CN109312270A - 洗涤剂组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含：(a)具有α‑淀粉酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其展示出α‑淀粉酶活性的片段，或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其展示出α‑淀粉酶活性的片段组成；(b)具有蛋白酶活性的多肽；或用于制造其的浓缩物或添加剂。

Description

洗涤剂组合物及其用途

对序列表的引用

本申请含有处于计算机可读形式的序列表，将其通过援引并入本文。

技术领域

本发明涉及包含α淀粉酶和蛋白酶的新颖组合物。本发明的这些组合物适合用作例如清洁或洗涤剂组合物，例如衣物洗涤洗涤剂组合物和餐具洗涤组合物(包括自动餐具洗涤组合物)。

背景技术

酶作为洗涤配制品的部分已经在洗涤剂工业中使用了数十年。从商业视角看，蛋白酶在此类配制品中是最相关的酶，而其他酶(包括淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、半纤维素酶或多种酶的混合物)也通常被使用。α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，E.C.3.2.1.1)构成一组酶，这些酶催化淀粉以及其他直链和支链1,4-糖苷寡糖和多糖的水解。

常用于洗涤剂中的一个蛋白酶家族是枯草杆菌酶。这个家族之前已经进一步由Siezen RJ和Leunissen JAM，1997，Protein Science[蛋白质科学]6，501-523被分组为6个不同亚组。这些亚组之一是枯草杆菌蛋白酶家族，其包括枯草杆菌酶，例如BPN'、枯草杆菌蛋白酶309(诺维信公司(Novozymes A/S)(SEQ ID NO:6))、枯草杆菌蛋白酶嘉士伯(Carlsberg)(诺维信公司(Novozymes A/S))、枯草杆菌蛋白酶S41(来自嗜冷的南极芽孢杆菌TA41的一种枯草杆菌酶，Davail S等人1994，The Journalof Biological Chemistry[生化杂志]，269(26)，99.17448-17453)和枯草杆菌蛋白酶S39(来自嗜冷的南极芽孢杆菌TA39的一种枯草杆菌酶，Narinx E等人1997，ProteinEngineering[蛋白质工程]，10(11)，第1271-1279页)。

芽孢杆菌α-淀粉酶例如特妙淀粉酶(SEQ ID NO:10)、AA560(本文SEQ ID NO:8；WO2000/060060)和SP707(本文SEQ ID NO:9；Tsukamoto等人，1988，Biochem.Biophys.Res.Comm.[生物化学和生物物理研究通讯]151:25-31)形成特定的已经用于洗涤剂中的α-淀粉酶的组。这些淀粉酶已经经修饰以改进洗涤剂中的稳定性。例如，WO96/23873披露了α-淀粉酶SP690、SP722和SP707的缺失突变体(参见WO 96/23873的SEQ IDNO:1、2和7)以改进这些淀粉酶的稳定性。用于本发明的变体的野生型淀粉酶已经描述于WO2000/060058中。

为了改进酶的成本和/或性能，对具有改变的特性的酶进行着持续搜寻，这些改变的特性，例如是在低温下增加的活性、增加的稳定性、在给定的pH下增加的比活性、改变的Ca²⁺依赖性、在其他洗涤剂成分(例如，漂白剂、表面活性剂等)的存在下增加的稳定性等。

已经描述了洗涤剂组合物，但是持续需要改进的洗涤剂组合物，其中洗涤剂组合物中的酶能够在清洁性能方面起协同作用。因此，本发明的目的是提供此类洗涤剂组合物。

发明内容

本发明涉及洗涤剂组合物，这些洗涤剂组合物包含：

(a)具有α-淀粉酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其展示出α-淀粉酶活性的片段，或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其展示出α-淀粉酶活性的片段组成；和

(b)具有蛋白酶活性的多肽，

或用于制造其的浓缩物或添加剂。

本发明还涉及一种餐具洗涤方法，该方法包括将所述洗涤剂组合物添加至所述自动餐具洗涤机中的洗涤剂组合物室内。

本发明还涉及一种衣物洗涤方法，该方法包括用根据本发明的洗涤剂组合物洗涤织物。

附图说明

图1.巧克力布丁的洗涤性能研究证明淀粉酶和蛋白酶之间的协同。该图示出了用洗涤剂(包含淀粉酶(A1)、四种蛋白酶(P1至P4)之一、或淀粉酶和蛋白酶的组合)洗涤的玷污的瓷砖在640nm处的光反射的最小均方。字母A至E表示使用Tukey的HSD测试的处理之间的统计学上显著差异。同样地，表示为A的处理彼此没有不同，而它们与表示为B等的处理不同。

定义

术语“α-淀粉酶”意指具有α-淀粉酶活性(即α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶(E.C.3.2.1.1)的活性)的α-淀粉酶，该α-淀粉酶构成一组催化淀粉和其他直链和支链的1,4-葡糖苷寡糖和多糖的水解的酶。出于在本发明的洗涤剂组合物中存在的α-淀粉酶的目的，可以如在下面实例1中所述确定α-淀粉酶活性。本文所述的α-淀粉酶包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其展示出α-淀粉酶活性的片段，或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其展示出α-淀粉酶活性的片段组成。

术语“蛋白酶”在本文被定义为水解肽键的酶。它包括属于EC 3.4酶组(包括其13个亚类中的每一个)的任何酶。EC编号参考来自NC-IUBMB的Enzyme Nomenclature 1992[1992年酶命名法]，Academic Press[学术出版社]，圣地亚哥，加利福尼亚州，分别包括在Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1994，223，1-5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1995，232，1-6；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1996，237，1-5；Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1997，250，1-6；以及Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学期刊]，1999，264，610-650中出版的增刊1-5。术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人，Protein Engng.[蛋白质工程学]4(1991)719-737和Siezen等人，Protein Science[蛋白质工程学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶或丝氨酸肽酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的一个亚组。另外，枯草杆菌酶(以及丝氨酸蛋白酶)的特征为除了丝氨酸以外，还具有两个活性位点氨基酸残基，即组氨酸和天冬氨酸残基。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。术语“蛋白酶活性”意指蛋白质分解活性(EC 3.4)。本发明的蛋白酶是内切肽酶(EC 3.4.21)。出于本发明的目的，根据下面实例1中所述的程序确定蛋白酶活性。本文所述的蛋白酶包含SEQ ID NO:2、3、4或5的氨基酸序列或其展示出蛋白酶活性的片段或变体，或由SEQ ID NO:2、3、4或5的氨基酸序列或其展示出蛋白酶活性的片段或变体组成。

术语“脂肪酶”意指具有脂肪酶活性的脂肪酶。本文定义的脂肪酶可以是羧酸酯水解酶EC 3.1.1,-，其包括例如EC 3.1.1.3三酰甘油脂肪酶、EC 3.1.1.4磷脂酶A2、EC3.1.1.5溶血磷脂酶、EC 3.1.1.26半乳糖脂酶、EC 3.1.1.32磷脂酶A1、EC 3.1.1.73阿魏酸酯酶的活性。

术语“蛋白酶变体”(或“变体”，当用于蛋白酶的上下文中时)意指相比于其亲本在一个或多个(或一个或若干个)位置处包括改变即取代、插入和/或缺失(优选取代)的具有蛋白酶活性的蛋白酶，该亲本是具有与所述变体相同的氨基酸序列但是在一个或多个所述指定位置不具有改变的蛋白酶。取代意指将占据一个位置的氨基酸用不同的氨基酸置换；缺失意指去除占据一个位置的氨基酸；并且插入意指在与占据一个位置的氨基酸相邻处添加氨基酸，例如1至10个氨基酸，优选地1-3个氨基酸。氨基酸取代可以把天然氨基酸换成另一种天然存在的氨基酸，或换成非天然存在的氨基酸衍生物。在一个实施例中，该变体是缺失变体，例如亲本蛋白酶的片段。这些蛋白酶变体具有其衍生自的成熟亲本蛋白酶的蛋白酶活性的至少20％，例如，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。

术语“蛋白酶片段”(或“片段”，当用于蛋白酶的上下文中时)意指相比于其亲本在N-和/或C-末端的一个或多个(或一个或若干个)位置处包含缺失的具有蛋白酶活性的蛋白酶，该亲本是与所述片段具有相同的氨基酸序列但是不具有N-和/或C-末端缺失的蛋白酶。因此，“蛋白酶片段”是蛋白酶变体的一个类型，并且可以是SEQ ID NO:2至5中任一个的片段。术语“α-淀粉酶片段”应相应地解释为相比于其亲本在N-和/或C-末端的一个或多个(或一个或若干个)位置处包含缺失的具有α-淀粉酶活性的α-淀粉酶，该亲本是包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列或由其组成的α-淀粉酶合适的蛋白酶片段具有蛋白酶活性，并且包含如下氨基酸序列或由其组成，该氨基酸序列包含SEQ ID NO:2至5中任一个的至少100个连续氨基酸，例如SEQ ID NO:2至5中任一个的至少150个连续氨基酸、200个连续氨基酸、225个连续氨基酸、或至少250个连续氨基酸。合适的α-淀粉酶片段具有其衍生自的成熟亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶活性的至少20％，例如，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。

术语“分离的片段或变体”意指通过人工修饰的片段或变体。在一方面，该变体是至少1％纯的，例如至少5％纯的、至少10％纯的、至少20％纯的、至少40％纯的、至少60％纯的、至少80％纯的、以及至少90％纯的，如通过SDS PAGE所确定的。

术语“亲本蛋白酶”意指对其作出改变以产生蛋白酶变体(包括片段)的蛋白酶。因此，亲本蛋白酶是与所述蛋白酶变体具有相同的氨基酸序列但是在一个或多个所述指定位置处不具有改变的蛋白酶。应当理解的是，在本发明上下文中“具有相同的氨基酸序列”的表达涉及100％序列同一性。该亲本蛋白酶可为天然存在的(野生型)多肽或其变体。在一个具体实施例中，该亲本是与具有SEQ ID NO:2至5的任一个的多肽具有至少70％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％，例如至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％或100％同一性的蛋白酶。术语“亲本α-淀粉酶”是指对其做出缺失以产生α-淀粉酶片段的α-淀粉酶。在一个实施例中，亲本α-淀粉酶是如SEQ ID NO:1中所定义的α-淀粉酶。

术语“野生型蛋白酶”意指由天然存在的有机体(例如在自然界中发现的细菌、古生菌、酵母、真菌、植物或动物)表达的蛋白酶。

术语“野生型α-淀粉酶”意指如由天然存在的微生物(例如自然界中发现的细菌、酵母或丝状真菌)表达的α-淀粉酶。

术语“核酸构建体”意指从天然存在的基因中分离的、或以自然界中不会另外存在的方式被修饰成含有核酸片段的、或合成的单链或双链的核酸分子。当核酸构建体含有表达本发明编码序列所需要的控制序列时，术语核酸构建体与术语“表达盒”含义相同。

术语“可操作地连接”意指一种构型，在该构型中控制序列相对于多核苷酸的编码序列放置在一个适当位置处，这样使得控制序列指导编码序列的表达。

术语“控制序列”意指对于表达编码本发明的蛋白酶或α-淀粉酶的多核苷酸所必需的所有组分。每个控制序列对于编码变体的多核苷酸可以是天然的或外源的，或者彼此可以是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于：前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列以及转录终止子。最少，控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入促进控制序列与编码蛋白酶或α-淀粉酶的多核苷酸的编码区域连接的特异性限制性酶切位点的目的，控制序列可以提供有接头。

术语“表达”包括涉及产生蛋白酶或α-淀粉酶的任何步骤，包括但不限于：转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰以及分泌。

术语“表达载体”意指包括编码蛋白酶或α-淀粉酶的多核苷酸、并与提供其表达的另外的核苷酸可操作地连接的线性或环形DNA分子。

术语“转录启动子”用于指为促进特定基因的转录的DNA区域的启动子。转录启动子典型地位于它们所调节的基因附近，在相同链上并且在上游(朝向有义链的5'区域)。

术语“转录终止子”用于指标记基因结束的基因序列区段或者在基因组DNA上用于转录的操纵子。

术语“宿主细胞”意指对用包括本发明多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行的转化、转染、转导等易感的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何后代。

知道如何比对氨基酸序列以确定本文所提及的特定位置中的哪个氨基酸对应于本文中未列出的另一个氨基酸序列的氨基酸是在本领域技术人员的知识范围内。因此，如本文使用的术语“对应于……的位置”在本领域中是熟知的。两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数“序列同一性”描述。出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件]，Rice等人，2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选地3.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性程度。所用的可选参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)替代矩阵。Needle标注的“最长的同一性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比同一性，并且如下计算：

(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)

本文将术语“改进的洗涤性能”定义为，相对于没有蛋白酶或α-淀粉酶的类似的洗涤剂组合物的洗涤性能展示出增加的洗涤性能的洗涤剂组合物。因此，据信包含蛋白酶和α-淀粉酶的洗涤剂组合物对洗涤性能具有有益的作用。当与仅包含蛋白酶和α-淀粉酶中的一者的洗涤剂组合物相比时，蛋白酶变体和α-淀粉酶变体可以显示协同，从而提供具有甚至进一步改进的洗涤性能的洗涤剂组合物。术语“洗涤性能”包括在衣物洗涤并且例如在餐具洗涤中的洗涤性能。如本文“洗涤性能”定义下所述的，洗涤性能可以被量化。本领域技术人员将会理解，仅在一些或者可能所有的洗涤条件下(例如在40℃或更高(例如在40℃和/或在50℃)的洗涤温度下、和/或有或没有漂白剂的存在),可以实现增强的洗涤性能。

对于餐具洗涤本文将术语“洗涤循环”定义为洗涤操作，其中通过循环该洗涤液并且将该洗涤液喷到餐具上，将餐具与洗涤液接触一段时间，以便清洁该餐具，并且最后去除多余的洗涤液。在相同或不同温度下，洗涤循环可以重复一次、两次、三次、四次、五次或甚至六次。此后，通常将餐具进行冲洗并且干燥。洗涤循环之一可以是浸泡步骤，其中将该餐具保持浸泡在洗涤液中一段时间。

本文将术语“洗涤液”定义为水和洗涤剂组分的溶液或混合物。

对于自动餐具洗涤的术语“洗涤性能”在本文中被定义为自动餐具洗涤洗涤剂组合物去除洗涤过程中待清洁的餐具上存在的污垢的能力。可以通过检查洗涤过的餐具、光反射(460nm)或通过测量重量来测量洗涤性能，以确定已经去除了多少污垢。这可以通过测量板、瓷砖或类似物上的重量差异来进行。如实例2中所述，可以在自动餐具洗涤中确定洗涤性能。如实例1中所述，可以使用自动机械应力测定(AMSA)确定衣物洗涤性能。

对于自动餐具洗涤的术语“洗涤时间”在本文中被定义为完整洗涤过程所花费的时间，即，一个或多个洗涤循环和一个或多个冲洗循环在一起的时间。

除非另外指明，术语“洗涤剂组合物”包括颗粒状或粉末状的通用或重垢洗涤剂，尤其是清洁洗涤剂；液体、凝胶或糊状的通用洗涤剂，尤其是所谓的重垢液体(HDL)类型；液体精细织物洗涤剂；手动餐具洗涤剂或轻垢餐具洗涤剂，尤其是高起泡类型的那些；机器餐具洗涤剂，包括用于供家庭和公共机构使用的不同的片剂、颗粒、液体和冲洗助剂类型；液体清洁剂和消毒剂，包括抗菌手洗类型、清洁条、肥皂条、漱口水、义齿清洁剂、汽车或地毯香波、浴室清洁剂；洗发香波和毛发染发剂；沐浴凝胶、泡沫浴液；金属清洁剂；以及清洁助剂如漂白添加剂和“去污棒(stain-stick)”或预处理型助剂。就旨在用于玷污的物体清洁的洗涤介质中的混合物而言，使用术语“洗涤剂组合物”和“洗涤剂配制品”。在一些实施例中，就洗涤织物和/或衣服而言，使用该术语(例如，“衣物洗涤洗涤剂”)。在替代性实施例中，该术语是指如用于清洁餐具、刀具等的那些的其他洗涤剂(例如“餐具洗涤洗涤剂”)。术语“自动餐具洗涤洗涤剂组合物”是指包括洗涤剂组分的组合物，该组合物供在洗碗机中清洁餐具，例如盘子、杯子、玻璃杯、碗、用餐工具(例如匙、刀、叉)、上菜用具、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯。并不旨在使本发明限于任何特定的洗涤剂配制品或组合物。术语“洗涤剂组合物”不旨在限于含有表面活性剂的组合物。旨在除了本文所述的酶以外，这些洗涤剂组合物可以包含，例如，选自稳定剂、表面活性剂、助水溶剂、助洗剂、共助洗剂、螯合试剂、漂白系统、漂白活化剂、聚合物和织物调色剂的一种或多种另外的组分。

在本发明洗涤剂组合物的上下文中使用的术语“浓缩物”或“添加剂”涵盖可用于生产本发明洗涤剂组合物的浓缩酶组合物(包含如本文所定义的蛋白酶和/或α-淀粉酶)。此类浓缩物和添加剂可以任选地包含表面活性剂。

术语“织物”涵盖任何纺织材料。因此，旨在该术语涵盖衣服，连同织物、纱线、纤维、非编织材料、天然材料、合成材料以及任何其他纺织材料。

术语“纺织品”是指编织织物，连同适合于转化为或用作纱线、编织、针织以及非编织织物的短纤维和长丝。该术语涵盖从天然以及合成(例如制造的)纤维制成的纱线。术语“纺织材料”是纤维、纱线中间体、纱线、织物以及制自纤维的产品(例如，衣服以及其他物品)的通用术语。

术语“非织物洗涤剂组合物”包括非纺织品表面洗涤剂组合物，包括但不限于用于硬表面清洁的组合物，例如餐具洗涤洗涤剂组合物、口腔洗涤剂组合物、义齿洗涤剂组合物以及个人清洁组合物。

术语“酶的有效量”是指在特定应用中，例如，在定义的洗涤剂组合物中达到所需的酶活性所必需的酶的量。此类有效量可以由本领域的普通技术人员容易地确定并且基于多种因素，例如使用的具体酶、清洁应用、洗涤剂组合物的特定组成以及是否需要液体或干燥(例如，颗粒、棒状)组合物等。术语酶的“有效量”是指达到所希望的水平的酶活性(例如，在定义的洗涤剂组合物中)的前述酶的量。在一个实施例中，蛋白酶的有效量与α-淀粉酶的有效量相同。在另一个实施例中，蛋白酶的有效量不同于α-淀粉酶的有效量，例如，蛋白酶的有效量可以多于或少于α-淀粉酶的有效量。

如本文使用的术语“水硬度”或“硬度”(degree of hardness)或“dH”或“°dH”是指德国硬度(German degrees of hardness)。一度被定义为10毫克氧化钙/升水。

本文使用的术语“相关洗涤条件”指示在洗涤剂细分市场中实际用于家用的条件，具体是洗涤温度、时间、洗涤力学、洗涤剂浓度、洗涤剂类型以及水硬度。

术语“辅料”意指针对所希望的具体类型的洗涤剂组合物和产品形式(例如，液体、颗粒、粉末、棒状、糊状、喷雾、片剂、凝胶或泡沫组合物)选择的任何液体、固体或气体材料，这些材料也优选地与用于该组合物中的酶可相容。在一些实施例中，颗粒组合物处于“压缩”形式，而在其他实施例中，液体组合物处于“浓缩”形式。

如本文使用的术语“污渍去除酶”描述帮助从织物或硬表面去除污渍或污垢的酶。污渍去除酶对特定底物起作用，例如，蛋白酶对蛋白质起作用、淀粉酶对淀粉起作用、脂肪酶和角质酶对脂质(脂肪和油)起作用、果胶酶对果胶起作用并且半纤维素酶对半纤维素起作用。污渍通常是具有不同组分的复杂混合物的沉积物，这导致材料自身局部变色或者在物体上留下粘性表面，该粘性表面可以吸引溶解于洗涤液中的污垢从而导致被玷污的区域变色。当酶对其存在于污渍中的特定底物起作用时，该酶降解或部分降解其底物，从而帮助在洗涤过程中去除与底物相关的污垢和污渍组分。例如，当蛋白酶对草地污渍起作用时，它降解草中的蛋白组分并且允许在洗涤期间释放绿色/棕色。

在此上下文下，术语“减少的量”意指在其他方面相同的条件下，该组分的量小于将用于参比过程中的量。在一个优选实施例中，该量被减少例如至少5％，例如至少10％、至少15％、至少20％或如另外本文所述的。

术语“低洗涤剂浓度”系统包括以下洗涤剂，其中在洗涤水中存在少于约800ppm的洗涤剂组分。亚洲(例如，日本)洗涤剂典型地被认为是低洗涤剂浓度系统。

术语“中洗涤剂浓度”系统包括以下洗涤剂，其中在洗涤水中存在约800ppm与约2000ppm之间的洗涤剂组分。北美洲洗涤剂通常被认为是中洗涤剂浓度系统。

术语“高洗涤剂浓度”系统包括以下洗涤剂，其中在洗涤水中存在大于约2000ppm的洗涤剂组分。欧洲洗涤剂通常被认为是高洗涤剂浓度系统。

如本文使用的术语“液体衣物洗涤洗涤剂组合物”是指处于稳定的液体形式并且用于洗涤织物的方法中的洗涤剂组合物。因此，该洗涤剂组合物被配制为流体形式。

如本文使用的术语“粉末衣物洗涤洗涤剂组合物”是指用于洗涤织物的方法中的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物处于固体形式，例如颗粒、非尘化的颗粒或粉末。

如本文使用的术语“液体餐具洗涤洗涤剂组合物”是指处于稳定的液体形式并且用于餐具洗涤的洗涤剂组合物。餐具洗涤可以是任何种类的餐具洗涤，例如手动餐具洗涤和例如自动餐具洗涤(ADW)。

如本文使用的术语“粉末餐具洗涤洗涤剂组合物”是指处于固体形式例如颗粒状、粉状或紧密单元并且用于餐具洗涤的洗涤剂组合物。粉末餐具洗涤洗涤剂组合物典型地用于自动餐具洗涤中，但是该用途不限于ADW，并且其还可以旨在被用于任何其他种类的餐具洗涤中，例如手动餐具洗涤。

变体(包括片段)的命名规则

出于本发明的目的，将SEQ ID NO:1、2、3、4和5中披露的成熟多肽用于确定另一种多肽(例如变体或片段)中对应的氨基酸残基。另一种多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO:1、2、3、4或5中披露的成熟多肽比对(这取决于它是蛋白酶还是α-淀粉酶)，并且基于该比对，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite[EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件]，Rice等人，2000，Trends Genet.[遗传学趋势]，16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)确定对应于在SEQID NO:1、2、3、4或5中披露的成熟多肽中的任何氨基酸残基的氨基酸位置编号。所用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)替代矩阵。

可以通过使用若干种计算机程序、使用其各自的默认参数比对多个多肽序列来确定在另一种蛋白酶中的相应氨基酸残基的鉴定，所述计算机程序包括但不限于：MUSCLE(通过对数‐预期的多序列比较；版本3.5或更新版本；Edgar，2004，Nucleic Acids Research[核酸研究]，32:1792-1797)、MAFFT(版本6.857或更新版本；Katoh和Kuma，2002，NucleicAcids Research[核酸研究]30:3059-3066；Katoh等人，2005，Nucleic Acids Research[核酸研究]33:511-518；Katoh和Toh，2007，Bioinformatics[生物信息学]23:372-374；Katoh等人，2009，Methods in Molecular Biology[分子生物学方法]537:39-64；Katoh和Toh，2010，Bioinformatics[生物信息学]26:1899-1900)以及采用ClustalW的EMBOSS EMMA(1.83或更新版本；Thompson等人，1994，Nucleic Acids Research[核酸研究]22:4673-4680)。

当其他蛋白酶与SEQ ID NO:2、3、4或5的成熟多肽相背离使得传统的基于序列的比较方法不能检测其相互关系时(Lindahl和Elofsson，2000，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]295:613-615)，可以使用其他成对序列比较算法。在基于序列的搜索中较高的敏感度可以使用搜索程序来获得，这些搜索程序采用多肽家族的概率表现(谱图)来搜索数据库。例如，PSI BLAST程序通过迭代数据库搜索过程来产生多个谱图，并且能够检测远距离同源物(Atschul等人，1997，Nucleic Acids Res[核酸研究]25:3389-3402)。如果多肽的家族或超家族在蛋白结构数据库中具有一个或多个代表，则可以实现甚至更大的敏感度。程序如GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]287:797-815；McGuffin和Jones,2003,Bioinformatics[生物信息学]19:874-881)利用来自多种来源(PSI BLAST、二级结构预测、结构比对谱图和溶剂化势)的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地，Gough等人，2000，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]313:903-919的方法可以用于比对未知结构的序列与存在于SCOP数据库中的超家族模型。这些比对进而可以用于产生多肽的同源性模型，并且使用出于该目的而开发的多种工具可以评估此类模型的准确度。

对于已知结构的蛋白质，若干工具和资源可用于检索并产生结构比对。例如，蛋白的SCOP超家族已经在结构上进行比对，并且那些比对是可访问的并且可下载的。可以使用多种算法如距离比对矩阵(Holm和Sander,1998,Proteins[蛋白质]33:88-96)或组合延伸(Shindyalov和Bourne,1998,Protein Engineering[蛋白质工程]11:739-747)比对两种或更多种蛋白质结构，并且这些算法的实施可以另外用于查询具有感兴趣的结构的结构数据库，以便发现可能的结构同源物(例如，Holm和Park,2000,Bioinformatics[生物信息学]16:566-567)。

当必须鉴定相应的氨基酸位置时确定使用哪种比对工具是在技术人员的知识范围内。因此，考虑了在本发明的上下文中可以使用本领域技术人员发现合适的任何可用的比对工具。

在描述本文所述的蛋白酶变体中，以下所述的命名法适于方便参考。采用公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。

取代：对于氨基酸取代，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、经取代的氨基酸。因此，将在位置226处的苏氨酸被丙氨酸取代表示为“Thr226Ala”或“T226A”。多个突变(或改变)由加号(“+”)分开，例如“Gly205Arg+Ser411Phe”或“G205R+S411F”代表分别在位置205和位置411处甘氨酸(G)被精氨酸(R)取代，并且丝氨酸(S)被苯丙氨酸(F)取代。图中还使用(“/”)例如“E492T/N503D”，这应该被视为与(“+”)是可互换的。

缺失：对于氨基酸缺失，使用以下命名法：原始氨基酸、位置*。因此，将在位置195处的甘氨酸的缺失表示为“Gly195*”或“G195*”。多个缺失由加号(“+”)分开，例如“Gly195*+Ser411*”或“G195*+S411*”。

插入：如上所披露的，插入可以是在占据一个位置的氨基酸(‘指定(或原始)氨基酸’，‘X’)的N-侧(‘上游’，‘X-1’)或C-侧(‘下游’，‘X+1’)。

对于向原始氨基酸(‘X’)的C-侧‘(下游’，‘X+1’)的氨基酸插入，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸。因此，将在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸表示为“Gly195GlyLys”或“G195GK”。将多个氨基酸的插入表示为[原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸#1、插入的氨基酸#2；等]。例如，将在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸和丙氨酸指示为“Gly195GlyLysAla”或“G195GKA”。

在此类情况下，通过将小写字母添加至在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基的位置编号中来对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号。在以上实例中，该序列因此将是：

表1

<u>亲本：</u>	<u>变体：</u>
		195	195 195a 195b
G	G-K-A

对于向原始氨基酸(X)的N-侧(‘上游’，‘X-1’)的氨基酸插入，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、插入的氨基酸、原始氨基酸。因此，将在位置195处的甘氨酸(G)之前插入赖氨酸(K)表示为“Gly195LysGly”或者“G195KG”。将多重氨基酸的插入表示为[原始氨基酸、位置、插入的氨基酸#1、插入的氨基酸#2；等，原始氨基酸]。例如，将在位置195处的甘氨酸之前插入赖氨酸(K)和丙氨酸(A)指示为“Gly195LysAlaGly”或“G195KAG”。在此类情况下，通过将具有角分符号的小写字母添加至在所插入的一个或多个氨基酸残基之后的氨基酸残基的位置编号中来对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号。在以上实例中，该序列因此将是：

表2

<u>亲本：</u>	<u>变体：</u>
		195	195a’195b’195
G	K-A-G

多种改变：包含多种改变的变体由加号(“+”)分开，例如“Arg170Tyr+Gly195Glu”或“R170Y+G195E”代表在位置170和位置195处的精氨酸和甘氨酸分别被酪氨酸和谷氨酸取代。

不同改变：在可以在某一位置引入不同的改变的情况下，这些不同的改变由逗号分开，例如“Arg170Tyr,Glu”代表在位置170处的精氨酸被酪氨酸或谷氨酸取代。因此，“Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala”表示以下变体：

“Tyr167Gly+Arg170Gly”、“Tyr167Gly+Arg170Ala”、“Tyr167Ala+Arg170Gly”和“Tyr167Ala+Arg170Ala”。

具体实施方式

在一方面，本发明涉及洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含：

(a)具有α-淀粉酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成

[SEQ ID NO:1]

或其展示出α-淀粉酶活性的片段；和

(b)具有蛋白酶活性的多肽，

或用于制造其的浓缩物或添加剂。

因此，在一个实施例中，具有α-淀粉酶活性的多肽由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成。SEQ ID NO:1的α-淀粉酶是SEQ ID NO:7的芽孢杆菌属物种的AAI10淀粉酶的缺失突变体，其中氨基酸183和184缺失。

在替代性实施例中，具有α-淀粉酶活性的多肽由SEQ ID NO:1的氨基酸序列的片段组成。合适的片段可以包含如下氨基酸序列或由其组成，该氨基酸序列包含SEQ ID NO:1的至少350个连续氨基酸，例如SEQ ID NO:1的至少400个连续氨基酸、450个连续氨基酸、475个连续氨基酸或至少480个连续氨基酸。合适的片段可以具有与SEQ ID NO:1相比至少80％的氨基酸序列同一性，例如与SEQ ID NO:1相比至少85％、至少90％或至少95％的序列同一性。

本发明洗涤剂组合物的第二组分是具有蛋白酶活性的多肽。在一个实施例中，蛋白酶可以是包含SEQ ID NO:2至5中任一个的亲本蛋白酶或其变体，或由SEQ ID NO:2至5中任一个的亲本蛋白酶或其变体组成的多肽。合适的变体可以具有与SEQ ID NO:2至5中任一个相比至少80％的氨基酸序列同一性，例如与SEQ ID NO:2至5中任一个相比至少85％、至少90％或至少95％的序列同一性。因此，所述变体相对于SEQ ID NO:2至5中任一个的氨基酸序列的修饰(改变和/或缺失)数目可以是从1至20，例如1至10和1至5，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个修饰(改变和/或缺失)。在一个实施例中，蛋白酶是如SEQ ID NO:2至4中任一个所定义的。

替代性的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选的是微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。蛋白酶可以是碱性蛋白酶，例如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如家族M4的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，例如来自M5、M7或M8家族的那些。合适的金属蛋白酶是如SEQ IDNO:13中所定义的。

术语“枯草杆菌蛋白酶”是指根据Siezen等人，Protein Engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人，Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是通过在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸来表征的蛋白酶的一个亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。

枯草杆菌酶的实例是衍生自芽孢杆菌属的那些，例如描述于US 7262042和WO 09/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌；和描述于WO 89/06279中的枯草杆菌蛋白酶迟缓(lentus)、枯草杆菌蛋白酶诺和(Novo)、枯草杆菌蛋白酶嘉士伯(Carlsberg)、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 92/175177、WO 01/016285、WO 02/026024以及WO 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属蛋白酶(描述于WO 89/06270、WO 94/25583和WO 05/040372中)、以及来源于纤维单胞菌属(Cellumonas)的糜蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。

进一步合适的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如例如WO 95/23221中所述)、及其变体(描述于WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中)。

金属蛋白酶的实例是如WO 07/044993(杰能科国际公司(Genencor Int.))中所述的中性金属蛋白酶，例如衍生自解淀粉芽孢杆菌的那些。

有用的蛋白酶的实例是描述于以下中的变体：WO 92/19729、WO 96/034946、WO98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264，尤其是在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体：3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252以及274，使用BPN’编号。更优选的蛋白酶变体可以包含以下突变：S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S、N87R、*97E、A98S、S99G、S99D、S99A、S99AD、S101G、S101M、S101R、S103A、V104I、V104Y、V104N、S106A、G118V、G118R、H120D、H120N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、T274A(使用BPN'编号)。

合适的可商购蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：DuralaseTm、DurazymTm、Ultra、(SEQ ID NO:6)、Ultra、 Ultra、Ultra、(SEQ ID NO:12)、和(诺维信公司)，以下列商品名出售的那些：PurafectPreferenzTm、PurafectPurafectPurafect EffectenzTm、以及(丹尼斯克/杜邦公司(Danisco/DuPont))、AxapemTM(吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocases N.V.))、BLAP(序列示于US 5352604的图29中)及其变体(汉高股份(Henkel AG))以及来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。进一步合适的蛋白酶是TY145蛋白酶(SEQ ID NO:14)。

可以将蛋白酶和α-淀粉酶以对应于以下的量添加至洗涤剂组合物中：每升洗涤液中0.001mg-100mg的蛋白质，例如0.01mg-100mg的蛋白质，优选地0.005mg-50mg的蛋白质、更优选地0.01mg-25mg的蛋白质、甚至更优选地0.05mg-10mg的蛋白质、最优选地0.05mg-5mg的蛋白质、并且甚至最优选地0.01mg-1mg的蛋白质。

除了酶，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含另外的组分。另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包含常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。对于织物护理，组分的选择可以包括以下考虑：待清洁的织物的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制。尽管根据具体的功能性对下面提及的组分通过通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被技术人员所理解的，一种组分可以包括另外的功能性。

根据本发明的洗涤剂组合物的其他组分可以是表面活性剂。表面活性剂降低洗涤剂中的表面张力，这使得清洁的污渍被提起并分散，并且然后洗去。因此，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或兼性离子的、或其混合物。在一个具体实施例中，洗涤剂组合物包含一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。因此，表面活性剂可以选自下组，该组由以下组成：阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、半极性表面活性剂、兼性离子表面活性剂和两性表面活性剂。一种或多种表面活性剂典型地以按重量计约0.1％至60％，如约1％至约40％、或约3％至约20％、或约3％至约10％的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择一种或多种表面活性剂，并且包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何表面活性剂。

当包括阴离子表面活性剂时，洗涤剂组合物将通常含有按重量计从约1％至约40％，如从约5％至约30％(包括从约5％至约15％)、或从约20％至约25％的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，具体地，直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或皂的二酯和单酯、及其组合。

当包括阳离子表面活性剂时，洗涤剂组合物将通常包括按重量计从约1％至约40％的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)、二甲基双十八烷基氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、以及其组合、烷基季铵化合物、烷氧基化的季铵(AQA)。

当包括非离子表面活性剂时，洗涤剂组合物将通常含有按重量计从约0.2％至约40％的非离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，具体地从约1％至约20％、从约3％至约10％，例如从约3％至约5％、或从约8％至约12％。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、连同在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品及其组合。

当包括半极性表面活性剂时，洗涤剂组合物将通常包括按重量计从约1％至约40％的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)，例如烷基二甲基氧化胺、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺，脂肪酸链烷醇酰胺和乙氧基化的脂肪酸链烷醇酰胺及其组合。

当包括兼性离子表面活性剂时，洗涤剂组合物将通常包括按重量计从约1％至约40％的兼性离子表面活性剂。兼性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱、烷基二甲基甜菜碱、以及磺基甜菜碱、及其组合。

蛋白酶多肽和α-淀粉酶多肽可以使用稳定剂来稳定，这些稳定剂可以选自下组，该组含有丙二醇、甘油、糖、糖醇、乳酸、硼酸、硼酸盐和苯基硼酸衍生物(例如如下的那些：其中在该苯基硼酸衍生物中的残基R是C₁-C₆烷基基团，并且在这些中，更优选地是CH₃、CH₃CH₂或CH₃CH₂CH₂)。该苯基硼酸衍生物中的残基R还可以是氢。苯基硼酸衍生物的一个实例是具有以下式的4-甲酰基苯基硼酸(4-FPBA)：

苯基硼酸衍生物可以另外在苯基环上具有其他化学修饰，并且具体地，它们可以含有一个或多个甲基、氨基、硝基、氯、氟、溴、羟基、甲酰基、乙基、乙酰基、叔丁基、茴香基、苄基、三氟乙酰基、N-羟基琥珀酰亚胺、叔丁氧羰基、苯甲酰基、4-甲基苄基、硫代茴香基(thioanizyl)、硫代甲苯基(thiocresyl)、苄基氧基甲基、4-硝基苯基、苄基氧基羰基、2-硝基苯甲酰基、2-硝基苯基氧硫基、4-甲苯磺酰基、五氟苯基、二苯基甲基、2-氯苄基氧基羰基、2,4,5-三氯苯基、2-溴苄基氧基羰基、9-芴基甲基氧基羰基、三苯基甲基、2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰基残基或基团或其组合。所有的稳定剂可以按所有质子化或去质子化形式存在于本发明的洗涤剂组合物中。此外，所有这些化合物(特别是其去质子化形式)可以与阳离子缔合。在这方面优选的阳离子是单价或多价的(特别是二价的)阳离子，特别是Na离子(Na+)、K离子(K+)、Li离子(Li+)、Ca离子(Ca2+)、Mg离子(Mg2+)、Mn离子(Mn2+)和Zn离子(Zn2+)。本发明的洗涤剂组合物可以包含两种或更多种稳定剂，例如像选自下组的那些，该组由以下组成：丙二醇、甘油、4-甲酰基苯基硼酸和硼酸盐。一个实例是包含4-甲酰基苯基硼酸和/或硼酸盐的本发明的洗涤剂组合物。该苯基硼酸衍生物可以按从0.00001wt％至5.0wt％、优选地从0.0001wt％至3.0wt％、从0.001wt％至2.0wt％、从0.005wt％至1.0wt％、从0.01wt％至0.5wt％、从0.02wt％至0.3wt％的量含有在洗涤剂组合物中。优选地，该硼酸/硼酸盐是按从0.001wt.％至5.5wt.％，并且更加优选地从0.01wt.％至4.5wt.％、从0.05wt.％至3.5wt.％和从0.1wt.％至3wt.％、0.4wt.％至2.49wt.％、0.5wt.％至1.5wt.％的量含有在洗涤剂组合物中。添加硼酸盐和4-甲酰基苯基硼酸的一种组合已经被发现是特别有效的，导致在洗涤剂组合物中酶稳定性的高的增加。优选地，在洗涤剂组合物中，硼酸/硼酸盐的含量为从0.001wt.％至5.5wt.％，并且愈加优选地从0.075wt.％至4.5wt.％、从0.09wt.％至3.5wt.％以及从0.1wt.％至2.49wt.％，并且苯基硼酸衍生物的含量为从0.001wt.％至0.08wt.％，并且愈加优选地至从0.003wt.％至0.06wt.％、从0.005wt.％至0.05wt.％、从0.007wt.％至0.03wt.％、以及从0.009wt.％至0.01wt.％。特别优选的是添加1.0wt％至2.0wt％的量的4-甲酰基苯基硼酸组合1.0wt％硼酸盐。

根据本发明的洗涤剂组合物可以包含蛋白酶多肽和α-淀粉酶多肽，其也可以使用如在WO 2005/105826和WO 2009/118375中所述的肽醛或肽酮来稳定。根据本发明的洗涤剂组合物的另一个实例涉及包含如本文所述的蛋白酶和α-淀粉酶的洗涤剂组合物，其中该洗涤剂配制品是如在WO 97/07202(其通过援引并入本文)中所披露的。

根据本发明的洗涤剂组合物的另一种任选的组分是水溶助剂。

水溶助剂是以下化合物，该化合物在水性溶液中溶解疏水化合物(或相反地，在非极性环境中溶解极性物质)。典型地，水溶助剂具有亲水和疏水两种特征(所谓的两亲特性，如由表面活性剂已知的)；然而，水溶助剂的分子结构一般不利于自发性自聚集，参见例如通过Hodgdon和Kaler(2007)，Current Opinion in Colloid&Interface Science[胶体和界面科学新见]12:121-128的综述。水溶助剂并不显示临界浓度，高于该浓度就会发生如对表面活性剂而言所发现的自聚集以及脂质形成胶束、薄层或其他很好地定义的中间相。相反，许多水溶助剂显示连续类型的聚集过程，在该过程中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而，许多水溶助剂改变了含有极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。水溶助剂常规在从药学、个人护理、食品到技术应用的各个产业中应用。水溶助剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过去除水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象，如相分离或高黏度。

因此，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含按重量计0-5％，例如约0.5至约5％、或约3％至约5％的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠及其组合。

洗涤剂组合物的另一种任选的组分可以是助洗剂和/或共助洗剂。术语“助洗剂”可以通过M.K.Nagaraja等人，JAOCS，第61卷，第9期(1984年9月)，第1475-1478页中描述的测试来进行分类以便确定在pH 8将水硬度从溶液中的2.0mM(作为CaCO3)降低至0.10mM所需的最小助洗剂水平。助洗剂可以具体地为与例如钙和镁离子形成水溶性络合物的螯合试剂。如本文使用的术语“螯合试剂(chelating agent)”或“螯合剂(chelator)”是指与某些金属离子形成分子的化学品，从而使这些离子失活以致于使他们不能与其他元素进行反应，因此是通过形成螯合物而抑制化学活性的一种结合剂。螯合是在配体与单一中心原子之间形成或存在的两种或更多种单独的结合。配体可以是任何有机化合物、硅酸盐或磷酸盐。因此，在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含按重量计约0至65％，例如约5％至约50％的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具洗涤洗涤剂中，助洗剂的水平典型地是40％-65％、特别是50％-65％。助洗剂和/或共助洗剂可以具体是形成具有Ca和Mg的水溶性络合物的螯合试剂。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤、ADW和硬表面清洁洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐例如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐例如碳酸钠、可溶性硅酸盐例如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺例如2-氨基乙-1-醇(MEA)、亚氨基二乙醇(DEA)和2,2',2”-次氮基三乙醇(TEA)和羧甲基菊粉(CMI)、及其组合。

根据本发明的洗涤剂组合物还可以包含按重量计0至65％，例如约5％至约40％的洗涤剂共助洗剂、或其混合物。洗涤剂组合物可以包含单独或与助洗剂组合的共助洗剂，例如沸石助洗剂。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯均聚物或其共聚物，如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。进一步的非限制性实例包括柠檬酸盐，螯合剂，例如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和膦酸盐，以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2',2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟乙烷-1,1-二基双(膦酸)(HEDP)、乙二胺四(亚甲基)四(膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基)五(膦酸)(DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、对氨基苯磺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、氨基乙磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)和磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(羟乙基)-亚乙基二胺三乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)、及其组合和盐。进一步的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中。

而洗涤剂组合物的又另一种任选的组分可以是漂白系统。漂白系统经常通过氧化去除颜色，并且许多漂白剂还具有强杀细菌特性，并且用于消毒和灭菌。因此，在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含按重量计0-10％，例如约1％至约5％的漂白系统。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤、ADW和硬表面清洁洗涤剂中使用的任何漂白系统。合适的漂白系统组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢来源(例如过碳酸钠和过硼酸钠)、预成型过酸以及其混合物。合适的预成型过酸包括但不限于：过氧羧酸及盐、过碳酸及盐、过亚氨酸(perimidic acid)及盐、过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(Oxone(R))，及其混合物。漂白系统的非限制性实例包括与过酸形成漂白活化剂组合的基于过氧化物的漂白系统，其可以包含例如无机盐，包括碱金属盐例如过硼酸盐的钠盐(通常为单水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐。漂白活化剂在本文意指与过氧化物漂白剂(像过氧化氢)反应以形成过酸的化合物。因此形成的过酸构成活化的漂白剂。本文有待使用的适合漂白活化剂包括属于酯酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。合适的实例是四乙酰乙二胺(TAED)、3,5,5三甲基己酰氧基苯磺酸钠、双过氧化十二酸、4-(十二烷基氧基)苯磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS)、4-(3,5,5-三甲基己酰氧基)苯磺酸盐(ISONOBS)、四乙酰乙二胺(TAED)和4-(壬酰氧基)苯磺酸盐(NOBS)，和/或WO 98/17767中披露的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP 624154中并且该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像Triacin)具有以下优点，其是环境友好的，因为其最终降解为柠檬酸和醇。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋精在储存时在产品中具有良好的水解稳定性，并且其是有效的漂白活化剂。最后，ATC为衣物洗涤添加剂提供一种良好的助洗能力。可替代地，漂白系统可以包括例如酰胺、酰亚胺、或砜型的过氧酸。漂白系统还可以包含过酸，例如6-(酞酰基氨基)过己酸(PAP)。漂白系统还可以包括漂白催化剂。在一些实施例中，漂白组分可以是选自下组的有机催化剂，该组由以下组成：具有下式的有机催化剂：

及其混合物；其中每个R1独立地是含有从9至24个碳的支链烷基基团或含有从11至24个碳的直链烷基基团，优选地，每个R1独立地是含有从9至18个碳的支链烷基基团或含有从11至18个碳的直链烷基基团，更优选地，每个R1独立地选自下组，该组由以下组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、正-十二烷基、正-十四烷基、正-十六烷基、正-十八烷基、异-壬基、异-癸基、异-十三基和异-十五烷基。其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259、WO 2007/087242中。合适的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌。

洗涤剂组合物的另一种组分是聚合物。因此，在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物包含聚合物。

因此，根据本发明的洗涤剂组合物可以包含按重量计0-10％，例如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％的聚合物。可以利用本领域中已知的在洗涤剂中使用的任何聚合物。该聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或抑泡特性。一些聚合物可以具有多于一种的以上提到的特性和/或多于一种的以下提到的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(乙烯亚胺)、羧甲基菊糖(CMI)、和聚羧化物(如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物)、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚对苯二甲酸乙二酯和聚氧乙烯对苯二甲酸乙二酯的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。进一步的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。还考虑了以上提到的聚合物的盐。

洗涤剂组合物的又另一种组分可以是织物调色剂。因此，在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物包含织物调色剂。

根据本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂(例如染料或色素)，当织物调色剂配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与包含所述洗涤剂组合物的洗涤液接触时，所述织物调色剂可以沉积到织物上，从而通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色调。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，当织物调色剂吸收至少一部分可见光光谱时，它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-黏土轭合物，并且还可以包括色素。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自下组的小分子染料，该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红或其混合物，例如如WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276和EP 1876226(通过援引并入本文)中所述。洗涤剂组合物优选包括从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包括从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。合适的调色剂还披露于例如WO 2007/087257、WO 2007/087243中。

洗涤剂组合物的其他任选的组分包含缓冲剂、结构化剂、多价螯合剂、光学增亮剂、消泡剂、芳香剂、抗再沉积剂、皮肤调理剂、柔软填充剂、乳化剂、着色剂、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、氧化剂、抗氧化剂、膨胀剂、和/或增溶剂。

这些洗涤剂组合物可以进一步包含以下中的至少一种或多种：表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、用于衣物洗涤或餐具洗涤中的漂白系统或漂白组分。

表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的量相比于在没有本发明的α-淀粉酶和蛋白酶情况下使用的表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的量可以有所减少。优选地，作为表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的该至少一种组分按以下量存在：比在不添加本发明的α-淀粉酶和蛋白酶的情况下组分在系统中的量(例如，此组分的常规的量)少1％、如少2％、如少3％、如少4％、如少5％、如少6％、如少7％、如少8％、如少9％、如少10％、如少15％、如少20％、如少25％、如少30％、如少35％、如少40％、如少45％、如少50％。洗涤剂组合物还可以是如下的组合物，该组合物不含至少一种组分，该组分是表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分和/或聚合物。

进一步的酶

在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物包含一种或多种进一步的酶，例如至少两种酶，更优选的至少三种、四种或五种酶。优选地，洗涤剂组合物的酶具有不同的底物特异性，例如蛋白质分解活性、淀粉分解活性、脂质分解活性、纤维素分解活性、溶半纤维活性、氧化活性、RNA酶活性、DNA酶活性或溶果胶活性。

根据本发明的洗涤剂组合物可以包含选自以下中的一种或多种另外的酶：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、lechinase、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶、甘露聚糖酶、或其任何混合物。其他合适的酶包括碳水化合物活性酶，像碳水化合物酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、或氧化酶，例如漆酶和/或过氧化物酶。

一般而言，所选的一种或多种酶的特性应与所选的洗涤剂兼容(即，最适pH、与其他酶和非酶成分的兼容性等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。

合适的蛋白酶如上所述。

合适的纤维素酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳属、支顶孢属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢菌产生的真菌纤维素酶。

尤其合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是在EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中所述的纤维素酶。其他实例是例如WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及WO 99/001544中所述的那些纤维素酶变体。

其他纤维素酶是具有以下序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶，该序列与WO 2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％的同一性，或家族44木葡聚糖酶，该木葡聚糖酶具有以下序列，该序列与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60％的同一性。

可商购的纤维素酶包括Celluzyme^TM和Carezyme^TM(诺维信公司(Novozymes A/S))、Carezyme Premium^TM(诺维信公司)、Celluclean^TM(诺维信公司)、CellucleanClassic^TM(诺维信公司)、Cellusoft^TM(诺维信公司)、Whitezyme^TM(诺维信公司)、Clazinase^TM、和Puradax HA^TM(杰能科国际公司(Genencor International Inc.))以及KAC-500(B)^TM(花王株式会社(Kao Corporation))。

合适的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或基因修饰的突变体。该甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是一种来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是粘琼脂芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌或特异腐质霉。合适的甘露聚糖酶描述于WO 1999/064619中。可商购的甘露聚糖酶是Mannaway(诺维信公司)。

合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变酶或蛋白质工程化的突变酶。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶，例如来自如EP 258068和EP305216中所述的疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如特异腐质霉(WO 96/13580)；来自假单胞菌属的菌株的脂肪酶(这些中的一些现在改名为伯克霍尔氏菌属)，例如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP331376)、假单胞菌属菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)；GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455)；来自稻瘟病菌的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 12/137147)。

其他实例是脂肪酶变体，如EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中所述的那些。

优选的商业化脂肪酶产品包括LipolaseTM、Lipex^TM；LipolexTM和LipocleanTM(诺维信公司(Novozymes A/S))，Lumafast(源自杰能科公司(Genencor))以及Lipomax(源自吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocades))。

再其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。

可以与本发明的酶一起使用的合适的另外的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以是细菌或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属，例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。

合适的淀粉酶包括芽孢杆菌α-淀粉酶，例如Termamyl(SEQ ID NO:10)、AA560(SEQID NO:8)、SP707(SEQ ID NO:9)、和SP.7-7(SEQ ID NO:15)。合适的淀粉酶包括具有在WO95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ ID NO:3具有90％序列同一性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，如在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408以及444。

不同的合适的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。

其他合适的淀粉酶是包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列同一性的变体。这种杂合α-淀粉酶的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209以及Q264。包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的衍生自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些：

M197T

H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或

G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。

进一步的合适的淀粉酶是具有在WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216以及K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182或位置H183和G184中具有缺失的那些。

可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:7具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304、以及476，使用WO 96/023873的SEQ ID 2用于编号。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置处具有缺失的那些，例如181和182、182和183、或位置183和184。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184处具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个处具有取代的那些。

其他能被使用的淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712的SEQID NO:10的淀粉酶、或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列同一性或WO 01/66712的SEQ ID NO:10具有90％序列同一性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211以及264。

进一步的合适的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQID NO:2具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:2的优选变体是在以下位置中的一个或多个处具有C-末端截短和/或取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444以及G475。SEQ ID NO:2的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些：Q87E、Q87R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E、N225R、N272E、N272R、S243Q、S243A、S243E、S243D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E和G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183处具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是在以下位置处具有取代的那些：

N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；

N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；

S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或

S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的，并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。

进一步的合适的淀粉酶是具有WO 13184577中的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQID NO:1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476和G477。SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些：K176L、E187P、N192F、N192Y、N192H、M199L、I203YF、S241Q、S241A、S241D、S241N、R458N、T459S、D460T、G476K和G477K，和/或在位置R178和/或S179或T180和/或G181中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是在以下位置处具有取代的那些：

E187P+I203Y+G476K，

E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K，

其中这些变体任选地进一步包含在位置241处的取代和/或在位置178和/或位置179处的缺失。

进一步的合适的淀粉酶是具有WO10104675中的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQID NO:1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：N21、D97、V128、K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477和G478。SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些：N21D、D97N、V128I K177L、M200L、L204Y、L204F、E242Q、E242A、G477K和G478K，和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是在以下位置处具有取代的那些：

N21D+D97N+V128I，

其中这些变体任选地进一步包含在位置200处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。

其他合适的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K及R458K的变体，以及在选自下组的一个或多个位置处另外具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339，最优选的是在所有这些位置处另外具有取代的变体。

其他的实例是淀粉酶变体，例如在WO 2011/098531、WO 2013/001078和WO 2013/001087中描述的那些。

可商购的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、Stainzyme TM、Stainzyme PlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X及BANTM(来自诺维信公司(Novozymes A/S)；SEQ ID NO:11)，以及RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase、Preferenz S1000、Preferenz S100、Excellenz S2000及Preferenz S110(来自杰能科国际公司/杜邦(Genencor International Inc./DuPont))。

合适的过氧物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属(例如来自灰盖鬼伞)的过氧化物酶、及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602、以及WO 98/15257中描述的那些。

可商购的过氧化物酶包括Guardzyme^TM(诺维信公司)。

根据本发明的洗涤剂组合物还可以包含另外的酶，例如果胶酸裂合酶例如PectawashTM、叶绿素酶等。

根据本发明的洗涤剂组合物还可以包含另外的酶，例如，lechinase/β-葡聚糖酶。合适的lechinase包括细菌来源或真菌来源的那些。它们可以被化学修饰或蛋白质工程化。有用的β-葡聚糖酶的实例包括WO 2015/144824(诺维信公司(Novozymes A/S))以及WO 99/06516(德国汉高公司(Henkel KGAA))中所述的那些。

该一种或多种洗涤剂酶可以通过添加包括一种或多种酶的单独的添加剂，或通过添加包括所有这些酶的组合添加剂而被包括在根据本发明的洗涤剂组合物中。洗涤剂添加剂，即单独的或组合的添加剂，可以配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂配制品为颗粒，特别是非尘化的颗粒；液体，特别是稳定化液体；或者浆液。

非尘化的颗粒可以例如如在US 4,106,991和US 4,661,452中所披露而产生，并且可以任选地通过本领域已知的方法进行包衣。蜡状包衣材料的实例是具有平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有从16个到50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚；具有从12个至20个碳原子并且存在15个至80个环氧乙烷单元的乙氧基化脂肪醇；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(例如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法来制备。

酶的制备

用于本发明的变体多肽可以使用本领域已知的任何诱变程序来制备，例如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等。

包含编码与一个或多个控制序列可操作地连接的多肽的多核苷酸的核酸构建体可用于在与控制序列相容的条件下指导编码序列在合适的宿主细胞中的表达。

该多核苷酸可以按多种方式操纵，以提供该多肽的表达。取决于表达载体，在其插入载体以前操纵多核苷酸可以是令人希望的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术在本领域是熟知的。合适的重组表达载体包含编码多肽、启动子、和转录和翻译终止信号的多核苷酸。各种核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可以包括一个或多个合宜的限制位点以允许在此类位点处插入或取代编码变体的多核苷酸。可替代地，可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中来表达该多核苷酸。在产生表达载体时，编码序列位于载体中，这样使得编码序列与用于表达的适当控制序列可操作地连接。

重组表达载体可以是可方便地经受重组DNA程序并且可引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。

合适的重组宿主细胞包含编码与一种或多种控制序列可操作地连接的多肽的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体而被维持。宿主细胞的选择在很大程度上将取决于编码变体的基因及其来源。宿主细胞可以是在变体的重组产生中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌细胞。将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与基因组学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829，或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)或接合(参见例如，Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。

宿主细胞还可以是真核生物，如植物、或真菌细胞。真菌宿主细胞可以是酵母细胞，例如克鲁维酵母属细胞、毕赤酵母属细胞、酵母属细胞或、裂殖酵母属细胞。真菌细胞可以通过下述过程转化，该过程涉及原生质体形成、原生质体的转化、以及以本身已知的方式的细胞壁的再生。可以使用由如以下文献描述的程序转化酵母：Becker和Guarente，在Abelson，J.N.和Simon，M.I.编辑，Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南]，Methods in Enzymology[酶学方法]，第194卷，第182-187页，学术出版社有限公司(Academic Press,Inc.)，纽约；Ito等人，1983，J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及Hinnen等人，1978，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院报]75:1920。

产生多肽的合适的方法包括：(a)在合适于多肽的表达的条件下培养宿主细胞；和(b)回收该多肽。

这些宿主细胞是在适合于使用本领域中已知的方法产生该多肽的一种营养介质中培养的。例如，可以通过在合适的培养基中，进行摇瓶培养，或在实验室或工业发酵罐中进行小规模或大规模发酵(包括连续、分批、分批补料或固态发酵)来培养这些细胞。

可以使用本领域已知的方法来检测该多肽。合适的检测方法包括但不限于：特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定多肽的α-淀粉酶活性(参见实例)。

可以使用本领域已知的方法来回收多肽。例如，可通过常规程序，包括但不限于，收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从营养介质回收多肽。可通过本领域已知的多种方法纯化多肽以获得基本上纯的多肽，所述方法包括但不限于层析(例如，离子交换、亲和、疏水、层析聚焦和大小排阻)、电泳程序(例如，制备型等电聚焦)、差示溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE，或提取(参见，例如，Protein Purification[蛋白纯化]，Janson和Ryden编辑，VCH出版公司(VCH Publishers)，纽约，1989)。

辅料

还可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤洗涤剂中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇如丙二醇)、织物调理剂(包括黏土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在普通技术人员的技术范围内。

根据本发明的洗涤剂组合物还可以包含分散剂。具体地，粉状洗涤剂可以包含分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。合适的分散剂例如描述于Powdered Detergents[粉末洗涤剂]，Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列]，第71卷，Marcel Dekker,Inc.[马塞尔·德克尔公司]中。根据本发明的洗涤剂组合物还可以包含一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物染料转移抑制试剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。根据本发明的洗涤剂组合物还可以优选地包含另外的组分，这些组分可以使正在被清洁的物品着色，例如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时，该增亮剂优选以约0.01％至约0.5％的水平存在。在该组合物中可以使用合适在衣物洗涤洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯衍生物。荧光增白剂的二氨芪-磺酸衍生物型的实例包括以下的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐；4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐；4,4'-双-(2-苯胺基-4(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐，4,4'-双-(4-苯基-2,1,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐；4,4'-双-(2-苯胺基-4(1-甲基-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐和2-(二苯乙烯基-4"-萘-1.,2':4,5)-1,2,3-三唑-2"-磺酸盐。优选的荧光增白剂是可从汽巴-嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉基-4苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)二磺酸盐的二钠盐。还优选的荧光增白剂，是可商购的Parawhite KX，由派拉蒙矿物与化学品公司(ParamountMinerals and Chemicals)，孟买，印度供应。适合使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷氨基香豆素。

合适的荧光增白剂水平包括从约0.01wt％、从0.05wt％、从约0.1wt％或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。根据本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些聚合物帮助从织物(如基于棉布和聚酯的织物)去除污垢，特别是从基于聚酯的织物去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以例如是基于非离子型或阴离子型对苯二甲酸的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接合的共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如Powdered Detergents[粉末洗涤剂]，Surfactant scienceseries[表面活性剂科学系列]第71卷第7章，Marcel Dekker，Inc.[马塞尔·德克尔公司]。另一种类型的污垢释放聚合物是包括核心结构和附接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包括聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构，如WO 2009/087523中详细描述的(将其通过援引特此并入)。此外，任意接合的共聚物是合适的污垢释放聚合物。合适的接合的共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856以及WO 2006/113314中(将其通过援引特此并入)。其他污垢释放聚合物是经取代的多糖结构，尤其是经取代的纤维素结构，例如经修饰的纤维素衍生物，例如在EP 1867808或WO 2003/040279中描述的那些(将二者都通过援引特此并入)。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺及其混合物。合适的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素及其混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。根据本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下描述的基于纤维素的聚合物还可以用作抗再沉积剂。

其他合适的辅料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填充剂、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、色素、抑泡剂、溶剂、用于液体洗涤剂的结构化剂(structurants)和/或结构弹力剂。

因此，在一个具体实施例中，该洗涤剂组合物进一步包含至少一种螯合试剂；至少一种表面活性剂；至少一种磺化的聚合物；至少一种水溶助剂；至少一种助洗剂和/或共助洗剂；至少一种香料；和/或至少一种漂白系统。

洗涤剂产品的配制品

根据本发明的洗涤剂组合物可以处于任何常规形式，例如棒状、均匀的片剂、具有两层或更多层的片剂、常规的或压缩的粉、颗粒、膏、凝胶、或常规的、压缩的或浓缩的液体。根据本发明的洗涤剂组合物可以配制为(例如)手洗或机洗衣物洗涤洗涤剂组合物，包括适用于预处理被玷污的织物的衣物洗涤添加剂组合物，和冲洗添加的织物软化剂组合物，或配制为用于一般家用硬表面清洁操作的洗涤剂组合物，或配制用于手洗或机洗餐具洗涤操作。

因此，在一个实施例中，根据本发明的洗涤剂组合物是液体衣物洗涤洗涤剂组合物、粉末衣物洗涤洗涤剂组合物、液体餐具洗涤洗涤剂组合物或粉末餐具洗涤洗涤剂组合物。在实施例中，该组合物是液体或粉末自动餐具洗涤(ADW)洗涤剂组合物；或是液体手动餐具洗涤洗涤剂组合物。

合适的餐具洗涤洗涤剂组合物包含：

(a)粉末自动餐具洗涤组合物

(b)非水性液体自动餐具洗涤组合物

(c)含有保护的漂白剂颗粒的液体自动餐具洗涤剂组合物

(d)非水性液体餐具洗涤组合物

稳定系统(例如精细硅酮和低分子量

洗涤剂配制品形式：层(相同或不同的相)、袋、对比用于机器给药单位的形式。

袋可以被配置为单个或多个的室。它可以具有合适保存该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。袋由封装内体积的水溶性膜制成。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是高分子材料，优选形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选的是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混物组合物，其包含可水解降解的和水溶性的聚合物共混物，例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在商品参考号M8630下，如由克里斯克拉夫特工业产品公司(ChrisCraft In.Prod.)，盖里，印第安纳州，美国销售)加增塑剂，如甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。袋可以包含固体衣物洗涤清洁组合物或部分组分以及/或者液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在构成上可以与含有固体的室不同。参考：(US 2009/0011970 A1)

可以由水可溶的袋中或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分物理地彼此分开。因此，可以避免组分间的不良的存储相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起所选的组分的延迟溶解。

非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且高达95％的水，如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括于水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。

液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。

方法和用途

本发明提供了洗涤剂组合物在家庭或工业清洁过程中的用途。清洁过程可以是例如餐具洗涤过程，例如自动餐具洗涤；衣物洗涤过程；或硬表面(如浴室砖、地板、桌面、排水管、水槽以及脸盆)的清洁。

餐具洗涤

自动餐具洗涤过程可以包含以下步骤：

a.将餐具暴露于包含洗涤剂组合物的水性洗涤液中；

b.完成至少一个洗涤循环；和

c.任选地冲洗和干燥该餐具。

因此，本发明提供了一种使用如在本文所述的洗涤剂组合物在自动餐具洗涤机中进行餐具洗涤的方法，该方法包括以下步骤：将所述洗涤剂组合物添加至所述自动餐具洗涤机中的洗涤剂组合物室内，并且在主洗涤循环期间释放所述洗涤剂组合物。

组合物可以在洗涤液中以从约1000ppm-8000ppm(例如在洗涤液中以2000ppm-6000ppm)的浓度采用。洗涤液的硬度可以是3-30°dH。洗涤液的pH可以是3-11，例如7-11。

当使用时，洗涤液的温度可以在10℃-70℃的范围内。例如，洗涤液的温度可以在15℃-60℃的范围内、在20℃-50℃的范围内、在25℃-50℃的范围内、在30℃-45°的范围内、在35℃-40℃的范围内，在35℃-55℃的范围内，或在40℃-50℃的范围内。

整个洗涤程序的温度可能会变化。一种酶可以在一个活性温度范围内活化，且其他酶可以在不同于第一种酶的活性温度范围的另一个活性温度范围内活化。例如，一个或多个洗涤循环可以在32℃-38℃的温度下进行，且其他洗涤循环可以在45℃-55℃的温度下进行。其优点是允许单一酶在其最佳温度下起作用。洗涤剂组合物的酶的最佳温度可以变化，但典型地，对于蛋白酶来说在65℃-70℃的范围内，且对于淀粉酶来说在55℃-65℃的范围内。最佳温度可以通过不同的测定来确定，例如对在不同温度下在缓冲溶液中在15min时间段内的活性进行比较。

在洗涤循环完成期间或之后，可以用水或包含冲洗助剂的水冲洗餐具。如果使用酸性冲洗助剂，可以进一步改进清洁的有效性。在冲洗步骤的至少一段时间内，冲洗助剂应该能够将pH降低到4以下。该pH甚至可以进一步降低，例如降低至低于pH 3.5，例如低于pH3、低于pH 2.5或低于pH 2。降低pH的时间段可以是至少1分钟，例如至少2分钟、至少3分钟、至少4分钟、至少5分钟、至少6分钟或至少7分钟。降低pH的时间段甚至可以与全冲洗步骤的时间一样长。

在冲洗步骤期间降低pH的能力是由于缓冲剂。应选择在低pH值(从4和以下的pH)下具有强缓冲能力的缓冲液。缓冲能力应对应于用15ml 4M HCL/冲洗循环进行pH下降的相同作用。在冲洗步骤期间降低pH的能力是由于选自下组的缓冲剂造成的，该组由以下组成：柠檬酸、乙酸、磷酸二氢钾、硼酸、二乙基巴比妥酸、卡莫第缓冲溶液(Carmody buffer)和Britton-Robinson缓冲液。

通过在洗涤循环期间冲洗掉从餐具释放的任何污垢，冲洗助剂可以进一步改进餐具的清洁。另外，酸性冲洗助剂可防止钙在餐具上沉淀。

衣物洗涤

衣物洗涤过程可以例如是家庭衣物洗涤，但是它也可以是工业衣物洗涤。用于洗涤织物和/或衣服的过程可以是如下的一个过程，该过程包括用含有如本文所述的洗涤剂组合物的洗涤溶液来处理织物。例如，可以在机器洗涤过程中或者在手动洗涤过程中进行清洁过程或纺织品保养过程。

经过洗涤、清洁或者纺织品保养过程的织物和/或衣服可以是常规的可洗涤的衣物，例如家庭衣物。优选地，衣物洗涤的主要部分是衣服和织物，包括针织品、编织物、斜纹粗棉布、非编织物、毛毡、纱线、以及毛巾布。这些织物可以是基于纤维素的，如天然纤维素，包括棉布、亚麻、亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维；或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括纤维胶/人造丝、苎麻、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。这些织物还可以是基于非纤维素的，例如天然聚酰胺，包括羊毛、骆驼毛、羊绒、马海毛、兔毛或丝，或者合成聚合物，例如尼龙、芳香族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯以及斯潘德克斯弹性纤维(spandex)/弹性纤维，或其共混物以及基于纤维素和基于非纤维素的纤维的共混物。

因此，在一方面，本发明涉及一种使用如本文所述的洗涤剂组合物在自动洗衣机中进行衣物洗涤的方法，该方法包括以下步骤：将所述洗涤剂组合物添加至所述自动餐具洗涤机中的洗涤剂组合物室内，并且在主洗涤循环期间释放所述洗涤剂组合物。在另一个方面，本发明涉及进行衣物洗涤的方法，该方法包括用如在本文所述的洗涤剂组合物洗涤衣服，优选地在40℃或更低的温度、或更优选地在30℃或更低的温度、或甚至更优选地在20℃或更低的温度进行该洗涤。

这些方法包括用于洗涤织物的方法。该方法包括将有待洗涤的织物与包括一种洗涤剂组合物的清洁衣物洗涤溶液接触的步骤。织物可以包括能够在常规消费者使用条件下被洗涤的任何织物。该溶液优选具有从约5.5至约11.5的pH。可以在溶液中按以下浓度使用组合物：从约100ppm，优选地500ppm至约15,000ppm。水温的范围典型地是从约5℃至约95℃，包括约10℃、约15℃、约20℃、约25℃、约30℃、约35℃、约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃、约80℃、约85℃以及约90℃。水与织物之比典型地是从约1:1至约30:1。

在具体的实施例中，洗涤方法在约0°dH至约30°dH的硬度下进行。在典型欧洲洗涤条件下，硬度是约16°dH，在典型美国洗涤条件下，是约6°dH，并且在典型亚洲洗涤条件下，是约3°dH。

本发明洗涤剂组合物的具体益处

从下面的实施例中可以明显看出，本发明的洗涤剂组合物对于特别难以除去的某些类型的污垢(最显著的是巧克力布丁污垢(获得自BV测试材料中心(Center forTestmaterials BV)，邮政信箱120，3133KT，弗拉尔丁恩，荷兰-还参见实例)表现出优异的洗涤性能。

因此，本发明的一个方面提供了如本文所述的洗涤剂组合物用于例如在家庭或工业清洁过程中清洁巧克力布丁污垢的用途，该过程可以是织物(例如衣物)的清洁、硬表面清洁(例如餐具洗涤，特别是自动餐具洗涤)。本发明的另一个方面提供了一种从织物或硬表面上去除巧克力布丁污垢的方法，该方法包括使被巧克力布丁污渍污染的织物或硬表面与如本文所述的洗涤剂组合物接触。在一个实施例中，该方法是用于织物的清洁，例如衣物洗涤。在另一个实施例中，该方法是用于硬表面清洁，例如餐具洗涤，例如如使用自动餐具洗涤机进行的。如实例2中所述，α-淀粉酶和蛋白酶在洗涤性能方面展示出协同。因此设想洗涤剂组合物可以包含减少的量的两种酶，并且仍提供与包含较大量的仅一种酶(即单独的蛋白酶或单独的α-淀粉酶)的洗涤剂可比较的洗涤性能。

通过以下实例进一步描述本发明，该实例不应理解为对本发明的范围进行限制。

实例

实例1：材料与方法

用于衣物洗涤的自动机械应力测定(AMSA)

为了评定在衣物洗涤中的洗涤性能，使用自动机械应力测定(AMSA)进行洗涤实验。使用AMSA，可以检査大量小体积的酶-洗涤剂溶液的洗涤性能。AMSA板具有许多用于测试溶液的槽和盖子，盖子针对所有槽开口强力挤压衣物洗涤样品(有待洗涤的纺织品)。在洗涤时间期间，板、测试溶液、纺织品和盖子剧烈摇动以使测试溶液与纺织品接触并以规则的、周期性摆动方式施加机械应力。关于进一步描述，参见WO 02/42740，尤其是第23-24页的“特定方法实施例(Special method embodiments)”段落。

将洗涤性能作为所洗涤的纺织品的颜色的亮度进行测量。也可以将亮度表示为当用白光照射样品时从样品反射的光的强度。当样品被玷污时，反射光的强度低于干净样品的反射光的强度。因此，反射光的强度可以用于测量洗涤性能。

使用专业平板扫描仪(Kodak iQsmart，柯达公司(Kodak)，Midtager 29，DK-2605丹麦)进行颜色测量，该扫描仪用于捕获所洗涤纺织品的图像。

为了从扫描的图像中提取光强度值，将来自图像的24-位像素值转化为红、绿以及蓝(RGB)的值。通过将RGB值作为向量加在一起并且然后取所得向量的长度来计算强度值(Int)。

蛋白酶活性测定-Suc-AAPF-pNA活性测定

蛋白质分解活性可以通过使用Suc-AAPF-PNA底物的方法来确定。Suc-AAPF-PNA是N-琥珀酰基-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-对硝基苯胺的缩写，并且它是可以被内切蛋白酶切割的一种嵌段肽。在切割后，游离PNA分子被释放出来，并且它具有黄颜色并且因此可以通过可见光分光光度法在波长405nm进行测量。该Suc-AAPF-PNA底物由巴亨公司(Bachem)制造(目录号L1400，溶解于DMSO中)。

待分析的蛋白酶样品被稀释在残余活性缓冲液(100mM Tris pH 8.6)中。通过转移60μl的稀释的酶样品至96孔微量滴定板并添加140μl底物工作溶液(0.72mg/ml于100mMTris pH 8.6)中进行该测定。将该溶液在室温混合并且在OD 405nm经5分钟每20秒测量吸收。

在一组给定条件下，时间相关吸收曲线的斜率(每分钟的吸光度)与所讨论的蛋白酶的比活性(活性/mg酶)成正比例。应该将蛋白酶样品稀释至其中斜率为线性的水平。

α-淀粉酶活性测定-pNP-G7测定

可以通过使用G7-pNP底物的方法确定α-淀粉酶活性。缩写为4,6-亚乙基(G7)-对硝基苯基(G1)-α,D-麦芽庚糖苷的G7-pNP是一种可以由内切淀粉酶(如α-淀粉酶)切割的嵌段低聚糖。裂解之后，试剂盒中所包括的α-葡糖苷酶进一步消化水解底物以释放游离PNP分子，该分子具有黄颜色并且因而可通过可见分光光度法在λ＝405nm(400-420nm)处测量。含有G7-pNP底物和α-葡糖苷酶的试剂盒由罗氏公司/日立公司(Roche/Hitachi)制造(目录号11876473)。

试剂

来自这个试剂盒的G7-pNP底物含有22mM 4,6-亚乙基-G7-pNP和52.4mM HEPES(2-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-乙磺酸)，pH 7.0。

α-葡糖苷酶试剂含有52.4mM HEPES、87mM NaCl、12.6mM MgCl₂、0.075mM CaCl₂、>4kU/L的α-葡糖苷酶。

通过将1mLα-葡糖苷酶试剂与0.2mL G7-pNP底物混合，制成底物工作溶液。此底物工作溶液在使用之前立即制成。

稀释缓冲液：50mM MOPS，0.05％(w/v)Triton X100(聚乙二醇对-(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯基醚(C₁₄H₂₂O(C₂H₄O)_n(n＝9-10)))，1mM CaCl₂，pH 8.0。

程序

将待分析的淀粉酶样品稀释于稀释缓冲液中以确保稀释样品中的pH是7。通过将20μl稀释的酶样品转移至96孔微量滴定板中并添加80μl底物工作溶液来进行测定。将溶液混合并在室温预孵育1分钟并且在OD 405nm经5分钟每20秒测量吸收。

在一组给定的条件下，时间依赖性吸收曲线的斜率(每分钟的吸光度)与所讨论的α-淀粉酶的比活性(活性/mg酶)成正比。淀粉酶样品应稀释至斜率低于0.4吸光度单位/分钟的水平。

α-淀粉酶活性测定-Phadebas活性测定

α-淀粉酶活性还可以通过使用Phadebas底物(例如来自瑞典隆德麦戈尔生命科学(Magle Life Sciences,Lund,Sweden))的方法来确定。Phadebas片剂包括互联淀粉聚合物，这些聚合物呈不溶于水的球状微球形式。将蓝色染料共价结合至这些微球。微球中的互联淀粉聚合物以与α-淀粉酶活性成比例的速度降解。当α-淀粉酶降解了淀粉聚合物时，释放的蓝色染料是可溶于水的并且染料浓度可通过在620nm测量吸光度来确定。蓝色的浓度与样品中的α-淀粉酶活性成比例。

将待分析的α-淀粉酶样品稀释于具有所希望的pH的活性缓冲液中。将两个底物片剂悬浮于5mL活性缓冲液中并且在磁力搅拌器上混合。在混合底物期间，将150μl转移至微量滴定板(MTP)或PCR-MTP。将30μl稀释的淀粉酶样品添加至150μl底物并混合。在37℃孵育15分钟。通过添加30μl 1M NaOH并且混合来停止反应。在4000xg离心MTP 5分钟。将100μl转移至新的MTP并且测量620nm的吸光度。

该α-淀粉酶样品应稀释成使得620nm的吸光度在0与2.2之间，并且在活性测定的线性范围内。

α-淀粉酶活性测定-Amylazyme活性测定

α-淀粉酶活性还可以通过使用包括已经与乳糖和硬脂酸镁混合并且压片的AZCL-直链淀粉的淀粉酶底物(Amylazyme Test，由梅格泽姆公司(Megazyme)提供的用于谷类和细菌淀粉酶的测定法)的方法来确定。将蓝色染料共价结合至这些微球。微球中的互联直链淀粉聚合物以与α-淀粉酶活性成比例的速度降解。当α-淀粉酶降解了直链淀粉聚合物时，释放的蓝色染料是可溶于水的并且染料浓度可通过在590nm测量吸光度来确定。蓝色的浓度与样品中的α-淀粉酶活性成比例。

将待分析的α-淀粉酶样品稀释于具有所希望的pH的活性缓冲液中。将两个底物片剂悬浮于5mL活性缓冲液中并且在磁力搅拌器上混合。在混合底物期间，将150μl转移至微量滴定板(MTP)或PCR-MTP。接下来，将25μl稀释的淀粉酶样品添加到150μl底物中并混合。将混合物在37℃孵育10分钟。通过添加25μl 1M NaOH并且混合来停止反应。将MTP在4000xg离心5分钟，随后将100μl转移至新的MTP，并在590nm处测量吸光度。

酶

在本实例中评估的变体是通过本领域技术人员熟知的方法(例如定点诱变)产生的。根据以下实例，在最佳条件下培养变体、进行纯化和评估。

实例2：使用全规模自动餐具洗涤(ADW)评估本发明的α-淀粉酶和蛋白酶的洗涤性能

为了评估本发明的多肽在洗涤剂基础组合物中的洗涤性能，可以使用全规模自动餐具洗涤(ADW)进行洗涤实验。全规模ADW装备用于测试模拟常规消费者装备的测试条件下多肽的洗涤性能。

在本研究中，测试条件是使用Miele餐具洗涤机GSL2机器的常规45℃洗涤程序。

洗涤性能总体描述

按照如下说明，将用巧克力布丁(DM-75)(来自BV测试材料中心，邮政信箱120，3133KT，弗拉尔丁恩，荷兰)玷污的三聚氰胺瓷砖用作测试材料，并使用19°dH水、在50g的IKW清洁土壤存在下、在“R45℃/8min/Kl55℃”程序下洗涤(参见表1和2)。将每种污渍类型的两块瓷砖添加到每个自动餐具洗涤机中。进行四次重复，并计算每个测试条件的平均值。

在运行机器程序五分钟后，对于α-淀粉酶以3mg多肽/洗涤的浓度或对于蛋白酶以30mg多肽/洗涤的浓度，添加洗涤剂和一种或多种酶。在流动自来水下彻底冲洗并且在黑暗中干燥之后，随后测量被玷污的瓷砖的光强度值作为洗涤性能的量度。全规模洗涤性能实验在下面指定的实验条件下进行：

表3：实验条件

表4：具有漂白剂的ADW标准洗涤剂(以w/w给出百分比)

在洗涤之后，将三聚氰胺瓷砖用自来水沖洗并干燥。

将洗涤性能作为反射单位进行测量。使用用于获取光谱和进行反射差和/或色差计算的Color-Eye 7000(CE7000)仪器进行反射测量。在460nm处(发光体中没有UV光)测量反射。

在这些测试中，单独测试淀粉酶；单独测试四种蛋白酶P1至P4中的每一种；并且还将每种蛋白酶与淀粉酶组合进行测试。结果呈现于表5中。如果蛋白酶和淀粉酶累加地起作用，则“预期的累加作用”是预期的光反射。“协同”是当蛋白酶和淀粉酶组合时测量的实际光反射减去“预期的累加作用”。因此，“协同”反映了酶的组合与其各自性能的累加作用相比实现的洗涤性能的提高。

使用实验设计来计划试验。随后使用ANOVA模型来评估洗涤性能数据。Tukey的HSD测试用于示出统计学上显著的协同作用。将HSD值计算为7.8。因此，任何大于7的绝对平均差被认为是显著的(p<0.05)。相比于仅用一种酶(即单独用淀粉酶或单独用蛋白酶)进行的测试，示出所有测试的组合都是显著的。

表5：巧克力布丁(DM-75)上的ADW洗涤性能证明淀粉酶和蛋白酶之间的协同

序列表

<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）

<120> 洗涤剂组合物及其用途

<130> 14091-WO-PCT

<160> 15

<170> PatentIn 版本 3.5

<210> 1

<211> 483

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 1

His His Asp Gly Thr Asn Gly Thr Ile Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asn

1 5 10 15

Val Pro Asn Asp Gly Gln His Trp Asn Arg Leu His Asn Asn Ala Gln

20 25 30

Asn Leu Lys Asn Ala Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp

35 40 45

Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr

50 55 60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65 70 75 80

Thr Lys Ala Glu Leu Glu Arg Ala Ile Arg Ser Leu Lys Ala Asn Gly

85 90 95

Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp

100 105 110

Phe Thr Glu Arg Val Gln Ala Val Glu Val Asn Pro Gln Asn Arg Asn

115 120 125

Gln Glu Val Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Glu Ala Trp Thr Gly Phe Asn

130 135 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Gln His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145 150 155 160

His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Ala Asn Arg

165 170 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu

180 185 190

Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met Asp His

195 200 205

Pro Glu Val Ile Asn Glu Leu Asn Arg Trp Gly Val Trp Tyr Ala Asn

210 215 220

Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys

225 230 235 240

Phe Ser Phe Met Arg Asp Trp Leu Gly His Val Arg Gly Gln Thr Gly

245 250 255

Lys Asn Leu Phe Ala Val Ala Glu Tyr Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala

260 265 270

Leu Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Thr Met Ser Ala Phe Asp

275 280 285

Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Gln Ala Ser Asn Ser Ser Gly Asn

290 295 300

Tyr Asp Met Arg Asn Leu Leu Asn Gly Thr Leu Val Gln Arg His Pro

305 310 315 320

Ser His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Glu

325 330 335

Ala Leu Glu Ser Phe Val Gln Gly Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala

340 345 350

Thr Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr Gly Asp

355 360 365

Tyr Tyr Gly Ile Pro Ser Asp Gly Val Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Ile

370 375 380

Asp Pro Leu Leu Lys Ala Arg Gln Gln Tyr Ala Tyr Gly Arg Gln His

385 390 395 400

Asp Tyr Phe Asp His Trp Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asn

405 410 415

Ala Ser His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly Pro

420 425 430

Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Arg Gln Lys Ala Gly Glu Val

435 440 445

Trp His Asp Met Thr Gly Asn Arg Ser Gly Thr Val Thr Ile Asn Gln

450 455 460

Asp Gly Trp Gly His Phe Phe Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Val Trp

465 470 475 480

Val Lys Arg

<210> 2

<211> 269

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 2

Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Arg Arg Val Gln Ala Pro Thr Ala

1 5 10 15

His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp

20 25 30

Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser

35 40 45

Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Glu Asn Gly His Gly Thr

50 55 60

His Ala Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu

65 70 75 80

Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala

85 90 95

Gly Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala

100 105 110

Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser

115 120 125

Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly

130 135 140

Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser

145 150 155 160

Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln

165 170 175

Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile

180 185 190

Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr

195 200 205

Ala Ser Leu Asp Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala

210 215 220

Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Arg Ile

225 230 235 240

Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu

245 250 255

Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg

260 265

<210> 3

<211> 269

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 3

Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala

1 5 10 15

His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp

20 25 30

Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser

35 40 45

Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr

50 55 60

His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu

65 70 75 80

Gly Val Ala Pro Asn Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala

85 90 95

Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala

100 105 110

Gly Asn Asn Val Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Leu Gln Ala

115 120 125

Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly

130 135 140

Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser

145 150 155 160

Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln

165 170 175

Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile

180 185 190

Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr

195 200 205

Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala

210 215 220

Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile

225 230 235 240

Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu

245 250 255

Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg

260 265

<210> 4

<211> 269

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 4

Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala

1 5 10 15

His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp

20 25 30

Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser

35 40 45

Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr

50 55 60

His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu

65 70 75 80

Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala

85 90 95

Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala

100 105 110

Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser

115 120 125

Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly

130 135 140

Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser

145 150 155 160

Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln

165 170 175

Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile

180 185 190

Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Leu Ser Thr Trp Pro Gly Ser Thr Tyr

195 200 205

Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala

210 215 220

Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile

225 230 235 240

Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Asp Thr Trp Glu

245 250 255

Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg

260 265

<210> 5

<211> 269

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 5

Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Arg Arg Val Gln Ala Pro Thr Ala

1 5 10 15

His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp

20 25 30

Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser

35 40 45

Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr

50 55 60

His Ala Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu

65 70 75 80

Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala

85 90 95

Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala

100 105 110

Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser

115 120 125

Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly

130 135 140

Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser

145 150 155 160

Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln

165 170 175

Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile

180 185 190

Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr

195 200 205

Ala Ser Leu Asp Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala

210 215 220

Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Arg Ile

225 230 235 240

Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu

245 250 255

Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg

260 265

<210> 6

<211> 269

<212> PRT

<213> 迟缓芽孢杆菌

<400> 6

Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala

1 5 10 15

His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp

20 25 30

Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser

35 40 45

Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr

50 55 60

His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu

65 70 75 80

Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala

85 90 95

Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala

100 105 110

Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser

115 120 125

Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly

130 135 140

Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser

145 150 155 160

Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln

165 170 175

Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile

180 185 190

Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr

195 200 205

Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala

210 215 220

Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile

225 230 235 240

Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu

245 250 255

Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg

260 265

<210> 7

<211> 485

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 7

His His Asp Gly Thr Asn Gly Thr Ile Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asn

1 5 10 15

Val Pro Asn Asp Gly Gln His Trp Asn Arg Leu His Asn Asn Ala Gln

20 25 30

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Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp

180 185 190

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Ile Lys Phe Ser Phe Met Arg Asp Trp Leu Gly His Val Arg Gly Gln

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Gly Pro Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Arg Gln Lys Ala Gly

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Glu Val Trp His Asp Met Thr Gly Asn Arg Ser Gly Thr Val Thr Ile

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Val Trp Val Lys Arg

485

<210> 8

<211> 485

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 8

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Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser

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Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Ser Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp

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50 55 60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly

65 70 75 80

Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Asn Ala Leu Lys Ser Asn Gly

85 90 95

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100 105 110

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp

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210 215 220

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Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser

465 470 475 480

Ile Trp Val Asn Lys

485

<210> 9

<211> 485

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 9

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1 5 10 15

Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Asn Ser Asp Ala Ser

20 25 30

Asn Leu Lys Ser Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp

35 40 45

Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr

50 55 60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65 70 75 80

Thr Arg Ser Gln Leu Gln Ala Ala Val Thr Ser Leu Lys Asn Asn Gly

85 90 95

Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp

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Gln Glu Val Thr Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Arg Phe Asp

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Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145 150 155 160

His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Arg Leu Asn Asn Arg

165 170 175

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Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala

245 250 255

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275 280 285

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His Pro Ser His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro

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Gly Ala Gly Gly Ser Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly

435 440 445

Gln Val Trp Ser Asp Ile Thr Gly Asn Arg Thr Gly Thr Val Thr Ile

450 455 460

Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser

465 470 475 480

Ile Trp Val Asn Lys

485

<210> 10

<211> 483

<212> PRT

<213> 地衣芽孢杆菌

<400> 10

Ala Asn Leu Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Met Pro

1 5 10 15

Asn Asp Gly Gln His Trp Arg Arg Leu Gln Asn Asp Ser Ala Tyr Leu

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35 40 45

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275 280 285

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<210> 11

<211> 483

<212> PRT

<213> 解淀粉芽孢杆菌

<400> 11

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35 40 45

Gln Ser Asp Asn Gly Tyr Gly Pro Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu Gly Glu

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65 70 75 80

Leu Gln Asp Ala Ile Gly Ser Leu His Ser Arg Asn Val Gln Val Tyr

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Gly Asp Val Val Leu Asn His Lys Ala Gly Ala Asp Ala Thr Glu Asp

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Val Thr Ala Val Glu Val Asn Pro Ala Asn Arg Asn Gln Glu Thr Ser

115 120 125

Glu Glu Tyr Gln Ile Lys Ala Trp Thr Asp Phe Arg Phe Pro Gly Arg

130 135 140

Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp His Trp Tyr His Phe Asp Gly

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210 215 220

Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Ala Lys His Ile Lys Phe Ser Phe

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Leu Arg Asp Trp Val Gln Ala Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Glu Met

245 250 255

Phe Thr Val Ala Glu Tyr Trp Gln Asn Asn Ala Gly Lys Leu Glu Asn

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Tyr Leu Asn Lys Thr Ser Phe Asn Gln Ser Val Phe Asp Val Pro Leu

275 280 285

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290 295 300

Arg Arg Leu Leu Asp Gly Thr Val Val Ser Arg His Pro Glu Lys Ala

305 310 315 320

Val Thr Phe Val Glu Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Gln Ser Leu Glu

325 330 335

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340 345 350

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355 360 365

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Asp Tyr Ile Asp His Pro Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asp

405 410 415

Ser Ser Ala Ala Lys Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro

420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

Asp Gly Trp Gly Glu Phe His Val Asn Asp Gly Ser Val Ser Ile Tyr

465 470 475 480

Val Gln Lys

<210> 12

<211> 300

<212> PRT

<213> 解淀粉芽孢杆菌

<400> 12

Ala Ala Thr Thr Gly Thr Gly Thr Thr Leu Lys Gly Lys Thr Val Ser

1 5 10 15

Leu Asn Ile Ser Ser Glu Ser Gly Lys Tyr Val Leu Arg Asp Leu Ser

20 25 30

Lys Pro Thr Gly Thr Gln Ile Ile Thr Tyr Asp Leu Gln Asn Arg Glu

35 40 45

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65 70 75 80

Val Tyr Asp Tyr Phe Tyr Gln Lys Phe Asn Arg Asn Ser Tyr Asp Asn

85 90 95

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100 105 110

Asn Ala Ala Trp Ile Gly Asp Gln Met Ile Tyr Gly Asp Gly Asp Gly

115 120 125

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Gln Pro Gly Ala Leu Asn Glu Ser Phe Ser Asp Val Phe Gly Tyr Phe

165 170 175

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195 200 205

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210 215 220

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Thr Ile Thr Lys Ile Gly Val Asn Lys Ala Glu Gln Ile Tyr Tyr Arg

245 250 255

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260 265 270

Ala Ala Leu Ile Gln Ser Ala Arg Asp Leu Tyr Gly Ser Gln Asp Ala

275 280 285

Ala Ser Val Glu Ala Ala Trp Asn Ala Val Gly Leu

290 295 300

<210> 13

<211> 300

<212> PRT

<213> 枯草芽孢杆菌

<400> 13

Ala Ala Ala Thr Gly Ser Gly Thr Thr Leu Lys Gly Ala Thr Val Pro

1 5 10 15

Leu Asn Ile Ser Tyr Glu Gly Gly Lys Tyr Val Leu Arg Asp Leu Ser

20 25 30

Lys Pro Thr Gly Thr Gln Ile Ile Thr Tyr Asp Leu Gln Asn Arg Gln

35 40 45

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50 55 60

Ser Ser Ser Gln Arg Ala Ala Val Asp Ala His Tyr Asn Leu Gly Lys

65 70 75 80

Val Tyr Asp Tyr Phe Tyr Ser Asn Phe Lys Arg Asn Ser Tyr Asp Asn

85 90 95

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100 105 110

Asn Ala Ala Trp Thr Gly Asp Gln Met Ile Tyr Gly Asp Gly Asp Gly

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Ser Phe Phe Ser Pro Leu Ser Gly Ser Leu Asp Val Thr Ala His Glu

130 135 140

Met Thr His Gly Val Thr Gln Glu Thr Ala Asn Leu Ile Tyr Glu Asn

145 150 155 160

Gln Pro Gly Ala Leu Asn Glu Ser Phe Ser Asp Val Phe Gly Tyr Phe

165 170 175

Asn Asp Thr Glu Asp Trp Asp Ile Gly Glu Asp Ile Thr Val Ser Gln

180 185 190

Pro Ala Leu Arg Ser Leu Ser Asn Pro Thr Lys Tyr Asn Gln Pro Asp

195 200 205

Asn Tyr Ala Asn Tyr Arg Asn Leu Pro Asn Thr Asp Glu Gly Asp Tyr

210 215 220

Gly Gly Val His Thr Asn Ser Gly Ile Pro Asn Lys Ala Ala Tyr Asn

225 230 235 240

Thr Ile Thr Lys Leu Gly Val Ser Lys Ser Gln Gln Ile Tyr Tyr Arg

245 250 255

Ala Leu Thr Thr Tyr Leu Thr Pro Ser Ser Thr Phe Lys Asp Ala Lys

260 265 270

Ala Ala Leu Ile Gln Ser Ala Arg Asp Leu Tyr Gly Ser Thr Asp Ala

275 280 285

Ala Lys Val Glu Ala Ala Trp Asn Ala Val Gly Leu

290 295 300

<210> 14

<211> 311

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 14

Ala Val Pro Ser Thr Gln Thr Pro Trp Gly Ile Lys Ser Ile Tyr Asn

1 5 10 15

Asp Gln Ser Ile Thr Lys Thr Thr Gly Gly Ser Gly Ile Lys Val Ala

20 25 30

Val Leu Asp Thr Gly Val Tyr Thr Ser His Leu Asp Leu Ala Gly Ser

35 40 45

Ala Glu Gln Cys Lys Asp Phe Thr Gln Ser Asn Pro Leu Val Asp Gly

50 55 60

Ser Cys Thr Asp Arg Gln Gly His Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val

65 70 75 80

Leu Ala His Gly Gly Ser Asn Gly Gln Gly Val Tyr Gly Val Ala Pro

85 90 95

Gln Ala Lys Leu Trp Ala Tyr Lys Val Leu Gly Asp Asn Gly Ser Gly

100 105 110

Tyr Ser Asp Asp Ile Ala Ala Ala Ile Arg His Val Ala Asp Glu Ala

115 120 125

Ser Arg Thr Gly Ser Lys Val Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Ser Ser

130 135 140

Ala Lys Asp Ser Leu Ile Ala Ser Ala Val Asp Tyr Ala Tyr Gly Lys

145 150 155 160

Gly Val Leu Ile Val Ala Ala Ala Gly Asn Ser Gly Ser Gly Ser Asn

165 170 175

Thr Ile Gly Phe Pro Gly Gly Leu Val Asn Ala Val Ala Val Ala Ala

180 185 190

Leu Glu Asn Val Gln Gln Asn Gly Thr Tyr Arg Val Ala Asp Phe Ser

195 200 205

Ser Arg Gly Asn Pro Ala Thr Ala Gly Asp Tyr Ile Ile Gln Glu Arg

210 215 220

Asp Ile Glu Val Ser Ala Pro Gly Ala Ser Val Glu Ser Thr Trp Tyr

225 230 235 240

Thr Gly Gly Tyr Asn Thr Ile Ser Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His

245 250 255

Val Ala Gly Leu Ala Ala Lys Ile Trp Ser Ala Asn Thr Ser Leu Ser

260 265 270

His Ser Gln Leu Arg Thr Glu Leu Gln Asn Arg Ala Lys Val Tyr Asp

275 280 285

Ile Lys Gly Gly Ile Gly Ala Gly Thr Gly Asp Asp Tyr Ala Ser Gly

290 295 300

Phe Gly Tyr Pro Arg Val Lys

305 310

<210> 15

<211> 485

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌属物种

<400> 15

His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr

1 5 10 15

Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser

20 25 30

Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp

35 40 45

Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr

50 55 60

Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly

65 70 75 80

Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Thr Ala Leu Lys Ser Asn Gly

85 90 95

Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp

100 105 110

Ala Thr Glu Trp Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Ser Asn Arg Asn

115 120 125

Gln Glu Val Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp

130 135 140

Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr

145 150 155 160

His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Gln Asn Arg

165 170 175

Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp

180 185 190

Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met

195 200 205

Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr

210 215 220

Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His

225 230 235 240

Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Thr

245 250 255

Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Ile

260 265 270

Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val

275 280 285

Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Arg Ser Gly

290 295 300

Gly Asn Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg

305 310 315 320

His Pro Thr His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro

325 330 335

Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala

340 345 350

Cys Ala Leu Thr Leu Thr Arg Asp Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr

355 360 365

Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser

370 375 380

Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Lys

385 390 395 400

Gln Asn Asp Tyr Leu Asp His His Asn Met Ile Gly Trp Thr Arg Glu

405 410 415

Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp

420 425 430

Gly Pro Gly Gly Asn Lys Trp Met Tyr Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly

435 440 445

Gln Val Trp Arg Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Gly Thr Val Thr Ile

450 455 460

Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser

465 470 475 480

Ile Trp Val Asn Asn

485

Claims (24)

1.一种洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含：

(a)具有α-淀粉酶活性的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其展示出α-淀粉酶活性的片段，或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其展示出α-淀粉酶活性的片段组成；

(b)具有蛋白酶活性的多肽；

或用于制造其的浓缩物或添加剂。

2.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其中该具有α-淀粉酶活性的多肽包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列或由其组成。

3.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物，其中该具有α-淀粉酶活性的多肽包含如下氨基酸序列或由其组成，该氨基酸序列包含SEQ ID NO:1的至少350个连续氨基酸，例如SEQID NO:1的至少400个连续氨基酸、450个连续氨基酸、475个连续氨基酸或至少480个连续氨基酸。

4.根据权利要求1或3中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该具有α-淀粉酶活性的多肽具有与SEQ ID NO:1相比至少80％的氨基酸序列同一性，例如与SEQ ID NO:1相比至少85％、至少90％或至少95％的序列同一性。

5.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含具有蛋白酶活性的多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：

(A)包含SEQ ID NO:2或其片段或变体、或由SEQ ID NO:2或其片段或变体组成的多肽；

(B)包含SEQ ID NO:3或其片段或变体、或由SEQ ID NO:3或其片段或变体组成的多肽；

(C)包含SEQ ID NO:4或其片段或变体、或由SEQ ID NO:4或其片段或变体组成的多肽；或

(D)包含SEQ ID NO:5或其片段或变体、或由SEQ ID NO:5或其片段或变体组成的多肽。

6.根据权利要求5所述的洗涤剂组合物，其中该具有蛋白酶活性的多肽是(A)、(B)或(C)中所定义的蛋白酶。

7.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含选自下组的一种或多种另外的酶，该组由以下组成：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶、甘露聚糖酶、lechinase、RNA酶、DNA酶、或其任何混合物。

8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，该组合物进一步包含选自下组的一种或多种另外的组分，该组由以下组成：稳定剂、表面活性剂、助水溶剂、助洗剂、共助洗剂、螯合试剂、漂白系统、漂白活化剂、聚合物和织物调色剂。

9.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含表面活性剂，其中该表面活性剂选自下组，该组由以下组成：阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和两性表面活性剂。

10.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中所述洗涤剂组合物是液体衣物洗涤洗涤剂组合物、粉末衣物洗涤洗涤剂组合物、液体餐具洗涤洗涤剂组合物或粉末餐具洗涤洗涤剂组合物。

11.根据权利要求10所述的洗涤剂组合物，其中所述组合物是液体或粉末衣物洗涤洗涤剂组合物。

12.根据权利要求10所述的洗涤剂组合物，其中所述组合物是液体或粉末自动餐具洗涤(ADW)洗涤剂组合物。

13.根据权利要求10所述的洗涤剂组合物，其中所述组合物是液体手动餐具洗涤洗涤剂组合物。

14.根据前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物在家庭或工业清洁过程中的用途。

15.根据权利要求14所述的用途，用于织物清洁，例如衣物洗涤。

16.根据权利要求14所述的用途，用于硬表面清洁，例如餐具洗涤。

17.根据权利要求16所述的用途，用于自动餐具洗涤。

18.根据权利要求14至17中任一项所述的用途，用于清洁巧克力布丁污垢。

19.一种从织物或硬表面去除巧克力布丁污垢的方法，该方法包括使被巧克力布丁污垢污染的织物或硬表面与根据权利要求1至13中任一项所述的洗涤剂组合物接触。

20.根据权利要求19所述的方法，用于织物清洁，例如衣物洗涤。

21.根据权利要求19所述的方法，用于硬表面清洁，例如餐具洗涤。

22.根据权利要求21所述的方法，其中该方法使用自动餐具洗涤机来进行。

23.一种使用根据权利要求1至10和13中任一项所述的洗涤剂组合物在自动餐具洗涤机中进行餐具洗涤的方法，该方法包括以下步骤：将所述洗涤剂组合物添加至所述自动餐具洗涤机中的洗涤剂组合物室内，并且在主洗涤循环期间释放所述洗涤剂组合物。

24.一种使用根据权利要求1至11中任一项所述的洗涤剂组合物在自动洗衣机中进行衣物洗涤的方法，该方法包括以下步骤：将所述洗涤剂组合物添加至所述自动洗衣机中的洗涤剂组合物室内，并且在主洗涤循环期间释放所述洗涤剂组合物。