CN111202006A - 一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法 - Google Patents

一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111202006A
CN111202006A CN202010293383.1A CN202010293383A CN111202006A CN 111202006 A CN111202006 A CN 111202006A CN 202010293383 A CN202010293383 A CN 202010293383A CN 111202006 A CN111202006 A CN 111202006A
Authority
CN
China
Prior art keywords
callus
differentiation
proliferation
pinellia ternata
tubers
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010293383.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111202006B (zh
Inventor
石云平
许娟
韦绍龙
林茜
苏祖祥
李小泉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangxi Zhuang Nationality Autonomous Region Academy of Agricultural Sciences
Original Assignee
Guangxi Zhuang Nationality Autonomous Region Academy of Agricultural Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangxi Zhuang Nationality Autonomous Region Academy of Agricultural Sciences filed Critical Guangxi Zhuang Nationality Autonomous Region Academy of Agricultural Sciences
Priority to CN202010293383.1A priority Critical patent/CN111202006B/zh
Publication of CN111202006A publication Critical patent/CN111202006A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111202006B publication Critical patent/CN111202006B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法，以半夏无菌苗的叶片诱导出的愈伤组织为材料，接入愈伤组织增殖与分化培养基中，应用6‑BA、TDZ、S3307、IAA和NAA植物生长调节剂和浓度不同组合配制成的培养基，将半夏愈伤组织直接诱导出块茎。这几种植物生长调节剂配合使用，不仅有利于半夏愈伤组织增殖，还能提高半夏诱导小块茎的分化率。该方法具有操作简单、成本低、分化率高、重复性好以及安全高效等优点。

Description

一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体是一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法。
背景技术
中药半夏为天南星科半夏属半夏Pinelliaternata(Thunb.)Breit. 植物干燥的块茎，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结等功效，内治湿痰寒痰、咳喘痰多、痰饮眩悸、风痰眩晕、痰厥头痛、呕吐反胃、胸脘痞闷、梅核气等症，外治痈肿痰核等症。
近年来，随着人们生活水平提高，半夏常用于人们日常保健当中，增强体质。随着半夏应用范围不断扩大，市场需求量不断增加，价格呈逐年上升趋势，从几元/kg上扬到150元/kg。农户对半夏种植热情很高，且规模不断扩大，种苗需求也在不断增加。目前半夏种苗繁育仍以块茎作为种茎繁殖为主，买大留小，长期的无性繁殖使得种茎中的病毒逐年积累,导致种性退化，生产中常出现易感病和易倒伏等问题, 严重制约了半夏规模化种植。由于半夏块茎既作为药用部位入药，又作为种苗繁殖用的种茎，且半夏的种茎需求量非常大，进一步加剧了半夏的供需矛盾。
植物组培快繁技术不仅能提纯复壮，还可不受外界因素影响快速生产大量种苗等，在无性繁殖种苗的作物中广泛应用。虽然许多科研工作者开展了半夏组培快繁技术研究，但由于未能获得突破性进展，导致半夏组培苗的成本过高，还未见推广应用。由于半夏块茎种苗具有成活率高、生长快等优点而备受种植户的青睐，也是半夏目前最常用的种苗繁育方式。
发明内容
本发明提供一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法，包括以下步骤：
（1）在超净工作台上，半夏愈伤组织为淡青色致密瘤状组织，将该愈伤组织切分成0.2cm×0.2 cm的小块，接入增殖与分化培养基中培养10 d左右，愈伤组织开始生长，愈伤组织细胞团不断长大，表面开始有尖状的突起，30 d时统计增殖系数为1.9～4.2；
所述增殖与分化培养基为：MS+6-BA 0.2～1.0 mg/L+ TDZ0.1～1.0 mg/L+ NAA0.1～0.5 mg/L +蔗糖25 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
（2）在超净工作台上，将步骤（1）得到愈伤组织切分成小块，大小约为0.3 cm×0.3 cm，接入分化培养基中培养10～15 d，愈伤组织表面上的突起增多，已有的小突起长成小块茎；之后的愈伤组织培养中，小突起不断长成小块茎，小块茎不断长大，40 d统计愈伤组织分化率为51.8%～100%；
Figure 173596DEST_PATH_IMAGE002
；
所述分化培养基为：MS +6-BA0.5～2.0 mg/L+TDZ0.05～0.5 mg/L+IAA0.1～1.0 mg/LS33070.001～0.02 mg/L +10%椰子汁+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；6-BA、TDZ、 S3307和IAA共同作用促进小块茎诱导和生长，椰子汁含有大量植物蛋白以及丰富氨基酸、维生素和锌、钙、铁等微量元素，也有利于小块茎形成和生长；
所述愈伤组织增殖与分化、分化培养阶段的培养条件是：培养温度为25±3℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000 Lx。
步骤（1）所述增殖与分化培养基优选为：MS+6-BA 0.5 mg/L+ TDZ0.5 mg/L+NAA0.3 mg/L +蔗糖25 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0。步骤（2）所述分化培养基优选为：MS +6-BA1.0 mg/L+TDZ0.3 mg/L+IAA0.5 mg/L S33070.01 mg/L +10%椰子汁+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
所述培养基中，MS为基本培养基， 6-BA为苄氨基嘌呤，TDZ为噻重氮苯基脲，IAA 为3-吲哚乙酸，NAA为a-萘乙酸，S3307为烯效唑，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
本发明方法，通过植物组织培养技术诱导出愈伤组织，利用愈伤组织可分化成不同形态和功能细胞的这一特性，将愈伤组织细胞诱导分化出小块茎，小块茎可在大棚苗床的基质上进行育苗，直接省掉了半夏组培快繁技术通过愈伤组织诱导还将继续进行的芽诱导、芽增殖、壮芽、生根结块茎等环节，节约了近3/4的培养时间和培养成本，从而大大减少种苗培育成本支出，为半夏组培苗应用提供简单快捷技术。
不同方式获得块茎的参数对比表：
Figure 825157DEST_PATH_IMAGE004
。
本发明利用半夏愈伤组织可分化出各种器官和组织可能性，研究出一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法。以半夏无菌苗的叶片诱导出的愈伤组织为材料，通过植物生长调节剂（6-BA、TDZ、 S3307、IAA和NAA）共同作用诱导出块茎，6-BA 具有促进细胞分裂和增大增肥作用，TDZ具有促进黄青色致密型瘤状愈伤组织形成的作用和诱导离体体细胞胚胎发生，S3307可通过改变植株内源激素含量促使植物或组织的生理特性、形态指标产生变化，IAA、NAA等生长素主要是促进细胞的分裂，改变植物体内的营养物质分配，在生长素分布较丰富的部分，得到的营养物质就多，形成分配中心。6-BA 、TDZ、IAA和NAA不同浓度配合使用，不仅有利半夏于愈伤组织增殖，还能提高半夏诱导分化小块茎的分化率。该方法具有操作简单、节约成本、分化率高、重复性好以及安全高效等优点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明内容作进一步的说明，但不是对本发明的限定。
实施例1
一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法，包括以下步骤：
（1）在超净工作台上，将半夏淡青色致密瘤状愈伤组织取出，把愈伤组织切分成0.2 cm×0.2 cm的小块，接入增殖与分化培养基中培养10 d左右，愈伤组织开始生长，愈伤组织细胞团不断长大，表面开始有尖状的突起，30 d时统计增殖系数为1.9；
所述增殖与分化培养基为：MS+6-BA 0.2 mg/L+ TDZ0.1 mg/L+ NAA0.1 mg/L +蔗糖25g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
（2）在超净工作台上，将步骤（1）得到愈伤组织切分成小块，大小约为0.3 cm×0.3 cm，接入分化培养基中培养15 d，愈伤组织表面上的突起增多，已有的小突起长成小块茎；之后的愈伤组织培养过程中，小突起不断长成小块茎，小块茎不断长大，40 d统计愈伤组织分化率为51.8%；
所述半夏愈伤组织分化培养基为：MS +6-BA0.5 mg/L+TDZ0.05 mg/L+IAA0.1 mg/L +S33070.001 mg/L +10%椰子汁+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
所述愈伤组织增殖与分化、分化培养阶段的培养条件是：培养温度为25±3℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000 Lx。
实施例2
一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法，包括以下步骤：
（1）在超净工作台上，将半夏淡青色致密瘤状愈伤组织取出，把愈伤组织切分成0.2 cm×0.2 cm的小块，接入增殖与分化培养基中培养10 d左右，愈伤组织开始生长，愈伤组织细胞团不断长大，表面开始有尖状的突起，30 d时统计增殖系数为3.4；
所述半夏愈伤组织增殖与分化培养基为：MS+6-BA 1.0 mg/L+ TDZ1.0 mg/L+ NAA0.5mg/L +蔗糖25 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
（2）在超净工作台上，将步骤（1）得到愈伤组织切分成小块，大小约为0.3 cm×0.3 cm，接入分化培养基中培养10 d，愈伤组织表面上的突起增多，已有的小突起长成小块茎，小突起不断长成小块茎，小块茎不断长大，40 d统计愈伤组织分化率为93.6%；
所述半夏愈伤组织分化培养基为：MS +6-BA2.0 mg/L+TDZ0.5 mg/L+IAA1.0 mg/L +S33070.02 mg/L +10%椰子汁+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
所述愈伤组织增殖与分化、分化培养阶段的培养条件是：培养温度为25±3℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000 Lx。
实施例3
一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法，包括以下步骤：
（1）在超净工作台上，将半夏淡青色致密瘤状愈伤组织取出，把愈伤组织切分成0.2 cm×0.2 cm的小块，接入增殖与分化培养基中培养10 d左右，愈伤组织开始生长，愈伤组织细胞团不断长大，表面开始有尖状的突起，30 d时统计增殖系数为4.2；
所述半夏愈伤组织增殖与分化培养基为：MS+6-BA 0.5 mg/L+ TDZ0.5 mg/L+ NAA0.3mg/L +蔗糖25 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
（2）在超净工作台上，将步骤（1）得到愈伤组织切分成小块，大小约为0.3 cm×0.3 cm，接入分化培养基中培养12 d，愈伤组织表面上的突起增多，已有的小突起长成小块茎，之后的愈伤组织培养过程中，小突起不断长成小块茎，小块茎不断长大，40 d统计愈伤组织分化率为100%；
所述半夏愈伤组织分化培养基为：MS +6-BA1.0 mg/L+TDZ0.3 mg/L+IAA0.5 mg/L +S33070.01 mg/L +10%椰子汁+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
所述愈伤组织增殖与分化、分化培养阶段的培养条件是：培养温度为25±3℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000 Lx。

Claims (3)

1.一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）在超净工作台上，将无菌瓶中的半夏愈伤组织取出，把该愈伤组织切分成0.2 cm×0.2 cm的小块，接入增殖与分化培养基中培养，愈伤组织开始生长，愈伤组织细胞团不断增大，表面出现小突起，统计增殖系数为1.9～4.2；
所述增殖与分化培养基为：MS+6-BA 0.2～1.0 mg/L+ TDZ0.1～1.0 mg/L+ NAA0.1～0.5 mg/L +蔗糖25 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
（2）在超净工作台上，将步骤（1）得到愈伤组织切分成0.3 cm×0.3 cm的小块，接入分化培养基中培养，愈伤组织表面上的突起增多，不断长大，长成小块茎，统计愈伤组织分化率为51.8%～100%；
所述分化培养基为：MS +6-BA0.5～2.0 mg/L+TDZ0.05～0.5 mg/L+IAA0.1～1.0 mg/L+ S33070.001～0.02 mg/L +10%椰子汁+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
所述愈伤组织增殖与分化、分化培养阶段的培养条件是：培养温度为25±3℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000 Lx。
2.根据权利要求1所述的以半夏叶片诱导珠芽的方法，其特征在于：步骤（1）所述增殖与分化培养基为：MS+6-BA 0.5 mg/L+ TDZ0.5 mg/L+ NAA0.3 mg/L +蔗糖25 g/L+琼脂5g/L，pH值为6.0。
3.根据权利要求1所述的以半夏叶片诱导珠芽的方法，其特征在于：步骤（2）所述分化培养基为：MS +6-BA1.0 mg/L+TDZ0.3 mg/L+IAA0.5 mg/L +10%椰子汁+蔗糖30 g/L+琼脂5g/L，pH值为6.0。
CN202010293383.1A 2020-04-15 2020-04-15 一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法 Active CN111202006B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010293383.1A CN111202006B (zh) 2020-04-15 2020-04-15 一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010293383.1A CN111202006B (zh) 2020-04-15 2020-04-15 一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111202006A true CN111202006A (zh) 2020-05-29
CN111202006B CN111202006B (zh) 2021-09-14

Family

ID=70781923

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010293383.1A Active CN111202006B (zh) 2020-04-15 2020-04-15 一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111202006B (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101720670A (zh) * 2009-12-17 2010-06-09 昆明理工大学 旱半夏组织培养快速繁殖方法
CN102150624A (zh) * 2011-04-29 2011-08-17 南京工业大学 半夏属植物的组培快繁方法
CN105660392A (zh) * 2016-01-08 2016-06-15 云南中医学院 一种半夏块茎的试管培养方法
CN108739383A (zh) * 2018-05-30 2018-11-06 甘肃源宜生物科技有限公司 一种半夏组织培养快速繁殖方法
CN109380227A (zh) * 2018-12-12 2019-02-26 四川国光农化股份有限公司 一种用于促进植物块根块茎生长的组合物、制剂及其应用
CN109757373A (zh) * 2019-01-11 2019-05-17 长江大学 一种荆半夏组织培养快速繁殖方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101720670A (zh) * 2009-12-17 2010-06-09 昆明理工大学 旱半夏组织培养快速繁殖方法
CN102150624A (zh) * 2011-04-29 2011-08-17 南京工业大学 半夏属植物的组培快繁方法
CN105660392A (zh) * 2016-01-08 2016-06-15 云南中医学院 一种半夏块茎的试管培养方法
CN108739383A (zh) * 2018-05-30 2018-11-06 甘肃源宜生物科技有限公司 一种半夏组织培养快速繁殖方法
CN109380227A (zh) * 2018-12-12 2019-02-26 四川国光农化股份有限公司 一种用于促进植物块根块茎生长的组合物、制剂及其应用
CN109757373A (zh) * 2019-01-11 2019-05-17 长江大学 一种荆半夏组织培养快速繁殖方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SATISH MANOHAR NALAWADE等: "In vitro propagation of some important chinese medicinal plants and their sustainable usage", 《IN VITRO CELLULAR ＆ DEVELOPMENTAL BIOLOGY-PLANT》 *
孙燕等: "泰半夏小块茎的诱导及工厂化育苗研究", 《江苏农业科学》 *
苏新: "半夏愈伤组织的诱导和植株再生的研究", 《中国中药杂志》 *
范美华等: "半夏愈伤组织的诱导及增殖效应", 《山东中医杂志》 *
陈美霞等: "《植物组织培养》", 31 August 2012, 华中科技大学出版社 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111202006B (zh) 2021-09-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101983557B (zh) 檀香种胚苗茎段的离体快速繁殖方法
CN111820130B (zh) 一种基于led节能光源的马铃薯试管薯诱导方法
CN107318616A (zh) 一种葡萄的无土扦插育苗方法
CN113080061A (zh) 一种斑兰栽培方法
CN101810144B (zh) 瓜叶菊的快速繁殖方法
CN101874472A (zh) 一种火龙果的组织培养方法
CN109302985B (zh) 子莲的体外幼胚诱导和植株再生的方法
CN105123521B (zh) 一种金银花直接体胚发生和植株再生的培养基及方法
CN108739380B (zh) 一种白及组培苗一次性成苗的方法
CN108812266B (zh) 一种降低水培生菜硝酸盐含量的方法
CN112715367B (zh) 一种利用硝酸镧进行毛梾组培继代增殖的方法
CN111226798B (zh) 一种以半夏叶片诱导珠芽的方法
CN111202006B (zh) 一种以半夏愈伤组织诱导块茎的方法
CN107549018A (zh) 蕲艾组培育苗方法
CN111758575A (zh) 一种葡萄花药胚性愈伤组织分化培养基
CN112154919B (zh) 一种诱导七叶一枝花愈伤组织直接成苗的培养基及方法
CN102440184A (zh) 利用生物反应器快速膨大培养百合脱毒籽球的方法
CN103155864A (zh) 一种西葫芦离体快速繁殖的方法
CN112106665A (zh) 一种花磨芋一步成苗的培养基及应用和组培方法
CN104381132B (zh) 奇异核桃乌拉克组培苗瓶内的生根方法
CN103250643B (zh) 一种唐古特白刺无性系离体生根培养方法
CN101803575B (zh) 菊芋组织培养的方法及其专用培养基
CN101024821A (zh) 橡胶树胚性组织长期继代增殖方法
CN115956503B (zh) 一种大别山冬青胚性悬浮系建立与植株再生的方法
CN116171863B (zh) 一种蝴蝶花高效再生的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Application publication date: 20200529

Assignee: Guangxi Nanning Nongxinda Agricultural Technology Co.,Ltd.

Assignor: GUANGXI ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES

Contract record no.: X2023980046041

Denomination of invention: A Method of Inducing Tubers from Pinellia ternata Callus

Granted publication date: 20210914

License type: Common License

Record date: 20231108