CN108469427A - 一种表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明是一种表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法。本方法将制备的细胞悬浮液加入优化后的fluo‑3AM，添加0.8mM Pluronic F‑127，获得最大荧光强度Fmax值，或添加钙离子螯合剂EGTA，获得最小荧光强度Fmin值，制备的细胞悬浮液加入优化后的fluo‑3AM经大气压冷等离子体处理，结合多功能酶标仪测定F值，再根据公式计算出绝对钙离子浓度。本发明实现了荧光探针flou‑3AM结合多功能酶标仪测定细胞绝对钙离子浓度的方法，该方法具有灵敏、高效、简便、精确测定和表征细胞内钙离子绝对浓度。

Description

一种表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法
技术领域
本发明属于细胞内钙离子浓度定量检测技术领域，具体是一种表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法。
背景技术
钙离子作为重要的第二信使，参与细胞内多种信号传导并调控一系列生命活动。细胞内钙离子浓度在一定范围内(1～10μM)，有助于微生物生长和产物形成，但是钙离子浓度过高会抑制菌体生长，甚至促进菌体死亡。大气压冷等离子体作为一种强化技术，通过诱导细胞内钙离子浓度变化，达到强化微生物转化目标产物的能力。目前常用细胞内钙离子浓度测定方法存在诸多限制因素，无法精确表征与微生物高转化力相匹配的胞内钙离子浓度。
目前，细胞内钙离子浓度较为简洁的测定方法为化学荧光探针技术，如利用单波长激发荧光探针Fluo-3和比率型荧光探针FuraRed，或二者结合使用，通过共聚焦显微镜测定荧光强度，采用单一荧光探针的荧光强度或上述两种探针荧光强度比率来表征细胞内自由钙离子浓度。但是，这种表征方法测定的均为钙离子的相对浓度。到目前为止，直接而精确的绝对钙离子浓度测定方法并未见报道。因此，建立精确测定和表征细胞内钙离子绝对浓度的方法是非常必要的。
发明内容
本发明的目的是提供一种表征等离子体诱导的细胞内绝对钙离子浓度的方法，可以精确测定和表征细胞内钙离子绝对浓度。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法，所述方法包括以下步骤：
步骤1，制备细胞悬浮液；
步骤2，优化fluo-3AM使用条件
(1)水浴温度和孵育时间优化
将步骤1制备的细胞悬浮液加入fluo-3AM，选取水浴温度30℃～44℃，孵育时间0min～120min处理，处理后的菌液进行细胞存活率分析选取最优；
(2)探针fluo-3AM终浓度和孵育时间优化
将步骤1制备的细胞悬浮液加入fluo-3AM，选取探针fluo-3AM终浓度0～12μM，孵育时间0～215min处理，使用多功能酶标仪检测处理后细胞的荧光强度，并计算得到相对荧光强度，相对荧光强度最高的为最优；
(3)探针装载顺序优化
先等离子体处理—后装载探针和先装载探针—后等离子体处理，这两种顺序对细胞活性及细胞内钙离子浓度测定没有影响；
步骤3，细胞质内绝对钙离子浓度测定
步骤1制备的细胞悬浮液加入步骤2优化条件下的fluo-3AM，添加0.8mMPluronicF-127，获得最大荧光强度Fmax值；或添加钙离子螯合剂EGTA，浓度范围为0～30nM，获得最小荧光强度Fmin值；
步骤1制备的细胞悬浮液经大气压冷等离子体处理后加入步骤2优化条件下的fluo-3AM或步骤1制备的细胞悬浮液先加入步骤3优化条件下的fluo-3AM再经大气压冷等离子体处理，获得F值，根据公式(1)，
已知Kd＝325nm为解离常数，计算即可得到细胞内绝对钙离子浓度；其中，Fmax值、Fmin值、F值均使用多功能酶标仪测定。
上述方法中，所述细胞为植物细胞、动物细胞、微生物细胞。
上述方法中，步骤1具体为：收集培养至对数期的菌液，4℃离心、30000×g、5min，弃上清，重悬于新鲜2％YPD培养液，调整菌浓度OD600至6.0(此时细胞浓度＝5×105个/mL)。
上述方法中，步骤3优化fluo-3AM使用条件具体为：
(1)水浴温度和孵育时间优化
将步骤1制得的细胞悬浮液分装于1.5mL离心管中，每管1mL，共6管，每6管为1组，每组分别于30℃、37℃、44℃条件下水浴处理0min、20min、40min、60min、80min、100min、120min，每隔7min上下颠倒几次混匀菌液；处理后的菌液进行细胞存活率分析，选取最优探针fluo-3AM孵育温度37℃；
(2)探针fluo-3AM终浓度和孵育时间优化
将步骤2制得的细胞悬浮液分为7组，向1～7组菌液中分别加入1mM fluo-3/AM母液0、1.4、2.8、4.2、5.6、7.0、8.4μL，至终浓度为0、2、4、6、8、10、12μM；充分混合，于37℃水浴条件下孵育55min，期间每隔5min上下颠倒几次混匀；孵育完成后离心收集菌体(6000rpm，4℃，10min)，PBS洗涤三次，加700μL PBS重悬；使用多功能酶标仪检测每组细胞的荧光强度，并计算得到相对荧光强度，选取最优探针fluo-3AM终浓度为6μM；
将步骤2制得的细胞悬浮液分为12组，将1～12组混合探针的细胞悬浮液于37℃水浴条件下分别孵育0～215min，每组间隔20min，孵育完成后离心收集菌体(6000rpm，4℃，10min)，PBS洗涤三次，加700μL PBS重悬；使用多功能酶标仪检测每组细胞的荧光强度，并计算得到相对荧光强度，选取最优孵育时间为135min。
上述方法中，步骤3所述优化条件为：探针fluo-3AM孵育温度37℃，探针fluo-3AM终浓度为6μM，孵育时间为135min。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明实现了荧光探针flou-3AM结合多功能酶标仪测定细胞绝对钙离子浓度的方法，该方法具有灵敏、高效、简便、精确测定和表征细胞内钙离子绝对浓度。本发明在生物化工、生物学、医学、农学、等离子体科学与技术等领域具有广泛应用前景。
附图说明
图1水浴温度和孵育时间对酿酒酵母致死率影响，A30℃，B 37℃，C 44℃；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；
图2Fluo-3浓度和孵育时间对探针荧光强度影响；A探针使用浓度，B探针孵育时间，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；
图3大气压冷等离子体对探针装载顺序的影响，A亚甲蓝检测细胞存活率，B Fluo-3AM检测细胞质内钙离子浓度；plasma+probe：先等离子体处理，后装载探针；probe+plasma：先装载探针，后等离子体处理；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；
图4细胞内钙离子浓度最大荧光强度和最小荧光强度优化，A Fmax值，B Fmin值；
图5大气压冷等离子体对酿酒酵母细胞钙离子浓度影响，*P<0.05。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明做进一步说明。
实施例1
一种表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法，包括以下步骤：
步骤1，制备细胞悬浮液
酿酒酵母CGMCC no.6148培养于YPD培养液(10g/L酵母浸粉、20g/L蛋白胨、20g/L葡萄糖)28℃，170rpm培养；收集对数生长期的酿酒酵母细胞，4℃离心、30000×g、5min，弃上清，重悬于新鲜2％YPD培养液，调整菌浓度OD600至6.0(此时细胞浓度＝5×105个/mL)。
步骤2，优化fluo-3AM使用条件
(1)水浴温度和孵育时间优化
将步骤1制得的细胞悬浮液分装于1.5mL离心管中，每管1mL，共6管，每6管为1组，每组组分别于30℃、37℃、44℃条件下水浴处理0min、20min、40min、60min、80min、100min、120min，每隔7min上下颠倒几次混匀菌液；处理后的菌液进行细胞存活率分析，见图1；
每组取10μL细胞悬浮液与30μL亚甲蓝染液混合，根据活细胞无色，死细胞染成蓝色，光学显微镜观察计算。细胞存活率通过测量至少200个细胞获得，实验重复三次。
细胞存活率(％)＝活细胞数量/对照组细胞数量×100％；
细胞致死率(％)＝100％-存活率(％)(致死细胞包括蓝染细胞和被降解细胞)。
(2)探针fluo-3AM终浓度和孵育时间优化
将步骤1制得的细胞悬浮液分为7组，向1～7组菌液中分别加入1mM fluo-3/AM母液0、1.4、2.8、4.2、5.6、7.0、8.4μL，至终浓度为0、2、4、6、8、10、12μM；充分混合，于37℃水浴条件下孵育55min，期间每隔5min上下颠倒几次混匀；孵育完成后离心收集菌体(6000rpm，4℃，10min)，PBS洗涤三次，加700μL PBS重悬；使用多功能酶标仪检测每组细胞的荧光强度，并计算得到相对荧光强度，见图2A；
将步骤1制得的细胞悬浮液分为12组，将1～12组混合探针的细胞悬浮液于37℃水浴条件下分别孵育0～215min，每组间隔20min，孵育完成后离心收集菌体(6000rpm，4℃，10min)，PBS洗涤三次，加700μL PBS重悬；使用多功能酶标仪检测每组细胞的荧光强度，并计算得到相对荧光强度，见图2B。
相对荧光强度(％)＝实验组荧光强度/对照组实验强度×100％。
(3)探针装载顺序优化
鉴于大气压冷等离子体具有降解特性，为了确保钙离子浓度测定的精确性，分别考察细胞先等离子体处理后装载探针和先装载探针后等离子体处理，这两种顺序对细胞内钙离子浓度测定的影响，见图3。如图3A所示，探针装载顺序对细胞活性没有明显影响，细胞活性与等离子体处理时间呈正相关。在相同处理时间，探针装载顺序对酿酒酵母细胞内钙离子浓度无显著性影响；随着放电时间延长，细胞内钙离子浓度出现不同程度增加，如图3B所示。因此，细胞内钙离子浓度变化主要受等离子体处理时间影响，与探针装载顺序无关。以下试验步骤选择先装载探针，后等离子体处理的探针装置顺序。
步骤3，细胞质内绝对钙离子浓度测定
步骤1制备的细胞悬浮液先加入步骤2优化条件下的fluo-3AM，优化条件为：探针fluo-3AM孵育温度37℃，探针fluo-3AM终浓度为6μM，孵育时间为135min，添加0.8mMPluronicF-127，获得最大荧光强度Fmax值，见图4A；添加钙离子螯合剂EGTA，浓度范围为0-30nM，获得最小荧光强度Fmin值，见图4B。
选取每份样品为500μL步骤1制备的细胞悬浮液(5×105个/mL)，加入步骤2优化条件下的fluo-3AM(优化条件为：探针fluo-3AM孵育温度37℃，探针fluo-3AM终浓度为6μM，孵育时间为135min)再经大气压冷等离子体处理，放电电源电压29V，电源电流0.65A，上电极与样品间距3mm，处理时间1-5min，间隔1min；未处理样品作为对照，处理后通过多功能酶标仪测定细胞荧光强度F值，根据公式(1)，
已知Kd＝325nm为解离常数，计算得到细胞内绝对钙离子浓度，见图5，大气压冷等离子体诱导酿酒酵母细胞内钙离子浓度增加的第一个峰出现在1min处理时间，达到865.1nM，大约是对照组的3倍；钙离子浓度最大峰出现在5mim处理时间，达到1232.5nM，大约是对照组的4.3倍。应用本发明方法，精确的测定出细胞内绝对钙离子浓度，为后续研究奠定基础。
所有实验结果采用mean±SEM表述，单因素方差分析用来评估对照组数据与实验组数据间的统计学显著性。P<0.05认为统计学差异显著，P<0.005认为统计学差异极显著，P<0.001认为统计学差异及其显著。实验数据来源于三次实验平均值。

Claims (5)

1.一种表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤1，制备细胞悬浮液；
步骤2，优化fluo-3AM使用条件
(1)水浴温度和孵育时间优化
将步骤1制备的细胞悬浮液加入fluo-3AM，选取水浴温度30℃～44℃，孵育时间0min～120min处理，处理后的菌液进行细胞存活率分析选取最优；
(2)探针fluo-3AM终浓度和孵育时间优化
将步骤1制备的细胞悬浮液加入fluo-3AM，选取探针fluo-3AM终浓度0～12μM，孵育时间0～215min处理，使用多功能酶标仪检测处理后细胞的荧光强度，并计算得到相对荧光强度，相对荧光强度最高的为最优；
(3)探针装载顺序优化
先等离子体处理—后装载探针和先装载探针—后等离子体处理，这两种顺序对细胞活性及细胞内钙离子浓度测定没有影响；
步骤3，细胞质内绝对钙离子浓度测定
步骤1制备的细胞悬浮液加入步骤2优化条件下的fluo-3AM，添加0.8mM Pluronic F-127，获得最大荧光强度Fmax值；或添加钙离子螯合剂EGTA，浓度范围为0～30nM，获得最小荧光强度Fmin值；
步骤1制备的细胞悬浮液经大气压冷等离子体处理后加入步骤2优化条件下的fluo-3AM或步骤1制备的细胞悬浮液先加入步骤3优化条件下的fluo-3AM再经大气压冷等离子体处理，获得F值，根据公式(1)，
已知Kd＝325nm为解离常数，计算即可得到细胞内绝对钙离子浓度；其中，Fmax值、Fmin值、F值均使用多功能酶标仪测定。
2.如权利要求1所述的表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法，其特征在于，所述细胞为植物细胞、动物细胞、微生物细胞。
3.如权利要求1所述的表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法，其特征在于，步骤1具体为：
收集培养至对数期的菌液，4℃离心、30000×g、5min，弃上清，重悬于新鲜2％YPD培养液，调整菌浓度OD600至6.0(此时细胞浓度＝5×105个/mL)。
4.如权利要求1所述的表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法，其特征在于，步骤3优化fluo-3AM使用条件具体为：
(1)水浴温度和孵育时间优化
将步骤1制得的细胞悬浮液分装于1.5mL离心管中，每管1mL，共6管，每6管为1组，每组分别于30℃、37℃、44℃条件下水浴处理0min、20min、40min、60min、80min、100min、120min，每隔7min上下颠倒几次混匀菌液；处理后的菌液进行细胞存活率分析，选取最优探针fluo-3AM孵育温度37℃；
(2)探针fluo-3AM终浓度和孵育时间优化
将步骤1制得的细胞悬浮液分为7组，向1～7组菌液中分别加入1mM fluo-3/AM母液0、1.4、2.8、4.2、5.6、7.0、8.4μL，至终浓度为0、2、4、6、8、10、12μM；充分混合，于37℃水浴条件下孵育55min，期间每隔5min上下颠倒几次混匀；孵育完成后离心收集菌体(6000rpm，4℃，10min)，PBS洗涤三次，加700μL PBS重悬；使用多功能酶标仪检测每组细胞的荧光强度，并计算得到相对荧光强度，选取最优探针fluo-3AM终浓度为6μM；
将步骤2制得的细胞悬浮液分为12组，将1～12组混合探针的细胞悬浮液于37℃水浴条件下分别孵育0～215min，每组间隔20min，孵育完成后离心收集菌体(6000rpm，4℃，10min)，PBS洗涤三次，加700μL PBS重悬；使用多功能酶标仪检测每组细胞的荧光强度，并计算得到相对荧光强度，选取最优孵育时间为135min。
5.如权利要求1所述的表征等离子体诱导细胞内绝对钙离子浓度的方法，其特征在于，步骤3所述优化条件为：探针fluo-3AM孵育温度37℃，探针fluo-3AM终浓度为6μM，孵育时间为135min。
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Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2851701A (en) * 2000-02-07 2001-08-20 Janssen Pharmaceutica N.V. Use of thrombin receptor antagonists against gliosis
WO2002090927A3 (en) * 2001-05-04 2003-06-26 Axiom Biotechnologies Inc Matrix assays in genomically indexed cells
US20080248040A1 (en) * 2003-10-02 2008-10-09 Menghang Xia Nucleic Acid Molecules Encoding Novel Human Low-Voltage Activated Calcium Channel Proteins, Designed-Alpha 1I-1 and Alpha 1I-2, Encoded Proteins and Methods of Use Thereof
US7585886B2 (en) * 2005-05-19 2009-09-08 Astellas Pharma Inc. Pyrrolidine derivative or salt thereof
CN101806736A (zh) * 2010-04-13 2010-08-18 南京农业大学 棉花花粉管游离钙离子的荧光标记方法
CN102532197A (zh) * 2010-12-24 2012-07-04 中国科学院上海药物研究所 一类光亲和标记双功能探针分子及其制备方法和应用
CN103288862A (zh) * 2013-06-21 2013-09-11 天津医科大学 一种红色荧光钙离子探针的制备方法及其应用
CN106092682A (zh) * 2016-06-03 2016-11-09 浙江大学 快速检测水稻花药游离钙离子分布的荧光标记方法
CN106290328A (zh) * 2016-07-22 2017-01-04 中南大学 用于液体钙离子检测的玻片或试纸阵列及制备和使用方法
US20170059557A1 (en) * 2012-10-05 2017-03-02 The Regents Of The University Of California Mechanical stress response analysis of cells and tissues
CN106596486A (zh) * 2016-12-13 2017-04-26 Tcl集团股份有限公司 无机钙钛矿量子点探针及制备方法与检测汞离子的方法
CN107179300A (zh) * 2017-04-06 2017-09-19 大连工业大学 刺参体腔细胞内钙离子浓度的检测方法

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2851701A (en) * 2000-02-07 2001-08-20 Janssen Pharmaceutica N.V. Use of thrombin receptor antagonists against gliosis
WO2002090927A3 (en) * 2001-05-04 2003-06-26 Axiom Biotechnologies Inc Matrix assays in genomically indexed cells
US20080248040A1 (en) * 2003-10-02 2008-10-09 Menghang Xia Nucleic Acid Molecules Encoding Novel Human Low-Voltage Activated Calcium Channel Proteins, Designed-Alpha 1I-1 and Alpha 1I-2, Encoded Proteins and Methods of Use Thereof
US7585886B2 (en) * 2005-05-19 2009-09-08 Astellas Pharma Inc. Pyrrolidine derivative or salt thereof
CN101806736A (zh) * 2010-04-13 2010-08-18 南京农业大学 棉花花粉管游离钙离子的荧光标记方法
CN101806736B (zh) * 2010-04-13 2012-05-23 南京农业大学 棉花花粉管游离钙离子的荧光标记方法
CN102532197A (zh) * 2010-12-24 2012-07-04 中国科学院上海药物研究所 一类光亲和标记双功能探针分子及其制备方法和应用
US20170059557A1 (en) * 2012-10-05 2017-03-02 The Regents Of The University Of California Mechanical stress response analysis of cells and tissues
CN103288862A (zh) * 2013-06-21 2013-09-11 天津医科大学 一种红色荧光钙离子探针的制备方法及其应用
CN106092682A (zh) * 2016-06-03 2016-11-09 浙江大学 快速检测水稻花药游离钙离子分布的荧光标记方法
CN106290328A (zh) * 2016-07-22 2017-01-04 中南大学 用于液体钙离子检测的玻片或试纸阵列及制备和使用方法
CN106596486A (zh) * 2016-12-13 2017-04-26 Tcl集团股份有限公司 无机钙钛矿量子点探针及制备方法与检测汞离子的方法
CN107179300A (zh) * 2017-04-06 2017-09-19 大连工业大学 刺参体腔细胞内钙离子浓度的检测方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A.K.STOUT.ET: "HIGH-AFFINITY CALCIUM INDICATORS UNDERESTIMATE INCREASES IN INTRACELLULAR CALCIUM CONCENTRATIONS ASSOCIATED WITH EXCITOTOXIC GLUTAMATE STIMULATIONS", 《NEUROSCIENCE》 *
IAN A. BREWIS.ET: "Measurement of Intracellular Calcium Concentration and Plasma Membrane Potential in Human Spermatozoa Using Flow Cytometry", 《JOURNAL OF ANDROLOGY》 *
R.Y.TSIEN,.ET: "Calcium Homeostasis in Intact Lymphocytes: Cytoplasmic Free Calcium Monitored With a Intracellularly Trapped Fluorescent Indicator New,Intracellularly Trapped Fluorescent Indicator", 《THE JORUNAL OF CELL BIOLOGY》 *

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