干14h，粉碎为全部过100目筛的葵花盘粉，水分含量为5.9％，取8.0kg葵花盘粉，加40L水混为浆液，然后加入1：2的酶活250U/g木瓜蛋白酶和800U/g中性蛋白酶，50℃下酶解，每0.5h测蛋白质含量，至不再变化时，获得葵花盘酶解液；

(2)酿酒酵母细胞制备：酵母菌种接种于含有葡萄糖4-8％wt、蛋白胨0.5-1％wt、磷酸氢二钾0.1-0.5％wt的无菌种子培养液中，摇床转速200rpm，30℃下培养12h至对数生长期，以10000rpm离心40min后弃掉上清液获得。

(3)将步骤(2)中的酿酒酵母按照0.3％wt的接种量接入步骤(1)获得的酶解液中，在30℃温度下发酵20h，发酵过程中pH值维持在5.0～5.5之间，发酵终点为发酵液中无葡萄糖，发酵结束，获得发酵液；

(4)将步骤(3)获得的发酵液以5000rpm离心除去沉淀，上清液再以0.45μm滤芯过滤除菌后即可得到最终发酵原液。

对比例1：

(1)称取10.0kg葵花盘，置于80℃下烘干10h，粉碎为全部过100目筛的葵花盘粉，水分含量为5.1％，取8.0kg葵花盘粉，加20L水混为浆液，然后加入1：3的酶活250U/g木瓜蛋白酶和800U/g中性蛋白酶，60℃下酶解，每0.5h测蛋白质含量，至不再变化时，获得葵花盘酶解液；

(2)将步骤(1)获得的酶解液以5000rpm离心除去沉淀，上清液再以0.45μm滤芯过滤除菌后即可得到最终酶解原液。

对比例2：

(1)称取10.0kg葵花盘，置于80℃下烘干10h，粉碎为全部过100目筛的葵花盘粉，水分含量为5.1％，取8.0kg葵花盘粉，加20L水混为浆液，获得葵花盘浆液；

(2)酿酒酵母细胞制备：酵母菌种接种于含有葡萄糖4-8％wt、蛋白胨0.5-1％wt、磷酸氢二钾0.1-0.5％wt的无菌种子培养液中，摇床转速200rpm，30℃下培养12h至对数生长期，以10000rpm离心40min后弃掉上清液获得。

(3)将步骤(2)中的酿酒酵母按照0.5％wt的接种量接入步骤(1)获得的浆液中，在30℃温度下发酵20h，发酵过程中pH值维持在5.0～5.5之间，发酵终点为发酵液中无葡萄糖，发酵结束，获得发酵液；

(4)将步骤(4)获得的发酵液以5000rpm离心除去沉淀，上清液再以0.45μm滤芯过滤除菌后即可得到最终发酵原液。

实施例4：

HPLC法测定黄酮含量

对照品溶液的制备：精密称定芦丁、槲皮素对照品各1.0mg，加甲醇溶液溶解，制备成每1mL分别含有1mg芦丁、槲皮素的混合溶液，再用0.45μm微孔滤膜过滤即得对照品溶液。

供试品溶液的制备：精密称取实施例1-3、对比例1-2制得的发酵原液各10g，加入40倍量70％乙醇溶液在80℃条件下水浴回流2h，抽滤，将滤液置于水浴锅上蒸干，蒸干后残渣用甲醇溶解，定容至10mL，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得供试品溶液。

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为乙腈，流动相B为水(含0.4％磷酸)，按表1进行洗脱；在波长为360nm条件下进行检测；洗脱流速为1mL/min；柱温箱温度为30℃；进样量为2μL。

表1流动相梯度洗脱比例

表2发酵液中黄酮含量检测结果

实施例5：

硫酸-苯酚法联合DNS法测定多糖含量

苯酚-硫酸法测定总糖含量

标准曲线的制备：分别精密吸取100ug/mL的葡萄糖标准溶液0.0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL于10mL具塞试管中，加蒸馏水补至2.0mL，分别加入5％苯酚溶液1.0mL，混匀，迅速贴壁加入浓硫酸5.0mL，混匀，置于沸水浴中加热反应15min后，用冷水浴30min停止反应，以0号管为参比，于489nm处测定吸光度，分别以葡萄糖浓度(mg/mL)、吸光度值为横、纵坐标，绘制标准曲线；

将供试样品以不同倍率稀释至2.0mL，进行测定，使之吸光度在标准曲线范围内，读取数据，计算样品中总糖含量。

DNS法测定还原糖含量

标准曲线的制备：分别精密吸取100ug/mL的葡萄糖标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL于25mL具塞试管中，加蒸馏水补至2.0mL，再加入DNS溶液1.5mL，混匀，沸水浴加热反应5min后，冰水浴冷却10min，加水至刻度线，混匀，以0号管为参比，于540nm处测定吸光度，分别以葡萄糖浓度(mg/mL)、吸光度值为横、纵坐标，绘制标准曲线。

将供试样品以不同倍率稀释至2.0mL，进行测定，使之吸光度在标准曲线范围内，读取数据，计算样品中还原糖含量。

多糖含量＝总糖含量-还原糖含量

表3发酵液中多糖含量检测结果

实施例6：

福林酚比色法测定肽含量

标准曲线的制备：取牛血清白蛋白对照品10mg，精密称定，加入去离子水溶解，并定容至50mL，精密量取对照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分别置具塞试管中，分别加水至1.0mL，再分别加入碱性铜试液1.0mL，混匀，分别加入福林酚试液4.0mL，立即混匀，置55℃水浴中平行反应5min，取出，置冷水浴中冷却10min，照紫外-可见分光光度法，以0号管为空白，在650nm波长处迅速测定吸光度，分别以牛血清白蛋白浓度(mg/mL)、吸光度值为横、纵坐标，绘制标准曲线。

将供试样品以不同倍率稀释至1.0mL，进行测定，使之吸光度在标准曲线范围内，读取数据，计算样品中肽含量。

表4发酵液中肽含量检测结果

实施例7：

临床试用观察

寻痛风患者100名，随机分为2组，分别饮用和不饮用实施例1制得的发酵原液，连续进行1个月。

患者诊断标准：患者关节红、肿、热、痛，关节活动不利，严重者呈关节畸形及功能障碍，且反复发作；血尿酸含量增高，男性高于420μmol/L，女性高于360μmol/L。

功效评定标准：

有效：实验室检查血尿酸值略有升高，关节稍有疼痛或肿胀症状；

无效：实验室检查血尿酸值明显升高，症状明显。

表5临床实验结果

组别	有效	无效
			饮用	36	14
不饮用	2	48

表6实施例1-3和对比例1-2的条件总结

以上实验结果表明，依本申请制得的葵花盘发酵原液能够给予痛风患者作为保健食品食用，能更好地满足广大消费者的需求。

尽管以上对本申请的实施方式进行了描述，但本申请并不局限于上述的具体实施方式和应用领域，上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本申请的保护之列。

Claims (8)

1.一种保健食品用葵花盘发酵原液的制备方法，其包括以下步骤：

将葵花盘干燥、粉碎、过筛，制成葵花盘粉；

在葵花盘粉中加入水、蛋白酶，酶解至终点，制成葵花盘酶解液；

在葵花盘酶解液中添加酵母菌，发酵至终点，制成发酵液；

对发酵液过滤，除去不溶物，得到成品。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，

在制成葵花盘粉的步骤中，将葵花盘在50～80℃干燥，粉碎后过筛，过筛目数为80～100目。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，

在制成葵花盘酶解液的步骤中，添加相对于葵花盘粉重量1～10倍的水，而蛋白酶的总添加量为相对于葵花盘粉重量的0.01至1％，所述蛋白酶优选采用木瓜蛋白酶和/或中性蛋白酶，

优选同时使用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，

进一步优选木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的质量比为1:1-3，

进一步优选木瓜蛋白酶的比活力为150-250U/g，中性蛋白酶的比活力为400-800U/g。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，

在制成葵花盘酶解液的步骤中，当检测到间隔0.5h进行检测肽含量不再发生变化时，则判定为到达酶解终点。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，

在制成发酵液的步骤中，所述酵母为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，酵母种子液的用量为相对于葵花盘酶解液总质量的0.01～2％wt。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，

当对发酵液取样检测发现无葡萄糖时，则判定为到达发酵终点。

7.一种葵花盘发酵原液，其包含：

0.8g/L至3.0g/L的黄酮；

13g/L至40g/L的多糖；

9g/L至37g/L的多肽；

其是由根据权利要求1至6的任一项所述的方法制成的。

8.根据权利要求7所述的葵花盘发酵原液在保健食品中的应用。