CN110063258A - 一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法 - Google Patents

一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法 Download PDF

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夏朝水
周辉明
陈玮婷
莫智龙
曹奕鸯
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Abstract

一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，包括种子处理、愈伤组织诱导、增殖培育与不定芽诱导、生根诱导、练苗移栽这一系列步骤，既可提高红果薄柱草的繁殖系数和速度，又保持了该品种优良性状，节约栽培生产中的用种量，避免花费大量时间和精力，此外，还使得愈伤培养基、增殖培养基和生根培养基分别在基本培养基配方下添加不同配比的营养物质与激素，并且根据不同果色的红果薄柱草产生愈伤和分化、生根的能力选用不同剂量的培养基，有效地控制了成本，提高了生产效率。

Description

一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养，尤其是指一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法。
背景技术
红果薄柱草(Nertera granadensis)，茜草科薄柱草属，多年生匍匐小草本，在太平洋周围有广泛的跨洲分布。浆果球形，橙色或红色。其品种还有白果和黄果。红果薄柱草株型矮小，叶片小而密集，结果数极多，晶圆亮丽的浆果密铺盆面，引人注目，观赏期长，能保持数月不衰，是一种极具观赏价值的微型观果盆栽。
红果薄柱草作为引进品种，深受市场欢迎，市场上价格居高不下，常常有价无市。与传统的繁殖方式相比，利用组织培养技术对红果薄柱草进行快速繁殖，能够大大提高繁殖系数和速度，且不受季节和气候等外界环境因素的影响，全年均可进行。因此，通过组培对红果薄柱草进行产业化生产具有较好的经济效益和市场前景。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，其主要目的在于克服现今红果薄柱草种苗在市场上供应紧张及价格居高不下的态势，在保持种苗性状良好的情况下，提高培育红果薄柱草种苗效率并促进红果薄柱草产业规模进一步提升。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
1)种子处理：选取成熟饱满的红果薄柱草种子，除去果皮果肉，洗净之后，对该种子进行消毒，再用蒸馏水进行冲洗，获得无菌种子；
2)愈伤组织诱导：将所述无菌种子接种到诱导培养基内培养25～40d，获得愈伤组织；培养条件：每天光照16h、温度25±1℃、光照强度1400-1500lux；愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇80～100mg/L、甘氨酸1.0～2.0mg/L、盐酸硫胺素0.1 ～0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.4～1.0mg/L、烟酸0.3～0.6mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.5～1.5mg/L、萘乙酸0.005～0.5 mg/L、蔗糖15～30g/L、琼脂4～5g/L；
3)增殖培育与不定芽诱导：将步骤2获得的愈伤组织切成0.5～1.0cm的小块，再转至增殖培养基内进行扩繁15～20d，诱导出不定芽；培养条件：每天光照15h，温度25±1℃，光照强度1400-1500lux；增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇80～100mg/L、甘氨酸1.0～2.0mg/L、盐酸硫胺素0.1～0.6mg/L、盐酸吡哆醇0.4～1.0mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.1～0.5mg/L、烟酸0.3～0.6mg/L、蔗糖20～30g/L、琼脂4～5g/L；
4)生根诱导：将步骤3制得的不定芽接种至生根培养基中培养15～20d，进行诱导生根；培养条件：每天光照15小时，温度25℃±1℃，光强1500～2000lux；生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭0.5～3.0g/L、含肌醇80～100mg/L、甘氨酸1.0～2.0mg/L、盐酸硫胺素0.1～0.6mg/L、盐酸吡哆醇0.4～1.0mg/L、萘乙酸0.1～0.5 mg/L、烟酸0.3～0.6mg/L、蔗糖20～30g/L、琼脂5～6g/L；
5)练苗移栽：对步骤4制得的再生植株炼苗4～6d，之后移栽至温室。
进一步的，步骤1中，所选取的红果薄柱草种子为可以结出红色果实或白色果实或黄色果实的红果薄柱草种子。
进一步的，步骤1中，所述消毒为：采用7%巴氏消毒液对所述种子消毒5min，并且期间不停搅拌。
进一步的，步骤1中，所述冲洗为：将所述种子上的消毒液洗掉，再将该种子置于超净台上，用无菌蒸馏水冲洗该种子3～５遍。
进一步的，所述愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇80mg/L、甘氨酸1.0mg/L、盐酸硫胺素0.1 mg/L、盐酸吡哆醇0.4mg/L、烟酸0.3mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.005 mg/L、蔗糖15g/L、琼脂4g/L；
所述增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇80mg/L、甘氨酸1.0mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.4mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.1 mg/L、烟酸0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂4g/L；
所述生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭0.5g/L、含肌醇80mg/L、甘氨酸1.0mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.4mg/L、萘乙酸0.1 mg/L、烟酸0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂5g/L。
进一步的，所述愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸1.5mg/L、盐酸硫胺素0.3mg/L、盐酸吡哆醇0.8mg/L、烟酸0.4mg/L、6-苄氨基腺嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.05 mg/L、蔗糖25g/L、琼脂5g/L；
所述增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.6mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.5 mg/L、烟酸0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂4g/L；
所述生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭2.0g/L、含肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.4mg/L、盐酸吡哆醇0.6mg/L、萘乙酸0.3 mg/L、烟酸0.4mg/L、蔗糖20g/L、琼脂5g/L。
进一步的，所述愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.5mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、烟酸0.6mg/L、6-苄氨基腺嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.5 mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L；
所述增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.6mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.5 mg/L、烟酸0.6mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L；
所述生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭3.0g/L、含肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.6mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、萘乙酸0.5 mg/L、烟酸0.6mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L。
和现有技术相比，本发明产生的有益效果在于:
1、本发明采用红果薄柱草种子组织培育方法，既可提高红果薄柱草的繁殖系数和速度，又保持了该品种优良性状，节约栽培生产中的用种量，避免花费大量时间和精力,只需55～80天即可获得试管苗；因此采用本发明的方法可以长期得到大量试管苗。
2、本发明中的愈伤培养基、增殖培养基和生根培养基分别在基本培养基配方下添加不同配比的营养物质与激素，并且根据不同果色的红果薄柱草产生愈伤和分化、生根的能力选用不同剂量的培养基，有效地控制了成本，提高了生产效率。
3、在本发明中，消毒采用7%巴氏消毒液，代替了传统的0.1%升汞，避免了采用0.1%升汞消毒会使红果薄柱草种子萌发延迟甚至会受到抑制的副作用。
附图说明
图1为本发明实施例一中红色果实的红果薄柱草组培阶段中的植株图。
图2为本发明实施例一中红色果实的红果薄柱草组培阶段中的种子萌发图。
图3为本发明实施例一中红色果实的红果薄柱草组培阶段中的愈伤增殖图。
图4为本发明实施例一中红色果实的红果薄柱草组培阶段中的不定芽分化图。
图5为本发明实施例一中红色果实的红果薄柱草组培阶段中的不定芽生根图。
图6为本发明实施例一中黄色果实的红果薄柱草组培阶段中的植株图。
图7为本发明实施例一中黄色果实的红果薄柱草组培阶段中的种子萌发图。
图8为本发明实施例一中黄色果实的红果薄柱草组培阶段中的愈伤增殖图。
图9为本发明实施例一中黄色果实的红果薄柱草组培阶段中的不定芽分化图。
图10为本发明实施例一中黄色果实的红果薄柱草组培阶段中的不定芽分化图。
图11为本发明实施例一中白色果实的红果薄柱草组培阶段中的植株图。
图12为本发明实施例一中白色果实的红果薄柱草组培阶段中的种子萌发图。
图13为本发明实施例一中白色果实的红果薄柱草组培阶段中的愈伤增殖图。
图14为本发明实施例一中白色果实的红果薄柱草组培阶段中的不定芽分化图。
图15为本发明实施例一中白色果实的红果薄柱草组培阶段中的不定芽分化图。
具体实施方式
下面参照附图说明本发明的具体实施方式。
一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一
种子处理：选取成熟饱满的红果薄柱草种子，除去果皮果肉，洗净之后，对该种子进行消毒，再用蒸馏水进行冲洗，获得无菌种子。具体而言：所选取的红果薄柱草种子为可以结出红色果实或白色果实或黄色果实的红果薄柱草种子；该消毒为将除去果皮果肉并洗净之后的红果薄柱草种子置于培养皿中，采用7%巴氏消毒液（其是指有效NaClO含量7%的巴氏消毒液）对该种子消毒5min，并且期间不停搅拌；该冲洗为将种子上的消毒液洗掉，再将该种子置于超净台上，用无菌蒸馏水冲洗该种子3～５遍。
步骤二
愈伤组织诱导：将所述无菌种子接种到诱导培养基内培养25～40d，获得愈伤组织。愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇80～100mg/L、甘氨酸1.0～2.0mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1 ～0.5mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.4～1.0mg/L、烟酸（VB3）0.3～0.6mg/L、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.5～1.5mg/L、萘乙酸（NAA）0.005～0.5 mg/L、蔗糖15～30g/L、琼脂4～5g/L。
具体而言，将接种后的诱导培养基转移至培养箱中以每天光照16h、温度25±1℃、光照强度1400-1500lux(勒克斯)的培养条件培养25～40d；愈伤组织形成的过程为：种子萌发后，在诱导培养基中培养1周后陆续诱导出愈伤组织，继续培养1～2周，可获得大量的愈伤组织。
步骤三
增殖培育与不定芽诱导：将步骤二获得的愈伤组织切成0.5～1.0cm的小块，再转至增殖培养基内进行扩繁15～20d，诱导出不定芽；培养条件：每天光照15h，温度25±1℃，光照强度1400-1500lux；增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇80～100mg/L、甘氨酸1.0～2.0mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1～0.6mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.4～1.0mg/L、6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.1～0.5 mg/L、烟酸（VB3）0.3～0.6mg/L、蔗糖20～30g/L、琼脂4～5g/L。
诱导出不定芽的过程为：愈伤组织转接至增殖培养基后开始持续增殖，1周后开始萌动分化，且速度较快，1～2周后，能生成0.5～2cm高的不定芽。
步骤四
生根诱导：将步骤四制得的不定芽接种至生根培养基中培养15～20d，进行诱导生根；培养条件：每天光照15小时，温度25℃±1℃，光强1500～2000lux；生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭（AC）0.5～3.0g/L、含肌醇80～100mg/L、甘氨酸1.0～2.0mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1～0.6mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.4～1.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.1～0.5 mg/L、烟酸（VB3）0.3～0.6mg/L、蔗糖20～30g/L、琼脂5～6g/L。
具体而言，将增殖培养基中分化得到的不定芽从基部切下，再接种至生根培养基中进行诱导生根，转接至生根培养基中4d后开始生根，持续培养2～3周，生根完成。
步骤五
练苗移栽：对步骤四制得的再生植株炼苗4～6d，之后移栽至温室。
具体而言，打开生根培养基的培养瓶封口，对生根培养基中的再生植株炼苗4～6d，之后便可将生根的红果薄柱草苗移栽至温室进行栽培。
本发明采用红果薄柱草种子组织培育方法，既可提高红果薄柱草的繁殖系数和速度，又保持了该品种优良性状，节约栽培生产中的用种量，避免花费大量时间和精力；并且，本发明中的愈伤培养基、增殖培养基和生根培养基分别在基本培养基配方下添加不同配比的营养物质与激素，并且根据不同果色的红果薄柱草产生愈伤和分化、生根的能力选用不同剂量的培养基，有效地控制了成本，提高了生产效率。除此之外，本发明中的消毒采用7%巴氏消毒液，代替了传统的0.1%升汞，避免了采用0.1%升汞消毒会使红果薄柱草种子萌发延迟甚至会受到抑制的副作用。
实施例一
参照图1～图15。一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
1)分别选取红色、白色、黄色三种果色成熟饱满的种子各100颗，除去果皮果肉，洗净之后，采用7%巴氏消毒液消毒5min，期间不停搅拌；之后清洗掉巴氏消毒液，并用蒸馏水冲洗3～5遍，获得三种果色的无菌种子；
2)愈伤组织诱导：将三种无菌种子分别接种到诱导培养基内培养25～40d，获得愈伤组织；培养条件：每天光照16h、温度25±1℃、光照强度1400-1500lux；愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇80mg/L、甘氨酸1.0mg/L、盐酸硫胺素0.1 mg/L、盐酸吡哆醇0.4mg/L、烟酸0.3mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.005 mg/L、蔗糖15g/L、琼脂4g/L；经过统计，红色果实的红果薄柱草种子诱导愈伤组织率可达到95％，93%都在培养25天之内诱导成功；黄色果实的红果薄柱草种子诱导愈伤组织率可达到78％，72%都在培养25天之内诱导成功；白果实的红果薄柱草种子诱导愈伤组织率只有57％，33%在培养25天之内诱导成功；
3)增殖培育与不定芽诱导：将步骤2获得的三种愈伤组织分别切成0.5～1.0cm的小块，再分别转至增殖培养基内进行扩繁15～20d，诱导出不定芽；培养条件：每天光照15h，温度25±1℃，光照强度1400-1500lux；增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇80mg/L、甘氨酸1.0mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.4mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.1 mg/L、烟酸0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂4g/L；经过统计，红色果实的红果薄柱草愈伤组织诱导不定芽率可达到100％，并且都在培养15天之内诱导成功；黄色果实的红果薄柱草愈伤组织诱导不定芽率可达到96％，86%都在培养15天之内诱导成功；白色果实的红果薄柱草愈伤组织诱导不定芽率只有91％，72％在培养15天之内诱导成功；
4)生根诱导：将步骤3制得的三种不定芽分别接种至生根培养基中培养15～20d，进行诱导生根；培养条件：每天光照15小时，温度25℃±1℃，光强1500～2000lux；生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭0.5g/L、含肌醇80mg/L、甘氨酸1.0mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.4mg/L、萘乙酸0.1 mg/L、烟酸0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂5g/L；经过统计，红色果实的红果薄柱草不定芽诱导生根率可达到98％，93％都在培养15天之内诱导成功；黄色果实的红果薄柱草不定芽诱导生根率可达到97％，88％都在培养15天之内诱导成功；白色果实的红果薄柱草不定芽诱导生根率只有89％，68％在培养15天之内诱导成功。
5)练苗移栽：对步骤4制得的三种再生植株炼苗4～6d，之后分别移栽至温室。
实施例二
一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
1)分别选取红色、白色、黄色三种果色成熟饱满的种子各100颗，除去果皮果肉，洗净之后，采用7%巴氏消毒液消毒5min，期间不停搅拌；之后清洗掉巴氏消毒液，并用蒸馏水冲洗3～5遍，获得三种果色的无菌种子；
2)愈伤组织诱导：将三种无菌种子分别接种到诱导培养基内培养25～40d，获得愈伤组织；培养条件：每天光照16h、温度25±1℃、光照强度1400-1500lux；愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸1.5mg/L、盐酸硫胺素0.3mg/L、盐酸吡哆醇0.8mg/L、烟酸0.4mg/L、6-苄氨基腺嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.05 mg/L、蔗糖25g/L、琼脂5g/L；经过统计，红色果实的红果薄柱草种子诱导愈伤组织率可达到99％，97％在培养25天之内诱导成功；黄色果实的红果薄柱草种子诱导愈伤组织率可达到94％，93％都在培养25天之内诱导成功；白果实的红果薄柱草种子诱导愈伤组织率只有76％，66％在培养25天之内诱导成功。
3)增殖培育与不定芽诱导：将步骤2获得的三种愈伤组织分别切成0.5～1.0cm的小块，再分别转至增殖培养基内进行扩繁15～20d，诱导出不定芽；培养条件：每天光照15h，温度25±1℃，光照强度1400-1500lux；增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.6mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.5 mg/L、烟酸0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂4g/L；经过统计，红色果实的红果薄柱草愈伤组织诱导不定芽率可达到99％，都能在培养15天之内诱导成功；黄色果实的红果薄柱草愈伤组织诱导不定芽率可达到98％，也都能在培养15天之内诱导成功；白色果实的红果薄柱草愈伤组织诱导不定芽率只有89％，81%在培养15天之内诱导成功。
4)生根诱导：将步骤3制得的三种不定芽分别接种至生根培养基中培养15～20d，进行诱导生根；培养条件：每天光照15小时，温度25℃±1℃，光强1500～2000lux；生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭2.0g/L、含肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.4mg/L、盐酸吡哆醇0.6mg/L、萘乙酸0.3 mg/L、烟酸0.4mg/L、蔗糖20g/L、琼脂5g/L；经过统计，红色果实的红果薄柱草不定芽诱导生根率可达到100％，其中98％在培养15天之内诱导成功；黄色果实的红果薄柱草不定芽诱导生根率达到96％，91％在培养15天之内诱导成功；白色果实的红果薄柱草不定芽诱导生根率88％，79％在培养15天之内诱导成功。
5)练苗移栽：对步骤4制得的三种再生植株炼苗4～6d，之后分别移栽至温室。
实施例三
一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
1)分别选取红色、白色、黄色三种果色成熟饱满的种子各100颗，除去果皮果肉，洗净之后，采用7%巴氏消毒液消毒5min，期间不停搅拌；之后清洗掉巴氏消毒液，并用蒸馏水冲洗3～5遍，获得三种果色的无菌种子；
2)愈伤组织诱导：将三种无菌种子分别接种到诱导培养基内培养25～40d，获得愈伤组织；培养条件：每天光照16h、温度25±1℃、光照强度1400-1500lux；愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.5mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、烟酸0.6mg/L、6-苄氨基腺嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.5 mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L；经过统计，红色果实的红果薄柱草种子诱导愈伤组织率可达到96％，都在培养25天之内诱导成功；黄色果实的红果薄柱草种子诱导愈伤组织率可达到97％，也都在培养25天之内诱导成功；白果实的红果薄柱草种子诱导愈伤组织率有87％，82％在培养25天之内诱导成功。
3)增殖培育与不定芽诱导：将步骤2获得的三种愈伤组织分别切成0.5～1.0cm的小块，再分别转至增殖培养基内进行扩繁15～20d，诱导出不定芽；培养条件：每天光照15h，温度25±1℃，光照强度1400-1500lux；增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.6mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.5 mg/L、烟酸0.6mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L；经过统计，红色果实的红果薄柱草愈伤组织诱导不定芽率可达到100％，都能在培养15天之内诱导成功；黄色果实的红果薄柱草愈伤组织诱导不定芽率可达到98％，也都在培养15天之内诱导成功；白色果实的红果薄柱草愈伤组织诱导不定芽率只有88％，85％在培养15天之内诱导成功。
4)生根诱导：将步骤3制得的三种不定芽分别接种至生根培养基中培养15～20d，进行诱导生根；培养条件：每天光照15小时，温度25℃±1℃，光强1500～2000lux；生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭3.0g/L、含肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.6mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、萘乙酸0.5 mg/L、烟酸0.6mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L；经过统计，红色果实的红果薄柱草不定芽诱导生根率可达到99％，98%在培养15天之内诱导成功；黄色果实的红果薄柱草不定芽诱导生根率达到98％，95％在培养15天之内诱导成功；白色果实的红果薄柱草不定芽诱导生根率91％，88％在培养15天之内诱导成功。
5)练苗移栽：对步骤4制得的三种再生植株炼苗4～6d，之后分别移栽至温室。
从上述三个实施例可看出，在本发明中不同果色的红果薄柱草对营养物质与激素溶度反应不同，随着溶度上升，白色果实的红果薄柱草的分化生殖效率明显上升，黄色果实的红果薄柱草次之，红色果实的红果薄柱草反应最弱。且红色果实的红果薄柱草对营养物质与激素溶度要求最低，分化生殖效率最高。具体的为：
实施例一与实施例二相比较，在各培养基上都相应的提高了添加的营养物质和激素的量，各果色的红果薄柱草在70天内的出苗率都得到提升。其中， 红色果实的红果薄柱草从86.49%升至94.11%，黄色果实的红果薄柱草从54.49%升至82.93%，白色果实的红果薄柱草从16.16%升至42.23%。
在实施例二的基础上，实施例三再次上调了各添加的营养物质和激素的量。黄色果实和白色果实的红果薄柱草也都在70天内的出苗率得到提升。黄色果实薄柱草从82.93%升至90.31%，白色果实的红果薄柱草从42.23%升至61.34%。
实施例一、二、三中红色果实的红果薄柱草组培各阶段成功率表
愈伤诱导率（%）-30天内 增殖和不定芽诱导率（%）-20天内 生根诱导率（%）-20天内 出苗率（%）-70天内
实施例一 93 100 93 86.49
实施例二 97 99 98 94.11
实施例三 96 100 98 94.08
实施例一、二、三中黄色果实的红果薄柱草组培各阶段成功率表
愈伤诱导率（%）-30天内 增殖和不定芽诱导率（%）-20天内 生根诱导率（%）-20天内 出苗率（%）-70天内
实施例一 72 86 88 54.49
实施例二 93 98 91 82.93
实施例三 97 98 95 90.31
实施例一、二、三中白色果实的红果薄柱草组培各阶段成功率表
愈伤诱导率（%）-30天内 增殖和不定芽诱导率（%）-20天内 生根诱导率（%）-20天内 出苗率（%）-70天内
实施例一 33 72 68 16.16
实施例二 66 81 79 42.23
实施例三 82 85 88 61.34
上述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。

Claims (7)

1.一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：
1) 种子处理：选取成熟饱满的红果薄柱草种子，除去果皮果肉，洗净之后，对该种子进行消毒，再用蒸馏水进行冲洗，获得无菌种子；
2) 愈伤组织诱导：将所述无菌种子接种到诱导培养基内培养25～40d，获得愈伤组织；培养条件：每天光照16h、温度25±1℃、光照强度1400-1500lux；愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇80～100mg/L、甘氨酸1.0～2.0mg/L、盐酸硫胺素0.1 ～0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.4～1.0mg/L、烟酸0.3～0.6mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.5～1.5mg/L、萘乙酸0.005～0.5 mg/L、蔗糖15～30g/L、琼脂4～5g/L；
3) 增殖培育与不定芽诱导：将步骤2获得的愈伤组织切成0.5～1.0cm的小块，再转至增殖培养基内进行扩繁15～20d，诱导出不定芽；培养条件：每天光照15h，温度25±1℃，光照强度1400-1500lux；增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇80～100mg/L、甘氨酸1.0～2.0mg/L、盐酸硫胺素0.1～0.6mg/L、盐酸吡哆醇0.4～1.0mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.1～0.5 mg/L、烟酸0.3～0.6mg/L、蔗糖20～30g/L、琼脂4～5g/L；
4) 生根诱导：将步骤3制得的不定芽接种至生根培养基中培养15～20d，进行诱导生根；培养条件：每天光照15小时，温度25℃±1℃，光强1500～2000lux；生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭0.5～3.0g/L、含肌醇80～100mg/L、甘氨酸1.0～2.0mg/L、盐酸硫胺素0.1～0.6mg/L、盐酸吡哆醇0.4～1.0mg/L、萘乙酸0.1～0.5 mg/L、烟酸0.3～0.6mg/L、蔗糖20～30g/L、琼脂5～6g/L；
5) 练苗移栽：对步骤4制得的再生植株炼苗4～6d，之后移栽至温室。
2.如权利要求1所述一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，其特征在于：步骤1中，所选取的红果薄柱草种子为可以结出红色果实或白色果实或黄色果实的红果薄柱草种子。
3.如权利要求1所述一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，其特征在于：步骤1中，所述消毒为：采用7%巴氏消毒液对所述种子消毒5min，并且期间不停搅拌。
4.如权利要求1所述一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，其特征在于：步骤1中，所述冲洗为：将所述种子上的消毒液洗掉，再将该种子置于超净台上，用无菌蒸馏水冲洗该种子3～５遍。
5.如权利要求1所述一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，其特征在于：
所述愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇80mg/L、甘氨酸1.0mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.4mg/L、烟酸0.3mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.005 mg/L、蔗糖15g/L、琼脂4g/L；
所述增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇80mg/L、甘氨酸1.0mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.4mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.1 mg/L、烟酸0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂4g/L；
所述生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭0.5g/L、含肌醇80mg/L、甘氨酸1.0mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.4mg/L、萘乙酸0.1 mg/L、烟酸0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂5g/L。
6.如权利要求1所述一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，其特征在于：
所述愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸1.5mg/L、盐酸硫胺素0.3mg/L、盐酸吡哆醇0.8mg/L、烟酸0.4mg/L、6-苄氨基腺嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.05 mg/L、蔗糖25g/L、琼脂5g/L；
所述增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.6mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.5 mg/L、烟酸0.3mg/L、蔗糖20g/L、琼脂4g/L；
所述生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭2.0g/L、含肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.4mg/L、盐酸吡哆醇0.6mg/L、萘乙酸0.3 mg/L、烟酸0.4mg/L、蔗糖20g/L、琼脂5g/L。
7.如权利要求1所述一种红果薄柱草组织培养快速繁殖方法，其特征在于：
所述愈伤培养基的组成：MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.5mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、烟酸0.6mg/L、6-苄氨基腺嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.5 mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L；
所述增殖培养基的组成：1/2MS培养基、补充肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.6mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.5 mg/L、烟酸0.6mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L；
所述生根培养基的组成：1/2MS培养基、补充活性炭3.0g/L、含肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.6mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、萘乙酸0.5 mg/L、烟酸0.6mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L。
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