CN110346345A - 一种高敏dna水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法 - Google Patents
一种高敏dna水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110346345A CN110346345A CN201910482819.9A CN201910482819A CN110346345A CN 110346345 A CN110346345 A CN 110346345A CN 201910482819 A CN201910482819 A CN 201910482819A CN 110346345 A CN110346345 A CN 110346345A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- uranyl ion
- dna
- detection method
- dna hydrogel
- hydrogel
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/65—Raman scattering
- G01N21/658—Raman scattering enhancement Raman, e.g. surface plasmons
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种高敏DNA水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法,包括以下步骤:首先,制备具有SERS性能的基底材料,接着,将拉曼探针分子RhB包埋在对铀酰离子响应的高特异性DNA水凝胶中,其次,将制备好的水凝胶涂覆到SERS基底材料表面,由于铀酰离子对DNA生物探针的催化反应,导致DNA在底物链的rA处发生断裂,从而释放出包埋于其中的拉曼探针分子RhB;再次,释放的拉曼探针分子吸附到SERS基底表面,利用拉曼光谱仪检测,根据探针分子RhB的峰强度,间接检测铀酰离子。本发明建立的检测方法具有灵敏度高、选择性好、抗基体干扰能力强、简单快速等优点,具有可推广的可能性。
Description
技术领域
本发明涉及一种痕量铀酰离子的检测方法,具体涉及一种基于SERS技术快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法,属于水环境中痕量离子的检测领域。
背景技术
水凝胶是一种能够在水环境中发生溶胀的亲水性高分子聚合物,通过物理交联或者化学交联制备。凝胶结构又可以称为“智能水凝胶”,能够响应如温度,pH,离子强度和溶剂组成等多种环境参数。DNA交联水凝胶的出现,很好的促进了水凝胶传感器的应用范围。其中,脱氧核酶(DNAzyme)是一类具有催化功能的DNA片段。功能核酸分子功能的多样性可以通过DNAzyme的催化反应来体现,其中包括,光逆转,DNA连接,RNA切割,磷酸化。DNAzyme其中一个非常重要的性质,是通过金属离子的存在(如铅离子,汞离子,铀酰离子,铜离子等)对特定的位点进行识别和切割。当金属离子存在时,DNAzyme在自由体系中会形成类似环形的二级结构,在金属离子的存在下,切割特定的识别位点,使得rA位点裂解。科学家利用DNAzyme与金属离子相互作用的特点,将脱氧核酶开发成能够监测金属离子的生物传感器。这样的生物传感器对待测金属离子有很高的专一性和特异性。
传统的检测方法利用大型仪器检测铀酰离子,如ICP-MS,原子吸收光谱等。具有较高的操作要求,检测成本高,时间长,需要复杂的样品前处理过程。表面增强拉曼技术(SERS)是一种新型的痕量分析技术,具有可直接检测,前处理简单,检测时间短,效率高,灵敏度高等优点。尤其适用于检测铀酰离子这类危险性物质中。
发明内容
利用DNAzyme构筑水凝胶生物传感器,结合SERS技术开展铀酰离子的痕量检测研究,可以更好的响应天然水样品中的铀酰离子,快速,准确,灵敏,便捷的对痕量铀酰离子进行检测。
本发明提供了一种高敏DNA水凝胶对铀酰离子的检测方法,利用包含有能与铀酰离子有特异性响应的DNA酶,捕捉底物链序列的DNA单链,以及两条末端键合有丙烯酰胺的DNA核苷酸序列,四条DNA核苷酸序列可以将信报分子包裹,形成DNA水凝胶传感器。将DNA水凝胶传感器涂覆到SERS柔性基底表面,高分子材料之间具有很好的相容性,当铀酰离子溶液滴到涂覆有DNA水凝胶的SERS柔性基底表面时,对铀酰离子有特异性催化作用的rA位点发生断裂,水凝胶表面出现了破口,包覆于水凝胶内部的信报分子通过破口溃流出来,吸附到SERS基底表面,利用拉曼光谱仪检测,间接得到铀酰离子的检测信号。
本发明利用DNA水凝胶作为生物传感器对铀酰离子的最低检测浓度为10-12M,能够超灵敏检测铀酰离子,有效解决了现有检测技术灵敏度和选择性不高的问题。同时,本发明具有简单、方便、易于携带,能实时、在线检测铀酰离子的浓度,具有很好的应用前景。
为达到上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种高敏DNA水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法,其特征在于包括如下步骤:
步骤一,制备具有SERS性能的基底材料;
步骤二,将有机分子探针包埋在对铀酰离子响应的高特异性DNA水凝胶中;
步骤三,将步骤二制备好的DNA水凝胶涂覆到具有SERS性能的基底材料表面,利用铀酰离子对DNA生物探针的催化反应,使DNA在底物链的rA处发生断裂,从而释放出包埋于其中的有机分子探针;
步骤四,释放的有机分子探针吸附到SERS基底表面,利用拉曼光谱仪检测,根据有机分子探针的峰强度,间接检测铀酰离子的浓度。
具有SERS性能的基底材料是以纳米硅柱阵列为模板,先利用纳米压印技术,获得柔性聚氨酯阵列基底,基底表面具有有序的纳米阵列结构,随后通过磁控溅射纳米银构筑复合SERS基底。
优选的,所述有机分子探针为拉曼探针分子,如RhB。
对铀酰离子响应的高特异性DNA水凝胶具有特定序列的DNA核苷酸序列组成,包括两条5’修饰丙烯酰胺的DNA高聚链,一条能与铀酰离子有特异性响应的底物链,一条与底物链退火双链的酶链;其中,高聚链包括:单链A1:GACACTTTTACACCGCTATT 5’-3’,其中5位修饰有acrydite;单链A2:CTACAAAAACACATTAGCCG 5’-3’,其中5位修饰有acrydite;底物链部分:TTAATCACTCACTATrAGGAAGAGATGGACGTG 5’-3’;酶链部分:CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAGTGAGT 5’-3’。
步骤二中,高特异性DNA水凝胶中,各DNA链的浓度为50μM-1mM。
步骤三中,所述高特异性DNA水凝胶与铀酰离子的反应时间为30min-3h。
步骤四中,释放的有机分子探针吸附到SERS基底表面的时间为10-30min。
由上述对本发明的描述可知,与现有的技术相比,本发明的一种高特异性DNA水凝胶对铀酰离子的检测方法灵敏度高,检测结果可靠,且成本低廉,检测迅速,操作检测,具有广泛推广的可能性。
附图说明
图1是本发明实施例一特异性DNA水凝胶的制备过程及铀酰离子检测过程示意图。
图2是本发明实施例一不同浓度的铀酰离子溶液的SERS检测图。
图3是本发明实施例一不同浓度的铀酰离子溶液的标准曲线图。
图4是本发明实施例二中干扰离子测试结果图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例一
1)SERS基底的制备:
先用光刻法结合深硅刻蚀技术,在硅片上刻蚀一定排列方式的纳米硅柱阵列;然后以纳米硅柱阵列为模板,利用模板在柔性聚氨酯材料上压印出具有有序阵列的SERS基底,利用磁控溅射纳米银构筑复合SERS活性基底材料。
2)DNA水凝胶的制备:
将DNA链A1和DNA链A2的线性高分子聚合物PS-A、PS-B按照1:1混合,加入反应缓冲液(25mM HEPES,300mM NaCl,pH 7),之后加入探针分子RhB,再加入DNAzyme底物链和酶链,保证最终浓度PS-A:PS-B:DNAzyme底物链:DNAzyme酶链浓度比为1:1:0.5:1;DNAzyme酶链的浓度为50μM,放置振荡器中震荡,并在20℃保持加热5min,缓慢冷却至室温,直至得到均匀包裹探针分子的三维交联水凝胶。
3)铀酰离子的表面增强拉曼检测:
将步骤2)中包裹了探针分子的DNA水凝胶涂覆到复合SERS基底表面,并滴加上待测的铀酰离子溶液,反应10min后,做拉曼检测。图1是特异性DNA水凝胶的制备过程及铀酰离子检测过程示意图;图2为不同浓度的铀酰离子溶液的SERS检测图;图3为不同浓度的铀酰离子溶液的标准曲线图。
实施例二
1)对其他干扰离子的检测实验:
将实施例一制备的DNA水凝胶SERS生物传感芯片即DNA水凝胶用于检测重金属离子(如Ag+、Mg2+、Fe3+、Cu2+、Ca2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Cd2+、Hg2+、Pb2+、Th4+、Zn2+、Ba2+、Mn2+)水样分别反应一段时间,各重金属离子浓度均为10-9M,并用拉曼光谱仪检测,图4是本发明实施例二中干扰离子测试结果图,从图4可以看出,该DNA水凝胶对铀酰离子具有高特异性,检测其浓度时不受其他重金属离子的干扰,灵敏度高。
尽管这里参照本发明的解释性实施例对本发明进行了描述,但是,应该理解,本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式,这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说,在本申请公开的范围内,可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变型和改进外,对于本领域技术人员来说,其他的用途也将是明显的。
单链A1:acrydite-GACACTTTTACACCGCTATT 5’-3’;
单链A2:acrydite-CTACAAAAACACATTAGCCG 5’-3’;
底物链部分:TTAATCACTCACTATrAGGAAGAGATGGACGTG 5’-3’;
酶链部分:CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAGTGAGT5’-3’。
Claims (8)
1.一种高敏DNA水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法,其特征在于包括如下步骤:
步骤一,制备具有SERS性能的基底材料;
步骤二,将有机分子探针包埋在对铀酰离子响应的高特异性DNA水凝胶中;
步骤三,将步骤二制备好的DNA水凝胶涂覆到具有SERS性能的基底材料表面,利用铀酰离子对DNA生物探针的催化反应,使DNA在底物链的rA处发生断裂,从而释放出包埋于其中的有机分子探针;
步骤四,释放的有机分子探针吸附到SERS基底表面,利用拉曼光谱仪检测,根据有机分子探针的峰强度,间接检测铀酰离子的浓度。
2.根据权利要求1所述的高敏DNA水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法,其特征在于所述的具有SERS性能的基底材料是以纳米硅柱阵列为模板,先利用纳米压印技术,获得柔性聚氨酯阵列基底,基底表面具有有序的纳米阵列结构,随后通过磁控溅射纳米银构筑复合SERS基底。
3.根据权利要求1所述的高敏DNA水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法,其特征在于所述有机分子探针为拉曼探针分子。
4.根据权利要求3所述的高敏DNA水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法,其特征在于所述拉曼探针分子为RhB。
5.根据权利要求1所述的高敏DNA水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法,其特征在于所述对铀酰离子响应的高特异性DNA水凝胶具有特定序列的DNA核苷酸序列组成,包括两条5’修饰丙烯酰胺的DNA高聚链,一条能与铀酰离子有特异性响应的底物链,一条与底物链退火双链的酶链;其中,高聚链包括:单链A1:GACACTTTTACACCGCTATT5’-3’,其中5位修饰有acrydite;单链A2:CTACAAAAACACATTAGCCG5’-3’,其中5位修饰有acrydite;底物链部分:TTAATCACTCACTATrAGGAAGAGATGGACGTG5’-3’;酶链部分:CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAGTGAGT5’-3’。
6.根据权利要求1或5所述的高敏DNA水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法,其特征在于所述高特异性DNA水凝胶中,各DNA链的浓度为50μM-1mM。
7.根据权利要求1所述的高敏DNA水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法,其特征在于步骤三中,所述高特异性DNA水凝胶与铀酰离子的反应时间为30min-3h。
8.根据权利要求1所述的高敏DNA水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法,其特征在于步骤四中,释放的有机分子探针吸附到SERS基底表面的时间为10-30min。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910482819.9A CN110346345A (zh) | 2019-06-04 | 2019-06-04 | 一种高敏dna水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910482819.9A CN110346345A (zh) | 2019-06-04 | 2019-06-04 | 一种高敏dna水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110346345A true CN110346345A (zh) | 2019-10-18 |
Family
ID=68181520
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910482819.9A Pending CN110346345A (zh) | 2019-06-04 | 2019-06-04 | 一种高敏dna水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110346345A (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112844325A (zh) * | 2020-09-15 | 2021-05-28 | 海南大学 | 一种用于海水提铀的特异性dna水凝胶材料及其制备方法 |
CN112941152A (zh) * | 2020-10-12 | 2021-06-11 | 中国工程物理研究院材料研究所 | 一种基于纯dna功能水凝胶的有害金属离子检测方法 |
CN114088682A (zh) * | 2021-10-26 | 2022-02-25 | 中国工程物理研究院材料研究所 | 一种表面增强拉曼光谱检测铀氧化物的方法 |
CN114414337A (zh) * | 2022-01-21 | 2022-04-29 | 山东大学 | 一种基于dna凝胶的铅离子快速检测方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107543813A (zh) * | 2017-08-22 | 2018-01-05 | 中国工程物理研究院化工材料研究所 | 一种表面增强拉曼有序复合阵列芯片的制备方法及其应用 |
CN108593626A (zh) * | 2018-05-29 | 2018-09-28 | 中国工程物理研究院化工材料研究所 | 基于sers技术快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法 |
CN108709880A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-10-26 | 中国工程物理研究院化工材料研究所 | 可重复使用的高通量sers微流控芯片及其应用 |
-
2019
- 2019-06-04 CN CN201910482819.9A patent/CN110346345A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107543813A (zh) * | 2017-08-22 | 2018-01-05 | 中国工程物理研究院化工材料研究所 | 一种表面增强拉曼有序复合阵列芯片的制备方法及其应用 |
CN108709880A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-10-26 | 中国工程物理研究院化工材料研究所 | 可重复使用的高通量sers微流控芯片及其应用 |
CN108593626A (zh) * | 2018-05-29 | 2018-09-28 | 中国工程物理研究院化工材料研究所 | 基于sers技术快速检测水环境中痕量铀酰离子的方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
HE YI等: "Switchable Target-Responsive 3D DNA Hydrogels As a Signal Amplification Strategy Combining with SERS Technique for Ultrasensitive Detection of miRNA 155", 《ANALYTICAL CHEMISTRY》 * |
何璇等: "基于三维纳米阵列结构的表面增强拉曼技术研究及其在痕量铀酰离子探测中的应用", 《核化学与放射化学》 * |
黄艺顺等: "铀响应的DNA 水凝胶设计合成及结合微流控芯片的距离可视化检测应用", 《中国科技论文在线精品论文》 * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112844325A (zh) * | 2020-09-15 | 2021-05-28 | 海南大学 | 一种用于海水提铀的特异性dna水凝胶材料及其制备方法 |
CN112844325B (zh) * | 2020-09-15 | 2022-01-28 | 海南大学 | 一种用于海水提铀的特异性dna水凝胶材料及其制备方法 |
CN112941152A (zh) * | 2020-10-12 | 2021-06-11 | 中国工程物理研究院材料研究所 | 一种基于纯dna功能水凝胶的有害金属离子检测方法 |
CN112941152B (zh) * | 2020-10-12 | 2023-06-23 | 中国工程物理研究院材料研究所 | 一种基于纯dna功能水凝胶的有害金属离子检测方法 |
CN114088682A (zh) * | 2021-10-26 | 2022-02-25 | 中国工程物理研究院材料研究所 | 一种表面增强拉曼光谱检测铀氧化物的方法 |
CN114414337A (zh) * | 2022-01-21 | 2022-04-29 | 山东大学 | 一种基于dna凝胶的铅离子快速检测方法 |
CN114414337B (zh) * | 2022-01-21 | 2023-11-10 | 山东大学 | 一种基于dna凝胶的铅离子快速检测方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110346345A (zh) | 一种高敏dna水凝胶对铀酰离子浓度的检测方法 | |
Chullasat et al. | A facile optosensing protocol based on molecularly imprinted polymer coated on CdTe quantum dots for highly sensitive and selective amoxicillin detection | |
Qi et al. | Impedimetric biosensor based on cell-mediated bioimprinted films for bacterial detection | |
Xu et al. | A molecularly imprinted polypyrrole for ultrasensitive voltammetric determination of glyphosate | |
Chandra et al. | Separation and simultaneous detection of anticancer drugs in a microfluidic device with an amperometric biosensor | |
Tang et al. | Electrochemical immuno-bioanalysis for carcinoma antigen 125 based on thionine and gold nanoparticles-modified carbon paste interface | |
Zaidi et al. | Molecularly imprinted polymer electrochemical sensors based on synergistic effect of composites synthesized from graphene and other nanosystems | |
Liang et al. | A novel amperometric immunosensor based on three-dimensional sol–gel network and nanoparticle self-assemble technique | |
Rocha et al. | Posttreatment of 3D‐printed surfaces for electrochemical applications: A critical review on proposed protocols | |
Xie et al. | Surface molecular imprinting for chemiluminescence detection of the organophosphate pesticide chlorpyrifos | |
Wang et al. | Dendrimer-like amino-functionalized hierarchical porous silica nanoparticle: A host material for 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid imprinting and sensing | |
Wang et al. | Boronic acid based imprinted electrochemical sensor for rutin recognition and detection | |
CN107727717B (zh) | 多氯联苯光电化学适配体传感器的制备方法及应用 | |
Yang et al. | Electrochemical detection of cholesterol based on competitive host–guest recognition using a β-cyclodextrin/poly (N-acetylaniline)/graphene-modified electrode | |
Liu et al. | Direct detection of microRNA-126 at a femtomolar level using a glassy carbon electrode modified with chitosan, graphene sheets, and a poly (amidoamine) dendrimer composite with gold and silver nanoclusters | |
Zengin et al. | Fabrication of a SERS based aptasensor for detection of ricin B toxin | |
Ge et al. | based biosensor relying on flower-like reduced graphene guided enzymatically deposition of polyaniline for Pb2+ detection | |
Li et al. | Simultaneous in situ extraction and self-assembly of plasmonic colloidal gold superparticles for SERS detection of organochlorine pesticides in water | |
Zhao et al. | Selectively electrochemical determination of chloramphenicol in aqueous solution using molecularly imprinted polymer-carbon nanotubes-gold nanoparticles modified electrode | |
Reville et al. | Customizable molecular recognition: Advancements in design, synthesis, and application of molecularly imprinted polymers | |
Ji et al. | Progress on click chemistry and its application in chemical sensors | |
JP2012242394A (ja) | 標的物質検出用キット及びこれを利用した標的物質検出方法 | |
Shahamirifard et al. | A new silver (I) ions optical sensor based on nanoporous thin films of sol–gel by rose bengal dye | |
CN109060790B (zh) | 基于羟基氧化钴纳米片的乙酰胆碱酯酶活性检测试纸条及其制备方法 | |
Song et al. | Ultrasensitive electrochemical detection of Hg 2+ based on an Hg 2+-triggered exonuclease III-assisted target recycling strategy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20191018 |