CN109825447A - 一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺 - Google Patents
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Abstract
一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺，在厌氧条件下，从菌种保存培养皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厌氧、30℃‑37℃下培养24h‑36h；将制备好的丁酸梭菌活化液接种到发酵罐的发酵培养基中，在温度为30℃‑37℃下进培养，作为二级培养种子液,接种到发酵罐的发酵培养基中，在30℃‑37℃下进行一级种子液培养，发酵结束后，收集二级发酵种子液,接种至发酵罐中，进行发酵培养，发酵温度30℃‑37℃，培养全程通入氮气，发酵结束后，收集罐内发酵液。优点是：将丁酸梭菌经优化菌种活化，发酵工艺优化控制，确立了稳定的产业化发酵生产工艺，发酵后可生产出发酵活菌数高，大大减少了丁酸梭菌的生产成本，适合工业规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺。
背景技术
丁酸梭酸(Clostridium butyricum)是一种专性厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌，为内生芽孢，具有很强的耐受性，能耐高温、耐酸、耐胆汁，因而通过消化道不失活，在体外室温下可保存三年以上不失效。并且对青霉素、氨苄西林、链霉素、庆大霉素、妥布霉素、氯霉素等有一定的抗性，因此这种制剂可和抗生素合用，提高疗效。大量实验证明它无任何毒副作用，被广泛用于医药、功能性保健食品和动物饲料的添加剂及植物肥料。
目前，枯草芽孢杆菌的发酵培养仍停留在实验室阶段，生产成本高，不适合工化投产。而工业化生产，普遍存在产品活菌数低，产品没有市场竞争。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺，该方法发酵条件合理，成本低廉，产品活菌数搞，产品质量稳定，适合工业化生产。
本发明的技术解决方案是：
一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺，其具体步骤如下：
1.1培养基组成
发酵培养基，1L：胰蛋白胨1％、牛肉粉膏0.3％、酵母粉0.5％、葡萄糖2％、氯化钠0.2％、乙酸钠0.2％、L-半胱氨酸盐酸盐0.05％、硫酸镁0.02％、硫酸锰0.02％、碳酸钙0.05％、磷酸氢二钾0.4％、水余量；
1.2菌种活化
称取GAM培养基60.0g，加热溶解1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，冷却至室温，氯化血红素2.5g，脱纤维兔血70mL，卡那霉素100mg，新霉素100mg，万古霉素1mg，混匀，得到活化液；
在厌氧条件下，从菌种保存培养皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厌氧、30℃-37℃下培养24h-36h；
1.3一级种子培养
将制备好的丁酸梭菌活化液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为1％-5％，在温度为 30℃-37℃、罐压为0.05Mpa-0.10Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为100r/min -200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0-6.0，发酵培养10h，作为二级培养种子液；
1.4二级种子培养
将制备好的二级培养种子液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为1％-5％，在温度为 30℃-37℃、罐压为0.05Mpa-0.10Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为100r/min -200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0-6.0，发酵培养10h，发酵结束后，收集二级发酵种子液；
1.5发酵培养
将二级发酵种子液接种至发酵罐中，进行发酵培养，接种量为3％-5％，发酵温度30℃-37℃，罐压为0.05Mpa-0.10Mpa，发酵罐转速为100r/min-200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0-6.0，发酵培养24h-36h，发酵结束后，收集罐内发酵液。
本发明的有益效果：
将丁酸梭菌经优化菌种活化，发酵工艺优化控制，确立了稳定的产业化发酵生产工艺，采用本方法发酵后可生产出发酵活菌数5.0×109CFU/ml-1.0×1010CFU/ml，大大减少了丁酸梭菌的生产成本，适合工业规模化生产。
附图说明
图1-图2是本发明实施例1的菌种鉴定报告。
具体实施方式
实施例1
1.1培养基组成
发酵培养基，1L：胰蛋白胨1％、牛肉粉膏0.3％、酵母粉0.5％、葡萄糖2％、氯化钠0.2％、乙酸钠0.2％、L-半胱氨酸盐酸盐0.05％、硫酸镁0.02％、硫酸锰0.02％、碳酸钙0.05％、磷酸氢二钾0.4％、水余量；
1.2菌种活化
称取GAM培养基60.0g，加热溶解1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，冷却至室温，氯化血红素2.5g，脱纤维兔血70mL，卡那霉素100mg，新霉素100mg，万古霉素1mg，混匀，得到活化液；
在厌氧条件下，从菌种保存培养皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厌氧、30℃下培养24h；
1.3一级种子培养
将制备好的丁酸梭菌活化液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为1％，在温度为30℃、罐压为0.05Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为100r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0，发酵培养10h，作为二级培养种子液；
1.4二级种子培养
将制备好的二级培养种子液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为1％，在温度为30℃、罐压为0.05Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为100r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0，发酵培养10h，发酵结束后，收集二级发酵种子液；
1.5发酵培养
将二级发酵种子液接种至发酵罐中，进行发酵培养，接种量为3％，发酵温度30℃，罐压为0.05Mpa，发酵罐转速为100r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0，发酵培养24h，发酵结束后，镜检菌体全部形成芽孢，停罐，收集罐内发酵液。菌株经16SrDNA序列测序鉴定，确定该菌为丁酸梭菌。发酵活菌数5.0×109CFU/ml。
实施例2
1.1培养基组成
发酵培养基，1L：胰蛋白胨1％、牛肉粉膏0.3％、酵母粉0.5％、葡萄糖2％、氯化钠0.2％、乙酸钠0.2％、L-半胱氨酸盐酸盐0.05％、硫酸镁0.02％、硫酸锰0.02％、碳酸钙0.05％、磷酸氢二钾0.4％、水余量；
1.2菌种活化
称取GAM培养基60.0g，加热溶解1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，冷却至室温，氯化血红素2.5g，脱纤维兔血70mL，卡那霉素100mg，新霉素100mg，万古霉素1mg,混匀，得到活化液；
在厌氧条件下，从菌种保存培养皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厌氧、37℃下培养36h；
1.3一级种子培养
将制备好的丁酸梭菌活化液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为5％，在温度为37℃、罐压为0.10Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为6.0，发酵培养10h，作为二级培养种子液；
1.4二级种子培养
将制备好的二级培养种子液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为5％，在温度为37℃、罐压为0.10Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为6.0，发酵培养10h，发酵结束后，收集二级发酵种子液；
1.5发酵培养
将二级发酵种子液接种至发酵罐中，进行发酵培养，接种量为5％，发酵温度37℃，罐压为0.10Mpa，发酵罐转速为200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为6.0，发酵培养36h，发酵结束后，镜检菌体全部形成芽孢，停罐，收集罐内发酵液。菌株经16SrDNA序列测序鉴定，确定该菌为丁酸梭菌。发酵活菌数1.0×109CFU/ml。
实施例3
1.1培养基组成
发酵培养基，1L：胰蛋白胨1％、牛肉粉膏0.3％、酵母粉0.5％、葡萄糖2％、氯化钠0.2％、乙酸钠0.2％、L-半胱氨酸盐酸盐0.05％、硫酸镁0.02％、硫酸锰0.02％、碳酸钙0.05％、磷酸氢二钾0.4％、水余量；
1.2菌种活化
称取GAM培养基60.0g，加热溶解1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，冷却至室温，氯化血红素2.5g，脱纤维兔血70mL，卡那霉素100mg，新霉素100mg，万古霉素1mg，混匀，得到活化液；
在厌氧条件下，从菌种保存培养皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厌氧、32下培养 30h；
1.3一级种子培养
将制备好的丁酸梭菌活化液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为2在温度为32罐压为0.08pa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为120r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.5培养10h，作为二级培养种子液；
1.4二级种子培养
将制备好的二级培养种子液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为2％，在温度为32℃、罐压为0.08Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为120r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.5，发酵培养10h，发酵结束后，收集二级发酵种子液；
1.5发酵培养
将二级发酵种子液接种至发酵罐中，进行发酵培养，接种量为4％，发酵温度32℃，罐压为0.08Mpa，发酵罐转速为120r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.5，发酵培养30h，镜检菌体全部形成芽孢，停罐，收集罐内发酵液。菌株经16SrDNA序列测序鉴定，确定该菌为丁酸梭菌。发酵活菌数8.0×109CFU/ml。
以上仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种高产丁酸梭菌的发酵生产工艺，其具体步骤如下：
1.1培养基组成
发酵培养基，1L：胰蛋白胨1％、牛肉粉膏0.3％、酵母粉0.5％、葡萄糖2％、氯化钠0.2％、乙酸钠0.2％、L-半胱氨酸盐酸盐0.05％、硫酸镁0.02％、硫酸锰0.02％、碳酸钙0.05％、磷酸氢二钾0.4％、水余量；
1.2菌种活化
称取GAM培养基60.0g，加热溶解1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟，冷却至室温，氯化血红素2.5g，脱纤维兔血70mL，卡那霉素100mg，新霉素100mg，万古霉素1mg，混匀，得到活化液；
在厌氧条件下，从菌种保存培养皿上挑取丁酸梭菌菌株至活化液中，在厌氧、30℃-37℃下培养24h-36h；
1.3一级种子培养
将制备好的丁酸梭菌活化液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为1％-5％，在温度为30℃-37℃、罐压为0.05Mpa-0.10Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为100r/min-200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0-6.0，发酵培养10h，作为二级培养种子液；
1.4二级种子培养
将制备好的二级培养种子液接种到发酵罐的发酵培养基中，接种量为1％-5％，在温度为30℃-37℃、罐压为0.05Mpa-0.10Mpa下进行一级种子液培养，发酵罐转速为100r/min-200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0-6.0，发酵培养10h，发酵结束后，收集二级发酵种子液；
1.5发酵培养
将二级发酵种子液接种至发酵罐中，进行发酵培养，接种量为3％-5％，发酵温度30℃-37℃，罐压为0.05Mpa-0.10Mpa，发酵罐转速为100r/min-200r/min，培养全程通入氮气，并控制培养环境pH值为5.0-6.0，发酵培养24h-36h，发酵结束后，收集罐内发酵液,即为发酵获得丁酸梭菌菌液。
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110408563A (zh) * | 2019-07-17 | 2019-11-05 | 天津市圣世莱科技有限公司 | 一种丁酸梭菌高密度发酵及其微生态菌剂的制备方法 |
| CN110846258A (zh) * | 2019-12-12 | 2020-02-28 | 北京好实沃生物技术有限公司 | 一种丁酸梭菌的高密度发酵生产方法 |
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Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110408563A (zh) * | 2019-07-17 | 2019-11-05 | 天津市圣世莱科技有限公司 | 一种丁酸梭菌高密度发酵及其微生态菌剂的制备方法 |
| CN110408563B (zh) * | 2019-07-17 | 2021-05-25 | 天津市圣世莱科技有限公司 | 一种丁酸梭菌高密度发酵及其微生态菌剂的制备方法 |
| CN110846258A (zh) * | 2019-12-12 | 2020-02-28 | 北京好实沃生物技术有限公司 | 一种丁酸梭菌的高密度发酵生产方法 |
| CN112625980A (zh) * | 2021-01-15 | 2021-04-09 | 驻马店华中正大有限公司 | 解淀粉芽孢杆菌及丁酸梭菌共培养发酵生产丁酸的工艺 |
| CN112626137A (zh) * | 2021-01-15 | 2021-04-09 | 驻马店华中正大有限公司 | 一种醋酸杆菌和丁酸梭菌级联发酵生产丁酸的方法 |
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