CN110261509A - 一种测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法 - Google Patents

一种测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法 Download PDF

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陈丽红
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Abstract

本发明提出一种测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法,包括以下步骤:称取5~10g均匀样品于50mL具塞离心管中,加入pH=4.2‑4.6的酸化甲醇溶液、无水硫酸镁、氯化钠涡旋振荡提取2~5min后,高速离心5~10min,取上层清液5~10mL于40℃氮气吹至近干,用流动相复溶定容至1mL,过0.22μm水系微孔滤膜,进行高效液相色谱测定。本发明能简单快速、准确灵敏地对大米中宁南霉素进行定量检测,检出限、回收率、重现性等指标均能满足国家标准相关规定。

Description

一种测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法
技术领域
本发明属于农药残留测定领域,涉及一种测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法。
背景技术
宁南霉素是中科院成都生物研究所研制成功的一种新型高效、低毒、低残留、广谱性生物农药,是从土壤中分离所得诺尔斯链霉菌西昌变种的发酵产物,属胞嘧啶核苷肽型抗菌素类杀菌剂。宁南霉素能系统地诱导植物产生PR蛋白,降低植物体内病毒粒体浓度,破坏病毒粒体结构,从而达到防治作物病毒病的效果。凭借着优异的杀菌性能,宁南霉素已在无公害果蔬种植领域大面积推广应用,潜在市场前景不可估量。随着宁南霉素产品专利到期,预计其产能会显著提升,应用领域也愈加广泛。
宁南霉素对人畜低毒,无致癌、致畸、致突变作用,基本无致敏作用,小白鼠急性毒性口服LD50=6435mg/kg,大白鼠口服LD50=5492mg/kg,鱼类半数耐受浓度为3323mg/L,在使用过程中存在一定药物残留。虽然食品安全国家标准《GB 2763-2016食品中农药最大残留限量》制定了食品中宁南霉素的管控限值,但未提供相应的检测方法。王芳等公开了采用液相色谱测定宁南霉素含量的检测方法和条件,但并未涉及实际样品的提取和检测;宋薇等发明了采用液相色谱串联质谱测定果蔬粮食中宁南霉素残留量的方法,查玉兵等发明了采用超高效液相色谱串联质谱结合QuEChERS样品净化技术测定番茄中宁南霉素含量的方法,然而此类方法检测成本偏高,对试验人员操作要求较高,无法广泛推广应用。因此在食品安全问题日益引起关注的前提下,开发出一种简单易行准确可靠的大米中宁南霉素残留量检测方法具有重大现实意义。
发明内容
为克服现有技术的不足,本发明提出一种测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法,能简单快速、准确灵敏地对大米中宁南霉素进行定量检测,检出限、回收率、重现性等指标均能满足国家标准相关规定。
本发明提出一种测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法,包括以下步骤:
(1)提取净化
称取5~10g均匀样品于50mL具塞离心管中,加入pH=4.2-4.6的酸化甲醇溶液、无水硫酸镁、氯化钠涡旋振荡提取2~5min后,高速离心5~10min,取上层清液5~10mL于40℃氮气吹至近干,用流动相复溶定容至1mL,过0.22μm水系微孔滤膜,供高效液相色谱测定;
(2)高效液相色谱的测试条件
色谱柱选用C18液相色谱柱;流动相为10mmol三氟乙酸溶液:甲醇=90:10;流速为1.0mL/min;进样量为50μL;柱温为30℃;检测器选用紫外检测器,检测波长为268nm。
优选的,所述酸化甲醇溶液为用乙酸调节至pH=4.5的乙酸-甲醇溶液,用量为10~20mL。
优选的,所述无水硫酸镁的用量为2~6g,所述氯化钠的用量为0.5~1g。
优选的,所述高速离心的转速为5000r/min。
本发明的有益效果:
1、本发明基于宁南霉素的理化特性,优选了提取溶剂、净化条件和仪器检测参数,最终确定采用酸化甲醇溶液(乙酸调节pH至4.5)作为提取溶剂,结合振荡提取、氮吹浓缩等技术手段进行样品处理,采用有机试剂与涡旋离心提取法相结合的方式提取大米样品中的宁南霉素,前处理方法简单易行,净化操作高效快捷,使用试剂较少,节约成本。
2、本发明使用高效液相色谱仪结合紫外检测器对宁南霉素残留量进行定性定量检测,准确度高,重复性好,检测成本相对于现有技术大幅降低。
3、本发明所提供的检测方法检出限为1μg/kg,160μg/kg加标水平的回收率为71.6~99.2%,重现性RSD不超过2%。
附图说明
图1为样品空白的色谱图。
图2为0.2μg/mL宁南霉素标准溶液的色谱图。
图3为40μg/kg宁南霉素样品加标溶液的色谱图。
上述附图中,横坐标表示保留时间,纵坐标表示响应强度,检测器为紫外检测器。
具体实施方式
如下结合具体实施例,对本申请方案作进一步描述:
一种测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法,包括以下步骤:
(1)标准溶液配制:准确吸取1000mg/L宁南霉素标准溶液10μL,用甲醇稀释定容至1mL,然后用流动相稀释配制成具有浓度梯度的系列宁南霉素标准溶液,以供高效液相色谱测定。
(2)提取净化:称取10g均匀样品于50mL具塞离心管中,加入20mL酸化甲醇溶液(乙酸调节pH至4.5)、6g无水硫酸镁、1g氯化钠涡旋振荡提取5min后,5000r/min高速离心10min,取上层清液10mL于40℃氮气吹至近干,用流动相复溶定容至1mL,过0.22μm水系微孔滤膜,供高效液相色谱测定。
(3)测试条件:
色谱柱:Thermo C18液相色谱柱(250×4.6mm,5μm)
流动相:10mmol三氟乙酸TFA溶液:甲醇=90:10
流速:1.0mL/min
进样量:50μL
柱温:30℃
检测器:紫外检测器
检测波长:268nm
(4)测定:
A、将本底空白大米样品按步骤(2)操作处理后,处理液按步骤(3)的测定条件进行测试,得到样品空白色谱图,如图1所示。
B、将步骤(1)所得的宁南霉素标准溶液按步骤(3)的测定条件进行测试,其中,0.2μg/mL宁南霉素标准溶液的色谱图如图2所示,时间为3.213min处的色谱峰为宁南霉素目标峰。以宁南霉素标准溶液浓度为横坐标,宁南霉素标准溶液色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线并进行线性拟合得出回归方程。
C、将本底空白大米样品按40μg/kg的添加量加入宁南霉素标准溶液,然后按步骤(3)的测定条件进行测试,得到色谱图如图3所示,时间为3.213min处的色谱峰为宁南霉素目标峰。根据测得的宁南霉素色谱峰面积由回归方程推算出处理液中的宁南霉素浓度即上机浓度。
(5)结果计算:
样品测定结果按下式计算,计算结果需扣除空白值。
式中:X–样品中宁南霉素的残留量,μg/kg;
C–样品溶液中宁南霉素的上机浓度,μg/mL;
V–最终定容体积,mL;
m–样品质量,g;
f–稀释倍数。
本实施例所提供的检测方法检出限为1μg/kg,160μg/kg加标水平的回收率为71.6~99.2%,重现性RSD不超过2%。
上述优选实施方式应视为本申请方案实施方式的举例说明,凡与本申请方案雷同、近似或以此为基础作出的技术推演、替换、改进等,均应视为本专利的保护范围。

Claims (4)

1.一种测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)提取净化
称取5~10g均匀样品于50mL具塞离心管中,加入pH=4.2-4.6的酸化甲醇溶液、无水硫酸镁、氯化钠涡旋振荡提取2~5min后,高速离心5~10min,取上层清液5~10mL于40℃氮气吹至近干,用流动相复溶定容至1mL,过0.22μm水系微孔滤膜,供高效液相色谱测定;
(2)高效液相色谱的测试条件
色谱柱选用C18液相色谱柱;流动相为10mmol三氟乙酸溶液:甲醇=90:10;流速为1.0mL/min;进样量为50μL;柱温为30℃;检测器选用紫外检测器,检测波长为268nm。
2.根据权利要求1所述的测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法,其特征在于,所述酸化甲醇溶液为用乙酸调节至pH=4.5的乙酸-甲醇溶液,用量为10~20mL。
3.根据权利要求1所述的测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法,其特征在于,所述无水硫酸镁的用量为2~6g,所述氯化钠的用量为0.5~1g。
4.根据权利要求1所述的测定大米中宁南霉素残留量的高效液相色谱检测方法,其特征在于,所述高速离心的转速为5000r/min。
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Citations (2)

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Title
TIELONG WANG等: "Dissipation and Residue Determination of Ningnanmycin in Cucumber and Soil by High Performance Liquid Chromatography with Ultraviolet Detector", 《BULL ENVIRON CONTAM TOXICOL》 *
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