CN109925311A - 一种TPCA-1在Svv循环调控通路相关肿瘤精准防治中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种IKKβ激酶抑制剂——TPCA‑1在肿瘤精准防治中的用途，TPCA‑1通过特异性地抑制IKKβ表达，从而阻断肿瘤组织中的Svv→IKKβ→NF‑κB→Svv循环调控通路，最终显著降低Svv的表达，进而抑制肿瘤的发生、进展；而Svv作为非常重要的原癌基因在几乎所有的肿瘤组织里持续高表达，Svv→IKKβ→NF‑κB→Svv循环调控通路广泛存在于多种肿瘤细胞中，所以TPCA‑1具有用于精准防治Svv→IKKβ→NF‑κB→Svv循环调控通路相关肿瘤的前景。

Description

一种TPCA-1在Svv循环调控通路相关肿瘤精准防治中的用途

技术领域

本发明涉及肿瘤的精准防治领域，具体涉及一种通过阻断肿瘤组织细胞中的Svv→IKKβ→NF-κB→Svv循环调控通路，最终显著抑制Svv表达的化合物—IKKβ 激酶特异性抑制剂TPCA-1，在Svv→IKKβ→NF-κB→Svv循环调控通路相关肿瘤精准防治中的用途。

发明背景

Survivin（Svv）的结构与功能特点：Svv的编码基因，BIRC5，位于人类染色体17q25，由三个内含子与四个外显子构成^[29]。Svv是IAPs家族最小的成员，野生型Svv由142个氨基酸组成，在胞浆内通常以同源二聚体形式存在。多项研究表明，Svv可与多种内源性及外源性途径的凋亡调控因子相互作用，明显的抑制凋亡的发生。同时，Svv在维持细胞稳态中也扮演了重要的角色，具有多种功能，参与了促进细胞有丝分裂、细胞内信号转导、细胞存活以及促进肿瘤血管生成等多种过程，并可参与DNA损伤修复。此外，Svv还具有转录调控因子的功能，例如对线虫类模式生物C. elegans的研究显示，通过siRNA沉默人Svv的同族蛋白BIR-1，可降低dpy-7和hlh-1基因的表达^[34]；同样在两栖类模式生物非洲爪蟾中，人Svv的同族蛋白SIX，可与核受体/转录因子RXRα相互作用，调控下游基因的转录。

Svv在已分化的正常组织中几乎不表达，但在绝大多数的癌症组织中持续高表达，提示Svv很可能在肿瘤的发生、进展中起了重要作用。现有研究显示Svv主要参与了肿瘤细胞的凋亡与周期干预调控。比如在食管癌中表达具有以下特征：①在食管癌等多种高发肿瘤标本中其表达阳性率为46.3%-90.0%；②在正常组织中不表达，而在不典型增生和癌组织中逐渐増高；③随着肿瘤的发展其癌组织表达阳性率逐渐升高。类似的结果也在前列腺癌、卵巢肿瘤、膀胱癌、结直肠癌、胰腺导管癌等肿瘤的研究中得出。

κB 、IKKβ的结构与功能特点：NF-κB是一种胞浆/核双相分布的转录因子，静息状态时，NF-κB的p50-p65亚基与抑制因子IκB结合组成一个三聚体p50-p65-IκB，以无活性的状态存在于细胞浆中。在IκBs激酶（IKK）催化IκBs的丝氨酸残基磷酸化后，IκBs发生多泛素化而被蛋白酶体降解，从而使NF-κB从p50-p65-IκB复合体释放、活化，活化的NFκB转位到核内与其相关的DNA序列结合以诱导靶基因转录。NFκB参与对众多炎症因子的转录调控、分子免疫应答以及细胞的凋亡、分化和增生等重要生理病理过程。近年来大量研究表明，NFκB还与多种实体瘤的发生密切相关。

在NFκB活化过程中，IKK的激活是最重要的起始因素，是NFκB信号通路调控的关键环节。IKK可被高血糖、高游离脂肪酸、糖基化终末产物、感染等多种因素激活，进而活化NFκB，启动其下游基因转录。IKK是由一个调节亚单位IKK-γ和两个催化亚单位IKKα，IKKβ组成。IKKα和IKKβ属于丝/苏氨酸蛋白激酶，而IKKγ无催化活性。在经典的NFκB激活途径中，IKKβ的活化起到了非常重要的作用。IKKβ基因敲除实验证实小鼠在缺乏IKKβ情况下，受到炎症细胞因子刺激时，这些小鼠NFκB激活通路出现障碍，由此说明，IKKβ是诱导NFκB活化的主要激酶^[15]。

κB对Svv的转录调控： NFκB可正调控Svv的表达。如在肾透明细胞癌RC3细胞系，激活NF-κB可上调Svv的表达；在射线抵抗的HER2(+) 乳腺癌细胞，诱导NFκB可激活Svv的表达并抑制凋亡；而在两种EBV阳性的NKTL淋巴瘤细胞系SNK-6和SNT-8，NFκB可诱导Svv的表达上调；在内皮细胞中，Svv/XIAP 可以通过NIK/TAK/TAX激活IKKβ和NFκB；在内皮前体细胞中存在Id1/PI3K/Akt/NF-κB/Svv 信号通路，Akt通过磷酸化IκB释放NFκB去上调Svv的表达。NFκB在其调控的下游靶基因启动子区具有识别与结合位点。

是IKKβ选择性抑制剂,分子式：C12H10FN3O2S，化学结构为

IC50为17.9 nM，对IKKα有22倍以上的选择性，对其它激酶则有超过550倍的选择性^[48]。TPCA-1(3, 10, 或20 mg/kg，i.p., b.i.d.)预防性给药，导致小鼠体内胶原诱导性关节炎(CIA)的严重程度剂量依赖性降低。TPCA-1(10 mg/kg, i.p., b.i.d.)导致的显著降低的疾病严重程度和疾病发作的延迟与抗风湿药，etanercept(4 mg/kg, i.p.)每隔一天预防性给药的作用相当。TPCA-1 和etanercept-处理的小鼠爪子组织中，p65的细胞核定位，以及IL-1β，IL-6，TNF-α，和干扰素-γ的水平显著降低。此外，TPCA-1给药导致体内胶原诱导的T细胞增殖显著减少。TPCA-1以20 mg/kg，而不是3或10 mg/kg，i.p.，b.i.d.治疗性给药显著降低CIA的严重程度，etanercept以12.5 mg/kg, i.p.，每隔一天给药具有同样的效果。

由上可知，现有研究均提示Svv与肿瘤的发生、发展关系非常密切，但是：

（1）在一些肿瘤细胞中，NFκB可正向调控Svv转录，Svv是NFκB的下游靶基因。但是，这一正向调控机制是否在其它常见的肿瘤细胞中存在，它是否可能与Svv正向调控NFkB形成Svv→IKKβ→NF-κB→Svv的正向调控环路均未见报道。

（2）对于Svv作为转录因子的转录调控机制，以及它是如何保持自我表达从无到有、从弱到强并持续高表达的分子调控机制仍无肯定答案。

（3）未见将TPCA-1用于精准防治Svv→IKKβ→NF-κB→Svv正向调控环路相关肿瘤的研究报道。

发明内容

针对在多种肿瘤细胞中是否存在NF-κB正向调控Svv转录，是否可能与Survivin正向调控NFkB形成Svv→IKKβ→NF-κB→Svv的正向调控环路这一问题，我们在Hela细胞与食管鳞癌细胞中、在肺癌、食管永生化细胞、结直肠癌中，均观察到外源性Survivin可以明显提升内源性Svv的表达。得到了在食管、结直肠和肺鳞癌细胞中形成了Svv→IKKβ→NF-κB→Svv的正向调控环路的证据。由于Svv在多种肿瘤细胞里是主要的原癌基因，综合其他人的研究成果，我们认为Svv→IKKβ→NF-κB→Svv的正向调控环路广泛存在于多种肿瘤细胞中。

本发明的目的是：

探寻能阻断肿瘤细胞中Svv→IKKβ→NF-κB→Svv循环调控通路、并最终显著抑制Svv表达，具有用于存在Svv→IKKβ→NF-κB→Svv循环调控通路肿瘤精准防治前景的化合物。

本发明具体技术内容：一种TPCA-1在Svv循环调控通路相关肿瘤精准防治中的用途,TPCA-1通过特异性地抑制IKKβ表达，从而阻断肿瘤组织中的Svv→IKKβ→NF-κB→Svv循环调控通路，最终显著降低Svv的表达。

优选地，所述肿瘤是肿瘤细胞中存在Svv→IKKβ→NF-κB→Svv循环调控通路的肿瘤，外源性Svv明显提升肿瘤细胞内源性Svv表达的同时，也增高IKKβ的表达量；而IKKβ抑制剂在降低肿瘤细胞中IKKβ表达的同时，也显著降低内源性Svv的表达量。

本发明有益效果：（1）外源性Svv通过IKKβ上调内源性Svv蛋白水平，存在Svv→IKKβ→NF-κB→Svv正向调控环路。

（2）IKKβ 激酶特异性抑制剂TPCA-1通过抑制肿瘤细胞Svv→IKKβ→NF-κB→Svv循环调控通路中的IKKβ，达到了最终降低Svv表达的目的，具有用于相关肿瘤精准防治的前景。

附图说明

图1为3×flag-Survivin的PCR扩增

图2为GV-219载体双酶切电泳图

图3为PCR鉴定重组质粒电泳图

图4为Western Blot检测CMV-MCS-3flag-Survivin-SV40-Neomycin质粒的表达

图5为在ECA109细胞中，外源性Svv通过IKKβ上调内源性Svv蛋白水平

图6为SPC-A-1细胞中转染Flag-Survivin重组质粒对Survivin、IKKβ、NF-κB p65在蛋白水平表达的影响。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步介绍本发明的实施及所具有的有益效果，目的在于帮助阅读者更好理解本发明的实质和精神，不能构成对本发明实施范围的限定。

实施例1

在食管鳞癌ECA-109细胞株中，我们观察到外源性Svv通过IKKβ上调内源性Svv蛋白水平。具体表现为：

1、外源性Svv明显提升内源性Svv的表达（图5b）；

2、IKKβ特异性抑制剂TPCA-1则降低了内源性Svv的表达量,同时qPCR检测Svv mRNA水平下调了70%（图5a）。

具体实验方法如下：

1.3×flag-Survivin-GV-219质粒构建、转化、抽提及测序

1.1.3×flag-Survivin，3×flag-p107引物设计与扩增

(1)根据GenBank中Survivin(HM625836.1，GI:30436781)编码序列设计PCR引物，并且在上游引物5’端引入XhoI酶切位点，下游引物5’端引入KpnI酶切位点，设计引物在Survivin cDNA前添加3×flag标签识别序列，产物预计长度544bp；(2)根据GenBank中（BC032247.1，GI:2159524）p107编码序列设计PCR引物，并且同样在上游引物5’端引入XhoI酶切位点，下游引物5’端引入KpnI酶切位点，设计引物在p107 cDNA前添加3×flag标签识别序列，产物预计长度3162bp。

扩增条件：98℃ 5 min;98℃ 10s，55℃ 10s,72℃ 90s，30个循环；72℃ 8 min。反应体系如下：ddH₂O 32.5 μL，5×PS Buffer 10μL,dNTP MIX 4μL，上游扩增引物1 μL，下游扩增引物1 μL，模板（cDNA）1 μL，Prime STAR HS DNA polymerase 0.5 μL。

和XhoI分别双酶切质粒和PCR扩增产物

（1）GV219载体双酶切。反应条件37℃，2 h；反应体系：KpnI 1 μL，XhoI 1 μL，10×Kbuffer 2 μL，Vector（GV219）3μL，ddH₂O 13 μL。（2）PCR扩增产物的双酶切。反应条件：37℃，2h。反应体系：KpnI 1 μL,XhoI 1 μL,10×K buffer 2 μL,DNA 5 μL,ddH₂O 11 μL。

连接3×flag-Survivin基因,3×flag-p107基因和GV-219载体

(1)16℃过夜，反应体系：GV-219vector 1 μL，3×flag-SurvivinDNA 3 μL，10×T₄DNALigase buffer 1 μL。T₄DNA Ligase 1 μL，ddH₂O 4 μL。产物交换入线性化表达载体，PCR鉴定引物，PCR鉴定重组克隆，PCR预期阳性转化因子产物844bp；(2)16℃过夜，反应体系：GV-219vector 1 μL，3×flag-p107DNA 3 μL，10×T₄DNA Ligase buffer 1 μL，T₄DNA Ligase1 μL，ddH₂O 4 μL。产物交换入线性化表达载体，PCR鉴定引物，PCR鉴定重组克隆，PCR预期阳性转化因子产物1017bp。

1.4 质粒转化至E.coli DH5α感受态细菌

将含有50 μL感受态细胞的EP管放置于冰上进行解冻，待完全解冻后将细胞悬浮，加2.5 mL连接液后混匀，放置冰上30 min，然后置于42℃水浴进行热激50～60s后，在转至冰上2 min，加200 μL不含AMP抗生素的LB液体培养基，37℃ 220 rpm振荡培养1 h。然后，涂布于含氨苄霉素的LB培养平板上（含IPTG/X-gal），37℃正向放置1 h，颠倒培养过夜，次日挑取LB培养板上的白色单克隆菌落（挑取4个克隆菌落，分别命名为a₁,a₂,a₃,a₄）至含有氨苄霉素的LB液体培养基（6～7mL）中，置37℃、200～300 rpm，振荡培养过夜。（2）送菌液测序以鉴定目的基因连接的正确性。（3）用质粒试剂盒抽提质粒双酶切鉴定。

质粒DNA的提取

15 mL离心管中加入6~7 mL含氨苄青霉素的LB液体培养基，并在Agar固体培养基的菌落中，挑取单个白色单克隆菌接种于LB液体培养基中，于37℃恒温孵育箱内培养13～16h，（1）取过夜培养的菌液，5000 rpm离心5 min收集菌体，（2）在沉淀中加入250 μL BufferP1，将菌体彻底悬浮。（3）加入250 μL Buffer P2，立刻温和颠倒离心管8次，室温静置2min。（4)加入350 μL Buffer P3，立刻温和颠倒离心管8次混匀。（5）13000 rpm离心15 min，将上清移入吸附柱，13000 rpm离心30秒，掉到收集管中的液体。（6）加入500 μL WashSolution，13000 rpm离心30秒，掉到收集管中的液体。（7）重复步骤(6)一次。（8）空吸附柱于13000 rpm离心1 min.(9)将吸附柱放入一个高压过的1.5 ml EP管中，在吸附膜中央加入50 μL Elution Buffer,室温静置1 min后，离心1 min。将得到的质粒DNA溶液用于后续实验或者放置于-20℃进行保存。

质粒测序

所构建质粒DNA序列的准确性需经过测序鉴定，测序公司为上海生工生物工程有限公司。

质粒浓度测定

（1）取2 μL抽提好的质粒DNA，加入98 μL ddH₂O，混匀；（2）将ddH₂O作为空白对照，在波长260 nm、280 nm处调节紫外分光光度计的读数为0；（3）将配置好的质粒稀释液，在波长260 nm、280 nm处测定吸光值；（4）记录吸光度值，然后计算求得质粒的浓度。

2.细胞培养

2.1细胞复苏 从液氮罐中取出一支ECA109细胞冻存管，套上PE手套，迅速置于37℃水浴箱中直至完全融化，用75%的医用酒精对冻存管表面进行擦拭。迅速将细胞悬液加入到20mL 1640完全培养基中混匀，接种到2个10 cm直径的细胞培养皿中，十字摇匀法摇匀后，置于37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养48 h，次日观察细胞的形态。

细胞换液配制新鲜1640完全培养基(含10%胎牛血清，1%的青/链霉素双抗)，细胞换液前，提前将1640完全培养基置于37℃、5% CO₂的培养箱中预热。换液时，移液枪轻轻吸去旧的完全培养基，并轻轻加入10mL新鲜配制的完全培养基，置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

细胞传代实验开始之前取出所有需要的培养液及试剂，提前放置于生物安全柜内预热至室温备用。镜下观察ECA109细胞状态，当细胞达到70%～80%的汇合率时进行传代培养。从培养皿中轻轻吸去旧的培养基，无菌的PBS缓冲液清洗2遍。加入1 mL 胰蛋白酶，缓慢倾斜培养皿，使胰蛋白酶完全覆盖细胞表面。显微镜下观察细胞形态，当细胞变圆开始脱落时(1~3 min),立即加入5 mL新鲜完全培养基。缓慢吹打细胞，并收集细胞至5 mL无菌离心管中，1000 rpm离心5 min。细胞沉淀用完全培养基重悬并计数，按照4×10⁴/ml的密度进行传代，于37℃、5% CO₂培养箱中培养。

细胞冻存将过滤后的胎牛血清、1640全培养基和DMSO以 6：3：1 的比例混合配制成冻存液。对细胞培养皿上进入对数生长期的细胞进行消化，消化结束后加入1640完全培养基终止消化，1000 rpm，离心5 min使细胞沉淀。将前面配好的冻存液加入细胞中，柔和的吹打细胞沉淀使其悬浮，通过冻存管进行分装，每管1ml，写上细胞名称和日期。细胞冻存的方法：第一步4℃ 40 min、第二步-20℃ 60 min、第三步-80℃过夜，最后用液氮将冻存管长久保存；另外也可以采用第一步 4℃30 min，再放入到壁厚 1 cm 以上的泡沫塑料盒，并且进行密封处理。第二步-80℃冰箱 24 h 以上，最后小心放入液氮罐冷冻储存。后者一般使用于中期保存。

细胞准备将ECA109细胞进行传代，取两只 60 mm 直径的培养皿（含有无抗性培养基），一般按照1×10⁵～2×10⁵ /cm 2 的比例重新进行接种，放入37℃、5％ CO₂的温箱保持培养24 h。

细胞电转仔细观察细胞形态确定细胞没有长满或者处于静止期，转染时应等到细胞长至85%-90%汇合度时即可开始。(1) 弃取旧的培养基，用2 mL的PBS清洗细胞表面后，弃掉。（2）取1.5 mL胰酶放入培养瓶中，放置37 ℃、5％ CO₂培养箱进行消化3 min后，立即加入1 ml新鲜1640完全培养基。缓慢吹打细胞，并收集细胞至15 ml无菌离心管中，1000 rpm离心5 min。（3）弃去上清液，加入无菌的PBS将细胞悬浮，1000 rpm离心5 min。（4）弃去上清液，加入Opti-MEM转染液将细胞悬浮，1000 rpm离心5 min。（5）弃去上清液，加入Opti-MEM转染液将细胞悬浮。（6）用移液枪吸取400 μL的Opti-MEM细胞悬浮液和相对应的质粒加入到电转杯中。（7）用电转移进行电转。（8）电转后离心将上清液弃取，加入新的1640全培养基，置于六孔板中。（4）转染后置于温箱（37 ℃、5％CO₂ ）中继续培养，大概24 h细胞即可将培养皿底部长满。在温箱培养期间，每过12 h需要换一次培养液。

3.蛋白抽提与检测

3.1细胞裂解/细胞核蛋白抽提 （1）将培养皿中原有的旧培养液弃去，加入预冷的 PBS溶液轻轻洗涤两遍后将PBS 弃去。（2）将冰上预冷的IP裂解缓冲液加入到细胞中（六孔板，每孔300 μL），冰上孵育5 min并定期混匀。（3）将细胞裂解液转移到EP管中，14000 rpm离心5~10 min。（4）将上清液转移到一个新的EP离心管中，进行蛋白浓度测定。

蛋白浓度检测（1）蛋白标准品的配置（如下表所示）。（2）在96孔板中，第一排的9个孔内从低到高依次加入各个浓度的蛋白标准品各25 μL；第二排再依次加入待测蛋白样品各25 μL，每个待测蛋白样品设3个复孔。（3）加入200 μL的A与B工作混合液(50：1)，混合均匀，贴上封板膜。（4）37℃孵育箱放置30 min。（5）使用紫外分光光度计在562 nm处测定蛋白的吸光度。（6）通过标准曲线，计算蛋白浓度。

3.3 Western-blot(SDS-PAGE)

（1）配制5%浓缩胶以及适宜浓度（10%或者12%）的分离胶（根据蛋白分子量的范围），并进行制胶。

TEMED

0.006mL

0.005mL

（2）首先按照分离胶的配方先配置分离胶，然后加ddH₂O封层，等分离胶完全凝固后（大约30 min），将小心将ddH₂O用滤纸吸干净，在配浓缩,灌胶后，立即插梳子。等浓缩胶完全凝固后（大约30 min），将胶从胶架上拿出，用ddH₂O将胶板表面冲洗干净，卡在电泳槽里，倒入适当的电泳液，进行加样。（3）每孔加样20 μL，80 V 电压进行电泳，20 min后将电压改为100 V。当观察到溴酚蓝开始要离开凝胶时电泳就可以停止，开始进行转膜。（4）电泳结束后，回收电泳液，将浓缩胶切除，将分离胶浸泡在转膜缓冲液中进行湿转。并根据分离胶的大小裁剪相应的PVDF膜和滤纸，PVDF膜提前用甲醇处理好（将PVDF浸泡在甲醇中60s后立即拿出，放入ddH₂O中漂洗2s），将处理好的PVDF膜浸泡在转膜液中，滤纸和转膜垫也提前在转膜液中浸泡。将泡好转膜垫、滤纸、胶、膜按顺序依次叠放，并用玻璃棒赶除气泡后放入转膜槽中，250 mA恒流转膜45 min，将蛋白质从凝胶中转移到PVDF膜上。(5)转膜结束后，将PVDF膜拿出，用 TBST 溶液对 PVDF 膜进行漂洗5 min。(6)在室温下，取5％的脱脂奶粉的 TBST加入将膜浸润，进行封闭15 min。（7）将膜从封闭液中取出，使用 TBST 溶液再次洗膜，5min。（8）一抗孵育：PVDF膜封闭，洗膜结束后，根据蛋白的大小，对膜进行裁剪，并置入含有TBST稀释的一抗中(Survivin为l：1000，p107为1：800，β-actin为1：1500)室温1 h或者4℃过夜；从一抗中取出孵育的PVDF膜，置于TBST中，水平摇床上，缓速洗膜三次，每次10 min。（9）二抗孵育：洗膜结束后，将PVDF膜放置于具有辣根过氧化物酶标记的二抗体中(1：5000)室温下孵育20 min，再置于TBST中，水平摇床上，洗膜三次，每次10 min。 （10）显影，将待发光的PVDF置于保鲜膜上，取ECL化学发光剂盒中A试剂和B试剂各100～200 μL，以1：1等比例混合，用加样枪均匀的滴在膜上，90s后用纸吸除过量的溶液，将待发光的PVDF膜包在保鲜膜里，用ImageLab软件，进行发光和分析，β-actin做为内参对照，从而检测蛋白的表达水平。

4. 结果

4.1 重组质粒的鉴定

4.1.1 3×flag-Survivin片段的扩增

使用3×flag-Survivin作为模板进行PCR扩增得到的PCR产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，可见在约544bp处有一条特异性扩增区带（图1中标识1），与预计的目的片段大小位置相符。

载体双酶切电泳图

用XhoI 和 KpnI 双酶切GV-219载体，进行琼脂糖凝胶电泳，可见在约6kb处有一条特异性扩增区带（图2中标识3）

4.1.3 PCR鉴定3×flag-Survivin重组质粒

对3×flag-Survivin重组质粒进行PCR扩增，进行琼脂糖凝胶电泳，可见在约844bp处有一条特异性扩增区带（图3中标识4）与预计的目的片段大小位置相符。

4.2. 过表达载体细胞转染后表达蛋白的western-blot验证

4.2.1 CMV-MCS-3flag-Survivin-SV40-Neomycin的过表达Survivin

蛋白的Western Blot验证

在食管癌ECA109细胞中，为了验证CMV-MCS-3flag-Survivin-SV40- Neomycin质粒在ECA109细胞中是否正常表达Survivin,我们将此质粒转染ECA109细胞，将CMV-MCS-3flag-SV40-Neomycin质粒作为阴性对照，空白的ECA109细胞作为空白对照，转染24h后收集细胞蛋白，用anti-Survivin抗体，anti-Flag标签抗体进行实验检测，结果如图4标识1。结果显示CMV-MCS- 3flag-Survivin-SV40-Neomycinp质粒能够表达Survivin蛋白。其中，在19.0kD的位置检测出含Flag标签的Survivin蛋白（外源性Survivin），在16.5kD的位置检测出Survivin蛋白（内源性Survivin）。.

实施例2

我们用实施例1相同的方法，在肺腺癌细胞株（SPC-A-1 ）中观察到：

1、外源性Svv明显提升内源性Svv的表达（图6a泳带3），同时也增高IKKβ的表达量（图6b泳带3）；

2、IKKβ特异性抑制剂TPCA-1则在降低IKKβ的表达量（图6b泳带4）的同时，也降低了内源性Svv的表达量（图6a泳带4）。

Claims (3)

1.TPCA-1在Svv循环调控通路相关肿瘤精准防治中的用途，其特征在于,所述肿瘤是肿瘤细胞中存在Svv→IKKβ→NF-κB→Svv循环调控通路的肿瘤，TPCA-1通过特异性地抑制IKKβ表达，从而阻断肿瘤组织中的Svv→IKKβ→NF-κB→Svv循环调控通路，最终显著降低Svv的表达。

2.根据权利要求1中所述的TPCA-1在Svv循环调控通路相关肿瘤精准防治中的用途，其特征在于：所述肿瘤是食管癌。

3.根据权利要求1中所述的TPCA-1在Svv循环调控通路相关肿瘤精准防治中的用途，其特征在于：所述肿瘤是是肺癌。