CN111544379B

CN111544379B - 一种唾液酸鼻腔给药制剂及其制备方法

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Publication number: CN111544379B
Application number: CN202010388119.6A
Authority: CN
Inventors: 李翔宇; 汪志明; 刘芳; 肖敏; 陆姝欢; 李慕梓; 陈祥松
Original assignee: Wuhan Zhongke Optics Valley Green Biotechnology Co ltd; Cabio Biotech Wuhan Co Ltd
Current assignee: Wuhan Zhongke Optics Valley Green Biotechnology Co ltd; Cabio Biotech Wuhan Co Ltd
Priority date: 2020-05-09
Filing date: 2020-05-09
Publication date: 2022-12-27
Anticipated expiration: 2040-05-09
Also published as: CN111544379A

Abstract

本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种唾液酸鼻腔给药制剂及其制备方法。所述唾液酸鼻腔给药制剂，含有由唾液酸与磷脂形成的复合物。本发明首次提出以“复合物”的形式将唾液酸与磷脂结合起来，利用唾液酸的负电荷与磷脂上的正电荷静电吸附，形成新的复合分子结构；通过这种复合形式，一方面利用磷脂降低鼻黏液粘度，进而减少鼻粘液对唾液酸的清除；另一方面利用磷脂的双亲性，使其疏水端与脂溶性的鼻粘膜连接，亲水端与药物中的游离唾液酸连接，从而使唾液酸紧密附着在鼻粘膜细胞表面，延长唾液酸在鼻粘膜上的停留时间，使唾液酸喷鼻剂能够在鼻腔内更好的发挥生理功效。

Description

一种唾液酸鼻腔给药制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种唾液酸鼻腔给药制剂及其制备方法。

背景技术

唾液酸又称神经氨酸，英文Sialic acid，简称SA，是一种天然存在的具有生物活性的九碳糖分子，其广泛存在于动物组织中，通常以黏液结合形态存在于人体真核细胞的上表层，与细胞膜最外层的糖蛋白、脂多糖等结合，在细胞表层形成一道严密的屏障。

流感等呼吸道传染病原体从人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸道感染侵入，引起有传染性的疾病。据研究，流感表面血凝素(HA)可以识别唾液酸，流感病毒通过流感表面血凝素来识别绑定健康细胞表面上的唾液酸，从而侵染健康细胞。鼻腔是呼吸道传染病原体最容易入侵的途径，随着人们对唾液酸生物学活性和应用的进一步研究和了解，出于保护、维持鼻腔健康的目的，唾液酸类鼻腔给药产品应运而生。

鼻腔给药作为全身疾病治疗的新型给药途径之一，因其能够避开首过效应、提高生物利用度、给药方便易行等优点受到广泛关注。唾液酸鼻腔给药制剂中的游离唾液酸，能够封闭病毒表面的血凝素使得其不再能够识别健康细胞表面的上唾液，从而阻止病毒的入侵、降低病毒感染。

但是，由于鼻粘膜给药对脂溶性小的唾液酸吸收效果较差，且鼻腔给药的剂量受限，无法最大程度发挥药剂作用；而且，鼻内分泌的黏液以及鼻粘膜纤毛清除功能导致唾液酸与鼻粘膜的接触时间很短，唾液酸很快从鼻腔中被清除，也影响了生理功效的发挥。因此，如何有效延长唾液酸在鼻粘膜上的停留时间成为唾液酸鼻腔给药制剂亟需解决的技术问题。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种唾液酸鼻腔给药制剂及其制备方法。所述唾液酸鼻腔给药制剂可长时间停留在鼻粘膜上，充分发挥其生理功效，降低机体病毒感染。

本发明所述唾液酸鼻腔给药制剂，含有由唾液酸(SA)与磷脂(PS)形成的复合物。

本发明首次提出以“复合物”的形式将唾液酸与磷脂结合起来，利用唾液酸的负电荷与磷脂上的正电荷静电吸附，形成新的复合分子结构；通过这种复合形式，一方面利用磷脂降低鼻黏液粘度，进而减少鼻粘液对唾液酸的清除；另一方面利用磷脂的双亲性，使其疏水端与脂溶性的鼻粘膜连接，亲水端与药物中的游离唾液酸连接，从而使唾液酸紧密附着在鼻粘膜细胞表面，延长唾液酸在鼻粘膜上的停留时间，使唾液酸喷鼻剂能够在鼻腔内更好的发挥生理功效。

我们在研究中发现，在所述复合物中，若磷脂比例过低将无法起到在鼻粘膜上延长停留时间的效果，但若磷脂比例过高又容易导致自身乳化形成胶体，不利于复合体系的稳定，同时也产生使患者不适应的气味，降低患者的依从性。基于此，确定所述复合物中，所述唾液酸与所述磷脂的质量比为1：(0.5-4)；优选1：(0.5-2)。

本发明进一步研究发现，作为鼻腔给药制剂，对其唾液酸活化后渗透压有一定要求，若唾液酸量太大，活化后渗透压变化过大，药剂体系将不适用于喷鼻；但若唾液酸量太小，则无法发挥其生理功效；因此经研究后确定本发明所述复合物中的唾液酸占所述唾液酸鼻腔给药制剂总质量的0.01％-0.5％，优选0.05-0.15％。

本发明中，所述磷脂选自含有不低于质量分数70％的磷脂酰胆碱的磷脂。优选地，所述磷脂酰胆碱选自含有溶血卵磷脂、棕榈酰溶血卵磷脂或二癸酰磷脂胆碱中的一种或几种。

本发明中，所述唾液酸的形式为N-乙酰神经氨酸(Neu₅Ac)，采用发酵方法制得，其CAS:131-48-6，分子式：C₁₁H₁₉NO₉，分子量：309.27，熔点：185-187℃，白色粉末，易溶于水。

本发明中所述的磷脂和唾液酸均可通过市售途径购买得到。

本发明还进一步发现，虽然磷脂具有两亲性，但水溶性不够理想，为了提高复合物的稳定性，在一些优选的实施方式中，可以通过添加助溶剂来提高磷脂的溶解性；所述助溶剂为甘油和/或丙二醇。

研究表明，所述助溶剂的添加量不应超过所述唾液酸鼻腔给药制剂总质量的85％；其中所述丙二醇的添加量为所述唾液酸鼻腔给药制剂总质量的0.1～2％；所述甘油的添加量为所述唾液酸鼻腔给药制剂总质量的20-85％。

在一些优选的实施方式中，同时添加40-60％的甘油、1-2％的丙二醇，助溶效果更好。

进一步研究发现，磷脂在制备过程中容易产生自乳化，因此除助溶剂以外，还通过添加助悬剂来进一步提高体系的稳定性。所述助悬剂选自微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、黄原胶或海藻酸钠中的一种或多种。所述助悬剂的添加量为所述唾液酸鼻腔给药制剂质量的0.1～1.0％。

虽然为了改善药剂的某一方面性能，技术人员通常会选择添加相应的助剂，但在实际研究中我们发现，由于原料及配伍与各助剂的种类选择及添加量之间存在特定的匹配度，以各因素中效果最佳条件的叠加难以兼顾多方面效果的平衡，仍然需要不断调试才能获得理想的多重效果。

作为本发明优选的实施方式之一，当所述唾液酸鼻腔给药制剂中包括如下质量分数的组分：唾液酸0.05-0.15％、磷脂0.025-0.3％、甘油40-60％、丙二醇1-2％、微晶纤维素0.5-1％，所得制剂的停留时间更长、药物保留率更高、体系稳定性更好。

除上述助剂之外，本发明所述的唾液酸鼻腔给药制剂还包括渗透压调节剂和水；所述渗透压调节剂的添加量为所述唾液酸鼻腔给药制剂总质量的0.9-2.2％，所述渗透压调节剂优选钠盐、磷酸盐；进一步优选氯化钠、磷酸钠等。

作为本发明的具体实施方式之一，所述唾液酸鼻腔给药制剂由如下质量分数的成分组成：唾液酸0.05-0.15％、磷脂0.025-0.3％、甘油40-60％、丙二醇1-2％、微晶纤维素0.5-1％、氯化钠0.9-2.2％、余量为水。

所述唾液酸鼻腔给药制剂还包括防腐剂。所述防腐剂选自苯扎氯铵、乙二胺四乙酸钠、乙二胺四乙酸二钠、苯甲醇或对羟基苯甲酸酯中的一种或多种；所述防腐剂的添加量不超过所述唾液酸鼻腔给药制剂总质量的0.4％。

本发明所述的唾液酸鼻腔给药制剂的剂型包括：滴鼻剂、气雾剂、喷雾剂等，根据不同的喷鼻设备呈现不同的使用效果。

本发明还提供上述唾液酸鼻腔给药制剂的制备方法，包括：溶于溶剂中的磷脂与水中唾液酸混合形成复合物；所述混合的温度为45-65℃。研究发现，常温条件下，溶解的唾液酸与磷酯在水中难以结合形成复合体系；而当混合体系的温度在45-65℃范围内时，两种分子运动速率比例适合，静电作用明显，结合力更强，形成的复合体系稳定性更好。

为了避免磷脂因水溶性较低而从混合体系中析出，在混合前先将磷脂溶于溶剂中，以“溶液”的形式将其缓慢加入含有唾液酸的水溶液中；所述溶剂为水或前述助溶剂；同时为了获得更好的稳定复合体系，混合后通常保持温度45-65℃并搅拌或剪切30-90min。

此外，为了更有利于唾液酸的活化以及促进磷脂的溶解，在所述混合前，控制所述水溶液的pH至4-7；也可在加入所述磷脂前，加热含唾液酸的水溶液至温度45-65℃；调节水溶液的pH调节剂为氢氧化钠、碳酸钠等等。

本发明所取得的有益效果如下：

本发明首次提出以“静电复合”的形式将唾液酸与磷脂结合，利用磷脂的特性解决了现有技术存在的唾液酸易被鼻粘膜清除的问题，显著延长了唾液酸在鼻粘膜上的停留时间，进而增强了唾液酸鼻腔给药制剂的效果；同时所述方法简单易行，更有利于实现工业化生产。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

以下实施例中选用的磷脂为大豆卵磷脂，含有不低于70％的磷脂酰胆碱，购自于国药集团。

实施例1

本实施例提供一种唾液酸鼻腔给药制剂的制备方法，包括：

处方如下：以质量分数计，0.1％唾液酸、0.1％磷脂、0.9％NaCl，余量为水。

制备步骤如下：

(1)将唾液酸、NaCl按量溶于水中，采用碳酸钠调节pH至5，得到溶液A；

(2)50℃条件下将磷脂溶解于水，得到溶液B；

(3)将溶液A加热至50℃，于搅拌条件下，将溶液B缓缓注入溶液A中，继续搅拌时长为90min。

实施例2

本实施例提供一种唾液酸鼻腔给药制剂的制备方法，包括：

处方如下：以质量分数计，0.1％唾液酸、0.1％磷脂、0.9％NaCl、48％甘油、2％丙二醇、其余为水。

制备步骤如下：

(1)将唾液酸、氯化钠按量溶于水中，采用碳酸钠调节pH至5，得到溶液A；

(2)50℃条件下，将磷脂与丙二醇相溶后加入甘油，得到溶液B；

实施例3

本实施例提供一种唾液酸鼻腔给药制剂的制备方法，包括：

处方如下：以质量分数计，0.1％唾液酸、0.025％磷脂、0.9％NaCl、甘油50％，余量为水。

制备步骤如下：

(2)50℃条件下，将磷脂与甘油相溶，得到溶液B；

实施例4

本实施例提供一种唾液酸鼻腔给药制剂的制备方法，包括：

处方如下：以质量分数计，0.1％唾液酸、0.25％磷脂、0.9％NaCl、48％甘油、2％丙二醇、其余为水。

制备步骤如下：

实施例5

本实施例提供一种唾液酸鼻腔给药制剂的制备方法，包括：

处方如下：以质量分数计，0.1％唾液酸、0.4％磷脂、0.9％NaCl、48％甘油、2％丙二醇、其余为水。

制备步骤如下：

实施例6

本实施例提供一种唾液酸鼻腔给药制剂的制备方法，包括：

处方如下：以质量分数计，0.1％唾液酸、0.1％磷脂、0.9％NaCl、48％甘油、2％丙二醇、0.5％微晶纤维素，其余为水。

制备步骤如下：

(1)将唾液酸、氯化钠、微晶纤维素按量溶于水中，采用碳酸钠调节pH至5，得到溶液A；

对比例1：

处方如下：0.9％NaCl、0.1％唾液酸，余量为水。

制备方法：将各原料直接加入水中溶解即可。

对比例2：

本对比例供一种唾液酸鼻腔给药制剂的制备方法，包括：

处方如下：以质量分数计，0.1％唾液酸、0.1％磷脂、0.9％NaCl、50％甘油、其余为水。

制备方法：将各原料于50℃在水中搅拌2h得到乳状液。

实验例1稳定性实验

复合物的聚集沉降会影响药物使用时的均匀度，虽然使用前可以通过摇晃操作进行混匀，但是为了简化使用感及提高使用时的均匀度，还是希望得到稳定性更高的样品，因而通过测试静置后的稳定情况来考察体系的稳定性。

实施例1-6分别取样10mL于试管中，封口静置48h，观察其状态，以考察稳定性。

表1

由表1可知，助溶剂及助悬剂的添加有助于提高体系的稳定性，实施例2、3/46的稳定性优于实施例1均未出现沉淀；但同时也可以看出磷脂的加入量并非越多越好，磷脂过高，也会导致沉淀的产生；如实施例5，磷脂与唾液酸的质量比达到4:1，放置过后底部出现沉淀。

实验例2效果验证

将实施例1-3、实施例6、对比例1、对比例2所得鼻腔给药制剂进行离体实验，具体如下：

取屠宰场新鲜猪头2个，切开鼻腔，暴露出鼻中隔及鼻甲骨，用一圆头细玻棒及镊子将鼻粘膜剥下，用生理盐水洗净，再将其平铺，按5*10cm进行剪切成后固定备用。

给药方式及给药剂量：溶液摇匀后用移液枪在猪鼻粘膜上均匀涂抹鼻腔给药溶剂(实施例1-3、实施例6和对比例1-2)，0.2mL；

检测：静置20min后，分别用4mL的水分两次轻轻冲洗鼻粘膜，收集冲洗液，分别用5mL的容量瓶定容后，测定洗液中的唾液酸(SA)含量，以此来计算唾液酸的保留率A＝(0.2mL*1mg/mL-C1*5mL-C2*5mL)/0.2mg％。

N-乙酰神经氨酸含量的测定方法为高效液相色谱法(HPLC)，具体测试条件如下：岛津Lc-15c；检测柱Bio-Rad AMINEX HPX 87H Organic Analysis Column(300×7.8mm)；柱温60℃；流动相为6mmol硫酸，流速0.6mL/min；检测波长210nm。

唾液酸含量的检测结果如表2所示。

表2

由表2可知：

(1)实施例1-3、实施例6的保留率显著高于对比例1和对比例2，说明唾液酸与磷脂以复合物形式存在更有利于延长停留时间，提高药物保留率。

(2)实施例1、实施例2、实施例6的保留率显著高于实施例3，说明当磷脂添加量过少时，延长停留时间的作用有限。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种唾液酸鼻腔给药制剂，其特征在于，含有由唾液酸与磷脂形成的复合物；

包括如下质量分数的组分：唾液酸0.05-0.15％、磷脂0.025-0.3％、甘油40-60％、丙二醇1-2％，微晶纤维素0.5-1％；

所述唾液酸与所述磷脂的质量比为1：(0.5-2)；

所述唾液酸占所述唾液酸鼻腔给药制剂总质量的0.05-0.15％；

所述磷脂含有不低于质量分数70％的磷脂酰胆碱。

2.根据权利要求1所述的唾液酸鼻腔给药制剂，其特征在于，所述磷脂酰胆碱为含有溶血卵磷脂、棕榈酰溶血卵磷脂或二癸酰磷脂胆碱中的一种或几种。

3.根据权利要求2所述的唾液酸鼻腔给药制剂，其特征在于，所述的唾液酸鼻腔给药制剂还包括渗透压调节剂和/或防腐剂；

所述渗透压调节剂的添加量为所述唾液酸鼻腔给药制剂总质量的0.9-2.2％；

所述防腐剂的添加量不超过所述唾液酸鼻腔给药制剂总质量的0.4％。

4.根据权利要求3所述的唾液酸鼻腔给药制剂，其特征在于，所述唾液酸鼻腔给药制剂由如下质量分数的成分组成：唾液酸0.05-0.15％、磷脂0.025-0.3％、甘油40-60％、丙二醇1-2％、微晶纤维素0.5-1％、氯化钠0.9-2.2％、余量为水。

5.根据权利要求1-4任一所述的唾液酸鼻腔给药制剂，其特征在于，所述唾液酸鼻腔给药制剂的剂型为滴鼻剂、气雾剂或喷雾剂。

6.权利要求1-5任一所述唾液酸鼻腔给药制剂的制备方法，其特征在于，溶于溶剂中的磷脂与水溶液中唾液酸混合形成复合物；所述混合的温度为45-65℃。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述混合是指将溶于溶剂中的磷脂加入至含有唾液酸的水溶液中；

和/或，在完成所述混合后，保持温度45-65℃并搅拌或剪切30-90min；

和/或，在所述混合前，控制所述水溶液的pH为4-7；

和/或，在加入所述磷脂前，加热含唾液酸的水溶液至温度45-65℃。