CN109566599A - 一种脱落细胞保存液 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种脱落细胞保存液包括以下重量份：CBS‑M缓冲剂56‑85份；草酸钠‑枸缘酸钠抗凝剂5‑16份；戊二醛‑重铬酸钾固定剂6‑20份；维生素C‑醋硫丙酸铵黏度调节剂4‑12份；维生素C‑山梨酸钾防腐剂5‑13份；乳酸钠‑山梨糖酸保湿剂6‑16份；短杆菌素‑青霉素抗菌剂3‑9份，可以对黏液等进行处理，使细胞的保存环境更为稳定，增加细胞的保存时间。

Description

一种脱落细胞保存液
技术领域
本发明涉及宫颈病变的筛查领域，更具体地说，它涉及一种脱落细胞保存液。
背景技术
宫颈癌是全球妇女中仅次于乳腺癌和结直肠癌的第3个常见的恶性肿瘤，在发展中国家是仅次于乳腺癌居第2位常见的恶性肿瘤，是最常见的女性生殖道恶性肿瘤。
TCT检测技术是目前国际领先的一种宫颈防癌细胞学检查技术。采用美国高精密度过滤膜核心技术和微电脑自动化控制系统进行精确检测，用于代替传统宫颈刮片（巴氏涂片），可以明显提高对各种宫颈癌前病变的检出率。资料显示，TCT检测术能有效预防超过90%的宫颈癌，据临床实践，TCT检测术不仅可以发现100%的宫颈癌。而且对癌前病变的检出率比传统宫颈刮片（巴氏涂片）提高了233%，是患者最值得信赖的子宫颈细胞学检查方法。
现有公开号为CN1834233A的中国专利公开了一种脱落细胞保存液，液由以下成分组成，按体积份计：甲醇或乙醇40份～60份、磷酸盐缓冲液或三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液20份～40份、甲醛或丙酮5份～10份、乙二胺四乙酸二钾或二二胺四乙酸二钠5份～10份。
但是，此发明受到细胞黏液、保存环境等原因的影响，导致此脱落细胞保存液的保存时间较短。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种脱落细胞保存液，可以对黏液等进行处理，使细胞的保存环境更为稳定，增加细胞的保存时间。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种脱落细胞保存液包括以下重量份：
CBS-M缓冲剂 56-85份；
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂 5-16份；
戊二醛-重铬酸钾固定剂 6-20份；
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂 4-12份；
维生素C-山梨酸钾防腐剂 5-13份；
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂 6-16份；
短杆菌素-青霉素抗菌剂 3-9份。
通过采取上述技术方案，pH缓冲系统对维持生物的正常pH值和正常生理 环境起到重要作用，多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化；在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们是蛋白质缓冲系统、重碳酸盐缓冲系统以及磷酸盐缓冲系统，因此CBS-M缓冲液中的CBS缓冲液可以在起到缓冲作用的同时，可以模拟细胞在生物体内的缓冲体系，而M缓冲液可以使细胞骨架中的微丝保持稳定，有利用后期的细胞形态观察，同时本发明的脱落细胞保存液在抗凝剂、固定剂、黏度调节剂、防腐剂、保湿剂以及抗菌剂的共同作用下，使脱落细胞保存液中的细胞的保存环境处于无菌状态的同时，使脱落细胞不会发生凝固、变质等问题二影响细胞的保存，增加细胞保存的时间。
本发明的进一步设置为，所述CBS-M缓冲剂包括以下重量份：
碳酸氢钠 50-68份；
碳酸钠 45-78份；
咪唑 26-46份；
乙二醇二乙醚二胺四乙酸 20-35份；
氯化镁 56-69份
氯化钠 56-75份；
氯化钾 40-53份。
通过采取上述技术方案，碳酸氢钠和碳酸钠作用CBS缓冲液模拟细胞在生物体内的存在环境，及时调节脱落细胞保存液的PH值；M缓冲液中的咪唑主要作为缓冲液对脱落细胞保存液的PH值进行调节，而乙二醇二乙醚二胺四乙酸与钙离子发生螯合，避免脱落细胞发生凝固现象，同时氯化镁在细胞钙离子含量较低的情况下提镁离子，使骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张，便于观察；氯化钾和氯化钠用来调节细胞在脱落细胞保存液内的渗透压，避免细胞内外的渗透压失衡，造成细胞壁的破裂。
本发明的进一步设置为，所述草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂包括以下重量份：
草酸钠 20-35份；
枸缘酸钠 35-42份。
通过采取上述技术方案，血液发生粘稠等问题主要是因为钙离子过多引起，草酸钠可以与细胞中的钙离子反应生成草酸钙沉淀进而除去钙离子，而枸缘酸钠可以与钙离子形成螯合物，草酸钠和枸缘酸钠想和配合可以进一步除去钙离子，避免细胞在脱落细胞保存液中发生凝固。
本发明的进一步设置为，所述戊二醛-重铬酸钾固定剂包括以下重量份：
戊二醛 15-32份；
重铬酸钾 16-25份；
无水乙醇 30-56份。
通过采取上述技术方案，戊二醛是一种优良的前固定剂，戊二醛能通过固定核蛋白来固定组织和细胞中的DNA和RNA，能保存糖原，也可以固定和蛋白质有关联的或含有氨基和亚氨基的脂类，进而保存细胞中的可检测物质；重铬酸钾在保护脂类和糖类的同时，均由一定的缓冲作用，重铬酸钾与戊二醛相结合可以最大范围地保护可检测的物质，确保后期细胞检查时的精准性。
本发明的进一步设置为，所述维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂包括以下重量份：
维生素C 22-36份；
醋硫丙酸铵 23-41份。
通过采取上述技术方案， 维生素C是一种水溶性维生素，在生物体内可以参加多种反应，可以有效降低细胞黏液的黏度，而醋硫丙酸铵是一种黏度调节剂，在维生素C降低细胞黏液的黏度后，醋硫丙酸铵进一步调节细胞黏液的黏度，避免细胞黏液的黏度过低，各个细胞间的细胞壁之间的润滑性降低，细胞壁之间的摩擦力过大，进而引起细胞壁的破裂。
本发明的进一步设置为，所述维生素C-山梨酸钾防腐剂包括以下重量份：
维生素C 15-36份；
山梨酸钾 20-41份。
通过采取上述技术方案，维生素C是一种抗氧剂，其具有还原作用，可以保护生物体免于氧化的威胁，同时，山梨酸钾作为一种防腐剂，能有效地抑制霉菌，酵母菌和好氧性细菌的活性，还能防止肉毒杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌等有害微生物的生长和繁殖，维生素C和山梨酸钾结合进一步增加脱落细胞保存液的保存时间。
本发明的进一步设置为，所述乳酸钠-山梨糖酸保湿剂包括以下重量份：
乳酸钠 35-46份；
山梨糖醇 23-39份。
通过采取上述技术方案，乳酸钠是一种天然的保湿因子，具有独特的pH调节和保湿功能，而山梨糖醇作为一种湿润剂，具有良好的保湿功能，同时，乳酸钠也是一种抗氧化增效剂，可以提高脱落细胞保存液的抗氧化性能，而且乳酸钠也可以对脱落细胞保存液的pH值进行调节，乳酸钠和山梨糖醇结合在一起，可以很好地保证脱落细胞保存液的湿润性，增加细胞在脱落细胞保存液内的保存时间。
本发明的进一步设置为，所述短杆菌素-青霉素抗菌剂包括以下重量份：
短杆菌素 12-36份；
青霉素 10-16份。
通过采取上述技术方案，短杆菌素和青霉素共同作用，使脱落细胞保存也处于无菌状态，避免脱落细胞保存液发生变质，减短细胞的保存时间。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
本发明中CBS-M缓冲液中的CBS缓冲液可以在起到缓冲作用的同时，可以模拟细胞在生物体内的缓冲体系，而M缓冲液可以使细胞骨架中的微丝保持稳定，有利用后期的细胞形态观察，同时本发明的脱落细胞保存液在抗凝剂、固定剂、黏度调节剂、防腐剂、保湿剂以及抗菌剂的共同作用下，使脱落细胞保存液中的细胞的保存环境处于无菌状态的同时，使脱落细胞不会发生凝固、变质等问题而影响细胞的保存，增加细胞保存的时间。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例一：
一种脱落细胞保存液，包括以下重量份：
CBS-M缓冲剂 56份；
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂 5份；
戊二醛-重铬酸钾固定剂 6份；
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂 4份；
维生素C-山梨酸钾防腐剂 5份；
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂 6份；
短杆菌素-青霉素抗菌剂 3份。
CBS-M缓冲剂包括以下重量份：
碳酸氢钠 50份；
碳酸钠 45份；
咪唑 26份；
乙二醇二乙醚二胺四乙酸 20份；
氯化镁 56份
氯化钠 56份；
氯化钾 40份。
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂包括以下重量份：
草酸钠 20份；
枸缘酸钠 35份。
戊二醛-重铬酸钾固定剂包括以下重量份：
戊二醛 15份；
重铬酸钾 16份；
无水乙醇 30份。
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂包括以下重量份：
维生素C 22份；
醋硫丙酸铵 23份。
维生素C-山梨酸钾防腐剂包括以下重量份：
维生素C 15份；
山梨酸钾 20份。
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂包括以下重量份：
乳酸钠 35份；
山梨糖醇 23份。
短杆菌素-青霉素抗菌剂包括以下重量份：
短杆菌素 12份；
青霉素 10份。
实施例二：
一种脱落细胞保存液，包括以下重量份：
CBS-M缓冲剂 58份；
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂 6份；
戊二醛-重铬酸钾固定剂 8份；
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂 6份；
维生素C-山梨酸钾防腐剂 7份；
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂 8份；
短杆菌素-青霉素抗菌剂 4份。
CBS-M缓冲剂包括以下重量份：
碳酸氢钠 52份；
碳酸钠 47份；
咪唑 28份；
乙二醇二乙醚二胺四乙酸 22份；
氯化镁 58份
氯化钠 57份；
氯化钾 42份。
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂包括以下重量份：
草酸钠 22份；
枸缘酸钠 37份。
戊二醛-重铬酸钾固定剂包括以下重量份：
戊二醛 17份；
重铬酸钾 18份；
无水乙醇 32份。
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂包括以下重量份：
维生素C 24份；
醋硫丙酸铵 26份。
维生素C-山梨酸钾防腐剂包括以下重量份：
维生素C 17份；
山梨酸钾 22份。
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂包括以下重量份：
乳酸钠 37份；
山梨糖醇 25份。
短杆菌素-青霉素抗菌剂包括以下重量份：
短杆菌素 15份；
青霉素 11份。
实施例三：
一种脱落细胞保存液，包括以下重量份：
CBS-M缓冲剂 60份；
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂 10份；
戊二醛-重铬酸钾固定剂 15份；
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂 9份；
维生素C-山梨酸钾防腐剂 8份；
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂 13份；
短杆菌素-青霉素抗菌剂 6份。
CBS-M缓冲剂包括以下重量份：
碳酸氢钠 55份；
碳酸钠 50份；
咪唑 30份；
乙二醇二乙醚二胺四乙酸 27份；
氯化镁 60份
氯化钠 66份；
氯化钾 47份。
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂包括以下重量份：
草酸钠 27份；
枸缘酸钠 35-42份。
戊二醛-重铬酸钾固定剂包括以下重量份：
戊二醛 20份；
重铬酸钾 19份；
无水乙醇 40份。
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂包括以下重量份：
维生素C 29份；
醋硫丙酸铵 30份。
维生素C-山梨酸钾防腐剂包括以下重量份：
维生素C 20份；
山梨酸钾 30份。
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂包括以下重量份：
乳酸钠 39份；
山梨糖醇 30份。
短杆菌素-青霉素抗菌剂包括以下重量份：
短杆菌素 20份；
青霉素 13份。
实施例四：
一种脱落细胞保存液，包括以下重量份：
CBS-M缓冲剂 79份；
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂 13份；
戊二醛-重铬酸钾固定剂 15份；
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂 10份；
维生素C-山梨酸钾防腐剂 10份；
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂 14份；
短杆菌素-青霉素抗菌剂 7份。
CBS-M缓冲剂包括以下重量份：
碳酸氢钠 60份；
碳酸钠 70份；
咪唑 40份；
乙二醇二乙醚二胺四乙酸 30份；
氯化镁 60份
氯化钠 71份；
氯化钾 49份。
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂包括以下重量份：
草酸钠 31份；
枸缘酸钠 41份。
戊二醛-重铬酸钾固定剂包括以下重量份：
戊二醛 22份；
重铬酸钾 21份；
无水乙醇 43份。
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂包括以下重量份：
维生素C 33份；
醋硫丙酸铵 33份。
维生素C-山梨酸钾防腐剂包括以下重量份：
维生素C 31份；
山梨酸钾 35份。
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂包括以下重量份：
乳酸钠 43份；
山梨糖醇 33份。
短杆菌素-青霉素抗菌剂包括以下重量份：
短杆菌素 33份；
青霉素 15份。
实施例五：
一种脱落细胞保存液，包括以下重量份：
CBS-M缓冲剂 85份；
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂 16份；
戊二醛-重铬酸钾固定剂 20份；
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂 12份；
维生素C-山梨酸钾防腐剂 13份；
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂 16份；
短杆菌素-青霉素抗菌剂 9份。
CBS-M缓冲剂包括以下重量份：
碳酸氢钠 68份；
碳酸钠 78份；
咪唑 46份；
乙二醇二乙醚二胺四乙酸 35份；
氯化镁 69份
氯化钠 75份；
氯化钾 53份。
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂包括以下重量份：
草酸钠 35份；
枸缘酸钠 42份。
戊二醛-重铬酸钾固定剂包括以下重量份：
戊二醛 32份；
重铬酸钾 25份；
无水乙醇 56份。
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂包括以下重量份：
维生素C 36份；
醋硫丙酸铵 41份。
维生素C-山梨酸钾防腐剂包括以下重量份：
维生素C 36份；
山梨酸钾 41份。
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂包括以下重量份：
乳酸钠 46份；
山梨糖醇 39份。
短杆菌素-青霉素抗菌剂包括以下重量份：
短杆菌素 36份；
青霉素 16份。
测试结果：
经过检测，本发明的细胞保存液的保存时间均可达到两年，而且细胞架构在显微镜下清晰可见，细胞分布非常均匀，细胞形态完好，胞浆与细胞核分界清楚、层次分明，胞浆与细胞核透亮性非常好，在同一标本做HPV-DNA检测时均能很好的体现质控点，阳性符合率均有一致性。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (8)

1.一种脱落细胞保存液，其特征在于：包括以下重量份：
CBS-M缓冲剂 56-85份；
草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂 5-16份；
戊二醛-重铬酸钾固定剂 6-20份；
维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂 4-12份；
维生素C-山梨酸钾防腐剂 5-13份；
乳酸钠-山梨糖酸保湿剂 6-16份；
短杆菌素-青霉素抗菌剂 3-9份。
2.根据权利要求1所述的一种脱落细胞保存液，其特征在于：所述CBS-M缓冲剂包括以下重量份：
碳酸氢钠 50-68份；
碳酸钠 45-78份；
咪唑 26-46份；
乙二醇二乙醚二胺四乙酸 20-35份；
氯化镁 56-69份
氯化钠 56-75份；
氯化钾 40-53份。
3.根据权利要求1所述的一种脱落细胞保存液，其特征在于：所述草酸钠-枸缘酸钠抗凝剂包括以下重量份：
草酸钠 20-35份；
枸缘酸钠 35-42份。
4.根据权利要求1所述的一种脱落细胞保存液，其特征在于：所述戊二醛-重铬酸钾固定剂包括以下重量份：
戊二醛 15-32份；
重铬酸钾 16-25份；
无水乙醇 30-56份。
5.根据权利要求1所述的一种脱落细胞保存液，其特征在于：所述维生素C-醋硫丙酸铵黏度调节剂包括以下重量份：
维生素C 22-36份；
醋硫丙酸铵 23-41份。
6.根据权利要求1所述的一种脱落细胞保存液，其特征在于：所述维生素C-山梨酸钾防腐剂包括以下重量份：
维生素C 15-36份；
山梨酸钾 20-41份。
7.根据权利要求1所述的一种脱落细胞保存液，其特征在于：所述乳酸钠-山梨糖酸保湿剂包括以下重量份：
乳酸钠 35-46份；
山梨糖醇 23-39份。
8.根据权利要求1所述的一种脱落细胞保存液，其特征在于：所述短杆菌素-青霉素抗菌剂包括以下重量份：
短杆菌素 12-36份；
青霉素 10-16份。
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梅峥嵘: "《对症用药及误用辨别手册》", 30 April 2017, 广东科技出版社 *

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