CN109971761B - 脂肪酸结合蛋白4的小干扰rna及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在用于诊断和/或愈后评估结核病试剂盒中的用途，以及所述脂肪酸结合蛋白4(FABP4)的小干扰RNA在制备用于预防或治疗结核病的药物中的用途。本发明所述的FABP4在BCG感染的巨噬细胞RAW264.7细胞中高表达，且FABP4的小干扰RNA能够抑制巨噬细胞发生凋亡的功能，因此FABP4的小干扰RNA可以作为新型的药物作用靶点，对结核病的预防及治疗具有重要的意义。

Description

脂肪酸结合蛋白4的小干扰RNA及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术医药领域，尤其是涉及一段抑制人或哺乳动物FABP4蛋白表达水平的RNA干扰序列以及以此核心序列为基础的针对FABP4的靶向干扰技术，具体涉及抑制FABP4蛋白表达水平的RNA干扰序列及其应用。
背景技术
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由细胞内双链小干扰RNA(smallinterference RNA，siRNA)引导的，通过细胞内RNA干扰原理识别具有同源序列的靶点mRNA后引起mRNA的降解或翻译抑制，从而抑制或降低mRNA编码蛋白表达水平的现象，其核心是一段21个核苷酸左右长度的具有靶向性的特异核酸序列，下面统称为核心序列。RNAi是广泛存在于大多数真核生物中，发生于转录后阶段的基因沉默现象。
近年来，人们利用这一原理针对靶基因表达进行阻断，从而产生相应的功能缺失表型用于科学研究，或疾病治疗，形成RNAi技术。根据RNAi原理，既可以在体外直接合成以核心序列为基础的RNA双链(siRNA)转入细胞，也可以利用不同的DNA表达载体携带核心序列在体内表达形成短发夹状RNA(shRNA)，起到特异性识别与降解相应的靶基因mRNA，或封闭其翻译的效果。虽然RNAi技术提供了一种对任何基因进行靶向干预调控的手段，在生物医学基础研究和疾病治疗领域具有重要的应用价值和前景，但其前提是必需针对靶基因对象展开分析、预测和实验筛选，找到一段特异和有效的核心序列，然后以此核心序列为基础，通过如上所述的通用方法实施对靶基因在蛋白水平的表达干扰。
结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)感染所引起的可空气传播的严重传染性疾病。根据世界卫生组织在2018年全球结核病报告，2017年全球新增结合病例640万人，其中157万人死亡，死亡率接近25％，同时多重耐药、共患病等因素已显著的增强了结核病的危险性，人类健康正在面临巨大的挑战。巨噬细胞是结核分支杆菌的主要宿主细胞也是人体的重要免疫细胞之一，当结核分支杆菌入侵时，巨噬细胞会主动吞噬病菌并在内部与其发生复杂的相互作用。在这一过程中，巨噬细胞会通过编程性死亡，控制病原体在人体内的扩散。细胞凋亡作为重要的清除病原菌的手段，也是细胞程序性死亡的重要部分，通过“自杀”的方式将细胞自身与细菌完全清除，是细胞抵御外来感染，控制感染源扩散的重要方式。与此同时，作为胞内寄生菌，结核分支杆菌会分泌多种毒性因子，通过影响细胞凋亡的进程以达到免疫逃逸的目的。这一博弈过程繁复，至今尚未完全明晰。
近期研究发现，在感染性疾病中，为满足巨噬细胞免疫功能执行过程中大量的物质与能量需求，巨噬细胞内部代谢通路会发生相应变化。相应的，代谢通路中的调控因子和代谢产物也会对免疫功能的执行产生影响。
脂肪酸作为细胞的重要组成部分，其含量变化会影响细胞的代谢状态与免疫功能的执行。首先，当巨噬细胞极化成M2型时，需要大量的能量供应，脂肪酸作为基础的供能分子，在脂肪酸氧化过程中产生的乙酰辅酶A、NADH和FADH2，可以通过TCA循环为细胞提供大量能量。其次，脂肪酸作为重要的信号分子，可作为多种粒子通道和激酶的配体，对免疫细胞的免疫反应进行调节。
在细胞内部，脂肪酸分子需要与蛋白质结合以降低其自身的细胞毒性。脂肪酸结合蛋白家族(Fatty acid-binding proteins,FABPs)是在细胞内部执行脂肪酸结合功能的重要蛋白分子，能够影响细胞内部的脂肪酸的含量，调节细胞内部免疫代谢和信号传导。脂肪酸结合蛋白4(Fatty acid-binding protein 4,FABP4),是在脂肪细胞和巨噬细胞中大量存在的载脂蛋白，当脂肪酸被摄入巨噬细胞后，FABP4会与之结合，并开始在细胞内的转运和信号传递工作。
现有技术中未见FABP4表达水平的变化对结核病进行预测和诊断方面的报道，也未见干预FABP4表达水平对于结核病的治疗和预防作用。
发明内容
本发明旨在提供一组针对FABP4的表达及功能的干扰RNA的核苷酸序列(siRNA)，能够靶向抑制FABP4的表达，并验证FABP的敲减对BCG感染引起的细胞凋亡，进而对结核病的临床诊断提供理论依据。
优选的，所述试剂和包括特异性检测FABP4蛋白的抗体。
本发明还提供了一种用于预防/治疗结核病的药物组合物，所述FABP4的小干扰RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
为解决上述技术问题，本发明提供了用于抑制FABP4蛋白表达的siRNA,一种用于预防/治疗结核病的药物组合，所述药物组合含有如下任意一种物质：
I、SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的RNA分子、生物活性功能片段或变体；
II、编码I所示RNA分子的重组载体；
III、编码I所示RNA分子的重组病毒；
IV、编码I所示RNA分子的重组病毒载体。
优选的，所述药物组合还包括药学上可接受的载体或辅料。
优选的，所述药学上可接受的载体选自壳聚糖、胆固醇、脂质体和纳米颗粒中的一种或几种。
优选的，所述药物的给药方式选自口服、静脉注射、肌肉注射中的一种或几种。
本发明第一方面提供了一种RNA调节制剂，所述RNA调节制剂能够在活细胞中靶向抑制FABP4基因或激活靶向FABP4基因的RNA干扰。
在一些实施方式中，所述FABP4基因的序列为GenBank登录号CT010390.1所示的序列或GenBank登录号CT010390.1所示的序列的同源序列；
在一些实施方式中，所述活细胞是肺泡巨噬细胞；在一些实施方式中，所述活细胞是RAW264.7细胞；
在一些实施方式中，所述RNA调节制剂是小干扰RNA，在一些实施方式中，所述小干扰RNA的序列的正义链和反义链分别选自SEQ ID NO:1和SEQ NO2所示的RNA序列。
本发明第二方面提供了一种RNA调节复合物，所述RNA调节复合物能够将如发明第一方面所述的RNA调节制剂转染或运转进入所述靶细胞；
在一些实施方式中，所述RNA调节复合物包括如发明第一方面所述的RNA调节制剂和脂质体。
本发明第三方面提供了一种RNA调节复合物的制备方法，所述制备方法为将如发明第一方面所述的RNA调节制剂与脂质体混合，形成所述RNA调节复合物。
本发明第四方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括如发明第一方面所述的RNA调节制剂或发明第二方面所述的RNA调节复合物以及药学上可接受的载体或辅料；
在一些实施方式中，所述药学上可接受的载体选自壳聚糖、胆固醇、脂质体和纳米颗粒中的一种或几种；
在一些实施方式中，所述药物组合物的给药方式选自口服、静脉注射、肌肉注射中的一种或几种。
本发明第五方面提供了一种基因工程表达载体，所述基因工程表达载体能够表达在活细胞中靶向抑制FABP4基因或激活靶向FABP4基因的RNA干扰的小干扰RNA；
在一些实施方式中，所述FABP4基因的序列为GenBank登录号CT010390.1所示的序列或GenBank登录号CT010390.1所示的序列的同源序列；
在一些实施方式中，所述活细胞是肺泡巨噬细胞，在一些实施方式中，所述活细胞是RAW264.7细胞；
在一些实施方式中，所述小干扰RNA的序列的正义链和反义链分别选自SEQ IDNO:1和SEQ NO.2所示的RNA序列，
在一些实施方式中，所述基因工程表达载体经体外转录产生所述小干扰RNA；
在一些实施方式中，所述基因工程表达载体在非靶细胞的细胞中转录产生所述小干扰RNA；
在一些实施方式中，所述基因工程表达载体在靶细胞中转录产生所述小干扰RNA。
本发明第六方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒中含有如本发明第一方面所述的RNA调节制剂，如本发明第二方面所述的RNA调节复合物，如本发明第三方面所述的制备方法制备得到的RNA调节复合物，如本发明第四方面所述的药物组合物或如本发明第五方面所述的基因工程表达载体。
本发明第七方面提供了如本发明第一方面所述的RNA调节制剂，如本发明第二方面所述的RNA调节复合物，如本发明第三方面所述的制备方法制备得到的RNA调节复合物，如本发明第四方面所述的药物组合物或如本发明第五方面所述的基因工程表达载体在治疗、预防或减缓结核病中的用途。
本发明第八方面提供了如本发明第一方面所述的RNA调节制剂，如本发明第二方面所述的RNA调节复合物，如本发明第三方面所述的制备方法制备得到的RNA调节复合物，如本发明第四方面所述的药物组合物或如本发明第五方面所述的基因工程表达载体在治疗、预防或减缓能够通过促进肺泡巨噬细胞凋亡而治疗、预防或减缓的疾病或亚健康状况中的用途。
本发明的优点如下：
小干扰RNA干扰技术是目前高特异性的有效技术，因此无论是在功能基因组研究，还是基因治疗方面均具有广阔的应用前景和。本发明针对FABP4基因靶位点设计了2条小干扰RNA，从而对FABP4的表达进行干扰。实验研究表明，抑制FABP4的表达可以促进巨噬细胞发生凋亡，本发明研制的FABP4的小干扰RNA能有效抑制FABP4的表达水平，本发明证实FABP4的小干扰RNA可望成为治疗结核病的有效手段。本发明的FABP4的小干扰RNA可以单独使用或几条FABP4小干扰RNA联合，还可以与其它药物和治疗手段联合，用于结核病的治疗。
附图说明
图1示出了BCG感染FABP4后FABP4的表达水平。
图2示出了免疫荧光检测BCG感染巨噬细胞后FABP4表达情况。
图3示出了Western-Blot验证FABP4小干扰RNA敲减效果。
图4示出了FABP4表达对BCG诱导巨噬细胞凋亡的抑制作用。
具体实施方式
为了更好的解释本发明的技术方案，下面结合附图详细介绍本发明的实施例。以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的固定或限制。若未特别指明，实施例中所用的技术特征可以替换为具有在不背离发明构思前提下等同或相似功能或效果的其他本领域已知的技术特征。
技术方法说明
1.全部实施例中所使用的巨噬细胞均为小鼠肺泡巨噬细胞RAW264.7(中国科学院细胞库，SCSP-5036)，全部实施例中所使用的均为牛分枝杆菌卡介苗(BCG)疫苗株作为病原体。其培养方法如下：
1.1采用含体积分数10％胎牛血清(FBS)的高糖DMEM培养液于37℃、饱和湿度、5％CO2培养箱中培养RAW264.7，每天传代1次。
1.2牛分枝杆菌卡介苗(BCG)疫苗株，购买自上海生物制品研究所有限公司。采用DifcoTMMiddlebrook 7H10培养基对BCG进行复苏，静置于37℃培养箱中培养，对数期挑菌转接至DifcoTMMiddlebrook 7H9液体培养基中，静置于37℃培养箱中，每月传代一次。
2.BCG感染RAW264.7细胞
2.1感染前一天，每孔5×105细胞接种于六孔板中，每孔加入2mL含10％FBS的高糖DEME培养基，于37℃、饱和湿度、5％CO2培养箱中进行培养。
2.2感染前换液，6孔板每孔换液2mL含10％FBS的高糖DMEM培养基，随后用BCG感染(MOI 1:10)。
3.以下全部实施例FABP4小干扰RNA均采用LipofectamineTMRNAiMAXTransfection Reagent(Thermo fisher)转染试剂按照说明书转染到小鼠肺泡巨噬细胞中。
转染的小干扰RNA(序列均由上海吉玛生物工程公司合成)为双链RNA，包含所需干扰序列的正义链与反义链，使用时需同时加入，正义链siRNA-A(shRNA-A，为所用小干扰双链RNA正义链，其同源的序列如SEQ ID NO.1所示)和siRNA-B(shRNA-B，为所用小干扰双链RNA反义链，其同源的序列如SEQ.ID.NO.2所示)，同时设置阴性对照组si-Control(其为双链RNA，其中与正义链同源的序列如sh-Control所示)。阴性对照为随机生成的序列，且与FABP4基因的序列同源性小于50％(si-Control)。阴性对照转染方法与FABP4小干扰RNA的转染方法一致。各干扰RNA序列如下：
shRNA-A(5'-3'):GACUUCCACAAGAGUUUAU
shRNA-B(5'-3'):AUAAACUCUUGUGGAAGUC
sh-Control(5'-3'):UUCUCCGAACGUGUCACGU
本发明的FABP4基因来自鼠FABP4基因，GenBank号为：CT010390.1；常见的其他FABP4基因包括包括人FABP4基因，GenBank号为：CR456903.1；牛FABP4基因，GenBank号为：NM_174314.2；等。
转染具体步骤如下：
a)转染前一天，每孔5×105细胞接种于六孔板中，每孔加入2mL含10％FBS的DEME培养基，于37℃、饱和湿度、5％CO2培养箱中进行培养。
b)感染前换液，6孔板每孔换液1mL OPTI-MEM培养基。
c)按每孔加入100μL OPTI-MEM无血清培养基后加入3μL的小干扰RNA 3μL(浓度为20μM)，混合均匀，室温放置5min。
d)混匀LipofectamineTMRNAiMAX Transfection Reagent试剂，按每孔加入100μLOPTI-MEM无血清培养基后加入7.5μLLipofectamineTMRNAiMAX Transfection Reagent试剂，混合均匀，室温放置5min。
e)将稀释好的小干扰RNA和LipofectamineTMRNAiMAXTransfection Reagent轻柔混匀，室温放置15min，按每孔200μL小干扰RNA/LipofectamineTMRNAiMAX TransfectionReagent混合液加到含有细胞和培养基的培养板中，来回轻摇细胞培养板。
f)细胞在37℃、饱和湿度、5％CO2培养箱中培养24-48h后进行Western-Blot检测。
4.Western-Blot检测
4.1蛋白提取方法：
a)六孔板每孔加入70含有蛋白酶抑制剂Cocktail的蛋白裂解液，放置冰盒上，静放10min。
b)用细胞刮刀将每孔裂解的细胞碎片仔细刮下来，用移液枪将裂解的细胞液移至1.5ml EP管中。
c)14000g，10min离心，取上清，即为细胞总蛋白。
4.2Westernblot具体步骤：
a)样品处理参考BCA试剂盒操作方法检测每组蛋白浓度，保证每孔上进的蛋白量相等。然后将蛋白与5×loading buffer按4：1比例混匀，放置加热器100℃加热5min。
b)配制10％的SDS-PAGE浓缩胶和分离胶。
c)将配制好的凝胶置入电泳槽，加入电泳缓冲液，依照阴性对照组、BCG感染组、FABP4干扰组、FABP4干扰结合BCG感染组的顺序次上样，每孔20μg。90V恒压电泳，待电泳条带跑至分离胶时，将电压调至120V，恒压电泳至溴酚蓝消失。
d)将分离胶切下，进行转膜。
e)将海绵，滤纸，纤维膜，分离胶用甲醇浸泡，然后从阴极至阳极按海绵-滤纸-分离胶-纤维膜-滤纸-海绵的顺序放置转膜夹中，注意勿使胶与纤维膜之间存在气泡，再将转膜夹放置转膜槽中。
f)将10×转膜液，甲醇，水按1：2：7比例混合均匀，倒入转膜槽，300mA恒流转膜120min。整个过程都在冰浴中进行。
g)转膜结束后，用SuperBlock进行室温封闭1h。
h)孵一抗。依次对各条带孵上对应抗体，4℃孵育过夜，放置水平摇床轻微震荡，使各条带上的蛋白与抗体充分结合。用TBST洗3次，每次15min。
i)孵二抗。依次孵上HRP标记的鼠源或兔源的二抗，4℃孵育lh，放置水平摇床轻微震荡，lh后用TBST洗3次，每次15min。
j)将各蛋白条带铺上HRP显色液，不同条带曝光时间不一，直至曝出。根据蛋白条带的黑白程度可进一步定量分析，判断凋亡蛋白的表达情况。
实施例1：BCG感染RAW264.7细胞后FABP4的表达变化
BCG分别感染(MOI 1:10)细胞时间6h、12h、18h、24h后收集细胞，提取RAW264.7细胞的总蛋白，实验同时设置阴性对照(Negative Control，NC，野生RAW264.7细胞)组。
具体步骤如下：
a)蛋白提取：蛋白提取按照全蛋白提取试剂盒说明书(凯基生物，南京)的操作步骤进行。提取后的蛋白用BCA试剂盒(Thermo fisher，American)检测浓度，后续Western-Blot检测每孔上样20μg；
b)Western-Blot检测：分离胶浓度选择12％，电泳后将胶上蛋白电转到PVDF膜(0.2μm，BD公司)，随后室温用5％牛奶封闭1小时。洗涤后加入一抗(兔抗鼠FABP4抗体，Thermo fisher，Prod#701158；兔抗鼠β-actin，Proteintech，60008-1-Ig)4℃孵育过夜，洗涤后用山羊抗兔酶标二抗(羊抗兔HRP酶标二抗，Proteintech，SA00001-2)。
结果显示，细胞经BCG刺激后，与阴性对照相比，BCG感染后FABP4的表达水平发生上调，且呈时间依赖性(p＜0.001)(图1)。
实施例2：免疫荧光法观测各处理组中FABP4的表达情况
实验组分为四组，分别为Control组(RAW264.7细胞)、BCG组(RAW264.7细胞感染BCG)、siRNA-FABP4组(RAW264.7细胞转染siRNA-(A+B))与siRNA-FABP4+BCG组(RAW264.7细胞转染siRNA-(A+B)后感染BCG)，其中Control组与BCG组转染siRNA-NC，siRNA-FABP4组与siRNA-FABP4+BCG组转染siRNA-FABP4，24h后结合或不结合BCG感染，12h后依照免疫荧光法处理，随后用共聚焦显微镜观察。
具体步骤如下：
细胞爬片：
a)感染前一天，每孔5×104细胞接种于十二孔板中的细胞爬片上，每孔加入1mL含10％FBS的DEME培养基，于37℃、饱和湿度、5％CO2培养箱中进行培养。
b)转染前换液，12孔板每孔换液1mL OPTI-MEM培养基，按照实验组设计转染siRNA-NC或siRNA-FABP4；
c)24h后吸弃各孔中液体，每孔加入1mL含10％FBS的DMEM培养液，按实验组设计结合或不结合BCG感染(MOI 1:10)。
d)12h后吸弃孔板中的培养基，PBS清洗两次，每次5min。
e)吸弃PBS，每孔加入1mL4％多聚甲醛，常温孵育30min。
f)吸弃多聚甲醛，PBS洗两次，每次5min。
g)吸弃PBS，每孔加入1mL 0.5％Triton-X100常温处理30min。
h)吸弃Triton-X100，PBS洗两次，每次5min。
i)吸弃PBS，每孔加入500μL3％BSA，室温放置1h。
j)每孔加入2.5μL FABP4抗体(兔抗鼠FABP4抗体，Thermo fisher，Prod#701158)，4℃孵育过夜。
k)吸弃BSA，PBS洗两次，每次5min。
l)用PBS配置荧光二抗(驴抗兔IG(H+L)荧光二抗，Invitrogen，Catalog#A-21432)，稀释浓度1:200，避光备用。
m)吸弃PBS，每孔加入500μL二抗，避光常温孵育1h。
n)吸弃二抗，PBS洗两遍，每遍5min。
o)用带DAPI的封片液封片，用激光共聚焦显微镜观察；
结果如图2所示，其中，四列从左到右依次为：Control组、BCG组、siRNA-FABP4组与siRNA-FABP4+BCG组。结果显示，BCG感染可显著上调RAW264.7中FABP4的表达，FABP4小干扰RNA可成功敲减细胞内FABP4表达。
实施例3：Western-Blot检测各组内FABP4的表达差异
试验处理组设置与具体处理时间与实施例2相同，处理结束后提取各处理组RAW264.7细胞总蛋白，用Western-Blot检测细胞内FABP4的表达情况，蛋白提取、BCA定量与Western-Blot具体试验操作与实施例1相同。按照前文“技术方法说明”部分所述步骤，使用一抗(兔抗鼠FABP4抗体，Thermo fisher，Prod#701158)4℃孵育过夜，洗涤后用二抗(羊抗兔HRP酶标二抗，Proteintech，SA00001-2)进行Western-Blot检测。结果参见图3，其中，四列从左到右依次为：Control组、BCG组、siRNA-FABP4组与siRNA-FABP4+BCG组。结果显示，BCG感染可显著上调RAW264.7中FABP4的表达，FABP4小干扰RNA可成功敲减细胞内FABP4表达。
实施例4：干扰FABP4的表达对BCG感染的巨噬细胞凋亡蛋白Caspase3、PARP产生促进作用试验处理组设置与具体处理时间与实施例2相同，处理结束后提取各处理组RAW264.7细胞总蛋白，用Western-Blot检测细胞内凋亡关键蛋白Caspase3和PARP的分子表达水平。按照前文“技术方法说明”部分所述步骤，使用一抗(兔抗鼠Caspase-3，Proteintech,19677-1-AP；兔抗鼠PARP，Abcam，ab32064)4℃孵育过夜，洗涤后用二抗(羊抗兔HRP酶标二抗，Proteintech，SA00001-2,)进行Western-Blot检测。结果参见图4(图A为FABP4、β-actin、Cleaved-Caspase-3、Cleaved-PARP实验结果图；图B、C、D分别为FABP4、Cleaved-Caspase-3、Cleaved-PARP与相比与β-actin的表达量)结果显示：与阴性对照组相比，FABP4干扰组的Caspase3及PARP蛋白表达量均发生上调，而FABP4+BCG组与BCG组相比Caspase3和PARP蛋白的表达量发生显著上调。因此，FABP4能够抑制BCG诱导的巨噬细胞凋亡。
Caspase-3与PARP为细胞凋亡的标志蛋白，在细胞正常时，细胞内部也会表达这两种蛋白，蛋白大小分别为34kDa与114kDa；但是细胞功能异常，如细胞凋亡发生时，这两个蛋白会被更上游的蛋白酶剪切，Caspase-3被剪切激活，形成17kDa的活性蛋白，PARP被剪切，形成24kDa的蛋白片段，图4中，C中显示检测的Cleaved-Caspase-3的结果与D中显示检测Cleaved-PARP的结果。
以上实验证明：1)针对FABP4的小干扰RNA能有效抑制FABP4的表达；2)抑制FABP4的表达可以促进BCG感染的巨噬细胞发生凋亡；3)结核分枝杆菌作为一种胞内寄生菌，在感染巨噬细胞后，巨噬细胞会通过细胞凋亡对胞内的结核分枝杆菌进行清除，然而结合分支杆菌也会通过多种方式抑制细胞凋亡的发生，最终达到在体内复制并扩散，其中具体调控机制复杂，至今尚未明晰。BCG作为目前全球唯一推广使用的结核分枝杆菌疫苗株，与结核分枝杆菌的抗原性有一定的相似度。因此研究BCG感染巨噬细胞后对巨噬细胞凋亡的影响，有助于揭示结核分枝杆菌的具体致病机制。本专利通过通过干扰细胞内FABP4蛋白的表达，研究FABP4在BCG感染所引起的巨噬细胞凋亡中的作用，研究结果为结核病的预防和治疗提供了理论依据。
以上各个实施例只是用于进一步说明本发明，并不是用来限制本发明的保护范围，凡是基于本发明的构思所作出的等同变换及对本发明的各个技术方案显而易见的改进，均落入本发明的保护范围。
序列表
<110> 宁夏大学
<120> 脂肪酸结合蛋白4的小干扰RNA及其应用
<141> 2019-04-12
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gacuuccaca agaguuuau 19
<210> 2
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
auaaacucuu guggaaguc 19

Claims (8)

1.一种RNA调节制剂，所述RNA调节制剂能够在活细胞中靶向抑制FABP4基因；
所述RNA调节制剂是小干扰RNA，所述小干扰RNA的正义链与反义链的序列分别选自SEQID NO:1和SEQ NO:2所示的RNA序列。
2.如权利要求1所述的RNA调节制剂，其特征在于，
所述FABP4基因的序列为GenBank登录号CT010390.1所示的序列；
所述活细胞是RAW264.7细胞。
3.一种RNA调节复合物，所述RNA调节复合物能够将如权利要求1或2所述的RNA调节制剂转染或运转进入所述活细胞；
所述RNA调节复合物包括如权利要求1或2所述的RNA调节制剂和脂质体。
4.一种RNA调节复合物的制备方法，所述制备方法为将如权利要求1或2所述的RNA调节制剂与脂质体混合，形成所述RNA调节复合物。
5.一种药物组合物，所述药物组合物包括如权利要求1或2所述的RNA调节制剂或权利要求3所述的RNA调节复合物以及药学上可接受的载体或辅料；
所述药学上可接受的载体选自壳聚糖、胆固醇和纳米颗粒中的一种或几种；
所述药物组合物的给药方式选自口服、静脉注射、肌肉注射中的一种或几种。
6.一种基因工程表达载体，所述基因工程表达载体能够表达在活细胞中靶向抑制FABP4基因的小干扰RNA；
所述FABP4基因的序列为GenBank登录号CT010390.1所示的序列；
所述活细胞是RAW264.7细胞；
所述小干扰RNA的正义链与反义链的序列分别选自SEQ ID NO:1和SEQ NO:2所示的RNA序列，
所述基因工程表达载体经体外转录产生所述小干扰RNA；或者
所述基因工程表达载体在非靶细胞的细胞中转录产生所述小干扰RNA；或者
所述基因工程表达载体在靶细胞中转录产生所述小干扰RNA。
7.一种试剂盒，所述试剂盒中含有如权利要求1或2所述的RNA调节制剂，如权利要求3所述的RNA调节复合物，如权利要求4所述的制备方法制备得到的RNA调节复合物，如权利要求5所述的药物组合物或如权利要求6所述的基因工程表达载体。
8.如权利要求1或2所述的RNA调节制剂，如权利要求3所述的RNA调节复合物，如权利要求4所述的制备方法制备得到的RNA调节复合物，如权利要求5所述的药物组合物或如权利要求6所述的基因工程表达载体在制备治疗、预防或减缓结核病的药物中的用途。
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