CN111011482A - 一种保鲜液的制备方法及保鲜液和保鲜方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种保鲜液的制备方法及保鲜液和保鲜方法,解决了现有技术中的泡菜发酵液一般处理后排放掉,存在浪费的技术问题。它包括下述步骤:(1)从泡菜液中分离得到肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌;(2)筛选出抑制能力强的乳酸乳球菌和产粘能力强的肠膜明串珠菌;(3)制备乳酸乳球菌发酵泡菜液和肠膜明串珠菌发酵泡菜液;(4)提取乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液;(5)将乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液以及乳化剂混合后进行均质,形成不分层的乳浊液即为保鲜液。本发明的保鲜液,可以应用于果蔬的保鲜,可以防止果蔬被致病菌、腐败菌污染,延缓果蔬的腐败、变色;是一种天然生物保鲜剂,可提高泡菜液综合利用率。
Description
技术领域
本发明涉及一种保鲜液,具体涉及一种保鲜液的制备方法。
背景技术
泡菜是我国的传统发酵蔬菜制品,以四川泡菜最具代表性,是以乳酸菌为主导进行厌氧发酵而成,富含以乳酸菌主导的有益微生物,泡菜酸爽、开胃,主要是里面含有大量的乳酸、乙酸、乙醇、游离氨基酸和一些抗氧化物质等。
目前有关泡菜中优势乳酸菌的报道比较多,主要包括植物乳杆菌、肠膜明串珠菌、乳酸乳球菌、短乳杆菌、魏斯氏菌等。每种微生物都在泡菜中扮演重要的角色,其中肠膜明串珠菌是异型发酵乳酸菌,不耐酸,能代谢产生乙酸、乳酸、胞外多糖等。其中胞外多糖是一些特殊微生物在生长代谢过程中分泌到细胞壁外、易与菌体分离、分泌到环境中的水溶性多糖,广泛用于各种食品的增稠、稳定、乳化、胶凝及持水。乳酸乳球菌是一种不耐酸的乳酸菌,能代谢产生乳酸、乙酸和乙醇等,能代谢产生细菌素,其中乳酸菌细菌素是一种具有生物活性的蛋白质、多肽,这些蛋白复合物能杀死会抑制环境中的其他微生物。
采后水果品质下降的主要原因是较高的呼吸代谢、乙烯生物合成、水分挥发以及腐烂。水果的机械损伤,环境微生物的污染等,使果蔬产品常出现软化、变色、异味等。目前常用的保鲜技术有臭氧气调保鲜、低剂量辐射预处理保鲜、涂膜保鲜和气调保鲜等,尽管通过控制储藏条件例如降低温度,添加二氧化碳和氮气等可以减少因代谢或微生物污染而引起的损失,但由于保鲜技术不完善等原因,目前年损失近30%。随着人们生活水平的提高,人们对杀虫剂的使用以及在环境和食物中的防腐剂残留的关注,开发安全而高效,不会对环境和人们的健康产生危害的杀细菌剂和杀真菌剂迫在眉睫。
泡菜发酵液一般不能直接食用,常常处理后排放掉,造成巨大的浪费,而泡菜液中的有机酸、细菌素和胞外多糖等可以作为保鲜和防腐等功能,但一直没有受到重视,更没有应用到果蔬保鲜液中。
本申请人发现现有技术至少存在以下技术问题:
现有技术中的泡菜发酵液一般处理后排放掉,存在浪费。
发明内容
本发明的目的在于提供一种保鲜液的制备方法,以解决现有技术中的泡菜发酵液一般处理后排放掉,存在浪费的技术问题。本发明提供的诸多技术方案中的优选技术方案所能产生的诸多技术效果详见下文阐述。
为实现上述目的,本发明提供了以下技术方案:
本发明提供的一种保鲜液的制备方法,包括下述步骤:
(1)从泡菜液中分离得到肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌;
(2)筛选:将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌进行抑菌实验,筛选出抑制能力强的乳酸乳球菌;将步骤(1)分离得到的肠膜明串珠菌进行产粘能力实验,筛选出产粘能力强的肠膜明串珠菌;
(3)应用步骤(2)筛选出的乳酸乳球菌和肠膜明串珠菌分别发酵泡菜,得到乳酸乳球菌发酵泡菜液和肠膜明串珠菌发酵泡菜液;
(4)应用步骤(3)制备出的乳酸乳球菌发酵泡菜液和肠膜明串珠菌发酵泡菜液分别进行乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液的提取;
(5)将步骤(4)提取的乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液以及乳化剂混合后进行均质,形成不分层的乳浊液即为保鲜液。
进一步的,所述步骤(5)中,所述乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液的重量比为1:1-2。
进一步的,所述步骤(5)中,所述乳化剂的加入量为乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液总重量的0.2-1%。
进一步的,所述步骤(1)中,所述泡菜液制备方法为:将新鲜蔬菜和辅料按比例加入到泡菜坛中,再向其中加入无菌盐水搅拌混匀,所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;然后将泡菜坛添加水进行密封,然后将泡菜坛置于12℃-18℃恒温培养箱中发酵8-12d,经菜水分离后,即得泡菜液。
进一步的,所述步骤(1)中,制备泡菜液时,所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.5%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的4%-6%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%-2.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.01%-0.03%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.2%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为1.5-2.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%-3.5%。
进一步的,所述步骤(2)中,
1)将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌进行抑菌实验,筛选出抑制能力强的乳酸乳球菌,具体方法为:
①将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌在M17液体培养基中进行2次活化,培养24h后将OD600nm>0.3的乳酸乳球菌进行抑菌实验;
②采用牛津杯法利用步骤①筛选的OD600nm>0.3的乳酸乳球菌离心后的上清液分别对大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌进行抑制,通过抑菌圈的大小判断乳酸乳球菌对大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌的抑制强弱,筛选抑制能力强的乳酸乳球菌;
2)将步骤(1)分离得到的肠膜明串珠菌进行产粘能力实验,筛选出产粘能力强的肠膜明串珠菌,具体方法为:
①将步骤(1)中分离得到的肠膜明串珠菌进行活化,活化后进行冷冻离心,得菌泥;
②将步骤①得到的菌泥添加到灭菌的牛乳中,牛乳中添加蔗糖,蔗糖的添加量为牛乳重量的6%,菌泥添加控制在107CFU/mL;然后将温度控制在37℃进行恒温发酵,观察酸奶凝固时间,筛选酸奶凝固时间短且酸奶粘稠度高的肠膜明串珠菌。
进一步的,所述步骤(3)中,
1)所述乳酸乳球菌发酵泡菜液的制备方法为:
①准备新鲜蔬菜、辅料和灭菌后的食盐水,将新鲜蔬菜和辅料清洗干净后沥;然后用灭菌后的生理盐水进行清洗去杂菌、沥干;
②将去杂菌后的新鲜蔬菜、辅料以及灭菌后的食盐水添加在灭菌后的泡菜坛中,将步骤(2)筛选出的乳酸乳球菌按0.5×107CFU/mL-1.5×107CFU/mL添加到泡菜中;
③将泡菜坛密封,然后置于12℃-18℃恒温培养箱中发酵8d-12d,当泡菜液pH<4,滴定酸度>0.3g/100mL时,得乳酸乳球菌发酵泡菜液;
其中,所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;其中,所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.5%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的4%-6%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%-2.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.01%-0.03%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.2%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为1.5-2.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%-3.5%。
2)所述肠膜明串珠菌发酵泡菜液的制备方法为:
①准备新鲜蔬菜、辅料和灭菌后的食盐水,将新鲜蔬菜和辅料清洗干净后沥;然后用灭菌后的生理盐水进行清洗去杂菌、沥干;
②将去杂菌后的新鲜蔬菜、辅料以及灭菌后的食盐水添加在灭菌后的泡菜坛中,将步骤(2)筛选的肠膜明串珠菌按0.5×107CFU/mL-1.5×107CFU/mL添加到泡菜中;
③将泡菜坛密封,然后置于12℃-18℃恒温培养箱中发酵8d-12d,当泡菜液pH<4,滴定酸度>0.3g/100mL时,得肠膜明串珠菌发酵泡菜液;
其中,所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;其中,所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.5%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的4%-6%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%-2.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.01%-0.03%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.2%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为1.5-2.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%-3.5%。
进一步的,所述步骤(4)中,
1)所述乳酸乳球菌功能液的提取方法为:
①将乳酸乳球菌发酵泡菜液过滤除去菜渣,然后将泡菜滤液在7000-8000r/min,3℃-5℃下离心8-10min,收集离心后的泡菜上清液;
②在泡菜上清液中加入活性炭进行脱色、脱臭处理;
③将脱色、脱臭处理后的泡菜上清液再次进行过滤、离心处理,收集上清液;在上清液中加入3-4倍体积的95%乙醇进行混匀,混匀后在3℃-5℃放置10h-14h,然后进行冷冻离心,收集离心沉淀即为乳酸乳球菌功能液;
2)所述肠膜明串珠菌功能液的提取方法为:
①将肠膜明串珠菌发酵泡菜液过滤除去菜渣;然后将泡菜滤液进行在7000-8000r/min,3℃-5℃下离心8-10min,收集离心后的泡菜上清液,
②在泡菜上清液中加入活性炭进行脱色、脱臭处理;
③将脱色、脱臭处理后的泡菜上清液再次进行过滤、离心处理,收集上清液;在上清液中加入3-4倍体积的95%乙醇进行混匀,混匀后在3℃-5℃放置10h-14h,然后进行冷冻离心,收集离心沉淀即为肠膜明串珠菌功能液。
本发明提供的一种由上述的保鲜液的制备方法制备出的保鲜液。
本发明提供的一种保鲜方法,应用上述的保鲜液进行果蔬保鲜,具体为:将上述的保鲜液和水按重量比1:30-80进行混匀,以浸泡后沥干的方式对果蔬进行涂层保鲜,浸泡2-8min,然后沥干表面液体、贮藏。
基于上述技术方案,本发明实施例至少可以产生如下技术效果:
(1)本发明提供的保鲜液的制备方法,通过对产粘、抑菌泡菜液的成分进行提取、复配,提供了一种抗菌、抗氧化多功能的保鲜液,可以应用于果蔬的保鲜,可以防止果蔬被致病菌、腐败菌污染,延缓果蔬的腐败、变色;
(2)本发明中的保鲜液是一种天然生物保鲜剂,相比现有的化学防腐剂,该发明的保鲜液对果蔬贮藏的安全性更高;
(3)本发明中的保鲜液及保鲜方法,首次将泡菜液回收利用于果蔬保鲜,提高了泡菜副产物的综合利用能力,提高泡菜液综合利用率,避免了浪费。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实验例中草莓贮藏过程中可溶性固形物含量变化图;
图2是本发明实验例中草莓贮藏过程中VC含量变化图;
图3是本发明实验例中草莓贮藏过程中DPPH清除率变化图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式,都属于本发明所保护的范围。
下述实施例中所使用的M17琼脂培养基,购买于德国ELITE BIOTECH公司;
下述实施例中所使用的M17液体培养基,购买于德国ELITE BIOTECH公司。
实施例1:
制备保鲜液,包括下述步骤:
(1)从泡菜液中分离得到肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌:
1)制备泡菜液:
①将新鲜蔬菜和辅料按比例加入到泡菜坛中,再向其中加入无菌盐水搅拌混匀,所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;制备泡菜液时,所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的1%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的5%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的2%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.02%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的1%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为2:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的3%;
②然后将泡菜坛添加水进行密封,然后将泡菜坛置于15℃恒温培养箱中发酵3天,经菜水分离后,即得泡菜液;
2)从泡菜液中分离肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌:
用M17琼脂培养基将步骤1)中泡菜发酵3d的泡菜液进行乳酸菌的分离,采用平板划线法进行3次纯化,然后将纯化菌株进行16S rDNA分子鉴定,挑选其中的肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌;
(2)筛选:
1)将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌进行抑菌实验,筛选出抑制能力强的乳酸乳球菌,具体方法为:
①将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌在M17液体培养基中进行2次活化,培养24h后将OD600nm>0.3的乳酸乳球菌进行抑菌实验;
②采用牛津杯法利用步骤①筛选的OD600nm>0.3的乳酸乳球菌离心后的上清液分别对大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌进行抑制,通过抑菌圈的大小判断乳酸乳球菌对大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌的抑制强弱,筛选抑制能力强的乳酸乳球菌;
2)将步骤(1)分离得到的肠膜明串珠菌进行产粘能力实验,筛选出产粘能力强的肠膜明串珠菌,具体方法为:
①将步骤(1)中分离得到的肠膜明串珠菌进行活化,活化后进行冷冻离心,冷冻离心是在8000r/min,4℃离心5min,得菌泥;
②将步骤①得到的菌泥添加到灭菌的牛乳中,牛乳中添加蔗糖,蔗糖的添加量为牛乳重量的6%,菌泥添加控制在1×107CFU/mL;然后将温度控制在37℃进行恒温发酵,观察酸奶凝固时间,筛选酸奶凝固时间短且酸奶粘稠度高的肠膜明串珠菌;
(3)应用步骤(2)筛选出的乳酸乳球菌和肠膜明串珠菌分别发酵泡菜,得到乳酸乳球菌发酵泡菜液和肠膜明串珠菌发酵泡菜液;
1)所述乳酸乳球菌发酵泡菜液的制备方法为:
①准备新鲜蔬菜、辅料和灭菌后的食盐水,将新鲜蔬菜和辅料清洗干净后沥;然后用灭菌后的生理盐水进行清洗去杂菌、沥干;其中,
所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的1%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的5%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的2%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.02%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的1%;所述灭菌后的食盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为2:1,且所述灭菌后的食盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的3%;
②将去杂菌后的新鲜蔬菜、辅料以及灭菌后的食盐水添加在灭菌后的泡菜坛中,将步骤(2)筛选出的乳酸乳球菌按1×107CFU/mL添加到泡菜坛中;
③将泡菜坛密封,然后置于15℃恒温培养箱中发酵10d,此时,泡菜液pH为3.5,滴定酸度为0.4g/100mL(满足泡菜液pH<4,滴定酸度>0.3g/100mL),即得乳酸乳球菌发酵泡菜液;
2)所述肠膜明串珠菌发酵泡菜液的制备方法为:
①准备新鲜蔬菜、辅料和灭菌后的食盐水,将新鲜蔬菜和辅料清洗干净后沥;然后用灭菌后的生理盐水进行清洗去杂菌、沥干;其中,所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;其中,所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的1%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的5%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的2%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.02%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的1%;所述灭菌后的食盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为2:1,且所述灭菌后的食盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的3%;
②将去杂菌后的新鲜蔬菜、辅料以及灭菌后的食盐水添加在灭菌后的泡菜坛中,将步骤(2)筛选的肠膜明串珠菌按1×107CFU/mL添加到泡菜中;
③将泡菜坛密封,然后置于15℃恒温培养箱中发酵10d,此时,泡菜液pH为3.5,滴定酸度为0.4g/100mL(满足泡菜液pH<4,滴定酸度>0.3g/100mL),得肠膜明串珠菌发酵泡菜液;
(4)应用步骤(3)制备出的乳酸乳球菌发酵泡菜液和肠膜明串珠菌发酵泡菜液分别进行乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液的提取;
1)所述乳酸乳球菌功能液的提取方法为:
①将乳酸乳球菌发酵泡菜液用80目灭菌尼龙布进行过滤除去菜渣,然后将泡菜滤液在7500r/min,4℃离心9min,收集离心后的泡菜上清液;
②在泡菜上清液中加入活性炭进行脱色、脱臭处理;所述活性炭的加入量为泡菜上清液重量的5%,所述脱色、脱臭处理的时间为135min;
③将脱色、脱臭处理后的泡菜上清液再次进行过滤、离心处理,收集上清液;在上清液中加入3.5倍体积的95%乙醇进行混匀,混匀后在4℃放置12h,然后进行冷冻离心,冷冻离心是在8000r/min,4℃离心5min,收集离心沉淀即为乳酸乳球菌功能液;
2)所述肠膜明串珠菌功能液的提取方法为:
①将肠膜明串珠菌发酵泡菜液用80目灭菌尼龙布进行过滤除去菜渣;然后将泡菜滤液进行在7500r/min,4℃下离心9min,收集离心后的泡菜上清液,
②在泡菜上清液中加入活性炭进行脱色、脱臭处理;所述活性炭的加入量为泡菜上清液重量的5%,所述脱色、脱臭处理的时间为135min;
③将脱色、脱臭处理后的泡菜上清液再次进行过滤、离心处理,收集上清液;在上清液中加入3.5倍体积的95%乙醇进行混匀,混匀后在4℃下放置12h,然后进行冷冻离心,冷冻离心是在8000r/min,4℃离心5min,收集离心沉淀即为肠膜明串珠菌功能液。
(5)将步骤(4)提取的乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液混合均匀,然后加入乳化剂混合后加入均质机,在压力为25Mpa进行均质,形成不分层的乳浊液即为保鲜液;其中,所述乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液的重量比为1:2;所述乳化剂采用蔗糖脂肪酸酯,所述蔗糖脂肪酸酯的加入量为乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液总重量的0.6%。
实施例2:
制备保鲜液,包括下述步骤:
(1)从泡菜液中分离得到肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌:
1)制备泡菜液:
①将新鲜蔬菜和辅料按比例加入到泡菜坛中,再向其中加入无菌盐水搅拌混匀,所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;制备泡菜液时,所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的6%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.01%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的1.2%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为2.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%;
②然后将泡菜坛添加水进行密封,然后将泡菜坛置于15℃恒温培养箱中发酵1d,经菜水分离后,即得泡菜液;
2)从泡菜液中分离肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌:
用M17琼脂培养基将步骤1)中泡菜发酵1d的泡菜液进行乳酸菌的分离,采用平板划线法进行3次纯化,然后将纯化菌株进行16S rDNA分子鉴定,挑选其中的肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌;
(2)筛选:
1)将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌进行抑菌实验,筛选出抑制能力强的乳酸乳球菌,具体方法为:
①将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌在M17液体培养基中进行2次活化,培养24h后将OD600nm>0.3的乳酸乳球菌进行抑菌实验;
②采用牛津杯法利用步骤①筛选的OD600nm>0.3的乳酸乳球菌离心后的上清液分别对大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌进行抑制,通过抑菌圈的大小判断乳酸乳球菌对大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌的抑制强弱,筛选抑制能力强的乳酸乳球菌;
2)将步骤(1)分离得到的肠膜明串珠菌进行产粘能力实验,筛选出产粘能力强的肠膜明串珠菌,具体方法为:
①将步骤(1)中分离得到的肠膜明串珠菌进行活化,活化后进行冷冻离心,冷冻离心是在8000r/min,4℃离心5min,得菌泥;
②将步骤①得到的菌泥添加到灭菌的牛乳中,牛乳中添加蔗糖,蔗糖的添加量为牛乳重量的6%,菌泥添加控制在1×107CFU/mL;然后将温度控制在37℃进行恒温发酵,观察酸奶凝固时间,筛选酸奶凝固时间短且酸奶粘稠度高的肠膜明串珠菌;
(3)应用步骤(2)筛选出的乳酸乳球菌和肠膜明串珠菌分别发酵泡菜,得到乳酸乳球菌发酵泡菜液和肠膜明串珠菌发酵泡菜液;
1)所述乳酸乳球菌发酵泡菜液的制备方法为:
①准备新鲜蔬菜、辅料和灭菌后的食盐水,将新鲜蔬菜和辅料清洗干净后沥;然后用灭菌后的生理盐水进行清洗去杂菌、沥干;其中,
所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的6%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.01%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的1.2%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为2.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%;
②将去杂菌后的新鲜蔬菜、辅料以及灭菌后的食盐水添加在灭菌后的泡菜坛中,将步骤(2)筛选出的乳酸乳球菌按0.5×107CFU/mL添加到泡菜坛中;
③将泡菜坛密封,然后置于12℃恒温培养箱中发酵12d,此时,泡菜液pH为3.8,滴定酸度为0.35g/100mL(满足泡菜液pH<4,滴定酸度>0.3g/100mL),即得乳酸乳球菌发酵泡菜液;
2)所述肠膜明串珠菌发酵泡菜液的制备方法为:
①准备新鲜蔬菜、辅料和灭菌后的食盐水,将新鲜蔬菜和辅料清洗干净后沥;然后用灭菌后的生理盐水进行清洗去杂菌、沥干;其中,
所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的6%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.01%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的1.2%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为2.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%;
②将去杂菌后的新鲜蔬菜、辅料以及灭菌后的食盐水添加在灭菌后的泡菜坛中,将步骤(2)筛选的肠膜明串珠菌按1.5×107CFU/mL添加到泡菜中;
③将泡菜坛密封,然后置于18℃恒温培养箱中发酵12d,此时,泡菜液pH为3,滴定酸度为0.5g/100mL(满足泡菜液pH<4,滴定酸度>0.3g/100mL),得肠膜明串珠菌发酵泡菜液;
(4)应用步骤(3)制备出的乳酸乳球菌发酵泡菜液和肠膜明串珠菌发酵泡菜液分别进行乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液的提取;
1)所述乳酸乳球菌功能液的提取方法为:
①将乳酸乳球菌发酵泡菜液用80目灭菌尼龙布进行过滤除去菜渣,然后将泡菜滤液在7000r/min,5℃离心10min,收集离心后的泡菜上清液;
②在泡菜上清液中加入活性炭进行脱色、脱臭处理;所述活性炭的加入量为泡菜上清液重量的5%,所述脱色、脱臭处理的时间为120min;
③将脱色、脱臭处理后的泡菜上清液再次进行过滤、离心处理,收集上清液;在上清液中加入4倍体积的95%乙醇进行混匀,混匀后在5℃放置14h,然后进行冷冻离心,冷冻离心是在8000r/min,4℃离心5min,收集离心沉淀即为乳酸乳球菌功能液;
2)所述肠膜明串珠菌功能液的提取方法为:
①将肠膜明串珠菌发酵泡菜液用80目灭菌尼龙布进行过滤除去菜渣;然后将泡菜滤液进行在7000r/min,3℃下离心8min,收集离心后的泡菜上清液,
②在泡菜上清液中加入活性炭进行脱色、脱臭处理;所述活性炭的加入量为泡菜上清液重量的5%,所述脱色、脱臭处理的时间为150min;
③将脱色、脱臭处理后的泡菜上清液再次进行过滤、离心处理,收集上清液;在上清液中加入3倍体积的95%乙醇进行混匀,混匀后在3℃下放置10h,然后进行冷冻离心,冷冻离心是在8000r/min,4℃离心5min,收集离心沉淀即为肠膜明串珠菌功能液。
(5)将步骤(4)提取的乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液混合均匀,然后加入乳化剂混合后加入均质机,在压力为40Mpa进行均质,形成不分层的乳浊液即为保鲜液;其中,所述乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液的重量比为1:1;所述乳化剂采用蔗糖脂肪酸酯,所述蔗糖脂肪酸酯的加入量为乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液总重量的0.2%。
实施例3:
制备保鲜液,包括下述步骤:
(1)从泡菜液中分离得到肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌:
1)制备泡菜液:
①将新鲜蔬菜和辅料按比例加入到泡菜坛中,再向其中加入无菌盐水搅拌混匀,所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;制备泡菜液时,所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的4%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.03%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为1.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的3.5%;
②然后将泡菜坛添加水进行密封,然后将泡菜坛置于15℃恒温培养箱中发酵5d,经菜水分离后,即得泡菜液;
2)从泡菜液中分离肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌:
用M17琼脂培养基将步骤1)中泡菜发酵5d的泡菜液进行乳酸菌的分离,采用平板划线法进行3次纯化,然后将纯化菌株进行16S rDNA分子鉴定,挑选其中的肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌;
(2)筛选:
1)将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌进行抑菌实验,筛选出抑制能力强的乳酸乳球菌,具体方法为:
①将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌在M17液体培养基中进行2次活化,培养24h后将OD600nm>0.3的乳酸乳球菌进行抑菌实验;
②采用牛津杯法利用步骤①筛选的OD600nm>0.3的乳酸乳球菌离心后的上清液分别对大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌进行抑制,通过抑菌圈的大小判断乳酸乳球菌对大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌的抑制强弱,筛选抑制能力强的乳酸乳球菌;
2)将步骤(1)分离得到的肠膜明串珠菌进行产粘能力实验,筛选出产粘能力强的肠膜明串珠菌,具体方法为:
①将步骤(1)中分离得到的肠膜明串珠菌进行活化,活化后进行冷冻离心,冷冻离心是在8000r/min,4℃离心5min,得菌泥;
②将步骤①得到的菌泥添加到灭菌的牛乳中,牛乳中添加蔗糖,蔗糖的添加量为牛乳重量的6%,菌泥添加控制在1×107CFU/mL;然后将温度控制在37℃进行恒温发酵,观察酸奶凝固时间,筛选酸奶凝固时间短且酸奶粘稠度高的肠膜明串珠菌;
(3)应用步骤(2)筛选出的乳酸乳球菌和肠膜明串珠菌分别发酵泡菜,得到乳酸乳球菌发酵泡菜液和肠膜明串珠菌发酵泡菜液;
1)所述乳酸乳球菌发酵泡菜液的制备方法为:
①准备新鲜蔬菜、辅料和灭菌后的食盐水,将新鲜蔬菜和辅料清洗干净后沥;然后用灭菌后的生理盐水进行清洗去杂菌、沥干;其中,
所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的4%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.03%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为1.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的3.5%;
②将去杂菌后的新鲜蔬菜、辅料以及灭菌后的食盐水添加在灭菌后的泡菜坛中,将步骤(2)筛选出的乳酸乳球菌按1.5×107CFU/mL添加到泡菜坛中;
③将泡菜坛密封,然后置于18℃恒温培养箱中发酵8d,此时,泡菜液pH为3.8,滴定酸度为0.36g/100mL(满足泡菜液pH<4,滴定酸度>0.3g/100mL),即得乳酸乳球菌发酵泡菜液;
2)所述肠膜明串珠菌发酵泡菜液的制备方法为:
①准备新鲜蔬菜、辅料和灭菌后的食盐水,将新鲜蔬菜和辅料清洗干净后沥;然后用灭菌后的生理盐水进行清洗去杂菌、沥干;其中,
所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的4%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.03%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为1.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的3.5%;
②将去杂菌后的新鲜蔬菜、辅料以及灭菌后的食盐水添加在灭菌后的泡菜坛中,将步骤(2)筛选的肠膜明串珠菌按0.5×107CFU/mL添加到泡菜中;
③将泡菜坛密封,然后置于12℃恒温培养箱中发酵8d,此时,泡菜液pH为3.5,滴定酸度为0.4g/100mL(满足泡菜液pH<4,滴定酸度>0.3g/100mL),得肠膜明串珠菌发酵泡菜液;
(4)应用步骤(3)制备出的乳酸乳球菌发酵泡菜液和肠膜明串珠菌发酵泡菜液分别进行乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液的提取;
1)所述乳酸乳球菌功能液的提取方法为:
①将乳酸乳球菌发酵泡菜液用80目灭菌尼龙布进行过滤除去菜渣,然后将泡菜滤液在8000r/min,3℃离心8min,收集离心后的泡菜上清液;
②在泡菜上清液中加入活性炭进行脱色、脱臭处理;所述活性炭的加入量为泡菜上清液重量的5%,所述脱色、脱臭处理的时间为150min;
③将脱色、脱臭处理后的泡菜上清液再次进行过滤、离心处理,收集上清液;在上清液中加入3倍体积的95%乙醇进行混匀,混匀后在3℃放置10h,然后进行冷冻离心,冷冻离心是在8000r/min,4℃离心5min,收集离心沉淀即为乳酸乳球菌功能液;
2)所述肠膜明串珠菌功能液的提取方法为:
①将肠膜明串珠菌发酵泡菜液用80目灭菌尼龙布进行过滤除去菜渣;然后将泡菜滤液进行在8000r/min,4℃下离心10min,收集离心后的泡菜上清液,
②在泡菜上清液中加入活性炭进行脱色、脱臭处理;所述活性炭的加入量为泡菜上清液重量的5%,所述脱色、脱臭处理的时间为130min;
③将脱色、脱臭处理后的泡菜上清液再次进行过滤、离心处理,收集上清液;在上清液中加入3.2倍体积的95%乙醇进行混匀,混匀后在4℃下放置12h,然后进行冷冻离心,冷冻离心是在8000r/min,4℃离心5min,收集离心沉淀即为肠膜明串珠菌功能液。
(5)将步骤(4)提取的乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液混合均匀,然后加入乳化剂混合后加入均质机,在压力为10Mpa进行均质,形成不分层的乳浊液即为保鲜液;其中,所述乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液的重量比为1:1.5;所述乳化剂采用蔗糖脂肪酸酯,所述蔗糖脂肪酸酯的加入量为乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液总重量的1%。
实施例4:
一种保鲜方法,应用实施例1中制备的保鲜液进行草莓的保鲜;具体为:
(1)将草莓用纯净水进行清洗干净、沥干,
(2)将实施例1中制备的保鲜液和水按重量比1:50进行混匀,以浸泡后沥干的方式对草莓进行涂层保鲜,浸泡5min,然后沥干表面液体、常温(25℃)贮藏。
分别在贮藏3天、6天和9天后,检测可溶性固形物含量、维生素C含量以及DPPH清除率。检测结果如下表1所示。
实施例5:
一种保鲜方法,应用实施例2中制备的保鲜液进行苹果的保鲜;具体为:
(1)将苹果用纯净水进行清洗干净、沥干,
(2)将实施例1中制备的保鲜液和水按重量比1:30进行混匀,以浸泡后沥干的方式对苹果进行涂层保鲜,浸泡3min,然后沥干表面液体、常温(25℃)贮藏。
分别在贮藏3天、6天和9天后,检测可溶性固形物含量、维生素C含量以及DPPH清除率。检测结果如下表1所示。
实施例6:
一种保鲜方法,应用实施例3中制备的保鲜液进行油桃的保鲜;具体为:
(1)将油桃用纯净水进行清洗干净、沥干,
(2)将实施例1中制备的保鲜液和水按重量比1:80进行混匀,以浸泡后沥干的方式对油桃进行涂层保鲜,浸泡8min,然后沥干表面液体、常温(25℃)贮藏。
分别在贮藏3天、6天和9天后,检测可溶性固形物含量、维生素C含量以及DPPH清除率。检测结果如下表1所示。
实施例7:
一种保鲜方法,应用实施例1中制备的保鲜液进行西红柿的保鲜;具体为:
(1)将西红柿用纯净水进行清洗干净、沥干,
(2)将实施例1中制备的保鲜液和水按重量比1:80进行混匀,以浸泡后沥干的方式对西红柿进行涂层保鲜,浸泡8min,然后沥干表面液体、常温(25℃)贮藏。
分别在贮藏3天、6天和9天后,检测可溶性固形物含量、维生素C含量以及DPPH清除率。检测结果如下表1所示。
对比例1:
选择实施例4中同等的草莓(成熟度统一、外表光鲜亮丽、色差差异不大、没有缺陷的草莓)
(1)将草莓用纯净水进行清洗干净、沥干,
(2)草莓浸泡在超纯水中5min后取出,沥干表面水分、常温(25℃)贮藏。
分别在贮藏3天、6天和9天后,检测可溶性固形物含量、维生素C含量以及DPPH清除率。检测结果如下表1所示。
对比例2:
选择实施例5中同等的苹果(成熟度统一、外表光鲜亮丽、色差差异不大、没有缺陷的苹果)
(1)将苹果用纯净水进行清洗干净、沥干,
(2)苹果浸泡在超纯水中3min后取出,沥干表面水分、常温(25℃)贮藏。
分别在贮藏3天、6天和9天后,检测可溶性固形物含量、维生素C含量以及DPPH清除率。检测结果如下表1所示。
对比例3:
选择实施例6中同等的油桃(成熟度统一、外表光鲜亮丽、色差差异不大、没有缺陷的油桃)
(1)将油桃用纯净水进行清洗干净、沥干,
(2)油桃浸泡在超纯水中8min后取出,沥干表面水分、常温(25℃)贮藏。
分别在贮藏3天、6天和9天后,检测可溶性固形物含量、维生素C含量以及DPPH清除率。检测结果如下表1所示。
对比例4:
选择实施例7中同等的西红柿(成熟度统一、外表光鲜亮丽、色差差异不大、没有缺陷的西红柿)
(1)将西红柿用纯净水进行清洗干净、沥干,
(2)西红柿浸泡在超纯水中8min后取出,沥干表面水分、常温(25℃)贮藏。
分别在贮藏3天、6天和9天后,检测可溶性固形物含量、维生素C含量以及DPPH清除率。检测结果如下表1所示。
实验例1:
以保鲜草莓为例,在眉山某超市采购新鲜的草莓,选择成熟度统一、外表光鲜亮丽、色差差异不大、没有缺陷的草莓进行实验。将草莓用纯净水进行清洗干净、沥干,平均分为两组,第一组为实验组,采用实施例4中的保鲜方法(将实施例1中制备的保鲜液和水按重量比1:50进行混匀,以浸泡后沥干的方式对果蔬进行涂层保鲜,浸泡5min,然后沥干表面液体);第二组为对照组,将草莓浸泡在超纯水中5min后取出,沥干表面水分。将两组草莓放置在25℃恒温培养箱中,分别在第0、1、3、5、7d测定草莓中的可溶性固形物含量、维生素C和DPPH清除率。
(1)可溶性固形物含量的检测:
参考《NY/T 2637-2014水果和蔬菜可溶性固形物含量的测定》中折射仪法进行测定,折射仪为PAL-1。
(2)维生素C测定:
参考《GB 5009.86-2016食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定》中2,6-二氯靛酚滴定法测定食品中抗坏血酸的方法进行测定。
(3)DPPH清除率的检测方法:
将1.0g样品与50%乙醇混合,并将混合物在12000×g(20min,4℃)下离心。然后将上清液用50%乙醇稀释10倍。测量溶液在525nm处的吸光度(提取物:DPPH=1:1.9(V/V))。
DPPH自由基清除率(%)=(A0–(A-B))*100/A0
其中A是测试组的吸光度,A0是没有样品的吸光度,B是0.1mL提取物在1.9mL 50%乙醇中的吸光度。
如图1所示,将草莓在实施例4的保鲜方法保鲜后,相比对照组,实验组延缓了可溶性固形物的降解,可以认为实施例1的保鲜液中含有的胞外多糖等物质涂层于水果后,有助于保留组织中的碳水化合物。
如图2所示,草莓中VC含量先增加后减少,将草莓在实施例4的保鲜方法保鲜后,VC含量相比对照组更高,实验组在第3d达到最大值,而对照组在第1天达到最大值后就开始下降,表明实施例1中的保鲜液有效地延迟了草莓的衰老。是因为保鲜液中多糖等物质阻止了水果的内部与外部的气体交换,并且防止了VC氧化为脱氢抗坏血酸。
如图3所示,草莓中DPPH清除率先增加后减少,贮藏1d时,实验组相比对照组低,但1d后对照组DPPH清除率逐渐下降,而实验组DPPH清除率在第3d达到峰值后才逐渐下降。这表明实施例1中的保鲜液具有强大的抗氧化能力,在贮藏过程中增加了草莓果实的抗氧化特性及延缓后期抗氧化能力的下降。
综上,应用本发明实施例1的保鲜液涂层的草莓的腐败指数显著下降,具有更高的可溶性固形物含量、维生素C含量以及更高的DPPH清除自由基活性。
表1检测结果
以上所述,仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种保鲜液的制备方法,其特征在于:包括下述步骤:
(1)从泡菜液中分离得到肠膜明串珠菌和乳酸乳球菌;
(2)筛选:将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌进行抑菌实验,筛选出抑制能力强的乳酸乳球菌;将步骤(1)分离得到的肠膜明串珠菌进行产粘能力实验,筛选出产粘能力强的肠膜明串珠菌;
(3)应用步骤(2)筛选出的乳酸乳球菌和肠膜明串珠菌分别发酵泡菜,得到乳酸乳球菌发酵泡菜液和肠膜明串珠菌发酵泡菜液;
(4)应用步骤(3)制备出的乳酸乳球菌发酵泡菜液和肠膜明串珠菌发酵泡菜液分别进行乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液的提取;
(5)将步骤(4)提取的乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液以及乳化剂混合后进行均质,形成不分层的乳浊液即为保鲜液。
2.根据权利要求1所述的保鲜液的制备方法,其特征在于:所述步骤(5)中,所述乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液的重量比为1:1-2。
3.根据权利要求2所述的保鲜液的制备方法,其特征在于:所述步骤(5)中,所述乳化剂的加入量为乳酸乳球菌功能液和肠膜明串珠菌功能液总重量的0.2-1%。
4.根据权利要求3所述的保鲜液的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中,所述泡菜液制备方法为:将新鲜蔬菜和辅料按比例加入到泡菜坛中,再向其中加入无菌盐水搅拌混匀,所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;然后将泡菜坛添加水进行密封,然后将泡菜坛置于12℃-18℃恒温培养箱中发酵8-12d,经菜水分离后,即得泡菜液。
5.根据权利要求4所述的保鲜液的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中,制备泡菜液时,所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.5%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的4%-6%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%-2.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.01%-0.03%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.2%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为1.5-2.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%-3.5%。
6.根据权利要求1-5中任意一项所述的保鲜液的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中,
1)将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌进行抑菌实验,筛选出抑制能力强的乳酸乳球菌,具体方法为:
①将步骤(1)分离得到的乳酸乳球菌在M17液体培养基中进行2次活化,培养24h后将OD600nm>0.3的乳酸乳球菌进行抑菌实验;
②采用牛津杯法利用步骤①筛选的OD600nm>0.3的乳酸乳球菌离心后的上清液分别对大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌进行抑制,通过抑菌圈的大小判断乳酸乳球菌对大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌的抑制强弱,筛选抑制能力强的乳酸乳球菌;
2)将步骤(1)分离得到的肠膜明串珠菌进行产粘能力实验,筛选出产粘能力强的肠膜明串珠菌,具体方法为:
①将步骤(1)中分离得到的肠膜明串珠菌进行活化,活化后进行冷冻离心,得菌泥;
②将步骤①得到的菌泥添加到灭菌的牛乳中,牛乳中添加蔗糖,蔗糖的添加量为牛乳重量的6%,菌泥添加控制在107CFU/mL;然后将温度控制在37℃进行恒温发酵,观察酸奶凝固时间,筛选酸奶凝固时间短且酸奶粘稠度高的肠膜明串珠菌。
7.根据权利要求6所述的保鲜液的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中,
1)所述乳酸乳球菌发酵泡菜液的制备方法为:
①准备新鲜蔬菜、辅料和灭菌后的食盐水,将新鲜蔬菜和辅料清洗干净后沥;然后用灭菌后的生理盐水进行清洗去杂菌、沥干;
②将去杂菌后的新鲜蔬菜、辅料以及灭菌后的食盐水添加在灭菌后的泡菜坛中,将步骤(2)筛选出的乳酸乳球菌按0.5×107CFU/mL-1.5×107CFU/mL添加到泡菜中;
③将泡菜坛密封,然后置于12℃-18℃恒温培养箱中发酵8d-12d,当泡菜液pH<4,滴定酸度>0.3g/100mL时,得乳酸乳球菌发酵泡菜液;
其中,所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;其中,所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.5%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的4%-6%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%-2.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.01%-0.03%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.2%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为1.5-2.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%-3.5%;
2)所述肠膜明串珠菌发酵泡菜液的制备方法为:
①准备新鲜蔬菜、辅料和灭菌后的食盐水,将新鲜蔬菜和辅料清洗干净后沥;然后用灭菌后的生理盐水进行清洗去杂菌、沥干;
②将去杂菌后的新鲜蔬菜、辅料以及灭菌后的食盐水添加在灭菌后的泡菜坛中,将步骤(2)筛选的肠膜明串珠菌按0.5×107CFU/mL-1.5×107CFU/mL添加到泡菜中;
③将泡菜坛密封,然后置于12℃-18℃恒温培养箱中发酵8d-12d,当泡菜液pH<4,滴定酸度>0.3g/100mL时,得肠膜明串珠菌发酵泡菜液;
其中,所述辅料为老姜、洋葱、红辣椒、花椒和葡萄糖;其中,所述老姜的添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.5%,所述洋葱的的添加量为新鲜蔬菜总重量的4%-6%,所述红辣椒的添加量为新鲜蔬菜总重量的1.5%-2.5%,所述花椒添加量为新鲜蔬菜总重量的0.01%-0.03%,所述葡萄糖添加量为新鲜蔬菜总重量的0.8%-1.2%;所述无菌盐水的添加量与新鲜蔬菜的重量比为1.5-2.5:1,且所述无菌盐水中食盐的添加量为新鲜蔬菜总重量的2.5%-3.5%。
8.根据权利要7所述的保鲜液的制备方法,其特征在于:所述步骤(4)中,
1)所述乳酸乳球菌功能液的提取方法为:
①将乳酸乳球菌发酵泡菜液过滤除去菜渣,然后将泡菜滤液在7000-8000r/min,3℃-5℃下离心8-10min,收集离心后的泡菜上清液;
②在泡菜上清液中加入活性炭进行脱色、脱臭处理;
③将脱色、脱臭处理后的泡菜上清液再次进行过滤、离心处理,收集上清液;在上清液中加入3-4倍体积的95%乙醇进行混匀,混匀后在3℃-5℃放置10h-14h,然后进行冷冻离心,收集离心沉淀即为乳酸乳球菌功能液;
2)所述肠膜明串珠菌功能液的提取方法为:
①将肠膜明串珠菌发酵泡菜液过滤除去菜渣;然后将泡菜滤液进行在7000-8000r/min,3℃-5℃下离心8-10min,收集离心后的泡菜上清液,
②在泡菜上清液中加入活性炭进行脱色、脱臭处理;
③将脱色、脱臭处理后的泡菜上清液再次进行过滤、离心处理,收集上清液;在上清液中加入3-4倍体积的95%乙醇进行混匀,混匀后在3℃-5℃放置10h-14h,然后进行冷冻离心,收集离心沉淀即为肠膜明串珠菌功能液。
9.一种由权利要求1-8中任意一项所述的保鲜液的制备方法制备出的保鲜液。
10.一种保鲜方法,其特征在于:应用权利要求9中的保鲜液进行果蔬保鲜,具体为:将权利要求9中的保鲜液和水按重量比1:30-80进行混匀,以浸泡后沥干的方式对果蔬进行涂层保鲜,浸泡2-8min,然后沥干表面液体、贮藏。
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