CN110935009A - 科博肽制剂在制备治疗痔疮药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及科博肽制剂在制备治疗痔疮药物中的应用；所述科博肽制剂的主要成分科博肽是从眼镜蛇蛇毒中分离纯化的神经毒蛋白，按干燥品计算，含神经毒蛋白不得少于35.0％；所述制剂为注射剂、口服制剂、肠溶制剂、直肠给药制剂、口腔吸收制剂等剂型。该科博肽制剂对于痔疮所表现的便血、脱出、肛门坠胀、疼痛、肛门异物感等主要症状，具有良好效果。另外，本发明制剂通过动物试验证实了其在治疗痔疮相关疾病的疗效，为患者提供了又一选择。

Description

科博肽制剂在制备治疗痔疮药物中的应用

技术领域

本发明涉及药物应用技术领域，尤其是科博肽制剂在制备治疗痔疮药物中的应用。

背景技术

痔疮，又称为痔，是最常见的肛肠疾病之一，临床上主要分为内痔、外痔、混合痔三种。人口患病率为39％，其中44.7％伴有临床症状。目前痔疮的病因尚未完全阐明，与多种因素有关，目前得到广泛认可的有静脉曲张学说。静脉曲张学说认为痔疮是直肠下段黏膜下和肛管皮肤下的静脉丛淤血、扩张和屈曲所形成的静脉团；直肠肛管位于腹腔最下部，任何引起腹内压增高的因素如久坐久立、便秘、妊娠、腹水及盆腔巨大肿瘤等均可阻碍直肠静脉回流,导致痔的形成。此外,长期饮酒和进食大量刺激性食物可使局部充血,肛周感染可引起静脉周围炎使肛垫肥厚,营养不良可使局部组织萎缩无力,这些因素都可诱发痔的发生。

痔疮在临床上主要表现为：便血、脱出、肛门坠胀、疼痛、肛门异物感等。目前，痔疮的治疗分为手术治疗和非手术治疗，手术治疗主要适用于Ⅲ、Ⅳ期内痔。非手术治疗法又分为口服药物、外用药物、注射疗法及套扎疗法、其他物理疗法。

蛇毒是毒蛇从毒腺中分泌出来的一种液体，主要成份是毒性蛋白质，约占干重的90％至95％；酶类和毒素约含二十多种。此外，还含有一些小分子肽、氨基酸、碳水化合物、脂类、核苷、生物胺类及金属离子等；蛇毒成分十分复杂，不同的蛇种、亚种所分泌的蛇毒，毒性成分仍存在一定的差异，其毒性、药理及毒理作用各具特点。眼镜蛇属蛇毒中主要含有神经毒素、细胞毒素、眼镜蛇毒因子、神经生长因子、酶类等功能组分，酶类主要分为氧化酶(L—AAO)和水解酶(PLA2、蛋白酶、核酸酶、乙酰胆碱酯酶、透明质酸酶)两类。现代研究证明：眼镜蛇毒神经毒素用于治疗血管性神经性头痛、坐骨神经痛、三叉神经痛，具有一定疗效且无成瘾性；眼镜蛇毒神经生长因子是一种神经营养因子，它在外周神经和中枢神经系统中参与神经元的生长、分化与生存的过程，具有修复神经损伤的作用；眼镜蛇毒酶类中的L-氨基酸氧化酶、PLA2、蛋白水解酶可抑制血小板的聚集，具有凝血酶抑制剂功能。蝮蛇毒的主要成分是蛋白质类化合物，含有水解蛋白酶、精氨酸酶、磷酸二脂酶等多种酶类。目前国内外的蝮蛇制剂主要以精氨酸酶为主的抗凝剂为主，具有抗凝、去纤、溶栓和扩张血管的功效；矛头蝮蛇蛇毒血凝酶是目前广泛应用的蝮蛇制剂之一，为从矛头蝮蛇的毒液分离出来的凝血物质，具有良好的止血效果。银环蛇毒素的主要成分为蛋白质和多肽，包括ɑ-银环蛇毒素(α-BGT)、β-银环蛇毒素(β-BGT)、γ-银环蛇毒素(γ-BGT)和磷脂酶A等酶类。现代研究证明：ɑ-BGT与乙酰胆碱受体结合的亲和力高，因此是研究乙酰胆碱受体结构的理想探针；可用于显示完整细胞膜表面乙酰胆碱受体的分布和密度，观察各种药物、毒物和其他致病因子对乙酰胆碱受体动力学变化的影响，也是从组织中分离和纯化乙酰胆碱受体的重要工具；对重症肌无力具有良好的治疗作用。

随着蛇毒研究的不断深入，现在蛇毒提取液及其制品已应用于痔疮治疗。文献《局部使用巴曲亭在痔术后出血中的应用》(现代预防医学,2011)中研究了巴西矛头蝮蛇蛇毒提取制品巴曲亭－注射用蛇毒血凝酶在痔术后出血的止血效果；结果发现：外用巴曲亭能有效地减少混合痔手术后出血时间或再出血，疗效明确，并未出现并发症，临床应用安全有效。又如公开号为CN98809129.1A的专利公开了神经毒素疗法在泌尿系及相关疾病治疗中的应用；其中公开了α-银环蛇毒素用于治疗骨盆肌筋膜病(如提肌括约肌、肛瘘痔疮)。但是该专利文献中未给出α-银环蛇毒素的规格及用法用量，也没有试验研究说明α-银环蛇毒素在治疗治疗痔疮上的药效机理及效果。

科博肽是从眼镜蛇蛇毒中分离提纯的低分子多肽，其化学名为眼镜蛇毒神经毒素，分子量在7000道尔顿左右。眼镜蛇毒神经毒素与N型乙酰胆碱受体有高度亲和力，能阻止神经肌肉接头神经冲动信号的传递。影响脑内乙酰胆碱的代谢，并能提高人、鼠脑内脑啡肽含量，产生镇痛作用。科博肽在临床上主要用于晚期癌症疼痛、慢性关节痛、坐骨神经痛、三叉神经痛、麻风反应神经痛等慢性疼痛的治疗，长期临床使用表明，科博肽具有良好的镇痛效果，具有无成瘾性、无耐受性，镇痛作用持久等特点，对停药或禁戒海洛因后出现的各种生理和精神依赖症状均有一定疗效，应用范围广，尤其适用于慢性、顽固性、持续性疼痛治疗，出现疗效后可减量维持。

目前，科博肽在治疗痔疮方面的研究还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供科博肽制剂在制备治疗痔疮药物中的应用。

本发明所述科博肽制剂中的主要成分科博肽是从眼镜蛇蛇毒中分离纯化的神经毒蛋白，按干燥品计算，含神经毒蛋白不得少于35.0％。

本发明所述科博肽制剂，是按一定工艺制备而成，其制备方法属于现有技术，可以从现有专利公开的文件中获得，或根据其他公开的文献技术及药品标准制备。如WS-10001-(HD-0833)-2002、文献《注射用科博肽制剂生产工艺研究》(中国科技期刊数据库.医药.2015)、CN200710121481.1、CN201410572487.0。

所述科博肽制剂是根据需要加入一种或多种药学上可接受稀释剂、赋型剂、助溶剂、缓释剂、缓冲剂、抑菌剂、渗透压调节剂，按照药学领域的常规方法，制备成所需要的剂型。

所述科博肽制剂的剂型为注射剂、口服制剂、肠溶制剂、直肠给药制剂、口腔吸收制剂；优选为注射剂。

本发明所述的科博肽制剂在使用时根据病人的情况确定用法用量。如已上市的由云南南诏药业有限公司生产的科博肽注射液，注射液中科博肽的含量为2ml：70μg，每次用药140μg，每日140μg—280μg，用药时间应大于6小时，连续用药10天后应停药1-2日。

痔疮目前在临床上主要表现为：便血、疼痛、肛门坠胀、脱出、肛门异物感等。

为了探究科博肽制剂在治疗痔疮药物中的应用；本发明进行了药效研究，从治疗效果、现有技术/产品给药对比情况方面，比较了给药后小鼠直肠下段黏膜下和肛管皮肤下的静脉丛的病理变化；并研究了给药后大鼠肝功能指标的变化及不良反应。结果显示，本发明所述的科博肽制剂具有治疗痔疮的作用；具体地说，本发明提供的科博肽制剂对痔疮引起的便血、脱出、肛门坠胀、疼痛、肛门异物感等的疗效确切、安全性好；相比现有相似配方及常用产品，具有治疗效果更优、恢复程度快等优势，值得推广。

具体实施方式

下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。

试验例科博肽制剂治疗痔疮药效学评价及机制分析实验研究

一、实验材料

组1：上市科博肽注射液，由云南南诏药业有限公司提供，规格：2ml：70μg，用法用量：肌内注射，每次用药4ml，每日2次，用药时间应大于6小时。

组2：科博肽口服片，按照现有公开技术方案制成，规格：280μg/0.25g片；用法用量：每日1次，每次1片。

组3：科博肽肠溶片，按照现有公开技术方案制成，规格：280μg/0.25g/素片，用法用量：每日1次，每次1片。

组4：科博肽直肠给药栓剂，按照现有公开技术方案制成，规格：140μg/2g栓；用法用量：每日2次，每次1栓。

组5：科博肽口腔吸收片剂，按照现有公开技术方案制成，规格：140μg/0.1g/片；用法用量：每日1次，每次2片。

对照组1：眼镜蛇毒注射液，按照现有公开技术(公开号为CN95114259A的专利)制成，规格为0.1mg/ml；用法用量：肌内注射，每日1次，每次用药1ml。

对照组2：巴曲亭(注射用矛头蝮蛇血凝酶)，由蓬莱诺康药业有限公司生产，规格：1单位/2支；用法用量：每日肌注1次，每次1单位。

对照组3:α-银环蛇毒素注射液，按照现有公开技术方案制成，规格：35μgα-银环蛇毒素/ml；用法用量：肌内注射，每次用药4ml，每日2次，用药时间应大于6小时。

二、实验方法

实验例1醋酸致痛扭体实验

1、实验对象：100只SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18-22g。

2、实验方法：将100只小鼠随机分为实验组1-5、对比组1-3、阳性对照组(消痔灵注射液)、空白对照组，每组10只，雌雄各半；实验组1小鼠肌内注射科博肽注射液，一次注射0.57ml，每天注射2次，两次注射时间大于6小时；实验组2小鼠灌胃科博肽口服片，每日1次，每次0.018g；实验组3灌胃科博肽肠溶片，每日1次，每次0.018g；实验组4小鼠直肠给科博肽直肠给药栓剂，每日2次，每次0.28g；实验组5小鼠口腔黏膜给药，将科博肽口腔吸收片剂放置在大右侧口腔颊囊处，放置0.014g，每日放置1次；对照组1小鼠肌内注射眼镜蛇毒注射液，每日1次，每次0.2ml；对照组2小鼠肌内注射巴曲亭，每日1次，每次1/2支；对照组3小鼠肌内注射α-银环蛇毒素注射液，一次注射0.57ml，每次注射2次，两次注射时间大于6小时；阳性对照组小鼠肛门注射消痔灵注射液，每日1次，每次10ml；空白组小鼠灌胃给予生理盐水8ml/d。各组连续给药5天，末次给药1h后小鼠体内注射0.7％醋酸10ml/kg体重，记录小鼠15min内流扭体次数，计算其抑制率，结果如表1所示：

表1

	扭体次数/次	抑制率％
			空白组	31.20±2.82	——
阳性对照组	22.75±5.32	27.08
			实验组1	19.78±4.64	36.60
实验组2	19.89±5.07	36.25
			实验组3	20.32±4.23	34.87
实验组4	20.54±3.96	34.17
			实验组5	19.95±4.50	36.06
对照组1	21.06±3.72	32.50
			对照组2	21.79±4.23	30.16
对照组3	20.08±5.33	35.64

从表1可知,与空白组比较，各药物组(阳性对照组、实验组、对照组)醋酸致痛后的扭体次数明显降低，表明各组药物具有明显的镇痛作用；实验组各组间差异不大，但总体上好于对照组,尤其是实验组1。

实验例2止血实验

1、实验对象同实验例1

2、实验方法：给药方法同实验例1。末次给药1h后毛细血管法和剪尾法测量各小鼠的凝血时间和出血时间。用内径为1mm的毛细玻管插入小鼠内眦球后静脉丛采血,使毛细玻管内血柱达5cm,每隔30s折断一小段玻管,观察有无血凝丝出现,以自采血至出现血凝丝的时间为凝血时间。将小鼠置固定器内,用利剪自距尾尖1.5cm处剪断鼠尾,以血液自行溢出起计时,每隔30s用滤纸吸去血液,至血液溢出停止的时间作为出血时间。结果见表2。

表2

	凝血时间(s)(X±S)	出血时间(s)(X±S)
			空白组	113.52±12.48	182.76±39.12
阳性对照组	77.47±24.79	134.72±42.51
			实验组1	62.73±16.48	105.87±32.79
实验组2	65.87±15.04	106.43±27.48
			实验组3	64.39±21.07	105.84±31.65
实验组4	64.75±19.43	109.97±45.42
			实验组5	70.86±11.7	111.47±25.64
对照组1	85.43±19.80	128.89±27.52
			对照组2	72.34±10.08	108.45±42.59
对照组3	88.25±11.42	129.08±11.7

从表2可知,与空白组比较，各药物组(阳性对照组、实验组、对照组)凝血时间、出血时间明显降低，表明各组药物具有明显的止血作用；实验组各组间差异不大，但总体上好于对照组，尤其是实验组1。

实验例3醋酸所致小鼠腹膜炎性渗出的影响试验

1、实验对象同实验例1

2、实验方法：给药方法同实验例1。末次给药后1h,各小鼠尾静脉注射0.5％伊文思蓝0.1ml/只，10min后腹腔注射0.6％醋酸溶液0.1ml/10g注射后20min脱颈处死，用生理盐水冲洗腹腔,收集全部冲洗液至10ml,离心后取上清液于半自动生化测定仪578nm波长处测定其OD值,以OD值表示冲洗液中伊文思蓝的浓度,间接反映腹膜炎性渗出的程度；结果如表3所示：

表3

	腹腔内含伊文思蓝量(μg/只)(X±SD)
		空白组	5.56±0.31
阳性对照组	3.44±0.29
		实验组1	3.56±0.31
实验组2	3.72±0.29
		实验组3	3.63±0.51
实验组4	3.85±0.37
		实验组5	3.78±0.86
对照组1	4.02±0.67
		对照组2	4.25±0.42
对照组3	3.98±0.49

实验结论：从表3可知，与空白组比较，各药物组(阳性对照组、实验组、对照组)腹腔内含伊文思蓝的量明显降低，表明各组药物具有明显的抑制毛细血管通透性作用，从而能够减少炎症介质的释放，减少炎性渗出；实验组各组间差异不大，但总体上好于对照组。

实验例4抗肿胀实验

1、试验对象：SPF级7-8周龄SD大鼠，体重为180-220g，100只，雌雄各半。

实验方法：将100只大鼠随机分为实验组1-5、对比组1-3、阳性对照组(消痔灵注射液)、空白对照组，每组10只(雌雄各半)；实验组1大鼠肌内注射科博肽注射液，一次注射1.71ml，每天注射2次，两次注射时间大于6小时；实验组2大鼠灌胃科博肽口服片，每日1次，每次0.054g；实验组3大鼠灌胃科博肽肠溶片，每日1次，每次0.054g；实验组4大鼠直肠给科博肽直肠给药栓剂，每日2次，每次0.86g；实验组5大鼠口腔黏膜给药，将科博肽口腔吸收片剂放置在大右侧口腔颊囊处，放置0.043g，每日放置1次；对照组1大鼠肌内注射眼镜蛇毒注射液，每日1次，每次0.6ml；对照组2大鼠肌内注射巴曲亭，每日1次，每次1.5支；对照组3大鼠肌内注射α-银环蛇毒素注射液，一次注射1.71ml，每次注射2次，两次注射时间大于6小时；阳性对照组大鼠肛门注射消痔灵注射液，每日1次，每次10ml；空白组大鼠灌胃给予生理盐水8ml/d。各组连续给药5天，末次给药1h后，用容积法测量各大鼠右后足跖容积，再于各大鼠右后足跖皮下注射1％角叉菜胶0.1ml，致炎后2、4、6h检测各大鼠右后足跖容积，计算足跖肿胀率：

足跖肿胀率＝(致炎后足跖容积—致炎前足跖容积)/致炎前足跖容积。

结果如表4所示：

表4

从表4可知,与空白组比较，各药物组(阳性对照组、实验组、对照组)在致角叉菜胶炎后2、4、6h的跖肿胀率明显降低，表明各组药物能明显降低角叉菜胶所致的足跖肿胀,尤其是实验组1的药物。

实验例5动物毒性实验

80只SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18-22g；分为8组，每组雌雄各5只；按照实验例1中实验组1-5和对照组1-3的给药方法给药。连续给药30天，给药期间及停药后5天时，观察小鼠生长状态和活动饮食，鉴定血液学、血液生化学、脏器组织结构以及尿常规等。结果发现所有小鼠均健康生存，无任何毒副作用；解剖观察血象、肝功能、各脏器组织状态，与正常小鼠比较无差异。实验证明，本发明提供的科博肽制剂，用药安全可靠。

三、结论

实验结果表明，本发明制剂可明显降低小鼠的凝血时间，缩短小鼠断尾后的出血时间，明显降低小鼠醋酸致痛扭体次数，明显降低大鼠跖肿胀率；对于痔疮引起的便血、肛门坠胀、疼痛等症状治愈率高、安全稳定；为痔疮患者提供了又一良好选择。现有技术认知中，蛇毒在用于治疗痔疮时，是通过蛇毒血凝酶的止血功能来发挥其作用的；本发明研究打破了蛇毒血凝酶治疗痔疮出血的这种认知，打破了α-银环蛇毒素治疗痔疮的限制，提供了一种眼镜蛇毒神经毒素制剂(科博肽制剂)的新应用，为痔疮患者提供了又一良好选择。

在此有必要指出的是，以上实施例和试验例仅限于对本发明的技术方案做进一步的阐述和理解，不能理解为对本发明的技术方案做进一步的限定，本领域技术人员作出的非突出实质性特征和显著进步的发明创造，仍然属于本发明的保护范畴。

Claims (6)

1.科博肽制剂在制备治疗痔疮药物中的应用。

2.如权利要求1所述的科博肽制剂在制备治疗痔疮药物中的应用，其特征在于，所述科博肽制剂的主要成分科博肽是从眼镜蛇蛇毒中分离纯化的神经毒蛋白，按干燥品计算，含神经毒蛋白不得少于35.0％。

3.如权利要求1-2任一项所述的应用，其特征在于，所述科博肽制剂是按照现有专利或非专利文献技术及药品标准制备而成。

4.如权利要求1-2任一项所述的应用，其特征在于，所述科博肽制剂是根据需要加入一种或多种药学上可接受稀释剂、赋型剂、助溶剂、缓释剂、缓冲剂、抑菌剂、渗透压调节剂，按照药学领域的常规方法，制备成所需要的剂型。

5.如权利要求4所述的应用，所述科博肽制剂的剂型为注射剂、口服制剂、肠溶制剂、直肠给药制剂、口腔吸收制剂。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述科博肽制剂的剂型为注射剂。