CN111494475A - 一种制备赤芍提取物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种制备赤芍提取物的方法，取氢键供体、氢键受体和/或去离子水，以预设比例混合、加热，制备低共熔溶剂，在低共熔溶剂中加入水，制得低共熔溶剂水溶液，取一定量赤芍粉加入其中，得到混合溶液，进行超声提取后进行离心处理，取离心后的上清液，得到赤芍提取物。本发明高效、绿色，利用低共熔溶剂制备赤芍提取物，可同时高效提取赤芍中主要成分，芍药苷和没食子酸的含量较水提物提高；以天然低共熔溶剂对中药材进行提取，方法所需时间短，能耗低，绿色环保，溶剂用量低，有效避免了其他溶剂所需提取时间长、提取物易变质等缺点，是一种适用于中药及其他天然药物的新型提取方法。

Description

一种制备赤芍提取物的方法
技术领域
本发明涉及含有来自藻类、苔藓、真菌或植物或其派生物，例如传统草药的未确定结构的药物制剂的技术领域，特别涉及一种利用天然低共熔溶剂的制备赤芍提取物的方法。
背景技术
赤芍为毛茛科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall)或川赤芍(Paeoniaveitchii Lynch)的干燥根，其味苦性凉，是一种常用的中药材，具有清热凉血、散瘀止痛等药效。
经多年临床和药理研究发现，赤芍具有对心血管系统的影响作用、抗血栓形成作用和保肝作用，以及调节免疫、抑菌、抗炎、解痉等作用，常用作治疗肠风下血、月经不调、自汗盗汗、目赤肿痛、腹痛、胁痛等病症，近期更有报道表明，赤芍能很好地改善糖尿病患者的早期肾功能。常见中成药，如补阳还五汤等亦以赤芍为主要药味。
赤芍的主要化学活性成分为芍药总苷，还含有鞣质类、黄酮类、挥发油类等成分，赤芍中，芍药苷的含量较高，在《中国药典》中作为质量标志物，被规定芍药苷(C23H28O11)不得少于1.8％(干燥品)。
国内外现阶段已经对中药化学成分进行了较多的研究，研究前的提取作业采用的方法大多比较传统，如回流提取、温浸提取等，这些方法仍是目前药典和工业应用最常用的提取手段，虽然在一定程度上有了改良，但也普遍存在着工艺复杂、设备要求高等缺点，而且传统有机溶剂的提取效率不高，又多具有毒性，具体于赤芍提取制备而言，则表现为水提取物的提取效率低、质量难控、易变质等。
发明内容
针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种制备赤芍提取物的方法，可以有效的解决上述问题。
为了实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现，一种制备赤芍提取物的方法，所述方法包括以下步骤：
步骤1：取氢键供体(Hydrogen Bond Donor,HBD)、氢键受体(Hydrogen BondAcceptor,HBA)和/或去离子水，以预设比例混合、加热，制备低共熔溶剂；
步骤2：在所述低共熔溶剂中加入水，制得低共熔溶剂水溶液；
步骤3：取一定量赤芍粉加入所述低共熔溶剂水溶液中，得到混合溶液；
步骤4：将制得的混合溶液进行超声提取；
步骤5：将步骤4处理后的溶液进行离心处理，取离心后的上清液，得到赤芍提取物。本发明中，离心的技术参数优选16200×g下10min。
优选地，所述步骤1中，氢键供体包括蔗糖(Suc)、麦芽糖(Ma)、葡萄糖(D-Glu)、甘油(Gly)、山梨醇(D-Sor)、乳酸(Lac)、苹果酸(DL-Ma)、尿素(Ur)、甲基脲(Mu)、二甲基脲(Du)、乙酰胺(Am)，氢键受体包括氯化胆碱(ChCl)、甜菜碱(Bet)、L-脯氨酸(L-Pro)、D-脯氨酸(D-Pro)。
优选地，所述步骤1中，氢键供体、氢键受体以物质的量之比1:1-2.5混合、加热，制备成低共熔溶剂。
优选地，所述步骤1中，氢键供体、氢键受体和去离子水以物质的量之比1:0.25-1:1-5混合、加热，制备成低共熔溶剂。
优选地，所述步骤1中，氢键供体、氢键受体和/或去离子水混合后，在80-100℃加热搅拌0.5-2h，形成澄清均一的低共熔溶剂。本发明中，一般以在80℃加热搅拌1h作为操作条件。
优选地，所述低共熔溶剂由甜菜碱与甘油以物质的量之比1:2混合后，在80℃加热搅拌1h制成，记为DES-15(Bet-Gly)。
优选地，所述低共熔溶剂水溶液中，低共熔溶剂的体积浓度为25-100％。本发明中，一般为75％。
优选地，所述步骤3中，每毫升低共熔溶剂水溶液中加入赤芍粉25-200mg。本发明中，赤芍粉末重量以低共熔溶剂水溶液体积用量计优选为200mg/mL。
优选地，所述步骤4中，超声提取为将制得的混合溶液于25-75℃、50-200W的超声条件下执行15-60min。本发明中，一般为在50℃、200W下超声提取30min。
优选地，所述赤芍提取物包括芍药苷和没食子酸。
本发明提供一种高效、绿色、利用低共熔溶剂的制备赤芍提取物的方法，可同时高效提取赤芍中主要成分，其中芍药苷的含量较水提物高34.16％；没食子酸的含量较水提物高13.89％。
本方法引入天然低共熔溶剂(Natural Deep Eutectic Solvent,NADES)对中药材进行提取，方法所需时间短，能耗低，绿色环保，溶剂用量低(200mg赤芍药材/1mL提取溶剂)，有效避免了其他溶剂所需提取时间长、提取物易变质等缺点，是一种适用于中药及其他天然药物的新型提取方法。
附图说明
图1是实施例1的高效液相色谱图；
图2是实施例2的高效液相色谱图；
图3是实施例3的高效液相色谱图；
图4是对比例1的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步描述,以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
本发明实施例所用赤芍均按照《中国药典》(2015)采集制备。
实施例1
将甜菜碱(1g)、甘油(1.57g)以摩尔比1:2的比例混合，于80℃加热搅拌1小时，形成澄清均一的低共熔溶剂，记为DES-15；
将750μL的DES-15与250μL水混合均匀，加入1.5mL离心管中，再准确称取200.0mg赤芍粉末加入其中，于50℃下超声提取30min，超声功率为200W；
超声提取后，于13300r/min下离心20min，取上清液，即为赤芍提取物。
上清液用体积浓度为50％的甲醇水溶液稀释2倍后，进行高效液相色谱检测，如图1所示，根据化合物(芍药苷和没食子酸)标准曲线，获得赤芍提取物中所含化合物种类及含量，以提取率＝提取物中化合物含量/赤芍重量计算提取率(mg/g)，测得提取物中含有芍药苷102.50mg/g、没食子酸1.71mg/g。
高效液相色谱(HPLC)的具体检测条件为：Agilent Extend-C18(250mm*4.6mm，5μm)；流动相：0.1％甲酸(A)-乙腈(B)，洗脱程序：0-20min 10％(乙腈浓度)；20-25min 45％(乙腈浓度)；30-45min45％(乙腈浓度)，流速为0.8mL/min,柱温：25℃，进样量：20μL，检测波长为280nm。
实施例2
将L-脯氨酸(1.15g)与甘油(2.30g)以摩尔比2:5的比例混合，于80℃加热搅拌1小时，形成澄清均一的低共熔溶剂，记为DES-1；
将750μL的DES-1与250μL水混合均匀，加入1.5mL离心管中，再准确称取200.0mg赤芍粉末加入其中，于50℃下超声提取30min，超声功率为200W；
超声提取后，于13300r/min下离心20min，取上清液，即为赤芍提取物。
上清液用体积浓度为50％的甲醇水溶液稀释2倍后，进行高效液相色谱检测，如图2所示，根据化合物(芍药苷和没食子酸)标准曲线，获得赤芍提取物中所含化合物种类及含量，以提取率＝提取物中化合物含量/赤芍重量计算提取率(mg/g)，测得提取物中含有芍药苷99.80mg/g、没食子酸1.60mg/g。
实施例3
将氯化胆碱(1.40g)、甘油(1.84g)以摩尔比1:2的比例混合，于80℃加热搅拌1小时，形成澄清均一的低共熔溶剂，记为DES-11；
将750μL的DES-11与250μL水混合均匀，加入1.5mL离心管中，再准确称取200.0mg赤芍粉末加入其中，于50℃下超声提取30min，超声功率为200W；
超声提取后，于13300r/min下离心20min，取上清液，即为赤芍提取物。
上清液用体积浓度为50％的甲醇水溶液稀释2倍后，进行高效液相色谱检测，如图3所示，根据化合物(芍药苷和没食子酸)标准曲线，获得赤芍提取物中所含化合物种类及含量，以提取率＝提取物中化合物含量/赤芍重量计算提取率(mg/g)，测得提取物中含有芍药苷82.94mg/g、没食子酸0.99mg/g。
对比例1
准确称取200.0mg赤芍粉末加入1.5mL离心管中，加入1mL去离子水，于50℃下超声提取30min，超声功率为200W，超声提取后，于13300r/min下离心20min，取上清液，即为赤芍水提物。
上清液用体积浓度为50％的甲醇水溶液稀释2倍后，进行高效液相色谱检测，如图4所示，根据化合物(芍药苷和没食子酸)标准曲线，获得赤芍提取物中所含化合物种类及含量，以提取率＝提取物中化合物含量/赤芍重量计算提取率(mg/g)，测得提取物中含有芍药苷76.40mg/g、没食子酸1.50mg/g。
试验例1
将实施例1中DES-15替换为表1中其他低共熔溶剂，摩尔比如表1所示，其他操作同实施例1，所制得赤芍提取物中芍药苷和没食子酸的含量见表1低共熔溶剂种类对提取率的影响；
表1.低共熔溶剂种类对提取率的影响
Figure BDA0002538292810000071
Figure BDA0002538292810000081
由表1中的结果显示，DES-15综合提取性能最佳。
试验例2
将实施例1中DES-15的体积浓度改成表2所示，其他操作同实施例1，所制得赤芍提取物中芍药苷、没食子酸的含量见表2低共熔溶剂浓度对提取效果的影响；
表2.低共熔溶剂浓度对提取效果的影响
Figure BDA0002538292810000082
Figure BDA0002538292810000091
由表2中的结果显示，可以得到在浓度为75％DES时提取效果最佳。
试验例3
将实施例1中赤芍质量(mg)与DES-15水溶液总体积(ml)比改为表3所示，其他操作同实施例1，所制得赤芍提取物中芍药苷、没食子酸的含量见表3提取固液比对提取效果的影响；
表3.提取固液比对提取效果的影响
Figure BDA0002538292810000092
由表3中的结果显示，固液比为200mg/mL时为最佳提取固液比。
试验例4
将实施例1中温度改成表4所示，其他操作同实施例1，所制得赤芍提取物中芍药苷、没食子酸的含量见表4提取温度对提取效果的影响；
表4.提取温度对提取效果的影响
Figure BDA0002538292810000101
由表4中的结果显示，在提取温度为50℃时为最佳提取温度。
试验例5
将实施例1中提取时间改成表5所示，其他操作同实施例1，所制得赤芍提取物中芍药苷、没食子酸的含量见表5提取时间对提取效果的影响；
表5.提取时间对提取效果的影响
Figure BDA0002538292810000102
由表5中的数据表明，在其他条件一致的情况下，提取时间为30min时为最佳提取时间。

Claims (10)

1.一种制备赤芍提取物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤1：取氢键供体、氢键受体和/或去离子水，以预设比例混合、加热，制备低共熔溶剂；
步骤2：在所述低共熔溶剂中加入水，制得低共熔溶剂水溶液；
步骤3：取一定量赤芍粉加入所述低共熔溶剂水溶液中，得到混合溶液；
步骤4：将制得的混合溶液进行超声提取；
步骤5：将步骤4处理后的溶液进行离心处理，取离心后的上清液，得到赤芍提取物。
2.根据权利要求1所述的制备赤芍提取物的方法，其特征在于，所述步骤1中，所述氢键供体包括蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、甘油、山梨醇、乳酸、苹果酸、丙二酸、尿素、甲基脲、乙酰胺；所述氢键受体包括氯化胆碱、甜菜碱、L-脯氨酸、D-脯氨酸。
3.根据权利要求1或2所述的制备赤芍提取物的方法，其特征在于，所述步骤1中，氢键供体、氢键受体以物质的量之比1:1-2.5混合、加热，制备成低共熔溶剂。
4.根据权利要求1或2所述的制备赤芍提取物的方法，其特征在于，所述步骤1中，氢键供体、氢键受体和去离子水以物质的量之比1:0.25-1:1-5混合、加热，制备成低共熔溶剂。
5.根据权利要求1或2所述的制备赤芍提取物的方法，其特征在于，所述步骤1中，氢键供体、氢键受体和/或去离子水混合后，在80-100℃加热搅拌0.5-2h，形成澄清均一的低共熔溶剂。
6.根据权利要求5所述的制备赤芍提取物的方法，其特征在于，所述低共熔溶剂由甜菜碱与甘油以物质的量之比1:2混合后，在80℃加热搅拌1h制成。
7.根据权利要求1所述的制备赤芍提取物的方法，其特征在于，所述低共熔溶剂水溶液中，低共熔溶剂的体积浓度为25-100%。
8.根据权利要求1所述的制备赤芍提取物的方法，其特征在于，所述步骤3中，每毫升低共熔溶剂水溶液中加入赤芍粉25-200mg。
9.根据权利要求 1所述的制备赤芍提取物的方法，其特征在于，所述步骤4中，超声提取为将制得的混合溶液于25-75℃、50-200W的超声条件下执行15-60min。
10.根据权利要求1所述的制备赤芍提取物的方法，其特征在于，所述赤芍提取物包括芍药苷和没食子酸。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112159342A (zh) * 2020-09-29 2021-01-01 沈阳药科大学 氨基酸类天然低共熔溶剂提取虾壳中虾青素的方法
CN114736109A (zh) * 2022-03-02 2022-07-12 华南理工大学 一种选择性提取何首乌中二苯乙烯苷类成分的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108553937A (zh) * 2018-05-15 2018-09-21 广州科帆生物科技有限公司 天然低共熔溶剂及其在植物提取中的应用
CN109609270A (zh) * 2018-11-21 2019-04-12 浙江工业大学 基于天然低共熔溶剂-微波辅助水蒸气提取香料中精油的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108553937A (zh) * 2018-05-15 2018-09-21 广州科帆生物科技有限公司 天然低共熔溶剂及其在植物提取中的应用
CN109609270A (zh) * 2018-11-21 2019-04-12 浙江工业大学 基于天然低共熔溶剂-微波辅助水蒸气提取香料中精油的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DAI YUNTAO等: "Natural deep eutectic solvents as a new extraction media for phenolic metabolites in Carthamus tinctorius L", 《ANALYTICAL CHENMISTRY》 *
JUE CHEN等: "Deep Eutectic Solvent-Based Microwave-Assisted Method for Extraction of Hydrophilic and Hydrophobic Components from Radix Salviae miltiorrhizae", 《MOLECULES》 *
马冰等: "不同提取方法对赤芍中芍药苷含量影响的高效液相色谱法对比研究", 《时珍国医国药》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112159342A (zh) * 2020-09-29 2021-01-01 沈阳药科大学 氨基酸类天然低共熔溶剂提取虾壳中虾青素的方法
CN114736109A (zh) * 2022-03-02 2022-07-12 华南理工大学 一种选择性提取何首乌中二苯乙烯苷类成分的方法

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