CN109069606A - 干扰素β抗体及其用途 - Google Patents

干扰素β抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN109069606A
CN109069606A CN201780025961.XA CN201780025961A CN109069606A CN 109069606 A CN109069606 A CN 109069606A CN 201780025961 A CN201780025961 A CN 201780025961A CN 109069606 A CN109069606 A CN 109069606A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cdr
antibody
seq
antigen
ifn
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201780025961.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN109069606B (zh
Inventor
S·V·古拉
C·华德
J·E·布尔曼
J·C·阿尔玛格罗
S·R·蔻丹嘉提尔
S·A·格林伯格
E·R·拉瓦列
E·M·本内特
L·莫斯雅克
J·P·哈尔
A·J·蔻勒
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Brigham and Womens Hospital Inc
Pfizer Inc
Original Assignee
Brigham and Womens Hospital Inc
Pfizer Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Brigham and Womens Hospital Inc, Pfizer Inc filed Critical Brigham and Womens Hospital Inc
Publication of CN109069606A publication Critical patent/CN109069606A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109069606B publication Critical patent/CN109069606B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/249—Interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及特异性结合至干扰素β(IFNβ)的抗体或其抗原结合片段。这些抗体或其抗原结合片段可用于各种治疗或诊断目的。

Description

干扰素β抗体及其用途
序列表
本申请含有序列表，该序列表已经以ASCII形式电子提交，并通过引用的方式全部并入本文中。在2017年4月20日创建的所述ASCII拷贝的名称为PCFC-1000-WO1_SL.txt，大小为102,679字节。
联合研究声明的各方
本发明是由以下所列的联合研究协议的各方作出的，或者代表以下所列的联合研究协议的各方作出的。所述联合研究协议在作出本发明之时或者此前生效，由于在所述联合研究协议的范围内作出的行为，完成了本发明。联合研究协议的各方为美国医疗联盟(PARTNERS HEALTHCARE)和辉瑞大药厂(PFIZER INC)。
背景技术
细胞因子的干扰素(IFN)家族是最初因其保护细胞不受病毒感染而发现，但现知晓进化上保守的细胞因子的此家族可引起广泛反应。该家族是由I型、II型及III型IFN子家族组成，I型IFN是所有细胞因子家族中最多样的。所述人类I型IFN是由针对IFNα亚型的13个基因，加针对IFNβ、IFNω、IFNκ及IFNε中的各者的单一基因进行编码。IFNβ及数个IFNα同种型是I型IFN的最佳研究。大多数IFNα蛋白质与共有IFNα序列共享78至98％同一性，及IFNβ与共有IFNα序列共享～35％同一性。IFNβ是经天然醣化，然而IFNα同种型是通常仅经微弱醣化。所有I型IFN结合至细胞表面II类别细胞因子受体IFNAR(其是由两条链IFNAR1及IFNAR2组成)。IFNα具有2至3小时的血清半衰期，但IFNβ是疏水性的且在血清中几乎检测不到，这些特征是与IFNα是全身有效，然而IFNβ以自分泌/旁分泌方式于局部位点起作用的见解一致。
IFN产生可通过暴露于与微生物衍生的病原体相关联的分子模式(包括微生物核酸、脂质、蛋白质及脂蛋白)加以刺激。然而，越来越多的证据表明IFN产生亦可通过在疾病过程期间释放的内源性自组分加以刺激，这在系统性红斑狼疮(SLE)及诸如皮肌炎(dermatomyositis，DM)的其他风湿性疾病的情况中是特别相关的。I型IFN表达的病理学过度产生通常以SLE为特征，及IFNα在来自有限数量的SLE患者的血清中是可检测的。
如由使用抗-IFNAR抗体阿尼法鲁单抗(anifrolimab)的临床结果证实，越来越多的证据亦指出干扰素调节基因(IRG)表达于SLE疾病活性/严重性的表现形式中的重要性。在安慰剂对照的2期研究中，阿尼法鲁单抗跨多个临床终点减小疾病严重性，而在该研究中所测试的两个剂量下同时抑制约90％的IRG标签。
除抗-IFN受体抗体阿尼法鲁单抗(anifrolimab)(抗-IFNAR)外，数个抗-IFNα抗体出于临床研究之下，如斯法利木单抗(sifalimumab)、罗塔利珠单抗(rontalizumab)及AGS-009。IFNα已成为这些努力的焦点，因为大量证据(包括遗传学、免疫学、血清学及临床研究)已将IFNα与自体免疫失调症联系起来。然而，基于迄今为止的科学证据，预期IFNβ将发挥IFNα在自体免疫失调症中的类似作用。迄今为止，未报道特异性靶向IFNβ(而非IFNα)的治疗抗体。因此，仍需特异性结合IFNβ的抗体以用于各种治疗或诊断目的。
发明内容
本发明提供结合干扰素β(IFNβ)的抗体及其抗原结合片段，并且本发明提供其用途及相关方法。
基于本文所提供的揭示内容，本领域技术人员将认识到或可确定使用不超过寻常的实验法、本文描述的本发明的特定实施方案的许多等效物。这些等效物意欲涵盖于下列实施方式(embodiment，E)中。
E1.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类干扰素β(IFNβ)。
E2.如实施方式1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段基本上不结合人类IFNα。
E3.如实施方式1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以比其针对人类IFNα的结合亲和力(KD)值小至少100倍、至少200倍、至少300倍、至少400倍、至少500倍、至少600倍、至少700倍、至少800倍、至少900倍或至少1000倍的KD值结合人类IFNβ。
E4.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ中的抗原决定基，其中所述抗原决定基包含来自根据SEQ ID NO:41的编号的氨基酸残基85至100的一个或更多个残基。
E5.如实施方式4的经分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原决定基包含选自由以下组成的组的一个或更多个残基：根据SEQ ID NO:41的编号的Ala89、Tyr 92、His93及His97。
E6.如实施方式4或5的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原决定基包含根据SEQID NO:41的编号的Ala89、Tyr 92、His93及His97。
E7.如实施方式4至6中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原决定基进一步包含选自由以下组成的组的一个或更多个残基：根据SEQ ID NO:41的编号的Phe8、Leu9、Ser12、Gln16、Asn86、Asn90、Asp96及Thr100。
E8.如实施方式4至7中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原决定基进一步包含根据SEQ ID NO:41的编号的残基Phe8、Leu9、Ser12、Gln16、Asn86、Asn90、Asp96及Thr100。
E9.如实施方式4至8中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原决定基进一步包含选自由以下组成的组的一个或更多个残基：根据SEQ ID NO:41的编号的Leu5、Leu6、Ser13、Phe15及Thr82。
E10.如实施方式1至9中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段基本上不结合小鼠IFNβ。
E11.如实施方式1至9中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以比其针对小鼠IFNβ的结合亲和力(KD)值小至少100倍、至少200倍、至少300倍、至少400倍、至少500倍、至少600倍、至少700倍、至少800倍、至少900倍或至少1000倍的KD值结合人类IFNβ。
E12.如实施方式1至11中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段基本上不结合大鼠IFNβ。
E13.如实施方式1至11中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以比其针对大鼠IFNβ的结合亲和力(KD)值小至少100倍、至少200倍、至少300倍、至少400倍、至少500倍、至少600倍、至少700倍、至少800倍、至少900倍或至少1000倍的KD值结合人类IFNβ。
E14.如实施方式1至13中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以比其针对兔IFNβ的结合亲和力(KD)值小至少50倍、至少100倍、至少150倍或至少200倍的KD值结合人类IFNβ。
E15.如实施方式1至14中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段也特异性结合至食蟹猴IFNβ。
E16.如实施方式3、11、13及14中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述KD值是通过表面等离子共振(SPR)，任选地使用Biacore T200仪器进行测量。
E17.如实施方式1至16中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括以下的重链可变区(VH)：
(a)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的VH互补决定区一(CDR-H1)，
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VH互补决定区二(CDR-H2)；及
(c)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VH互补决定区三(CDR-H3)。
E18.如实施方式1至17中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:28的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列。
E19.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，其包含包括以下的VH：
(a)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H1，
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-H2；及
(c)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-H3。
E20.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，其包含包括选自由以下组成的组的一个或更多个互补位残基的VH：根据Kabat编号的CDR-H1中的Trp33、CDR-H2中的Tyr56、CDR-H2中的Tyr58及CDR-H3中的Tyr97。
E21.如实施方式20的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH进一步包含选自由以下组成的组的一个或更多个互补位残基：根据Kabat编号的CDR-H2中的Asp54、CDR-H2中的Gln61、CDR-H3中的Gly98及CDR-H3中的Leu100。
E22.如实施方式1至21中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含衍生自人类生殖系VH3、VH1或VH5框架序列的VH框架。
E23.如实施方式1至21中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含衍生自人类生殖系IGHV3-7、IGHV3-23或IGHV1-69框架序列的VH框架序列。
E24.如实施方式1至21中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含衍生自人类生殖系DP10、DP-88、DP-25、DP-73、IGHV5-10-1*01、IGHV5-10-1*04、DP-14、DP-75、DP15、DP-8、DP-7或IGHV7-4-1*02框架序列，优选地DP-88、DP-25、DP-73、IGHV5-10-1*01或IGFV-10-1*04框架序列的VH框架序列。
E25.如实施方式1至24中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括以下的VH：
(a)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H1；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-H2；及包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-H3；及
(b)包含与人类生殖系DP10的框架序列至少73％、至少75％、至少79％、至少89％、至少90％、至少92％、至少93％或至少99％相同的序列的VH框架。
E26.如实施方式25的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH框架相较于人类生殖系DP10的框架序列，于下列位置(根据Kabat编号)进一步包含四个或更少个、三个或更少个、或两个或更少个氨基酸差异：(A)H2、H47、H48、H49、H67、H69、H71、H73、H93及H94；(B)H37、H39、H45、H47、H91及H93；及(C)H24、H71及H94。
E27.如实施方式1至26中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含衍生自人类生殖系DP10的VH框架序列。
E28.如实施方式1至21中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含人类VH生殖系共有框架序列。
E29.如实施方式1至28中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含与SEQ ID NO:28至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的VH序列。
E30.如实施方式1至29中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括以下的轻链可变区(VL)：
(a)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL互补决定区一(CDR-L1)，
(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL互补决定区二(CDR-L2)；及
(c)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的VL互补决定区三(CDR-L3)。
E31.如实施方式1至30中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:1的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。
E32.如实施方式1至29中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括选自由以下组成的组的一个或更多个互补位残基的VL：根据Kabat编号的CDR-L1中的Tyr32、CDR-L3中的Ile92及CDR-L3中的Leu94。
E33.如实施方式32的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL进一步包含选自由以下组成的组的一个或更多个互补位残基：根据Kabat编号的CDR-L1中的Gln27、CDR-L1中的Asp28、CDR-L1中的Ile29、CDR-L1中的Gly30及CDR-L3中的Ile93。
E34.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，其包含SEQID NO:28的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO:1的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。
E35.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，其包含：
(i)包含以下的VH：
(a)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H1，
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-H2；及
(c)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-H3；
及(ii)包含以下的VL：
(a)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L1，
(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-L2；及
(c)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-L3。
E36.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，其包含包括选自由以下组成的组的一个或更多个互补位残基的VL：根据Kabat编号的CDR-L1中的Tyr32、CDR-L3中的Ile92及CDR-L3中的Leu94。
E37.如实施方式36的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL进一步包含选自由以下组成的组的一个或更多个互补位残基：根据Kabat编号的CDR-L1中的Gln27、CDR-L1中的Asp28、CDR-L1中的Ile29、CDR-L1中的Gly30及CDR-L3中的Ile93。
E38.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，其包含(根据Kabat编号)：
(i)包含以下的VH：
(a)包含Trp33及相较于SEQ ID NO:37的三个或更少个氨基酸差异的CDR-H1，
(b)包含Asp54、Tyr56、Tyr58及Gln61及相较于SEQ ID NO:38的三个或更少个氨基酸差异的CDR-H2；及
(c)包含Tyr97、Gly98及Leu100；及相较于SEQ ID NO:39的三个或更少个氨基酸差异的CDR-H3；及
(ii)包含以下的VL：
(a)包含Gln27、Asp28、Ile29、Gly30、Tyr32；及相较于SEQ ID NO:34的三个或更少个氨基酸差异的CDR-L1，
(b)包含包括相较于SEQ ID NO:35的三个或更少个氨基酸差异的序列的CDR-L2；及
(c)包含Ile92、Ile93及Leu94；及相较于SEQ ID NO:36的三个或更少个氨基酸差异的CDR-L3。
E39.如实施方式38的抗体或其抗原结合片段，其中CDR-H1、CDR-H2、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的所述氨基酸差异是人类生殖系取代，其中非人类CDR残基是经相应的人类生殖系残基置换。
E40.如实施方式1至39中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含衍生自人类生殖系VK或Vλ框架序列的VL框架。
E41.如实施方式1至39中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含衍生自人类生殖系IGKV1-39或IGKV3-20框架序列的VL框架。
E42.如实施方式1至39中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含衍生自人类生殖系DPK9、DPK5、DPK4、DPK1、IGKV1-5*01、DPK24、DPK21、DPK15、IGKV1-13*02、IGKV1-17*01、DPK8、IGKV3-11*01，或DPK22框架序列，优选地DPK5、DPK4、DPK1、IGKV1-5*01、DPK24、DPK21或DPK15框架序列的VL框架。
E43.如实施方式1至42中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括以下的VL：
(a)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L1；包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-L2；及包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-L3；及
(b)包含与人类生殖系DPK9的框架序列至少66％、至少74％、至少76％、至少80％、至少96％、至少97％或至少99％相同的序列的VL框架。
E44.如实施方式43的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL框架于下列位置(根据Kabat编号)进一步包含相较于人类生殖系DPK9的框架序列的一个氨基酸差异或无氨基酸差异：(A)L2、L4、L35、L36、L46、L47、L48、L49、L64、L66、L68、L69及L71；(B)L36、L38、L44、L46及L87；及(C)L2、L48、L64及L71。
E45.如实施方式1至44中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含衍生自人类生殖系DPK9的VH框架序列。
E46.如实施方式1至39中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含人类VL生殖系共有框架序列。
E47.如实施方式1至46中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含与SEQ ID NO:1至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的VL序列。
E48.如实施方式1至47中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含与SEQ ID NO:29至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的重链恒定区(CH)序列。
E49.如实施方式1至48中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含与SEQ ID NO:30至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的轻链恒定区(CL)序列。
E50.如实施方式1至49中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含Fc域。
E51.如实施方式50的抗体或其抗原结合片段，其中所述Fc域来自IgA，诸如IgA1或IgA2。
E52.如实施方式50的抗体或其抗原结合片段，其中所述Fc域是来自IgD。
E53.如实施方式50的抗体或其抗原结合片段，其中所述Fc域是来自IgE。
E54.如实施方式50的抗体或其抗原结合片段，其中所述Fc域是来自IgM。
E55.如实施方式50的抗体或其抗原结合片段，其中所述Fc域是来自IgG。
E56.如实施方式55的抗体或其抗原结合片段，其中所述IgG是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
E57.如实施方式1至56中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括与SEQ IDNO:33至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列的重链。
E58.如实施方式1至57中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括与SEQ IDNO:32至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列的轻链。
E59.如实施方式1至58中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含通过于ATCC保藏且具有ATCC登录号PTA-122727的质粒中的插入物编码的VH序列。
E60.如实施方式1至59中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含通过于ATCC保藏且具有ATCC登录号PTA-122726的质粒中的插入物编码的VL序列。
E61.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，其包含(a)SEQ ID NO:28的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及(b)
i)SEQ ID NO:2的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
ii)SEQ ID NO:3的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
iii)SEQ ID NO:4的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
iv)SEQ ID NO:5的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
v)SEQ ID NO:6的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
vi)SEQ ID NO:7的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
vii)SEQ ID NO:8的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
viii)SEQ ID NO:9的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
ix)SEQ ID NO:10的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
x)SEQ ID NO:11的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xi)SEQ ID NO:12的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xii)SEQ ID NO:13的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xiii)SEQ ID NO:14的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xiv)SEQ ID NO:15的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xv)SEQ ID NO:16的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xvi)SEQ ID NO:17的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xvii)SEQ ID NO:18的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xviii)SEQ ID NO:19的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xix)SEQ ID NO:20的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xx)SEQ ID NO:21的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xxi)SEQ ID NO:22的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xxii)SEQ ID NO:23的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xxiii)SEQ ID NO:24的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xxiv)SEQ ID NO:25的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xxv)SEQ ID NO:26的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或
xxvi)SEQ ID NO:27的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。
E62.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，其包含包括SEQ ID NO:28的氨基酸序列的VH，及包含SEQ ID NO.2至27中任何一者的氨基酸序列的VL。
E63.如实施方式61或62的抗体或其抗原结合片段，其包含Fc域。
E64.如实施方式63的抗体或其抗原结合片段，其中所述Fc域是来自IgA(例如，IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgM或IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
E65.如实施方式61至64中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括SEQ IDNO:29的氨基酸序列的CH。
E66.如实施方式61至65中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括SEQ IDNO:30的氨基酸序列的CL。
E67.一种抗体或其抗原结合片段，其与如实施方式1至66中任一项的抗体或其抗原结合片段竞争特异性结合至人类IFNβ。
E68.一种抗体或其抗原结合片段，其与CTI-AF1或CTI-AF1的抗原结合片段竞争特异性结合至人类IFNβ。
E69.一种抗体或其抗原结合片段，其与选自由以下组成的组的一个或更多个抗体及其抗原结合片段竞争特异性结合至人类IFNβ：CTI-AF2、CTI-AF3、CTI-AF4、CTI-AF5、CTI-AF6、CTI-AF7、CTI-AF8、CTI-AF9、CTI-AF10、CTI-AF11、CTI-AF12、CTI-AF13、CTI-AF14、CTI-AF15、CTI-AF16、CTI-AF17、CTI-AF18、CTI-AF19、CTI-AF20、CTI-AF21、CTI-AF22、CTI-AF23、CTI-AF24、CTI-AF25、CTI-AF26、CTI-AF27。
E70.一种抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，其中所述抗体或其抗原结合片段基本上结合与CTI-AF1或CTI-AF1的抗原结合片段相同的抗原决定基。
E71.一种抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，其中所述抗体或其抗原结合片段基本上结合与选自由以下组成的组的一个或更多个抗体或其抗原结合片段相同的抗原决定基：CTI-AF2、CTI-AF3、CTI-AF4、CTI-AF5、CTI-AF6、CTI-AF7、CTI-AF8、CTI-AF9、CTI-AF10、CTI-AF11、CTI-AF12、CTI-AF13、CTI-AF14、CTI-AF15、CTI-AF16、CTI-AF17、CTI-AF18、CTI-AF19、CTI-AF20、CTI-AF21、CTI-AF22、CTI-AF23、CTI-AF24、CTI-AF25、CTI-AF26及CTI-AF27。
E72.如实施方式1至71中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是Fc融合蛋白、单抗体(monobody)、巨型抗体(maxibody)、双功能抗体、scFab、scFv、肽抗体或前述中任何一者的抗原结合片段。
E73.如实施方式1至72中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以不大于约5×10-9M的结合亲和力(KD)值结合人类IFNβ。
E74.如实施方式1至73中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以不大于约1×10-9M的结合亲和力(KD)值结合人类IFNβ。
E75.如实施方式1至74中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以自约1×10-9M至约1×10-14M的结合亲和力(KD)值结合人类IFNβ。
E76.如实施方式1至75中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段(a)抑制IFNβ及IFNAR的结合；(b)减少IFNβ依赖性基因的表达水平；及/或(c)抑制由IFNβ诱导的STAT1或STAT2磷酸化。
E77.如实施方式76的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以约5×10-9M或以下的IC50值抑制IFNβ和IFNAR的结合。
E78.如实施方式76的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以自约1×10-9M至约1×10-14M的IC50值抑制IFNβ和IFNAR的结合。
E79.一种经分离的核酸分子，其编码如实施方式1至78中任一项的抗体或其抗原结合片段。
E80.一种经分离的核酸，其包含SEQ ID NO:166的核苷酸序列。
E81.一种经分离的核酸，其包含SEQ ID NO:167的核苷酸序列。
E82.一种经分离的核酸，其包含于ATCC保藏且具有登录号PTA-122727的质粒的插入物的核苷酸序列。
E83.一种经分离的核酸，其包含于ATCC保藏且具有登录号PTA-122726的质粒的插入物的核苷酸序列。
E84.一种载体，其包含如实施方式79至83中任一项的核酸分子。
E85.一种宿主细胞，其包含如实施方式79至83中任一项的核酸分子或如实施方式84的载体。
E86.如实施方式85的宿主细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
E87.如实施方式85或83的宿主细胞，其中所述宿主细胞是CHO细胞、HEK-293细胞或Sp2.0细胞。
E88.一种产生抗体或其抗原结合片段的方法，其包括培养如实施方式85至87中任一项的宿主细胞，在其中所述抗体或其抗原结合片段被所述宿主细胞产生的条件下进行培养。
E89.如实施方式88的方法，其进一步包括分离抗体或其抗原结合片段。
E90.一种抗体或其抗原结合片段，其是通过如实施方式88或89的方法获得。
E91.一种药物组合物，其包含如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段及药学上可接受的载体。
E92.一种减小IFNβ的活性的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物。
E93.一种治疗风湿性疾病的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物。
E94.一种治疗系统性红斑狼疮(SLE)的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物。
E95.一种治疗皮肌炎(DM)的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物。
E96.一种治疗干扰素疾病(interferonopathy)的方法，其包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物。
E97.如实施方式92至96中任一项的方法，其中所述受试者是人类。
E98.如实施方式92至97中任一项的方法，其包括静脉施用所述抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
E99.如实施方式92至98中任一项的方法，其包括皮下施用所述抗体或其抗原结合片段或药物组合物。
E100.如实施方式92至99中任一项的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段或药物组合物是按以下方式施用：一周两次、一周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每十周一次、一个月两次、一个月一次、每两个月一次或每三个月一次。
E101.如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物，其用作药物。
E102.如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物，其用于减小受试者中IFNβ的活性。
E103.如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物，其用于治疗受试者的风湿性疾病。
E104.如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物，其用于治疗受试者的SLE。
E105.如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物，其用于治疗受试者的DM。
E106.如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物，其用于治疗受试者的干扰素疾病。
E107.如实施方式101至106中任一项的抗体或抗原结合片段或药物组合物，其中所述受试者是人类。
E108.一种如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物的用途，其用于减小受试者中IFNβ的活性。
E109.一种如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物的用途，其用于制造以减小受试者中IFNβ的活性的药物。
E110.一种如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物的用途，其用于治疗受试者的风湿性疾病。
E111.一种如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物的用途，其用于制造以治疗受试者的风湿性疾病的药物。
E112.一种如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物的用途，其用于治疗受试者的SLE。
E113.一种如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物的用途，其用于制造以治疗受试者的SLE的药物。
E114.一种如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物的用途，其用于治疗受试者的DM。
E115.一种如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物的用途，其用于制造以治疗受试者的DM的药物。
E116.一种如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物的用途，其用于治疗受试者的干扰素疾病。
E117.一种如实施方式1至78及90中任一项的抗体或其抗原结合片段或如实施方式91的药物组合物的用途，其用于制造以治疗受试者的干扰素疾病的药物。
E118.如实施方式108至117中任一项的用途，其中所述受试者是人类。
附图简述
图1显示IFNβ抗体于MOD1缓冲剂中的粘度。
图2是抗体CTI-AF1的差示扫描量热法(DSC)图。
图3是作为保持低pH的结果，CTI-AF1聚集的粒径排阻HPLC(SE-HPLC)分析。
图4A至4D显示来自稳定性研究的时间点的SE-HPLC分析。
图5A至5D显示证实CTI-AF1是在储存于40℃下时经时稳定的且不失去中和IFNβ的能力的图。CTI-AF1是储存于各种温度及时间周期下，然后在IFN依赖性萤光素酶报导子(reporter)分析中评估抗体中和IFNβ的能力。在40℃下储存1周(图5A，T0等于在40℃下无时间)的材料无中和活性的损失；在40℃下储存两周或三周对活性无影响(图5C)。在转染CHO细胞而非HEK293细胞之后产生或含有自苯丙氨酸至脯氨酸的氨基酸44的突变的材料对中和无影响(图5B)。最终，在40℃下储存四周或在室温下储存五周的材料(图5D)对CTI-AF1中和由IFNβ诱导的活性的能力无影响。
图6绘示显示可使用ForteBio Octet通过生物层干涉术(BLI)阻断IFNβ结合至IFNAR2以测量分子相互作用的小鼠抗-人类IFNβ杂交瘤的识别的数据。首先，小鼠抗-人类IFNβAb是自经调整的培养基捕获于蛋白G传感器上；接着，人类IFNβ是经结合(通过+hIFN-β箭头指示)，然后Ab:IFNβ复合物是暴露于人类受体IFNAR2的高亲和力链(通过+IFNAR2箭头指示)。非阻断抗体显示指示额外结合的曲线中的向上凸起(如通过非中和剂箭头指示，底部)，然而中和抗体证实相对扁平的曲线(如通过中和剂箭头指示，顶部)。数个小鼠杂交瘤证实中和IFNAR2对IFNβ的结合的能力及是经选择以供进一步表征及最终人源化。
图7绘示显示通过表面等离子共振(SPR)测定CTI-AF1对人类IFNβ的KD的数据。CTI-AF1是捕获于CM5传感器芯片上，然后于2.5nM IFNβ处开始，经6点、2倍系列滴定浓度的重组人类IFNβ是于CTI-AF1上流动。样本是一式两份运行及IFNβ的浓度是指示于该图的右侧。就IFNβ的各浓度而言，灰色细线绘示各重复样本中IFNβ的结合；较粗的灰线表示通过分析程序计算的平均拟合曲线。CTI-AF1对人类IFNβ的KD是经测定为约36pM。
图8A至8B证实CTI-AF1是多个分析中由IFNβ诱导的信号传导的有效中和剂。图8A显示经IFN刺激的反应组件(ISRE)萤光素酶报道构建体稳定转导的HEK293细胞是在IFNβ及滴定量的CTI-AF1的存在下经刺激。可见发光的剂量依赖性抑制，其指示IFNβ已经中和。IFNβ对干扰素受体(IFNAR)的结合已知于U937细胞中诱导STAT1蛋白质的磷酸化。图8B显示STAT1磷酸化分析。U937细胞是暴露于经滴定量的CTI-AF1预培养的IFNβ，持续15分钟，然后评价STAT1磷酸化程度。数据显示存在STAT1磷酸化的剂量依赖性抑制，其指示IFNβ依赖性信号已通过CTI-AF1中和。
图9证实在原发性人皮肤成纤维细胞(HDF)中CTI-AF1中和IFN刺激的基因Mx1(MxA)的表达。存在许多已知经表达以响应于IFN刺激的基因(IFN刺激的基因(ISG))。Mx1(MxA)的特征为I型IFN ISG。经重组IFNβ刺激后的Mx1(MxA)基因表达是于原发性HDF中在指示量的CTI-AF1的存在或缺乏的情况下经评估。刺激细胞5小时，然后分离RNA。RNA是转化为cDNA及进行定量PCR(qPCR)以测定Mx1(MxA)表达的程度及B2M是用作对照。数据是呈现为诱导倍率；可见Mx1(MxA)基因表达的剂量依赖性抑制，其指示IFNβ信号传导的中和。
图10A至10B证实CTI-AF1特异性中和IFNβ。U937细胞是在IFNβ的中和抗体(CTI-AF1)或IFNα的中和抗体(斯法利木单抗，SIF)的存在下经IFNβ(图10A)或IFNα(图10B)刺激15分钟。CTI-AF1抑制IFNβ依赖性STAT1磷酸化(A图)，但对由IFNα诱导的STAT1磷酸化(B图)无影响。作为对照，中和抗-IFNα(SIF)是结合IFNα刺激一起使用以证实可抑制IFNα依赖性STAT1磷酸化。
图11表明CTI-AF1是由原发性人皮肤成纤维细胞(HDF)分泌的内源性IFNβ的有效抑制剂。HDF是经聚肌胞苷酸(polyinosinic:polycytidylic acid，聚I:C)刺激24小时以在滴定量的CTI-AF1的存在下诱导IFNβ的表达，然后，如图9中所述，评价Mx1(MxA)基因表达。随递增量的CTI-AF1可见Mx1(MxA)基因表达的剂量依赖性抑制，此证实该抗体中和内源性产生的IFNβ。
图12A至12D绘示在2mg/kg IV Q4W下人类中的CTI-AF1血清PK及IFNβ皮肤覆盖曲线。曲线是针对10(图12A及12C)及100(图12B及12D)的IFNβ皮肤:血浆比率显示。注意，CTI-AF1血清PK不受IFNβ皮肤:血浆比率及IFNβ周转半衰期影响。C及D图中的虚线表示皮肤中的95％IFNβ覆盖。
图13A至13D显示针对10(图13A及13C)及100(图13B及13D)的IFNβ皮肤:血浆比率的曲线。注意，血清PK不受IFNβ皮肤:血浆比率及IFNβ周转半衰期影响。C及D图中的虚线表示皮肤中的95％IFNβ覆盖。
图14显示来自毒性研究的食蟹猴中CTI-AF1的平均血清浓度。
图15A显示人类IFNβ(SEQ ID NO:41)的序列及二级结构。图15B显示人类(SEQ IDNO:41)、食蟹猴(SEQ ID NO:44)、小鼠(SEQ ID NO:42)、大鼠(SEQ ID NO:43)及兔(SEQ IDNO:45)IFNβ序列的序列比对。
图16A显示皮肤皮肌炎疾病区与严重指数(CDASI)活性及血液10-基因标签评分之间的关系。CDASI活性评分≥12是与提高的10个基因血液IRG“标签”相关(斯皮尔曼等级相关r＝0.61；p<0.0001)。图16B显示随CDASI截断值12可见的强阈值效应，CDASI截断值12是与IRG标签截断值相差3倍相关(p＝0.0004，曼-惠特尼测试)。
图17显示来自以下的血清样本：25个正常(未受影响)供体、19个具有<12的CDASI的DM供体、及38个具有≥12的CDASI的DM供体，所述血清样本是使用高灵敏度ELISA试剂盒(PBL分析科学)进行分析(威尔科克森测试“未受影响相比于CDASI<12”，p＝0.39；威尔科克森测试“未受影响相比于CDASI≥12”，p<0.0001)加以分析IFNβ蛋白的存在。
图18A至18B显示在收集自5个DM患者及通过常用I型IFN TaqMan低密度数组(TLDA)(96个分析数组)评价的配对皮肤活检(即，未受影响及受影响的组织)中，IFNα或IFNβmRNA(图18A)或IRG标签于未受影响相比于受影响的皮肤样本(图18B)中的程度。各数据点表示每个样本中2个独立qPCR反应的平均值；平均值±SEM。A图：符号秩检验p-值“未受影响的IFNβ相比于受影响的IFNβ”＝0.06；符号秩检验p-值“未受影响的IFNα相比于受影响的IFNα”＝1.0。B图：符号秩检验p-值“未受影响相比于受影响”＝0.002。
图19是显示杂合IFNα/β蛋白的剂量依赖性CTI-AF1抑制的图。由IFN诱导的STAT1磷酸化的缺乏(CID1281)或减小(CID1280)的抑制指示IFNα序列的插入已破坏IFNβ内的由CTI-AF1识别的抗原决定基。
图20A至20B显示食蟹猴-IFNβ的共晶体结构及CTI-AF1的Fab。结合抗原决定基残基以灰色显示于图20A中，结合互补位残基以灰色显示于图20B中。
发明详述
1.抗-IFNβ抗体
A.干扰素β(IFNβ)
干扰素β(IFNβ)(亦称为成纤维细胞IFN)是分子的I型干扰素家族的醣化的、分泌的及约22kDa的成员。人类IFNβ前体的序列显示为SEQ ID NO:40。所述前体的信号肽(SEQID NO:40的残基1至21)是经裂解以产生成熟IFNβ(SEQ ID NO:41)，其分别与小鼠及大鼠蛋白质共享47％及46％氨基酸序列同一性。来自各种物种的IFNβ的比对是显示于图15B中。该信号肽于下文序列中是经加下划线的。
MTNKCLLQIA LLLCFSTTAL SMSYNLLGFL QRSSNFQCQK LLWQLNGRLE YCLKDRMNFDIPEEIKQLQQ FQKEDAALTI YEMLQNIFAI FRQDSSSTGW NETIVENLLA NVYHQINHLK TVLEEKLEKEDFTRGKLMSS LHLKRYYGRI LHYLKAKEYS HCAWTIVRVE ILRNFYFINR LTGYLRN(人类IFNβ前体，SEQ ID NO:40)
IFNβ的结构含有5个α-螺旋，其命名为A(YNLLGFLQRSSNFQCQKLL；SEQ ID NO:153或SEQ ID NO:41的残基3至21)、B(KEDAALTIYEMLQNIFAIF；SEQ ID NO:154或SEQ ID NO:41的残基52至70)、C(ETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKL；SEQ ID NO:155或SEQ ID NO:41的残基81至106)、D(SLHLKRYYGRILHYLKA；SEQ ID NO:156或SEQ ID NO:41的残基119至135)及E(HCAWTIVRVEILRNFYFINRLT；SEQ ID NO:157或SEQ ID NO:41的残基140至161)。所述五个α-螺旋是由命名为AB、BC、CD及DE环的具有2至28残基的环互连(图15A)。已报道A螺旋、AB环及E螺旋涉及IFNβ对其受体(IFNAR)的结合。
B.抗-IFNβ抗体
抗-IFNAR抗体(例如，阿尼法鲁单抗)的一个潜在缺点是IFNα及IFNβ细胞因子两者均结合至IFNAR。尽管此两种类型的IFN细胞因子引起相似生物活性至相似程度，但此两种类型的IFN在效力及细胞类型具体活性方面仍存在显著差异。例如，IFNβ相较于IFNα在一些细胞类型(诸如胚胎性癌、黑色素瘤及黑色素细胞)中引起显著更高的抗增殖反应。亦已观察到IFNβ于多发性硬化症及某些癌症的治疗中的较高效力。然而，阻断IFNAR的活性不选择性调节IFNβ的活性。显著地，IFNα是响应于病毒感染的重要细胞因子，使得阻断其活性可具有非所需的效应。因此，特异性结合IFNβ而非IFNα的抗体将实现针对主要由IFNβ驱动的疾病的治疗的显著未满足的需求。
在一个方面，本发明提供经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ。本发明的例示性抗体的序列显示于表11中。
如实施例中显示，在某些实施方式中，本发明的抗体抑制IFNβ对其受体的结合，因此称为“中和”抗体。不希望受任何特定理论的束缚，数据指示抗体或其抗原结合片段通过针对来自IFNAR的相同或重叠残基竞争或通过产生空间位阻以阻断或部分阻断IFNβ的受体结合位点。
例如，据信来自IFNβ的螺旋A、AB环及螺旋E的残基涉及IFNβ对其受体的结合。因此，在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段结合抗原决定基，其包含选自由以下组成的组的一个或更多个残基：根据SEQ ID NO:41的编号的3-21(螺旋A)、22-51(AB环)；及140-161(螺旋E)。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段在基本上相同的分析条件下以比其针对人类IFNα的KD值小至少100倍的结合亲和力(KD)值结合至人类IFNβ。例如，针对IFNβ的KD相对于针对IFNα的KD的比率可为1:100或更小、1:250或更小、1:500或更小、1:1000或更小、1:2500或更小、1:5000或更小或1:10,000或更小。
诱变研究及晶体结构研究亦识别人类IFNβ中由本文揭示的抗-IFNβ抗体识别的抗原决定基残基。具体而言，在位于距离抗体的重原子内的所有IFNβ残基(“潜在”抗原决定基残基)中，已识别三种不同类型：(i)“一级”抗原决定基残基，特征为位于抗体-抗原界面且于此位置处对任何其他氨基酸取代具有零-至-低序列耐受度的高隐蔽残基；(ii)“二级”抗原决定基残基，其特征为位于该界面处具有中度隐蔽表面区域且于这些位置处对氨基酸取代具有中度序列耐受度的残基；及(iii)“可选”抗原决定基残基是特征为位于该界面处具有低隐蔽表面区域且于这些位置处对氨基酸取代具有高序列耐受度的残基。
因此，在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段特异性结合人类IFNβ中的抗原决定基，其中该抗原决定基包含选自由以下组成的组的一个或更多个残基：根据SEQ ID NO:41的编号的Ala89、Tyr 92、His93及His97(“一级”抗原决定基残基)。在某些实施方式中，该抗原决定基进一步包含选自由以下组成的组的一个或更多个残基：根据SEQID NO:41的编号的Phe8、Leu9、Ser12、Gln16、Asn86、Asn90、Asp96及Thr100(“二级抗原决定基残基)。在某些实施方式中，该抗原决定基进一步包含选自由以下组成的组的一个或更多个残基：根据SEQ ID NO:41的编号的Leu5、Leu6、Ser13、Phe15及Thr82(“可选”抗原决定基残基)。
在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段除人类IFNβ外亦特异性结合食蟹猴IFNβ。在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段特异性结合食蟹猴IFNβ中的抗原决定基，其中该抗原决定基包含选自由以下组成的组的一个或更多个残基：根据SEQ ID NO:44的编号的Ala89、Tyr 92、His93及His97(“一级”抗原决定基残基)。在某些实施方式中，该抗原决定基进一步包含选自由以下组成的组的一个或更多个残基：根据SEQID NO:44的编号的Phe8、Leu9、Ser12、Gln16、Asn86、Asn90、Asp96、Thr100及Tyr67(“二级”抗原决定基残基)。在某些实施方式中，该抗原决定基进一步包含选自由以下组成的组的一个或更多个残基：SEQ ID NO:44的编号的Leu5、Leu6、Ser13、Phe15及Thr82(“可选”抗原决定基残基)。
本文提供抗体CTI-AF1及其变体。因此，在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含下列重链CDR序列：(i)包含SEQ ID NO:37的CDR-H1、包含SEQ ID NO:38的CDR-H2及包含SEQ ID NO:39的CDR-H3；及/或(ii)下列轻链CDR序列：包含SEQ ID NO:34的CDR-L1、包含SEQ ID NO:35的CDR-L2及包含SEQ ID NO:36的CDR-L3。
如自晶体结构研究中证实，CDR中非所有残基有助于抗体-抗原结合。如实施例7及表14中显示，仅有限数量CDR残基是位于距离抗原的重原子内，视为潜在互补位残基。在这些潜在互补位残基中，(i)“一级”互补位残基是那些特征为位于抗体-抗原界面且于此位置处对任何其他氨基酸取代具有低序列耐受度的高隐蔽残基；及(ii)“二级”互补位残基的特征为位于该界面处具有较低隐蔽残基表面区域且于此位置处对氨基酸取代具有较高序列耐受度的残基。
因此，在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含VH链，其包含选自由以下组成的组的一个或更多个互补位残基：根据Kabat编号的CDR-H1中的Trp33、CDR-H2中的Tyr56、CDR-H2中的Tyr58及CDR-H3中的Tyr97(“一级”互补位残基)。在某些实施方式中，该VH进一步包含选自由以下组成的组的一个或更多个互补位残基：根据Kabat编号的CDR-H2中的Asp54、CDR-H2中的Gln61、CDR-H3中的Gly98及CDR-H3中的Leu100(“二级”互补位残基)。在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含VL，其包含选自由以下组成的组的一个或更多个互补位残基：根据Kabat编号的CDR-L1中的Tyr32、CDR-L3中的Ile92及CDR-L3中的Leu94(“一级”互补位残基)。在某些实施方式中，该VH进一步包含选自由以下组成的组的一个或更多个互补位残基：根据Kabat编号的CDR-L1中的Gln27、CDR-L1中的Asp28、CDR-L1中的Ile29、CDR-L1中的Gly30及CDR-L3中的Ile93(“二级”互补位残基)。本发明的抗体或其抗原结合片段可亦包含本文揭示的互补位残基的任何组合。
在某些实施方式中，本文描述的抗体或其抗原结合片段包含下列重链CDR序列：(i)与SEQ ID NO:37共享至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％或至少95％同一性的CDR-H1；与SEQ ID NO:38共享至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％或至少95％同一性的CDR-H2；及与SEQ ID NO:39共享至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％或至少95％同一性的CDR-H3；及/或(ii)下列轻链CDR序列：与SEQ ID NO:34共享至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％或至少95％同一性的CDR-L1；与SEQ ID NO:35共享至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％或至少95％同一性的CDR-L2；及与SEQ ID NO:36共享至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％或至少95％同一性的CDR-L3。在某些实施方式中，相较于SEQ ID NO.37、38、39、34、35及36的氨基酸差异分别是非如表14中显示的一级或二级互补位残基中的一者。
在某些实施方式中，相对于SEQ ID NO.34，在CDR-L1的序列中作出不超过10、不超过9、不超过8、不超过7、不超过6、不超过5、不超过4、不超过3、不超过3、不超过2或不超过一个取代。在某些实施方式中，相对于SEQ ID NO.35，在CDR-L2的序列中作出不超过6、不超过5、不超过4、不超过3、不超过3、不超过2或不超过一个取代。在某些实施方式中，相对于SEQID NO.36，在CDR-L3的序列中作出不超过8、不超过7、不超过6、不超过5、不超过4、不超过3、不超过3、不超过2或不超过一个取代。在某些实施方式中，相对于SEQ ID NO.37，在CDR-H1的序列中作出不超过9、不超过8、不超过7、不超过6、不超过5、不超过4、不超过3、不超过3、不超过2或不超过一个取代。在某些实施方式中，相对于SEQ ID NO.38，在CDR-H2的序列中作出不超过16、不超过15、不超过14、不超过13、不超过12、不超过11、不超过10、不超过9、不超过8、不超过7、不超过6、不超过5、不超过4、不超过3、不超过3、不超过2或不超过一个取代。在某些实施方式中，相对于SEQ ID NO.39，在CDR-H3的序列中作出不超过9、不超过8、不超过7、不超过6、不超过5、不超过4、不超过3、不超过3、不超过2或不超过一个取代。在某些实施方式中，相较于无该取代的抗体或其抗原结合片段的KD，所述取代不改变结合亲和力(KD)值超过3个数量级、超过2个数量级或1个数量级。在某些实施方式中，该取代是非如表14中显示的一级或二级互补位残基中的一者。
在某些实施方式中，所述取代是如由表1提供的保守取代。
表1：例示性保守取代
残基 保守取代 残基 保守取代
Ala Ser Leu Ile,Val
Arg Lys Lys Arg,Gln
Asn Gln；His Met Leu,Ile
Asp Glu Phe Met,Leu,Tyr
Cys Ser Ser Thr；Gly
Gln Asn Thr Ser,Val
Glu Asp Trp Tyr
Gly Pro Tyr Trp,Phe
His Asn,Gln Val Ile,Leu
Ile Leu,Val Pro -
在某些实施方式中，当抗体是衍生自非人类物种(诸如人源化抗体，其中鼠科CDR是经移植至人类框架)时，所述取代为人类生殖系取代，其中非人类CDR残基是经相应的人类生殖系残基置换。此取代的一个好处是增加人类氨基酸含量，及减小衍生自非人类物种的抗体的潜在免疫原性。例如，若使用人类生殖系DPK9框架及例示性抗体CTI-AF1，则CTI-AF1抗体及人类生殖系DPK9的CDR-L1的比对如下：
表2
就位置24、26、27、29、32、33及34而言，人类生殖系残基及相应的CTI-AF1残基是相同的，及这些位置处无需取代。就位置25、28、30及31(加粗表示)而言，人类生殖系残基及相应的CTI-AF1鼠科残基是不同的。CTI-AF1的这些位置处的鼠科残基可经相应的人类生殖系DPK9残基置换以进一步增加人类氨基酸残基含量。
用于在抗体CDR中引入人类生殖系残基的方法及库是详细描述于Townsend等人，Augmented Binary Substitution:Single-pass CDR germlining and stabilization oftherapeutic antibodies,PNAS，第112卷，15354-15359(2015)及美国专利申请第2017-0073395A1号(2017年3月16日公开)中，将其以全文引用的方式并入本文中。
在某些实施方式中，本文描述的抗体或其抗原结合片段包含人类框架序列。例如，重链框架序列可衍生自人类VH3生殖系、VH1生殖系、VH5生殖系或VH4生殖系序列。优选人类生殖系重链框架是衍生自VH1、VH3或VH5生殖系序列的框架。例如，可使用来自下列熟知生殖系序列的VH框架：IGHV3-23、IGHV3-7或IGHV1-69，其中生殖系名称是基于IMGT生殖系定义。优选人类生殖系轻链框架是衍生自VK或Vλ生殖系序列的框架。例如，可使用来自下列生殖系的VL框架：IGKV1-39或IGKV3-20，其中生殖系名称是基于IMGT生殖系定义。或者或另外，该框架序列可为人类生殖系共有框架序列，诸如人类Vλ1共有序列、VK1共有序列、VK2共有序列、VK3共有序列、VH3生殖系共有序列、VH1生殖系共有序列、VH5生殖系共有序列或VH4生殖系共有序列的框架。
人类生殖系框架的序列是可获得自各种公共数据库，诸如V-base、IMGT、NCBI或Abysis。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是DPK9的框架(IMGT名称：IGKV1-39)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的DPK9生殖系残基(SEQ ID NO.:46、47、48)取代。
表3
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是DPK12的框架(IMGT名称：IGKV2D-29)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的DPK12生殖系残基(SEQ ID NO.:49、50、51)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是DPK18的框架(IMGT名称：IGKV2-30)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的DPK18生殖系残基(SEQ ID NO.:52、53、54)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是DPK24的框架(IMGT名称：IGKV4-1)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的DPK24生殖系残基(SEQ ID NO.:55、56、57)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是HK102_V1的框架(IMGT名称：IGKV1-5)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的HK102_V1生殖系残基(SEQ ID NO.:58、59、60)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是DPK1的框架(IMGT名称：IGKV1-33)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的DPK1生殖系残基(SEQ ID NO.:61、62、63)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是DPK8的框架(IMGT名称：IGKV1-9)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的DPK8生殖系残基(SEQ ID NO.:64、65、66)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是DPK21的框架(IMGT名称：IGKV3-15)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的DPK21生殖系残基(SEQ ID NO.:67、68、69)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是Vg_38K的框架(IMGT名称：IGKV3-11)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的Vg_38K生殖系残基(SEQ ID NO.:70、71、72)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是DPK22的框架(IMGT名称：IGKV3-20)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的DPK22生殖系残基(SEQ ID NO.:73、74、75)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是DPK15的框架(IMGT名称：IGKV2-28)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的DPK15生殖系残基(SEQ ID NO.:76、77、78)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是DPL16的框架(IMGT名称：IGLV3-19)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的DPL16生殖系残基(SEQ ID NO.:79、80、81)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是DPL8的框架(IMGT名称：IGLV1-40)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的DPL8生殖系残基(SEQ ID NO.:82、83、84)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是V1-22的框架(IMGT名称：IGLV6-57)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应的V1-22生殖系残基(SEQ ID NO.:85、86、87)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是人类Vλ共有序列的框架，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应Vλ生殖系共有残基(SEQ ID NO.:88、89、90、91、92、93)取代。对有或无间隙的共有序列提供替代序列。在无共有的位置，括号()内的残基是关联最频繁存在于人类抗体中的残基。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是人类Vλ1共有序列的框架，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应Vλ1生殖系共有残基(SEQ ID NO.:94、95、96、97)取代。对有或无间隙的共有序列提供替代序列。在无共有的位置，括号()内的残基是关联最频繁存在于人类抗体中的残基。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是人类Vλ3共有序列的框架，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应Vλ3生殖系共有残基(SEQ ID NO.:98、99、100、101)取代。对有或无间隙的共有序列提供替代序列。在无共有的位置，括号()内的残基是关联最频繁存在于人类抗体中的残基。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是人类Vκ共有序列的框架，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应Vκ生殖系共有残基(SEQ ID NO.:102、103、104、105)取代。对有或无间隙的共有序列提供替代序列。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是人类Vκ1共有序列的框架，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应Vκ1生殖系共有残基(SEQ ID NO.:106、107、108)取代。在无共有的位置，括号()内的残基是关联最频繁存在于人类抗体中的残基。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是人类Vκ2共有序列的框架，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应Vκ2生殖系共有残基(SEQ ID NO.:109、110、111、112)取代。对有或无间隙的共有序列提供替代序列。在无共有的位置，括号()内的残基是关联最频繁存在于人类抗体中的残基。
在某些实施方式中，人类生殖系VL框架是人类VK3共有序列的框架，及本发明的抗体(及片段)的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的一个或更多个残基可经如表3中显示的相应生殖系残基(SEQ ID NO.:113、114、115)取代。在无共有的位置，括号()内的残基是关联最频繁存在于人类抗体中的残基。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP54的框架(IMGT名称：IGHV3-7)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应生殖系残基(SEQ ID NO.:116、117)取代。
表4
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP47的框架(IMGT名称：IGHV3-23)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的DP47生殖系残基(SEQ ID NO.:118、119)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP71的框架(IMGT名称：IGHV4-59)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的DP71生殖系残基(SEQ ID NO.:120、121)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP75的框架(IMGT名称：IGHV1-2_02)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的DP75生殖系残基(SEQ ID NO.:122、123)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP10的框架(IMGT名称：IGHV1-69)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的DP10生殖系残基(SEQ ID NO.:124、125)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP7的框架(IMGT名称：IGHV1-46)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的DP7生殖系残基(SEQ ID NO.:126、127)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP49的框架(IMGT名称：IGHV3-30)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的DP49生殖系残基(SEQ ID NO.:128、129)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP51的框架(IMGT名称：IGHV3-48)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的DP51生殖系残基(SEQ ID NO.:130、131)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP38的框架(IMGT名称：IGHV3-15)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的DP38生殖系残基(SEQ ID NO.:132、133)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP79的框架(IMGT名称：IGHV4-39)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的DP79生殖系残基(SEQ ID NO.:134、135)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP78的框架(IMGT名称：IGHV4-30-4)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的DP78生殖系残基(SEQ ID NO.:136、137)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是DP73的框架(IMGT名称：IGHV5-51)，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的DP73生殖系残基(SEQ ID NO.:138、139)取代。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是人类VH生殖系共有序列的框架，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的VH生殖系共有残基(SEQ ID NO.:140、141、142、143)取代。对有或无间隙的共有序列提供替代序列。在无共有(consensus)的位置，括号()内的残基是关联最频繁存在于人类抗体中的残基。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是人类VH3生殖系共有序列的框架，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的VH3生殖系共有残基(SEQ ID NO.:144、145、146)取代。针对有或无间隙的共有序列提供替代序列。在无共有的位置，括号()内的残基是关联最频繁存在于人类抗体中的残基。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是人类VH5生殖系共有序列的框架，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的VH5生殖系共有残基(SEQ ID NO.:147、148)取代。在无共有的位置，括号()内的残基是关联最频繁存在于人类抗体中的残基。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是人类VH1生殖系共有序列的框架，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的VH1生殖系共有残基(SEQ ID NO.:149、150)取代。在无共有的位置，括号()内的残基是关联最频繁存在于人类抗体中的残基。
在某些实施方式中，人类生殖系VH框架是人类VH4生殖系共有序列的框架，及本发明的抗体或其抗原结合片段的CDR-H1及CDR-H2中的一个或更多个残基可经如表4中显示的相应的VH4生殖系共有残基(SEQ ID NO.:151、152)取代。在无共有的位置，括号()内的残基是关联最频繁存在于人类抗体中的残基。
在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含(根据Kabat编号)：
(i)VH，其包含：(a)包含Trp33及相较于SEQ ID NO:37的三个或更少个氨基酸差异的CDR-H1；(b)包含Asp54、Tyr56、Tyr58及Gln61及相较于SEQ ID NO:38的三个或更少个氨基酸差异的CDR-H2；及(c)包含Tyr97、Gly98及Leu100；及相较于SEQ ID NO:39的三个或更少个氨基酸差异的CDR-H3；及
(ii)VL，其包含：(a)包含Gln27、Asp28、Ile29、Gly30、Tyr32；及相较于SEQ ID NO:34的三个或更少个氨基酸差异的CDR-L1；(b)包含包括相较于SEQ ID NO:35的三个或更少个氨基酸差异的序列的CDR-L2；及(c)包含Ile92、Ile93及Leu94；及相较于SEQ ID NO:36的三个或更少个氨基酸差异的CDR-L3。
在某些实施方式中，CDR-H1、CDR-H2、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的氨基酸差异是人类生殖系取代，其中非人类CDR残基是经相应的人类生殖系残基(诸如那些如表3及4中显示的人类生殖系残基者)置换。
在某些实施方式中，本文描述的抗体或其抗原结合片段包含(i)包含与SEQ IDNO:28至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列的VH；及/或(ii)包含与SEQ ID NO:1至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列的VL。这些VL及VH序列的任何组合是亦包含于本发明中。
在某些实施方式中，VH框架是DP10。亦预测其他类似框架区递送包含SEQ IDNO.37、38及39的CDR的本发明的有利抗体或抗体片段，其包括：DP-88、DP-25、DP-73、IGHV5-10-1*01、IGHV5-10-1*04、DP-14、DP-75、DP15、DP-8、DP-7及IGHV7-4-1*02，其与DP10的FW区分别共享99％、93％、75％、73％、73％、92％、90％、90％、89％、93％及79％序列同一性，及其于共同结构特征中包含四个或更少个氨基酸差异：(A)直接位于CDR下方的残基(光标区)，H2、H47、H48及H49，H67、H69、H71、H73、H93、H94；(B)VH/VL链折叠残基：H37、H39、H45、H47、H91、H93；及(C)典型CDR结构支持残基H24、H71、H94(全部根据Kabat编号)。特别优选是DP-88、DP-25、DP-73、IGHV5-10-1*01及IGFV-10-1*04的框架区，其与DP10分别共享99％、93％、75％、73％及73％序列同一性，且于这些共同结构特征中具有两个或更少个氨基酸差异。
在某些实施方式中，VL框架是DPK9。亦预测其他类似框架区递送包含SEQ IDNO.34、35及36的CDR的本发明的有利抗体，其包括：DPK5、DPK4、DPK1、IGKV1-5*01、DPK24、DPK21、DPK15、IGKV1-13*02、IGKV1-17*01、DPK8、IGKV3-11*01及DPK22，其与DPK-9的FW区分别共享99％、97％、97％、96％、80％、76％、66％、97％、97％、96％、76％及74％序列同一性，且于共同结构特征中包含一个或更少个氨基酸差异：(A)直接位于CDR下方的残基(光标区)，L2、L4、L35、L36、L46、L47、L48、L49、L64、L66、L68、L69、L71；(B)VH/VL链折叠残基：L36、L38、L44、L46、L87；及(C)典型CDR结构支持残基L2、L48、L64、L71(全部根据Kabat编号)。特别优选是DPK5、DPK4、DPK1、IGKV1-5*01、DPK24、DPK21及DPK15的框架区，其与DPK9分别共享99％、97％、97％、96％、80％、76％及66％序列同一性，且于这些共同结构特征中无氨基酸差异。
在某些实施方式中，本文描述的抗体或其抗原结合片段包含(i)包含SEQ ID NO:37的CDR-H1；包含SEQ ID NO:38的CDR-H2；包含SEQ ID NO:39的CDR-H3；包含SEQ ID NO:34的CDR-L1；包含SEQ ID NO:35的CDR-L2；及包含SEQ ID NO:36的CDR-L3；及(ii)包含与人类生殖系DPK9的框架序列至少66％、至少74％、至少76％、至少80％、至少96％、至少97％或至少99％相同的序列的VL框架；及包含与人类生殖系DP10的框架序列至少73％、至少75％、至少79％、至少89％、至少90％、至少92％、至少93％或至少99％相同的序列的VH框架。
在某些实施方式中，本文描述的抗体或其抗原结合片段包含(i)包含与SEQ IDNO:29至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列的CH；及/或(ii)包含与SEQ ID NO:30至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列的CL。这些CH及CL序列的任何组合是亦包含于本发明中。
在某些实施方式中，本文描述的抗体或其抗原结合片段包含Fc域。该Fc域可衍生自IgA(例如，IgA1或IgA2)、IgG、IgE或IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
在某些实施方式中，本文描述的抗体或其抗原结合片段包含(i)包含与SEQ IDNO:33至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列的重链；及/或(ii)包含与SEQ ID NO:32至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列的轻链。这些重链及轻链序列的任何组合是亦包含于本发明中。
本发明亦提供额外的抗体(例如，CTI-AF2至CTI-AF27)、其抗原结合片段及其抗原结合变体。CTI-AF2至CTI-AF27共享相同的VH序列但具有不同的VL序列。因此，在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含(i)包含与SEQ ID NO:28至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列的VH；及/或(ii)包含与SEQ ID NO:2至27中的任何一者至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的氨基酸序列的VL。这些VL及VH序列的任何组合是亦包含于本发明中。
本发明亦提供与本文描述的抗体或其抗原结合片段中的任何一者(诸如表11中列举的抗体或其抗原结合片段中的任何一者)竞争结合至人类IFNβ的抗体或其抗原结合片段。例如，若抗体或其抗原结合部分对人类IFNβ的结合减少CTI-AF1对人类IFNβ的后续结合，则该抗体或其抗原结合部分视为与CTI-AF1竞争人类IFNβ结合。
本发明亦提供与本文描述的任何抗体或其抗原结合片段(诸如表11中列举的任何抗体或其抗原结合片段)一样结合人类IFNβ的相同抗原决定基的抗体或其抗原结合片段。例如，抗体竞争分析(及重叠抗原决定基分析)可使用如本文详细描述的SPR或任何公认竞争性结合分析进行评估。本文描述的SPR结合分析是用于评估本发明的抗体及任何其他测试抗体的结合的优选的非排他性方法。
本发明的抗体及其抗原结合片段包括单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段(例如，Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、Fc等)、嵌合抗体、双特异性抗体、异质共轭抗体(heteroconjugateantibodies)、单链(ScFv)、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白、结构域抗体(dAb)、人源化抗体及免疫球蛋白分子的包含具有所需特异性的抗原识别位点的任何其他构型，其包括抗体的醣化变体、抗体的氨基酸序列变体及经共价修饰的抗体。所述抗体及抗原结合片段可为小鼠、大鼠、人类或任何其他来源(包括嵌合或人源化抗体)。在一些实施方式中，所述抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，所述抗体是嵌合、人源化或人类抗体。在某些实施方式中，所述抗体是全人类抗体。在某些实施方式中，所述抗体是人源化抗体。
抗体的结合亲和力可表示为KD值，其是指特定抗原-抗体相互作用的解离速率。KD是解离的速率(亦称为“解离率(koff)”)相比于结合速率(或”结合率(kon)”)的比率。因此，KD等于koff/kon(解离/结合)及表示为摩尔浓度(M)及KD越小，则结合的亲和力越强。抗体的KD值可使用本领域中已完全确立的方法进行测定。除非另有规定，否则“结合亲和力”是指单价相互作用(内在活性；例如，抗体通过单价相互作用对抗原的结合)。
在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段具有不超过约1×10-7M，诸如不超过约1×10-7M、不超过约9×10-8M、不超过约8×10-8M、不超过约7×10-8M、不超过约6×10-8M、不超过约5×10-8M、不超过约4×10-8M、不超过约3×10-8M、不超过约2×10-8M、不超过约1×10-8M、不超过约9×10-9M、不超过约8×10-9M、不超过约7×10-9M、不超过约6×10-9M、不超过约5×10-9M、不超过约4×10-9M、不超过约3×10-9M、不超过约2×10-9M、不超过约1×10-9M、不超过约9×10-10M、不超过约8×10-10M、不超过约7×10-10M、不超过约6×10-10M、不超过约5×10-10M、不超过约4×10-10M、不超过约3×10-10M、不超过约2×10-10M、不超过约1×10-10M、不超过约9×10-11M、不超过约8×10-11M、不超过约7×10-11M、不超过约6×10-11M、不超过约5×10-11M、不超过约4×10-11M、不超过约3×10-11M、不超过约2×10-11M、不超过约1×10-11M、不超过约9×10-12M、不超过约8×10-12M、不超过约7×10-12M、不超过约6×10-12M、不超过约5×10-12M、不超过约4×10-12M、不超过约3×10-12M、不超过约2×10-12M、不超过约1×10-12M、不超过约9×10-13M、不超过约8×10-13M、不超过约7×10-13M、不超过约6×10-13M、不超过约5×10-13M、不超过约4×10-13M、不超过约3×10-13M、不超过约2×10-13M、不超过约1×10-13M、自约1x10-7M至约1x10-14M、自约9x10-8M至约1x10-14M、自约8x10-8M至约1x10-14M、自约7x10-8M至约1x10-14M、自约6x10-8M至约1x10-14M、自约5x10-8M至约1x10-14M、自约4x10-8M至约1x10-14M、自约3x10-8M至约1x10-14M、自约2x10-8M至约1x10-14M、自约1x10-8M至约1x10-14M、自约9x10-9M至约1x10-14M、自约8x10-9M至约1x10-14M、自约7x10-9M至约1x10-14M、自约6x10-9M至约1x10-14M、自约5x10-9M至约1x10-14M、自约4x10-9M至约1x10-14M、自约3x10-9M至约1x10-14M、自约2x10-9M至约1x10-14M、自约1x10-9M至约1x10-14M、自约1x10-7M至约1x10-13M、自约9x10-8M至约1x10-13M、自约8x10-8M至约1x10-13M、自约7x10-8M至约1x10-13M、自约6x10-8M至约1x10- 13M、自约5x10-8M至约1x10-13M、自约4x10-8M至约1x10-13M、自约3x10-8M至约1x10-13M、自约2x10-8M至约1x10-13M、自约1x10-8M至约1x10-13M、自约9x10-9M至约1x10-13M、自约8x10-9M至约1x10-13M、自约7x10-9M至约1x10-13M、自约6x10-9M至约1x10-13M、自约5x10-9M至约1x10-13M、自约4x10-9M至约1x10-13M、自约3x10-9M至约1x10-13M、自约2x10-9M至约1x10-13M或自约1x10-9M至约1x10-13M的亲和力(KD)值。
KD的值可通过熟知方法直接测定，及可通过诸如那些(例如，阐述于Caceci等人(1984,Byte9:340-362)中)者的方法甚至针对复杂混合物进行计算。例如，该KD可使用诸如由Wong&Lohman(1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:5428-5432)揭示的双过滤器硝基纤维素过滤器结合测定建立。本领域中已知评估配体(诸如抗体)对靶抗原的结合能力的其他标准测定法，包括(例如)ELISA、Western印迹、RIA及流动式细胞测量术分析及本文别处例示的其他测定法。
用于测量结合亲和力(KD)值的一个例示性方法是表面等离子共振(SPR)，其通常使用生物传感器系统(诸如系统)。SPR是指通过检测生物传感器矩阵(例如使用系统)内蛋白质浓度的改变容许实时生物特异性相互作用的分析的光学现象。BIAcore动力学分析包括分析抗原从表面具有固定化分子(例如，包含抗原-结合域的分子)的芯片的结合及解离；或分析抗体或其抗原结合片段从具有固定化抗原的芯片的解离。
在某些实施方式中，SPR测量是使用T100或T200仪器进行。例如，用于表面等离子共振的标准分析条件可基于在SPR芯片上的具有约100至500个反应单元(RU)的IgG的抗体固定化。经纯化的靶蛋白是于缓冲剂中稀释至最终浓度范围及以所需流动速率(例如，10至100μl/min)进行注射以容许计算Ka。容许进行解离以建立解离率，接着注射3M MgCl2(或20mM NaOH)以再生芯片表面。然后使用动力学评估软件包分析感测图。在例示性实施方式中，该SPR分析是根据如实施例1中阐述的条件。
在某些实施方式中，结合亲和力(KD)值是使用基于溶液的动力学排除测定(KinExATM)进行测量。在一个特定实施方式中，该KinExA测量是使用KinExATM3200仪器(Sapidyne)进行。该动力学排除分析(KinExATM)是一般目的免疫分析平台(主要流式分光亮度计)，其可测量平衡解离常数，及针对抗原/抗体相互作用的结合及解离速率常数。由于KinExATM是在已获得平衡后进行，因此其是用于测量高亲和力相互作用(其中该相互作用的解离率可为非常缓慢的)的KD的有利技术。该KinExATM方法论可通常如Drake等人(2004)Analytical Biochemistry 328,35-43中的描述进行。
用于测定抗体的KD的另一方法是通过使用生物层干涉术，其通常使用技术(Octet QKe系统，ForteBio)。
一般而言，抗-IFNβ抗体应以高亲和力结合至IFNβ，以有效阻断IFNβ的活性。IFNβ以约50nM的KD结合IFNAR1及以约100pM的KD结合至IFNAR2。因此，所述IFNβ抗体宜具有于纳摩尔及皮摩尔范围中的结合亲和力(KD)，诸如约1×10-9M或更低。
活性测定
在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段是减小IFNβ的至少一种活性的中和抗体。IFNβ的此活性包括(但不限于)结合至IFNAR；增加IFNβ依赖性基因的表达及/或诱导例如STAT1及/或STAT2的磷酸化，其为本领域中尤其已知的IFNβ活性。抗体或其抗原结合片段是否减小IFNβ的活性可通过许多分析进行评估。例如，分析可用以判定抗体或其抗原结合片段是否：(a)抑制IFNβ对IFNAR的结合；(b)减小IFNβ依赖性基因的表达水平；及/或(c)抑制由IFNβ诱导的磷酸化，诸如STAT1及/或STAT2的磷酸化。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段抑制IFNβ对IFNAR的结合(例如，可通过竞争性结合至IFNβ进行评估)。例如，分析可比较(i)IFNβ在抗体或其抗原结合片段的存在下结合至IFNAR，及(ii)IFNβ在缺乏抗体或其抗原结合片段的情况下结合至IFNAR。在抗-IFNβ抗体或其抗原结合片段的存在下，IFNβ对IFNAR的结合的减小可为至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％。在缺乏抗体或其抗原结合片段的情况下，IFNβ对IFNAR的预期结合可设定为100％。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段以不超过约1×10-7M、不超过约1×10-8M、不超过约1×10-9M、不超过约1×10-10M、不超过约1×10-11M、不超过约1×10-12M、不超过约1×10-13M、不超过约1×10-14M、不超过约1×10-15M、自约1×10-7M至约5×10-14M、自约1×10-7M至约1×10-14M、自约1×10-7M至约5×10-13M、自约1×10-7M至约1×10-13M、自约1×10-7M至约5×10-12M或自约1×10-7M至约1×10-12M的半最大抑制浓度(IC50)抑制IFNβ结合至IFNAR。
本发明的抗体或其抗原结合片段的活性亦可通过测量IFNβ依赖性基因的表达水平进行评估。例如，该基因可为经IFNβ介导的信号途径中的下游组分(诸如CMPK2、IFIT1、IFI27、IFIH1、IFI44、IFI44L、IFI6、ISG15、LY6E、HERC5、MX1、OAS1、OAS2、OAS3、RSAD2、XAF1、CXCL10或其任何组合)。或者，该基因可为报道基因(例如，如用于实施例中的萤光素酶报道基因)，其中该报道基因的表达水平与IFNβ活性相关(例如，该报道基因是以可操作方式连接至IFNβ依赖性反应组件)。该下游基因或报道基因的表达水平可通过各种方法进行评估，诸如测量RNA水平、蛋白质水平或蛋白质的活性水平。该测定可比较(i)IFNβ依赖性基因在所述抗体或其抗原结合片段的存在下的表达水平，及(ii)IFNβ依赖性基因在缺乏所述抗体或其抗原结合片段的情况下的表达水平。在抗-IFNβ抗体或其抗原结合片段的存在下，下游基因或报道基因的表达水平的减少可为至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％。在缺乏抗体或其抗原结合片段的情况下，基线表达水平可设定为100％。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段以不超过约1×10-7M、不超过约1×10-8M、不超过约1×10-9M、不超过约1×10-10M、不超过约1×10-11M、不超过约1×10-12M、不超过约1×10-13M、不超过约1×10-14M、不超过约1×10-15M、自约1×10-7M至约5×10-14M、自约1×10-7M至约1×10-14M、自约1×10-7M至约5×10-13M、自约1×10-7M至约1×10-13M、自约1×10-7M至约5×10-12M或自约1×10-7M至约1×10-12M的半最大抑制浓度(IC50)抑制IFNβ依赖性基因的表达。在某些实施方式中，自约1×10-10M至约1×10-13M的IC50是优选的。在某些实施方式中，自约5×10-11M至约5×10-12M的IC50是优选的。
抗体或其抗原结合片段的抑制活性亦可通过测量由IFNβ诱导的磷酸化的程度(诸如STAT1磷酸化及/或STAT2磷酸化程度)进行评估。该分析可比较(i)STAT1及/或STAT2在抗体或其抗原结合片段的存在下的磷酸化程度，及(ii)STAT1及/或STAT2在缺乏抗体或其抗原结合片段的情况下的磷酸化程度。在抗-IFNβ抗体或其抗原结合片段的存在下，磷酸化程度的减小可为至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％。在缺乏抗体或其抗原结合片段的情况下，基线STAT1磷酸化及/或STAT2磷酸化程度可设定为100％。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段以不超过约1×10-7M、不超过约1×10-8M、不超过约1×10-9M、不超过约1×10-10M、不超过约1×10-11M、不超过约1×10-12M、不超过约1×10-13M、不超过约1×10-14M、不超过约1×10-15M、自约1×10-7M至约5×10-14M、自约1×10-7M至约1×10-14M、自约1×10-7M至约5×10-13M、自约1×10-7M至约1×10-13M、自约1×10-7M至约5×10-12M或自约1×10-7M至约1×10-12M的半最大抑制浓度(IC50)抑制由IFNβ诱导的磷酸化(诸如STAT1磷酸化及/或STAT2磷酸化)。在某些实施方式中，自约1×10-10M至约1×10-13M的IC50是优选的。在某些实施方式中，自约5×10-11M至约5×10-12M的IC50是优选的。
在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段的特征是使用其他生物活性测定法进行进一步评估，例如，以评估其作为治疗剂的效力、药理学活性及潜在功效。这些测定法是本领域中已知及取决于抗体的预期用途。实例包括(例如)毒性分析、免疫原性分析、稳定性分析及/或PK/PD概况分析。
C.产生抗-IFNβ抗体的核酸及方法
本发明亦提供编码抗体中的任何一者(包括本文描述的抗体部分及经修饰的抗体)的多核苷酸。本发明亦提供制造本文描述的多核苷酸中的任何一者的方法。多核苷酸可通过本领域中已知的程序来制造及表达。
所需抗体或其抗原结合片段及编码此抗体或其抗原结合片段的核酸的序列可使用标准测序技术进行测定。编码所需抗体或其抗原结合片段的核酸序列可插入于各种载体(诸如克隆及表达载体)中以用于进行重组产生及特征分析。编码重链或重链的抗原结合片段的核酸及编码轻链或轻链的抗原结合片段的核酸可经克隆至相同载体或不同载体内。
在一个方面，本发明提供编码下列抗-IFNβ抗体及其抗原-结合部分中的任何一者的氨基酸序列的多核苷酸：CTI-AF1、CTI-AF2、CTI-AF3、CTI-AF4、CTI-AF5、CTI-AF6、CTI-AF7、CTI-AF8、CTI-AF9、CTI-AF10、CTI-AF11、CTI-AF12、CTI-AF13、CTI-AF14、CTI-AF15、CTI-AF16、CTI-AF17、CTI-AF18、CTI-AF19、CTI-AF20、CTI-AF21、CTI-AF22、CTI-AF23、CTI-AF24、CTI-AF25、CTI-AF26及CTI-AF27。
本发明亦提供编码抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，该抗体或其抗原结合片段结合大量与选自由以下组成的组的抗体相同的抗原决定基：CTI-AF1、CTI-AF2、CTI-AF3、CTI-AF4、CTI-AF5、CTI-AF6、CTI-AF7、CTI-AF8、CTI-AF9、CTI-AF10、CTI-AF11、CTI-AF12、CTI-AF13、CTI-AF14、CTI-AF15、CTI-AF16、CTI-AF17、CTI-AF18、CTI-AF19、CTI-AF20、CTI-AF21、CTI-AF22、CTI-AF23、CTI-AF24、CTI-AF25、CTI-AF26及CTI-AF27。
本发明亦提供编码抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，该抗体或其抗原结合片段与选自由以下组成的组的抗体竞争结合至IFNβ：CTI-AF1、CTI-AF2、CTI-AF3、CTI-AF4、CTI-AF5、CTI-AF6、CTI-AF7、CTI-AF8、CTI-AF9、CTI-AF10、CTI-AF11、CTI-AF12、CTI-AF13、CTI-AF14、CTI-AF15、CTI-AF16、CTI-AF17、CTI-AF18、CTI-AF19、CTI-AF20、CTI-AF21、CTI-AF22、CTI-AF23、CTI-AF24、CTI-AF25、CTI-AF26及CTI-AF27。
本发明亦提供包含编码包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的蛋白质的序列的多核苷酸：(i)SEQ ID NO:1-27；(ii)SEQ ID NO:28；及(iii)其任何组合。
本发明亦提供包含如SEQ ID NO:166或167所示的核酸序列的多核苷酸。
本发明亦提供包含于ATCC保藏且具有登录号PTA-122727的质粒的DNA插入物或于ATCC保藏且具有登录号PTA-122726的质粒的DNA插入物的核酸序列的多核苷酸。
在另一方面，本发明提供编码抗-IFNβ抗体的多核苷酸及其变体，其中这些变体多核苷酸与本文揭示的具体核酸序列中的任何一者共享至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性。这些数量非意谓限制性，且所列举百分比间的增量具体视为本公开的部分。
在一个实施方式中，VH及VL域或其抗原-结合部分或全长HC或LC是由各别多核苷酸编码。或者，VH及VL两者或其抗原-结合部分或HC及LC是由单一多核苷酸编码。
本发明亦涵盖与任何这些序列互补的多核苷酸。多核苷酸可为单链(编码或反义)或双链及可为DNA(基因体、cDNA或合成)或RNA分子。RNA分子包括HnRNA分子，其含有内含子及以一对一方式对应于DNA分子及mRNA分子，其不含有内含子。额外的编码或非编码序列可(但无需)存在于本发明的多核苷酸内，及多核苷酸可(但无需)连接至其他分子及/或支持材料。
多核苷酸可包含天然序列(即，编码抗体或其部分的内源性序列)或可包含此序列的变体。多核苷酸变体含有一个或更多个取代、添加、删除及/或插入，使得经编码的多肽的免疫反应性相对于天然免疫反应性分子未减小。对经编码的多肽的免疫反应性的影响可通常如本文描述进行评估。在一些实施方式中，变体对编码天然抗体或其部分的多核苷酸序列显示至少约70％同一性，在一些实施方式中，至少约80％同一性，在一些实施方式中，至少约90％同一性，及在一些实施方式中，至少约95％同一性。这些数量非意谓限制性，且所列举百分比间的增量是具体视为本发明的部分。
若当如下文描述针对最大对映性比对时，两个序列中的核苷酸或氨基酸的序列是相同的，则两个多核苷酸或多肽序列被称为是“相同的”。两个序列之间的比较是通常通过于比较窗上比较所述序列而进行以识别及比较具有序列相似性的局部区域。如本文使用的“比较窗”是指具有至少约20个(通常30至约75或40至约50个)连续位置的区段，其中在两个序列经优化比对后，可将序列与具有相同数量连续位置的参考序列进行比较。
用于比较的序列的优化比对可使用生物信息学软件(Inc.,Madison,WI)的套件中的程序，使用默认参数进行。此程序实施下列参考文献中描述的数种比对方案：Dayhoff,M.O.,1978,A model of evolutionarychange in proteins-Matrices for detecting distant relationships.In Dayhoff,M.O.(编)Atlas of Protein Sequence and Structure,National Biomedical ResearchFoundation,Washington DC，第5卷，增刊3，第345至358页；Hein J.,1990,UnifiedApproach to Alignment and Phylogenes，第626至645页，Methods in Enzymology，第183卷，Academic Press,Inc.,San Diego,CA；Higgins,D.G.及Sharp,P.M.,1989,CABIOS 5:151-153；Myers,E.W.及Muller W.,1988,CABIOS 4:11-17；Robinson,E.D.,1971,Comb.Theor.11:105；Santou,N.,Nes,M.,1987,Mol.Biol.Evol.4:406-425；Sneath,P.H.A.及Sokal,R.R.,1973,Numerical Taxonomy the Principles and Practice of NumericalTaxonomy,Freeman Press,San Francisco,CA；Wilbur,W.J.及Lipman,D.J.,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80:726-730。
在一些实施方式中，“序列同一性的百分比”是通过在具有至少20个位置的比较的窗上比较两个经优化比对的序列进行测定，其中比较窗中的多核苷酸或多肽序列的部分相较于针对两个序列的优化比对的参考序列(其不包含添加或删除)可包含20％或以下、通常5％至15％或10％至12％的添加或删除(即，间隙)。该百分比是通过以下计算：通过测定其中两个序列中均出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置数量以产生具有匹配位置的数量，将匹配位置的数量除以参考序列中的位置的总数量(即，窗尺寸)及使所述结果乘以100以产生序列同一性的百分比。
或者，变体亦可与天然基因或其的部分或补体基本上同源。这些多核苷酸变体可在中度严格的条件下与编码天然抗体(或互补序列)的天然生成的DNA序列杂交。
合适的“中度严格的条件”包括在5X SSC，0.5％SDS，1.0mM EDTA(pH 8.0)的溶液中预洗；在50℃至65℃，5X SSC下杂交整夜；接着在65℃下清洗两次，历时20分钟，及每次清洗使用含有0.1％SDS的2X、0.5X及0.2X SSC。
如本文使用，“高度严格的条件”或“高严格性条件”是那些下列者：(1)针对清洗采用低离子强度及高温，例如在50℃下用0.015M氯化钠/0.0015M柠檬酸钠/0.1％十二烷基硫酸钠；(2)在杂交期间采用变性剂，诸如甲酰胺，例如，具有在pH 6.5下的0.1％牛血清白蛋白/0.1％聚蔗糖/0.1％聚乙烯吡咯啶酮/50mM磷酸钠缓冲剂及在42℃下的750mM氯化钠、75mM柠檬酸钠的50％(v/v)甲酰胺；或(3)在42℃下采用50％甲酰胺、5X SSC(0.75M NaCl、0.075M柠檬酸钠)、50mM磷酸钠(pH 6.8)、0.1％焦磷酸钠、5X Denhardt杂交溶液、经声处理的鲑鱼精子DNA(50μg/mL)、0.1％SDS及10％硫酸葡聚糖，及在42℃下于0.2X SSC(氯化钠/柠檬酸钠)及在55℃下于50％甲酰胺中清洗，接着在55℃下于由含有EDTA的0.1X SSC组成的高严格性清洗液中进行清洗。本领域技术人员将知晓为适应诸如探针长度及类似物的因素，如何任选地调节温度、离子强度等。
本领域普通技术人员将知晓由于遗传密码子的简并性，因此存在许多编码如本文描述的多肽的核苷酸序列。这些多核苷酸中的一些与具有任何天然基因的核苷酸序列具有最小同源性。然而，本发明具体预期因密码子使用中的差异而改变的多核苷酸。此外，包含本文提供的多核苷酸序列的基因的等位基因是于本发明的范围内。等位基因是由于核苷酸的一个或更多个突变诸如删除、添加及/或取代而变化的内源性基因。所得mRNA及蛋白质可(但无需)具有经改变的结构或功能。等位基因可使用标准技术(诸如杂交、扩增及/或数据库序列比较)进行识别。
本发明的多核苷酸可使用化学合成、重组方法或PCR获得。化学多核苷酸合成的方法是本领域中熟知及本文中无需详细描述。本领域技术人员可使用本文提供的序列及市售DNA合成剂以产生所需DNA序列。
就使用重组方法制备多核苷酸而言，可将包含所需序列的多核苷酸插入合适的载体内，及可将该载体进一步引入合适的宿主细胞内，以用于复制及扩增，如本文进一步讨论。多核苷酸可通过本领域中已知的任何方式插入宿主细胞内。细胞是通过直接摄取、内吞作用、转染、F-杂交或电穿孔以引入外源性多核苷酸而进行转化。一经引入，外源性多核苷酸可作为非整合性载体(诸如质粒)维持于细胞内或整合于宿主细胞基因体内。经如此扩增的多核苷酸可通过本领域内熟知的方法自宿主细胞分离。参见，例如，Sambrook等人，1989。
或者，PCR容许DNA序列的复制。PCR技术是本领域中熟知及是描述于美国专利案第4,683,195、4,800,159、4,754,065及4,683,202号，及PCR:The Polymerase ChainReaction,Mullis等人编，Birkauswer Press,Boston,1994中。
RNA可通过在合适的载体中使用经分离的DNA及将其插入于合适的宿主细胞内获得。当细胞复制及将DNA转录成RNA时，该RNA可然后使用本领域技术人员公知的方法进行分离，例如，如阐述于Sambrook等人，1989中的方法。
合适的克隆及表达载体可包括各种组件，诸如启动子、增强子及其他转录调节序列。该载体亦可经构建以容许接着将抗体可变结构域克隆至不同载体内。
合适的克隆载体可根据标准技术进行构建或可选择自本领域中可获得的大量克隆载体。尽管所选克隆载体可根据预期使用的宿主细胞而改变，但有用的克隆载体将通常具有自我复制的能力，可具有针对特定限制核酸内切酶的单一靶及/或可携载针对可用于选择含有该载体的克隆中的标记物的基因。合适的实例包括质粒及细菌病毒，例如，pUC18、pUC19、Bluescript(例如，pBS SK+)及其衍生物，mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA及穿梭载体(诸如pSA3及pAT28)。这些及许多其他克隆载体是可获得自商业供货商(诸如BioRad、Strategene及Invitrogen)。
进一步提供表达载体。表达载体通常是可复制多核苷酸构建体，其含有根据本发明的多核苷酸。其暗示表达载体必须于宿主细胞中可复制，以游离基因的形式或以染色体DNA的整体部分的形式。合适的表达载体包括(但不限于)质粒、病毒载体，其包括腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、黏质粒及揭示于PCT公开第WO 87/04462号中的表达载体。载体组件可通常包括(但不限于)下列中的一或更多者：信号序列；复制起点；一个或更多个标记基因；合适的转录控制组件(诸如启动子、增强子及终止子)。就表达(即，翻译)而言，亦通常需一个或更多个转录控制组件，诸如核糖体结合位点、翻译起始位点及终止密码子。
含有目的多核苷酸的载体及/或所述多核苷酸本身可通过许多适当方式中的任何一者引入宿主细胞内，所述方式包括电穿孔、采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-葡聚糖或其他物质的转染；微粒轰击(microprojectile bombardment)；脂质转染；及感染(例如，其中该载体是感染剂，诸如痘疮病毒)。引入载体或多核苷酸的选择将通常取决于该宿主细胞的特征。
抗体或其抗原结合片段可使用合适的宿主细胞重组制造。编码该抗体或其抗原结合片段的核酸可克隆至表达载体内，其可然后引入宿主细胞诸如大肠杆菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞、类人猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞内，其中该细胞不另外产生免疫球蛋白，以于重组宿主细胞中获得抗体的合成。在本领域熟知的许多细胞中，优选的宿主细胞包括CHO细胞、人类胚胎肾(HEK)293细胞或Sp2.0细胞。
抗体片段可通过重组方法或通过化学合成由全长抗体的蛋白质水解或其他降解产生。抗体的多肽片段(尤其多达约50个氨基酸的较短多肽)可通过化学合成便利地制成。用于蛋白质及肽的化学合成的方法是本领域中已知及是可购买获得。
本发明的抗体或其抗原结合片段可经亲和力成熟。例如，经亲和力成熟的抗体可由本领域中已知的程序(Marks等人，1992,Bio/Technology,10:779-783；Barbas等人，1994,Proc Nat.Acad.Sci,USA 91:3809-3813；Schier等人，1995,Gene,169:147-155；Yelton等人，1995,J.Immunol.,155:1994-2004；Jackson等人，1995,J.Immunol.,154(7):3310-9；Hawkins等人，1992,J.Mol.Biol.,226:889-896；及WO2004/058184)产生。
2.配方及用途
本发明的抗体或其抗原结合片段可调配成药物组合物。该药物组合物可进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂及/或稳定剂(Remington:The Science and practice ofPharmacy，第20版，2000,Lippincott Williams and Wilkins,Ed.K.E.Hoover)，以冻干配方或水溶液的形式。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在剂量及浓度下对接受者是无毒的，及可包含缓冲剂诸如磷酸、柠檬酸及其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸及甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六羟季铵；杀藻胺；氯化本索宁；酚醇、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；及间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯啶酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰氨酸、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单醣、二醣及其他醣，包括葡萄糖、甘露糖或葡聚糖；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐相反离子，诸如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白质络合物)；及/或非离子型表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。本文进一步描述药学上可接受的赋形剂。
本发明的抗体或其抗原结合片段可用于各种治疗或诊断目的。例如，本发明的抗体或其抗原结合片段可用作亲和力纯化剂(例如，用于IFNβ的活体外纯化)；用作诊断剂(例如，用于检测IFNβ于特异性细胞、组织或血清中的表达)。
本发明的抗体或其抗原结合片段的例示性治疗用途包括治疗风湿性疾病(诸如SLE或DM)或干扰素疾病。本发明的抗体或其抗原结合片段亦可用于预防性治疗(例如，向未显示疾病症状但易患风湿性疾病或干扰素疾病的受试者施用)。
就治疗应用而言，本发明的抗体或其抗原结合片段可通过常规技术向哺乳动物、尤其人类施用，所述技术诸如静脉内(作为推注或通过经时的连续输注)、肌内、腹腔内、脑内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、经口、局部或通过吸入。本发明的抗体或其抗原结合片段亦可适当通过肿瘤内、肿瘤周围、病灶内或病灶周围途径施用。
因此，在一个方面，本发明提供减小IFNβ的活性的方法，其包括向有此需要的受试者(例如，人类)施用治疗有效量的本发明的抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方式中，该受试者饱受风湿性疾病折磨或易患风湿性疾病。在某些实施方式中，该风湿性疾病是SLE。在某些实施方式中，该风湿性疾病是DM。
在某些实施方式中，该受试者饱受干扰素疾病折磨或易患干扰素疾病。
在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段是经皮下施用。在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段是经静脉内施用。
药物组合物可以可随风湿性疾病或干扰素疾病的严重性变化的频率向有此需要的受试者施用。在预防治疗的情况下，该频率可取决于该受试者患风湿性疾病或干扰素疾病的易发性或倾向而变化。
所述组合物可作为推注或通过连续输注向有此需要的患者施用。例如，以Fab片段呈现的抗体的推注施用可以自0.0025至100mg/kg体重、0.025至0.25mg/kg、0.010至0.10mg/kg或0.10至0.50mg/kg的量进行施用。就连续输注而言，以Fab片段呈现的抗体可以0.001至100mg/kg体重/分钟、0.0125至1.25mg/kg/min、0.010至0.75mg/kg/min、0.010至1.0mg/kg/min或0.10至0.50mg/kg/min的量施用，持续1至24小时、1至12小时、2至12小时、6至12小时、2至8小时或1至2小时。
就以全长抗体(具有完整恒定区)呈现的抗体的施用而言，剂量可为自约1mg/kg至约10mg/kg、自约2mg/kg至约10mg/kg、自约3mg/kg至约10mg/kg、自约4mg/kg至约10mg/kg、自约5mg/kg至约10mg/kg、自约1mg/kg至约20mg/kg、自约2mg/kg至约20mg/kg、自约3mg/kg至约20mg/kg、自约4mg/kg至约20mg/kg、自约5mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg或更多、约2mg/kg或更多、约3mg/kg或更多、约4mg/kg或更多、约5mg/kg或更多、约6mg/kg或更多、约7mg/kg或更多、约8mg/kg或更多、约9mg/kg或更多、约10mg/kg或更多、约11mg/kg或更多、约12mg/kg或更多、约13mg/kg或更多、约14mg/kg或更多、约15mg/kg或更多、约16mg/kg或更多、约17mg/kg或更多、约19mg/kg或更多或约20mg/kg或更多。施用的频率将取决于病症的严重性。频率可在自每周三次至每两周或三周一次的范围内变化。
另外，所述组合物可经由皮下注射向患者施用。例如，1至100mg抗-IFNβ抗体的剂量可经由皮下或静脉内注射以一周两次、一周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每十周一次、一个月两次、一个月一次、每两个月一次或每三个月一次的频率向患者施用。例如，抗体CTI-AF1具有约19天的预估半衰期。此半衰期支持以每2至6周，诸如每2周一次或每4周一次进行皮下或静脉内注射。
在某些实施方式中，抗-IFNβ抗体于人类中的半衰期是约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天、约20天、约21天、约22天、约23天、约24天、约25天、约26天、约27天、约28天、约29天、约30天、自约5天至约40天、自约5天至约35天、自约5天至约30天、自约5天至约25天、自约10天至约40天、自约10天至约35天、自约10天至约30天、自约10天至约25天、自约15天至约40天、自约15天至约35天、自约15天至约30天、或自约15天至约25天。
在某些实施方式中，该药物组合物是以以下的剂量每2至6周进行皮下或静脉内施用：自约0.1mg/kg至约10mg/kg、自约0.5mg/kg至约10mg/kg、自约1mg/kg至约10mg/kg、自约1.5mg/kg至约10mg/kg、自约2mg/kg至约10mg/kg、自约0.1mg/kg至约8mg/kg、自约0.5mg/kg至约8mg/kg、自约1mg/kg至约8mg/kg、自约1.5mg/kg至约8mg/kg、自约2mg/kg至约8mg/kg、自约0.1mg/kg至约5mg/kg、自约0.5mg/kg至约5mg/kg、自约1mg/kg至约5mg/kg、自约1.5mg/kg至约5mg/kg、自约2mg/kg至约5mg/kg、约0.5mg/kg、约1.0mg/kg、约1.5mg/kg、约2.0mg/kg、约2.5mg/kg、约3.0mg/kg、约3.5mg/kg、约4.0mg/kg、约4.5mg/kg、约5.0mg/kg、约5.5mg/kg、约6.0mg/kg、约6.5mg/kg、约7.0mg/kg、约7.5mg/kg、约8.0mg/kg、约8.5mg/kg、约9.0mg/kg、约9.5mg/kg或约10.0mg/kg。
在某些实施方式中，该药物组合物是以约2.0mg/kg的剂量每2至6周进行皮下注射或静脉内施用。在某些实施方式中，该药物组合物是以自约2.0mg/kg至约10.0mg/kg的剂量每2至6周进行皮下注射或静脉内施用。
在一个例示性实施方式中，药物组合物是每2周皮下施用。
本发明的抗体或其抗原结合片段可用作单药疗法或与其他疗法组合以治疗风湿性疾病。
3.定义
除非本文另有定义，否则结合本发明使用的科学及技术术语应具有本领域普通技术人员通常所了解的含义。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数及复数术语应包括单数。通常，结合本文描述的细胞及组织培养物、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学及蛋白质及核酸化学及杂交使用的术语表及技术是那些本领域中熟知及常用者。
抗体的“抗原结合片段”是指全长抗体的保留特异性结合至抗原的能力的片段(优选地，具有基本上相同的结合亲和力)。抗原结合片段的实例包括(i)Fab片段，其为由VL、VH、CL及CH1域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，其为包含于铰链区通过双硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH及CH1域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VL及VH域组成的Fv片段；(v)dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341:544-546)，其由VH域组成；及(vi)经分离的互补决定区(CDR)、经双硫键连接的Fvs(dsFv)及抗-特应(抗-Id)抗体及胞内抗体。此外，尽管Fv片段的两个域(VL及VH)是由不同基因编码，但其可使用重组方法通过合成连接体连接，该合成连接体使得其被制成单一蛋白链，其中VL及VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv))；参见例如，Bird等人Science 242:423-426(1988)及Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988))。单链抗体的其他形式(诸如双抗体)亦包含于本发明中。双抗体是二价双特异性抗体，其中VH及VL域是表达于单一多肽链上，但使用太短以致于无法容许在相同链上的两个链之间配对的连接体，藉此迫使所述域与另一链的互补域配对，及产生两个抗原-结合位点(参见例如，Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)；Poljak等人，1994,Structure 2:1121-1123)。
抗体“可变域”是指抗体轻链(VL)的可变区或抗体重链(VH)的可变区，单独或组合。如本领域中已知，重链及轻链的可变区各由三个互补决定区(CDR)组成，及由四个框架区(FR)连接，及有助于抗体的抗原结合位点的形成。
可变域中的残基是根据Kabat编号，Kabat是用于抗体的编译的重链可变域或轻链可变域的编号系统。参见Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))。使用此编号系统，实际直链氨基酸序列可含有较少或额外的氨基酸，其对应于可变域的FR或CDR的缩短或插入。例如，重链可变域可包括在CDR-H2的残基52后的单一氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)及在重链FR残基82后经插入的残基(例如，根据Kabat编号的残基82a、82b及82c)。对于给定抗体，残基的Kabat编号可通过于该抗体的序列与“标准”Kabat编号的序列具有同源性的区域的比对来测定。用于分配Kabat编号的各种算法是可获得的。除非本文另有说明，否则本文使用2012年发布的Abysis(www.abysis.org)中执行的算法将Kabat编号分配至可变区。
抗体中的具体氨基酸残基位置(诸如互补位残基)是亦根据Kabat编号。
“互补决定区”(CDR)可根据本领域中熟知的Kabat、Chothia、Kabat及Chothia两者的聚集、AbM、接触(contact)及/或构形定义或CDR测定的任何方法的定义加以识别。参见例如Kabat等人，1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版(高度可变区)；Chothia等人，1989,Nature 342:877-883(结构性环结构)。CDR的AbM定义是在Kabat与Chothia之间折衷及使用Oxford Molecular的AbM抗体建模软件CDR的“接触”定义是基于阐述于MacCallum等人，1996,J.Mol.Biol.,262:732-745中的可见抗原接触。CDR的“构象”定义是基于制造有助于抗原结合的焓的残基(参见，例如，Makabe等人，2008,Journal of Biological Chemistry,283:1156-1166)。又其他CDR边界定义可非严格遵守上文方法中的一者，但虽然如此仍将与Kabat CDR的至少一部分重叠，然而其可根据特定残基或残基组或甚至全部CDR不显著影响抗原结合的预测或实验发现而经缩短或延长。如本文使用，CDR可是指通过本领域中已知的任何方法(包括方法的组合)定义的CDR。
在实施例(参见表11)中，CDR是经如下定义(根据Kabat编号；H：重链；L：轻链)：
CDR-H1：H26-H35B；CDR-H2：H50-H65；CDR-H3：H95-H102
CDR-L1：L24-L34；CDR-L2：L50-L56；CDR-L3：L89-L97
“框架”(FR)残基是除CDR残基外的抗体可变域残基。VH或VL域框架包含四个框架子区：FR1、FR2、FR3及FR4，呈下列结构其间散布CDR：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。在实施例(参见表11)中，FR残基包括下列(根据Kabat编号；H：重链；L：轻链)：
表5
FR1 FR2 FR3 FR4
重链 H1-H25 H36-H49 H66-H94 H103-H113
轻链 L1-L23 L35-L49 L57-L88 L98-L107
“抗原决定基”是指抗原(Ag)中抗体特异性结合的范围或区域，例如，包含与该抗体(Ab)相互作用的氨基酸残基的范围或区域。抗原决定基可为直链或非直链(例如，构象)的。
当相应的抗体或其抗原结合片段的结合呈互相排外性时，抗体或其抗原结合片段基本上结合与另一抗体或其抗原结合片段相同的抗原决定基。即，一种抗体或其抗原结合片段的结合排除其他抗体或其抗原结合片段的同时或连续结合。若该抗原可适应两种相应的抗体或其抗原结合片段的同时结合，则认为抗原决定基是独一无二的或不是实质性地相同。
术语“互补位”是通过扭转角度衍生自“抗原决定基”的上文定义，及是指抗体分子中涉及抗原结合的范围或区域，例如，包含与该抗原相互作用的残基的范围或区域。互补位可为直链或构象的(诸如CDR中的不连续残基)。
给定抗体/抗原结合对的抗原决定基/互补位可使用各种实验及计算抗原决定基定位方法在不同细节层次下经定义及特征分析。实验方法包括诱变、X射线晶体学、核磁共振(NMR)光谱学、氢/氘交换质谱法(HX-MS)及各种竞争结合方法。因为各方法依赖于独一无二的原则，所以抗原决定基的描述是与已测定该抗原决定基的方法紧密联系。因此，给定抗体/抗原对的抗原决定基/互补位将取决于采用的定位方法而不同地定义。
在其最细节层次下，用于抗体(Ab)与抗原(Ag)间相互作用的抗原决定基/互补位可通过界定存在于Ag-Ab相互作用中的原子接触的空间坐标及有关其对结合热力学的相对贡献的信息进行定义。在一种程度下，抗原决定基/互补位残基可通过界定Ag与Ab间原子接触的空间坐标进行特征分析。在一个方面，该抗原决定基/互补位残基可通过特定标准，例如Ab及Ag中原子间的距离(例如，距同源抗体的重原子及该抗原的重原子等于或小于约(诸如本文实施例中所用的)的距离)界定。在另一方面，抗原决定基/互补位残基的特征为参与与同源抗体/抗原，或与亦经氢结合至同源抗体/抗体(经水介导的氢结合)的水分子的氢键相互作用。在另一方面，抗原决定基/互补位残基的特征为与同源抗体/抗原的残基形成盐桥。在又另一方面，抗原决定基/互补位残基的特征可为因与同源抗体/抗原的相互作用而于掩蔽表面积(BSA)中具有非零变化的残基。在较为不详细的程度下，抗原决定基/互补位可通过函数进行特征描述，例如，通过与其他Ab的竞争结合。该抗原决定基/互补位亦可更一般地定义为包含氨基酸残基，其中通过另一氨基酸的取代将变更于Ab与Ag之间的相互作用的特征(例如，丙氨酸扫描)。
在通过抗体(例如，Fab片段或两个Fab片段)与其抗原之间的络合物的空间坐标界定的X射线衍生的晶体结构的内文中，除非另有规定，否则抗原决定基残基是指IFNβ残基，(i)其具有在距离同源抗体的重原子的约(例如，)的距离内的重原子(即，非氢原子)；(ii)参与与同源抗体的残基或与亦经氢结合至该同源抗体的水分子的氢键(经水介导的氢结合)；(iii)参与对同源抗体的残基的盐桥及/或(iv)因与该同源抗体的相互作用而于掩蔽表面积(BSA)中具有非零变化。一般而言，针对BSA施加截断以避免包含具有最小相互作用的残基。因此，除非另有规定，否则若当该抗体结合至IFNβ时，类别(iv)下的抗原决定基残基具有或更大的BSA或涉及静电相互作用，则选择类别(iv)下的抗原决定基残基。类似地，在X射线衍生的晶体结构的内文中，除非另有规定或与内文矛盾，否则互补位残基是指以下的抗体残基：(i)具有在距离IFNβ的重原子的约的距离内的重原子(即，非氢原子)；(ii)参与与IFNβ残基或与亦经氢结合至IFNβ的水分子的氢键(经水介导的氢结合)；(iii)参与对IFNβ的残基的盐桥及/或(iv)其因与IFNβ的相互作用而于掩蔽表面积中具有非零变化。此外，除非另有规定，否则若当抗体结合至IFNβ时，类别(iv)下的互补位残基具有或更大的BSA或涉及静电相互作用，则选择类别下的互补位残基(iv)。通过(i)距离或(iv)BSA识别的残基是通常称为“接触”残基。
自抗原决定基的描述及定义依赖于所用抗原决定基作图(mapping)方法及在不同细节层次下获得的事实，推断于相同Ag上不同Ab的抗原决定基的比较可在不同细节层次下类似地进行。例如，于氨基酸层面描述，例如自X射线结构测定的抗原决定基，若其含有相同氨基酸残基组，则认为其是相同的。若相应抗体的结合是相互排他性的，即，一种抗体的结合排除其他抗体的同时或连续结合，则认为以竞争结合为特征的抗原决定基为重叠的；及若该抗原可适应两个相应抗体同时结合，则认为抗原决定基是各别(独特)的。
给定抗体/抗原对的抗原决定基及互补位可通过例行方法鉴别。例如，抗原决定基的一般位置可通过评估抗体结合至不同片段或变体IFNβ多肽的能力测定，如本文先前更充分地描述。可与抗体内的特异性残基接触的IFNβ内的特异性残基亦可使用例行方法测定，诸如实施例中所述者。例如，抗体/抗原复合体可经结晶。该晶体结构可经测定及用以鉴别在抗体与抗原之间相互作用的特异性位点。
术语“特异性结合”是本领域中熟知的术语，且本领域中亦熟知用以测定这些特异性结合的方法。若分子与特定细胞或物质反应或结合比该分子与替代细胞或物质反应或结合更频繁、更快速、更久持续时间及/或更大亲和力，则认为该分子显示“特异性结合”。若抗体或其抗原结合片段结合靶(例如IFNβ)相较于结合其他物质以更大亲和力、结合性、更容易及/或更久持续时间，则该抗体或其抗原结合片段“特异性结合”至靶。
例如，特异性结合IFNβ的抗体或其抗原结合片段是抗体结合其同源抗原(IFNβ)相较于结合其他抗原(诸如IFN超家族的其他成员(例如INFα、IFNγ、IFNω)或其他无关分子)，以更大亲和力、结合性、更容易及/或更久持续时间。例如，在标准结合分析条件下，抗-IFNβ抗体可特异性结合样本中的人类IFNβ，但基本上不识别或结合该样本中的其他分子。亦了解特异性结合第一靶的抗体或其抗原结合片段可或可不特异性结合至第二靶。因此，“特异性结合”不一定要求(虽然其可包括)排他性结合。通常，但未必，“结合”的提及意谓特异性结合。
可使用各种分析模式以选择特异性结合目的分子的抗体或其抗原结合片段。例如，在许多测定中，固相ELISA免疫测定、免疫沈淀、BiacoreTM(GE Healthcare)、KinExA、荧光活化的细胞分选(FACS)、OctetTM(FortéBio,Inc.)及Western印迹分析可用以识别特异性结合抗原的抗体或其抗原结合片段。通常，特异性结合将是背景信号或噪音的至少两倍，更通常是背景的至少10倍、背景的至少50倍、背景的至少100倍、背景的至少500倍、背景的至少1000倍或背景的至少10,000倍。
抗体结合的特异性可通过测定抗体与IFNβ之间的特异性结合的KD值及比较该KD值与已知不结合至IFNβ的对照抗体的KD值来评估。一般而言，当该KD是约×10-5M或更小时，认为抗体”、“特异性”结合抗原。
当相较于抗体或其抗原结合片段结合其他抗原，该抗体或其抗原结合片段不以更大亲和力、结合性、更容易及/或以更久持续时间结合至一抗原时，该抗体或其抗原结合片段“基本上不结合”至该抗原。通常，该结合将不大于背景信号或噪音的两倍。一般而言，其以1×10-4M或更大、1×10-3M或更大、1×10-2M或更大或1×10-1M或更大的KD结合该抗原。
如本文关于抗体使用的术语“竞争”意谓第一抗体或其抗原-结合部分结合至抗原减少后续第二抗体或其抗原-结合部分对相同抗原的结合。一般而言，第一抗体的结合产生空间位阻、构象变化或结合至共同抗原决定基(或其部分)，使得第二抗体对相同抗原的结合是减少。可使用标准竞争性结合分析以判定两种抗体是否相互竞争。
用于抗体竞争的一种合适的分析涉及使用Biacore技术，该技术可使用表面等离子共振(SPR)技术，通常使用生物传感器系统(诸如系统)测量相互作用的程度。例如，SPR可用于活体外竞争性结合抑制分析中以测定一种抗体抑制第二抗体的结合的能力。用于测量抗体竞争的另一分析使用基于ELISA的方法。此外，一种基于抗体的竞争来“分级”抗体的高通量方法是描述于WO2003/48731中。若一种抗体或其抗原结合片段减少另一抗体或其抗原结合片段对IFNβ的结合，则存在竞争。例如，可使用顺序结合竞争分析，及顺序添加不同抗体。可添加第一抗体以达成接近饱和的结合。然后，添加第二抗体。若第二抗体对IFNβ的结合无法检测到或相较于在缺乏该第一抗体的情况下(其中值可设定为100％)的平行分析是显著减少(例如，至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％减少)，则所述两个抗体视为互相竞争。通过SPR进行的例示性抗体竞争分析(及重叠抗原决定基分析)是提供于实施例1中。
亦可进行竞争性结合分析，其中抗体对抗原的结合是相较于靶对具该靶的另一结合配偶体(诸如原本结合该靶的另一抗体或可溶受体)的结合。50％抑制发生时的浓度被称为Ki。在理想条件下，该Ki是等于KD。因此，一般而言，Ki的测量可便利地经取代以提供KD的上限值。与不同分子相互作用相关联的结合亲和力(例如，不同抗体针对给定抗原的结合亲和力的比较)可通过针对个别抗体/抗原复合体的KD值的比较而进行比较。针对抗体或其他结合配偶体的KD值可使用本领域中业已建立的方法进行测定。
“Fc融合”蛋白是其中一个或更多个多肽以可操作方式连接至Fc多肽的蛋白质。Fc融合组合免疫球蛋白的Fc区及融合配偶体。该“Fc区”可为天然序列Fc区或变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可改变，该人类IgG重链Fc区通常被定义为自位置Cys226的氨基酸残基或自Pro230延伸至其羧基端。Fc区中的残基的编号是具有EU指数的编号，如描述于Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991中。免疫球蛋白的Fc区通常包含两个恒定域(CH2及CH3)。如本领域中已知，Fc区可以二聚物或单体形式存在。
术语“治疗有效量”意谓抗-IFNβ抗体或其抗原结合片段或包含此抗体或其抗原结合片段的组合足以达成预期目的(诸如减少IFNβ对IFNAR的结合，减少STAT1及/或STAT2的磷酸化，减少IFNβ依赖性基因的表达或以其他方式引起对有所需要的受试者中的体内可测量利益)的量。精确量将取决于许多因素，包括(但不限于)治疗组合物的组分及物理特征、预期患者群体、个别患者注意事项等，及可由本领域技术人员判定。
术语“治疗”包括预防性及/或治疗性治疗。若在疾病、失调症或病症的临床表现前施用，则认为该治疗是预防性的。治疗性治疗包括(例如)减轻或减弱疾病、失调症或病症的严重性或缩短疾病、失调症或病症的长度。优选地，该疾病、失调症或病症是经结合至IFNAR的IFNβ介导或是与结合至IFNAR的IFNβ相关联。
如本文使用，术语“约”是指值的+/-10％。
生物保藏
本发明的代表性材料是2015年12月18日保藏于美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)，10801 University Boulevard，Manassas,Va.20110-2209,USA。具有ATCC登录号PTA-122727的载体CTI-AF1-VH包含编码抗体CTI-AF1的重链可变区的DNA插入物，具有ATCC登录号PTA-122726的载体CTI-AF1-VL包含编码抗体CTI-AF1的轻链可变区的DNA插入物。所述保藏是根据国际承认用于专利程序的微生物保藏布达佩斯条约(Budapest Treaty on the International Recognition of the Depositof Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure)及其(布达佩斯条约)下的法规(Regulations)而作出。这确保自保藏日期起维持保藏物的活培养物30年。该保藏物将可根据布达佩斯条约的条款由ATCC获得，及受到辉瑞公司与ATCC间的协议约束，在颁发相关美国专利时或在任何美国或外国专利申请案对公众公开时(无论何者先)，确保该保藏培养物的后代对公众的永久及不受限制的可用性，及确保由美国专利商标局判定根据35U.S.C.122节及该局规则(包括37C.F.R.1.14节及对886 OG 638的特别参考)定名的子代的可用性。
本申请的拥有者已同意若当在合适的条件下培养时，保藏的材料的培养物应当死亡或损失或破坏，则将通知所述材料及时置换为另一相同的材料。保藏材料的可用性不应视为许可在违背在任何政府当局根据其专利法授予的权利下来实践本发明。
实施例
本发明是通过参考下列实验性实施例进一步进行详细描述。这些实施例是仅出于阐述的目的提供，除非另外指明，否则非意欲是限制性的。因此，本发明不应以任何方式视为限制于下列实施例，而是应视为包含因本文提供的教导而变得显而易见的任何及所有变化。
实施例1：抗-IFNβ抗体的产生
抗体CTI-AF1是抗可溶细胞因子干扰素β(IFNβ)的人源化IgG1抗体。抗人类IFNβ的小鼠单克隆抗体(小鼠mAb)是通过以人类IFNβ标准免疫接种雌性BALB/c小鼠，及后续杂交瘤筛选而产生。
基于动力学结合曲线选择两个杂交瘤克隆以供人源化。所述克隆显示约20nM的KD值及约20nM的IC50。杂交瘤克隆是通过使用来自IGKV1-39(DPK9轻链可变域；基因库登录号X59315)及IGHV1-69(DP10重链可变域；基因库登录号L22582)的人类生殖系框架序列进行人源化。
使用多轮亲和力成熟以增加抗体的亲和力。这些抗体的VL区的序列是显示于表11中。表11中的所有抗体具有相同的VH序列。具体而言，CTI-AF1显示通过将下列突变引入轻链可变域中而使KD值自25nM减小至29pM：位置30中的S至G突变；分别于位置92及93处的H至I及T至I突变；及位置96中的L至I突变。无突变引入至重链可变域中。
CTI-AF抗体对人类干扰素β(IFNβ)的亲和力是通过SPR如下，使用Biacore T200仪器进行测定。抗体是在室温下使用标准胺-偶合(amine-coupling)技术直接固定于CM5传感器芯片的表面上。固定化程度涵盖自49至375个共振单元(RU)的范围。然后，分析物(重组人类IFNβ)是以自10nM下至0.078nM的范围内的连续稀释(2倍稀释)，以每分钟30至50μL的流动速率，历时在自65至300秒的范围内的结合时间进行注射，接着进行10分钟的解离阶段。各浓度是一式两份经评估。通过在各循环之间使用pH 3.0下的3M MgCl2或pH 1.5下的10mM甘氨酸-HCl，接着缓冲剂冲洗再生CM5传感器芯片表面，来移除所述分析物。此再生步骤移除经结合的分析物及使响应信号返回至基线。来自参考流式细胞(无分析物)的数据是自抗原结合反应中减去以移除系统性伪迹。表观结合亲和力是使用Biacore T200评估软件2.0版以1:1相互作用模型进行测定。平衡常数KD是作为动力学速率常数的比率(kd/ka)进行测定。结合是在CM5传感器芯片上使用两个单独的仪器及不同流式细胞历时多日重复结合实验来证实。结果显示于表6中。
表6：表11中的抗体的生物活性的汇总
实施例2：抗-IFNβ抗体的生物物理性质
使CTI-AF1在MOD1缓冲剂中以10K MWCO再生的纤维素膜透析及浓缩至150mg/mL。使食蟹猴ETS材料被超滤/渗滤至相同缓冲剂内至72mg/mL的最终浓度及产物的损失最小。当调配于PBS(pH7.2，以～50mg/mL)中时，CTI-AF1相在2至8℃下经分离及形成稳定的乳白乳液。一经升温至室温，该溶液再次变得澄清。在MOD1缓冲剂中，未出现相分离。
粘度是在22℃下使用mVROC粘度计测量。注射是在100μL/min下使用100μL汉米尔顿注射器进行。粘度对浓度的依赖性显示于图1中。甚至在最大浓度下，该粘度仍是小于10cP。
热稳定性是使用MicroCal VP-DSC(Malvern)评价。CTI-AF1是以1mg/mL蛋白质于MOD1缓冲剂中以1deg/min扫描。如图2中显示，此分子的第一熔融转化是于69.4℃处出现，其是远高于针对商业规模生产的已知所需稳定性阈值。
低pH稳定性是通过用柠檬酸将蛋白A池滴定至pH 2.8、3.0及3.4及在室温下培养5小时且接着中和至pH 7.0进行评价。如图3中显示，HMMS的形成仅发生于pH 2.8时，然而在较高pH水平下，产物是稳定的。如商业制造所需，此稳定性将在低pH下灭活包膜病毒。
冷冻/解冻稳定性是以72mg/mL于MOD1缓冲剂中通过将含有1mL产物的Eppendorf管在-80℃下放置于10min，接着在室温下解冻进行。在冷冻-解冻循环3次之后未见显著聚集。
稳定性研究是以100mg/mL于MOD1缓冲剂中在2至8℃(图4A)下及在环境温度(22℃，图4C)下历时6周进行；于MOD1缓冲剂中以5mg/mL在40℃(图4B)下历时4周进行；于20mM缓冲剂(谷氨酸pH 4.0，组氨酸pH 5.8，tris pH 8.0)中以4mg/mL在37℃(图4D)下历时5或11天进行。所述时间点的测试是通过SE-HPLC进行。在研究的任何一者中未检测出HMW的显著增加。同样地，通过CGE的分析未显示所述时间点之间的任何显著差异。电荷异质性是通过iCE(表7)测定，其显示酸性物质在37℃(特别在pH 8.0下)及在40℃下增加，其指示脱酰胺及/或氧化的一定程度。然而，无主要变化是经检测以触发液相层析术(LS)/质谱分析(MS)研究。其他稳定性系列(2至8℃及环境温度)未显示通过iCE分析的％酸性物质及％碱性物质的显著变化。
来自40℃系列的稳定性时间点是于测量IFNβ活性的中和的基于细胞的分析中进行测试(图5A至D)。在第1天，将20,000个HEK293ISRE-Luc(IFNβ反应性萤光素酶报导子)细胞接种于经组织培养物处理的96孔板的每孔的100μL含有10％胎牛血清(FBS)的DMEM中。抗体溶液是制备成2×原液，起始自于DMEM/10％FBS中的1μM最高浓度，然后用培养基作出11个点、10倍稀释系列。20×IFNβ原液(0.625ng/mL)是制备于培养基中及添加至抗体滴定原液中至最终2×浓度。抗体:IFNβ溶液是在37℃下培养2小时，然后每孔添加100μL溶液及使所述板在37℃下培养整夜。在第3天，制备150μg/mL甲虫荧光素溶液(钾盐)及添加20μL/孔及使所述板在37℃下培养15分钟。于EnVision多标记板读数器上读取发光。未检测出中和活性的变化。
CTI-AF1是与配方缓冲剂(20mM His，8.5％蔗糖，0.05mg/mL EDTA，pH 5.8)相容及维持高达150mg/mL的溶解度及可接受的粘度。
表7：稳定性样本中的电荷异质性
实施例3.药理学
简介
CTI-AF1是针对可溶细胞因子干扰素β(IFNβ)的有效及高选择性人源化IgG1抗体。在体外，CTI-AF1针对人类IFNβ显示高亲和力(36.7±12.4pM的KD)。该抗体针对人类及食蟹猴IFNβ显示类似EC50结合(分别为15.28±2.11pM及25.04±5.11pM)。在基于人类细胞的功能分析中，CTI-AF1显示由IFNβ诱导的STAT1磷酸化的有效中和(IC50 7.7±5.0至29.8±6.9pM)及经I型干扰素刺激的萤光素酶报导子于经培养的人类细胞中的表达(ISRE分析；IC50 28.8±7.6pM)。在聚肌胞苷酸(聚I:C)刺激后，CTI-AF1亦抑制MxA(Mx1)于基因表达分析中经IFNβ驱动的表达(IC50 29.4±23.5pM)及可抑制通过人皮肤成纤维细胞(疾病相关细胞类型)内源性表达的IFNβ。
主要药理学，在体外
在初始杂交瘤筛选期间，抗体是基于其阻断IFNβ结合至IFNAR2的能力；I型IFN受体的高亲和力组件(图6)而经选择。在人源化及亲和力成熟后的后续筛选中，抗体选择是基于在基于细胞的测定中IFNβ的功能性中和。
SPR是用以测定CTI-AF1对人类IFNβ的KD；结合实验是使用配备研究级CM5传感器芯片及人类IFNβ(Peprotech)的Biacore T200光学生物传感器进行。芯片的再生是使用剥离缓冲剂(pH 3.0的3M MgCl2或pH 1.5的10mM甘氨酸)，接着缓冲剂冲洗进行。CTI-AF1是在室温下固定于CM5传感器芯片的表面上。捕获程度涵盖50至375个共振单元(RU)的范围。分析物(人类IFNβ)是然后以每分钟30至50μL的流动速率注射，历时在自65至300秒的范围内变化的结合时间，接着进行10分钟的解离阶段。相互作用的动力学表征是使用典型多循环方法进行，该方法使用以一系列2倍稀释的自10nM下至0.078125nM的一系列人类IFNβ浓度。各浓度是一式两份经评估。该分析物是通过在各循环之间使用pH 3.0的3M MgCl2或pH 1.5的10mM甘氨酸，接着缓冲剂冲洗再生数组表面来移除。此再生步骤移除经结合的分析物及使响应信号返回至基线。来自参考流式细胞(无分析物)的数据是自抗原结合反应中减去以移除系统性伪迹。表观结合亲和力是使用简单1:1相互作用模型测定及平衡常数KD是作为动力学速率常数的比率进行测定。CTI-AF1针对人类IFNβ的表观结合亲和力是经测定为36.7±12.4pM(图7)。
CTI-AF1对人类IFNβ及食蟹猴、兔、大鼠及小鼠直系同源物及三种最近I型人类同源物及IFNγ(II型)的结合是在基于板的ELISA中进行评估。ELISA板是在4℃下用5μg/mL下列细胞因子中的一者涂布整夜：人类IFNβ、食蟹猴IFNβ、大鼠IFNβ、人类IFNα2、IFNγ、人类IFNω；小鼠IFNβ或人类IFNα14(H2)是以1μg/mL涂布，及兔IFNβ是以10ng/mL涂布。所有蛋白质是稀释于无钙及镁的磷酸盐缓冲盐水中。经涂布的板是用含有0.05％Tween-20(PBST)的磷酸盐缓冲盐水清洗及在室温下经阻断缓冲剂(PBST+0.5％BSA)阻断1小时。用PBST再次清洗板，并将一级抗体以30nM起始浓度添加至板中，接着在阻断缓冲剂中1:3稀释。就抗-兔IFNβ而言，进行1:10稀释。板是在室温下培养1小时及然后用PBST清洗。结合是用物种特异性经过氧化物酶连接的二级抗体及四甲基联苯胺(TMB1)受质进行检测。反应是用0.18M硫酸(H2SO4)停止及吸光度是于450nm下在EnVision多标记读数器(PerkinElmer)中读取。表8显示针对人类及食蟹猴IFNβ的相似反应性，而对兔IFNβ的反应性是低200倍。不存在对大鼠或小鼠IFNβ或对三种最近人类同源物或IFNγ(II型)的可检测的结合。
表8：如通过ELISA测量的CTI-AF1对IFNβ直系同源物及最近I型同源物及IFNγ的反应性
“无结合”：当450nm下的吸光度是<2×空白对照孔的吸光度时。
两个体外测定是用以证实由IFNβ诱导的信号的CTI-AF1依赖性抑制。首先，使用经人类ISRE萤光素酶报导子稳定转导的HEK293细胞作为IFNβ依赖性基因表达的量度；在第1天，将20,000个HEK293ISRE-Luc(IFNβ反应性萤光素酶报导子)细胞接种于经组织培养物处理的96孔板的每孔的100μL含有10％胎牛血清(FBS)的DMEM中。抗体溶液是制备成2×原液，起始自于DMEM/10％FBS中的1μM的最高浓度。用培养基作出11个点、10倍稀释系列。20x IFNβ原液(28nM，最终分析浓度为1.4nM，EC50)是制备于培养基中及将其添加至抗体滴定原液中至最终2×浓度。抗体:IFNβ溶液是在37℃下培养2小时，然后每孔添加100μL溶液及使所述板在37℃下培养整夜。在第3天，制备150μg/mL甲虫荧光素溶液(钾盐)及添加20μL/孔及使所述板在37℃下培养15分钟。于EnVision多标记板读数器上读取发光。图8A显示由IFNβ诱导的萤光素酶活性的CTI-AF1剂量依赖性抑制，其具有28.8±7.6pM的IC50。
其次，通过phosflow评估由IFNβ诱导的STAT1磷酸化的经CTI-AF1介导的抑制。U937细胞(人类单核细胞细胞系)是于含有10％FBS及2mM Glutamax(cRPMI)的RPMI 1640中生长。抗体原液是在4×下，以4μM(最终最高浓度是1μM)的最高浓度制得及在cRPMI中作出12个点、10倍稀释系列；在U型底96孔组织培养物板中添加25μL/孔。将等体积4×IFNβ(200pM，最终浓度是50pM，EC90)添加至抗体原液中及在37℃下培养2小时。对照孔包括单独培养基(无刺激背景pSTAT1表达)及仅50pM IFNβ(最大pSTAT1信号)。收获U937细胞，以1500rpm在室温下离心5min，及然后以2×106/mL的浓度重悬浮于升温至37℃的cRPMI中；每孔添加50μL细胞悬浮液及将板在37℃下放置15分钟。接着，添加100μL预热的cytofix缓冲剂及将板放回原处，在37℃下放置15分钟。将板移除及如上文描述离心。自所述板中移除培养基，将细胞重悬浮及于200μL的PBS中清洗及再次离心。再次移除培养基，然后将细胞重悬浮于100μL透化缓冲剂IV中及在室温下培养15分钟。在培养结束时，细胞是经离心及如上文描述进行清洗。在PBS清洗后，将细胞重悬浮于100μL的PBS/5％FBS中；添加5μL的TruStainFcX/孔及板在4℃下培养10min。每孔添加十微升Alexa Fluor 674(AF647)结合的抗磷基STAT1抗体及在4℃下培养20min。培养后，每孔添加120μL的FACS缓冲剂及如上文描述离心板。用220μL的FACS缓冲剂重复清洗及将细胞重悬浮于120μL的FACS缓冲剂中。使用Fortessa血球计数器以获取数据及使用FlowJo软件进行分析。计算AF647途径中的几何平均荧光强度(Geo MFI)及使用棱镜软件以计算IC50。CTI-AF1是人类IFNβ的蛋白中和剂，其具有29.8±6.9pM的IC50(图8B)。
为评估CTI-AF1中和由重组IFNβ诱导的MxA(Mx1)基因表达的能力，将正常人皮肤成纤维细胞(HDF)接种于T-150烧瓶的成纤维细胞培养基中。为建立分析，使用胰蛋白酶/EDTA溶液将细胞移出烧瓶及接种于每种实验条件分配三个孔的48孔板中。在第3天，所述细胞用掺入0.15pM IFNβ的培养基刺激5小时，该培养基是用或未用在自10nM至0.016nM的范围内的CTI-AF1的稀释液预培养2小时。0.15pM IFNβ及50nM同种型对照抗体的组合是用作实验的阴性对照。5小时后，收获细胞，RNA是使用RNeasy微试剂盒分离及cDNA使用高容量cDNA逆转录试剂盒合成。Taqman实时PCR分析是于Vii A7系统(Thermo Fisher)中使用针对Mx1及B2M的人类基因特异性引子探针进行。相对定量(倍数变化)是使用如下ΔΔCt方法计算自所得Ct值：就各条件而言，内源性对照基因(B2M)的Ct值是自针对靶基因(Mx1)的各别Ct值中减去。这是接着针对未经处理的样本进行标准化以计算ΔΔCt值，其接着用以计算倍数变化(2-ΔΔCt)。同种型阴性对照抗体对MxA(Mx1)表达无影响；然而，在CTI-AF1的存在下，观察到基因转录的剂量依赖性抑制，IC50为29.4±23.5pM(图9)。
CTI-AF1中和的特异性是通过如先前针对图8B描述的相同pSTAT分析进行评估，然而，U937细胞是经最终浓度的20pM IFNβ或50pM IFNα刺激。选择不同浓度的I型IFN以提供STAT1磷酸化的相似程度，因为IFNα是IFNAR信号传导的较不有效的活化剂。相似的12个点、10倍稀释系列是用斯法利木单抗(SIF)针对IFNα中和作为阳性对照制得。如可见，CTI-AF1特异性抑制由IFNβ诱导的STAT1磷酸化，但不抑制由IFNα诱导的磷酸化(分别图10A及B)。单一实验是使用IFNω(以100pM)或IFNα14(以4pM)进行及CTI-AF1对由IFNω或IFNα14诱导的STAT1磷酸化无影响。
为确保CTI-AF1中和内源性表达的IFNβ，将正常人皮肤成纤维细胞接种于每种实验条件分配三个孔的48孔板中。在第3天，细胞是受或未受1μg/mL聚I:C及CTI-AF1(剂量范围：50pM至100nM)或100nM斯法利木单抗的稀释液的组合刺激。在2.5及24小时后，收获细胞，RNA使用RNeasy微试剂盒分离及cDNA使用高容量cDNA逆转录试剂盒合成。Taqman实时PCR及倍数变化计算是如上文描述进行(图9)。尽管由聚I:C刺激诱导的IFNβ的量未知，但MxA(Mx1)表达的剂量依赖性抑制在CTI-AF1的存在下可见(图11)。
实施例4：转化药理学(translational pharmacology)
在皮肌炎(DM)中IFNβ的PK/PD关系未经定义。存在可用于DM的无关可转化临床前模型及未了解临床前有效浓度(Ceff)。1型干扰素基因标签在临床上用作药理学调节的机械生物标记物(mechanistic biomarker)。1型干扰素基因是通常在DM及SLE患者中升高及1型干扰素基因标签的平均倍数变化先前已用于针对抗-IFNα(斯法利木单抗及罗塔利珠单抗)及抗-IFNAR(阿尼法鲁单抗)mAb的临床研究中。然而，基因标签调节的定量了解仍未建立及在体内暴露、靶接合、下游药理学及经时功效之间的关系仍不了解。人类有效剂量可行性预测是基于CTI-AF1中和皮肤中>95％的IFNβ的能力。
LC\MS\MS测定是用以测量临床血清及组织活检中的总IFNβ，及与CTI-AF1临床PK及KD的组合是用以评估及证实靶接合。血液及皮肤中的1型IFN基因标签及IP-10(CXCL10)是经评估为机械生物标记物。在DM患者中的后续验证机制(PoM)/早期功效信号(ESoE)研究中，使用皮肤皮肌炎疾病面积及严重性指数(CDASI)作为除任何相关机械生物标记物外的主要终点(结果生物标记物)。
药物动力学-药效动力学关系及人类剂量
在针对CTI-AF1的抗体药物暴露与IFNβ之间的药物动力学及药效动力学(PK/PD)关系已使用针对典型IgG1治疗、IFNβ-CTI-AF1平衡结合常数、皮肤及血清中的IFNβ浓度及IFNβ周转半衰期报道的PK参数进行模拟。
“作用位点”PK/PD模型是用以预测IFNβ于DM患者中的覆盖度。为达成功效，认为在低谷期具有>95％的IFNβ覆盖度是必要的。CTI-AF1的皮肤间质浓度是假定为血清浓度的30％。通过SPR(Biacore KD＝36.7pM)测定的CTI-AF1对IFNβ的结合亲和力是用于PK/PD建模。与此一致，在基于细胞的功能分析中，CTI-AF1显示由IFNβ诱导的STAT1磷酸化的有效中和(IC50 29.8pM)。
DM患者血清中的中值IFNβ浓度是3pg/mL(N＝26)；然而，DM患者皮肤中的IFNβ浓度未知。因此，在该模型中，IFNβ皮肤:血浆比率的影响是以10及100的比率进行研究。由于这是针对该模型的敏感参数，因此这些比率是用作建议边界条件以证实皮肤:血浆比率对目标覆盖度的影响。
IFNβ周转的体内半衰期是通过将3室模型拟合至针对IFNβ1a的人类PK数据(其包括3个IV剂量)进行评估。此拟合导致针对IFNβ周转的两个不同半衰期，其视为最相关的，取决于认为阶段及室在自3分钟(基于初始阶段)至126分钟(基于有效半衰期)的范围内变化。为增加此模型参数中的置信度，开发针对食蟹猴血清的IFNβ分析以用于食蟹猴。
IFNβ皮肤:血浆比率及IFNβ周转率是用于PK/PD模型的敏感参数。因此，人类有效剂量可行性评估是使用上文针对IFNβ皮肤:血浆比率及IFNβ周转率两者描述的范围进行。针对两个类似临床ESoE给药方案的实例评估显示于图12A至D(IV Q4W)及图13A至D(SCQ1W)中。150mg/mL的CTI-AF1溶解度将使2mg/kg的临床剂量变为可能，因为其可经由1mL注射笔递送。因此，2mg/kg的剂量是用于下文的剂量可行性评估。
图12A至D显示在2mg/kg IV Q4W的剂量下，与IFNβ皮肤:血浆比率无关，仅针对IFNβ的126min半衰期预测皮肤中>95％IFNβ覆盖度。若IFNβ的半衰期是3min，则预测皮肤中>95％IFNβ覆盖度需要高于2mg/kg的剂量。图13A至D显示在2mg/kg SC Q1W的剂量下，与IFNβ皮肤:血浆比率无关，仅针对IFNβ的126min半衰期预测皮肤中>95％IFNβ覆盖度。若IFNβ的半衰期是3min，则仅100的IFNβ皮肤:血浆比率将导致皮肤中以2mg/kg的>95％IFNβ覆盖度。对比之下，若IFNβ皮肤:血浆比率是10，达成>95％覆盖度将需要高于2mg/kg的剂量。
人类PK/暴露
基于食蟹猴中CTI-AF1的药物动力学曲线，预期人类中CTI-AF1的药物动力学与针对典型IgG1治疗报道的值相似。2室药物动力学参数值是汇总于表9中。CTI-AF1在预期有效剂量程度下的仿真浓度-时间曲线是绘示于图12A至D及13A至D的顶图中。
表9：人类中CTI-AF1的预计药物动力学参数
非临床药物动力学
CTI-AF1的IV及SC药物动力学已于食蟹猴中使用来自单剂量研究性毒性研究的数据进行评估。针对食蟹猴的平均血清药物动力学参数值汇总于表10中，CTI-AF1的平均血清浓度显示于图14中。
表10：食蟹猴中CTI-AF1药物动力学的汇总表
实施例5：作为针对SLE及DM的靶的IFNβ
越来越多证据表明IFN产生是与SLE及其他风湿性疾病(诸如DM)相关。然而，SLE疾病过程的永续性很可能涉及I型IFN的进一步产生及恶性发病周期。
DM是罕见的自体免疫性疾病(美国约20,000名患者)，其特征为骨骼肌及皮肤发炎，及伴随地，骨骼肌衰弱及皮疹。DM是通常与自体抗体相关联，该疾病的发病机制可涉及这些自体抗体对内皮自体抗原的顺序结合、触发补体活化及血管炎症，最终导致束周萎缩。
如图16A至B中显示，数据指示如通过皮肤皮肌炎疾病面积及严重性指数(CDASI)测量，DM血液中I型干扰素调节基因(IRG)转录本“标签”与皮疹活性的关联。高度IFNβ诱导型基因MxA(Mx1)是表达于DM束周肌纤维及毛细血管中，血液血清IFNβ(但非IFNα或IFNω)与DM相关联，但非与其他炎性肌病变或正常血清相关联。这些数据支持以下见解：DM中对毛细血管、肌纤维及皮肤的损伤来自IFNβ信息及蛋白质的病原性过度产生。数据亦已证实在CDASI评分与IFNβ蛋白的血清浓度之间的关联(图17)。经配对的皮肤活检的分析指示IFNβ及mRNA两者的存在及仅于受影响的组织中的IRG标签的上调(图18A至B)。总的，这些数据有力表明DM是由IFNβ驱动的疾病。
鉴于在许多组织内文中，IFNβ产生可先于IFNα产生及启动IRG标签表达的病原性升高，认为DM可为主要由IFNβ驱动的疾病，据信DM及SLE共享许多病原性特征及属性。实际上，若无法组织学上区分自那些SLE者，则DM的皮肤病变是难以区分的，及DM皮肤病变的诊断通常需要增加的CD4+及CXCR3+细胞类型的临床测定及Mx1的内皮表达。此外，DM及SLE两者的特征均在于B细胞活化及自体抗体介导的炎症及组织破坏。
表11：抗-IFNβ抗体的序列
实施例6：抗原决定基作图
为阐明通过CTI-AF1识别的抗原决定基，制造其中IFNβ序列的所选部分经IFNα序列置换的杂合IFNβ蛋白。CTI-AF1特异性中和IFNβ但非IFNα，因此CTI-AF1对中和给定杂合蛋白的失能将指示抗原决定基的损失。产生杂合蛋白，纯化及证实诱导STAT1磷酸化的能力(表12)。
表12：杂合IFN蛋白的序列
所有经纯化的杂合蛋白可诱导STAT1磷酸化，然而，在生物活性方面存在差异。各杂合蛋白是在EC80浓度下于下列磷基-STAT1分析(pSTAT1)中使用。U937细胞(人类单核细胞细胞系)是于含有10％FBS(cRPMI)的RPMI 1640中生长。抗体原液是以4×，用4至400μM的最高浓度(最终最高浓度是1至100μM)制得及在cRPMI中作出11个点、10倍稀释序列；在U型底96孔组织培养物板中，添加25μl/孔。将等体积4×杂交或对照IFNβ以适当的EC80浓度添加至抗体原液中及在37℃下培养2小时。对照孔包括单独培养基(无刺激背景pSTAT1表达)或未添加抗体(最大pSTAT1信号)。收获U937细胞，以1500rpm在室温下离心5min及然后以2×106/mL的浓度重悬浮于升温至37℃的cRPMI中；每孔添加50μL细胞悬浮液及将板在37℃下放置5分钟。接着，添加100μL预热的cytofix缓冲剂(BD Biosciences,catalog#554655)及将板放回原处，在37℃下放置15分钟。将板移除及如上文描述离心。自所述板中移除培养基，将细胞重悬浮及于200μL的PBS中清洗及再次离心。再次移除培养基，然后将细胞重悬浮于100μL透化缓冲剂IV(BD Biosciences)中及在室温下培养15分钟。在培养结束时，细胞是经离心及如上文描述进行清洗。在PBS清洗后，将细胞重悬浮于100μL的PBS/5％FBS(FACS缓冲剂)中；添加5μL的TruStain FcX/孔(BioLegend)及板在4℃下培养10min。每孔添加十微升Alexa Fluor 674(AF647)结合的抗磷基STAT1抗体(BD Biosciences)及在4℃下培养20min。培养后，每孔添加120μL的FACS缓冲剂及如上文描述离心板。用220μL的FACS缓冲剂重复清洗及将细胞重悬浮于120μL的FACS缓冲剂中；使用Fortessa血球计数器(BDBiosciences)以获取数据及使用FlowJo软件(TreeStar)进行分析。计算AF647途径中的几何平均荧光强度(Geo MFI)及使用棱镜软件以计算IC50。数据是在减去背景后经标准化为抗体浓度/IFN浓度的比率及最大信号的百分比。
U937细胞是在CTI-AF1的存在下经IFNα/IFNβ杂合蛋白刺激15分钟，在此之后，通过细胞内流动式细胞测量术评估磷酸化STAT1的存在。CTI-AF1不抑制CID1280依赖性STAT1磷酸化及针对由CID1281诱导的STAT1磷酸化中和的效力是大大减小。相对于人类IFNβ，CTI-AF1以相等的效力中和所有其他杂合IFN蛋白的STAT1磷酸化。参见图19及表13。经组合的这些数据指示通过CTI-AF1识别的抗原决定基残基是包含于构建体CID1280及CID1281内，其中IFNα序列取代分别跨越氨基酸85至89及90至100(参见表12)。
表13：由I型IFN诱导的STAT1磷酸化的经CTI-AF1介导的中和的IC50及倍数变化
IFN蛋白 IC<sub>50</sub>(nM) 来自IFNβ的倍数差异
人类IFNβ 0.3
CID1276 0.2 0.7
CID1277 0.3 0.9
CID1280 47.7 161.8
CID1281 3281.0 11137.1
CID1283 0.4 1.2
CID1285 0.4 1.4
CID1286 0.4 1.4
CID1287 0.3 1.0
实施例7：抗-IFNβ抗体的晶体结构
在食蟹猴IFNβ与CTI-AF1Fab之间的复合体的共结晶是使用作为沉淀剂的下列溶液生长：19％PEG 3350、250mM柠檬酸钠、100mM Bis-Tris丙烷pH 8.5。所述结晶属于间隔基团P21(晶胞参数：b＝94.86deg)及每个结晶非对称单元中含有复合体的两个副本。结构已在分辨率下使用分子置换方法进行测定及提纯使用自动BUSTER进行。
CTI-AF1Fab结合至IFNβ的由两个α-螺旋(A及C)形成的侧边上，A及C界定CTI-AF1的结合抗原决定基(表13)。
表13：抗原决定基分析
位于距离CTI-AF1内的所有氨基酸是经选择作为“潜在”抗原决定基残基。“一级”抗原决定基残基是特征为位于CTI-AF1-IFNβ界面处且在此位置处对任何其他氨基酸取代具有零-至-低序列耐受度的高隐蔽残基。“二级”抗原决定基残基是特征为位于该界面处具有中度掩蔽表面积且在这些位置处对氨基酸取代具有中度序列耐受度的残基。“可选”抗原决定基残基是特征为位于该界面处具有低掩蔽表面积且在这些位置处对氨基酸取代具有高序列耐受度的残基。
结合互补位是通过五个CDR可变区组成：CDR-H1、-H2、-H3及CDR-L1、-L3(表14)。在结合界面下经掩蔽的总表面积是CTI-AF1-IFNβ结合模式的分析揭示CTI-AF1的中和效应是通过在IFNAR1结合位点上直接阻断达成。
表14：互补位分析
位于距离IFNβ内的所有氨基酸是经选择作为“潜在”结合互补位。“一级”互补位残基是特征为位于CTI-AF1-IFNβ界面处且在此位置处对任何其他氨基酸取代具有低序列耐受度的高隐蔽残基及。“二级”互补位残基是特征为位于该界面处具有较低掩蔽表面积且在这些位置处对氨基酸取代具有较高序列耐受度的残基。
表15汇总抗原决定基-互补位相互作用对。表16汇总基于BSA的抗原决定基及互补位分析。
表15：抗原决定基-互补位相互作用对
表16：基于BSA的抗原决定基及互补位分析
实施例8：I型干扰素表达图谱
在本实施例中，我们研究响应于toll样受体配体刺激的4种疾病相关细胞系的I型IFN表达图谱。使用四种类型的细胞：PBMC、皮肤成纤维细胞细胞系、肌细胞系及肾细胞系，其是在有及无抗-IFNβ抗体的情况下经TLR3、TLR4、TLR7/8及TLR9激动剂刺激。
不同初级人类细胞类型中I型IFN及Mx1的基因表达水平是使用定量-PCR测量。初级细胞是培养于如下相关培养基中：FGM-2bulletkit培养基中的正常人皮肤成纤维细胞；MsGM bulletkit培养基中的正常人类肾小球膜及强直性肌生长培养基中的一级人类骨骼肌衍生的细胞。外周血液单核细胞(PBMC)是通过在Ficoll-Paque Plus上离心来分离。单核细胞是培养于用10％FBS及盘尼西林-链霉素补充的RPMI1640中。为测量I型IFN基因表达，接种细胞，然后经相关TLR配体刺激1、2.5、5、8及24小时。培养后，收获细胞，分离RNA及合成cDNA。下列基因的表达是通过Taqman PCR评估：IFNβ、Mx1、IFNα1、IFNα2、IFNα4、IFNα5、IFNα6、IFNα7、IFNα8、IFNα14、IFNα16、IFNα17及B2m。Taqman实时PCR及倍数变化计算是如上文描述进行(图9)。
表17A显示IFNβ是通过各种组织固有初级人类细胞类型经受Toll样受体(TLR)配体刺激即产生的主要I型IFN。来自正常人类供体的皮肤成纤维细胞、骨骼肌细胞、肾小球系膜细胞及PBMC是以时间-剂量依赖性方式经聚I:C(TLR3配体)、LPS(TLR4配体)、R848(TLR7/8配体)及ODN2216(TLR9配体)刺激。IFNβ、Mx1、IFNα的相对表达水平(1、2、4、5、6、7、8、14、16及17)是使用B2M作为对照经由定量-PCR进行测量。各基因的相对表达是指示为强(+)、弱(+/-)或无表达(-)。
CTI-AF1是显示为一种来自经TLR配体(聚I:C、LPS、R848或ODN2216)刺激的初级人类细胞的内源性产生的IFNβ的有效中和剂。细胞在缺乏或存在滴定量CTI-AF1的情况下经各种TLR配体刺激。Mx1的表达是在刺激后24小时内进行测量，但经LPS刺激的PBMC除外，其是在刺激后6小时内进行测量。RNA分离、cDNA合成及定量PCR是如上文描述进行(图9)。尽管一经TLR刺激即由任何细胞类型诱导的IFNβ的量未知，但Mx1表达的剂量依赖性抑制是在CTI-AF1的存在下可见。
表17B显示CTI-AF1是一种具有由初级人类细胞在聚I:C及LPS刺激后分泌的内源性IFNβ的有效抑制剂。细胞是经指定TLR配体刺激及定量-PCR是使用B2M作为对照来进行以测定Mx1表达水平。CTI-AF1对Mx1基因表达的剂量依赖性抑制是由“+”指示，而CTI-AF1依赖性Mx1表达抑制的缺乏是由“-”指示。可通过CTI-AF1潜在中和的其中I型IFN表达不足以驱动Mx1表达的任何有意义增加的情况是指示为NA。
表18：干扰素β蛋白的序列
以上各部分中提及本发明的各种特征及实施方式可在必要的变更下适宜地应用至其他部分。因此，一个部分中指定的特征可适宜地与其他部分中指定的特征组合。本文引用的所有参考文献包括专利、专利申请、论文、教科书及所援引的序列登录号，及本文引用的参考文献通过以全文引用的方式将其并入本文中。在并入本文中的文献及类似材料中的一或更多者不同于本申请(包括(但不限于)经定义的术语、术语使用、本文描述的技术或类似物)或与本申请相矛盾的事件中，以本申请为准。
序列表
&lt;110&gt; 辉瑞大药厂
布里格海姆妇女医院公司
&lt;120&gt; 干扰素β抗体及其用途
&lt;130&gt; PCFC-1000-WO1
&lt;140&gt;
&lt;141&gt;
&lt;150&gt; 62/483,669
&lt;151&gt; 2017-04-10
&lt;150&gt; 62/339,709
&lt;151&gt; 2016-05-20
&lt;150&gt; 62/329,327
&lt;151&gt; 2016-04-29
&lt;160&gt; 167
&lt;170&gt; PatentIn version 3.5
&lt;210&gt; 1
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 1
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Ile Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 2
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Val Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 3
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 3
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Val Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 4
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 4
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Val Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 5
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 5
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Val Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 6
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Asp Asn Phe
20 25 30
Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Val Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 7
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 7
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Val Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 8
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr Ile Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 9
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 9
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr Ile Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 10
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr Ile Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 11
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr Ile Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 12
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Asp Asn Phe
20 25 30
Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr Ile Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 13
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 13
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr Ile Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 14
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Ile Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 15
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 15
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Ile Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 16
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Ile Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 17
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 17
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Asp Asn Phe
20 25 30
Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Ile Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 18
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 18
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Ile Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 19
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 19
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Val Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 20
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Val Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 21
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 21
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Asp Asn Phe
20 25 30
Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Val Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 22
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr Ile Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 23
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 23
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr Ile Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 24
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Asp Asn Phe
20 25 30
Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Thr Ile Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 25
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 25
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Ile Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 26
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Ile Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 27
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 27
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Asp Asn Phe
20 25 30
Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Ile Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
&lt;210&gt; 28
&lt;211&gt; 119
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 28
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly His Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asp Tyr Gly Asn Leu Leu Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
&lt;210&gt; 29
&lt;211&gt; 330
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (330)..(330)
&lt;223&gt; /replace=" "
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(330)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 29
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
&lt;210&gt; 30
&lt;211&gt; 107
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 30
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
&lt;210&gt; 31
&lt;400&gt; 31
000
&lt;210&gt; 32
&lt;211&gt; 214
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Phe Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ile Ile Leu Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
&lt;210&gt; 33
&lt;211&gt; 449
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (449)..(449)
&lt;223&gt; /replace=" "
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(449)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 33
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly His Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asp Tyr Gly Asn Leu Leu Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
&lt;210&gt; 34
&lt;211&gt; 11
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 34
Arg Thr Ser Gln Asp Ile Gly Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
&lt;210&gt; 35
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 35
Ser Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
&lt;210&gt; 36
&lt;211&gt; 9
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 36
Gln Gln Gly Ile Ile Leu Pro Ile Thr
1 5
&lt;210&gt; 37
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 37
Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr Trp Met His
1 5 10
&lt;210&gt; 38
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 38
His Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
&lt;210&gt; 39
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 39
Trp Asp Tyr Gly Asn Leu Leu Phe Glu Tyr
1 5 10
&lt;210&gt; 40
&lt;211&gt; 187
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Homo sapiens
&lt;400&gt; 40
Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg
20 25 30
Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg
35 40 45
Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu
50 55 60
Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile
65 70 75 80
Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val
100 105 110
Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu
115 120 125
Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys
130 135 140
Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser
145 150 155 160
His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr
165 170 175
Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
180 185
&lt;210&gt; 41
&lt;211&gt; 166
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Homo sapiens
&lt;400&gt; 41
Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln
1 5 10 15
Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu
20 25 30
Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln
35 40 45
Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln
50 55 60
Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn
85 90 95
His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr
100 105 110
Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg
115 120 125
Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr
130 135 140
Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
165
&lt;210&gt; 42
&lt;211&gt; 161
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Mus sp.
&lt;400&gt; 42
Ile Asn Tyr Lys Gln Leu Gln Leu Gln Glu Arg Thr Asn Ile Arg Lys
1 5 10 15
Cys Gln Glu Leu Leu Glu Gln Leu Asn Gly Lys Ile Asn Leu Thr Tyr
20 25 30
Arg Ala Asp Phe Lys Ile Pro Met Glu Met Thr Glu Lys Met Gln Lys
35 40 45
Ser Tyr Thr Ala Phe Ala Ile Gln Glu Met Leu Gln Asn Val Phe Leu
50 55 60
Val Phe Arg Asn Asn Phe Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val
65 70 75 80
Val Arg Leu Leu Asp Glu Leu His Gln Gln Thr Val Phe Leu Lys Thr
85 90 95
Val Leu Glu Glu Lys Gln Glu Glu Arg Leu Thr Trp Glu Met Ser Ser
100 105 110
Thr Ala Leu His Leu Lys Ser Tyr Tyr Trp Arg Val Gln Arg Tyr Leu
115 120 125
Lys Leu Met Lys Tyr Asn Ser Tyr Ala Trp Met Val Val Arg Ala Glu
130 135 140
Ile Phe Arg Asn Phe Leu Ile Ile Arg Arg Leu Thr Arg Asn Phe Gln
145 150 155 160
Asn
&lt;210&gt; 43
&lt;211&gt; 163
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Rattus sp.
&lt;400&gt; 43
Ile Asp Tyr Lys Gln Leu Gln Phe Arg Gln Ser Thr Ser Ile Arg Thr
1 5 10 15
Cys Gln Lys Leu Leu Arg Gln Leu Asn Gly Arg Leu Asn Leu Ser Tyr
20 25 30
Arg Thr Asp Phe Lys Ile Pro Met Glu Val Met His Pro Ser Gln Met
35 40 45
Glu Lys Ser Tyr Thr Ala Phe Ala Ile Gln Val Met Leu Gln Asn Val
50 55 60
Phe Leu Val Phe Arg Ser Asn Phe Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr
65 70 75 80
Ile Val Glu Ser Leu Leu Asp Glu Leu His Gln Gln Thr Glu Leu Leu
85 90 95
Glu Ile Ile Leu Lys Glu Lys Gln Glu Glu Arg Leu Thr Trp Val Thr
100 105 110
Ser Thr Thr Thr Leu Gly Leu Lys Ser Tyr Tyr Trp Arg Val Gln Arg
115 120 125
Tyr Leu Lys Asp Lys Lys Tyr Asn Ser Tyr Ala Trp Met Val Val Arg
130 135 140
Ala Glu Val Phe Arg Asn Phe Ser Ile Ile Leu Arg Leu Asn Arg Asn
145 150 155 160
Phe Gln Asn
&lt;210&gt; 44
&lt;211&gt; 166
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Macaca fascicularis
&lt;400&gt; 44
Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Ser Phe Gln
1 5 10 15
Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu
20 25 30
Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Pro Gln
35 40 45
Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln
50 55 60
Asn Ile Tyr Ala Ile Phe Arg Gln Asp Leu Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asp
85 90 95
His Leu Lys Thr Ile Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr
100 105 110
Arg Gly Lys Phe Val Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg
115 120 125
Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr
130 135 140
Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Phe Phe Ile Asn Lys Leu
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
165
&lt;210&gt; 45
&lt;211&gt; 159
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Oryctolagus cuniculus
&lt;400&gt; 45
Met Ser Tyr Asn Ser Leu Gln Ile Gln Leu Trp His Gly Ser Leu Thr
1 5 10 15
Cys Ala Lys Leu Leu Leu Gln Leu Asn Gly Thr Thr Glu Asp Cys Leu
20 25 30
Asn Glu Arg Ile Asn Phe Lys Val Pro Lys Glu Ile Lys Glu Pro Gln
35 40 45
Gln Leu Gln Lys Glu Asp Thr Thr Leu Val Ile Phe Glu Met Leu Asn
50 55 60
Asn Ile Phe Asp Ile Phe Arg Lys Asn Phe Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Leu Val Glu Asn Leu Leu Gly Glu Thr His Leu Gln Ile His
85 90 95
His Leu Lys Ser Lys Ile Asn Lys Lys Val Thr Leu Glu Ser Ile Arg
100 105 110
Met Asn Leu Arg Leu Lys Ser Tyr Tyr Trp Arg Ile Met Asp Tyr Leu
115 120 125
Glu Thr Lys Gln Tyr Ser Asn Cys Ala Trp Lys Ile Val Gln Leu Glu
130 135 140
Ile Phe Arg Asn Phe Ser Phe Ile Ile Met Leu Ile Asp Tyr Leu
145 150 155
&lt;210&gt; 46
&lt;211&gt; 11
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 46
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
&lt;210&gt; 47
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 47
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
&lt;210&gt; 48
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 48
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro
1 5
&lt;210&gt; 49
&lt;211&gt; 16
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 49
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr
1 5 10 15
&lt;210&gt; 50
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 50
Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
&lt;210&gt; 51
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 51
Met Gln Ser Ile Gln Leu Pro
1 5
&lt;210&gt; 52
&lt;211&gt; 16
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 52
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
&lt;210&gt; 53
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 53
Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser
1 5
&lt;210&gt; 54
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 54
Met Gln Gly Thr His Trp Pro
1 5
&lt;210&gt; 55
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 55
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
&lt;210&gt; 56
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 56
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
&lt;210&gt; 57
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 57
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro
1 5
&lt;210&gt; 58
&lt;211&gt; 11
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 58
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
&lt;210&gt; 59
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 59
Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
&lt;210&gt; 60
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 60
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser
1 5
&lt;210&gt; 61
&lt;211&gt; 11
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 61
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
&lt;210&gt; 62
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 62
Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr
1 5
&lt;210&gt; 63
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 63
Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro
1 5
&lt;210&gt; 64
&lt;211&gt; 11
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 64
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
&lt;210&gt; 65
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 65
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
&lt;210&gt; 66
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 66
Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro
1 5
&lt;210&gt; 67
&lt;211&gt; 11
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 67
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala
1 5 10
&lt;210&gt; 68
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 68
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
&lt;210&gt; 69
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 69
Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro
1 5
&lt;210&gt; 70
&lt;211&gt; 11
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 70
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
&lt;210&gt; 71
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 71
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
&lt;210&gt; 72
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 72
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro
1 5
&lt;210&gt; 73
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 73
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
&lt;210&gt; 74
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 74
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
&lt;210&gt; 75
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 75
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
1 5
&lt;210&gt; 76
&lt;211&gt; 16
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 76
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
&lt;210&gt; 77
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 77
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
&lt;210&gt; 78
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 78
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro
1 5
&lt;210&gt; 79
&lt;211&gt; 11
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 79
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 80
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 80
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser
1 5
&lt;210&gt; 81
&lt;211&gt; 9
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 81
Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His
1 5
&lt;210&gt; 82
&lt;211&gt; 14
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 82
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
&lt;210&gt; 83
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 83
Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
&lt;210&gt; 84
&lt;211&gt; 9
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 84
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly
1 5
&lt;210&gt; 85
&lt;211&gt; 13
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 85
Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn Tyr Val Gln
1 5 10
&lt;210&gt; 86
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 86
Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser
1 5
&lt;210&gt; 87
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 87
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Asn
1 5
&lt;210&gt; 88
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 88
Thr Gly Ser Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Tyr Val Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 89
&lt;211&gt; 14
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 89
Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Gly Gly Ser Tyr Tyr Val Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 90
&lt;211&gt; 8
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 90
Glu Asn Asp Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
&lt;210&gt; 91
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (6)..(6)
&lt;223&gt; /replace="Asp"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (8)..(8)
&lt;223&gt; /replace="Gly"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(12)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 91
Glu Asp Ser Asn Arg Ser Lys Gln Gln Lys Pro Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 92
&lt;211&gt; 8
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (8)..(8)
&lt;223&gt; /replace="Thr"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(8)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 92
Gln Ser Trp Asp Ser Ser Ala Asn
1 5
&lt;210&gt; 93
&lt;211&gt; 11
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (8)..(8)
&lt;223&gt; /replace="Thr"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (10)..(10)
&lt;223&gt; /replace="Val"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (11)..(11)
&lt;223&gt; /replace="Val"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(11)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 93
Gln Ser Trp Asp Ser Ser Ala Asn Phe Phe Gly
1 5 10
&lt;210&gt; 94
&lt;211&gt; 13
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (11)..(11)
&lt;223&gt; /replace="Tyr"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (13)..(13)
&lt;223&gt; /replace="His" or "Ser"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(13)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 94
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn
1 5 10
&lt;210&gt; 95
&lt;211&gt; 14
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (12)..(12)
&lt;223&gt; /replace="Tyr"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (14)..(14)
&lt;223&gt; /replace="His" or "Ser"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(14)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 95
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn
1 5 10
&lt;210&gt; 96
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (4)..(4)
&lt;223&gt; /replace="Asn" or "Gln"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(7)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 96
Gly Asn Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
&lt;210&gt; 97
&lt;211&gt; 9
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (8)..(8)
&lt;223&gt; /replace="Ser"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(9)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 97
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly
1 5
&lt;210&gt; 98
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (5)..(5)
&lt;223&gt; /replace="Val"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (8)..(8)
&lt;223&gt; /replace="Ser"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(12)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 98
Cys Ser Gly Asp Ala Leu Gly Lys Lys Tyr Ala His
1 5 10
&lt;210&gt; 99
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 99
Lys Asp Ser Glu Arg Pro Ser
1 5
&lt;210&gt; 100
&lt;211&gt; 8
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (8)..(8)
&lt;223&gt; /replace="Asp" or "Thr" or "Ala"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(8)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 100
Gln Ser Trp Asp Ser Ser Gly Asn
1 5
&lt;210&gt; 101
&lt;211&gt; 9
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (8)..(8)
&lt;223&gt; /replace="Asp" or "Thr" or "Ala"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(9)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 101
Gln Ser Trp Asp Ser Ser Gly Asn His
1 5
&lt;210&gt; 102
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 102
Arg Ala Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Ile Ser Ser Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
&lt;210&gt; 103
&lt;211&gt; 11
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 103
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
&lt;210&gt; 104
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 104
Ala Ala Ser Ser Arg Ala Ser
1 5
&lt;210&gt; 105
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 105
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro
1 5
&lt;210&gt; 106
&lt;211&gt; 11
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (8)..(8)
&lt;223&gt; /replace="Ser"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(11)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 106
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
&lt;210&gt; 107
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 107
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
&lt;210&gt; 108
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 108
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro
1 5
&lt;210&gt; 109
&lt;211&gt; 16
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 109
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asp
1 5 10 15
&lt;210&gt; 110
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 110
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Asp Gly Asn Thr Tyr Leu
1 5 10 15
Asp
&lt;210&gt; 111
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (1)..(1)
&lt;223&gt; /replace="Thr"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (2)..(2)
&lt;223&gt; /replace="Ile"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (6)..(6)
&lt;223&gt; /replace="Phe"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(7)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 111
Lys Val Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
&lt;210&gt; 112
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 112
Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro
1 5
&lt;210&gt; 113
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (6)..(7)
&lt;223&gt; /replace="Val"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(12)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 113
Arg Ala Ser Gln Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
&lt;210&gt; 114
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 114
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
&lt;210&gt; 115
&lt;211&gt; 7
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (4)..(4)
&lt;223&gt; /replace="Asn" or "Gly" or "His"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(7)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 115
Gln Gln Tyr Ser Asn Trp Pro
1 5
&lt;210&gt; 116
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 116
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 117
&lt;211&gt; 18
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 117
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
&lt;210&gt; 118
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 118
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 119
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 119
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
&lt;210&gt; 120
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 120
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 121
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 121
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15
Ser
&lt;210&gt; 122
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 122
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His
1 5 10
&lt;210&gt; 123
&lt;211&gt; 18
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 123
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
1 5 10 15
Gln Gly
&lt;210&gt; 124
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 124
Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 125
&lt;211&gt; 18
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 125
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
1 5 10 15
Gln Gly
&lt;210&gt; 126
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 126
Gly Tyr Thr Gly Thr Ser Tyr Tyr Met His
1 5 10
&lt;210&gt; 127
&lt;211&gt; 18
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 127
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
1 5 10 15
Gln Gly
&lt;210&gt; 128
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 128
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His
1 5 10
&lt;210&gt; 129
&lt;211&gt; 18
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 129
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
&lt;210&gt; 130
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 130
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn
1 5 10
&lt;210&gt; 131
&lt;211&gt; 18
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 131
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
&lt;210&gt; 132
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 132
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 133
&lt;211&gt; 20
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 133
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
1 5 10 15
Pro Val Lys Gly
20
&lt;210&gt; 134
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 134
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly
1 5 10
&lt;210&gt; 135
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 135
Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15
Ser
&lt;210&gt; 136
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 136
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Asp Tyr Tyr Trp Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 137
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 137
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15
Ser
&lt;210&gt; 138
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 138
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly
1 5 10
&lt;210&gt; 139
&lt;211&gt; 18
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 139
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
1 5 10 15
Gln Gly
&lt;210&gt; 140
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (10)..(10)
&lt;223&gt; /replace="Ser"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(10)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 140
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His
1 5 10
&lt;210&gt; 141
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (10)..(10)
&lt;223&gt; /replace="Ser"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(12)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 141
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 142
&lt;211&gt; 18
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 142
Gly Trp Ile Ser Pro Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
&lt;210&gt; 143
&lt;211&gt; 20
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 143
Gly Trp Ile Ser Pro Lys Ala Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10 15
Ser Val Lys Gly
20
&lt;210&gt; 144
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 144
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 145
&lt;211&gt; 18
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (8)..(8)
&lt;223&gt; /replace="Ser"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(18)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 145
Ser Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
&lt;210&gt; 146
&lt;211&gt; 20
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (10)..(10)
&lt;223&gt; /replace="Ser"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(20)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 146
Ser Val Ile Ser Ser Lys Ala Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
1 5 10 15
Ser Val Lys Gly
20
&lt;210&gt; 147
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (10)..(10)
&lt;223&gt; /replace="Gly" or "His"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(10)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 147
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 148
&lt;211&gt; 18
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (2)..(2)
&lt;223&gt; /replace="Ile" or "Ser"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(18)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 148
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
1 5 10 15
Gln Gly
&lt;210&gt; 149
&lt;211&gt; 10
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (8)..(8)
&lt;223&gt; /replace="Tyr"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (9)..(9)
&lt;223&gt; /replace="Met"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(10)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 149
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala Ile His
1 5 10
&lt;210&gt; 150
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (6)..(6)
&lt;223&gt; /replace="Tyr"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(17)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 150
Gly Trp Ile Asn Pro Gly Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
1 5 10 15
Gln
&lt;210&gt; 151
&lt;211&gt; 12
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; VARIANT
&lt;222&gt; (8)..(8)
&lt;223&gt; /replace="Tyr"
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; MISC_FEATURE
&lt;222&gt; (1)..(12)
&lt;223&gt; /note="Variant residues given in the sequence have no
preference with respect to those in the annotations
for variant positions"
&lt;400&gt; 151
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Asn Tyr Tyr Trp Ser
1 5 10
&lt;210&gt; 152
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
&lt;400&gt; 152
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15
Ser
&lt;210&gt; 153
&lt;211&gt; 19
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Homo sapiens
&lt;400&gt; 153
Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln
1 5 10 15
Lys Leu Leu
&lt;210&gt; 154
&lt;211&gt; 19
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Homo sapiens
&lt;400&gt; 154
Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe
1 5 10 15
Ala Ile Phe
&lt;210&gt; 155
&lt;211&gt; 26
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Homo sapiens
&lt;400&gt; 155
Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn
1 5 10 15
His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu
20 25
&lt;210&gt; 156
&lt;211&gt; 17
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Homo sapiens
&lt;400&gt; 156
Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys
1 5 10 15
Ala
&lt;210&gt; 157
&lt;211&gt; 22
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Homo sapiens
&lt;400&gt; 157
His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr
1 5 10 15
Phe Ile Asn Arg Leu Thr
20
&lt;210&gt; 158
&lt;211&gt; 166
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 158
Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Arg Arg
1 5 10 15
Cys Leu Met Leu Leu Ala Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu
20 25 30
Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln
35 40 45
Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln
50 55 60
Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn
85 90 95
His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr
100 105 110
Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg
115 120 125
Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr
130 135 140
Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
165
&lt;210&gt; 159
&lt;211&gt; 166
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 159
Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln
1 5 10 15
Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu
20 25 30
Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Ile Pro Gln Glu Ile Lys Gln Leu Gln
35 40 45
Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln
50 55 60
Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn
85 90 95
His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr
100 105 110
Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg
115 120 125
Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr
130 135 140
Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
165
&lt;210&gt; 160
&lt;211&gt; 166
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 160
Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln
1 5 10 15
Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu
20 25 30
Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln
35 40 45
Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln
50 55 60
Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Ile Val Asp Lys Leu Leu Thr Asn Val Tyr His Gln Ile Asn
85 90 95
His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr
100 105 110
Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg
115 120 125
Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr
130 135 140
Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
165
&lt;210&gt; 161
&lt;211&gt; 166
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 161
Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln
1 5 10 15
Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu
20 25 30
Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln
35 40 45
Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln
50 55 60
Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Glu Val Tyr Gln Gln Ile Asn
85 90 95
Asp Leu Glu Ala Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr
100 105 110
Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg
115 120 125
Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr
130 135 140
Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
165
&lt;210&gt; 162
&lt;211&gt; 166
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 162
Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln
1 5 10 15
Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu
20 25 30
Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln
35 40 45
Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln
50 55 60
Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn
85 90 95
His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr
100 105 110
Arg Gly Lys Leu Met Ser Ile Leu His Leu Arg Lys Tyr Tyr Gly Arg
115 120 125
Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr
130 135 140
Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
165
&lt;210&gt; 163
&lt;211&gt; 166
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 163
Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln
1 5 10 15
Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu
20 25 30
Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln
35 40 45
Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln
50 55 60
Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn
85 90 95
His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr
100 105 110
Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg
115 120 125
Ile Leu His Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr
130 135 140
Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
165
&lt;210&gt; 164
&lt;211&gt; 166
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 164
Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln
1 5 10 15
Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu
20 25 30
Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln
35 40 45
Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln
50 55 60
Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn
85 90 95
His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr
100 105 110
Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg
115 120 125
Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Thr
130 135 140
Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
165
&lt;210&gt; 165
&lt;211&gt; 166
&lt;212&gt; PRT
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
&lt;400&gt; 165
Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln
1 5 10 15
Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu
20 25 30
Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln
35 40 45
Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln
50 55 60
Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn
65 70 75 80
Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn
85 90 95
His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr
100 105 110
Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg
115 120 125
Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr
130 135 140
Ile Val Arg Ala Glu Ile Leu Arg Asn Phe Ser Leu Ile Thr Arg Leu
145 150 155 160
Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
165
&lt;210&gt; 166
&lt;211&gt; 357
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
&lt;400&gt; 166
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcagcag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcagc cggtactgga tgcactgggt gcggcaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatgggccac atcgacccca gcgacagcta cacctactac 180
aaccagaagt tcaagggccg ggtgaccatc accgccgacg agagcaccag caccgcctac 240
atggagctga gcagcctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc ccggtgggac 300
tacggcaacc tgctgttcga gtactggggc cagggcaccc tggtgaccgt ctcgagc 357
&lt;210&gt; 167
&lt;211&gt; 321
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; Artificial Sequence
&lt;220&gt;
&lt;221&gt; source
&lt;223&gt; /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
&lt;400&gt; 167
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgcc ggaccagcca ggacatcggc aactacctga actggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggcct tcaagctgct gatctacagc accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag gggattattt tgcccattac cttcggcggc 300
ggcaccaagg tggagatcaa g 321

Claims (35)

1.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其以比所述抗体针对人类IFNα的结合亲和力(KD)值小至少1000倍的KD值特异性结合人类干扰素β(IFNβ)。
2.权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段基本上不结合人类IFNα。
3.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ中的抗原决定基，其中所述抗原决定基包含根据SEQ ID NO:41的编号的氨基酸残基85至100的一个或更多个残基。
4.权利要求3的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原决定基包含一个或更多个选自由以下组成的组的残基：根据SEQ ID NO:41的编号的Ala89、Tyr 92、His93及His97。
5.权利要求4的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原决定基进一步包含一个或更多个选自由以下组成的组的残基：根据SEQ ID NO:41的编号的Phe8、Leu9、Ser12、Gln16、Asn86、Asn90、Asp96及Thr100。
6.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，包含：
(i)重链可变区(VH)，其包含：
(a)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的VH互补决定区一(CDR-H1)，
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VH CDR-H2；及
(c)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VH CDR-H3；及
(ii)轻链可变区(VL)，其包含：
(a)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL互补决定区一(CDR-L1)，
(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL CDR-L2；及
(c)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的VL CDR-L3。
7.权利要求6的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含(i)包含人类生殖系DP10、DP-88、DP-25、DP-73、IGHV5-10-1*01、IGHV5-10-1*04、DP-14、DP-75、DP15、DP-8、DP-7或IGHV7-4-1*02的框架序列的VH框架；(ii)包含人类生殖系DPK9、DPK5、DPK4、DPK1、IGKV1-5*01、DPK24、DPK21、DPK15、IGKV1-13*02、IGKV1-17*01、DPK8、IGKV3-11*01或DPK22的框架序列的VL框架。
8.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，包含(i)包含一个或更多个选自由以下组成的组的互补位(paratope)残基的VH：根据Kabat编号的CDR-H1中的Trp33、CDR-H2中的Tyr56、CDR-H2中的Tyr58及CDR-H3中的Tyr97，及(ii)包含一个或更多个选自由以下组成的组的互补位残基的VL：根据Kabat编号的CDR-L1中的Tyr32、CDR-L3中的Ile92及CDR-L3中的Leu94。
9.权利要求8的抗体或其抗原结合片段，其中(i)所述VH进一步包含一个或更多个选自由以下组成的组的互补位残基：根据Kabat编号的CDR-H2中的Asp54、CDR-H2中的Gln61、CDR-H3中的Gly98及CDR-H3中的Leu100，及(ii)所述VL进一步包含一个或更多个选自由以下组成的组的互补位残基：根据Kabat编号的CDR-L1中的Gln27、CDR-L1中的Asp28、CDR-L1中的Ile29、CDR-L1中的Gly30及CDR-L3中的Ile93。
10.权利要求8或9的抗体或其抗原结合片段，其中：
(i)所述VH包含：
(a)包含Trp33及相较于SEQ ID NO:37的三个或更少个氨基酸差异的CDR-H1，
(b)包含Asp54、Tyr56、Tyr58及Gln61及相较于SEQ ID NO:38的三个或更少个氨基酸差异的CDR-H2；及
(c)包含Tyr97、Gly98及Leu100及相较于SEQ ID NO:39的三个或更少个氨基酸差异的CDR-H3；及
(ii)所述VL包含：
(a)包含Gln27、Asp28、Ile29、Gly30、Tyr32及相较于SEQ ID NO:34的三个或更少个氨基酸差异的CDR-L1，
(b)包含包括相较于SEQ ID NO:35的三个或更少个氨基酸差异的序列的CDR-L2；及
(c)包含Ile92、Ile93及Leu94及相较于SEQ ID NO:36的三个或更少个氨基酸差异的CDR-L3，
其中CDR-H1、CDR-H2、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3中的所述氨基酸差异是人类生殖系取代，其中非人类CDR残基是经相应的人类生殖系残基置换。
11.权利要求1至10中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括SEQ ID NO:28的氨基酸序列的VH。
12.权利要求1至11中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链恒定区(CH)。
13.权利要求1至12中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VL。
14.权利要求1至13中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链恒定区(CL)。
15.权利要求1至14中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链。
16.权利要求1至15中任一项的抗体或其抗原结合片段，其包含包括SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链。
17.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，包含(a)SEQ IDNO:28的CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及(b)
i)SEQ ID NO:2的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
ii)SEQ ID NO:3的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
iii)SEQ ID NO:4的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
iv)SEQ ID NO:5的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
v)SEQ ID NO:6的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
vi)SEQ ID NO:7的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
vii)SEQ ID NO:8的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
viii)SEQ ID NO:9的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
ix)SEQ ID NO:10的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
x)SEQ ID NO:11的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xi)SEQ ID NO:12的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xii)SEQ ID NO:13的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xiii)SEQ ID NO:14的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xiv)SEQ ID NO:15的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xv)SEQ ID NO:16的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xvi)SEQ ID NO:17的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xvii)SEQ ID NO:18的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xviii)SEQ ID NO:19的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xix)SEQ ID NO:20的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xx)SEQ ID NO:21的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xxi)SEQ ID NO:22的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xxii)SEQ ID NO:23的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xxiii)SEQ ID NO:24的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xxiv)SEQ ID NO:25的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；
xxv)SEQ ID NO:26的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或
xxvi)SEQ ID NO:27的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。
18.一种经分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合人类IFNβ，包含包括SEQ IDNO:28的氨基酸序列的VH，及包含SEQ ID NO:2至27中任一者的氨基酸序列的VL。
19.权利要求1至18中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段以自约1×10-9M至约1×10-13M的结合亲和力(KD)值特异性结合IFNβ。
20.权利要求1至19中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段：(a)抑制IFNβ及IFNAR的结合；(b)减少IFNβ依赖性基因的表达水平；及/或(c)抑制IFNβ诱导的STAT1磷酸化及/或STAT2磷酸化。
21.权利要求1至20中任一项的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段以自约1×10-9M至约1×10-13M的IC50值抑制IFNβ和IFNAR的结合。
22.一种经分离的核酸分子，其包含编码权利要求1至21中任一项的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。
23.权利要求6的抗体或其抗原结合片段，其包含由以下编码的VH序列：
a.于ATCC保藏且具有ATCC登录号PTA-122727的质粒中的DNA插入物；或
b.包含SEQ ID NO:166的序列的核酸；
及进一步包含由以下编码的VL序列：
a.于ATCC保藏且具有ATCC登录号PTA-122726的质粒中的DNA插入物；或
b.包含SEQ ID NO:167的序列的核酸。
24.一种编码特异性结合人类IFNβ的抗体或其抗原结合片段的经分离的核酸，其包含：
(i)包含以下的VH：
(a)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的VH CDR-H1；
(b)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VH CDR-H2；及
(c)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VH CDR-H3；及
(ii)包含以下的VL：
(a)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL CDR-L1，
(b)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL CDR-L2；及
(c)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的VL CDR-L3。
25.一种经分离的核酸，其包含：(i)SEQ ID NO:166的核苷酸序列；(ii)SEQ ID NO:167的核苷酸序列；(iii)于ATCC保藏且具有登录号PTA-122727的质粒的插入物的核苷酸序列；或(iv)于ATCC保藏且具有登录号PTA-122726的质粒的插入物的核苷酸序列。
26.一种载体，其包含权利要求22至25中任一项的核酸分子。
27.一种宿主细胞，其包含权利要求22至25中任一项的核酸分子或权利要求26的载体。
28.一种产生抗体或其抗原结合片段的方法，其包括：培养权利要求27的宿主细胞，所述培养在该宿主细胞产生所述抗体或其抗原结合片段的条件下进行。
29.一种药物组合物，其包含权利要求1至21及23中任一项的抗体或其抗原结合片段及药学上可接受的赋形剂。
30.一种减小有此需要的受试者中IFNβ的活性的方法，其包括向所述受试者施用权利要求1至21及23中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求29的药物组合物。
31.一种治疗风湿性疾病的方法，其包括向有此需要的受试者施用权利要求1至21及23中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求29的药物组合物。
32.一种治疗皮肌炎(DM)的方法，其包括向有此需要的受试者施用权利要求1至21及23中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求29的药物组合物。
33.一种治疗系统性红斑狼疮(SLE)的方法，其包括向有此需要的受试者施用权利要求1至21及23中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求的药物组合物。
34.一种治疗干扰素疾病的方法，其包括向有此需要的受试者施用权利要求1至21及23中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求29的药物组合物。
35.一种治疗有此需要的受试者中由增加的IFNβ活性所介导或与增加的IFNβ活性相关的疾病、失调症或病症的方法，其包括向所述受试者施用权利要求1至21及23中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求29的药物组合物。
CN201780025961.XA 2016-04-29 2017-04-28 干扰素β抗体及其用途 Active CN109069606B (zh)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662329327P 2016-04-29 2016-04-29
US62/329,327 2016-04-29
US201662339709P 2016-05-20 2016-05-20
US62/339,709 2016-05-20
US201762483669P 2017-04-10 2017-04-10
US62/483,669 2017-04-10
PCT/US2017/030089 WO2017189983A1 (en) 2016-04-29 2017-04-28 Interferon beta antibodies and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109069606A true CN109069606A (zh) 2018-12-21
CN109069606B CN109069606B (zh) 2022-07-01

Family

ID=59215947

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780025961.XA Active CN109069606B (zh) 2016-04-29 2017-04-28 干扰素β抗体及其用途

Country Status (29)

Country Link
US (3) US10829553B2 (zh)
EP (2) EP3448419B1 (zh)
JP (2) JP6799076B2 (zh)
KR (1) KR102527840B1 (zh)
CN (1) CN109069606B (zh)
AU (1) AU2017258492B2 (zh)
BR (1) BR112018072118A2 (zh)
CA (1) CA2965652A1 (zh)
CO (1) CO2018012497A2 (zh)
DK (1) DK3448419T3 (zh)
ES (1) ES2950288T3 (zh)
FI (1) FI3448419T3 (zh)
HR (1) HRP20230605T1 (zh)
HU (1) HUE063621T2 (zh)
IL (1) IL262244B2 (zh)
MX (1) MX2018013222A (zh)
MY (1) MY194084A (zh)
NZ (1) NZ747225A (zh)
PE (1) PE20190371A1 (zh)
PH (1) PH12018502275A1 (zh)
PL (1) PL3448419T3 (zh)
PT (1) PT3448419T (zh)
RU (1) RU2750454C2 (zh)
SA (1) SA518400327B1 (zh)
SG (1) SG11201809456UA (zh)
SI (1) SI3448419T1 (zh)
TW (1) TWI776808B (zh)
WO (1) WO2017189983A1 (zh)
ZA (1) ZA201806682B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020156474A1 (en) * 2019-01-31 2020-08-06 Immunecent Biotechnology, Inc. Novel anti-ifnar1 antibodies

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUE063621T2 (hu) 2016-04-29 2024-01-28 Pfizer ß-interferon elleni ellenanyagok és alkalmazásuk
WO2019040674A1 (en) 2017-08-22 2019-02-28 Sanabio, Llc SOLUBLE INTERFERON RECEPTORS AND USES THEREOF
US20210070871A1 (en) 2018-04-25 2021-03-11 Prometheus Biosciences, Inc. Optimized anti-tl1a antibodies
KR20220103721A (ko) 2019-10-24 2022-07-22 프로메테우스 바이오사이언시즈, 인크. Tnf 유사 리간드 1a(tl1a)에 대한 인간화 항체 및 그의 용도
CN114733455B (zh) * 2022-04-15 2023-02-14 北京田园奥瑞生物科技有限公司 一种利用生物改性β-环糊精纳米磁颗粒进行快速哺乳动物精子分型的方法
WO2024062420A1 (en) * 2022-09-22 2024-03-28 Pfizer Inc. METHODS OF TREATMENT WITH IFNß ANTIBODIES

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5869603A (en) * 1988-10-14 1999-02-09 Schering Aktiengesellschaft Peptides representing eptiopic sites on r-IFN-β, antibodies thereto, and uses thereof
US6010864A (en) * 1988-10-14 2000-01-04 Schering Aktiengellschaft Peptides representing epitopic sites on r-IFN-β,antibodies thereto, and uses thereof
CN102898521A (zh) * 2011-07-26 2013-01-30 上海市免疫学研究所 抗β-干扰素单克隆抗体及其应用
CN103596983A (zh) * 2011-04-07 2014-02-19 基因泰克公司 抗fgfr4抗体及使用方法
CN108348600A (zh) * 2015-06-26 2018-07-31 比奥贝拉蒂美国公司 治疗自身免疫病症和同种免疫病症的方法

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4754065A (en) 1984-12-18 1988-06-28 Cetus Corporation Precursor to nucleic acid probe
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL108584A (en) 1994-02-07 2008-03-20 Yeda Res & Dev Cloning of the interferon-binding protein ALPHA / BETA
ZA9811070B (en) 1997-12-08 2000-07-03 Genentech Inc Type I interferons.
JP2005512044A (ja) 2001-12-03 2005-04-28 アブジェニックス・インコーポレーテッド 結合特性に基づく抗体分類
CA2492671C (en) 2002-03-22 2012-04-17 Aprogen, Inc. Humanized antibody and process for preparing same
EP2270048B1 (en) 2002-12-24 2015-11-11 Rinat Neuroscience Corp. Anti-NGF antibodies and methods using same
US10647756B2 (en) 2015-05-18 2020-05-12 Pfizer Inc. Humanized antibodies
HUE063621T2 (hu) 2016-04-29 2024-01-28 Pfizer ß-interferon elleni ellenanyagok és alkalmazásuk

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5869603A (en) * 1988-10-14 1999-02-09 Schering Aktiengesellschaft Peptides representing eptiopic sites on r-IFN-β, antibodies thereto, and uses thereof
US6010864A (en) * 1988-10-14 2000-01-04 Schering Aktiengellschaft Peptides representing epitopic sites on r-IFN-β,antibodies thereto, and uses thereof
CN103596983A (zh) * 2011-04-07 2014-02-19 基因泰克公司 抗fgfr4抗体及使用方法
CN102898521A (zh) * 2011-07-26 2013-01-30 上海市免疫学研究所 抗β-干扰素单克隆抗体及其应用
CN108348600A (zh) * 2015-06-26 2018-07-31 比奥贝拉蒂美国公司 治疗自身免疫病症和同种免疫病症的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RUNKEL L等: ""Mapping of IFN-beta epitopes important for receptor binding and biologic activation: comparison of results achieved using antibody-based methods and alanine substitution mutagenesis"", 《JOURNAL INTERFERON CYTOKINE RES》 *
SHEEHAN KC等: ""Selective Blockade of Interferon-α and -β Reveals Their Non-Redundant Functions in a Mouse Model of West Nile Virus Infection"", 《PLOS ONE》 *
SOMINANDA A等: ""Inhibition of Endogenous Interferon Beta by Neutralizing Antibodies Against Recombinant Interferon Beta"", 《ARCH NEUROL》 *
张登央等: ""重组人β干扰素1a(rhIFN-β1a)单克隆抗体的制备"", 《细胞与分子免疫学杂志》 *
钦伦秀: "《肿瘤的分子诊断与预防》", 31 December 2004, 上海科技教育出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020156474A1 (en) * 2019-01-31 2020-08-06 Immunecent Biotechnology, Inc. Novel anti-ifnar1 antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
RU2018141839A3 (zh) 2020-10-16
IL262244B2 (en) 2024-01-01
US11858986B2 (en) 2024-01-02
JP2021040642A (ja) 2021-03-18
JP2019516366A (ja) 2019-06-20
US20210163588A1 (en) 2021-06-03
SI3448419T1 (sl) 2023-10-30
CN109069606B (zh) 2022-07-01
HRP20230605T1 (hr) 2023-09-29
IL262244A (en) 2018-11-29
US20240174742A1 (en) 2024-05-30
PT3448419T (pt) 2023-07-26
RU2750454C2 (ru) 2021-06-28
TW201739764A (zh) 2017-11-16
HUE063621T2 (hu) 2024-01-28
IL262244B1 (en) 2023-09-01
US20170313769A1 (en) 2017-11-02
PE20190371A1 (es) 2019-03-08
AU2017258492B2 (en) 2023-12-07
EP3448419A1 (en) 2019-03-06
EP4273165A3 (en) 2023-12-20
TWI776808B (zh) 2022-09-11
SG11201809456UA (en) 2018-11-29
JP6799076B2 (ja) 2020-12-09
MX2018013222A (es) 2019-04-22
FI3448419T3 (fi) 2023-08-02
BR112018072118A2 (pt) 2019-03-19
CO2018012497A2 (es) 2018-12-14
EP3448419B1 (en) 2023-06-07
EP4273165A2 (en) 2023-11-08
JP7102489B2 (ja) 2022-07-19
KR20190003625A (ko) 2019-01-09
AU2017258492A1 (en) 2018-10-25
MY194084A (en) 2022-11-11
PL3448419T3 (pl) 2023-09-04
WO2017189983A1 (en) 2017-11-02
ZA201806682B (en) 2022-05-25
NZ747225A (en) 2022-07-29
ES2950288T3 (es) 2023-10-06
SA518400327B1 (ar) 2022-12-03
KR102527840B1 (ko) 2023-05-03
PH12018502275A1 (en) 2019-09-09
DK3448419T3 (da) 2023-06-26
US10829553B2 (en) 2020-11-10
RU2018141839A (ru) 2020-05-29
CA2965652A1 (en) 2017-10-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11525010B2 (en) Antibodies specific for GUCY2c and uses thereof
CN109069606A (zh) 干扰素β抗体及其用途
CN109415436A (zh) 抗il-33抗体及其组合物、方法及用途
JP2022531113A (ja) 組換えポリクローナルタンパク質およびその使用方法
CN109071664A (zh) 新型抗-SIRPa抗体及其治疗应用
TWI840399B (zh) 結合人il-4r的抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途
CN110267989B (zh) 抗cd40抗体、其抗原结合片段及其医药用途
SA111320266B1 (ar) أجسام مضادة مع ارتباط مولد مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني
KR20200014441A (ko) 항cxcr3 항체
CN110790839A (zh) 抗pd-1抗体、其抗原结合片段及医药用途
US20180057581A1 (en) Antibodies targeting m-csf
KR20200092976A (ko) 항-cd137 항체 및 이의 용도
CN114728171A (zh) 抗tigit抗体及其应用
US11365253B2 (en) Anti-ROBO2 antibodies, compositions, methods and uses thereof
US20240076382A1 (en) CD1a ANTIBODIES AND USES THEREOF
CA3124356A1 (en) Fn14 antibodies and uses thereof
CA3214281A1 (en) Antibodies specific to sialic acid-binding ig-like lectin 15 and uses thereof
JP2022538374A (ja) Ｐｄｇｆ－ｂおよびｐｄｇｆ－ｄに結合する抗原結合分子ならびにその使用
CN113631188A (zh) 抗pd-l1结合蛋白及其使用方法
RU2812113C2 (ru) Антитела против gucy2c и их применение
RU2779128C2 (ru) Антитело к cd40, его антигенсвязывающий фрагмент и его медицинское применение
KR20230145929A (ko) CD1a 항체 및 그의 용도
JP2023153754A (ja) ＣＤ１ａ抗体およびその使用
KR20240004375A (ko) Il-38-특이적 항체
TW202413405A (zh) 抗體、其抗原結合片段及其藥物用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1263200

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant