CN110448545A - 大蒜素在减少脂筏稳定性中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了大蒜素在减少脂筏稳定性中的应用，本发明首次发现一定剂量的大蒜素能够抑制小鼠乳腺组织中脂筏形成和/或降低脂筏含量，从而有效减少乳腺细胞中脂筏稳定性；因此，大蒜素可以作为一种新型的脂筏抑制剂，为治疗与脂筏相关疾病的药物开发提供了技术支持。

Description

大蒜素在减少脂筏稳定性中的应用

技术领域

本发明涉及大蒜素的医药用途技术领域，具体涉及大蒜素在减少脂筏稳定性中的应用。

背景技术

脂筏是一种富含胆固醇和鞘磷脂的液态有序相动态微区，直径在50-350nm，所谓微区是指普遍存在于生物膜的，因为生物膜成分互不相溶而形成的分相，比如液晶相和凝胶相所形成的分相。而脂筏是这样一种含有特殊的酯类和蛋白质的微区。脂筏主要由胆固醇、鞘脂类和一些特殊的蛋白组成的。鞘脂类是一类以鞘氨醇为骨架的复杂化合物，主要分为鞘磷脂、鞘糖脂和神经酰胺。其中鞘磷脂主要由脂肪酸、鞘氨醇和磷酸胆碱组成；鞘糖脂主要由脂肪酸、鞘氨醇和糖组成；神经酰胺作为鞘磷脂的一种特殊形式，亦在脂筏中发挥很重要的作用。脂筏中主要的特殊蛋白有4种，包括小窝蛋白、浮舰蛋白、GPI锚固蛋白和棕榈酰蛋白。小窝蛋白主要有三种，包括小窝蛋白-1、-2、-3，其中前2种小窝蛋白还有不同的亚型。小窝蛋白-1有两种亚型，分别是小窝蛋白-1α和小窝蛋白-1β；小窝蛋白-2有三种亚型，包括小窝蛋白-2α、2β、2γ。浮舰蛋白属于膜镶嵌蛋白家族，主要有flotillin-1和-2。GPI锚固蛋白如叶酸受体。棕榈酰蛋白如流感病毒血凝素B-分泌酶(BACE)，此外，胆固醇也是脂筏中重要的成分，对脂筏的形成与结构的稳定发挥作用。

脂筏不仅参与蛋白质和胆固醇的转运，亦在细胞包纳和胞吐过程中扮演重要角色，其主要是与胞纳有关的功能。在此功能基础上，越来越多的研究表明脂筏在细菌与病毒的感染过程中扮演重要的角色，并且脂筏在病原微生物感染中的作用也逐渐成为人们研究的热点之一。在细菌的感染过程中，脂筏发挥着重要的功能，有许多研究表明，当脂筏的结构和功能遭到破坏时，细菌感染的过程将受到明显的阻碍，其作用主要表现为：(1)在细菌感染的一系列过程中所需要的相关蛋白与分子都存在于脂筏上，脂筏通过募集这些相关的蛋白与分子为细菌的感染提供平台，介导病原体的内吞过程；(2)细菌通过与脂筏上信号因子的相互作用，引起细胞活化，激发生物效应。同样，在病毒入胞、复制、装配等过程中，脂筏也发挥十分重要的作用，首先，病毒的内吞入胞方式主要可分为两大类，一类是经典的病毒入胞途径—网格蛋白介导的病毒内吞；另一类是依赖胆固醇的病毒入胞途径。在病毒入胞的过程中，一方面脂筏可通过募集相关的信号分子参与病毒与受体的结合，另一方面可通过信号的转导诱发小窝的内陷、开口的封闭和内吞泡的形成。其次，在病毒复制过程中，脂筏也发挥重要的作用，有研究表明脂筏能影响丙型肝炎病毒的复制。最后，脂筏在病毒的生命周期的其他阶段，比如病毒的装配和出芽过程中亦有重要作用。

大蒜素是大蒜中的有效成分之一，纯品大蒜素为无色油状物，具有大蒜异味；稍溶于水，溶于乙醇、苯、乙醚等有机溶剂；对热和碱不稳定，对酸较稳定；对皮肤有刺激性，对许多革兰氏阳性和阴性细菌及真菌有很强的抑制作用。大蒜素的结构式如下：

现有研究表明，大蒜素具有多种药理活性，例如：抗肿瘤、降血压和血脂、抗血小板聚集、抗氧化、抗衰老及记忆力下降、抗微生物活性等。但还未见有关于大蒜素能够减少脂筏稳定性的报道。

发明内容

针对上述现有技术，本发明首次研究发现，大蒜素能够有效减少小鼠乳腺细胞中脂筏的形成，并且呈现剂量效应。

本发明的第一方面，提供大蒜素在作为脂筏抑制剂中的用途。

本发明的第二方面，提供大蒜素在制备减少乳腺细胞中脂筏稳定性的药物中的用途。

优选的，上述用途中，所述大蒜素通过抑制脂筏形成和/或降低脂筏含量来减少乳腺细胞中脂筏稳定性。

优选的，上述用途中，所述乳腺细胞为小鼠乳腺细胞。

优选的，上述用途中，所述大蒜素的有效剂量为25mg/kg-100mg/kg。

本发明的第三方面，提供一种减少小鼠乳腺细胞脂筏稳定性的药物，所述药物以25mg/kg-100mg/kg的大蒜素为有效成分。

本发明的有益效果：

本发明首次发现一定剂量的大蒜素能够抑制小鼠乳腺组织中脂筏形成和/或降低脂筏含量，从而有效减少乳腺细胞中脂筏稳定性；因此，大蒜素可以作为一种新型的脂筏抑制剂，为治疗与脂筏相关疾病的药物开发提供了技术支持。

附图说明：

图1：大蒜素对乳腺脂筏的影响；图中：A为对照组，B为感染组，C为地塞米松组，D为大蒜素低剂量组，E为大蒜素中剂量组，F为大蒜素高剂量组。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

正如背景技术部分介绍的，脂筏具有多种生理功能，特别是在细菌与病毒的感染过程中发挥着重要作用，当脂筏的结构和功能遭到破坏时，细菌感染的过程将受到明显的阻碍。因此，开发能够减少脂筏稳定性的物质，将对抗细菌和病毒感染药物的研究具有重要的意义。但现有报道的能够作为脂筏抑制剂的成分较少。

本发明在试验过程中意外的发现，大蒜素能够抑制小鼠乳腺组织中脂筏形成和/或降低脂筏含量，从而有效减少乳腺细胞中脂筏稳定性；而且呈现剂量效应，大蒜素能够发挥上述功效的有效剂量为25mg/kg-100mg/kg。因此，大蒜素可以作为一种新型的脂筏抑制剂，由此，提出了本发明。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。

本发明实施例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。

实施例1：大蒜素对小鼠乳腺组织中脂筏稳定性的影响

1.材料与方法

1.1实验材料：

所采用的小鼠为成年产后雌性BALB/c小鼠，共60只(8～10周龄，体重25～30g)。所有小鼠均由湖北实验动物中心提供。所有动物实验均按照美国国立卫生研究院的《实验室动物护理和使用指南》进行，并经华中农业大学动物护理和使用机构委员会批准。

大蒜素(纯度>99.8％)均购自国家医药生物制品控制研究所(北京)，并溶于生理盐水中。

金黄色葡萄球菌(ATCC 35556)购自American Type Culture Collection(Manassas,VA,USA)。

1.2实验分组及管理：

将实验小鼠随机分为以下六组：

A：空白对照组，小鼠不做任何处理。

B：感染组，小鼠体内注射金黄色葡萄球菌，具体为：金黄色葡萄球菌细胞在1000μL磷酸盐缓冲盐水中重悬(菌落形成单位为每30μL中2×10⁸CFU)，每个乳房用100μL悬浮液；将金黄色葡萄球菌悬浮液注射到乳腺乳头管内以感染乳腺。

C：地塞米松组，小鼠体内注射金黄色葡萄球菌(同感染组)，腹腔注射地塞米松。

D：大蒜素低剂量组，小鼠体内注射金黄色葡萄球菌(同感染组)，腹腔注射大蒜素25mg/kg。

E：大蒜素中剂量组，小鼠体内注射金黄色葡萄球菌(同感染组)，腹腔注射大蒜素50mg/kg。

F：大蒜素高剂量组，小鼠体内注射金黄色葡萄球菌(同感染组)，腹腔注射大蒜素100mg/kg。

治疗结束后，CO₂吸入法处死小鼠，取其乳腺，-80℃保存至分析。

1.3组织学分析：

用10％福尔马林固定乳腺组织一周。用石蜡包埋样品，二甲苯脱蜡，分级醇复水染色。切片用苏木精、伊红染液染色，显微镜观察。石蜡包埋切片采用flotillin-1脂筏标记蛋白免疫组化法，在电镜下观察脂筏。

2.实验结果

使用flotillin-1蛋白免疫荧光标记检测乳腺组织切片中的脂筏，结果见图1，由图可见，感染组的脂筏含量明显高于对照组(图中绿色荧光是脂阀特有的蛋白，它含量越多表明脂阀存在较多；感染组由于损害较大组织结构已经不完整了，但其绿色荧光存在的比率相对较高)；与感染组相比，大蒜素能够显著降低小鼠乳腺组织中的脂筏含量，且小鼠乳腺脂筏含量的降低呈剂量依赖性。

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (6)

1.大蒜素在作为脂筏抑制剂中的用途。

2.大蒜素在制备减少乳腺细胞中脂筏稳定性的药物中的用途。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述大蒜素通过抑制脂筏形成和/或降低脂筏含量来减少乳腺细胞中脂筏稳定性。

4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述乳腺细胞为小鼠乳腺细胞。

5.根据权利要求2或4所述的用途，其特征在于，所述大蒜素的有效剂量为25mg/kg-100mg/kg。

6.一种减少小鼠乳腺细胞脂筏稳定性的药物，其特征在于，所述药物以25mg/kg-100mg/kg的大蒜素为有效成分。