CN1108663A - 心肌细胞生长刺激肽(cmgsp)的制备方法 - Google Patents

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心肌细胞生长刺激肽(CMGSP)的制备方法及 冷冻干燥曲线。是选自健康的幼年哺乳类动物的心 脏经任何机械方式捣碎、经深冻、加热、深冻、离心、上 清液进负压截留柱、除菌、分装、冻干、包装流程制得， 保持生物活性是：将CMGSP液体加入甘露醇分装 5ml药用易析安瓿中经速冻、升温、提高温度、维持温 度，在-20-30℃避光条件下，CMGSP生物活性可 保持3年稳定，其生物活性等于液体状态下的心肌细 胞生长刺激肽。

Description

本发明涉及的是心肌细胞生长刺激肽（CMGSP）技术领域。
一般具有刺激心肌细胞DNA合成和蛋白合成，促进其分裂增殖的细胞因子，是从自发性高血压大鼠或实验性高血压动物的心肌中提取。据文献介绍：尚有Nagano  M等人、Subha  S等人进行此项研究。其共同特点是心生长因子（CGF）的提取均用病理性高血压动物心肌。
本发明的目的在于提供一种从健康的幼年哺乳动物的心肌中，制备出一种具有较高的生物活的（CNGSP）的方法，并采用特异的冷冻干燥曲线（方法），将（CMGSP）冻干，使其可较长期保持活性。
本发明的目的可通过以下技术措施来达到，选取健康的幼年哺乳动物心脏，采用任何机械方式，将其捣碎-20℃深冻-融解后加热60-100℃，15分钟-恢复至室温后再-20℃深冻-融解后，离心3000rpm，30分钟-上清液进负压截留柱-除菌-分装-冻干-包装。
本发明的目的还可以通过以下技术措施来达到：截留柱系采用中空纤维超滤柱，其截留分子量≤20000Da，负压在0.5×104Pa，超滤柱组合方式可为单一柱或多柱串联使用;制备的心肌细胞生长刺激肽（CMGSP）活性保持冷冻干燥是：加入3-8%甘露，-40℃速冻维持2小时30分钟后，于半小时内升温至0℃，持续3小时，然后在1小时内升温至37-38℃，维持20小时。
冻融方法可重复1至数次。
本发明制备的（CMGSP）具有较高的生物活性，表现生物活性方法：取SD胚胎鼠（孕12-16天），无菌分离心脏，胰蛋白酶分离心肌细胞，用DMEM培养基洗涤3次后，用含10%小牛血清的DME/F12培养基配制2-5×105个细胞/ml，置96孔培养板内，每孔0.15ml，37℃，5% CO2条件下孵育24小时。用无血清DME/F12培养基换液后，实验孔加入5-40μg/孔的CMGSP，对照孔仅加DME/F12培养基，继续培养48小时，每孔加入5μIMTT（1.5mg/ml，DME培养基配制），继续培养4-6小时，每孔加入二甲基亚砜100μl终止反应置酶标仪570nm条件下测OD值，以实验孔/对照孔＞1.7倍为有活性。测定结果如下：
CMGSP对培养中心肌细胞线粒体脱氢酶活力的影响
n    OD    倍数    P值
对照组    8    0.108±0.01
实验组(μg)
5    4    0.143±0.02    1.3    >0.05
10    4    0.233±0.03    2.2    <0.01
20    4    0.243±0.02    2.3    <0.01
40    4    0.195±0.04    1.8    <0.05
本发明制备的CMGSP的药理作用明显，心肌细胞坏死数量少，淋巴细胞浸润程度轻，心肌细胞结构清晰。
本发明制备的心肌细胞生长刺激肽（CMGSP）的健康的幼年哺乳类动物选自人、猪、牛、马、羊、狗、兔。
本发明制备的心肌细胞生长刺激肽（CMGSP）可制成口服药和肌肉注射，或其它药物配伍静脉滴入给药。
本发明实施：1、将心肌细胞生长刺激肽（CMGSP）液体加入3-8%甘露分装5ml药用易析安瓿中，每瓶5ml液体，-40℃速冻维持2.5小时，半小时后提高温度至0℃，持续3小时，然后在1小时内提高温度至37-38℃，维持20小时。
冻干为5ml药用易析安瓿，也适合于其它5-10ml药用营子瓶或模子瓶。

Claims (3)

1、一种稳定的心肌细胞生长刺激肽(CMGSP)的制备方法及其制备的心肌细胞生长刺激肽活性保持的冻干曲线，其特征是所述的制备方法：选取健康的幼年哺乳动物心脏，用任何机械方式捣碎--20℃深冻-融解后加热60-100℃，15分钟-恢复至室温后再-20℃深冻-融解后，离心3000rpm，30分钟-上清液进负压截留柱-除菌-分装-冻干-包装。
2、根据权利要求1所述的心肌细胞生长刺激肽制备方法，其特征是截留柱系采用中空纤维超滤柱，其截留分子量≤20000Da，负压在0.5×104Pa，超滤柱组合方式可为单一柱或多柱串联使用，
3、根据权利要求1所述的制备的心肌细胞生长刺激肽活性保持冷冻干燥曲线，其特征是加入3-8%甘露，-40℃速冻维持2小时30分钟后，于半小时内升温至0℃，持续3小时，然后在1小时内升温至37-38℃，维持20小时。
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