CN1108310C - 一种海藻多糖及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种海藻多糖及其制备方法，所说的海藻多糖产品，为海洋植物中的红藻门Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳节藻属Galaxaura Lamx.的海藻所提取分离的有效部位多糖，其分子量在500～50000之间，固态呈浅黄色至浅棕色，可用作镇静、安神、催眠的药品或作为具有这类药用功能的保健品或食品。本发明还提供本海藻多糖产品的制备方法，该方法可靠易行，适宜大规模生产，不污染环境，成本低。

Description

一种海藻多糖及其制备方法和用途
本发明涉及一种在海藻原料中提取的海藻多糖及其制备方法和用途。
乳节藻Galaxaura sp.广泛分布在我国的南海海域，资源丰富，有关它的药理及化学方面的研究，目前国内外尚未见报道。目前在临床上所用的镇静催眠药物主要是以生化药为主，如安定、巴比妥类药等，此类药物的毒性和副作用较大，因而探索从天然海洋植物中提取其药用有效成分并研究其适于工业应用的制备方法，以便对海藻资源进行综合利用，具有重要意义。
本发明的目的是提出一种从海藻原料中所分离提取的海藻多糖的新物质及其制备方法，并提出该物质作为镇静、安神和催眠药物的新用途。
本发明所提出的海藻多糖新产品，为海洋植物中的红藻门Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳节藻属Galaxaura Lamx.的海藻所提取分离的有效部位多糖，其分子量在500～50000道尔顿之间，固态呈浅黄色至浅棕色，用高压液相色谱分析，主要由以下单糖组成：90～98％的葡萄糖醛酸、2～8％的海藻糖及少量的阿拉伯糖和葡萄糖，糖溶液的pH＜7，属于酸性多糖。
本发明的海藻多糖产品，从所述的海藻原料中所提取分离的有效部位多糖，其分子量在500～20000道尔顿之间的，品质较好；其有效部位多糖的分子量在2000～12000道尔顿之间的，品质最好。
本发明所述的海藻多糖的制备方法为：以海洋植物中的红藻门Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳节藻属Galaxaura Lamx.的海藻为原料，其制备工艺步骤如下：
(1)干海藻粉碎后称量；
(2)用非脂性溶剂的水溶液浸泡，所说的非脂性溶剂一般可采用乙醇、甲醇、丙醇或乙二醇；
(3)过滤出浸泡液；
(4)将浸泡液在减压蒸干；
(5)用有机溶剂浸泡蒸干物5～10小时，所说的有机溶剂一般可采用乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮、丁醇、二甲基甲胺或二甲亚砜；
(6)过滤，取滤液；
(7)所得的滤液加入有机溶剂，搅拌后静置，使分层，除去上层含叶绿素部分的层液，所说的有机溶剂可采用乙酸乙酯、乙酸丁酯、苯、甲苯、二甲苯或60～90℃的石油醚；
(8)将除去叶绿素后的滤液通过离子交换柱或离子渗析方法脱盐；
(9)将经脱盐的滤液先用酸性离子交换，再用碱性离子交换去蛋白；
(10)对上一步骤经离子交换后所得的滤液(或称离交下柱液)加氨水中和至中性，；
(11)再加入乙醇，形成沉淀物；
(12)取沉淀物，用无水乙醇洗涤，一般洗涤3～5次；
(13)再先后经阴离子交换树脂和阳离子交换树脂截取得分子量为500～50000道尔顿的多糖。所述的阴离子交换树脂最好采用701或弱碱330阴离子交换树脂；所述的阳离子交换树脂最好采用724或弱酸101或732阳离子交换树脂；
(14)将上述所得物浓缩后，烘干，粉碎，或者直接将浓缩物喷雾干燥，即得本海藻多糖产品。
为获取品质较好的海藻多糖产品，上述步骤(13)的所得物可进一步纯化，用高压液相色谱分离、提纯得分子量为500～20000道尔顿的多糖，最好提纯分子量为2000～12000道尔顿的多糖，以后再继续所述的步骤(14)即可得精制的海藻多糖产品。
本发明所提供的海藻多糖产品，是从所述的海洋植物中的红藻门Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳节藻属Galaxaura Lamx.的海藻原料中经过逐步分离提纯所得到的有效部位为一种海藻多糖，根据药效学研究以及动物试验和初步临床试验结果表明，本海藻多糖产品对神经系统具有很强的抑制作用，具有明显的镇静、安神和催眠等作用，可用作镇静、安神、催眠的药品或作为具有这类药用功能的保健品或食品。
本发明采用现代科学方法，对所述的海藻原料中的药用保健成分进行分离提纯，所制得的海藻多糖产品安全无毒，其制备方法可靠易行，适宜大规模生产，不污染环境，成本低。
本发明良好的镇静、安神和催眠作用，已经过动物实验证明，现将它的主要药效学实验报告如下：
                           药效试验结果
I.样品来源：中国科学院南海海洋研究所提供的本海藻多糖(简称GPG)产品
II.实验动物：NIH纯系小白鼠，由广东省医用动物饲养场提供
III.试验方法与结果：
(一).对小鼠一般行为活动的影响试验
取健康小鼠170只，体重20+2g，雌雄各半，随机分17组，用于灌胃给药的有8个不同剂量组，用于腹腔注射给药的有9个不同剂量组。给药后连续观察和记录小鼠在24小时内的行为外观症状。
(二).口服给药与巴比妥类药物的协同作用
1、对戊巴比妥钠睡眠时间的影响
预试验得出使小鼠100％入睡，但又不使睡眠时间过长的戊巴比妥钠剂量为30mg/kg，小鼠体重20-25g，随机分7组，给药组口服一定剂量的海藻GPG多糖，药物出现峰作用前10-15分钟，给动物腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg，观察海藻GPG多糖对戊巴比妥钠睡眠时间的延长作用。结果见表1。
             表1  口服给药对戊巴比妥钠睡眠时间的影响组別               剂量mg/kg     动物数只      出现睡眠百分率％   平均睡眠时间分钟    P值戊巴比妥钠组       30            10            100                20.75+5.94高GPG组            1400          10            0                  0中GPG组            1050          10            0                  0低GPG组            700           10            0                  0高GPG+戊           1400+30       10            100                52.05+3.51*        ＜0.01中GPG+戊           1050+30       10            100                42.70+4.49*        ＜0.01低GPG+戊           700+30        10            100                28.45+4.54*        ＞0.05
*与戊巴比妥钠组比较
2、对戊巴比妥钠阈下催眠剂量试验
预试验得出戊巴比妥钠阈下催眠剂量，即90-100％小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥钠最大剂量为25mg/kg。小鼠体重20-25g，随机分7组，给药组口服一定剂量的海藻GPG多糖，药物出现峰作用前10-15分钟，腹腔注射戊巴比妥钠25mg/kg，观察口服给药动物出现睡眠数。结果见表2。
              表2  服给药对戊巴比妥钠阈下催眠剂量试验组别        剂量mg/kg        动物数(只)       出现睡眠数(只)      未出现睡眠数(只)        P值戊巴比妥钠          25              10         0        10高GPG组             1400            10         0        10中GPG组             1050            10         0        10低GPG组             700             10         0        10高GPG+戊            1400+25         10         10       0        ＜0.01中GPG+戊            1050+25         10         8        2        ＜0.01低GPG+戊            700+25          10         7        3        ＜0.01
3、再入睡试验
小鼠体重20-25g，随机分4组，给予睡眠剂量30mg/kg的戊巴比妥钠，小鼠睡眠醒来后立即口服一定剂量的海藻GPG多糖，观察口服给药动物出现的再入睡数。结果见表3。
                      表3  口服给药再入睡试验组别            剂量mg/kg         动物数(只)        出现再入睡数(只)       未出现再入睡数(只)       P值戊巴比妥钠      30                10                0                      10高GPG组         1400+30           10                10                     0                        ＜0.01中GPG组         1050+30           10                9                      1                        ＜0.01低GPG组         700+30            10                7                      3                        ＜0.01
(三).腹腔注射给药与巴比妥类药物的协同作用
1.对戊巴比妥钠睡眠时间的影响
方法与(二)1相同，给药途径为腹腔注射。观察腹腔注射海藻GPG多糖对戊巴比妥钠睡眠时间的延长作用。结果见表4。
                     表4  腹腔注射给药对戊巴比妥钠睡眠时间的影响组别             剂量mg/kg          动物数只        出现睡眠百分率％       平均睡眠时间分钟        P值戊巴比妥钠       30                 10              100                    18.80+4.55高GPG组          280                10              0                      0中GPG组          210                10              0                      0低GPG组          140                10              0                      0高GPG+戊         280+30             0               100                    34.50+5.40*             ＜0.05中GPG+戊         210+30             10              100                    28.75+3.58*             ＜0.05低GPG+戊         140+30             10              100                    29.10+5.91*             ＜0.05
*与戊巴比妥钠组比较2.戊巴比妥钠阈下催眠剂量试验
预试验得出戊巴比妥钠阈下催眠剂量为18mg/kg。方法与(二)2相同，给药途径为腹腔注射。观察腹腔注射海藻GPG多糖后动物出现睡眠数。结果见表5。
             表5  腹腔注射给药对戊巴比妥钠阈下催眠剂量试验
组别            剂量mg/kg      动物数只      出现睡眠数只    未出现睡眠数只      P值
戊巴比妥钠      18             10            1               9
高GPG组         280            10            0               10
中GPG组         210            10            0               10
低GPG组         140            10            0               10
高GPG+戊        280+18         10            10              0                  ＜0.01
中GPG+戊        210+18         10            9               1                  ＜0.01
低GPG+戊        140+18         10            2               8                  ＞0.05
3.再入睡试验
方法与(二)3相同，给药途径为腹腔注射。观察腹腔注射海藻GPG多糖后动物出现的再入睡数。结果见表6。
                    表6  腹腔注射给药再入睡试验
组别              剂量mg/kg       动物数(只)      出现睡眠数(只)       未出现睡眠数(只)      P值
戊巴比妥钠        30              10              0                    10
高GPG+戊          280+30          10              10                   0                     ＜0.01
中GPG+戊          210+30          10              10                   0                     ＜0.01
低GPG+戊          140+30          10              7                    3                     ＜0.01
结论：
1.海藻GPG多糖对动物试验具有很明显的镇静催眠作用，表现为动物活动减少，安静，随剂量的提高作用加强，动物出现睡眠。
2.海藻GPG多糖能使动物自主活动减少。
3.海藻GPG多糖与巴比妥类药物合用有协同作用。二种给药途径均可延长戊巴比妥钠的睡眠时间，同时与戊巴比妥钠阈下催眠剂量试验中，90％以上小鼠发生睡眠。在再入睡试验中，小鼠出现再入睡。
上述试验表明口服及腹腔注射二种途经给予海藻GPG多糖，对实验动物的中枢神经系统均有较强的抑制作用，既具有明显的镇静、催眠等作用。
实施例一
取干海藻(红藻门Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳节藻属Galaxaura Lamx.的海藻)2公斤，粉碎后，加浓度为95％的乙醇2倍量(重量)，浸泡5次，滤布过滤出浸泡液，在80℃下减压蒸干；蒸干物加丙酮浸泡8小时，框滤出滤液，加乙酸乙酯，搅拌后静置1小时，分层后除去上层含叶绿素部分的层液，再用离子渗析法脱盐，然后用酸性离子交换和碱性离子交换，离交下柱液加氨水中和至中性，加入乙醇有沉淀物产生，取沉淀物用无水乙醇洗涤三次；再用701阴离子交换树脂及724阳离子交换树脂截取分子量为500～50000道尔顿的多糖，最后用高压液相色谱分离、提纯得分子量为2000～12000道尔顿的多糖，然后在80℃下烘干1小时，粉碎烘干物，即得本浅黄色海藻多糖。
实施例二
将所述的干海藻粉碎后，称2公斤，加95％甲醇约2倍量，浸泡5次，滤布过滤出浸泡液，在60℃下减压蒸干；蒸干物加乙醇浸泡6小时，框滤出滤液浓缩，回收乙醇；浓缩物加苯，搅拌后静置1小时，分层后除去上层含叶绿素部分的层液，用离子交换柱脱盐，离交下柱液加氨水中和至中性，加入乙醇有沉淀物产生，用无水乙醇洗涤沉淀物五次，再用701阴离子交换树脂及724阳离子交换树脂截取分子量为500～50000道尔顿的多糖；最后用高压液相色谱分离、提纯得分子量为500～10000道尔顿的多糖，然后经喷雾干燥即得本浅黄色海藻多糖。
实施例三
将所述的干海藻粉碎后，称2公斤，加95％甲醇约2倍量，浸泡5次，滤布过滤出浸泡液，在60℃下减压蒸干，回收乙醇；蒸干物加异丙醇浸泡6小时，过滤出滤液浓缩；浓缩物加苯，搅拌后静置1小时，分层后除去上层含叶绿素部分的层液，用离子交换柱脱盐，离交下柱液加氨水中和至中性，加入乙醇有沉淀物产生，用无水乙醇洗涤沉淀物三次，再用701阴离子交换树脂及732阳离子交换树脂截取分子量为500～50000道尔顿的多糖，然后用高压液相色谱分离、提纯得分子量为2000～50000道尔顿的多糖，最后在80℃下烘干1小时，粉碎烘干物，即得本浅棕色海藻多糖。

Claims (9)

1.一种海藻多糖，其特征在于为海洋植物中的红藻门Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳节藻属Galaxaura Lamx.的海藻所提取分离的有效部位多糖，其分子量在500～50000道尔顿之间，固态呈浅黄色至浅棕色，用高压液相色谱分析，主要由以下单糖组成：90～98％的葡萄糖醛酸、1～8％的海藻糖及少量的阿拉伯糖和葡萄糖，糖溶液的pH＜7。
2.按权利要求1所述的海藻多糖，其特征在于该海藻多糖的分子量在500～20000道尔顿之间。
3.按权利要求1所述的海藻多糖，其特征在于该海藻多糖的分子量在2000～12000道尔顿之间。
4.权利要求1所述的海藻多糖的制备方法，其特征在于以海洋植物中的红藻门Rhofophys，海索面目Nemaliales，粘皮藻科Chaetangiaceae，乳节藻属GalaxauraLamx.的海藻为原料，其制备工艺步骤如下：
(1)干海藻粉碎后称量；
(2)用非脂性溶剂的水溶液浸泡，所说的非脂性溶剂为乙醇、甲醇、丙醇或乙二醇的水溶液；
(3)过滤出浸泡液；
(4)浸泡液在减压蒸干；
(5)有机溶剂浸泡蒸干物5～10小时，所说的有机溶剂为乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮、丁醇、二甲基甲胺或二甲亚砜；
(6)过滤，取滤液；
(7)所得的滤液加入有机溶剂，搅拌后静置，使分层，除去上层含叶绿素部分的层液，所说的有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯、苯、甲苯、二甲苯或60～90℃的石油醚；
(8)将除去叶绿素后的滤液通过离子交换柱或离子渗析方法脱盐；
(9)将经脱盐的滤液先用酸性离子交换，再用碱性离子交换去蛋白；
(10)对步骤(9)经离子交换后所得的滤液加氨水中和至中性；
(11)再加入乙醇，形成沉淀物；
(12)取沉淀物，用无水乙醇洗涤；
(13)再先后经阴离子交换树脂和阳离子交换树脂截取得分子量为500～50000道尔顿的多糖；
(14)将上述所得物浓缩后，烘干，粉碎，或者直接将浓缩物喷雾干燥，即得本海藻多糖产品。
5.按权利要求4所述的海藻多糖的制备方法，其特征在于所述的步骤(1 3)的所得物可进一步纯化，用高压液相色谱分离、提纯得分子量为500～20000道尔顿的多糖，以后再继续所述的步骤(14)即可得精制的海藻多糖产品。
6.按权利要求4所述的海藻多糖的制备方法，其特征在于所述的步骤(13)的所得物可进一步纯化，用高压液相色谱分离、提纯得分子量为2000～12000道尔顿的多糖，以后再继续所述的步骤(14)即可得精制的海藻多糖产品。
7.按权利要求4所述的海藻多糖的制备方法，其特征在于所述的步骤(12)中，所述的沉淀物用无水乙醇洗涤3～5次。
8.按权利要求4所述的海藻多糖的制备方法，其特征在于所述的步骤(13)中，所述的阴离子交换树脂采用701或弱碱330阴离子交换树脂；所述的阳离子交换树脂采用724或弱酸101或732阳离子交换树脂。
9.一种权利要求1～3所述的海藻多糖作为镇静、安神和催眠药品的用途。
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