CN108324730A - 硫酸化党参多糖在制备预防和/或治疗应激性肝肾损伤药物中的应用 - Google Patents

硫酸化党参多糖在制备预防和/或治疗应激性肝肾损伤药物中的应用 Download PDF

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Abstract

发明公开了硫酸化党参多糖在制备预防和/或治疗应激性肝肾损伤药物中的应用。本发明研究发现，硫酸化党参多糖能够保证动物受到应激性损伤后，其肝肾功能及其各项检测指标与正常情况无明显差异，对于哺乳动物应激性肝肾损伤具有很好的预防和/或治疗作用，在兽医临床应用上具有重要的价值。

Description

硫酸化党参多糖在制备预防和/或治疗应激性肝肾损伤药物 中的应用
技术领域
本发明属于抗应激性肝肾损伤药物技术领域，更具体地，涉及硫酸化党参多糖在制备预防和/或治疗应激性肝肾损伤药物中的应用。
背景技术
在畜牧业生产链条中，因集约化养殖、营养不良、饲料发酵、长途运输及极端环境等因素引起的动物的应激性疾病，引发动物内脏损伤、脓血症、乳房炎、肠炎、肺炎和关节炎等疾病，尤其是动物的肝脏和肾脏容易受损，影响养殖业的发展，给养殖户造成巨大的经济损失。而为了解决由于应激性肝肾损伤导致的生产问题，一方面是从改善动物饲养环境和条件入手；另一方面是进行给药治疗。目前已在采用的有镇静剂、维生素制剂和一些中草药制剂等，但其预防和/或治疗效果仍有待提高。
另外，各种应激性肝肾损伤也困扰着人类的健康，尤其是过量饮酒导致的酒精性肝肾损伤。过量饮酒是世界范围内的一个重要的公共卫生问题，过量饮酒会导致多系统脏器官损害。乙醇极易吸收人血，可引起多脏器的功能损害如：肝脏、肾脏、小肠、胃、胰腺、神经系统等；尤其是肝肾损伤对人类健康具有极大的威胁。酒精已成为继病毒性肝炎后导致肝损伤的第二大病因，酒精对肝脏的损伤主要包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化，酒精性肝损伤还会导致其它危害，例如致使肝脏无法完全过滤血液，会引发高血脂、心脑血管病；肝脏分解代谢能力降低，并发糖尿病、胆石症等。同时，过量饮酒超过肝脏代谢能力时，肾脏的负荷亦明显增加，且乙醇可诱发以肾小管-间质损害为主的肾脏病理改变，其结果可进展至肾间质纤维化、慢性肾功衰竭。
党参多糖因具有改善机体免疫功能、抗病毒、抗氧化、抑制肿瘤生长、抗衰老等广泛的生物活性，且具有绿色天然、毒副作用小、不易产生耐药性等特点，受到国内外学者的广泛研究。而最近的研究证实，硫酸化修饰多糖有助于提高多糖的活性。但目前还未有报道硫酸化党参多糖在应激性肝肾损伤方面的效果及应用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供硫酸化党参多糖在制备预防和/或治疗应激性肝肾损伤药物中的应用。本发明通过研究硫酸化党参多糖对小鼠应激性肝肾损伤后，肝肾功能检测、血液学分析及组织切片观察等实验，发现硫酸化党参多糖对于应激性肝肾损伤具有很好的预防和/或治疗作用，在兽医临床上预防和/或治疗动物应激性肝肾损伤具有广阔的应用前景。
本发明的上述目的是通过以下方案予以实现的：
本发明提供了硫酸化党参多糖在制备预防和/或治疗应激性肝肾损伤药物中的应用。
优选地，所述硫酸化党参多糖在制备预防和/或治疗哺乳动物应激性肝肾损伤药物中的应用。
优选地，所述应激性肝肾损伤是指酒精性肝肾损伤，即由乙醇引起的应激性肝肾损伤。
优选地，所述应用是指硫酸化党参多糖能够降低应激性损伤后肝脏和/或肾脏中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血糖和/或尿素氮的含量。
优选地，所述应用是指硫酸化党参多糖能够减少应激性损伤后肝脏和/或肾脏中碱性磷酸酶、总蛋白、白蛋白和/或肌酐含量的降低。
优选地，所述硫酸化党参多糖是先将党参中提取的多糖经sevage法纯化，再经氯磺酸-吡啶法进行硫酸化修饰得到。
更优选地，所述硫酸化党参多糖的制备过程如下：
采用水煎醇沉法从党参饮片中提取党参总多糖，再采用sevage法去除多糖中的蛋白质、DEAE-52纤维素柱纯化，冷冻干燥，得到纯化多糖。采用氯磺酸-吡啶法对纯化党参多糖进行硫酸化修饰，并优化修饰工艺条件，修饰后的多糖经透析纯化，冷冻干燥，制得硫酸化党参多糖。
优选地，所述硫酸化党参多糖中多糖和硫酸根的质量占比采用苯酚-硫酸法和超声酸性铬酸钡法测定得到。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明通过研究发现，硫酸化党参多糖能够保证动物受到应激性损伤后，其肝肾功能及其各项检测指标与正常情况无明显差异，对于哺乳动物应激性肝肾损伤具有很好的预防和/或治疗作用，在兽医临床应用上具有重要的价值。
附图说明
图1为各实验组对小鼠谷丙转氨酶（ALT）含量的影响结果。
图2为各实验组对小鼠谷草转氨酶（AST）含量的影响结果。
图3为各实验组对小鼠碱性磷酸酶（ALP）含量的影响结果。
图4为各实验组对小鼠总蛋白（TP）含量的影响结果。
图5为各实验组对小鼠白蛋白（ALB）含量的影响结果。
图6为各实验组对小鼠血糖（GLU）含量的影响结果。
图7为各实验组对小鼠尿素氮（UREA）含量的影响结果。
图8为各实验组对小鼠肌酐（CREA）含量的影响结果。
图9为各实验组对小鼠甘油三酯（TG）含量的影响结果。
图10为各实验组对小鼠胆固醇（TC）含量的影响结果。
图11为各实验组对小鼠乳酸脱氢酶（LDH）含量的影响结果。
图12为各实验组对小鼠血液中白细胞总数（WBC）含量的影响结果。
图13为各实验组对小鼠血液中红细胞总数（RBC）含量的影响结果。
图14为各实验组对小鼠血液中血小板计数（PLT）含量的影响结果。
图15为各实验组对小鼠血液中血红蛋白含量（HGB）含量的影响结果。
图16为各实验组对小鼠血液中淋巴细胞比例（LYM）含量的影响结果。
图17为各实验组对小鼠血液中红细胞压积（HCT）的影响结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1
硫酸化党参多糖的制备过程如下：
采用水煎醇沉法从党参饮片中提取党参总多糖，再采用sevage法去除多糖中的蛋白质、DEAE-52纤维素柱纯化，冷冻干燥，得到纯化多糖。采用氯磺酸-吡啶法对纯化党参多糖进行硫酸化修饰，并优化修饰工艺条件，修饰后的多糖经透析纯化，冷冻干燥，制得硫酸化党参多糖，用苯酚-硫酸法和超声酸性铬酸钡法进行测定，制备得到的党参多糖中多糖质量占比为66.30%，硫酸根质量占比为34.48%。
实施例2 硫酸化党参多糖对小鼠应激性损伤的防治效果
1、试验方法：
雄性实验小鼠饲养温度18℃～22℃，湿度55%～75%，自然光照，自由采食饮水。小鼠在实验环境下给予基础饲料适应性饲养7d，按体质量随机分成6组，分别为空白对照组、VC对照组、模型对照组、硫酸化党参多糖配置成浓度为3mg/mL（高浓度组）、2mg/mL（中浓度组）和1mg/mL（低浓度组）3组。
处理过程为：高、中和低浓度组每天分别给予高、中和低浓度硫酸化党参多糖灌胃0.2mL/只；VC对照组的用药浓度为100mg/kg·bw·d，VC溶解于双蒸水，按照0.2mL/只进行灌胃，所用VC购于上海麦克林生化科技有限公司，AR,>99.0%（T），生产批号为：C10095307；空白对照组和模型对照组给予同体积双蒸水，连续灌胃30d。末次灌胃后，VC对照组、模型对照组和实验组禁食16h（过夜），然后1次性灌胃给予50%乙醇12mL/kg·bw（建模），空白对照组不作处理。
2、实验结果
（1）硫酸化党参多糖对小鼠应激性损伤的生化指标测定
灌服乙醇6h后，每组随机抽取5只小鼠，摘眼球采血，析出血清，用全自动血生化分析仪测定血清中，（1）肝功能指标：谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）的含量；（2）肾功能指标：尿素氮（UREA）、肌酐（CREA）的含量；（3）血脂指标：甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）的含量；（4）心肌酶指标：乳酸脱氢酶（LDH）变化的含量。
检测结果如表1和表2所示。
表1 硫酸化党参多糖对小鼠应激性损伤的生化指标影响结果
注：表1中各数据后面的上标字母表示数据间的差异性
从表1中可知，对于谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、乳酸脱氢酶（LDH），低浓度组、中浓度组及高浓度组均与模型组有显著性差异（P<0.05），与空白对照组无显著差异；对于碱性磷酸酶（ALP）、胆固醇（TC），中浓度组及高浓度组较于模型组有显著差异（P<0.05）；对于尿素氮（UREA）、肌酐（CREA）、甘油三酯（TG），各组间无明显差异（P>0.05）。
各指标的测试结果图见图1～11所示，各项血生化指标趋势图显示，三种浓度的硫酸化党参多糖，中浓度组及高浓度组各项指数均处于较好水平，更接近空白对照组参考值，显著对比于模型组（P<0.05），表明中浓度组和高浓度组对于预防和/或治疗应激性肝肾损伤具有很好的作用。
（2）硫酸化党参多糖对小鼠应激性损伤的血液指标测定
灌服乙醇6h后，每组随机抽取5只小鼠，摘眼球采抗凝血，用全自动血细胞分析仪测定血液中白细胞总数（WBC）、红细胞总数（RBC）、血小板计数（PLT）、血红蛋白含量（HGB）、淋巴细胞比例（LYM）和红细胞压积（HCT）的含量变化。
检测结果如表2所示。
表2 硫酸化党参多糖对小鼠应激性损伤的血常规指标
注：表2中各数据后面的上标字母表示数据间的差异性
对于红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HGB）、淋巴细胞绝对值（LYM），低浓度组、中浓度组及高浓度组均与模型组有显著性差异（P<0.05），与空白组无显著差异；对于血小板计数（PLT），高浓度组较于模型组有显著差异（P<0.05）；对于红细胞比积（HCT），低浓度组较于模型组有显著差异（P<0.05）；对于白细胞计数（WBC），各组间无明显差异（P>0.05）。
各指标的测试结果图见图12～17所示，各项血常规指标趋势图显示，三种浓度的硫酸化党参多糖，中浓度组及高浓度组各项指数均处于较好水平，更接近空白对照组参考值，显著对比于模型组（P<0.05），表明这两种浓度均是优选浓度，其中高浓度组为最佳浓度，可以作为应激性肝肾损伤的方剂，推荐预防和/或治疗浓度为3mg/mL。

Claims (7)

1.硫酸化党参多糖在制备预防和/或治疗应激性肝肾损伤药物中的应用。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述硫酸化党参多糖在制备预防和/或治疗哺乳动物应激性肝肾损伤药物中的应用。
3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述应激性肝肾损伤是指酒精性肝肾损伤。
4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述应用是指硫酸化党参多糖能够降低应激性损伤后肝脏和/或肾脏中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血糖和/或尿素氮的含量。
5.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述应用是指硫酸化党参多糖能够减少应激性损伤后肝脏和/或肾脏中碱性磷酸酶、总蛋白、白蛋白和/或肌酐含量的降低。
6.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述硫酸化党参多糖是先将党参中提取的多糖经sevage法纯化，再经氯磺酸-吡啶法进行硫酸化修饰得到。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述硫酸化党参多糖的制备过程如下：采用水煎醇沉法从党参饮片中提取党参总多糖，再采用sevage法去除多糖中的蛋白质、DEAE-52纤维素柱纯化，冷冻干燥，得到纯化多糖；采用氯磺酸-吡啶法对纯化多糖进行硫酸化修饰，并优化修饰工艺条件，修饰后的多糖经透析纯化，冷冻干燥，制得硫酸化党参多糖。
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