CN111257453B - 测定生物样品中的阿司匹林的方法、抗凝液及抗凝管 - Google Patents

Abstract

本发明涉及测定生物样品中的阿司匹林的方法。具体地说，一方面涉及一种抗凝液，其中包含氟化钠、乙二胺四乙酸二钾、草酸和水。本发明抗凝液用于处理包含阿司匹林的待检测的生物样品(例如全血，例如血清，例如血浆)。本发明还涉及一种用于生物样品(例如全血，例如血清，例如血浆)抗凝的抗凝管，其包括管体以及密封于该管体内的抗凝液。本发明进一步涉及一种测定生物样品中的阿司匹林含量的方法，该方法包括使所述抗凝液与包含阿司匹林的生物样品混合，接着测定该生物样品中的阿司匹林含量的步骤。本发明抗凝液呈现如说明书所述优异技术效果。

Description

测定生物样品中的阿司匹林的方法、抗凝液及抗凝管

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种生物样品尤其例如是血液样品的检测方法，尤其是涉及一种检测血浆中的阿司匹林含量的方法，本发明特别是涉及一种在检测血浆中阿司匹林含量时处置该血浆的方法，还涉及该方法中所使用的血浆抗凝管。

背景技术

作为一种百年老药，目前阿司匹林(Aspirin，乙酰水杨酸)仍然作为临床的一线用药。在临床上，需要经常对不同种类的阿司匹林制剂进行生物等效性评价，即需要测定服药后血液/血浆中的药物浓度。

自2010年起，欧洲药品管理局(EMA)指南中要求阿司匹林药品生物等效性研究中需同时检测血浆中乙酰水杨酸和水杨酸的浓度。而乙酰水杨酸在血浆中极度不稳定，极易被水解成活性代谢产物水杨酸，其半衰期仅为10-20分钟；同时血浆中乙酰水杨酸和水杨酸的浓度差异非常大，至少相差一个数量级，因此这对血浆样品处理以及质谱分析检测带来很大挑战，具体表现在：

1、如何维持待测物特别是乙酰水杨酸的稳定性，以保证检测数据的真实、可靠

根据文献调研，为了能有效阻止血浆样本中乙酰水杨酸进一步水解，应使用能有效抑制酯酶活性的氟化钠-草酸钾抗凝液的真空采血管，并且所有抗凝管以及血浆冻存管都需要在冰水中预冷，血液采集后应置于立即置于冰水浴中，全血样本应在采血后30分钟内离心分离血浆，离心也应在4℃条件下进行，分离后的血浆样本应立即放入-80℃冰箱或干冰中冷冻保存。

2、如何开发一套分析方法即可同时检测两种待测物，以实现血浆样本的低成本、高效率的分析检测

由于血浆中两种待测物浓度相差悬殊，这对质谱分析方法开发带有一定难度，文献报道一些分析检测机构采用两套分析方法分别检测两种待测物，这不仅费时，更显著增加分析检测成本。

因此，本领域仍然期待有新的方法用于血浆样品中乙酰水杨酸及其代谢物水杨酸的测定，尤其是能够使生物样品在进入色谱仪检测前乙酰水杨酸的含量保持稳定，也就是说，该方法主要是涉及在进入色谱分析前的样品处理过程中如何保持目标物质乙酰水杨酸在血浆生物样品中的稳定性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定生物样品尤其是血浆中的阿司匹林即乙酰水杨酸及其代谢物水杨酸的方法，期待该种方法能够使生物样品在进入色谱仪检测前乙酰水杨酸的含量保持稳定。本发明出人意料的发现，通过采用本发明的抗凝液和/或抗凝管，能够使得所采集的生物样品在进行色谱仪检测前，即使供试样品是在常温条件下保存，仍然具有优良的稳定性，尤其是生物样品中的乙酰水杨酸能够保持稳定。本发明基于此发现而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了一种抗凝液，其中包含氟化钠、乙二胺四乙酸二钾、草酸和水。

根据本发明第一方面的抗凝液，其中所述氟化钠的浓度为20～100mg/mL，例如为30～80mg/mL，例如为40～60mg/mL，例如为50mg/mL。

根据本发明第一方面的抗凝液，其中所述乙二胺四乙酸二钾的浓度为10～50mg/mL，例如为 20～40mg/mL，例如为25～35mg/mL，例如为30mg/mL。

根据本发明第一方面的抗凝液，其中所述草酸的浓度为50～200mg/mL，例如为60～150mg/mL，例如为80～120mg/mL，例如为100mg/mL。

根据本发明第一方面的抗凝液，其是照如下方法制备得到的：精密称取各固体物料，加适量水使溶解，补加水至全量，混合均匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，即得。

根据本发明第一方面的抗凝液，其中用于配制所述抗凝液的水是纯化水。

根据本发明第一方面的抗凝液，其中用于配制所述抗凝液的水是重蒸水。

根据本发明第一方面的抗凝液，其中用于配制所述抗凝液的水是注射用水。

根据本发明第一方面的抗凝液，其用于处理包含阿司匹林的待检测的生物样品(例如全血，例如血清，例如血浆)。

根据本发明第一方面的抗凝液，其是作为包含阿司匹林的生物样品(例如全血，例如血清，例如血浆)的抗凝液。

进一步的，本发明第二方面提供了一种用于生物样品(例如全血，例如血清，例如血浆)抗凝的抗凝管，其包括管体以及密封于该管体内的抗凝液。

根据本发明第二方面的抗凝管，其容纳生物样品的标示体积与抗凝液的体积二者之比为15～30：1，例如为15～25：1，例如为20：1。

根据本发明第二方面的抗凝管，其中所述抗凝液包含氟化钠、乙二胺四乙酸二钾、草酸和水。

根据本发明第二方面的抗凝管，其中所述抗凝液中，所述氟化钠的浓度为20～100mg/mL，例如为 30～80mg/mL，例如为40～60mg/mL，例如为50mg/mL。

根据本发明第二方面的抗凝管，其中所述抗凝液中，所述乙二胺四乙酸二钾的浓度为10～50mg/mL，例如为20～40mg/mL，例如为25～35mg/mL，例如为30mg/mL。

根据本发明第二方面的抗凝管，其中所述抗凝液中，所述草酸的浓度为50～200mg/mL，例如为 60～150mg/mL，例如为80～120mg/mL，例如为100mg/mL。

根据本发明第二方面的抗凝管，其中所述抗凝液是照如下方法制备得到的：精密称取各固体物料，加适量水使溶解，补加水至全量，混合均匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，即得。

根据本发明第二方面的抗凝管，其中所述抗凝液中，用于配制所述抗凝液的水是纯化水。

根据本发明第二方面的抗凝管，其中所述抗凝液中，用于配制所述抗凝液的水是重蒸水。

根据本发明第二方面的抗凝管，其中所述抗凝液中，用于配制所述抗凝液的水是注射用水。

根据本发明第二方面的抗凝管，其用于处理包含阿司匹林的待检测的生物样品(例如全血，例如血清，例如血浆)。

根据本发明第二方面的抗凝管，其是作为包含阿司匹林的生物样品(例如全血，例如血清，例如血浆)的抗凝管。

根据本发明第二方面的抗凝管，其是照如下方法制备得到的：提供所述抗凝液，提供所述管体，向所述管体内添加规定量的抗凝液，密封即得。

根据本发明第二方面的抗凝管，其是采血管。

根据本发明第二方面的抗凝管，其是真空采血管。

进一步的，本发明第三方面提供了测定生物样品中的阿司匹林含量的方法，该方法包括使本发明第一方面任一实施方案所述抗凝液与包含阿司匹林的生物样品混合，接着测定该生物样品中的阿司匹林含量的步骤。

根据本发明第三方面的方法，其中所述生物样品例如是全血，例如血清，例如血浆。测定阿司匹林含量的方法是本领域公知的，例如通过高效液相色谱法，例如液相色谱-质谱法，例如气相色谱-质谱法等等。

在本发明描述的方法步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的实例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

本发明成功开发了一套通过简易处理含有阿司匹林的生物样品即可用于后续色谱的分析，使得色谱分析能够满足两种待测物即乙酰水杨酸及其代谢物水杨酸的同时分析检测，有效缩短分析时程，更为检测节省费用。

依据FDA关于阿司匹林生物等效性研究指南，其生物等效性是基于乙酰水杨酸(即阿司匹林)的生物等效，同时提供其代谢产物水杨酸的数据作为支持证据。

对于阿司匹林生物等效性研究的生物分析而言，最大的难点和挑战是乙酰水杨酸在血浆中极度不稳定，极易被酯酶水解成代谢产物水杨酸，其半衰期仅为10-20分钟。如何能保持乙酰水杨酸在血浆中的稳定性成为生物分析最为关键的因素。

截至目前，我司已完成15个阿司匹林生物等效性预试验或正式试验项目(两个品规，分别为100mg 和300mg肠溶片)的生物分析检测。在此过程中，预试验结果均出现了乙酰水杨酸生物不等效。究其原因，固然有受试制剂与参比制剂存在差异的原因，但更有可能在临床研究的采血环节以及生物分析样品前处理环节的不当处理导致血浆中乙酰水杨酸的降解，从而影响生物等效性。已经出人意料地发现，当采用本发明抗凝剂采血时，从采血到进行色谱测定的过程比之于使用已知的抗凝剂能够显著更有效地保持生物样品中的乙酰水杨酸的稳定性。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。

实施例1：抗凝液的配制

抗凝液配方：氟化钠50mg/mL、乙二胺四乙酸二钾30mg/mL、草酸100mg/mL、水加至全量。

抗凝液的制备：精密称取各固体物料，加适量重蒸水(亦可使用注射用水)使溶解，补加水至全量，混合均匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，即得。在本发明的具体实例中，如未特别说明，抗凝液的制备方法均照此进行。

抗凝管的制备：在实际使用时，为方便起见，通常将配制的抗凝液预先添加到(真空的)抗凝管中，直接用些抗凝管采集受试者静脉血，通常来讲，这种以塑料制成的抗凝管对血浆是惰性的，即管体本身并不会影响凝血、血液成分的稳定性，因此对于本发明的抗凝液而言，可以预先将其分装于管中制成抗凝管的形式供临床使用，在本文具体实验中亦是以包含抗凝液的抗凝管形式使用的。抗凝管的制备方法如下：分别提供抗凝液和管体，向管体内添加规定量的抗凝液，密封即得；管体容纳生物样品的标示体积与抗凝液的体积二者之比为20：1(本领域技术人员公知，通常来讲15～25：1范围内均是可接受的)。通常地，为方便取血，管包含抗凝液的抗凝管是真空形式的。在本发明的具体实例中，如未特别说明，抗凝管的制备方法均照此进行。

实施例2：抗凝液的配制

抗凝液配方：氟化钠40mg/mL、乙二胺四乙酸二钾35mg/mL、草酸80mg/mL、水加至全量。

抗凝液和抗凝管的制备照实施例1的方法进行。

实施例3：抗凝液的配制

抗凝液配方：氟化钠60mg/mL、乙二胺四乙酸二钾25mg/mL、草酸120mg/mL、水加至全量。

抗凝液和抗凝管的制备照实施例1的方法进行。

实施例4：抗凝液的配制

抗凝液配方：氟化钠30mg/mL、乙二胺四乙酸二钾40mg/mL、草酸60mg/mL、水加至全量。

抗凝液和抗凝管的制备照实施例1的方法进行。

实施例5：抗凝液的配制

抗凝液配方：氟化钠80mg/mL、乙二胺四乙酸二钾20mg/mL、草酸150mg/mL、水加至全量。

抗凝液和抗凝管的制备照实施例1的方法进行。

实施例6：抗凝液的配制

分别参照实施例1～3的配方和制法，不同的是随氟化钠等物质一起还额外添加精氨酸使其在抗凝液中的浓度分别为7.5mg/mL、5mg/mL、10mg/mL，得到三种抗凝液和抗凝管。

实施例7：抗凝液的配制

分别参照实施例1～3的配方和制法，不同的是随氟化钠等物质一起还额外添加氯化钙使其在抗凝液中的浓度分别为4mg/mL、3mg/mL、2mg/mL，得到三种抗凝液和抗凝管。

实施例8：抗凝液的配制

分别参照实施例1～3的配方和制法，不同的是随氟化钠等物质一起还额外添加精氨酸和氯化钙使其在抗凝液中的浓度分别为(精氨酸:氯化钙)7.5mg/mL:4mg/mL、5mg/mL:3mg/mL、10mg/mL:2mg/mL，得到三种抗凝液和抗凝管。

实施例9：抗凝液的配制

参照CN 105193427 A的记载，参考本发明实施例1的方法制备抗凝液和抗凝管(抗凝液在抗凝管中不干燥并呈混合液状态)，使得在用于抗凝时每毫升血液中含氟化钠3mg和草酸钾2mg的量。

实施例10：抗凝液

一种从市售途径获得的呈液体状态的氟化钠-草酸钾抗凝液(这种体系的抗凝液可以从众多途径获得，例如本实例例使用的是永康医药的弘鹊

一次性使用人体静脉血样采集容器(冀食药监械(准)官 2014第2410010号)，其每管内含氟化钠-草酸钾抗凝液5ml)，使此市售抗凝液照参考本发明实施例1 的方法制备抗凝管(抗凝液在抗凝管中不干燥并呈混合液状态)，使得在用于抗凝时每0.1ml抗凝剂与 2.5ml血混合。

试验例1：抗凝能力的考察

向抗凝管中添加新鲜家兔心脏血液(血液与抗凝液的体积比为2ml:0.1ml)，缓缓上下颠倒3次使血液与抗凝液混匀，于室温处静置30min，观察是否凝血；每种抗凝液试验三次。结果：实施例7出现凝血，实施例1～6以及实施例8～10均未见凝血，表明氯化钙可能会引起实施例1～5抗凝液抗凝功能的丧失，但是通过添加精氨酸可以克服氯化钙的这一缺陷。全部试验均未见溶血。另外取健康志愿者全血1ml分别与0.05ml的各种抗凝液混合进行一次验证试验，显示与上述兔血试验结果完全相同。

试验例2：阿司匹林及其代谢物水杨酸的测定方法

1、血样处理方法

将取自服用阿司匹林的志愿受试者(体重50～60kg，口服阿司匹林片500mg，于口服后2小时取静脉血)的静脉血与抗凝液混合(1ml:0.05ml)，接着立即在5分钟内高速离心以分离出血浆，将血浆于-24～ -20℃条件下冷冻保存，直至进行色谱测定。

2：色谱测定的供试品处理

取步骤1冷冻保存的血浆，于0～4℃条件下融化，或者于20～24℃条件下融化，然后参照赵坤文献(赵坤，等，超高效液相色谱法测定阿司匹林和水杨酸的血药浓度，中国医院药学杂志，2017， 37(3):207)之“1.4血浆样品预处理”的方法处理血浆，得到待进行色谱检测的供试品。

3：色谱测定

对于血液中的阿司匹林及其代谢物水杨酸的方法有诸多文献报道(包括对含有阿司匹林的血液进行处理的方法亦如此)，本发明参照上述赵坤文献之“1.材料和方法”部分记载的方法进行色谱测定，方法学验证按照生物样品定量分析指导原则以及相关文献进行，包括：选择性、标准曲线、最低定量下限、残留效应、准确度、精密度、回收率、稳定性；方法学验证与赵坤文献结果吻合。

试验例3：不同血样处理阶段的乙酰水杨酸和水杨酸的测定

(0)试验例2之步骤1中，新鲜采集的全血与不同抗凝液混合后立即离心分离出血浆，然后立即照试验例2相应方法步骤测定其中的乙酰水杨酸和水杨酸含量，同一样品的两种物质含量分别记为Y0 和S0(即条件0，也就是0时的乙酰水杨酸含量和水杨酸含量)，同一样品中的两种物质含量之和即总量记为YS0。在本发明中，试验用新鲜采集的全血经快速测定其中的乙酰水杨酸绝对浓度均在 0.46～0.93μg/ml范围内；而水杨酸绝对浓度均在乙酰水杨酸绝对浓度的1/36～1/28范围内。

(1)试验例2之步骤1和步骤2中，血浆于-24～-20℃冷冻保存7天后于0～4℃条件下融化，融化后立即照试验例2相应方法步骤测定其中的乙酰水杨酸和水杨酸含量，同一样品的两种物质含量分别记为Y1和S1(即条件1的乙酰水杨酸含量和水杨酸含量)，同一样品中的两种物质含量之和即总量记为YS1。

(2)试验例2之步骤1和步骤2中，血浆于-24～-20℃冷冻保存7天后于20～24℃条件下融化，融化后立即照试验例2相应方法步骤测定其中的乙酰水杨酸和水杨酸含量，同一样品的两种物质含量分别记为Y2和S2(即条件2的乙酰水杨酸含量和水杨酸含量)，同一样品中的两种物质含量之和即总量记为YS2。

(3)试验例2之步骤1和步骤2中，血浆于-24～-20℃冷冻保存7天后于0～4℃条件下融化，融化后继续置0～4℃温度下放置6小时，然后立即照试验例2相应方法步骤测定其中的乙酰水杨酸和水杨酸含量，同一样品的两种物质含量分别记为Y3和S3(即条件3的乙酰水杨酸含量和水杨酸含量)，同一样品中的两种物质含量之和即总量记为YS3。

(4)试验例2之步骤1和步骤2中，血浆于-24～-20℃冷冻保存7天后于20～24℃条件下融化，融化后继续置20～24℃温度下放置6小时，然后立即照试验例2相应方法步骤测定其中的乙酰水杨酸和水杨酸含量，同一样品的两种物质含量分别记为Y4和S4(即条件4的乙酰水杨酸含量和水杨酸含量)，同一样品中的两种物质含量之和即总量记为YS4。

两种物质含量之和的变化率计算：对于某血样采用某抗凝液处理，然后分别以上述条件0～条件4 处置，得到的两种物质含量之和，以YS0为100％，计算条件1～条件4的(该血样该抗凝液处理后)两种物质总量相对百分含量；结果：血液分别使用实施例1～实施例9的全部抗凝液以条件1～条件4处置后，两种物质总量相对百分含量均在98～102％范围内，例如血液使用实施例1抗凝液以条件4处置后两种物质总量相对百分含量为100.7％；这一结果表明，血(浆)中的原形药物乙酰水杨酸与其代谢物水杨酸之间存在质量恒定的关系；基于此结果，并且鉴于各阶段各条件下的样品中仍然主要以原形药物乙酰水杨酸存在、并且亦以原形药物乙酰水杨酸形式发挥生理功能，因此，对于各试样在用不同条件处理后的物质变化，均以原形药物乙酰水杨酸为考察标志。

乙酰水杨酸相对含量的计算：对于某血样采用不同抗凝液处理，然后分别以上述条件0～条件4处置，得到乙酰水杨酸含量，以Y0为100％，计算条件1～条件4的乙酰水杨酸相对百分含量。结果如下表a：

表a

例如，上表中，(a)以实施例1所得抗凝剂用条件1～条件4方式处理时的乙酰水杨酸相对百分含量分别为93.6％、85.7％、81.2％、66.4％；

又例如，上表中，(b)以实施例6参照实施例1所得抗凝剂用条件1～条件4方式处理时的乙酰水杨酸相对百分含量分别为93.2％、88.4％、80.5％、65.7％；

又例如，上表中，(c)以实施例7参照实施例3所得抗凝剂用条件1～条件4方式处理时的乙酰水杨酸相对百分含量分别为96.5％、97.7％、96.8％、95.3％；

又例如，上表中，(d)以实施例8参照实施例2所得抗凝剂用条件1～条件4方式处理时的乙酰水杨酸相对百分含量分别为98.8％、98.4％、99.4％、98.7％。

从上述结果可见，不同抗凝剂处理血液后其中乙酰水杨酸的稳定性差异非常明显，实施例1～5抗凝剂处理的血液中乙酰水杨酸明显稳定性不足，实施例6即使额外添加精氨酸亦不能有效提高乙酰水杨酸的稳定性；出人意料的发现当添加微量氯化钙后可以显著地提高乙酰水杨酸的稳定性，即使是在常温下融化并且常温放置6小时后仍然保持优良稳定性。因此，在本发明任一方面的任一实施方案中，所述抗凝液中还包含5～10mg/mL精氨酸；在本发明任一方面的任一实施方案中，所述抗凝液中还包含 2～4mg/mL氯化钙。在本发明任一方面的任一实施方案中，所述抗凝液中还包含5～10mg/mL精氨酸和 2～4mg/mL氯化钙。在本发明任一方面的任一实施方案中，所述抗凝液在配制时精氨酸和/或氯化钙是与其余固体物料一起添加的。

赵坤文献之表4记载了血浆样本：室温2h、预处理后室温6h、进样器24h、冻融3次、冷冻31d 五种条件下ASP理论值与测定值之间的差异，包括RE和RSD两个参数，此两个参数与本发明以上表a中的乙酰水杨酸相对百分含量不具可比性。原因在于，一方面，这两个参数是用于方法学验证的参数，即RE是相对误差，其表示绝对误差与真实值之比，而RSD即相对标准偏差为偏差与平均值之比，两个参数涉及的术语“稳定性”均是指方法学稳定性，与本发明乙酰水杨酸在血浆中的降解无关。另一方面，赵坤文献之表4记载的数据是空白血浆额外添加ASP或SA后，再经其中1.4节的高氯酸处理，然后再进行上述表4所涉及结果的测定，即赵坤文献之表4数据中ASP与空白血浆接触后立即经高氯酸处理；而本发明以上表a数据是反映药物存在于血浆中经历各种条件后的稳定性(各组试验在采用高氯酸处理后的过程基本相同，即此高氯酸处理后的阶段对稳定性的影响在各组是相同的)。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (18)

1.一种抗凝液，其中包含20~100mg/mL氟化钠、10~50mg/mL乙二胺四乙酸二钾、50~200mg/mL草酸、5~10mg/mL精氨酸、2~4mg/mL氯化钙和水。

2.根据权利要求1的抗凝液，其中所述氟化钠的浓度为30~80mg/mL。

3.根据权利要求1的抗凝液，其中所述氟化钠的浓度为40~60mg/mL。

4.根据权利要求1的抗凝液，其中所述乙二胺四乙酸二钾的浓度为20~40mg/mL。

5.根据权利要求1的抗凝液，其中所述乙二胺四乙酸二钾的浓度为25~35mg/mL。

6.根据权利要求1的抗凝液，其中所述草酸的浓度为60~150mg/mL。

7.根据权利要求1的抗凝液，其中所述草酸的浓度为80~120mg/mL。

8.根据权利要求1的抗凝液，其是照如下方法制备得到的：精密称取各固体物料，加适量水使溶解，补加水至全量，混合均匀，经0.45µm微孔滤膜过滤，即得。

9.根据权利要求1的抗凝液，其中用于配制所述抗凝液的水是重蒸水。

10.根据权利要求1的抗凝液，其用于处理包含阿司匹林的待检测的生物样品；或者，其是作为包含阿司匹林的生物样品的抗凝液。

11.根据权利要求1的抗凝液，所述生物样品选自：全血、血清、血浆。

12.一种用于生物样品抗凝的抗凝管，其包括管体以及密封于该管体内的抗凝液；所述抗凝液如权利要求1-11任一项所述。

13.根据权利要求12的抗凝管，所述生物样品选自：全血、血清、血浆。

14.根据权利要求12的抗凝管，其容纳生物样品的标示体积与抗凝液的体积二者之比为15~30：1。

15.根据权利要求12的抗凝管，其容纳生物样品的标示体积与抗凝液的体积二者之比为15~25：1。

16.根据权利要求12的抗凝管，其是照如下方法制备得到的：提供所述抗凝液，提供所述管体，向所述管体内添加规定量的抗凝液，密封即得。

17.根据权利要求12的抗凝管，其是采血管。

18.测定生物样品中的阿司匹林含量的方法，该方法包括使权利要求1-11任一项所述抗凝液与包含阿司匹林的生物样品混合，接着测定该生物样品中的阿司匹林含量的步骤。