CN109735483A - 一种改进的多抗霉素孢子培养基及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种改进的多抗霉素孢子培养基及其制备方法，以质量百分比计，由以下配方组成：玉米粉为0.2%‑0.8%，麦芽糖为0.2%‑0.8%、酵母浸粉为0.2%‑0.5%、KH2PO4为0.05%‑0.2%，琼脂为2‑8%，余量为水。本发明制备得到的金色产色链霉菌孢子培养基与原孢子培养基中相比，质量更加稳定，培养基原料溶解速度更快，培养基澄清度更高；主要原料一次制备，多次使用，用该种原料配制培养基简单，提高了孢子培养基的配制效率，提高了各批孢子培养基的质量均一性，各批培养基之间培养的的菌落形态更为稳定，孢子量更高。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种改进的多抗霉素孢子培养基及其制备方法。
背景技术
多抗霉素（Polyoxin）具有较好的内吸传导作用，属于广谱性抗生素类杀菌剂，是一种高效低毒、无环境污染的安全农药，所以被广泛应用于粮食作物、水果和蔬菜等重要病害的防治。主要用于防治苹果斑点落叶病、水稻纹枯病、轮纹病、梨黑斑病、葡萄灰霉病、霜霉病、人参黑斑病和烟草赤星病等十多种作物病害。
由于多抗霉素遗传稳定性较差，在普通孢子培养基（麦芽糖0.5%、玉米粉0.5%、酵母膏0.4%、琼脂2.0%，蒸馏水配制，消前pH6.3，121℃灭菌20min）上传代3代后产孢能力明显下降。平时配制孢子培养基时，用到的玉米粉、酵母膏、黄豆粉等生物原材料和试剂的质量不稳定。每次在使用玉米粉、黄豆粉前经常要指定温度水浴一定时间，增加了配制培养基的时间，降低了配制效率。每次配制含有黄豆饼粉的培养基时可能会因水浴时间、水浴温度等参数也会稍微有差异。这些不同和差异影响到培养基的质量，不利于菌种的稳定生长。这就要求每次配制孢子培养基时有更高的要求。
中国专利申请201310594078.6公开了一种霉菌培养基，该霉菌培养基组成为：马铃薯浸出粉15～18g/L，酵母浸出粉3～5g/L，葡萄糖20～22g/L，琼脂粉15～20g/L。该申请采用质量稳定的马铃薯浸出粉，并配合丰富菌体生长环境、方便菌体代谢观察的酵母浸出粉作为原料，获得的霉菌培养基质量稳定，且配料简单，取材方便，配制工艺简单易行，可操作性强，应用本发明的培养基进行霉菌培养，能够得到生长同步性好，菌层厚实、均匀，产孢子能力强的菌体细胞，并且可以缩短霉菌的培养周期，仅为3～5天。
但是现有技术中还没有针对多抗霉素孢子培养基改进的研究。为了提高多抗霉素孢子培养基的质量稳定性和配制效率，解决目前该类培养基质量不稳定的问题，寻求一种改进的多抗霉素孢子培养基及其制备方法具有重要的意义。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种改进的多抗霉素孢子培养基及其制备方法，有效的提高多抗霉素孢子培养基的质量稳定性和配制效率，解决目前该类培养基质量不稳定的问题。
本发明采用如下技术方案：一种改进的多抗霉素孢子培养基，以质量百分比计，由以下配方组成：玉米粉为0.2%-0.8%，麦芽糖为0.2%-0.8%、酵母浸粉为0.2%-0.5%、KH2PO4为0.05%-0.2%，琼脂为2-8%，余量为水。
本发明还保护所述的多抗霉素孢子培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）将玉米粉加水溶解，搅拌恒温至45-85℃，保持10-60min，用多层纱布过滤得到滤液；
（2）滤液中加入麦芽糖、酵母浸粉、KH2PO4搅拌均匀，再经干燥，得到孢子培养基干粉；
（3）配制孢子培养基时，将琼脂加入到纯净水中，搅拌加热沸腾，趁热加入质量分数为1.2%的上述孢子培养基干粉继续搅拌均匀，分装成孢子培养基。
优选地，所述的玉米粉为不去胚芽的整粒玉米经粉碎且过80目筛后的玉米粉，占培养基的质量比例为0.2%-0.8%。
优选地，所述的麦芽糖的添加量占培养基的质量比例为0.2%-0.8%。
优选地，所述的酵母浸粉的添加量占培养基的质量比例为0.2%-0.5%。
优选地，所述的添加KH2PO4占培养基的质量比例为0.05%-0.2%。
优选的，所述的琼脂的添加量占培养基的质量比例为2-5%。
优选地，所述的干燥是经喷雾干燥或冷冻真空干燥所得。
优选地，所述的步骤（3）中，加入上述孢子培养基干粉后，调节pH值至7.0，并且在120-130℃下高压灭菌20-30min，趁热分装成孢子培养基。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
（1）采用本发明的金色产色链霉菌孢子培养基与原孢子培养基中相比，质量更加稳定，培养基原料溶解速度更快，培养基澄清度更高。
（2）主要原料一次制备，多次使用，用该种原料配制培养基简单，提高了孢子培养基的配制效率，提高了各批孢子培养基的质量均一性，各批培养基之间培养的的菌落形态更为稳定，孢子量更高。
附图说明
下面结合附图做进一步的说明：
图1为对比例1的菌落形态图；
图2为实施例1的菌落形态图。
具体实施方式
为了对本发明的目的、技术方案及技术效果有更加清楚的理解，现对照附图及具体实施例对本发明进一步详细说明。
对比例1
原孢子培养基的制备方法：
（1）马铃薯浸出粉0.3%, 加水溶解，搅拌恒温至45-85℃，保持10-60min，用多层纱布过滤得到滤液；
（2）滤液中加入葡萄糖、酵母浸粉、KH2PO4搅拌均匀，再经喷雾干燥，得到孢子培养基干粉；
（3）配制孢子培养基时，称取20g琼脂加入到少于1L的纯净水中，加热溶解。称取12g孢子培养基干粉溶于水中，定容至1L，调节pH值至7.0，121℃高压灭菌20min，趁热分装成孢子培养基。
得到以下配方组成的多抗霉素孢子培养基：马铃薯浸出粉0.3%，葡萄糖0.2%、酵母浸粉0.4%、KH2PO4 0.15%，琼脂2%，余量为水。搅拌均匀，再经喷雾干燥，得到孢子培养基干粉。
实施例1
（1）将玉米粉加水溶解，搅拌恒温至45-85℃，保持10-60min，用多层纱布过滤得到滤液；
（2）滤液中加入麦芽糖、酵母浸粉、KH2PO4搅拌均匀，再经喷雾干燥，得到孢子培养基干粉；
（3）配制孢子培养基时，称取20g琼脂加入到少于1L的纯净水中，加热溶解。称取12g孢子培养基干粉溶于水中，定容至1L，调节pH值至7.0，121℃高压灭菌20min，趁热分装成孢子培养基。
得到以下配方组成的多抗霉素孢子培养基：得到以下配方组成的多抗霉素孢子培养基：玉米粉0.3% ，麦芽糖0.2%、酵母浸粉0.4%、KH2PO4 0.15%，琼脂2%， 余量为水。
将对比例1和实施例1得到的培养基进行比较，结果如表1所示。
表1 对比例1和实施例1得到的培养基对比
注：A 该培养基斜面为26—28℃培养12天的茄子瓶斜面。
B 孢子量的计算 采用每瓶加入100mL无菌水，装入20个玻璃珠，反复摇动斜面使玻璃珠在培养基表面来回均匀滚动，洗下孢子成孢子悬液。用平板计数法测得孢子悬液的孢子浓度。
可见，采用实施例1得到的孢子培养基质量更加稳定，培养基原料溶解速度更快，培养基澄清度更高。并且各批孢子培养基的质量均一性，各批培养基之间培养的的菌落形态更为稳定，孢子量更高。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (9)
1.一种改进的多抗霉素孢子培养基，其特征在于，以质量百分比计，由以下配方组成：玉米粉为0.2%-0.8%，麦芽糖为0.2%-0.8%、酵母浸粉为0.2%-0.5%、KH2PO4为0.05%-0.2%，琼脂为2-8%，余量为水。
2.根据权利要求1所述的多抗霉素孢子培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将玉米粉加水溶解，搅拌恒温至45-85℃，保持10-60min，用多层纱布过滤得到滤液；
（2）滤液中加入麦芽糖、酵母浸粉、KH2PO4搅拌均匀，再经干燥，得到孢子培养基干粉；
（3）配制孢子培养基时，将琼脂加入到纯净水中，搅拌加热沸腾，趁热加入质量分数为1.2%的上述孢子培养基干粉继续搅拌均匀，分装成孢子培养基。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的玉米粉为不去胚芽的整粒玉米经粉碎且过80目筛后的玉米粉，占培养基的质量比例为0.2%-0.8%。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的麦芽糖的添加量占培养基的质量比例为0.2%-0.8%。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的酵母浸粉的添加量占培养基的质量比例为0.2%-0.5%。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的添加KH2PO4占培养基的质量比例为0.05%-0.2%。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的琼脂的添加量占培养基的质量比例为2-5%。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的干燥是经喷雾干燥或冷冻真空干燥所得。
9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（3）中，加入上述孢子培养基干粉后，调节pH值至7.0，并且在120-130℃下高压灭菌20-30min，趁热分装成孢子培养基。
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