CN109988056A - 一种用于多肽液相合成载体的化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于多肽液相合成载体的化合物及其制备方法和用途，具体公开了一种可以作为多肽液相载体的稠环化合物，其具有如下式A或B所示：其中，X选自H、F、Cl、Br、I或带有羟基、氨基、羧基、卤素的基团；Y选自H、F、Cl、Br或I。发明的液相合成载体化合物制备简单，反应效率高。

Description

一种用于多肽液相合成载体的化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及多肽合成领域，具体涉及一种用于多肽液相合成载体的化合物及其制备方法和用途。
背景技术
多肽合成已经有100多年的历史了，现阶段主要有传统的固相合成方法和液相合成方法。这两类方法都具有不同的缺点。传统液相合成方法反应步骤多、分离方法困难、后处理繁琐，合成周期长等缺点；每次接肽以后都要进行分离纯化或结晶以除去未反应的原料或者反应的副产物，这种操作相当费时而且麻烦，并且由操作带来的损失也很大；为了克服这些缺点，Merrifield于1963年首先发展了固相多肽合成的方法。固相合成的方法可以避免繁琐的分离提纯的步骤，与液相的方法相比具有明显的优越性：(1)多肽合成过程中，肽链连接于不溶性载体上，因此产物肽也是不溶的，易洗涤易过滤；(2)反应中可以加入过量的反应物使反应趋于完全，而过量的试剂和副产物可以通过洗涤和过滤除去；(3)整个反应在同一容器中进行，避免了液相法合成中的多次沉淀、洗涤、分离造成的机械损失，操作简便快捷；(4)操作具有很强的重复性，有利于多肽合成反应的自动化。现阶段多肽合成多采用固相合成方法。但是固相合成需要使用固相载体树脂，目前主要的固相载体树脂有：聚苯乙烯—二乙烯苯交联树脂；聚酰胺树脂；聚乙烯一乙二醇类树脂等。固相法合成多肽由于无法对中间反应步骤进行有效监控、过程中产生的杂质进行有效分离，导致终产物中杂质成分复杂，分离纯化难度较大；由于使用到固相载体，合成规模受到树脂取代度等、树脂粒度、机械性能等因素影响，合成规模一般明显小于液相方法。常用的固相合成树脂通常偶联linker，以方便氨基酸的偶联，其中常见的linker-树脂有wang树脂，氨基树脂、三苯甲基氯树脂。
近些年为了改进传统固相合成方法的缺点，科学家们发明了一类采用液相合成和固相载体相结合的方法进行多肽化合物合成。通过设计具有特定结构的液相载体，在液相中进行氨基酸偶联，结合固相合成和液相合成中间体纯化和后处理方法进行多肽合成。这类方法可以大大提高固相合成的生产规模和中间体的纯度。实现多肽合成规模的放大，大大提高生产效率。(Tetrahedron 67(2011)6633-6643，Org.Lett.17(2015)4264-4267))
现有技术中已经报道了多种液相合成载体，例如HO-TAGa、HO-TAGb、NH2-DPM以及Br-T等。
发明内容
为了改进固相合成方法的缺点，本申请公开了一种可以作为多肽液相载体的稠环化合物，其具有如下式A或B所示：
其中，X选自H、F、Cl、Br、I或带有羟基、氨基、羧基、卤素的基团；
Y选自H、F、Cl、Br或I。
在本发明的技术方案中，所述的X选自H、F、Cl、Br、I、
在本发明的技术方案中，所述式A化合物为
本发明另一个方面提供了一种液相合成载体，其具有如上式A所述的结构式。
本发明另一个方面提供了本发明所述的液相合成载体的制备方法，其包括如下步骤：
1)制备化合物
任选地，2)将液相载体化合物与功能性官能团偶联得到功能化的稠环化合物。
在本发明的技术方案中，其中步骤1)为:
1-1)2，3-二氢化茚和(β-氯丙酰)氯在三氯化铝条件下反应获得
1-2)将在Bu4HNSO4和浓硫酸作用下加热回流至反应完全得到
1-3)将在浓盐酸和冰醋酸配成的混合酸溶液中，加热回流，得到或者
1-1)和(β-氯丙酰)氯在三氯化铝条件下反应获得
1-2)将在Bu4HNSO4和浓硫酸作用下加热回流至反应完全得到
1-3)将在浓盐酸和冰醋酸配成的混合酸溶液中，加热回流，得到
在本发明的技术方案中，其中步骤2)为
2-1)将溴代或氯代处理，
2-2)任选地，进一步偶联功能性官能团得到功能化的稠环化合物。
在本发明的技术方案中，步骤2-1)为将在NBS(N-溴代丁二酰亚胺)或N-氯代丁二酰亚胺和BPO(过氧化苯甲酰)以及有机溶剂中加热回流，至反应完全，甲醇重结晶。
在本发明的技术方案中，步骤2-2)为取 与对羟甲基苯酚在碳酸钾条件下反应得到 或者
将化合物 与化合物在碳酸钾条件下进行取代反应，至反应完全后，在硼氢化钠和乙醇中进行氢化至反应完全，加入甲烷磺酸和Fmoc-NH2在碳酸钠条件下反应至完全，脱除Fmoc保护基得到
本发明另一个方面提供了式A或B所示化合物作为液相合成载体的用途。
本发明再一个方面提供了式A或B所示化合物用于在液相中合成多肽链的用途。
本发明再一个方面提供了一种多肽的合成方法，其以式A或B所示化合物作为液相合成载体，在式A或B所示化合物的官能团上依次偶联氨基酸。
在本发明的技术方案中，偶联氨基酸的方法为，以缩合剂剂活化羧基组分，并在碱性条件下与氨基组分进行缩合，脱除氨基保护基，并继续偶联下一氨基酸直至完成多肽，裂解液相合成载体。
在本发明的技术方案中，缩合剂选自EDCI、EDC、DCC、DIC、HATU、HBTU、HOAt、HOBt、PyAOP、PyBOP中的一种或多种。
在本发明的技术方案中，碱性条件由DIEA、NMM、TEA、吡啶、DBU、N-甲基吗啉、三甲基吡啶或二甲基吡啶中的一种或多种提供。
在本发明的技术方案中，氨基保护基脱除条件为碱性条件下脱除，优选以二乙胺和DBU脱除氨基保护基。
在本发明的技术方案中，氨基保护基选自Fmoc或Boc。
在本发明的技术方案中，裂解多肽和液相合成载体条件为TFA:TIS:H2O的组合，优选为TFA:TIS:H2O＝95:2.5:2.5。
在本发明的技术方案中，式A或B所示化合物上具有氨基、羧基、羟基、卤素中的一种或多种官能团。
本发明再一个方面提供了一种特利加压素的合成方法，其以式A或B所示化合物作为液相合成载体，偶联Fmoc-Gly1-OH、脱除氨基保护基、按此方法依次偶联Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)OH、Fmoc-Gly-Gly-OH和Boc-Gly-OH，脱除保护基后，裂解液相合成载体，纯化得到特利加压素。
制备化合物B的方法如下：
在本发明的技术方案中，将在NBS(N-溴代丁二酰亚胺)或N-氯代丁二酰亚胺和BPO(过氧化苯甲酰)以及有机溶剂中加热回流，至反应完全，甲醇重结晶。
在本发明的技术方案中，与对羟甲基苯酚在碳酸钾条件下反应得到或者
将化合物与化合物在碳酸钾条件下进行取代反应，至反应完全后，在硼氢化钠和乙醇中进行氢化至反应完全，加入甲烷磺酸和Fmoc-NH2在碳酸钠条件下反应至完全，脱除Fmoc保护基得到
本发明以化合物A为母体化合物的液相载体的制备方法流程如下：
有益效果
1.液相载体用于多肽合成，操作较传统液相合成简便；
2.液相载体用于多肽合成，合成规模大于传统的固相合成；
3.大大减少Fmoc氨基酸的投料量；
4.载体利用率高，Org.Lett.17(2015)4264-4267)和Tetrahedron 67(2011)6633-6643中报道的液相载体分子量为832，只能合成1条肽链；而本发明提到的氨基液相载体化合分子量2758，可以合成9条肽链，平均合成1条肽链的分子量为306。
附图说明
图1为化合物d的H-NMR(400M Hz)谱图。
图2为化合物d的C-NMR(100M Hz)谱图。
图3为化合物d的质谱谱图。
图4为载体化合物e质谱谱图。
图5为载体化合物3质谱谱图。
图6为载体化合物4质谱谱图。
图7为特利加压素线性肽质谱图。
图8为特利加压素质谱图。
图9为特利加压素精肽HPLC谱图。
图10Wang树脂型液相载体1质谱图。
图11以化合物A为母体的氨基型液相载体化合物。
图12以化合物B为母体的氨基型液相载体化合物。
具体实施方式
下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不是用来限制本发明的范围。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1载体化合物的合成
常温条件下，65克(0.5mol)化合物a(2，3-二氢化茚)和70克(0.5mol)化合物b(β-氯丙酰)氯混合后，缓慢滴加到溶有161.5克(1.2mol)无水三氯化铝的800mL硝基甲烷溶液中。反应液渐渐呈棕黑色溶液，室温搅拌5h后，检测反应，当化合物a反应完全后将产物迅速倒入-5℃以下的冰盐水中。用CH2Cl2萃取(3×1500mL)，合并有机相，再依次加0.05mol/LH2SO4溶液洗涤两遍(2×500ml)，饱和NaHCO3溶液洗涤两遍(2×500ml)，饱和NaCl溶液洗1遍(1×500ml)，最后用无水Na2SO4干燥。将有机相浓缩，采用乙酸乙酯重结晶得到100.2克白色固体状的化合物c，收率96％。
将93.6克(0.45mol)化合物c和0.5克Bu4HNSO4置于1000mL二氯甲烷中，冰浴条件下，缓慢滴加于500mL浓硫酸中，加热回流4h，监控反应，化合物c消耗完全则停止反应，冷至室温。将反应液倒入3倍体积的-5℃的冰盐水中，加氢氧化钠颗粒，将混合溶液调至pH＝7，CH2Cl2萃取(3×1500mL)，合并有机相，再依次加0.05mol/L H2SO4溶液洗(2500ml)，饱和NaHCO3溶液洗涤2遍(2×500ml)，饱和NaCl溶液洗1遍(1×500ml)，最后用无水Na2SO4干燥。将有机相浓缩，采用乙二氯甲烷和石油醚混合溶剂重结晶得到70.4克白色固体状的化合物d，收率91％。采用核磁、质谱对化合物d的结构进行确认。
51.6g(0.3mol)化合物d加入到由70mL(36％)浓盐酸和140mL冰醋酸配成的混合酸溶液中，加热回流，过夜，冷却至室温，抽滤除去溶剂，依次用水，丙酮和乙醇洗涤，得到类白色固体28.7克，产率62％，并用质谱对载体化合物e进行确认。参见附图4。
实施例2载体化合物和链接臂的反应
1.以化合物A为母体的Wang树脂型液相载体1的合成
将化合物e 6.9克(15mmol)、NBS(N-溴代丁二酰亚胺)40.1克(225mmol)、BPO(过氧化苯甲酰)3.7克(15mmol)和500ml四氯甲烷加入到1L的反应瓶中，加热回流反应，HPLC监控反应，化合物e反应完即可停止反应。待反应液回至室温后，过滤除去溶剂，用甲醇重结晶得到淡黄色固体化合物f 16.1克，收率91％。
取化合物f 15.3克(13mmol)和对羟甲基苯酚33.5克(260mmol)加入1L三口烧瓶内，然后向反应瓶中加入DMF(400mL)，搅拌均匀，再加入碳酸钾35.8克(260mmol)。将反应液升温至80℃继续搅拌16小时。HPLC监控反应。原料消耗完后，将反应液冰浴冷却至10℃以下。在充分搅拌条件下，向反应液中缓慢滴加1mol/L稀盐酸(300mL)，和纯化水(150mL)，滴加完后继续搅拌半小时。过滤，滤饼依次用纯化水(100mL)和甲醇(100mL)冲洗。在60℃条件下真空干燥5小时，得到化合物g 19.5克，收率96.0％。化合物g即为Wang树脂型液相载体1。通过质谱对化合物进行验证，质谱结果为[M+H+]＝1562.435，见图10。
2.以化合物A为母体的氨基型载体合成
将化合物e 6.9克(15mmol)、NBS(N-溴代丁二酰亚胺)40.1克(225mmol)、BPO(过氧化苯甲酰)3.7克(15mmol)和500ml四氯甲烷加入到1L的反应瓶中，加热回流反应，HPLC监控反应，化合物e反应完即可停止反应。待反应液回至室温后，过滤除去溶剂，用甲醇重结晶得到淡黄色固体化合物f 16.4克，收率93％。
取化合物f 15.3克(13mmol)和化合物h(2,4-二甲氧基-苯基)-(4-羟基-苯基)-甲酮50.3克(195mmol)加入1L三口烧瓶内，然后向反应瓶中加入DMF(500mL)，搅拌均匀，再加入碳酸钾27.6克(200mmol)。将反应液升温至80℃继续搅拌16小时。HPLC监控反应。原料消耗完后，将反应液冰浴冷却至10℃以下。在充分搅拌条件下，向反应液中缓慢滴加1mol/L稀盐酸(300mL)，和纯化水(150mL)，滴加完后继续搅拌半小时。过滤，滤饼依次用纯化水(100mL)和甲醇(100mL)冲洗。在60℃条件下真空干燥5小时，得到类白色化合物i 33.5克，收率93.0％。
称取化合物i 33.4g(10.0mmol)加入1L三口烧瓶内，然后向反应瓶中加入THF(300mL)和甲醇(150mL)，搅拌均匀。将反应液升温至60℃后，缓慢加入硼氢化钠(5.8g，100mmol)，加完后保持温度继续搅拌4小时。TLC(乙酸乙酯：正己烷＝1:2，紫外灯显色)监控反应。原料消耗完后，将反应液冰浴冷却至10℃以下。在充分搅拌的条件下，缓慢滴加1mol/L稀盐酸(100mL)，滴加完后，减压浓缩除去THF，向剩余反应液加入纯化水(450mL)，并用1mol/L稀盐酸调pH值至5-7。过滤，滤饼滤饼依次用纯化水(100mL)和甲醇(100mL)冲洗。在60℃条件下真空干燥8小时，得到白色化合物固体j 27.7g，收率99.9％。
称取化合物j(27.7g,10mmol)加入1L三口烧瓶内，然后向反应瓶中加入甲苯(400mL)，搅拌均匀，再依次加入甲烷磺酸(9.2克，100mmol)、Fmoc-NH2(26.7克,120mmol)。将反应液升温至110℃继续搅拌3小时。将反应液冷却至室温，加入碳酸钠(1.0g,9.3mmol)，然后旋蒸除去溶剂。向残余物中加入甲醇(400mL)和甲苯(100mL)，升温至90℃，搅拌溶清。将反应液自然冷却至室温析晶。过滤。滤饼用甲醇和乙腈混合溶剂(1:1，100mL)冲洗，50℃真空干燥5小时，得到白色固体化合物k 44.3g，收率93.0％。
称取化合物k 44.3g(9.3mmol)加入1L三口烧瓶内，向反应瓶中加入甲苯(200mL)和乙醇(200mL)，搅拌均匀，再加入氢氧化钠(3.6g,90mmol)。将反应液升温至110℃继续搅拌16小时。向反应液中依次加水(234mL)、正己烷(156mL)乙酸乙酯(156mL)，搅拌15分钟后，过滤。滤饼用纯化水(200mL×2)洗涤两次，得到的滤液静置分层后收集有机相，将有机相在45℃条件下浓缩至干。将滤饼与浓缩后残余物合并，用甲醇与乙腈混合溶剂(1:1，200mL)打浆两次。过滤，滤饼在45℃条件下真空干燥5小时，得到白色固体化合物l 25.2克，收率98％。通过质谱对化合物进行验证，质谱结果为[M+H+]＝2779.653。
实施例3化合物B的合成
常温条件下，32克(0.26mol)化合物1和70克(0.5mol)β-氯丙酰混合后，缓慢滴加到溶有50.1克(0.3mol)无水三氯化铝的800mL硝基甲烷溶液中。反应液渐渐呈棕黑色溶液，室温搅拌5h后，检测反应，当化合物a反应完全后将产物迅速倒入-5℃以下的冰盐水中。用CH2Cl2萃取(3×1500mL)，合并有机相，再依次加0.05mol/L H2SO4溶液洗涤两遍(2×500ml)，饱和NaHCO3溶液洗涤两遍(2×500ml)，饱和NaCl溶液洗1遍(1×500ml)，最后用无水Na2SO4干燥。将有机相浓缩，采用乙酸乙酯重结晶得到45.2克白色固体状的化合物3，收率90％。通过质谱对化合物进行验证，质谱结果为[M+H+]＝207.2.，见图5。
将45.2克(0.22mol)化合物c和0.5克Bu4HNSO4置于500mL二氯甲烷中，冰浴条件下，缓慢滴加于200mL浓硫酸中，加热回流4h，监控反应，化合物c消耗完全则停止反应，冷至室温。将反应液倒入3倍体积的-5℃的冰盐水中，加氢氧化钠颗粒，将混合溶液调至pH＝7，CH2Cl2萃取(3×500mL)，合并有机相，再依次加0.05mol/L H2SO4溶液洗(2500ml)，饱和NaHCO3溶液洗涤2遍(2×500ml)，饱和NaCl溶液洗1遍(1×500ml)，最后用无水Na2SO4干燥。将有机相浓缩，采用乙二氯甲烷和石油醚混合溶剂重结晶得到31.2克白色固体状的化合物3，收率92％。
将31.2g(0.3mol)化合物3加入到由70mL(36％)浓盐酸和140mL冰醋酸配成的混合酸溶液中，加热回流，过夜，冷却至室温，抽滤除去溶剂，依次用水，丙酮和乙醇洗涤，得到类白色固体7.6克，产率58％，通过质谱对化合物进行验证，质谱结果为[M+H+]＝566.8，结果见图6.
实施例4以化合物B为母体的氨基型液相载体化合物合成
将化合物B 13.8克(30mmol)、NBS(N-溴代丁二酰亚胺)80.3克(450mmol)、BPO(过氧化苯甲酰)7.6克(30mmol)和1000ml四氯甲烷加入到2L的反应瓶中，加热回流反应，HPLC监控反应，化合物B反应完即可停止反应。待反应液回至室温后，过滤除去溶剂，用甲醇重结晶得到淡黄色固体化合物4 32.9克，收率94％。
取化合物4 32.9克(13mmol)和化合物h(2,4-二甲氧基-苯基)-(4-羟基-苯基)-甲酮107.3克(400mmol)加入2L三口烧瓶内，然后向反应瓶中加入DMF(800mL)，搅拌均匀，再加入碳酸钾57.4克(400mmol)。将反应液升温至80℃继续搅拌16小时。HPLC监控反应。原料消耗完后，将反应液冰浴冷却至10℃以下。在充分搅拌条件下，向反应液中缓慢滴加1mol/L稀盐酸(600mL)，和纯化水(400mL)，滴加完后继续搅拌半小时。过滤，滤饼依次用纯化水(200mL)和甲醇(400mL)冲洗。在60℃条件下真空干燥5小时，得到类白色化合物5 64.3克，收率91.8％。
称取化合物5 64.3g(20mmol)加入1L三口烧瓶内，然后向反应瓶中加入THF(400mL)和甲醇(200mL)，搅拌均匀。将反应液升温至60℃后，缓慢加入硼氢化钠(12.3g，200mmol)，加完后保持温度继续搅拌4小时。TLC(乙酸乙酯：正己烷＝1:2，紫外灯显色)监控反应。原料消耗完后，将反应液冰浴冷却至10℃以下。在充分搅拌的条件下，缓慢滴加1mol/L稀盐酸(300mL)，滴加完后，减压浓缩除去THF，向剩余反应液加入纯化水(600mL)，并用1mol/L稀盐酸调pH值至5-7。过滤，滤饼滤饼依次用纯化水(300mL)和甲醇(300mL)冲洗。在60℃条件下真空干燥8小时，得到白色化合物固体6 53.3g，收率98.3％。
称取化合物6(53.3g,19mmol)加入1L三口烧瓶内，然后向反应瓶中加入甲苯(400mL)，搅拌均匀，再依次加入甲烷磺酸(18.4克，200mmol)、Fmoc-NH2(54.1克,245mmol)。将反应液升温至110℃继续搅拌3小时。将反应液冷却至室温，加入碳酸钠(2.3g,20mmol)，然后旋蒸除去溶剂。向残余物中加入甲醇(400mL)和甲苯(100mL)，升温至90℃，搅拌溶清。将反应液自然冷却至室温析晶。过滤。滤饼用甲醇和乙腈混合溶剂(1:1，300mL)冲洗，50℃真空干燥5小时，得到白色固体化合物7 86.5g，收率92.6％。
称取化合物7 86.5g(18.4mmol)加入1L三口烧瓶内，向反应瓶中加入甲苯(300mL)和乙醇(400mL)，搅拌均匀，再加入氢氧化钠(7.5g,181mmol)。将反应液升温至110℃继续搅拌16小时。向反应液中依次加水(500mL)、正己烷(240mL)乙酸乙酯(300mL)，搅拌15分钟后，过滤。滤饼用纯化水(200mL×2)洗涤两次，得到的滤液静置分层后收集有机相，将有机相在45℃条件下浓缩至干。将滤饼与浓缩后残余物合并，用甲醇与乙腈混合溶剂(1:1，300mL)打浆两次。过滤，滤饼在45℃条件下真空干燥5小时，得到白色固体化合物8 48.6克，收率96％。通过质谱对化合物进行验证，质谱结果为[M+H+]＝2880.278。
实施例5固相载体用于多肽合成
采用实施例1得到的氨基型液相载体用于特定肽序NH2-Gly12-Gly11-Gly10--Cys9-Tyr8-Ph7e-Gln6-Asn5-Pro4-Cys3-Lys2-Gly1-NH2(特利加压素肽序)的合成。
1.偶联第一个氨基酸(Fmoc-Gly1-OH)
称取化合物I(25.2g,9mmol)加入250mL三口烧瓶内，向反应瓶中加入氯仿(100mL)，再依次加入HOBt(16.2g.7.2mmol)、Fmoc-Gly-OH(29.7g,100mmol)。搅拌溶清。加入EDC·HCl(19.2g,100mmol)，在室温条件下继续搅拌3小时。TLC(DCM:MeOH:HAc＝100:1:0.5)监控反应。反应完全后，反应液在30℃条件下，减压浓缩至成粘稠物，向粘稠物中加入甲醇(60mL)，搅拌2小时。过滤，滤饼用甲醇(20mL×3)冲洗三次。将滤饼在40℃条件下真空干燥5小时，得到化合物m 45.6g，收率96％)。
2.偶联第二个氨基酸(Fmoc-Lys2(Boc)-OH)
称取化合物m(45.6g,8.6mmol)加入100mL三口烧瓶内，向反应瓶中加入氯仿(50mL)，搅拌溶清，再加入DBU(13.2g，86mmol)。将反应液冰浴冷却至5℃以下，缓慢滴加二乙胺(18.4g，250mmol)，控温不超过5℃。滴加完后，将反应液升至室温继续搅拌2小时。TLC(DCM:MeOH:HAc＝100:1:0.5)监控反应。反应完全后，将反应液在30℃条件下减压浓缩至成粘稠物，向粘稠物中加入乙腈(20mL)，搅拌30分钟。过滤，滤饼用甲醇(10mL×2)冲洗两次。将滤饼在40℃条件下真空干燥2小时，得到类白色固体27.6g。
将上述固体加入100mL三口烧瓶内，向反应瓶中加入氯仿(20mL)，再依次加入HOBt(13.5g，100mmol)、Fmoc-Lys(Boc)-OH(46.8g,100mmol)。搅拌溶清。将反应液冷却至0℃。加入EDC·HCl(19.2g,100mmol)，在0-10℃条件下继续搅拌3小时。TLC(DCM:MeOH:HAc＝100:1:0.5)监控反应。反应完全后，反应液在30℃减条件下，减压浓缩至成粘稠物，向粘稠物中加入甲醇(20mL)，搅拌2小时。过滤，滤饼用甲醇(10mL×3)冲洗三次。将滤饼在40℃条件下真空干燥3小时，得到化合物n。
重复Fmoc-Lys(Boc)-OH的偶联反应条件，按照肽序依次偶联完Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)OH、Fmoc-Gly-Gly-OH和Boc-Gly-OH得到连有肽的载体化合物P 167.4克，合成收率82％。
将上述的白色固体化合物P(160g)加入裂解液中(TFA:TIS:H2O＝95:2.5:2.5，800mL)，室温搅拌2小时。然后将反应液缓慢倒入冰冻乙醚(160mL)中，搅拌30分钟后，冰箱中静置1小时。离心，用乙醚(50mL×3)洗涤三次。得到的沉降物在30℃条件下干燥2小时，再用甲醇(10mL)打浆2小时，过滤，滤饼弃去，滤液40℃旋干后得到白色固体NH2-Gly12-Gly11-Gly10-Cys9-Tyr8-Phe7-Gln6-Asn5-Pro4-Cys3-Lys2-Gly1-NH2(75.1g，纯度98.5％，收率99％)。MS[M+1]：1229.775。
将75.1g特利加压素线性粗肽溶解于75L的缓冲体系中，缓冲体系为200mmol/L磷酸二氢钠、25mmol/L盐酸胍和75mmol/L的醋酸铵的水溶液，采用20％DMSO，pH为7.8，敞口置于室温中，搅拌氧化10小时以上，待线性肽反应完全加冰乙酸调节pH＝3～5淬灭，即得到特利加压素粗肽溶液。得到的粗肽溶液采用NOVASEP RP-HPLC系统，波长220nm，色谱柱为反相C18柱，常规0.1％TFA/水、乙腈流动相体系纯化，除盐，收集目的峰馏分，旋转蒸发浓缩，冻干得到特利加压素精肽51.3g，HPLC纯度大于99.5％，最大单杂小于0.1％总收率53.8％。[M+H+]:1227.753。
采用相同方法和条件，以实施例2和4中的其他液相载体化合物进行液相多肽合成，均能合成特利加压素。
图7中特利加压素保留时间为17.012min，纯度为99.48％。
编号 进样 保留时间 峰面积 峰面积比％ 峰高
1 9 12.745 12656 0.11 189
2 9 14.523 6006 0.05 209
3 9 16.200 5154 0.04 776
4 9 17.012 11503005 99.48 427218
5 9 17.633 5566 0.05 404
6 9 19.848 6121 0.05 304
7 9 23.395 10481 0.09 265
8 9 26.315 14427 0.12 268
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种可以作为多肽液相载体的稠环化合物，其具有如下式A或B所示：
其中，X选自H、F、Cl、Br、I或带有羟基、氨基、羧基、卤素的基团；
Y选自H、F、Cl、Br或I。
2.根据权利要求1所述的稠环化合物，其中X选自H、F、Cl、Br、I、
3.根据权利要求1或2所述的稠环化合物，其中，所述式A化合物为
B化合物为
4.权利要求1-3任一项所述稠环化合物的制备方法，其包括如下步骤：
1)制备化合物
任选地，2)将液相载体化合物与功能性官能团偶联得到功能化的稠环化合物。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其中步骤1)为:
1-1)2，3-二氢化茚和(β-氯丙酰)氯在三氯化铝条件下反应获得
1-2)将在Bu4HNSO4和浓硫酸作用下加热回流至反应完全得到
1-3)将在浓盐酸和冰醋酸配成的混合酸溶液中，加热回流，得到或者
1-1)和(β-氯丙酰)氯在三氯化铝条件下反应获得
1-2)将在Bu4HNSO4和浓硫酸作用下加热回流至反应完全得到
1-3)将在浓盐酸和冰醋酸配成的混合酸溶液中，加热回流，得到
6.根据权利要求4所述的制备方法，其中步骤2)为
2-1)将溴代或氯代处理，
2-2)任选地，进一步偶联功能性官能团得到功能化的稠环化合物。
7.权利要求1所述的稠环化合物作为液相合成载体的用途。
8.权利要求1所述的稠环化合物用于在液相中合成多肽链的用途。
9.一种多肽的合成方法，其以权利要求1所示的稠环化合物作为液相合成载体，在式A所示化合物的官能团上依次偶联氨基酸。
10.一种特利加压素的合成方法，其以式A所示化合物作为液相合成载体，偶联Fmoc-Gly1-OH、脱除氨基保护基、按此方法依次偶联Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)OH、Fmoc-Gly-Gly-OH和Boc-Gly-OH，脱除保护基后，裂解液相合成载体，纯化得到特利加压素。
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