CN111513146A - 一种含有益生菌的水飞蓟油的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,采用水飞蓟油递增培养技术,提高有益菌在水飞蓟油环境下的存活率;间隔加温的培养方法有效提高有益菌在室温下的存活能力;并采用水飞蓟油的包裹技术,提高了有益菌与水飞蓟油的相溶性能;整个工艺操作过程是在洁净的环境下完成的,没有给环境带来任何的污染;且通过上述方法培养的益生菌生命活力强,质量稳定;工艺操作简单,成品率高。
Description
技术领域
本发明涉及水飞蓟油片的制备方法领域,尤其涉及一种含有益生菌的水飞蓟油的制备方法。
背景技术
水飞蓟油是一种从菊科植物水飞蓟籽仁中分离出来的产物,其中含有70%以上的不饱和脂肪酸,具有一定的软化血管和抗疲劳的功效,目前已列入国家新食品资源,随着人们对水飞蓟油了解和青睐,越来越多的老百姓从接收水飞蓟油保健品到接收水飞蓟油食品,从偶尔服用到长期服用,通过长期服用发现水飞蓟油暴露了油类制品的的通病,就是导致肠道不适。为了更好的发挥好水飞蓟油的功效,研究人员着手研究在水飞蓟油中添加利于平衡肠道菌群的双岐杆菌和乳酸菌。
但是该项技术目前出现三个技术瓶颈无法解决,一是有益菌细胞膜在水飞蓟油中有微溶的情况,导致有益菌细胞膜破裂,有益菌无法存活。二是,有益菌在水飞蓟油中需要低温保存,否则无法存活。三是水飞蓟油与有益菌不相溶,导致服用水飞蓟油的时候需要振摇,否则出现分层。
发明内容
发明目的:为了克服现有技术中存在的缺陷,本发明公开了一种含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,解决了水飞蓟油中有益菌的存活难的问题,提高有益菌与水飞蓟油的相容性。
技术方案:为了解决上述技术问题,本发明所采用的技术方案为:一种含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,包括如下步骤:
(1)取1份双岐杆菌、1~1.5份乳酸菌,在1~5℃的环境下置于洁净的旋转真空罐中,采用益生菌中递增间隔式包裹水飞蓟油的方法进行水飞蓟油益生菌包裹处理;
(2)将上述已包裹双岐杆菌和乳酸菌的水飞蓟油,温度控制在10~15℃后开启中速旋转,旋转时间控制在1~3h后,再关闭旋转,静置;
(3)采用定量PCR筛选,保证双岐杆菌和乳酸菌的CFU总数;
(4)取上述步骤(3)得到的以重量计算的1份水飞蓟油,加入300~500份的水飞蓟油中,在5~20℃的环境下中速搅拌15~30min后,得到含有益生菌的水飞蓟油,分装保存。
更进一步的,步骤(1)中所述双歧杆菌的活菌数量为1×105CFU/g。
更进一步的,步骤(1)中所述乳酸菌的活菌数量为1×105CFU/g。
更进一步的,步骤(1)所述的包裹处理方法如下:打开装有双岐杆菌和乳酸菌的旋转真空罐,转速控制在30~50r/min;转动5~10min后,在旋转真空罐中加入以重量计算0.001~0.01份的水飞蓟油,开启真空保持真空状态转动10~20min后:停止旋转并关闭真空3~5min;再加入以重量计算0.1~0.9份的水飞蓟油,再开启真空保持真空状态转动10~20min后:再次停止旋转并关闭真空3~5min;继续加入以重量计算1~3份的水飞蓟油,再开启真空保持真空状态转动10~20min后,关闭真空,静置5~10h。
更进一步的,每次开启真空的真空度控制在-0.01~-0.08MPa。
更进一步的,步骤(2)、(4)中所述中速选择和中速搅拌的速度为30~50r/min。
更进一步的,步骤(2)中静置的时间为5~10h。
有益效果:本发明具有以下优点:(1)采用水飞蓟油递增培养技术,提高有益菌在水飞蓟油环境下的存活率;(2)间隔加温的培养方法有效提高有益菌在室温下的存活能力;并采用水飞蓟油的包裹技术,提高了有益菌与水飞蓟油的相溶性能;(3)整个工艺操作过程是在洁净的环境下完成的,没有给环境带来任何的污染;且通过上述方法培养的益生菌生命活力强,质量稳定;工艺操作简单,成品率高。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明:
实施例以及动物实验中所使用的药物药品以及仪器来源如下:
水飞蓟油由西安千诺生物科技有限公司提供;
双歧杆菌和乳酸菌由广州万康医药科技有限公司提供。
实施例1:
一种含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,包括如下步骤:
(1)取30g双岐杆菌(1×105CFU/g)、30g乳酸菌(1×105CFU/g),在1℃的环境下置于洁净的洁净的旋转真空罐中,开启旋转真空罐,转速30r/min;转动时间5min后,在益生菌中加入0.03g的水飞蓟油置旋转真空罐中,开启真空,真空度控制在-0.01MPa,保持真空状态转动10min后:再停止真空3min;真空罐中再加入3g水飞蓟油,再开启真空,真空度控制在-0.01MPa,保持真空状态转动10min后:再停止真空3min;真空罐中再加入30g水飞蓟油,再开启真空,真空度控制在-0.01MPa,保持真空状态转动10min后,关闭真空,静置5h;
(2)将上述已包裹双岐杆菌和乳酸菌的水飞蓟油,温度控制到10℃后,开启旋转(30r/min)1h后,关闭旋转,静置5h;
(3)采用定量PCR筛选,保证双岐杆菌和乳酸菌的CFU总数;
(4)取上述步骤(3)得到的90g包裹益生菌的水飞蓟油,加27000g的水飞蓟油中,在5℃的环境下搅拌15min,转速控制在30r/min,得到含有益生菌的水飞蓟油27090g,分装保存。
实施例2:
一种含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,包括如下步骤:
(1)取30g双岐杆菌(1×105CFU/g)、30g乳酸菌(1×105CFU/g),在3℃的环境下置于洁净的洁净的旋转真空罐中,开启旋转真空罐,转速40r/min;转动时间7min后,在益生菌中加入0.15g的水飞蓟油置旋转真空罐中,开启真空,真空度控制在-0.05MPa,保持真空状态转动10min后:再停止真空3min;真空罐中再加入3g水飞蓟油,再开启真空,真空度控制在-0.05MPa,保持真空状态转动10min后:再停止真空3min;真空罐中再加入30g水飞蓟油,再开启真空,真空度控制在-0.05MPa,保持真空状态转动15min后,关闭真空,静置7h;
(2)将上述已包裹双岐杆菌和乳酸菌的水飞蓟油,温度控制到13℃后,开启旋转(40r/min)2h后,再关闭旋转保持静置7h;
(3)采用定量PCR筛选,保证双岐杆菌和乳酸菌的CFU总数;
(4)取上述步骤(3)得到的102g包裹益生菌的水飞蓟油,加40800g的水飞蓟油中,在5℃的环境下搅拌20min,转速控制在40r/min,得到含有益生菌的水飞蓟油40902g,分装保存。
实施例3:
一种含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,包括如下步骤:
(1)取30g双岐杆菌(1×105CFU/g)、30g乳酸菌(1×105CFU/g),在3℃的环境下置于洁净的洁净的旋转真空罐中,开启旋转真空罐,转速50r/min;转动时间10min后,在益生菌中加入0.3g的水飞蓟油置旋转真空罐中,开启真空,真空度控制在-0.08MPa,保持真空状态转动20min后:再停止旋转和关闭真空5min后;真空罐中再加入27g水飞蓟油,再开启真空,真空度控制在-0.08MPa,保持真空状态转动10min后:再停止旋转和关闭真空5min后;真空罐中再加入90g水飞蓟油,再开启真空,真空度控制在-0.08MPa,保持真空状态转动20min后,关闭真空,静置10h;
(2)将上述已包裹双岐杆菌和乳酸菌的水飞蓟油,温度控制到15℃后,开启旋转(50r/min)3h后,再关闭旋转保持静置10h;
(3)采用定量PCR筛选,保证双岐杆菌和乳酸菌的CFU总数;
(4)取上述步骤(3)得到的192g包裹益生菌的水飞蓟油,加96000g的水飞蓟油中,在20℃的环境下搅拌30min,转速控制在50r/min,得到含有益生菌的水飞蓟油96192g,分装保存。
对比例1:
取30g双岐杆菌(1×105CFU/g)、30g乳酸菌(1×105CFU/g),在3℃的环境下置于洁净的旋转真空罐中,开启旋转真空罐,转速50r/min;转动时间10min后,在旋转真空罐中加入96000h的水飞蓟油,开启真空,真空度控制在-0.08MPa,保持真空状态转动20min后:静置10h,得到含有益生菌的水飞蓟油96060g,分装保存。
对比试验如下:
(一)实施例3与对比例1益生菌水飞蓟油相溶性实验:
试验方法:
外观(目测):分别取200g实施例3与对比例1制备而成的益生菌水飞蓟油,在20℃±2℃的环境下,放置的300mL溶量瓶中,根据不同时间放置后,观察油的变化。具体如表1所示:
活菌数量CFU/g:采用平板计数法,具体法如下:配LB培养液(酵母粉0.5%,蛋白胨1%,氯化钠1%,琼脂2%,其余为水),121度灭菌20分种,倒培养皿冷凝待用,水飞蓟油液经10倍比稀释后,在超净台中用于涂平板,吸取稀释后菌液100微升,尽量均匀涂到一平皿,然后倒置放在20℃±2℃恒温培养箱中培养24小时左右。计算每个平皿菌数,计算出原液中活菌的数量,如表1所示。
表1实施例3与对比例1益生菌水飞蓟油相溶情况
从表1可以看出,按照本申请方法制备的益生菌水飞蓟油5个小时后能看出明显的差异,实施例3中益生菌与水飞蓟油的相溶性能有了明显的提高。
二、动物实验:
1、材料和仪器:
1-1、动物:
SPF级雄性小鼠(20±2g):由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供;
1-2、药物和试剂:
水飞蓟油由西安千诺生物科技有限公司提供;
双歧杆菌和乳酸菌由广州万康医药科技有限公司提供。
1-3、仪器:
低温高速离心机:由Thermo Fisher Scientific提供;万分之一天平:由上海菁海仪器有限公司提供;
1-4、动物试验:
1-4-1动物饲养条件:
将小鼠置于动物实验室,室温控制在20~25℃,湿度55%~65%,空调控制。每日通风2~3次,每次1h。控制昼夜光照,避免过多噪声及其它干扰,分笼饲养,给予鼠粮饲养,饮水采用自来水煮沸后的冷却水,不限制进食量及饮水量。
1-4-2:试验方法:
取40只小鼠随机分为4组,即为:正常对照组、模型对照组(采用实施例2中制备的水飞蓟油)、水飞蓟油组、(采用未进行处理的水飞蓟油);水飞蓟油对照组(采用对比例中制备的水飞蓟油)
每组10只,给药方法具体参考表1,正常对照组饲喂生理盐水,模型对照组进行实施例2中制备的水飞蓟油进行饲喂,水飞蓟油组采用未进行处理的水飞蓟油进行饲喂;水飞蓟油对照组采用对比例中制备的水飞蓟油进行饲喂;记录数据,直至小鼠出息拉肚子的情况,停止灌胃,并记录小鼠的摄食量。
实验分组以及给药剂量具体如表2所示:
表2实验分组及给药剂量
分组 | 数量(只) | 给药剂量(mg/10g) |
正常对照组 | 10 | 生理盐水0.10 |
模型对照组 | 10 | 实施例2益生菌水飞蓟油0.10 |
水飞蓟油组 | 10 | 水飞蓟油0.10 |
水飞蓟油对照组 | 10 | 对比例益生菌水飞蓟油0.10 |
末次给药后,禁食不禁水24h,观察小鼠情况。
1-4-3、实验结果与分析:
含有益生菌水飞蓟油对小鼠肠道功能的影响如表2所示:
表3不同组别小鼠肠道功能影响对比
从表3的数据可以得出以下结论:
正常对照组和本申请制备的含有益生菌的水飞蓟油进行饲喂的小鼠都无肠道反应,且本申请制备的含有益生菌的水飞蓟油的饲喂的小鼠精神状态较为活跃,而仅仅用水飞蓟油进行饲喂的小鼠肠道反应较为严重,有六只拉肚子,且精神状态也不好,说明不含益生菌的水飞蓟油不易被小鼠吸收,此外,采用传统方法制备的益生菌水飞蓟油由于其益生菌存活较低且与水飞蓟油相溶性不好,2只小鼠服用后肠道出现拉肚现象,3只没有精神(包括二只肠道出现不良反应的小鼠)。因此,本申请制备的含有益生菌的水飞蓟油,有效提高了有益菌与水飞蓟油的相溶性能;且益生菌生命活力强,应用效果较好。
Claims (7)
1.一种含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)取1份双岐杆菌、1~1.5份乳酸菌,在1~5℃的环境下置于洁净的旋转真空罐中,采用益生菌中递增间隔式包裹水飞蓟油的方法进行水飞蓟油益生菌包裹处理;
(2)将上述已包裹双岐杆菌和乳酸菌的水飞蓟油,温度控制在10~15℃后开启中速旋转,旋转时间控制在1~3h后,再关闭旋转,静置;
(3)采用定量PCR筛选,保证双岐杆菌和乳酸菌的CFU总数;
(4)取上述步骤(3)得到的以重量计算的1份水飞蓟油,加入300~500份的水飞蓟油中,在5~20℃的环境下中速搅拌15~30min后,得到含有益生菌的水飞蓟油,分装保存。
2.根据权利要求1所述的含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述双歧杆菌的活菌数量为1×105CFU/g。
3.根据权利要求1中含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述乳酸菌的活菌数量为1×105CFU/g。
4.根据权利要求1中含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,其特征在于:步骤(1)所述的包裹处理方法如下:打开装有双岐杆菌和乳酸菌的旋转真空罐,转速控制在30~50r/min;转动5~10min后,在旋转真空罐中加入以重量计算0.001~0.01份的水飞蓟油,开启真空保持真空状态转动10~20min后:停止旋转并关闭真空3~5min;再加入以重量计算0.1~0.9份的水飞蓟油,再开启真空保持真空状态转动10~20min后:再次停止旋转并关闭真空3~5min;继续加入以重量计算1~3份的水飞蓟油,再开启真空保持真空状态转动10~20min后,关闭真空,静置5~10h。
5.根据权利要求4中含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,其特征在于:每次开启真空的真空度控制在-0.01~-0.08MPa。
6.根据权利要求1所述的含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,其特征在于:步骤(2)、(4)中所述中速选择和中速搅拌的速度为30~50r/min。
7.根据权利要求1所述的含有益生菌的水飞蓟油的制备方法,其特征在于:步骤(2)中静置的时间为5~10h。
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