CN109180769B

CN109180769B - 一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法

Info

Publication number: CN109180769B
Application number: CN201810934206.XA
Authority: CN
Inventors: 张瑜; 肖红; 郭文华; 王晓莹
Original assignee: SHAANXI JIAHE PHYTOCHEM CO Ltd
Current assignee: SHAANXI JIAHE PHYTOCHEM CO Ltd
Priority date: 2018-08-16
Filing date: 2018-08-16
Publication date: 2021-03-12
Anticipated expiration: 2038-08-16
Also published as: CN109180769A

Abstract

本发明涉及一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，属于一种植物提纯方法，解决了现有技术使用柱层析生产周期长、收率低，不利于工业化生产的问题。采用的技术方案是一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，包括沙梨木原料酶解，活性炭和活性白土吸附有效成分，氯化钠脱水，混合溶剂结晶、低极性试剂洗杂得到羽扇豆醇产品。本发明通过添加酶试剂进行酶解，可有效提高羽扇豆醇的收率；通过活性炭和活性白土将有效成分吸附，快速实现活性成分和杂质的分离，简化了工艺路线，可有效降低生产成本，提高生产效率，并减少了有毒试剂的使用，实现绿色生产。

Description

一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法

技术领域

本发明属于一种植物提纯方法，具体涉及一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法。

背景技术

沙梨木又叫刺籽鱼木，主产于中国云南、广西、广东等省，在印度中南半岛至印度尼西亚都有分布，已被海南植物志所收录，具有抗氧化、抗炎症、促进伤口愈合的作用。一项由香港大学所主持的研究发现，羽扇豆醇可抑制头颈部肿瘤的生长和扩散，还可能对肝癌、前列腺癌和乳腺癌有治疗作用。

文献“Effect of lupeol isolated from Crataeva nurvala Buch.-Ham.stembark extract agaist free radical induced nephrotoxicity in rat.”IndianJournal of Experimental Biology Vol.42,July,2004,pp.686-690.中提到一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，原料采用石油醚提取，然后柱层析，分别采用己烷、己烷-苯、苯洗脱，收集苯洗脱液，浓缩得到羽扇豆醇粗品(收率0.6％)，再采用甲醇:丙酮(60:40)反复重结晶得到羽扇豆醇。该工艺采使用柱层析，工艺路线复杂、生产周期长、成本高，且采用了大量的苯、丙酮等毒性试剂，不适合工业化生产。

专利CN 103626829 B公开了一种从老鸦柿中分离制备羽扇豆醇的方法，原料采用95％乙醇、甲醇、苯或氯仿提取，硅胶柱或氧化铝柱层析，石油醚-乙酸乙酯或正己烷-氯仿洗脱，无水乙醇或乙酸乙酯反复重结晶得到纯羽扇豆醇。该方法的缺点也在于采用柱层析，生产周期长，成本高，不利于工业化生产。

发明内容

本发明目的是提供一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，以解决现有技术使用柱层析生产周期长、收率低，不利于工业化生产的问题。

本发明的技术解决方案是：

一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)酶解：将沙梨木原料粉碎，浸泡于质量3-5倍量水中，加酶试剂酶解，过滤，得到酶解料；所述酶试剂为纤维素酶或半纤维素酶中的任一种，添加量为原料质量的0.05-0.1％，酶解温度40-50℃，酶解时间60-90min；

沙梨木原料由于质地坚硬，活性成分被包裹在细胞壁中，常规试剂提取很难提取完全，且溶耗大、时间长，采用纤维素酶或半纤维素酶可使细胞壁破坏，有效成分溶出，增加提取率，缩短提取时间；

2)提取：将上述酶解料，在原料质量8-15倍量的70-80％有机试剂中回流提取，提取液浓缩至醇度30-40％，加入原料质量20-30％活性炭和10-15％活性白土，在60-80℃吸附1-3h，过滤，收集不溶物；

所述有机试剂为乙醇、甲醇或丙酮；

所述活性炭型号为767、320、303、HB-F中的一种或多种的组合；

3)结晶、干燥：将上述不溶物采用其质量3-5倍量二氯甲烷或乙酸乙酯热溶解，过滤，滤液经氯化钠柱或无水硫酸铜柱吸附，将吸附流出液浓缩至原体积的1/40-1/50，搅拌加入异丙醇、正丁醇或戊醇至溶液微浑浊，10-15℃保温3h以上，进行析晶，离心收集结晶，干燥；

4)过滤、收集：将上述得到的结晶，用其质量1-2倍量有机试剂常温搅拌1-2h，过滤，收集沉淀即可得到纯度98％以上的羽扇豆醇；

所述有机试剂为正己烷、环己烷或石油醚中的任一种。

进一步地，步骤2)中，活性炭和活性白土在70℃吸附1-3h。

进一步地，步骤2)中，活性炭和活性白土在70℃吸附1h。

进一步地，步骤2)中，所述有机试剂为乙醇。

进一步地，步骤3)中，滤液经氯化钠柱吸附，由于有机试剂中含水量少，氯化钠即可将其水分完全吸收掉，而且环保，易回收处理，成本低。

进一步地，步骤3)中，搅拌加入异丙醇至溶液微浑浊。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、将沙梨木原料通过添加酶试剂进行酶解，可有效提高羽扇豆醇的收率，实现原料的综合利用，从而降低成本。

2、摒弃传统的柱层析，将提取液浓缩至一定醇度，通过活性炭和活性白土将有效成分吸附，而将大部分醇溶性杂质留到母液中，从而快速实现活性成分和杂质的分离，简化了工艺路线，可有效降低生产成本，提高生产效率，适于工业化生产；同时减少了有毒试剂的使用，可实现绿色生产。

3、采用氯化钠柱，降低了试剂中的含水量，可实现结晶的松散度，避免包合现象；通过添加异丙醇，降低结晶的溶解度，同时对结晶温度进行严格控制，提高了结晶析出率。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的说明。

实施例1

一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，包括以下步骤：

1)酶解：

取沙梨木原料100kg粉碎，浸泡于300kg水中，加入50g纤维素酶40℃酶解90min，过滤，得到酶解料。

2)提取：

将上述酶解料采用800kg 80％乙醇回流提取，提取液减压浓缩至醇度30％，加入20kg 767活性炭和10kg活性白土在60℃吸附1h，过滤，收集不溶物。

3)结晶、干燥：

将上述不溶物采用96kg二氯甲烷热溶解，过滤，滤液用预先备好的氯化钠柱吸附，将吸附流出液浓缩至1.9kg，加入异丙醇至溶液微浑浊，10-15℃保温3h以上进行析晶，离心收集结晶，干燥。

4)过滤、收集：

将上述结晶再用0.95kg环己烷常温搅拌溶解1-2h，过滤，收集沉淀，干燥得羽扇豆醇835g，纯度98.3％。

实施例2

一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，包括以下步骤：

1)酶解：

取沙梨木原料100kg粉碎，浸泡于500kg水中，加入100g半纤维素酶50℃酶解60min，过滤，得到酶解料。

2)提取：

将上述酶解料采用1500kg 70％甲醇回流提取，提取液减压浓缩至醇度40％，加入30kg 320活性炭和15kg活性白土在80℃吸附3h，过滤，收集不溶物。

3)结晶、干燥：

将上述不溶物采用227kg乙酸乙酯热溶解，过滤，滤液用预先备好的氯化钠柱吸附，将吸附流出液浓缩至5.6kg，加入戊醇至溶液微浑浊，10-15℃保温3h以上进行析晶，离心收集结晶，干燥。

4)过滤、收集：

将上述结晶再用1.7kg正己烷常温搅拌溶解1-2h，过滤，收集沉淀，干燥得羽扇豆醇842g，纯度98.2％。

实施例3

一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，包括以下步骤：

1)酶解：

取沙梨木原料100kg粉碎，浸泡于400kg水中，加入80g纤维素酶45℃酶解70min，过滤，得到酶解料。

2)提取：

将上述酶解料采用1000kg 75％丙酮回流提取，提取液减压浓缩至醇度35％，加入25kg 303活性炭和12kg活性白土在70℃吸附2h，过滤，收集不溶物。

3)结晶、干燥：

将上述不溶物采用135kg二氯甲烷热溶解，过滤，滤液用预先备好的无水硫酸铜柱吸附，将吸附流出液浓缩至3kg，加入正丁醇至溶液微浑浊，10-15℃保温3h以上进行析晶，离心收集结晶，干燥。

4)过滤、收集：

将上述结晶再用1.8kg石油醚常温搅拌溶解1-2h，过滤，收集沉淀，干燥得羽扇豆醇841g，纯度98.5％。

实施例4

一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，包括以下步骤：

1)酶解：

取沙梨木原料100kg粉碎，浸泡于320kg水中，加入60g纤维素酶45℃酶解80min，过滤，得到酶解料。

2)提取：

将上述酶解料采用1100kg 70％乙醇回流提取，提取液减压浓缩至醇度35％，加入20kg HB-F活性炭和12kg活性白土在60℃吸附2h，过滤，收集不溶物。

3)结晶、干燥：

将上述不溶物采用130kg乙酸乙酯热溶解，过滤，滤液用预先备好的无水硫酸铜柱吸附，将吸附流出液浓缩至2.8kg，加入异丙醇至溶液微浑浊，10-15℃保温3h以上进行析晶，离心收集结晶，干燥。

4)过滤、收集：

将上述结晶再用1kg环己烷常温搅拌溶解1-2h，过滤，收集沉淀，干燥得羽扇豆醇840g，纯度98.5％。

实施例5

一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，包括以下步骤：

1)酶解：

取沙梨木原料100kg粉碎，浸泡于350kg水中，加入90g半纤维素酶50℃酶解70min，过滤，得到酶解料。

2)提取：

将上述酶解料采用900kg 75％乙醇回流提取，提取液减压浓缩至醇度35％，加入28kg 320活性炭和14kg活性白土在70℃吸附1h，过滤，收集不溶物。

3)结晶、干燥：

将上述不溶物采用189kg二氯甲烷热溶解，过滤，滤液用预先备好的氯化钠柱吸附，将吸附流出液浓缩至4.2kg，加入戊醇至溶液微浑浊，10-15℃保温3h以上进行析晶，离心收集结晶，干燥。

4)过滤、收集：

将上述结晶再用1.3kg石油醚常温搅拌溶解1-2h，过滤，收集沉淀，干燥得羽扇豆醇839g，纯度98.2％。

实施例6

一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，包括以下步骤：

1)酶解：

取沙梨木原料100kg粉碎，浸泡于450kg水中，加入70g纤维素酶45℃酶解80min，过滤，得到酶解料。

2)提取：

将上述酶解料采用1200kg 75％乙醇回流提取，提取液减压浓缩至醇度35％，加入26kg 320活性炭和15kg活性白土在70℃吸附2h，过滤，收集不溶物。

3)结晶、干燥：

将上述不溶物采用200kg二氯甲烷热溶解，过滤，滤液用预先备好的氯化钠柱吸附，将吸附流出液浓缩至4.5kg，加入异丙醇至溶液微浑浊，10-15℃保温3h以上进行析晶，离心收集结晶，干燥。

4)过滤、收集：

将上述结晶再用2kg正己烷常温搅拌溶解1-2h，过滤，收集沉淀，干燥得羽扇豆醇848g，纯度99.2％。

Claims

1.一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)酶解：将沙梨木原料粉碎，浸泡于质量3-5倍量水中，加酶试剂酶解，过滤，得到酶解料；

所述酶试剂为纤维素酶或半纤维素酶中的任一种，添加量为原料质量的0.05-0.1％，酶解温度40-50℃，酶解时间60-90min；

2)提取：将上述酶解料，在原料质量8-15倍量的70-80％有机试剂中回流提取，提取液浓缩至体积浓度30-40％，加入原料质量20-30％活性炭和10-15％活性白土，在60-80℃吸附1-3h，过滤，收集不溶物；

所述有机试剂为乙醇、甲醇或丙酮；

所述活性炭型号为767、320、303、HB-F中的一种或多种的组合；

所述有机试剂为正己烷、环己烷或石油醚中的任一种。

2.根据权利要求1所述的一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，其特征在于：

步骤2)中，活性炭和活性白土在70℃吸附1-3h。

3.根据权利要求2所述的一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，其特征在于：

步骤2)中，活性炭和活性白土在70℃吸附1h。

4.根据权利要求1所述的一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，其特征在于：

步骤2)中，所述有机试剂为乙醇。

5.根据权利要求1所述的一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，其特征在于：

步骤3)中，滤液经氯化钠柱吸附。

6.根据权利要求1所述的一种从沙梨木中分离纯化羽扇豆醇的方法，其特征在于：

步骤3)中，搅拌加入异丙醇至溶液微浑浊。