CN108586363A - 一种l-丝-l-酪环二肽和d-丝-l-酪环二肽的分离提纯方法 - Google Patents

一种l-丝-l-酪环二肽和d-丝-l-酪环二肽的分离提纯方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108586363A
CN108586363A CN201810058986.6A CN201810058986A CN108586363A CN 108586363 A CN108586363 A CN 108586363A CN 201810058986 A CN201810058986 A CN 201810058986A CN 108586363 A CN108586363 A CN 108586363A
Authority
CN
China
Prior art keywords
junket
cyclic dipeptides
extracting solution
cyclic
dipeptides
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810058986.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108586363B (zh
Inventor
刘逊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Vocational Health College
Original Assignee
Suzhou Vocational Health College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Vocational Health College filed Critical Suzhou Vocational Health College
Priority to CN201810058986.6A priority Critical patent/CN108586363B/zh
Publication of CN108586363A publication Critical patent/CN108586363A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108586363B publication Critical patent/CN108586363B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/06—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having one or two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/08—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having one or two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with oxygen atoms directly attached to ring carbon atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明提供了一种L‑丝‑L‑酪环二肽和D‑丝‑L‑酪环二肽的分离提纯方法，包括以下步骤：（1）将穿山甲药材砂炒炮制为炮山甲或醋山甲；（2）将炮山甲或醋山甲打粉，过100目筛，然后通过第一溶剂提取后脱脂得到提取液和药渣，将第一溶剂提取后的药渣再通过第二溶剂提取得到提取液，将两次的提取液合并，减压浓缩得到浸膏；（3）将浸膏用甲醇溶解拌硅胶上柱，并用TLC碘显色监控；（4）将步骤（3）得到的流份用反相高效液相色谱纯化，以乙睛‑水流动相，洗脱液减压浓缩除去乙睛和水，干燥，得到L‑丝‑L‑酪环二肽和D‑丝‑L‑酪环二肽。

Description

一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法
技术领域
本发明涉及中药有效成分提取领域，具体涉及一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法。
背景技术
穿山甲来源于鲮鲤科动物中华穿山甲的鳞甲，需砂炒方可入药，有活血消癥之功，临床疗效确切。穿山甲在高温砂炒过程中，新增了L-丝-L-酪环二肽，D-丝-L-酪环二肽。
环二肽作为一类活性物质，目前受了越来越多的关注，表现出了抗炎、抗肿瘤、抗凝、神经保护、免疫调节等多种显著的生物活性。由于角蛋白特殊的分子结构使角蛋白难以消化分解,当把角蛋白分解为多肽或氨基酸时方可消化吸收，穿山甲角蛋白在炮制过程中，由于温度升高，蛋白质吸收的能量超过了分子间作用力，导致肽键断裂，从而引起蛋白变性。蛋白炮制产物进入人体后，肠道内对蛋白质的利用并不局限于游离氨基酸的形式，而大部分是以寡肽形式吸收的，在消化过程中，L-丝-L-酪环二肽，D-丝-L-酪环二肽可以通过肠道吸收而进入血液循环从而在全身发挥作用，也可以在胃肠道中产生局部效应，吸收速度比相同组成的氨基酸更快。其吸收机制优于蛋白质和氨基酸。
发明内容
要解决的技术问题：本发明的目的是提供从穿山甲中简便易行分离纯化L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的方法。
技术方案：一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，包括以下步骤：
（1）将穿山甲药材砂炒炮制为炮山甲或醋山甲；
（2）将炮山甲或醋山甲打粉，过100目筛，然后通过第一溶剂提取后脱脂得到提取液和药渣，将第一溶剂提取后的药渣再通过第二溶剂提取得到提取液，将两次的提取液合并，减压浓缩得到浸膏；
（3）将浸膏用甲醇溶解拌硅胶上柱，固定相为200-300目硅胶，流动相为二氯甲烷：丙酮：乙醇体积比为1-20:1-2:1洗脱，并用TLC碘显色监控，合并二氯甲烷-丙酮-乙醇的体积比为10:2:1的流份；
（4）将步骤（3）得到的流份用反相高效液相色谱纯化，以乙睛-水流动相，洗脱液减压浓缩除去乙睛和水，干燥，得到纯度96%以上的L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽。
进一步的，所述步骤（2）中第一溶剂为二氯甲烷，将炮山甲或醋山甲粉加入5-10倍量的二氯甲烷提取3-5次，每次1小时。
进一步的，所述步骤（2）中第二溶剂为浓度为50wt%的乙醇，将药渣加入5-10倍重量份的50%乙醇提取4-5次，每次1小时。
进一步的，所述步骤（3）中每10g浸膏用50ml甲醇溶解，用20g硅胶拌匀。
进一步的，所述步骤（4）中反相高效液相色谱条件为：柱温30℃，检测波长210nm或230nm。
进一步的，所述步骤（4）中乙睛-水流动相为浓度为1-4wt%乙腈水溶液，洗脱液洗脱流速为2-6ml/min，洗脱时间20-60分钟。
有益效果：本发明以穿山甲炮制品为原料分离纯化L-丝-L-酪环二肽，D-丝-L-酪环二肽，方法简单，成本低，具有可持续性，制得的化L-丝-L-酪环二肽，D-丝-L-酪环二肽纯度高均大于97%和96%，对进一步开展 L-丝-L-酪环二肽，D-丝-L-酪环二肽药理学研究和穿山甲替代资源的寻找具有重要意义。
附图说明
图1为L-丝-L-酪环二肽质谱图；
图2为L-丝-L-酪环二肽NMR1H谱；
图3为L-丝-L-酪环二肽NMR13Ｃ谱；
图4为D-丝-L-酪环二肽质谱图；
图5为D-丝-L-酪环二肽NMR1H谱；
图6为D-丝-L-酪环二肽NMR13Ｃ谱。
具体实施方式
实施例1
一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，包括以下步骤：
（1）将穿山甲药材砂炒炮制为炮山甲；
（2）将炮山甲打粉，过100目筛，然后加入5倍量的二氯甲烷提取3次，每次1小时，然后脱脂得到提取液和药渣，将二氯甲烷提取后的药渣加入5倍重量份的50wt%的乙醇提取4次，每次1小时，得到提取液，将两次的提取液合并，减压浓缩得到浸膏；
（3）将浸膏用甲醇溶解拌硅胶上柱，其中，每10g浸膏用50ml甲醇溶解，用20g硅胶拌匀，固定相为200目硅胶，流动相为二氯甲烷：丙酮：乙醇体积比为1:1:1洗脱，并用TLC碘显色监控，合并二氯甲烷-丙酮-乙醇的体积比为10:2:1的流份；
（4）将步骤（3）得到的流份用反相高效液相色谱纯化，其中柱温30℃，检测波长210nm，以4wt%乙腈水溶液作为洗脱液，其中，脱流速为6ml/min，洗脱时间20分钟，洗脱液减压浓缩除去乙睛和水，干燥，先后得到L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽，其中L-丝-L-酪环二肽的纯度为96.0%，D-丝-L-酪环二肽的纯度为97.1%。
实施例2
一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，包括以下步骤：
（1）将穿山甲药材砂炒炮制为醋山甲；
（2）将醋山甲打粉，过100目筛，然后加入10倍量的二氯甲烷提取5次，每次1小时，然后脱脂得到提取液和药渣，将二氯甲烷提取后的药渣加入10倍重量份的50wt%的乙醇提取5次，每次1小时，得到提取液，将两次的提取液合并，减压浓缩得到浸膏；
（3）将浸膏用甲醇溶解拌硅胶上柱，其中，每10g浸膏用50ml甲醇溶解，用20g硅胶拌匀，固定相为300目硅胶，流动相为二氯甲烷：丙酮：乙醇体积比为20:2:1洗脱，并用TLC碘显色监控，合并二氯甲烷-丙酮-乙醇的体积比为10:2:1的流份；
（4）将步骤（3）得到的流份用反相高效液相色谱纯化，其中柱温30℃，检测波长230nm，以1wt%乙腈水溶液作为洗脱液，其中，脱流速为2ml/min，洗脱时间60分钟，洗脱液减压浓缩除去乙睛和水，干燥，先后得到L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽，其中L-丝-L-酪环二肽的纯度为96.2%，D-丝-L-酪环二肽的纯度为97.0%。
实施例3
一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，包括以下步骤：
（1）将穿山甲药材砂炒炮制为炮山甲；
（2）将炮山甲打粉，过100目筛，然后加入7倍量的二氯甲烷提取3次，每次1小时，然后脱脂得到提取液和药渣，将二氯甲烷提取后的药渣加入8倍重量份的50wt%的乙醇提取5次，每次1小时，得到提取液，将两次的提取液合并，减压浓缩得到浸膏；
（3）将浸膏用甲醇溶解拌硅胶上柱，其中，每10g浸膏用50ml甲醇溶解，用20g硅胶拌匀，固定相为220目硅胶，流动相为二氯甲烷：丙酮：乙醇体积比为20:1:1洗脱，并用TLC碘显色监控，合并二氯甲烷-丙酮-乙醇的体积比为10:2:1的流份；
（4）将步骤（3）得到的流份用反相高效液相色谱纯化，其中柱温30℃，检测波长210nm，以2wt%乙腈水溶液作为洗脱液，其中，脱流速为3ml/min，洗脱时间30分钟，洗脱液减压浓缩除去乙睛和水，干燥，先后得到L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽，其中L-丝-L-酪环二肽的纯度为96.5%，D-丝-L-酪环二肽的纯度为97.2%。
实施例4
一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，包括以下步骤：
（1）将穿山甲药材砂炒炮制为醋山甲；
（2）将醋山甲打粉，过100目筛，然后加入9倍量的二氯甲烷提取4次，每次1小时，然后脱脂得到提取液和药渣，将二氯甲烷提取后的药渣加入9倍重量份的50wt%的乙醇提取4次，每次1小时，得到提取液，将两次的提取液合并，减压浓缩得到浸膏；
（3）将浸膏用甲醇溶解拌硅胶上柱，其中，每10g浸膏用50ml甲醇溶解，用20g硅胶拌匀，固定相为250目硅胶，流动相为二氯甲烷：丙酮：乙醇体积比为1:2:1洗脱，并用TLC碘显色监控，合并二氯甲烷-丙酮-乙醇的体积比为10:2:1的流份；
（4）将步骤（3）得到的流份用反相高效液相色谱纯化，其中柱温30℃，检测波长230nm，以3wt%乙腈水溶液作为洗脱液，其中，脱流速为5ml/min，洗脱时间50分钟，洗脱液减压浓缩除去乙睛和水，干燥，先后得到L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽，其中L-丝-L-酪环二肽的纯度为96.2%，D-丝-L-酪环二肽的纯度为97.4%。
实施例5
一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，包括以下步骤：
（1）将穿山甲药材砂炒炮制为炮山甲；
（2）将炮山甲打粉，过100目筛，然后加入10倍量的二氯甲烷提取5次，每次1小时，然后脱脂得到提取液和药渣，将二氯甲烷提取后的药渣加入10倍重量份的50wt%的乙醇提取5次，每次1小时，得到提取液，将两次的提取液合并，减压浓缩得到浸膏；
（3）将浸膏用甲醇溶解拌硅胶上柱，其中，每10g浸膏用50ml甲醇溶解，用20g硅胶拌匀，固定相为300目硅胶，流动相为二氯甲烷：丙酮：乙醇体积比为10:2:1洗脱，并用TLC碘显色监控，合并二氯甲烷-丙酮-乙醇的体积比为10:2:1的流份；
（4）将步骤（3）得到的流份用反相高效液相色谱纯化，其中柱温30℃，检测波长210nm，以2wt%乙腈水溶液作为洗脱液，其中，脱流速为4ml/min，洗脱时间40分钟，洗脱液减压浓缩除去乙睛和水，干燥，先后得到L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽，其中L-丝-L-酪环二肽的纯度为96.5%，D-丝-L-酪环二肽的纯度为97.5%。
通过对比参考文献(马雪梅, 秦永祺. 穿山甲化学成分的研究[J]. 药学学报,1988, 23(8): 588-592.)，由图1-3可知，经MS，1HNMR，13CNMR分析， 确认分离纯化到的化合物为L-丝-L-酪环二肽；由图4-5可知，经MS，1HNMR，13CNMR分析，确认分离纯化到的化合物为D-丝-L-酪环二肽。

Claims (6)

1.一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将穿山甲药材砂炒炮制为炮山甲或醋山甲；
（2）将炮山甲或醋山甲打粉，过100目筛，然后通过第一溶剂提取后脱脂得到提取液和药渣，将第一溶剂提取后的药渣再通过第二溶剂提取得到提取液，将两次的提取液合并，减压浓缩得到浸膏；
（3）将浸膏用甲醇溶解拌硅胶上柱，固定相为200-300目硅胶，流动相为二氯甲烷：丙酮：乙醇体积比为1-20:1-2:1洗脱，并用TLC碘显色监控，合并二氯甲烷-丙酮-乙醇的体积比为10:2:1的流份；
（4）将步骤（3）得到的流份用反相高效液相色谱纯化，以乙睛-水流动相，洗脱液减压浓缩除去乙睛和水，干燥，得到L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽。
2.根据权利要求1所述的一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，其特征在于：所述步骤（2）中第一溶剂为二氯甲烷，将炮山甲或醋山甲粉加入5-10倍量的二氯甲烷提取3-5次，每次1小时。
3.根据权利要求1中所述的一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，其特征在于：所述步骤（2）中第二溶剂为浓度为50wt%的乙醇，将药渣加入5-10倍重量份的50%乙醇提取4-5次，每次1小时。
4.根据权利要求1中所述的一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，其特征在于：所述步骤（3）中每10g浸膏用50ml甲醇溶解，用20g硅胶拌匀。
5.根据权利要求1中所述的一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，其特征在于：所述步骤（4）中反相高效液相色谱条件为：柱温30℃，检测波长210nm或230nm。
6.根据权利要求1中所述的一种L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽的分离提纯方法，其特征在于：所述步骤（4）中乙睛-水流动相为浓度为1-4wt%乙腈水溶液，洗脱液洗脱流速为2-6ml/min，洗脱时间20-60分钟。
CN201810058986.6A 2018-01-22 2018-01-22 一种l-丝-l-酪环二肽和d-丝-l-酪环二肽的分离提纯方法 Active CN108586363B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810058986.6A CN108586363B (zh) 2018-01-22 2018-01-22 一种l-丝-l-酪环二肽和d-丝-l-酪环二肽的分离提纯方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810058986.6A CN108586363B (zh) 2018-01-22 2018-01-22 一种l-丝-l-酪环二肽和d-丝-l-酪环二肽的分离提纯方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108586363A true CN108586363A (zh) 2018-09-28
CN108586363B CN108586363B (zh) 2021-07-02

Family

ID=63608511

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810058986.6A Active CN108586363B (zh) 2018-01-22 2018-01-22 一种l-丝-l-酪环二肽和d-丝-l-酪环二肽的分离提纯方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108586363B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109248176A (zh) * 2018-10-24 2019-01-22 苏州卫生职业技术学院 一种人工穿山甲粉组合物
CN111077244A (zh) * 2019-12-19 2020-04-28 苏州卫生职业技术学院 一种同时测定穿山甲中4种水溶性成分的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006014429A2 (en) * 2004-07-02 2006-02-09 University Of Southern California (La) Cidofovir peptide conjugates as prodrugs
CN1732992A (zh) * 2005-08-25 2006-02-15 孙小毛 生穿山甲的炮制方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006014429A2 (en) * 2004-07-02 2006-02-09 University Of Southern California (La) Cidofovir peptide conjugates as prodrugs
CN1732992A (zh) * 2005-08-25 2006-02-15 孙小毛 生穿山甲的炮制方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴梧桐 等编著: "《生物制药工艺学 第三版》", 30 April 2013, 中国医药科技出版社 *
马雪梅 等: "穿山甲化学成分的研究", 《药学学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109248176A (zh) * 2018-10-24 2019-01-22 苏州卫生职业技术学院 一种人工穿山甲粉组合物
CN111077244A (zh) * 2019-12-19 2020-04-28 苏州卫生职业技术学院 一种同时测定穿山甲中4种水溶性成分的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108586363B (zh) 2021-07-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102060891A (zh) 从甜叶菊中制备甜菊糖苷的工艺方法
CN103665059B (zh) 一种天然藏红花素提取分离方法及其降血脂药物的制备
CN101485705A (zh) 熟三七和熟三七标准提取物和其应用
EP1980569A1 (en) Process for preparing high purity corosolic acid and high purity ursolic acid
CN108586363A (zh) 一种l-丝-l-酪环二肽和d-丝-l-酪环二肽的分离提纯方法
CN108276465A (zh) 一种以亚临界水解吸附技术分离纯化罗汉果甜苷ⅴ的方法
CN104224911B (zh) 一种新的丹参提取物及其制备
CN1903241A (zh) 一种三七药材的提取分离方法
CN105902584A (zh) 具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮及其制备方法与应用
CN105273020A (zh) 一种以黑果枸杞为原料制备矮牵牛素-3-o-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-o-葡萄糖苷的方法
Hou et al. Enhancing the potential exploitation of salvia Miltiorrhiza Bunge: extraction, enrichment and hplc-dad analysis of bioactive phenolics from its leaves
CN103376300B (zh) 注射用丹参多酚酸中鞣质类物质的检测方法
CN109293509A (zh) 一种从竹叶提取物中制备高纯度绿原酸的方法
CN105712896A (zh) 一种从玛咖中高效制备玛咖酰胺单体的方法
CN108558812A (zh) 一种酸解制备淫羊藿素的方法
CN100464766C (zh) 一种治疗急、慢性充血性心力衰竭的药物组合物及制备方法和应用
CN102526134A (zh) 续断总皂苷及川续断皂苷vi的制备方法
CN104586904B (zh) 一种同步分离制备锁阳多糖和锁阳黄酮的方法
CN109810177A (zh) 一种具有ace抑制活性的核桃粕多肽及其制备方法和应用
CN108114024A (zh) 一种番石榴叶萜类物质的提取方法
CN104788990B (zh) 一种从腊八蒜中提取和分离黄色素的方法
CN109481531B (zh) 一种补气养血的组合物及其制备方法和应用
CN108178778B (zh) 一种制备达木林b的方法
JP6654754B2 (ja) イワベンケイ属植物からのヘルバセチン抽出方法
CN109180774A (zh) 一种含有蒺藜果总皂苷的药物组合物及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant