CN107936128A - 一种简便有效的细菌疫苗纯化方法 - Google Patents
一种简便有效的细菌疫苗纯化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107936128A CN107936128A CN201711175681.5A CN201711175681A CN107936128A CN 107936128 A CN107936128 A CN 107936128A CN 201711175681 A CN201711175681 A CN 201711175681A CN 107936128 A CN107936128 A CN 107936128A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- purification process
- polysaccharide
- zymotic fluid
- process according
- precipitation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
- A61K39/092—Streptococcus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明在保证肺炎多糖免疫原性和符合欧洲药典各指标要求的前提下,提供了一套快速的、简化的肺炎链球菌发酵液纯化方法,用于制备精制的荚膜多糖。该方法通过改进裂解剂作用环境,控制发酵液的细菌密度、裂解剂浓度、添加裂解剂后的裂解时间,并调节pH到一定范围,可直接经离心、超滤等步骤后用乙醇沉淀多糖,即为精制多糖,取消了微滤、层析等步骤,去掉了CTAB、酶、苯酚等物料的添加,具有多糖收率高、过程简单快速、减少时间成本、人力成本和物料成本等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种细菌疫苗的纯化方法,具体涉及一种细菌荚膜多糖的纯化方法。
背景技术
肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae)是环境中常见的致病菌,5%~10%正常人上呼吸道中携带此菌。引起的疾病根据感染部位可分为侵袭性肺炎球菌疾病(Invasive Pneumococ-cal Disease,IPD)和非IPD(NIPD)。IPD包括脑膜炎、菌血症、脓毒症以及积脓症、心包炎、心内膜炎、腹膜炎和化脓性骨关节炎等;NIPD则主要包括:扁桃体咽炎、中耳炎、鼻窦炎等。
肺炎链球菌感染是在全球范围内引起死亡的重要原因之一,婴幼儿和65岁以上老年人发病率明显高于其他年龄组。全球每年有1200万的儿童因感染肺炎链球菌住院,160万幼儿死亡,在用疫苗可预防儿童死亡的疾病中,肺炎链球菌引起的疾病排名第一,随着抗菌素的大量使用,耐药菌株与日俱增,医学界肺炎疫苗的研发关注度逐渐提高。
1977年美国食品药品管理局批准了默沙东的14价肺炎球菌多糖疫苗上市,自此第一个正式的肺炎疫苗诞生,此后该类疫苗的生产改进和研发一直在多国进行,目前市场上常见且效果较好的是23价肺炎多糖疫苗和13价肺炎结合疫苗。肺炎链球菌的荚膜多糖是肺炎链球菌最重要的毒力因子,是血清学分型的依据,同时也是重要的保护性抗原,现有疫苗均是提取其荚膜多糖为原料制得。
荚膜多糖制备的一般工艺为:菌种制备、发酵培养、荚膜多糖纯化后制得精制多糖,目前肺炎菌体的培养大都能达到较高的菌体密度,而多糖纯化工艺,一直在研发、改进和提升中。
现有专利和文献所述的荚膜多糖纯化方式多种多样,且相同纯化方法也有处理顺序的不同,目前常见的关键处理步骤包括:直接(或加裂解剂后)离心或微滤去固体杂质,调pH(文献和专利出现最低pH为3.0)或用蛋白酶、核酸酶等处理去蛋白和核酸,加活性炭或者碘化钠进一步去除杂质,用CTAB或(一次或二次)乙醇沉淀荚膜多糖,再用苯酚抽提或层析法精制多糖等。我们在前人研究的基础上,通过反复的摸索,惊喜地发现了一套快速、简单、无人员毒害和环境污染的荚膜多糖纯化工艺技术,并且多糖经检验均符合欧洲药典标准。该方法能提高多糖收率以及生产效率、显著降低生产成本,有实际的经济和社会效益。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足,在保证肺炎多糖免疫原性和符合欧洲药典各指标要求的前提下,提供一套快速的、简化的肺炎链球菌发酵液纯化方法,用于制备精制的荚膜多糖。该方法通过改进裂解剂作用环境,控制发酵液的细菌密度、裂解剂浓度、添加裂解剂后的裂解时间,并调节pH到一定范围,可直接经离心、超滤等步骤后用乙醇沉淀多糖,即为精制多糖,取消了微滤、层析等步骤,去掉了CTAB、酶、苯酚等物料的添加,具有多糖收率高、过程简单快速、减少时间成本、人力成本和物料成本等优点。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:
一种简便有效的细菌疫苗纯化方法,其特征在于:
S1、生产荚膜多糖的细菌发酵液,培养至吸光度保持恒定并开始下降时,终止培养;
S2、用组氨酸缓冲液稀释发酵液OD600至6.0以下,加裂解剂至终浓度为 0.08~0.15%(w/v),控温14~18℃,持续搅拌24~48小时;
S3、将S2步骤处理后的发酵液调pH至2.0~3.0,然后静置沉淀;
S4、将S3步骤处理后的发酵液连续流离心,收集上清,再澄清过滤、超滤;
S5、加入活性炭、澄清过滤、超滤;
S6、用一定浓度的乙醇沉淀S5步骤所得超滤液,得多糖沉淀;
S7、离心S6步骤所得沉淀,用无水乙醇和丙酮洗糖、吹干,得精制荚膜多糖,-20℃保存。
优选的,所述组氨酸缓冲溶液由组氨酸、KCl、MgCl2通过注射用水配制而成。
优选的,所述组氨酸缓冲溶液中组氨酸含量为90-120mmol/L,KCl含量为 240-275mmol/L,MgCl2含量为10mmol/L。
优选的,步骤S3中调pH以后,在常温下静置沉淀1~12小时。
优选的,步骤S3中调pH以后,在2~8℃静置2~72小时。
优选的,步骤S2中所述裂解剂为非动物源型溶解剂或动物源型溶解剂。
优选的,步骤S2中所述裂解剂为脱氧胆酸钠。
优选的,步骤S4中仅需要将调pH处理后的发酵液进行一次离心即可完成有效的固液分离。
优选的,步骤S3中所用的调pH所用酸为乙酸、磷酸、盐酸和硫酸的任意一种。
优选的,步骤S6中所述乙醇的浓度为80%。
本发明的有益效果是:
1、本发明通过改进裂解剂作用环境,使用组氨酸缓冲液稀释发酵液到一定菌体浓度以后再加入裂解剂使荚膜从菌体上剥,裂解剂在上述缓冲溶液中能够更大程度地发挥裂解作用进而有效提高多糖收率,并且后续的调pH步骤中在pH 降低将蛋白质等杂质沉淀出来时,能够减轻酸性环境对于多糖产率的影响;
2、本发明通过组合设定裂解的菌体浓度、裂解剂浓度和裂解时间以上三个工艺参数,有效调控荚膜从菌体上剥离的程度,进而控制多糖的收率;
3、本发明通过改进裂解剂作用环境、控制发酵液的细菌密度、控制添加裂解剂后的裂解时间,并加酸调pH值有效沉淀裂解后菌液中绝大部分蛋白、核酸及其他杂质,可直接经离心、超滤等步骤后用乙醇沉淀多糖,即为精制多糖,取消了微滤、层析等步骤,去掉了CTAB、酶、苯酚等物料的添加,并且在调节pH 后只需要进行一次离心即能达到很好的分离效果,具有过程简单快速、减少时间成本、人力成本和物料成本等优点。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案,但本发明的保护范围不局限于以下所述。
本发明所述的荚膜多糖纯化方法,皆适用于肺炎链球菌1、2、3、4、5、6A、 6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、 23F共24个血清型,也适用于b型流感嗜血杆菌、流行性脑膜炎球菌等菌的荚膜多糖纯化。此处只是举例,而不限于这些细菌。
实施例1:一种细菌疫苗的纯化方法,它包括以下步骤:
S1、肺炎1型发酵液,培养至吸光度保持恒定并开始下降时,终止培养。
S2、用组氨酸缓冲液稀释发酵液OD600至4.9,加裂解剂至终浓度为0.10%(w/v),控温14℃,持续搅拌35小时。
S3、将S2步骤处理后的发酵液调pH至2.5,2~8℃静置40小时。
S4、将S3步骤处理后的发酵液连续流离心,收集上清。再过滤、超滤。
S5、加入活性炭、澄清过滤、超滤。
S6、用80%乙醇沉淀S5步骤所得超滤液,得多糖沉淀。
S7、离心S6步骤所得沉淀,用无水乙醇和丙酮洗糖、吹干,得精制荚膜多糖,于-20℃保存。
实施例2:一种细菌疫苗的纯化方法,它包括以下步骤:
S1、肺炎1型发酵液,培养至吸光度保持恒定并开始下降时,终止培养。
S2、用组氨酸缓冲液稀释发酵液OD600至5.2,加裂解剂至终浓度为0.09% (w/v),控温15℃,持续搅拌29小时。
S3、将S2步骤处理后的发酵液调pH至3.0,常温静置沉淀6小时。
S4、将S3步骤处理后的发酵液连续流离心,收集上清。再过滤、超滤。
S5、加入活性炭、澄清过滤、超滤。
S6、用80%乙醇沉淀S5步骤所得超滤液,得多糖沉淀。
S7、离心S6步骤所得沉淀,用无水乙醇和丙酮洗糖、吹干,得精制荚膜多糖,于-20℃保存。
实施例3:一种细菌疫苗的纯化方法,它包括以下步骤:
S1、肺炎2型发酵液,培养至吸光度保持恒定并开始下降时,终止培养。
S2、用组氨酸缓冲液稀释发酵液OD600至5.5,加裂解剂至终浓度为0.12% (w/v),控温16℃,持续搅拌24小时。
S3、将S2步骤处理后的发酵液调pH至3.0,常温静置沉淀3小时。
S4、将S3步骤处理后的发酵液连续流离心,收集上清。再过滤、超滤。
S5、加入活性炭、澄清过滤、超滤。
S6、用80%乙醇沉淀S5步骤所得超滤液,得多糖沉淀。
S7、离心S6步骤所得沉淀,用无水乙醇和丙酮洗糖、吹干,得精制荚膜多糖,于-20℃保存。
实施例4:一种细菌疫苗的纯化方法,它包括以下步骤:
S1、肺炎2型发酵液,培养至吸光度保持恒定并开始下降时,终止培养。
S2、用组氨酸缓冲液稀释发酵液OD600至4.8,加裂解剂至终浓度为0.15% (w/v),控温18℃,持续搅拌27小时。
S3、将S2步骤处理后的发酵液调pH至3.0,2~8℃静置沉淀25小时。
S4、将S3步骤处理后的发酵液连续流离心,收集上清。再过滤、超滤。
S5、加入活性炭、澄清过滤、超滤。
S6、用80%乙醇沉淀S5步骤所得超滤液,得多糖沉淀。
S7、离心S6步骤所得沉淀,用无水乙醇和丙酮洗糖、吹干,得精制荚膜多糖,于-20℃保存。
实施例5:一种细菌疫苗的纯化方法,它包括以下步骤:
S1、肺炎3发酵液,培养至吸光度保持恒定并开始下降时,终止培养。
S2、用组氨酸缓冲液稀释发酵液OD600至5.8,加裂解剂至终浓度为0.13% (w/v),控温17℃,持续搅拌45小时。
S3、将S2步骤处理后的发酵液调pH至2.0,2~8℃静置48小时。
S4、将S3步骤处理后的发酵液连续流离心,收集上清。再过滤、超滤。
S5、加入活性炭、澄清过滤、超滤。
S6、用80%乙醇沉淀S5步骤所得超滤液,得多糖沉淀。
S7、离心S6步骤所得沉淀,用无水乙醇和丙酮洗糖、吹干,得精制荚膜多糖,于-20℃保存。
实施例6:一种细菌疫苗的纯化方法,它包括以下步骤:
S1、肺炎4型发酵液,培养至吸光度保持恒定并开始下降时,终止培养。
S2、用组氨酸缓冲液稀释发酵液OD600至4.5,加裂解剂至终浓度为0.11% (w/v),控温16℃,持续搅拌40小时。
S3、将S2步骤处理后的发酵液调pH至3.0,常温静置沉淀7小时。
S4、将S3步骤处理后的发酵液连续流离心,收集上清。再过滤、超滤。
S5、加入活性炭、澄清过滤、超滤。
S6、用80%乙醇沉淀S5步骤所得超滤液,得多糖沉淀。
S7、离心S6步骤所得沉淀,用无水乙醇和丙酮洗糖、吹干,得精制荚膜多糖,于-20℃保存。
以下通过实验结果说明本发明的有益效果:
本发明实例的实验结果:多糖收率、各指标合格情况如表1所示。
表1纯化肺炎荚膜多糖后的实验结果
由表1可知:采用本发明纯化的肺炎荚膜多糖,收率较高,且各指标均符合欧洲药典标准。
表2使用不同缓冲液的多糖收率考察
通过实施例1中方法制备肺炎1型发酵液,分别将步骤(2)中稀释发酵液的缓冲液替换为注射用水、甘氨酸缓冲液、PBS缓冲液;通过实施例3中方法制备肺炎2型发酵液,分别将步骤(2)中稀释发酵液的缓冲液替换为注射用水、甘氨酸缓冲液、PBS缓冲液;通过实施例5中方法制备肺炎3型发酵液,分别将步骤(2)中稀释发酵液的缓冲液替换为注射用水、甘氨酸缓冲液、PBS缓冲液;通过实施例6中方法制备肺炎4型发酵液,分别将步骤(2)中稀释发酵液的缓冲液替换为注射用水、甘氨酸缓冲液、PBS缓冲液,分别考察上述不同类型细菌发酵液应用不同缓冲液情况下的多糖收率。
通过实验发现,当使用组氨酸缓冲液稀释发酵液到一定菌体浓度以后再加入裂解剂使荚膜从菌体上剥离,将菌体悬浮在组氨酸缓冲溶液中,裂解剂在上述缓冲溶液中能够更大程度地发挥裂解作用进而有效提高多糖收率,并且后续的调 pH步骤中在pH降低将蛋白质沉淀出来时,能够减轻酸性环境对于多糖产率的影响,通过组氨酸缓冲液来稀释发酵液进而制备荚膜多糖得到的多糖产率明显高于不使用缓冲液和使用其它缓冲液。
将本发明应用于规模化生产,较现有荚膜多糖纯化技术的优点见表3。
表3本发明与现有荚膜多糖纯化技术的比较
注:人员和时间的计算,按每周1批连续生产,每批40~100L发酵液处理
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例的排除,而可用于各种其他组合、修改和环境,并能够在本文所述构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围,则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。
Claims (10)
1.一种简便有效的细菌疫苗纯化方法,其特征在于:
S1、生产荚膜多糖的细菌发酵液,培养至吸光度保持恒定并开始下降时,终止培养;
S2、用组氨酸缓冲液稀释发酵液OD600至6.0以下,加裂解剂至终浓度为0.08~0.15%(w/v),控温14~18℃,持续搅拌24~48小时;
S3、将S2步骤处理后的发酵液调pH至2.0~3.0,然后静置沉淀;
S4、将S3步骤处理后的发酵液连续流离心,收集上清,再澄清过滤、超滤;
S5、加入活性炭、澄清过滤、超滤;
S6、用一定浓度的乙醇沉淀S5步骤所得超滤液,得多糖沉淀;
S7、离心S6步骤所得沉淀,用无水乙醇和丙酮洗糖、吹干,得精制荚膜多糖,-20℃保存。
2.一种根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于:所述组氨酸缓冲溶液由组氨酸、KCl、MgCl2通过注射用水配制而成。
3.一种根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于:所述组氨酸缓冲溶液中组氨酸含量为90-120mmol/L,KCl含量为240-275mmol/L,MgCl2含量为10mmol/L。
4.一种根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于:步骤S3中调pH以后,在常温下静置沉淀1~12小时。
5.一种根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于:步骤S3中调pH以后,在2~8℃静置2~72小时。
6.一种根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于:步骤S2中所述裂解剂为非动物源型溶解剂或动物源型溶解剂。
7.一种根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于:步骤S2中所述裂解剂为脱氧胆酸钠。
8.一种根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于:步骤S4中仅需要将调pH处理后的发酵液进行一次离心即可完成有效的固液分离。
9.一种根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于:步骤S3中所用的调pH所用酸为乙酸、磷酸、盐酸和硫酸的任意一种。
10.一种根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于:步骤S6中所述乙醇的浓度为80%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711175681.5A CN107936128B (zh) | 2017-11-22 | 2017-11-22 | 一种简便有效的细菌疫苗纯化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711175681.5A CN107936128B (zh) | 2017-11-22 | 2017-11-22 | 一种简便有效的细菌疫苗纯化方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107936128A true CN107936128A (zh) | 2018-04-20 |
CN107936128B CN107936128B (zh) | 2020-07-03 |
Family
ID=61930796
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201711175681.5A Active CN107936128B (zh) | 2017-11-22 | 2017-11-22 | 一种简便有效的细菌疫苗纯化方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107936128B (zh) |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101663327A (zh) * | 2007-03-23 | 2010-03-03 | 惠氏公司 | 产生肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae)荚膜多糖的缩短的纯化方法 |
CN101932698A (zh) * | 2007-12-20 | 2010-12-29 | 诺华有限公司 | 培养链球菌的发酵工艺以及从中提取cps的纯化工艺 |
WO2011148382A1 (en) * | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Biological E Limited | An improved process for the purification of capsular polysaccharides of haemophilus influenza - b, neisseria meningitis such as serotypes a, c, y and w-135, and other similar related capsular polysaccharides produced from both gram negative and gram positive microorganisms using aluminium phosphate with alcohol. |
CN104080904A (zh) * | 2011-12-15 | 2014-10-01 | 血清研究所印度有限公司 | 培养细菌以提高荚膜多糖产率的新方法 |
CN104530250A (zh) * | 2014-12-11 | 2015-04-22 | 北京科兴生物制品有限公司 | 一种纯化肺炎链球菌荚膜多糖的方法 |
CN104781413A (zh) * | 2012-09-07 | 2015-07-15 | Sk化学公司 | 用于具有肺炎球菌血清型的荚膜多糖的生产方法 |
CN106397537A (zh) * | 2016-10-13 | 2017-02-15 | 河北佑仁生物科技有限公司 | 一种高效快速的多糖蛋白结合疫苗纯化分析方法 |
-
2017
- 2017-11-22 CN CN201711175681.5A patent/CN107936128B/zh active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101663327A (zh) * | 2007-03-23 | 2010-03-03 | 惠氏公司 | 产生肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae)荚膜多糖的缩短的纯化方法 |
CN101932698A (zh) * | 2007-12-20 | 2010-12-29 | 诺华有限公司 | 培养链球菌的发酵工艺以及从中提取cps的纯化工艺 |
WO2011148382A1 (en) * | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Biological E Limited | An improved process for the purification of capsular polysaccharides of haemophilus influenza - b, neisseria meningitis such as serotypes a, c, y and w-135, and other similar related capsular polysaccharides produced from both gram negative and gram positive microorganisms using aluminium phosphate with alcohol. |
CN104080904A (zh) * | 2011-12-15 | 2014-10-01 | 血清研究所印度有限公司 | 培养细菌以提高荚膜多糖产率的新方法 |
CN104781413A (zh) * | 2012-09-07 | 2015-07-15 | Sk化学公司 | 用于具有肺炎球菌血清型的荚膜多糖的生产方法 |
CN104530250A (zh) * | 2014-12-11 | 2015-04-22 | 北京科兴生物制品有限公司 | 一种纯化肺炎链球菌荚膜多糖的方法 |
CN106397537A (zh) * | 2016-10-13 | 2017-02-15 | 河北佑仁生物科技有限公司 | 一种高效快速的多糖蛋白结合疫苗纯化分析方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
任克明 等: "响应面法优化14型肺炎链球菌荚膜多糖的超滤工艺", 《中国生物制品学杂志》 * |
任克明: "14型肺炎球菌荚膜多糖纯化工艺的建立与优化", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN107936128B (zh) | 2020-07-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5843612B2 (ja) | 肺炎連鎖球菌(Streptococcuspneumoniae)血清型19A多糖の分子量を制御するための方法 | |
AU2009335824B2 (en) | Method for controlling Streptococcus pneumoniae polysaccharide molecular weight using carbon | |
CN101402944B (zh) | 一种ev-71病毒毒种、人用灭活疫苗及其制备方法 | |
CN104099301B (zh) | 柯萨奇病毒a16型病毒株、用途、疫苗及其制备方法 | |
CN108244432A (zh) | 一种发酵蛹虫草益生菌饮料及其制备方法 | |
CN102653565A (zh) | 一种从荚膜细菌发酵液纯化荚膜多糖的方法 | |
CN101575593A (zh) | 手足口病疫苗及其制备方法和应用 | |
CN111728976A (zh) | 岩藻寡糖在制备肠道益生元中的应用 | |
CN106755257A (zh) | 一种蚯蚓多肽提取物的制备方法 | |
CN107058421A (zh) | 一种336型金黄色葡萄球菌中荚膜多糖的提取纯化方法 | |
CN106479936A (zh) | 一种绵羊肺炎支原体低血清培养基及其制备方法 | |
CN106399206A (zh) | 一种牛支原体培养基及制备方法 | |
CN103734745B (zh) | 一种高浓度乳铁蛋白与嗜酸乳杆菌复合微胶囊的制备方法 | |
CN103333849B (zh) | 金黄色葡萄球菌突变株及其制备方法和应用 | |
CN103160555A (zh) | 一种促进产气荚膜梭菌高产外毒素的培养基及其培养方法和其应用 | |
CN1686540A (zh) | 四价轮状病毒灭活疫苗的制备及应用 | |
CN107936128A (zh) | 一种简便有效的细菌疫苗纯化方法 | |
CN105131139B (zh) | 一种肺炎链球菌荚膜多糖的纯化方法 | |
CN110747218A (zh) | 一种特殊膳食蛋白质的生产方法与应用 | |
CN105420153B (zh) | 一种绿脓杆菌发酵培养基及其发酵培养方法、疫苗制备方法 | |
CN106497850B (zh) | 一种纯化猪肺炎支原体的方法 | |
CN112043723B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌胞外多糖的应用 | |
CN104558225B (zh) | 一种针对肠道细菌的荚膜多糖提取方法 | |
WO2020139308A1 (ru) | Инактивированная стафилококковая жидкая вакцина | |
CN101220094A (zh) | 腺病毒anti-Fi、anti-Pb和anti-Hx的免疫球蛋白制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |