CN108245502B - 大黄素琥珀酰酯类化合物在制备抗心肌缺血药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开大黄素琥珀酰酯类化合物在制备抗心肌缺血药物中的用途，属于医药技术领域，所述的大黄素琥珀酰酯类化合物具有式I所示的结构(R为C_1‑5烷基)。通过对实验心肌梗死大鼠和小鼠进行药理实验，证实本发明的大黄素琥珀酰酯类化合物具有抗心肌缺血作用显著、安全性好、用药简单方便、原料价格低廉易得、便于运输与保存的优点，本发明的大黄素琥珀酰酯类化合物作为抗心肌缺血药物将具有广阔的应用前景。

Description

大黄素琥珀酰酯类化合物在制备抗心肌缺血药物中的用途

技术领域

本发明涉及一种新的抗心肌缺血化合物大黄素琥珀酰酯类化合物及其用途。属于医药技术领域。

背景技术

《中国心血管疾病预防指南》(2016年)指出近30年来，我国人群心血管病的发病率和死亡率逐年上升，发病年龄提前。主要是由于我国人群心血管病危险因素水平上升和人口老龄化问题。美国每年约有150万人发生心肌梗死。中国每年新发患者至少50万人，现有患者至少200万人。由于心血管病的高致残率和死亡率，心血管病已成为我国最重要的公共卫生问题之一。心肌梗死主要由冠状动脉粥样硬化导致心肌缺血、缺氧，进而导致弥漫性心肌细胞纤维化，最终使细胞死亡。心肌缺血(Myocardial ischemia，MI)是引起心收缩功能障碍、心肌电生理异常、严重的心律失常的重要原因，对心脏造成严重损伤。

临床上心肌缺血的常用药物如抗血小板药、β受体阻滞剂、他汀类药物、钙拮抗剂、硝酸酯类药物及溶血栓等药物，但治疗效果仍不理想，开发有效的、安全的抗心肌缺血药物具有重要的意义。

大黄素(1,3,8-三羟基-6-甲基蒽醌)存在于大黄属、蓼属、鼠李属的根茎和番泻叶中的主要有效单体，属植物型药物。近年来，许多学者通过对大黄素药理作用及其机制的深入研究，发现大黄素具有抗心肌缺血、抗菌抗炎、抗肿瘤、抑制细胞增殖提高免疫、保护肝肾等广泛的药理作用。大黄素抗心肌缺血作用显著，且毒副作用小。但由于大黄素生物利用度较低，雄性SD大鼠的绝对生物利用度为7.5％，在雌性中仅为5％，本发明公开的大黄素琥珀酰酯类化合物是对大黄素进行了结构改造，通过结扎大鼠冠状动脉左前降支，建立心肌梗死模型，旨在观察大黄素琥珀酰酯类化合物对实验性心肌梗死大鼠的心肌保护作用，发现大黄素琥珀酰酯类化合物具有治疗缺血性心肌病的作用。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明提供了一种新的抗心肌缺血化合物及其用途。本发明所提供的化合物具有抗心肌缺血作用显著、安全性好、用药简单方便、价格低廉、便于运输与保存等优点。

本发明是通过以下技术方案来实现上述目的:

本发明提出的一种新的抗心肌缺血化合物为大黄素琥珀酰酯类化合物，其具有式I所示的结构：

其中，R为C_1-5烷基。

其中，优选的，所述的大黄素琥珀酰酯类化合物为大黄素琥珀酰乙酯。

所述的新的抗心肌缺血化合物大黄素琥珀酰酯类化合物利于生物体吸收，利于提高口服对药物的生物利用度。通过对实验混合型高脂血症大鼠、小鼠进行药理实验，证实本发明的抗心肌缺血化合物大黄素琥珀酰乙酯具有显著的抗心肌缺血作用，且抗心肌缺血作用明显优于大黄素。

因此，本发明提出了大黄素琥珀酰酯类化合物在制备抗心肌缺血药物中的用途。

其中，优选的，所述的药物具有增加缺血心脏的心脏功能，表现为增加缺血心脏的射血分数和短轴缩短率，此外所述的药物具有减小缺血心肌梗死面积和降低血清中乳酸脱氢酶活性的作用。

其中，优选的，将所述的大黄素琥珀酰酯类化合物加入制剂成型所需的辅料制备成胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂、缓释剂、注射剂或其他制剂。

进一步的，本发明还提出了一种用于抗心肌缺血的药物，所述的药物的有效成分为大黄素琥珀酰酯类化合物。优选的，所述的有效成分为大黄素琥珀酰乙酯。

其中，优选的，所述的药物为胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂、缓释剂、注射剂或其他制剂。

更进一步的，本发明还提出了一种制备所述的大黄素琥珀酰酯类化合物的方法，包括以下步骤：琥珀酸酐和C_1-5的烷醇合成琥珀酸单烷醇酯，琥珀酸单烷醇酯再与氯化亚砜反应得到琥珀酸单烷醇酯酰氯类化合物，琥珀酸单烷醇酯酰氯类化合物再与大黄素反应得到所述的大黄素琥珀酰酯类化合物。

其中，优选的，制备所述的大黄素琥珀酰酯类化合物的方法，包括以下步骤：

(1)琥珀酸单烷醇酯的合成：取琥珀酸酐置于圆底烧瓶中，以C_1-5的烷醇为溶剂，加热回流，减压蒸馏除去过量的烷醇，得淡黄色油状物即琥珀酸单烷醇酯，该产物不分离直接进行下一步反应；

(2)琥珀酸单烷醇酯酰氯类化合物的合成：取琥珀酸单烷醇酯置于圆底烧瓶中，以氯化亚砜为溶剂，加热回流，减压蒸馏除去过量的氯化亚砜，得淡黄色至黄色油状物即琥珀酸单烷醇酯酰氯类化合物，该产物不分离直接进行下一步反应；

(3)大黄素琥珀酰酯类化合物的合成：取大黄素和碱置于圆底烧瓶中，以二氯甲烷为溶剂，缓慢滴加相应的琥珀酸单烷醇酯酰氯，室温反应。

(4)用碳酸氢钠水溶液萃取，合并有机相，饱和食盐水萃取有机相，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、减压浓缩，得到粗产物为黄色至紫黄色固体；

(5)粗产物用硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇混合溶液洗脱，得淡黄色至黄色产物纯品，即为相应的大黄素琥珀酰酯类化合物。

当R为乙基时，即大黄素琥珀酰酯类化合物为大黄素琥珀酰乙酯时，所述的方法按照以下步骤进行：

(1)琥珀酸单乙酯的合成：取琥珀酸酐置于圆底烧瓶中，以乙醇为溶剂，加热回流，减压蒸馏除去过量的乙醇，得淡黄色油状物即琥珀酸单乙酯，该产物不分离直接进行下一步反应；

(2)琥珀酸单乙酯酰氯的合成：取琥珀酸单乙酯置于圆底烧瓶中，以氯化亚砜为溶剂，加热回流，减压蒸馏除去过量的氯化亚砜，得淡黄色油状物即琥珀酸单乙酯酰氯，该产物不分离直接进行下一步反应；

(3)大黄素琥珀酰乙酯的合成：取大黄素和碱置于圆底烧瓶中，以二氯甲烷为溶剂，缓慢滴加琥珀酸单乙酯酰氯，室温反应；

(4)用碳酸氢钠水溶液萃取，合并有机相，饱和食盐水萃取有机相，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、减压浓缩，得到粗产物为紫黄色固体；

(5)粗产物用硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇混合溶液洗脱，得淡黄色产物纯品，即为大黄素琥珀酰乙酯。

在所述的方法中，优选的，步骤(1)中所述的加热回流的时间为3-10个小时，更优选为4个小时，按照g：ml计算，琥珀酸酐的质量与乙醇的体积比为＝1:10，更优选为1:4；步骤(2)中加热回流的时间为1-10个小时，更优选2小时；琥珀酸单乙酯与氯化亚砜的质量比为1:1～1:10，更优选为1:4；步骤(3)中，所述的碱为吡啶、三乙胺或氨水，更优选为吡啶，大黄素与琥珀酸单乙酯酰氯的质量比为＝1：0.5～1，更优选为1:0.7；步骤(5)中，二氯甲烷-甲醇混合溶液中，二氯甲烷与甲醇的体积比为100：1～100：更优选为100：1。

相对于现有技术，本发明的有益技术效果在于：

抗心肌缺血作用显著：大黄素琥珀酰酯类化合物能够显著增加缺血心脏的心脏功能，表现为增加缺血心脏的射血分数和短轴缩短率，此外所述的药物具有减小缺血心肌梗死面积和血清乳酸脱氢酶活性的作用。可以作为安全有效的预防和治疗心肌缺血的药物。

(1)抗心肌缺血作用显著优于大黄素：大黄素琥珀酰酯类化合物能够显著保护缺血心脏，增加缺血心脏的射血分数和短轴缩短率，减小缺血心肌梗死面积和血清乳酸脱氢酶活性效果显著优于同等剂量的大黄素。

(2)安全性好：本发明的新的抗心肌缺血化合物大黄素琥珀酰酯类化合物耐受量大，无明显毒副作用。

(3)用药简单方便，人或动物口服易吸收。

(4)本发明的药物原料为大黄素，成品成药性强，与其他进口抗心肌缺血药物相比，价格便宜，性价比高，易于患者接受。

(5)便于运输与保存，密封，置阴凉干燥处即可。

附图说明

图1为大黄素琥珀酰酯类化合物合成路线图；

图2为大黄素琥珀酰乙酯二维核磁相关信号示意图；

图3为大黄素琥珀酰乙酯对急性心肌梗死大鼠心脏功能的影响；

数据以均值±标准差表示，^***P<0.001vs.假手术组，^#P<0.05vs.心肌梗死组。假手术组，n＝8；心肌梗死组，n＝8；大黄素琥珀酰乙酯组(40mg/kg)，n＝6；大黄素组(40mg/kg)，n＝8。

图4为大黄素琥珀酰乙酯对急性心肌梗死大鼠心肌梗死面积的影响；

假手术组，n＝3；心肌梗死组，n＝3；大黄素琥珀酰乙酯组(40mg/kg)，n＝3；大黄素组(40mg/kg)，n＝3。

图5为大黄素琥珀酰乙酯对急性心肌梗死大鼠血清中乳酸脱氢酶的影响；

数据以均值±标准差表示，^**P<0.01vs.假手术组，^#P<0.05vs.心肌梗死组。假手术组，n＝8；心肌梗死组，n＝8；大黄素琥珀酰乙酯组(40mg/kg)，n＝6；大黄素组(40mg/kg)，n＝8。

图6为大黄素琥珀酰乙酯对急性心肌梗死小鼠心脏功能的影响；

数据以均值±标准差表示，^***P<0.001vs.假手术组，^#P<0.05vs.心肌梗死组。假手术组，n＝6；心肌梗死组，n＝6；大黄素琥珀酰乙酯组(40mg/kg)，n＝6；大黄素组(40mg/kg)，n＝6；

图7为大黄素琥珀酰乙酯对急性心肌梗死小鼠血清中乳酸脱氢酶的影响。

数据以均值±标准差表示，^**P<0.01vs.假手术组，^#P<0.05vs.心肌梗死组。假手术组，n＝6；心肌梗死组，n＝6；大黄素琥珀酰乙酯组(40mg/kg)，n＝6；大黄素组(40mg/kg)，n＝6。

具体实施方式

下面结合附图(表)及具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1大黄素琥珀酰乙酯的制备

取琥珀酸酐(1.0g，10mmol)置于10mL圆底烧瓶中，以乙醇(3.5mL，60mmol)为溶剂，加热回流4小时，减压蒸馏除去过量的乙醇，得淡黄色油状物即琥珀酸单乙酯(1.4g，96％)，该产物不分离直接进行下一步反应。

取琥珀酸单乙酯(1.0g，6.8mmol)置于10mL圆底烧瓶中，以氯化亚砜(4.0g，34.0mmol)为溶剂，加热回流2小时，减压蒸馏除去过量的氯化亚砜，得淡黄色油状物即琥珀酸单乙酯酰氯(1.1g，98％)，该产物不分离直接进行下一步反应。

取大黄素(1.0g，3.7mmol)和吡啶(0.45g，5.6mmol)置于10mL圆底烧瓶中，以二氯甲烷(3mL)为溶剂，在0℃下缓慢滴加琥珀酸单乙酯酰氯(0.7g，4.0mmol)，室温反应3小时。

用碳酸氢钠水溶液萃取(2mL×3)，合并有机相，饱和食盐水萃取有机相(3mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、减压浓缩，得到粗产物为紫黄色固体。

硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇(v/v 100:1)洗脱，得淡黄色产物纯品1.4g。收率94.7％，纯度97％。

大黄素琥珀酰酯类化合物合成路线图如图1所示，其中R为乙基。

实施例2大黄素琥珀酰乙酯的制备

取琥珀酸酐(10g，100mmol)置于150mL圆底烧瓶中，以乙醇(40mL，600mmol)为溶剂，加热回流6小时，减压蒸馏除去过量的乙醇，得淡黄色油状物即琥珀酸单乙酯(14g，96％)，该产物不分离直接进行下一步反应。

取琥珀酸单乙酯(10g，68mmol)置于150mL圆底烧瓶中，以氯化亚砜(40g，340mmol)为溶剂，加热回流2小时，减压蒸馏除去过量的氯化亚砜，得淡黄色油状物即琥珀酸单乙酯酰氯(11g，98％)，该产物不分离直接进行下一步反应。

取大黄素(10g，37mmol)和三乙胺(2.3g，22mmol)置于250mL圆底烧瓶中，以二氯甲烷(3mL)为溶剂，在0℃下缓慢滴加琥珀酸单乙酯酰氯(7g，40mmol)，室温反应3小时。用碳酸氢钠水溶液萃取(20mL×3)，合并有机相，饱和食盐水萃取有机相(30mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、减压浓缩，得到粗产物为紫黄色固体。

硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇(v/v 100:1)洗脱，得淡黄色产物纯品12.7g。收率92.3％，纯度98％以上。

大黄素琥珀酰酯类化合物合成路线图如图1所示，其中R为乙基。

实施例3大黄素琥珀酰乙酯的制备

取琥珀酸酐(10g，100mmol)置于150mL圆底烧瓶中，以乙醇(20mL，434mmol)为溶剂，加热回流2小时，减压蒸馏除去过量的乙醇，得淡黄色油状物即琥珀酸单乙酯(14g，96％)，该产物不分离直接进行下一步反应。

取琥珀酸单乙酯(10g，68mmol)置于150mL圆底烧瓶中，以氯化亚砜(20g，170mmol)为溶剂，加热回流1小时，减压蒸馏除去过量的氯化亚砜，得淡黄色油状物即琥珀酸单乙酯酰氯(8g，98％)，该产物不分离直接进行下一步反应。

取大黄素(10g，37mmol)和氨水(1.5g，44mmol)置于250mL圆底烧瓶中，以二氯甲烷(3mL)为溶剂，在室温下缓慢滴加琥珀酸单乙酯酰氯(8g，45mmol)，室温继续反应1小时。用碳酸氢钠水溶液萃取(20mL×3)，合并有机相，饱和食盐水萃取有机相(30mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤、减压浓缩，得到粗产物为紫黄色固体。

硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇(v/v 100:1)洗脱，得淡黄色产物纯品8g。总收率54.1％，纯度98％以上。

大黄素琥珀酰酯类化合物合成路线图如图1所示，其中R为乙基。

实施例4目标化合物结构鉴定

对实施例1-3制备得到的化合物的结构进行鉴定，鉴定结果表明：该化合物为大黄素琥珀酰乙酯，黄色粉末，溶于甲醇，

0.0°(c 0.5,CHCl₃)。IR(KBr,cm^-1)3500(-OH)、3088(Ar-H)、2981(R-H)、1763(C＝O)、1730(C＝O)、1624(苯环)、1481(苯环)。UV[nm(loge),MeOH]:278(3.37),268(3.40)。CD(nm,△ε,MeOH)：212(-0.56)。¹H-NMR中δ7.08(1H,d,J＝2.2Hz)、7.33(1H,d,J＝2.2Hz)为苯环上处于间位偶合的质子信号，δ7.39(1H,brs)、7.07(1H,brs)为芳香质子信号，δ2.91(2H,d,J＝6.2)、2.71(2H,d,J＝6.2Hz)、4.13(2H,q,J＝7.1Hz)为三个亚甲基质子信号，δ2.36(3H,s)、1.22(3H,t,J＝7.1Hz)为甲基质子信号。碳谱给出21个碳信号，其中δ190.8、181.0为酮羰基碳信号，δ172.0、170.6为酯羰基碳信号，163.2、162.0、157.0为苯环上连氧碳信号。在¹H-¹H COSY谱中，δ2.91、2.71有相关信号，δ4.13、1.22有相关信号。根据该化合物的DEPT谱可知，结构中含有4个sp2杂化的次甲基碳信号、12个sp²杂化的季碳信号，3个sp³杂化的亚甲基碳信号，2个甲基碳信号。通过HMQC谱对其碳氢信号进行了归属。在HMBC谱中，δ7.08质子与化学位移为163.2、114.3有远程相关，δ7.33质子与157.0、181.0、114.3的碳信号有远程相关，δ7.39的质子与δ149.5、181.0、113.8的碳信号有远程相关，δ7.07的质子与δ162.2、113.8的碳信号有远程相关。δ2.91的质子与δ170.6的碳信号有远程相关，δ2.71的质子与δ172.2的碳信号有远程相关，δ4.13的质子与δ172.2的碳信号有远程相关，δ1.22的质子与δ60.7的碳信号有远程相关，2.36的甲基质子与121.1、149.5、116.7的碳有远程相关。综合上述信息确定该化合物结构如下式I所示，信号归属如表1所示。大黄素琥珀酰乙酯二维核磁相关信号示意图如图2所示。

表1.大黄素琥珀酸乙酯NMR数据(600MHz，DMSO-d6)

实施例5本发明产品的功效性试验1

1、实验材料

实验动物：48只体重均匀的大鼠

受试物：大黄素琥珀酰乙酯(实施例1-3制备)

2、实验原理

通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌梗死的大鼠模型，再给予大鼠受试药物，可检测受试物对心肌缺血的影响，并可判定受试物对心肌梗死大鼠的心脏功能、心肌梗死面积与血清中乳酸脱氢酶活性的影响。

3、实验方法

3.1动物分组

随机分组：动物接收后，适应性喂养3天，适应期结束后，SD大鼠称重，按照体重随机分为4组，即假手术组、心肌梗死模型组、大黄素组(40mg/kg·d^-1)以及受试物组(大黄素琥珀酰乙酯40mg/kg·d^-1)。

3.2心肌梗死模型建立

大鼠心肌缺血模型是通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立的。健康的雄性SD大鼠(260±20g)用戊巴比妥钠(3.6g/kg)腹腔注射进行麻醉，并将已麻醉的大鼠仰卧位固定于鼠操作台上，连接呼吸机。左胸部皮肤做左上到右下斜切口，约1.5～2.0cm，分离胸大肌及前锯肌，于第4、5肋间钝性分离肋间肌，轻轻推挤出心脏，在左冠状动脉前降支距左心耳下缘1～2mm处穿一根5/0结扎线，进行冠状动脉结扎，结扎后可见心尖处颜色出现苍白，心电图中可见明显的S-T段抬高。

3.3给药及造模期：

将适应性喂养后的SPF级别的SD大鼠随机称重，随机分为4组，即假手术组、心肌梗死模型组、大黄素组和大黄素琥珀酰乙酯组，造模前通过灌胃(如表2所示)给予大鼠大黄素琥珀酰乙酯、大黄素以及空白溶剂，连续7天后进行结扎，结扎6小时后，检测各组大鼠心脏功能、检测心肌梗死面积和血清中乳酸脱氢酶的活性。

表2.各组动物给药及饮食情况

3.4观察期

实验过程中进行一般生命体征观察。

3.5主要检测指标

(1)造模结束后6小时，小动物超声检测各组大鼠心脏功能变化。

(2)心肌梗死面积测定。

(3)测定血清中乳酸脱氢酶的活性。

3.6大鼠心脏功能检测

检测大鼠心脏血流动力学参数采用

2100高分辨率小动物超声成像系统及MicroScan MS 250-0206探头，实验大鼠麻醉，仰卧位固定。胸前区脱毛，涂抹超声凝胶。探头置于大鼠左侧胸前，2D超声示左室短轴切面，二维(2D)引导下取M模式超声记录左心室运动情况，测量射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)，以此指标评价各组动物左心室功能。

3.7大鼠心肌梗死面积测定

取各组大鼠(n＝3)固定在固定板上，然后将腹腔打开，吸0.6ml 2％伊文斯兰注入腹主动脉，可以观察到瞬间整只大鼠四肢、口腔、尾、心脏全成深蓝或蓝色。1min后将心脏取下，用手术刀将上述组织切片，将整个心脏分离开，置于1％TTC中37℃ 10min。取出后置于4％多聚甲醛中固定。次日取出，观察红色缺血区域，白色梗塞区域，蓝色正常区域，并进行图像采集。

3.8血清中乳酸脱氢酶活性测定

取测完超声的大鼠血清(每只大鼠5ml左右)作为待测样本。向空白管、标准管、测定管、对照管依次按照说明书加入双蒸水、标准液、待测样本、基质缓冲液、辅酶I。混匀，37℃水浴。再全部加25μl 2,4-二硝基苯肼，混匀，37℃水浴15min。再全部加250μl 0.4mol/L的NaOH溶液，室温放置3min，440nm，双蒸水调1cm光径，分别测吸光度。酶标仪得出数据后，根据LDH标准曲线，计算血清中LDH活性，得出结果。

4.实验数据与结果

4.1数据处理

采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，36F值<0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

4.2实验结果

结果如图3所示，大鼠冠状动脉左前降支结扎6小时后，心肌梗死组与假手术组相比射血分数(EF)与短轴缩短率(FS)明显降低(^***P<0.001vs.假手术组)，而大黄素琥珀酰乙酯组与心肌梗死模型组比则明显升高(^##P<0.01vs.心肌梗死组)，具有显著的统计学差异。如图4所示，心肌梗死模型组与假手术组相比心肌梗死面积显著增加，而大黄素琥珀酰乙酯则能改善心肌梗死大鼠梗死面积。如图5所示，心肌梗死模型组与假手术组相比血清中乳酸脱氢酶(LDH)显著增加，而大黄素琥珀酰乙酯则能改善心肌梗死大鼠乳酸脱氢酶活性，其作用显著优于大黄素。

实施例6本发明产品的功效性试验2

1、实验材料

实验动物：24只体重均匀的小鼠

受试物：大黄素琥珀酰乙酯(实施例1-3制备)

2、实验原理

通过结扎小鼠冠状动脉左前降支24小时建立心肌梗死的小鼠模型，再给予小鼠受试药物，可检测受试物对心肌缺血的影响，并可判定受试物对心肌梗死小鼠的心脏功能和血清中乳酸脱氢酶活性的影响。

3、实验方法

3.1动物分组

随机分组：动物接收后，适应性喂养3天，适应期结束后，C47BL/6小鼠称重，按照体重随机分为4组，即假手术组、心肌梗死模型组、大黄素组(大黄素40mg/kg·d^-1)以及受试物组(大黄素琥珀酰乙酯40mg/kg·d^-1)。

3.2心肌梗死模型建立

小鼠心肌缺血模型是通过结扎小鼠冠状动脉左前降支建立的。健康的雄性C47BL/6小鼠(20±2g)用阿弗汀(0.2g/kg)腹腔注射进行麻醉,并将已麻醉的小鼠仰卧位固定于鼠操作台上，连接呼吸机。左胸部皮肤做左上到右下斜切口，约0.5～1.0cm，分离胸小肌及前锯肌，于第4、5肋间钝性分离肋间肌，轻轻推挤出心脏，在左冠状动脉前降支距左心耳下缘1～2mm处穿一根5/0结扎线，进行冠状动脉结扎，结扎后可见心尖处颜色出现苍白，心电图中可见明显的S-T段抬高。

3.3给药及造模期：

将适应性喂养后的SPF级别的小鼠随机称重，随机分为4组，即假手术组、心肌梗死模型组、大黄素组和大黄素琥珀酰乙酯组，造模前通过灌胃(如表3所示)给予小鼠大黄素琥珀酰乙酯、大黄素以及空白溶剂，连续7天后进行结扎，结扎24小时后，检测各组小鼠心脏功能积和血清中乳酸脱氢酶的活性。

表3.各组动物给药及饮食情况

3.4观察期

实验过程中进行一般生命体征观察。

3.5主要检测指标

造模结束后24小时，测定心脏功能和血清中乳酸脱氢酶的活性。

3.6血清中乳酸脱氢酶的活性测定

取测完超声的小鼠血清(每只小鼠1ml左右)作为待测样本。向空白管、标准管、测定管、对照管依次按照说明书加入双蒸水、标准液、待测样本、基质缓冲液、辅酶I。混匀，37℃水浴。再全部加25μl 2,4-二硝基苯肼，混匀，37℃水浴15min。再全部加250μl 0.4mol/L的NaOH溶液，室温放置3min，440nm，双蒸水调1cm光径，分别测吸光度。酶标仪得出数据后，根据LDH标准曲线，计算血清中LDH活性，得出结果。

4.实验数据与结果

4.1数据处理

采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，36F值<0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

4.2实验结果

利用冠状动脉左前降支结扎术建立小鼠心肌梗死模型，结果如图6所示，小鼠冠状动脉左前降支结扎24小时后，心肌梗死组与假手术组小鼠相比射血分数(EF)与短轴缩短率(FS)明显降低(^***P<0.001vs.假手术组)，而大黄素琥珀酰乙酯组与心肌梗死模型组比则明显升高(^#P<0.05vs.心肌梗死组)，具有显著的统计学差异，该作用优于大黄素。此外，心肌梗死模型组与假手术组相比小鼠血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)显著增加，而给予大黄素琥珀酰乙酯后则能显著降低心肌梗死小鼠血清中乳酸脱氢酶的活性(如图7所示)，其作用也明显优于大黄素。乳酸脱氢酶(LDH)几乎存在于所有组织中，以心、骨骼肌和肾脏最丰富，临床上可用于心脏疾病的诊断。以上结果表明大黄素琥珀酰乙酯具有减轻小鼠心肌缺血损伤的所用，且该作用优于大黄素。

Claims (6)

1.大黄素琥珀酰酯类化合物在制备抗心肌缺血药物中的用途，其特征在于，所述的大黄素琥珀酰酯类化合物具有式I所示的结构：

其中，R为C_1-5烷基。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的大黄素琥珀酰酯类化合物为大黄素琥珀酰乙酯。

3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的药物能够显著改善缺血心脏的心脏功能，表现为增加缺血心脏的射血分数和短轴缩短率。

4.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的药物能够减小缺血心脏的心肌梗死面积。

5.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的药物能够降低心肌缺血动物血清中的乳酸脱氢酶(LDH)活性。

6.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，将所述的大黄素琥珀酰酯类化合物加入制剂成型所需的辅料制备成胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂、缓释剂、注射剂。

Images