CN111170975B - 抗生素lobophorin及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了抗生素lobophorin H1‑H8和lobophorin H12‑H14及其制备方法和应用。本发明构建了重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560和重组突变菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561，并从它们的发酵培养物分离出具有抗菌和抗肿瘤活性的lobophorin H1‑H8(1‑8)和lobophorin H12‑H14(12‑14)，可以作为抗菌、抗肿瘤化合物的先导化合物。

Description

抗生素lobophorin及其制备方法和应用
技术领域：
本发明属于工业微生物领域，具体涉及新的抗生素lobophorin H1-H8(1-8)和lobophorin H12-H14(12-14)及其制备方法和应用。
背景技术：
lobophorins是一类螺环类化合物，这一家族的化合物结构多样，具有抗菌、抗肿瘤、抗炎症等多种生物活性。Lobophorin H1-H8(1-8)和lobophorin H12-H14(12-14)是具有新颖结构的lobophorins家族化合物。近年来，异源表达在天然产物的发现中被广泛应用。本研究拟通过异源表达lobophorin生物合成基因簇获得更多的结构类似物以研究它们的构效关系。
发明内容：
本发明的第一个目的是提供11个新的螺环类抗生素lobophorin H1-H8(1-8)和lobophorin H12-H14(12-14)。
本发明的11个新的螺环类抗生素lobophorin H1-H8(1-8)和lobophorin H12-H14(12-14)，其结构如式(I)所示：
Figure BDA0002374261840000011
化合物1为lobophorin H1，R1为NH2，R3为OH；化合物2为lobophorin H2，R1为NH2，R3为H；化合物3为lobophorin H3，R1为NO2，R2为NH2，R3为OH；化合物4为lobophorin H4，R1为NO2，R2为NH2，R3为H；化合物5为lobophorin H5，R1为NH2，R2为NH2，R3为OH；化合物6为lobophorin H6，R1为NH2，R2为NH2，R3为H；化合物7为lobophorin H7，R1为NO2，R2为NO2，R3为H；化合物8为lobophorin H8；化合物12为lobophorin H12，R为NO2；化合物13为lobophorinH13，R为NH2；化合物14为lobophorin H14，R为OH。
本发明的第二个目的是提供一种重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560的构建方法，其是将包含lobophorin生物合成基因簇的BAC质粒导入到异源宿主streptomyces coelicolor M1154中得到重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560。
本发明的第三个目的是提供重组突变株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的构建方法，其是将lobophorin生物合成基因簇中的糖基转移酶基因lobG1缺失后的质粒再导入到异源宿主streptomyces coelicolor M1154中得到重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561。
本发明的第四个目的是提供一种制备抗生素lobophorin H1-H8(1-8)和lobophorin H12-H14(12-14)的方法，其特征在于，包括以下步骤：化合物lobophorin H1-H8(1-8)是从重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560的发酵培养物中制备分离得到的，化合物lobophorin H12-H14(12-14)是从重组突变菌株streptomycescoelicolor M1154/pCSG5561的发酵培养物中制备分离得到的。
优选，具体步骤为：
a、分别制备重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560和重组突变菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的发酵培养物，将发酵培养物的发酵液和菌丝体分开；发酵液经大孔树脂吸附，后用丙酮洗脱，减压浓缩回收丙酮，剩余的水相用丁酮萃取，再减压浓缩至干得到浸膏A；菌丝体先用丙酮浸提，减压浓缩回收丙酮，剩余的水相用丁酮萃取，减压浓缩至干得到浸膏B；将浸膏A和浸膏B合并得到粗提物，由此分别得到重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560的粗提物和重组突变菌株streptomycescoelicolor M1154/pCSG5561的粗提物；
将重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560的粗提物经正相硅胶柱层析分离，用氯仿/甲醇梯度洗脱从体积比为1:0、4:1、2:1和0:1梯度洗脱，顺序得到4个馏分Fr.1-Fr.4；将Fr.1和Fr.2两个馏分合并，经Sephdex LH-20凝胶柱分离，以氯仿/甲醇体积比1:1等度洗脱，洗脱馏分经纯化得到化合物lobophorin H7、化合物lobophorin H11、化合物lobophorin H8、化合物lobophorin H5、lobophorin H6、化合物lobophorin H1、化合物lobophorin H10、化合物lobophorin H3、化合物lobophorin H2、化合物lobophorin H4和化合物lobophorin H9；
将重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的粗提物并经正相硅胶柱层析分离，用氯仿/甲醇梯度洗脱从体积比为1:0、4:1、2:1、3:1和0:1梯度洗脱，顺序得到5个馏分Fr.1到Fr.5；将Fr.2-Fr.5合并后，经Sephdex LH-20凝胶柱分离，以氯仿/甲醇体积比1:1等度洗脱，洗脱馏分经纯化得到化合物lobophorin H8、lobophorin H12、lobophorinH14、lobophorin H15和化合物lobophorin H13。
所述的制备重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560和重组突变菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的发酵培养物是将活化的重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560和重组突变菌株streptomyces coelicolorM1154/pCSG5561分别接入种子培养基，28℃，200rpm，培养48h得种子液，将种子液以10％的接种量接入到发酵培养基中，28℃，200rpm，振荡培养120h，而制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方都为每升培养基中含有：大豆粉3g，酵母提取粉3g，海藻糖10g，L-proline 1g，牛肉膏3g，甘油6g，FeSO4·7H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，K2HPO4 0.3g，CaCO3 2g，海盐30g，余量为水，pH 7.2-7.4。
本发明的第五个目的是提供上述螺环类抗生素lobophorin H1-H8(1-8)和lobophorin H12-H14(12-14)中的任一化合物在制备抗菌药物中的应用。
所述的抗菌药物优选为抗Bacillus subtilis、Micrococcus luteus、Staphylococcus aureus、MRSA和/或Pseudomonas aeruginosa的药物。
本发明的第六个目的是提供上述螺环类抗生素lobophorin H1-H8(1-8)和lobophorin H12-H14(12-14)中的任一化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述的抗肿瘤药物优选为抗神经瘤、肝癌、乳腺瘤和或非小细胞肺癌的药物。
本发明构建了重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560和重组突变菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561，并从它们的发酵培养物分离出具有抗菌和抗肿瘤活性的lobophorin H1-H8(1-8)和lobophorin H12-H14(12-14)，可以作为抗菌、抗肿瘤化合物的先导化合物。
本发明的异源表达宿主链霉菌Streptomyces coelicolor M1154公开于文献：蒋程恺,孟思童,张菲,胡晓婧,谢守锋,陶美凤,梁晶丹,康前进,白林泉,邓子新.林可链霉菌NRRL 2936中帕马霉素生物合成基因簇的异源表达及调控基因功能研究[J].微生物学通报,2018,45(2):334-346。链霉菌Streptomyces coelicolor M1154本申请人也持有，保证自20年内向公众提供。
附图说明：
图1是Streptomyces pactum SCSIO 02999中lobophorin生物合成基因簇图；
图2是BAC质粒pCSG5560的末端测序图；
图3是重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560的发酵提取物的高效液相色谱图及化合物1-11的结构；
高效液相色谱(HPLC)条件：色谱柱为Phenomex Kinetex C18,250×4.6mm,5μm，流动相包括A相和B相，流动相A相：10％(体积分数)的乙腈+0.1％(体积分数)的甲酸，溶剂为水，流动B相：90％(体积分数)的乙腈，溶剂为水；进样程序：0-20min，流动相比例为A相/B相(体积比)：95:5-0:100，20-30min，流动相比例为A相/B相(体积比)：0:100，30-31min，流动相比例为A相/B相(体积比)：0:100-95:5，31-35min，流动相比例为A相/B相(体积比)：95:5，检测波长265nm，流速1ml min-1，其中1代表化合物1，2代表化合物2，3代表化合物3，4代表化合物4，5代表化合物5，6代表化合物6，7代表化合物7，8代表化合物8，9表化合物9，10代表化合物10，11代表化合物11。
图4是质粒pCSG5561的构建图；
图5是重组突变株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的发酵提取物的高效液相色谱图及化合物8，12-15的结构；
高效液相色谱(HPLC)条件：色谱柱为Nanologica SveaTM C18,250×4.6mm,5μm，流动相包括A相和B相，流动相A相：10％(体积分数)的乙腈+0.1％(体积分数)的甲酸，溶剂为水，流动B相：90％(体积分数)的乙腈，溶剂为水；进样程序：0-20min，流动相比例为A相/B相(体积比)：95:5-0:100，20-30min，流动相比例为A相/B相(体积比)：0:100，30-31min，流动相比例为A相/B相(体积比)：0:100-95:5，31-35min，流动相比例为A相/B相(体积比)：95:5，检测波长265nm，流速1ml min-1，其中8表化合物8，12代表化合物12，13代表化合物13，14代表化合物14，15代表化合物15。
图6是化合物1的HRESIMS谱图
图7是化合物1的1H-NMR谱图
图8是化合物1的13C-NMR谱图
图9是化合物1的DEPT135谱图
图10是化合物1的COSY谱图
图11是化合物1的HSQC谱图
图12是化合物1的HMBC谱图
图13是化合物2的HRESIMS谱图
图14是化合物2的1H-NMR谱图
图15是化合物2的13C-NMR谱图
图16是化合物2的DEPT135谱图
图17是化合物2的COSY谱图
图18是化合物2的HSQC谱图
图19是化合物2的HMBC谱图
图20是化合物3的HRESIMS谱图
图21是化合物3的1H-NMR谱图
图22是化合物3的13C-NMR谱图
图23是化合物3的DEPT135谱图
图24是化合物3的COSY谱图
图25是化合物3的HSQC谱图
图26是化合物3的HMBC谱图
图27是化合物4的HRESIMS谱图
图28是化合物4的1H-NMR谱图
图29是化合物4的13C-NMR谱图
图30是化合物4的DEPT135谱图
图31是化合物4的COSY谱图
图32是化合物4的HSQC谱图
图33是化合物4的HMBC谱图
图34是化合物5的HRESIMS谱图
图35是化合物5的1H-NMR谱图
图36是化合物5的13C-NMR谱图
图37是化合物5的DEPT135谱图
图38是化合物5的COSY谱图
图39是化合物5的HSQC谱图
图40是化合物5的HMBC谱图
图41是化合物6的HRESIMS谱图
图42是化合物6的1H-NMR谱图
图43是化合物6的13C-NMR谱图
图44是化合物6的DEPT135谱图
图45是化合物6的COSY谱图
图46是化合物6的HSQC谱图
图47是化合物6的HMBC谱图
图48是化合物7的HRESIMS谱图
图49是化合物7的1H-NMR谱图
图50是化合物7的13C-NMR谱图
图51是化合物7的DEPT135谱图
图52是化合物7的COSY谱图
图53是化合物7的HSQC谱图
图54是化合物7的HMBC谱图
图55是化合物8的HRESIMS谱图
图56是化合物8的1H-NMR谱图
图57是化合物8的13C-NMR谱图
图58是化合物8的DEPT135谱图
图59是化合物8的COSY谱图
图60是化合物8的HSQC谱图
图61是化合物8的HMBC谱图
图62是化合物12的HRESIMS谱图
图63是化合物12的1H-NMR谱图
图64是化合物12的13C-NMR谱图
图65是化合物12的DEPT135谱图
图66是化合物12的COSY谱图
图67是化合物12的HSQC谱图
图68是化合物12的HMBC谱图
图69是化合物13的HRESIMS谱图
图70是化合物13的1H-NMR谱图
图71是化合物13的13C-NMR谱图
图72是化合物13的DEPT135谱图
图73是化合物13的COSY谱图
图74是化合物13的HSQC谱图
图75是化合物13的HMBC谱图
图76是化合物14的HRESIMS谱图
图77是化合物14的1H-NMR谱图
图78是化合物14的13C-NMR谱图
图79是化合物14的DEPT135谱图
图80是化合物14的COSY谱图
图81是化合物14的HSQC谱图
图82是化合物14的HMBC谱图
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
1.BAC质粒pCSG5560的筛选
根据lobophorin生物合成基因簇(KC013978.1)的上下游基因lob-orf(1)和totR5设计引物(表1)对Streptomyces pactum SCSIO 02999的BAC文库进行筛选，获得阳性克隆子，对其进行末端测序(图2)，确定该BAC质粒包含了整个lobophorin生物合成基因簇，将其命名为pCSG5560。
2.BAC质粒pCSG5560的异源表达
通过三亲本接合转移的方法将pCSG5560和对照质粒pSET152分别导入到链霉菌Streptomyces coelicolor M1154中，得到重组菌株Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560和Streptomyces coelicolor M1154/pSET152。对比对照组Streptomycescoelicolor M1154/pSET152的发酵检测图，重组菌株Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560中产生了已知的化合物9，10和11，此外，还产生了新化合物1-8(图3)，经HRESIMS、1H、13C、DEPT135、HSQC、HMBC和COSY等数据分析，确认这8个新化合物lobophorin H1(1)(图6-12)、lobophorin H2(2)(图13-19)，lobophorin H3(3)(图20-26)，lobophorin H4(4)(图27-33)，lobophorin H5(5)(图34-40)，lobophorin H6(6)(图41-47)，lobophorin H7(7)(图48-54)和lobophorin H8(8)(图55-61)的结构。
表1.本发明中使用的引物
Figure BDA0002374261840000071
Figure BDA0002374261840000081
本发明成功实现了lobophorin生物合成基因簇在异源宿主Streptomycescoelicolor M1154中的表达，并获得了一系列罕见的新的lobophorin类似物。
3.lobG1缺失突变质粒pCSG5561的构建及异源表达
通过PCR-targeting的方法(敲除所用到的引物如表1所示)在质粒pCSG5560的基础上构建了lobG1基因缺失突变质粒pCSG5561(图4)，将质粒pCSG5561导入异源宿主Streptomyces coelicolor M1154中，与Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560相比，产生了已知化合物15和新化合物8，12-14(图5)。经HRESIMS、1H、13C、DEPT135、HSQC、HMBC和COSY等数据分析，确认这4个新化合物lobophorin H8(8)(图55-61)，lobophorin H12(12)(图62-68)，lobophorin H13(13)(图69-75)和lobophorin H14(14)(图76-82)的结构。
以下进一步提供实施例，这些实施实例有助于理解本发明，仅用作说明而不限
实施例1：重组菌株Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560的构建
依据基因组信息和生物信息学分析，设计引物lob-orf(1)testF/R和totR5testF/R(引物序列如表1所示)，从菌株Streptomyces pactum SCSIO 02999的BAC文库中筛选出克隆子pCSG5560，经末端测序，确认pCSG5560包含lobophorin生物合成基因簇的所有基因。通过三亲本接合转移的方法将pCSG5560导入异源宿主Streptomyces coelicolor M1154中。接合转移过程具体说明如下：放线菌Streptomyces coelicolor M1154在SFM培养基平板中划线培养5-7天，长出的孢子用无菌棉签收集于TSB培养基中，涡旋振荡，使孢子分散。过滤分离菌丝体和孢子，孢子悬浮于5mL的TSB培养基中，50℃热激10min，然后于28℃萌发2h，作为接合转移的受体菌。供体菌E.coli DH 10B/pCSG5560(即是将质粒pCSG5560转入到E.coli DH10B中获得的)在50mL含50μg/mL阿泊拉霉素的LB液体培养基中于37℃生长至OD600值约为0.8。含穿梭质粒的助体菌E.coli ET12567/pUB307在50mL含50μg/mL卡那霉素和50μg/mL的氯霉素的LB液体培养基中于37℃生长至OD600值约为0.8，离心收集两种菌体(4000rpm，10min)，用LB清洗菌体3遍，悬浮于300μL LB培养基中，作为接合转移的供体菌。取上述受体菌400μL和供体菌100μL混合均匀，涂布于不含任何抗生素的ISP4固体培养基上，吹干后，于28℃培养18-20h。然后将平板取出，用含有抗生素的水覆盖平板，抗生素终浓度为50μg/mL阿泊拉霉素和100μg/mL甲氧苄氨嘧啶，吹干后，置于28℃培养箱中，培养5-7天后观察。当接合转移平板上长出菌落后，用无菌牙签将其转接到含有50μg/mL阿泊拉霉素和100μg/mL甲氧苄氨嘧啶的SFM平板上，28℃培养3天后，抽取各个突变株的基因组DNA，利用检测引物lob-orf(1)testF/R和totR5testF/R(表1)通过PCR检测获得阳性克隆，即获得pCSG5560异源表达菌株-Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560。
实施例2：lobG1缺失突变质粒pCSG5561的构建
pCSG5560中lobG1(编码糖基转移酶的基因，genbank登录号：AGI99481.1)通过PCR-targeting的方法被抗性盒aadA和oriT所置换得到lobG1缺失的突变质粒pCSG5561。具体的PCR-targeting方法如下：(1)将质粒pCSG5560转入大肠杆菌E.coli BW25113/pIJ790中获得E.coli BW25113/pIJ790/pCSG5560，用10mmol/L的L-阿拉伯糖诱导λ/red重组系统表达，并将其制备成为化转感受态细胞待用。(2)用内切酶EcoR I和Hind III酶切质粒pIJ778，回收其中约1.4kb含有转移原点和壮观霉素抗性基因的DNA片段，以此作为PCR模板，用引物lobG1-tarF/R通过PCR扩增出1.4kb的PCR产物，50μL的PCR反应体系：高保真DNA聚合酶3U，10×Buffer 5μL，dNTPs 0.5mmol/L，DMSO 2.5μL，引物各0.5μmol/L，DNA模板约1ng，加水补至50μL。PCR反应条件为：预变性94℃5min；扩增循环为94℃变性45s，58℃退火45s，72℃延伸90s，30个循环；最后72℃延伸10min。将1.4kb的PCR产物回收纯化待用。(3)将PCR产物化转入(1)步骤中制备的感受态细胞使其发生重组，涂布于LB筛选平板(含100μg/mL壮观霉素和50μg/mL阿泊拉霉素)上，37℃过夜培养。从平板上挑出阳性单克隆E.coliBW25113/pCSG5561(验证引物lobG1-TF/TR)作为接合转移的供体菌。
实施例3：重组突变菌株粒Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的构建
E.coli BW25113/pCSG5561作为接合转移的供体菌，放线菌Streptomycescoelicolor M1154的孢子作为接合转移的受体菌，通过三亲本接合转移的方法将pCSG5561导入Streptomyces coelicolor M1154得到重组突变株Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561。其接合转移的过程同实施例1中PCSGS5560导入Streptomyces coelicolorM1154的过程一致。
实施例4：lobophorin类化合物的发酵和制备
1、放大发酵培养：
种子培养基的组分为：大豆粉3g，酵母提取粉3g，海藻糖10g，L-proline 1g，牛肉膏3g，甘油6g，FeSO4·7H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，K2HPO4 0.3g，CaCO3 2g，海盐30g，加入到1000ml水中，调pH 7.2-7.4，灭菌制得。发酵培养基和种子培养基相同。
将重组菌株Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560和重组突变株Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561活化后，将孢子接入到种子培养基中，28℃，200rpm，培养48h制得种子液；将种子液以10％的接种量接入到发酵培养基中(14L)，28℃，200rpm，培养120h，而分别制得重组菌株Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560和重组突变株Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的发酵培养物。
2、发酵液的萃取：
发酵培养物先进行离心分离(3500rpm，8min)，得到上清液(发酵液)和菌丝体。发酵液经大孔树脂XAD16固相萃取，后用丙酮洗脱大孔树脂3次，洗脱液回收丙酮后剩余的水混合液用丁酮萃取3次，丁酮层经蒸馏浓缩后得到上清液提取物-浸膏A；菌丝体用2L丙酮在室温下浸提3次，每次3小时，合并提取液，减压回收丙酮后剩余水混合液用6L丁酮萃取，丁酮层减压蒸馏得菌丝体提取物-浸膏B。
3、化合物的分离：
将重组菌株Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560的发酵培养物得到的浸膏A和浸膏B合并经正相硅胶柱层析分离，用氯仿/甲醇梯度洗脱(体积比为1:0、4:1、2:1和0:1)顺序得到4馏分(Fr.1-Fr.4)；将Fr.1和Fr.2两个馏分合并，经Sephdex LH-20凝胶柱(柱子大小120cm×3cm)分离，以氯仿/甲醇1:1等度洗脱，每15mL接收1瓶，根据TLC检测结果，将含有相同Rf值的组分合并得5个亚馏分Fr.1.1-Fr.1.5(其中Fr.1.1由第1-4小瓶合并；Fr.1.2由第5-19小瓶合并；Fr.1.3由第20-26小瓶合并；Fr.1.4由第27-34小瓶合并；Fr.1.5由第35-42小瓶合并)；其中Fr.1.2经硅胶柱层析分离，用环己烷/乙酸乙酯梯度洗脱(体积比为8:1，4:1，2:1和0:1)，最后用甲醇冲洗，得到5个馏分(Fr.1.2.1-Fr.1.2.5)；Fr.1.2.1(环己烷/乙酸乙酯体积比8:1洗脱流份)经半制备HPLC纯化(柱子参数为：Phenomenex Kinetex C18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为90％的乙腈/水，60％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到化合物lobophorin H7(7)(Rt＝25.0min)；Fr.1.2.2(环己烷/乙酸乙酯体积比4:1洗脱流份)经半制备HPLC纯化(柱子参数为：Phenomenex Kinetex C18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为90％的乙腈/水，50％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到化合物lobophorin H11(11)(Rt＝20.0min)；F.1.2.4(环己烷/乙酸乙酯体积比0:1洗脱流份)经半制备HPLC纯化(柱子参数为：Phenomenex Kinetex C18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为90％的乙腈/水，40％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到化合物lobophorin H8(8)(Rt＝20.0min)；馏分Fr.1.2.5(甲醇洗脱流份)经中压反相分离(填料为YMC*GEL ODS-A-HG；12nm S-50μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为100％乙腈；洗脱程序为：0％B-85％，B 0-60min；85％B-100％B，60-80min；100％B，80-100min；流速为20mL min-1，检测波长为265nm)得到9个组分(Fr.1.2.5.1-Fr.1.2.5.9)。
Fr.1.2.5.1(保留时间为30-35min)经半制备HPLC纯化(柱子参数为：PhenomenexKinetex C18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为90％的乙腈/水，40％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到化合物lobophorin H5(5)(Rt＝18.0min)；Fr.1.2.5.2(保留时间为35-45min)经半制备HPLC纯化(柱子参数为：Phenomenex Kinetex C18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为90％的乙腈/水，50％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到化合物lobophorin H6(6)(Rt＝21.0min)和lobophorin H1(1)(Rt＝24.0min)；Fr.1.2.5.4(保留时间为45–52min)经半制备HPLC纯化(柱子参数为：Phenomenex Kinetex C18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为90％的乙腈/水，55％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到化合物lobophorin H3(3)(Rt＝22.0min)、lobophorin H2(2)(Rt＝25.0min)和lobophorin H10(10)(Rt＝30.0min)；Fr.1.2.5.6(保留时间为60–67min)经半制备HPLC纯化(柱子参数为：Phenomenex Kinetex C18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为80％的乙腈/水，60％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到化合物lobophorin H4(4)(Rt＝25.0min)；Fr.1.2.5.8(保留时间为82–90min)经半制备HPLC纯化(柱子参数为：Phenomenex KinetexC18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为90％的乙腈/水，90％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到化合物lobophorin H9(9)(Rt＝27.0min)
将重组突变菌株Streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的发酵培养物得到的浸膏A和浸膏B合并经正相硅胶柱层析分离，用氯仿/甲醇梯度洗脱(体积比为1:0、4:1、2:1、3:1和0:1)顺序得到5个馏分(Fr.1到Fr.5)；将Fr.2-Fr.5合并后，经Sephdex LH-20凝胶柱(柱子大小120cm×3cm)分离，以氯仿/甲醇1:1等度洗脱，每15mL接收1瓶，根据TLC检测结果，将含有相同Rf值的组分合并得到8个馏分(Fr.2.1-Fr.2.8，其中Fr.2.1由第1-5小瓶合并；Fr.2.2由第6-15小瓶合并；Fr.2.3由第16-20小瓶合并；Fr.2.4由第21-25小瓶合并；Fr.2.5由第26-28小瓶合并；Fr.2.6由第29-30小瓶合并；Fr.2.7由第31-32小瓶合并；Fr.2.8由第33-40小瓶合并)；Fr.2.5经半制备HPLC纯化(柱子参数为：Phenomenex KinetexC18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为90％的乙腈/水，40％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到lobophorin H8(8)(Rt＝20.0min)；Fr.2.2-Fr.2.4合并后经正相硅胶柱层析分离，用环己烷/乙酸乙酯进行梯度洗脱(体积比为8:1、4:1、2:1、1:1和0:1)，最后用甲醇进行冲洗，顺序得到6个馏分(Fr.2.2.1到Fr.2.2.6)。F.2.2.2(环己烷/乙酸乙酯体积比为4:1洗脱流份)经半制备HPLC纯化(柱子参数为：Phenomenex Kinetex C18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为90％的乙腈/水，90％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到化合物lobophorin H12(12)(Rt＝15.0min)；F.2.2.4(环己烷/乙酸乙酯体积比为1:1洗脱流份)经半制备HPLC纯化(柱子参数为：Phenomenex Kinetex C18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为90％的乙腈/水，85％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到化合物lobophorin H14(14)(Rt＝18.0min)；Fr.2.2.5(环己烷/乙酸乙酯体积比为0:1洗脱流份)经半制备HPLC纯化(柱子参数为：Phenomenex Kinetex C18，250×4.6mm，5μm；流动相为：A相为水加0.1％的甲酸，B相为90％的乙腈/水，65％的B相等度洗脱，流速为2.5mL·min-1；检测波长为265nm)得到化合物lobophorin H15(15)(Rt＝28.5min)；Fr.2.2.6(甲醇洗脱流份)经半制备TLC(氯仿/甲醇，7.5:1)纯化得到化合物lobophorin H13(13)(Rf值为0.6)。
4、化合物的鉴定：
化合物1-8和化合物12-14的结构经HRESIMS、1H、13C、DEPT135、HSQC、HMBC和COSY鉴定。其核磁数据归属见表2-5，化合物lobophorin H1(1)的谱图见图6-12，lobophorin H2(2)的谱图见图13-19，lobophorin H3(3)的谱图见图20-26，lobophorin H4(4)的谱图见图27-33，lobophorin H5(5)的谱图见图34-40，lobophorin H6(6)的谱图见图41-47，lobophorin H7(7)的谱图见图48-54，lobophorin H8(8)的谱图见图55-61，lobophorinH12(12)的谱图见图62-68，lobophorin H13(13)的谱图见图69-75，lobophorin H14(14)的谱图见图76-82。
由此确定化合物1-8和12-14的结构式如下所示：
Figure BDA0002374261840000131
表2.化合物1-3的NMR(700MHz)核磁数据归属
Figure BDA0002374261840000141
Figure BDA0002374261840000151
表3.化合物4-5的NMR(700MHz)核磁数据归属
Figure BDA0002374261840000161
Figure BDA0002374261840000171
表4.化合物6-8的NMR(700MHz)核磁数据归属
Figure BDA0002374261840000181
Figure BDA0002374261840000191
表5.化合物12-14的NMR(700MHz)核磁数据归属
Figure BDA0002374261840000192
实施例5:化合物1-15及LOB A/B的抗菌活性的测定
采用微量培养基稀释法测定了化合物1-15及LOB A/B对5种指示菌Bacillussubtilis 1064、Micrococcus luteus SCSIO ML01、Staphylococcus aureus ATCC 29213、MRSA shhs-A1(临床样品)和Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853的抑制活性。5种指示菌经摇床37℃，200rmp培养16h，用无菌培养基稀释到OD值(600nm)为0.04-0.06，再稀释10倍加入到96孔板中；加入样品后，等倍稀释到终浓度64-0.125μg mL-1，每个浓度3个平行；37℃培养18h，用酶标仪测定各孔的吸收值，并计算各化合物的最小抑菌浓度(MIC)，抑制率(％)＝(1-(A样品-A样品背景)/(A阴性对照-A空白对照))×100％，抑制率>80％为MIC值。其结果见表6。
表6.化合物1-15的抗菌活性(MIC，μg mL-1)
Figure BDA0002374261840000201
实施例6:lobophorin H1-H7(1-7)及lobophorin H9-H13(9-13)抗肿瘤活性的测定
采用SRB法测定了化合物lobophorin H1-H7(1-7)及lobophorin H9-H13(9-13)对4种肿瘤细胞株SF-268，HepG2，MCF-7和A549的抑制活性。4种肿瘤细胞株采用RPMI培养基培养，将180μL培养物(浓度为3×104个细胞每mL)加入到96孔板中，37℃，5％CO2培养18h；将20μL的待测样品(终浓度为1、10和100μM，溶剂为DMSO)加入到96孔板相应的孔中，用DMSO作为阴性对照，每个浓度做3个平行，继续培养72小时；加入50％的三氯乙酸50μL混合，再加入0.4％的SRB(溶解在1％的乙酸中)放置30分钟；去除上清，将与染料结合的蛋白溶解200μL10 mM的Tris缓冲液中，用酶标仪测定各孔的OD值(570nm)，并计算相应的抑制率；以顺铂作为阳性对照。其结果见表7，结果表明，lobophorin H7(7)及lobophorin H12(12)对4种指示细胞株的IC50(采用SigmaPlot 14.0软件中非线性曲线拟合(non-linear curve-fitting)的方法计算相应的IC50)范围为6.8到14.1μm。
表7.化合物1-7和化合物9-13的细胞毒活性
Figure BDA0002374261840000211

Claims (7)

1.如式（I）所示任一化合物：
Figure 685310DEST_PATH_IMAGE001
式（I）
其中，化合物4为LOB H4，R1为NO2，R2为NH2，R3为H；化合物7为LOB H7，R1为NO2，R2为NO2，R3为H；化合物12为LOB H12，R为NO2；化合物13为LOB H13，R为NH2。
2.一种制备权利要求1中所述的化合物的方法，其特征在于，
分别制备重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560和重组突变菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的发酵培养物，将发酵培养物的发酵液和菌丝体分开；发酵液经大孔树脂吸附，后用丙酮洗脱，减压浓缩回收丙酮，剩余的水相用丁酮萃取，再减压浓缩至干得到浸膏A；菌丝体先用丙酮浸提，减压浓缩回收丙酮，剩余的水相用丁酮萃取，减压浓缩至干得到浸膏B；将浸膏A和浸膏B合并得到粗提物，由此分别得到重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560的粗提物和重组突变菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的粗提物；
将重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560的粗提物经正相硅胶柱层析分离，用氯仿/甲醇梯度洗脱从体积比为1:0、4:1、2:1和0:1梯度洗脱，顺序得到4个馏分Fr.1-Fr.4；将Fr.1和Fr.2两个馏分合并，经Sephdex LH-20凝胶柱分离，以氯仿/甲醇体积比1:1等度洗脱，洗脱馏分经纯化得到化合物LOB H7和化合物LOB H4；
将重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的粗提物并经正相硅胶柱层析分离，用氯仿/甲醇梯度洗脱从体积比为1:0、4:1、2:1、3:1和0:1梯度洗脱，顺序得到5个馏分Fr.1到Fr.5；将Fr.2-Fr.5合并后，经Sephdex LH-20凝胶柱分离，以氯仿/甲醇体积比1:1等度洗脱，洗脱馏分经纯化得到化合物LOB H12和化合物LOB H13；
所述的重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560，其是将包含lobophorin生物合成基因簇的BAC质粒导入到异源宿主streptomyces coelicolor M1154中得到重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560；
所述的重组突变株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的构建方法，其是将lobophorin生物合成基因簇中的糖基转移酶基因lobG1缺失后的质粒再导入到异源宿主streptomyces coelicolor M1154中得到重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的重组菌株streptomyces coelicolor
M1154/pCSG5560和重组突变菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561的发酵培养物是将活化的重组菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5560和重组突变菌株streptomyces coelicolor M1154/pCSG5561分别接入种子培养基，28 °C，200 rpm，培养48h得种子液，将种子液以10%的接种量接入到发酵培养基中，28 °C，200 rpm，振荡培养120h，而制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方都为每升培养基中含有：大豆粉 3 g，酵母提取粉3 g，海藻糖 10 g，L-proline 1g，牛肉膏 3 g，甘油 6 g，FeSO4·7H2O 0.5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO4 0.3 g，CaCO3 2 g，海盐 30 g，余量为水，pH 7.2-7.4。
4.权利要求1中所述的化合物在制备抗菌药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的抗菌药物为抗枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、藤黄微球菌（Micrococcus luteus）、金黃葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）和/或铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的药物。
6.权利要求1中所述的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗神经瘤、肝癌、乳腺瘤和或非小细胞肺癌的药物。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS577479A (en) * 1980-06-14 1982-01-14 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd Tetronolide compound
CN102030791A (zh) * 2010-10-28 2011-04-27 中国科学院南海海洋研究所 四种台勾霉素类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用
CN102304555A (zh) * 2011-09-16 2012-01-04 广东省微生物研究所 抗生素lobophorin A和lobophorin B的制备方法及其应用
CN102321133A (zh) * 2011-06-03 2012-01-18 中国科学院南海海洋研究所 抗生素Lobophorin E和F及其制备方法和在制备抗菌、抗肿瘤药物中的应用
CN103436458A (zh) * 2013-04-24 2013-12-11 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种链霉菌和以链霉菌产生的spiroteteronate类化合物及其制备和应用
CN107699532A (zh) * 2017-08-21 2018-02-16 上海交通大学 3,7‑二羟基卓酚酮高产菌株及其发酵培养方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS577479A (en) * 1980-06-14 1982-01-14 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd Tetronolide compound
CN102030791A (zh) * 2010-10-28 2011-04-27 中国科学院南海海洋研究所 四种台勾霉素类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用
CN102321133A (zh) * 2011-06-03 2012-01-18 中国科学院南海海洋研究所 抗生素Lobophorin E和F及其制备方法和在制备抗菌、抗肿瘤药物中的应用
CN102304555A (zh) * 2011-09-16 2012-01-04 广东省微生物研究所 抗生素lobophorin A和lobophorin B的制备方法及其应用
CN103436458A (zh) * 2013-04-24 2013-12-11 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种链霉菌和以链霉菌产生的spiroteteronate类化合物及其制备和应用
CN107699532A (zh) * 2017-08-21 2018-02-16 上海交通大学 3,7‑二羟基卓酚酮高产菌株及其发酵培养方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Dissecting Glycosylation Steps in Lobophorin Biosynthesis Implies an Iterative Glycosyltransferase;Sumei Li 等;《ORGANIC LETTERS》;20130222;第15卷(第6期);Supporting Information第S12页表S15,第1375页左栏最后1段-第1376页右栏第1段,Supporting Information第S3-S4页 *
New Spirotetronate Antibiotics, Lobophorins H and I, from a South China Sea-Derived Streptomyces sp.12A35;Hua-Qi Pan 等;《marine drugs》;20131015;第11卷;第3891-3901页 *
Sumei Li 等.Dissecting Glycosylation Steps in Lobophorin Biosynthesis Implies an Iterative Glycosyltransferase.《ORGANIC LETTERS》.2013,第15卷(第6期),第1374-1377页. *

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