CN111537730A - 检测布鲁氏菌抗体的检测试纸 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，包括底板，在底板上依次固定有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述胶体金垫包被有金颗粒标记的布鲁氏菌抗原1和金颗粒标记的鸡IgY，所述硝酸纤维素膜上喷有检测线和质控线，所述检测线包被有布鲁氏菌抗原2，所述质控线包被有羊抗鸡IgY抗体。本发明对布鲁氏菌检测特异性高，样本不受物种限制，可检测人、牛、羊等多物种样本，操作便捷，检测速度快。

Description

检测布鲁氏菌抗体的检测试纸
技术领域
本发明涉及疫病检测技术领域，尤其涉及一种检测布鲁氏菌抗体的检测试纸。
背景技术
布鲁氏菌病(Brucellosis，简称布病)是由布鲁氏菌或称布鲁氏菌(Brucella)引起的以流产和发热为特征的人兽共患病，严重地威胁着人和多种动物的生命健康。本病不但对动物的繁殖和生产性能具有严重危害，更重要的是，人感染布鲁氏菌后，往往难以治愈，从而造成严重的公共卫生问题。因此在布鲁氏菌流行的国家，消除布病一直是公共卫生计划中最重要的目标之一。布病是世界性的人畜共患传染病，流行范围甚广，几乎遍及世界各地，凡有牲畜的地区都有布病流行。在我国，牛、羊是主要传染源，而人群对布鲁菌普遍易感，故人感染布病多是由牲畜传染。
布鲁氏菌病会造成人的发热、睾丸炎、流产和关节炎等病症，严重者甚至丧失劳动和生育能力。近年来我国人布鲁氏菌病流行严重，而人布鲁氏菌病的唯一传染来源即为动物布鲁氏菌病。控制动物布鲁氏菌病的主要方法为检出阳性动物并及时淘汰。因此，对布鲁氏菌病的筛查是对布鲁氏菌疫情的控制十分关键。目前临床上的筛查方法主要为虎红平板凝集试验和试管凝集实验。虎红平板凝集试验主观性较强，不易判断，准确率偏低。而试管凝集实验准确性较高，但操作复杂、检测时间较长，＞24小时。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的技术问题，提供一种检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，对布鲁氏菌检测特异性高，样本不受物种限制，可检测人、牛、羊等多物种样本，操作便捷，检测速度快。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，包括底板，在底板上依次固定有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述胶体金垫包被有金颗粒标记的布鲁氏菌抗原1和金颗粒标记的鸡IgY，所述硝酸纤维素膜上喷有检测线和质控线，所述检测线包被有布鲁氏菌抗原2，所述质控线包被有羊抗鸡IgY抗体。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，所述布鲁氏菌抗原1为布鲁氏菌脂多糖抗原LPS。
进一步，所述布鲁氏菌抗原2为BP26蛋白。
进一步，所述检测线布鲁氏菌抗原2浓度为0.1mg/ml～2mg/ml。
进一步，所述质控线中有羊抗鸡IgY抗体浓度为0.1mg/ml～2mg/ml。
进一步，所述胶体金垫采用以下方法制得：
1)金颗粒标记布鲁氏菌抗原1的制备：取10ml的纳米金颗粒，加入布鲁氏菌抗原1，使终浓度为5μg/ml～50μg/ml，室温混匀搅拌反应30min；再加入2ml标记封闭液(含2％BSA的PBS缓冲液)，室温混匀搅拌反应30min，而后离心纯化，得到金颗粒标记布鲁氏菌抗原1；
2)金颗粒标记鸡IgY的制备：取10ml的纳米金颗粒，加入鸡IgY，使终浓度为5μg/ml～50μg/ml，室温混匀搅拌反应30min；再加入2ml标记封闭液(含2％BSA的PBS缓冲液)，室温混匀搅拌反应30min，而后离心纯化，得到金颗粒标记鸡IgY；
3)胶体金垫的制备：将金颗粒标记布鲁氏菌抗原1和金颗粒标记的鸡IgY等体积混匀，制得胶体金垫。
4)用三维平面点膜喷金仪将混匀后的金颗粒标记溶液喷在聚酯纤维上，设定参数使喷量为2～3μL/cm，将喷膜均匀的胶体金垫平置于网架上，37℃烘干，放入装有干燥剂的铝箔袋内，密封，备用。
进一步，所述步骤1中纳米金颗粒的粒径为30～50nm。
进一步，所述硝酸纤维素膜采用以下方法制得：
1)将布鲁氏菌抗原2和羊抗鸡IgY抗体分别用包被稀释液(含1％BAS、5％海藻糖、0.1％Tween 20的磷酸盐溶液，pH7.4)调整浓度为0.1～2mg/ml。
2)用三维平面点膜喷金仪将布鲁氏菌抗原2划在硝酸纤维素膜上，设定参数使喷量为0.5～1.5μL/cm，即为检测线。
3)用三维平面点膜喷金仪将羊抗鸡IgY抗体划在硝酸纤维素膜上，设定参数使喷量为0.5～1.5μL/cm，即为质控线。
4)包被后的硝酸纤维素膜平置于网架上，37℃烘干，放入装有干燥剂的铝箔袋内，密封，备用。
进一步，样品垫的制备：将玻璃纤维浸泡在样品垫处理液(含5％蔗糖、0.5％Casein、0.09％Proclin300的磷酸盐缓冲液)中，两面浸泡均不少于5min，将浸泡均匀的玻璃纤维平置于网架上，37℃烘干，放入装有干燥剂的铝箔袋内，密封，备用。
进一步，试纸条的制备：在底板上依次粘贴硝酸纤维素、胶体金垫、样品垫和吸水垫。将底板置于自动斩切机上，切成宽度为3.5mm试纸条。将试纸条放入塑料卡底相应位置，盖好卡盖，放置于压壳机的传送带上，采用压壳机对测试盒进行紧密压盖。
本发明的有益效果是：本发明采用包被布鲁氏菌抗原1和鸡IgY的胶体金垫，检测线采用布鲁氏菌抗原2，质控线采用羊抗鸡IgY抗体，检测特异性高，抗干扰性强；本发明样本不受物种限制，可检测人、牛、羊等多物种样本；本发明相对于现有的虎红平板凝集试验和试管凝集实验而言，检测速度极快，15分钟左右就能得到检测结果，而且操作十分便捷，无需外接其它设备，成本也较为低廉。
附图说明
图1为本发明实施例的结构示意图；
图2为本发明使用状态下的装配结构示意图；
附图中，各标号所代表的部件列表如下：
1、装置壳体，2、样品垫，3、胶体金垫，4、硝酸纤维素膜，5、检测线，6、质控线，7、吸水垫，8、检测盒上盖，8a、样品窗口，8b、观察窗口，9、检测盒下盖。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
如图1所示，本发明的检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，包括底板1，在底板1上依次粘贴有样品垫2、胶体金垫3、硝酸纤维素膜4和吸水垫7。在硝酸纤维素膜4划刻有检测线5和质控线6。如图2所示，使用时，将本发明的检测试纸装入到检测盒下盖9内，盖上检测盒上盖8。血液样本从样品窗口8a加入，待样品反应后，通过观察窗口8b观察检测结果。
本发明的胶体金垫3包被有金颗粒标记的布鲁氏菌抗原1和金颗粒标记的鸡IgY。本发明检测线5包被布鲁氏菌抗原2，质控线6包被羊抗鸡IgY抗体。
本发明的样品垫2的制备：将玻璃纤维浸泡在样品垫处理液(含5％蔗糖、0.5％Casein、0.09％Proclin300的磷酸盐缓冲液)中，两面浸泡均不少于5min，将浸泡均匀的玻璃纤维平置于网架上，37℃烘干，放入装有干燥剂的铝箔袋内，密封，备用。
本发明的胶体金垫3采用以下方法制得：
1)金颗粒标记布鲁氏菌抗原1的制备：取10ml的纳米金颗粒，加入布鲁氏菌抗原1，使终浓度为5μg/ml～50μg/ml，室温混匀搅拌反应30min；再加入2ml标记封闭液(含2％BSA的PBS缓冲液)，室温混匀搅拌反应30min，而后离心纯化，得到金颗粒标记布鲁氏菌抗原1；
2)金颗粒标记鸡IgY的制备：取10ml的纳米金颗粒，加入鸡IgY，使终浓度为5μg/ml～50μg/ml，室温混匀搅拌反应30min；再加入2ml标记封闭液(含2％BSA的PBS缓冲液)，室温混匀搅拌反应30min，而后离心纯化，得到金颗粒标记鸡IgY；
3)胶体金垫的制备：将金颗粒标记布鲁氏菌抗原1和金颗粒标记的鸡IgY等体积混匀，制得胶体金垫。
4)用三维平面点膜喷金仪将混匀后的金颗粒标记溶液喷在聚酯纤维上，设定参数使喷量为2～3μL/cm，将喷膜均匀的胶体金垫平置于网架上，37℃烘干，放入装有干燥剂的铝箔袋内，密封，备用。
其中，纳米金颗粒的粒径优选30～50nm。
本发明的硝酸纤维素膜4采用以下方法制得：
1)将布鲁氏菌抗原2和羊抗鸡IgY抗体分别用包被稀释液(含1％BAS、5％海藻糖、0.1％Tween 20的磷酸盐溶液，pH7.4)调整浓度为0.1～2mg/ml。
2)用三维平面点膜喷金仪将布鲁氏菌抗原2划在硝酸纤维素膜上，设定参数使喷量为0.5～1.5μL/cm，即为检测线。
3)用三维平面点膜喷金仪将羊抗鸡IgY抗体划在硝酸纤维素膜上，设定参数使喷量为0.5～1.5μL/cm，即为质控线。
4)包被后的硝酸纤维素膜平置于网架上，37℃烘干，放入装有干燥剂的铝箔袋内，密封，备用。
本发明的试纸条的制备：在底板上依次粘贴硝酸纤维素、胶体金垫、样品垫和吸水垫。将底板置于自动斩切机上，切成宽度为3.5mm试纸条。将试纸条放入塑料卡底相应位置，盖好卡盖，放置于压壳机的传送带上，采用压壳机对测试盒进行紧密压盖。
实施例1
制备胶体金垫3：
1)金颗粒标记布鲁氏菌抗原的制备：取10ml的30nm的纳米金颗粒和10ml的浓度为50μg/ml布鲁氏菌抗原混合，室温反应15min，而后离心纯化，得到金颗粒标记布鲁氏菌抗原；
2)金颗粒标记的鸡IgY的制备：取10ml的30nm的纳米金颗粒和10ml的浓度为100μg/ml鸡IgY混合，室温反应15min，而后离心纯化，得到金颗粒标记鸡IgY；
3)胶体金垫的制备：将金颗粒标记布鲁氏菌抗原和金颗粒标记的鸡IgY等体积混匀，而后加入到胶体内，备用。
硝酸纤维素膜4的处理：
在硝酸纤维素膜4上划刻检测线5和质控线6，将布鲁氏菌抗原2喷在检测线5上，将羊抗鸡IgY抗体喷在质控线6上。
制作试纸：
在底板1上依次粘贴样品垫2、胶体金垫3、硝酸纤维素膜4和吸水垫7，制得布鲁氏菌抗体检测试纸。
实施例2
制备胶体金垫3：
1)金颗粒标记布鲁氏菌抗原的制备：取10ml的50nm的纳米金颗粒和10ml的浓度为30μg/ml布鲁氏菌抗原混合，室温反应15min，而后离心纯化，得到金颗粒标记布鲁氏菌抗原；
2)金颗粒标记的鸡IgY的制备：取10ml的50nm的纳米金颗粒和10ml的浓度为90μg/ml鸡IgY混合，室温反应15min，而后离心纯化，得到金颗粒标记鸡IgY；
3)胶体金垫的制备：将金颗粒标记布鲁氏菌抗原和金颗粒标记的鸡IgY等体积混匀，而后加入到胶体内，备用。
硝酸纤维素膜4的处理：
在硝酸纤维素膜4上划刻检测线5和质控线6，将布鲁氏菌抗原2喷在检测线5上，将羊抗鸡IgY抗体喷在质控线6上。
制作试纸：
在底板1上依次粘贴样品垫2、胶体金垫3、硝酸纤维素膜4和吸水垫7，制得布鲁氏菌抗体检测试纸。
实施例3
制备胶体金垫3：
1)金颗粒标记布鲁氏菌抗原的制备：取10ml的30nm的纳米金颗粒和10ml的浓度为45μg/ml布鲁氏菌脂多糖抗原混合，室温反应15min，而后离心纯化，得到金颗粒标记布鲁氏菌抗原；
2)金颗粒标记的鸡IgY的制备：取10ml的30nm的纳米金颗粒和10ml的浓度为75μg/ml鸡IgY混合，室温反应15min，而后离心纯化，得到金颗粒标记鸡IgY；
3)胶体金垫的制备：将金颗粒标记布鲁氏菌抗原和金颗粒标记的鸡IgY等体积混匀，而后加入到胶体内，备用。
硝酸纤维素膜4的处理：
在硝酸纤维素膜4上划刻检测线5和质控线6，将布鲁氏菌抗原2喷在检测线5上，将羊抗鸡IgY抗体喷在质控线6上。
制作试纸：
在底板1上依次粘贴样品垫2、胶体金垫3、硝酸纤维素膜4和吸水垫7，制得布鲁氏菌抗体检测试纸。
取人、牛、羊的阳性血液样品，每个物种5份共15份进行处理。将15份血液标本收集在促凝采血管内，分别收集上层血清，2～8℃冷藏备用。
将15份血清样本每份取少许滴加在洁净的玻片，采用虎红平板凝集试验进行检测，结果有11份血样未被检测出阳性，准确度较低。
将15份血清样本每份取少许，采用试管凝集实验进行检测，48小时后对检测结果进行统计，全部15份血样均检测呈阳性，准确度较高。
将15份血清样本每份取600μL，每份600μL的血液样本等分成6份，共得到90份样本。取实施例1～6的检测试纸，每个实施例取15份试纸，共得到90份检测试纸。将90份样本分别加入到90份检测试纸的样品窗口8a内，30分钟后观察检测结果。检测呈阳性的样本量为89份，仅1份样本检测为阴性，检测准确率极高。对90份检测试纸的检测过程进行观察，平均检测时间在12分钟左右，检测速度极快。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，包括底板(1)，在底板(1)上依次固定有样品垫(2)、胶体金垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水垫(7)，其特征在于：所述胶体金垫(3)包被有金颗粒标记的布鲁氏菌抗原1和金颗粒标记的鸡IgY，所述硝酸纤维素膜(4)上喷有检测线(5)和质控线(6)，所述检测线(5)包被有布鲁氏菌抗原2，所述质控线(6)包被有羊抗鸡IgY抗体。
2.根据权利要求1所述的检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，其特征在于：所述布鲁氏菌抗原1为布鲁氏菌脂多糖抗原LPS。
3.根据权利要求1所述的检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，其特征在于：所述布鲁氏菌抗原2为BP26蛋白。
4.根据权利要求1所述的检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，其特征在于：所述检测线(5)中布鲁氏菌抗原2浓度为0.1mg/ml～2mg/ml。
5.根据权利要求1所述的检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，其特征在于：所述质控线(6)中有羊抗鸡IgY抗体浓度为0.1mg/ml～2mg/ml。
6.根据权利要求1所述的检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，其特征在于，所述胶体金垫(3)采用以下方法制得：
1)金颗粒标记布鲁氏菌抗原1的制备：取10ml的纳米金颗粒，加入布鲁氏菌抗原1，使终浓度为5μg/ml～50μg/ml，室温混匀搅拌反应30min；再加入2ml标记封闭液(含2％BSA的PBS缓冲液)，室温混匀搅拌反应30min，而后离心纯化，得到金颗粒标记布鲁氏菌抗原1；
2)金颗粒标记鸡IgY的制备：取10ml的纳米金颗粒，加入鸡IgY，使终浓度为5μg/ml～50μg/ml，室温混匀搅拌反应30min；再加入2ml标记封闭液(含2％BSA的PBS缓冲液)，室温混匀搅拌反应30min，而后离心纯化，得到金颗粒标记鸡IgY；
3)胶体金垫的制备：将金颗粒标记布鲁氏菌抗原1和金颗粒标记的鸡IgY等体积混匀，制得胶体金垫；
4)用三维平面点膜喷金仪将混匀后的金颗粒标记溶液喷在聚酯纤维上，设定参数使喷量为2～3μL/cm，将喷膜均匀的胶体金垫平置于网架上，37℃烘干，放入装有干燥剂的铝箔袋内，密封，备用。
7.根据权利要求6所述的检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，其特征在于：所述步骤1中纳米金颗粒的粒径为30～50nm。
8.根据权利要求1所述的检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(4)采用以下方法制得：
1)将布鲁氏菌抗原2和羊抗鸡IgY抗体分别用包被稀释液(含1％BAS、5％海藻糖、0.1％Tween 20的磷酸盐溶液，pH7.4)调整浓度为0.1～2mg/ml；
2)用三维平面点膜喷金仪将布鲁氏菌抗原2划在硝酸纤维素膜(4)上，设定参数使喷量为0.5～1.5μL/cm，即为检测线(5)；
3)用三维平面点膜喷金仪将羊抗鸡IgY抗体划在硝酸纤维素膜(4)上，设定参数使喷量为0.5～1.5μL/cm，即为质控线(6)；
4)包被后的硝酸纤维素膜(4)平置于网架上，37℃烘干，放入装有干燥剂的铝箔袋内，密封，备用。
9.根据权利要求1所述的检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，其特征在于，所述样品垫(2)采用以下步骤制备：将玻璃纤维浸泡在样品垫处理液中，两面浸泡均不少于5min，将浸泡均匀的玻璃纤维平置于网架上，37℃烘干，放入装有干燥剂的铝箔袋内，密封，备用。
10.根据权利要求1所述的检测布鲁氏菌抗体的检测试纸，其特征在于，所述试纸条采用以下步骤制备：在底板(1)上依次粘贴硝酸纤维素膜(4)、胶体金垫(3)、样品垫(2)和吸水垫(7)，将底板(1)置于自动斩切机上，切成宽度为3.5mm试纸条；将试纸条放入塑料卡底相应位置，盖好卡盖，放置于压壳机的传送带上，采用压壳机对测试盒进行紧密压盖，即制得试纸条。
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