CN107841552B - 一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合、mlpa探针、基因芯片及试剂盒 - Google Patents
一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合、mlpa探针、基因芯片及试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107841552B CN107841552B CN201710963634.0A CN201710963634A CN107841552B CN 107841552 B CN107841552 B CN 107841552B CN 201710963634 A CN201710963634 A CN 201710963634A CN 107841552 B CN107841552 B CN 107841552B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- heart disease
- congenital heart
- kit
- microdeletion
- microduplication
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000523 sample Substances 0.000 title claims abstract description 61
- 238000007838 multiplex ligation-dependent probe amplification Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 208000002330 Congenital Heart Defects Diseases 0.000 title claims abstract description 29
- 208000028831 congenital heart disease Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 26
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 5
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 49
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 13
- 238000012217 deletion Methods 0.000 abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 11
- 230000037430 deletion Effects 0.000 abstract description 7
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 abstract description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 abstract description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 abstract description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 abstract description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 8
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 8
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 8
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 6
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 6
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 4
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 4
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 4
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 3
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 3
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 3
- 208000032170 Congenital Abnormalities Diseases 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 101150013690 Cdr2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 101150118364 Crkl gene Proteins 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 101150080984 Gja5 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 206010050469 Holt-Oram syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101001014196 Homo sapiens Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000895759 Homo sapiens Eukaryotic elongation factor 2 kinase Proteins 0.000 description 1
- 101000713590 Homo sapiens T-box transcription factor TBX1 Proteins 0.000 description 1
- 101150002003 NIPA2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010029748 Noonan syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 101000615913 Oryza sativa subsp. japonica Mitogen-activated protein kinase kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101150052097 SH2B1 gene Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000007698 birth defect Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000032692 embryo implantation Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011841 epidemiological investigation Methods 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 101150003286 gata4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150101299 gene 4 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000307 polymer substrate Polymers 0.000 description 1
- 238000003793 prenatal diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000009609 prenatal screening Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010863 targeted diagnosis Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复位点的引物组合、MLPA探针、基因芯片及试剂盒,涉及生物技术领域,所述引物组合、MLPA探针、基因芯片及试剂盒均具有如SEQ ID NO.1‑66所示的核苷酸序列。本发明提供的引物组合、MLPA探针、基因芯片及试剂盒可以同时检测多个位点的先天性心脏病微缺失,特异性好,反应灵敏,检测时间短,方法简单、从点突变到大染色体缺失/插入都可以进行检测,成本低廉,临床应用价值高。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,尤其涉及一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合、MLPA探针、基因芯片及试剂盒。
背景技术
先天性心脏病(congernital heart diseases,CHD)现已成为广泛发生一种先天性出生缺陷。我国每年约有15-20万先天性心脏病患儿出生,在新生儿中其发病率约为0.7-1.0%,是新生儿非感染性死亡的重要死亡原因之一。先天性心脏病按照有无合并其他畸形大致分为两类,一类为孤立型的先天性心脏病,另一类为综合征型先天性心脏病。综合征型先天性心脏病患儿多呈现出典型的外貌特征,伴或不伴有不同程度智力或生长发育异常及先天性多器官发育畸形等,其常见综合征型先天性心脏病为Down氏综合征,Holt-Oram综合征,努南综合征,DiGeoge综合征等。
近年来,大量流行病学调查研究显示多种因素包括遗传因素,环境因素及其二者的共同作用参与了先天性心脏病的发生,其中,遗传因素与先天性心脏病发生密切相关,其中染色体微缺失和微重复也是胚胎染色体异常的常见类型。染色体微缺失/微重复是指染色体上出现长度为1.5kb-10Mb的缺失或重复。尽管每种微缺失综合征发病率都很低,如较常见的22q11微缺失综合征发生率为1∶4000,但由于临床检测技术的限制,大量的微缺失综合征患者在产前筛查和产前诊断中无法检出,更为重要的是作为胚胎植入前诊断的最主要的样本类型,平衡易位患者的胚胎必须通过分析微重复和微缺失来判定胚胎是否发生异常。因此,如果在试管婴儿技术中能够避免移植有染色体微缺失/微重复的胚胎,将具有很重要的意义。
目前微缺失综合征的诊断技术主要包括高分辨率核型分析、荧光原位杂交、BoBs液态基因芯片检测或微阵列比较基因组杂交,其中,高分辨率核型分析方法仅能发现少部分较大片段的微缺失异常,荧光原位杂交方法特异性好,但是只能进行靶向性诊断。
发明内容
为解决现有技术存在的只能一次检测一个位点的问题,本发明提供一种可以同时快速检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的试剂盒,使用本发明提供的引物、MLPA探针或基因芯片方法简单,成本低廉,临床应用价值高。
为实现本发明的技术目的,本发明一方面提供一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合,其具有如SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列。
其中,所述引物组合是基于NIPA2基因、SH2B1基因、GJA5基因、TBX1基因、CRKL基因、MAPKK1基因、EEF2K基因、CDR2基因、MHY11基因和GATA4基因设计的多个引物对,其依次具有SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列。
为实现本发明的技术目的,本发明另一方面提供一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的MLPA探针组合,其具有如SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列。
其中,所述每个MLPA探针上具有荧光标记和通用引物。
其中,所述通用引物对依次具有如SEQ ID NO.67-68所示的核苷酸序列。
为实现本发明的技术目的,本发明再一方面提供一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的试剂盒,其包括上述的引物组合或上述的MLPA探针组合。
其中,所述试剂盒还包括反应液。
其中,所述反应液包括常规的用于MLPA杂交连接反应的缓冲剂、连接酶、聚合酶以及用于PCR反应的缓冲剂、连接酶、聚合酶或其他相关试剂。
其中,上述试剂可以通过市售获得。
其中,所述MLPA杂交连接反应的反应条件为在95℃反应1min,60℃温浴杂交反应3小时。
其中,所述PCR反应的条件为:95℃预变性5min,95℃变性10s,60℃退火20s,72℃聚合20s,35个循环后,72℃延长聚合10min,4℃保存。
为实现本发明的技术目的,本发明再提供一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的方法,其采用上述引物组合或MLPA探针组合或试剂盒对待测样本进行检测。
其中,所述对待测样本进行检测是指对待测样本的全基因组DNA进行检测。
其中,所述待测样本可以是任意一种可以提取出的全基因组DNA的样本,包括但不限于血液、羊水细胞、皮肤组织等
其中,所述采用上述引物组合或MLPA探针组合或试剂盒对待测样本进行检测包括:
提取待测样本的DNA溶液后,进行变性处理,得到变性后的基因组DNA;
利用所述引物组合制成的MLPA探针组合或所述MLPA探针组合或试剂盒中的MLPA探针组合与变形后的基因组DNA进行杂交连接反应,获得连接产物;
将得到连接产物进行PCR反应后,对PCR扩增产物进行毛细管电泳,得到毛细管电泳结果;
对毛细管电泳结果进行分析后,判断待测样本是否发生先天性心脏病微缺失。
其中,所述变性处理是将DNA溶液在98℃处理5分钟。
其中,所述杂交连接反应的反应液为:
其中,所述杂交连接反应的反应条件为在95℃反应1min,60℃温浴杂交反应3小时。
其中,所述PCR反应的反应液为:
其中,所述PCR反应的反应条件为:95℃预变性5min,95℃变性10s,60℃退火20s,72℃聚合20s,35个循环后,72℃延长聚合10min,4℃保存。
为实现本发明的技术目的,本发明还提供一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的基因芯片,包括固相载体及附着在其上的基因探针。
其中,所述基因探针具有如SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列。
其中,所述固相载体为适用于制作基因芯片的任一一种固相载体。
有益效果
本发明方法利用具有SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列的引物组合或MLPA探针或基因芯片或试剂盒可以在一个管中同时检测多个位点的先天性心脏病微缺失或/和微重复,特异性好,反应灵敏,检测时间短,方法简单、从点突变到大染色体缺失/插入都可以进行检测,成本低廉,临床应用价值高。
附图说明
图1是本发明实施例1进行毛细管电泳的检测结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解的是这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1引物、探针及试剂盒
1、引物
依据内参基因GAPDH和目的基因NOTCH3的序列信息,设计引物,并将设计得到的引物利进行二级结构评估和Tm值评估,最终获得特异性好、灵敏度高,并且可以在同一反应条件下检测出待测样本的先天性心脏病微缺失或/和微重复的本发明的SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列的引物序列。
二级结构评估及Tm值评估可以采用本领域常用的任一一种方式进行,例如在本发明的一个实施例中,采用DNA folding form评估其二级结构,具体是(http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/DNA-Folding-Form);采用MLPA自带软件RaW-Probe评估其Tm值。
2、MLPA探针
根据MLPA原理,将上述引物进行标记,并与通用引物序列结合,形成MLPA探针,其中,本发明的MLPA探针所使用的通用引物的序列如SEQ ID NO.67-68所示;所述对上述引物标记采用常规技术,例如荧光标记。
3、基因芯片
本申请的基因芯片是采用常规方法将步骤2获得的探针固定在聚合物基片行,例如尼龙膜、硝酸纤维膜、塑料、硅胶晶片、微型磁珠等,或将探针固定在玻璃板上,或在玻璃等硬质表面上直接合成本申请的MLPA探针。本申请的基因芯片的使用方法与常规方法相同。
4、试剂盒
该试剂盒包括步骤1中的引物,或步骤2中的MLPA探针。
优选条件是包括步骤2中的MLPA探针。
当试剂盒中包括步骤2中的MLPA探针时,其中还包括杂交连接反应用的反应液和PCR反应用的反应液。
进一步的,杂交连接反应用的反应液为本领域MLPA反应常规使用的缓冲液、连接酶或其他相关试剂;PCR反应液为本领域常规使用的PCR反应常规使用的Buffer、dNTP、MgCl2、MLPA-F、MLPA-R、Hot start Taq、ddHB2BO。
进一步的,本发明的试剂盒所使用的条件包括杂交连接反应条件和PCR反应条件,其中,杂交连接反应条件为95℃反应1min,60℃温浴杂交反应3小时;PCR反应的条件为:95℃预变性5min,95℃变性10s,60℃退火20s,72℃聚合20s,35个循环后,72℃延长聚合10min,4℃保存。
实施例2正常DNA样本的检测
利用实施例1中的试剂盒对人的正常DNA进行检测,该DNA从人的血液中提取,具体操作如下:
1样本的获取及处理
采集人的外周血,并采用常规的DNA提取试剂盒提取样本中的全基因组DNA,获得全基因组DNA样本,利用Thermo Scientific NanoDrop 2000紫外分光光度计测量DNA样本浓度,并稀释至20ng/μl,备用;
抽取其中的5μl基因组DNA(总量为100ng)于200μl PCR反应管中98℃变性5分钟,得到变性后的全基因组DNA。
2反应液的配制
将试剂盒中的每条探针分别稀释至500fmol/ul,配制成Probe Mix;然后配制杂交连接反应液,即
3杂交连接反应
取步骤2配制的杂交反应液5μl,加入步骤1的PCR反应管中,枪头反复吹吸至完全混匀后,在95℃反应1min,60℃温浴杂交反应3小时,得到连接产物。
4 PCR扩增
配制PCR反应液,并以每管24μl分装于200μl PCR薄壁反应管中,取步骤3得到的连接产物1μl作为PCR反应模板进行PCR扩增,得到扩增产物。
其中,PCR反应液为:
PCR反应条件为:95℃预变性5min,95℃变性10s,60℃退火20s,72℃聚合20s,35个循环后,72℃延长聚合10min,4℃保存。
5.数据分析
将得到扩增产物均做3个平行管,并设立有内参基因,进行毛细管电泳实验,得到如图1所示的电泳图,将试验结果采集的荧光数据利用ABI 3730XL测序仪处理后,得到峰型的面积数据。取每个基因的峰型面积(area)数据的平均值(DQ值),通过相对定量的方式计算是否存在拷贝数变异,即:DQ值=待检样品的待检基因(NOTCH3)峰型面积/待检样品的内参基因(GAPDH)峰型面积对照样品的待检基因(NOTCH3)峰型面积/对照样品的内参基因(GAPDH)峰型面积
当计算结果为0.80<DQ<1.20,则判定样本正常,没有发生微缺失(Normal);
当计算结果为DQ=0.00,则判断样本为纯合子缺失(Homozygous deletion);
当计算结果为0.40<DQ<0.65,则判断样本为杂合子缺失(Heterozygousdeletion);
当计算结果为1.3<DQ<1.65,则判断样本为杂合子重复(Heterozygousduplication);
当计算结果为1.75<DQ<2.15,则判断样本杂合子/纯合子三倍重复(Heterozygous triplication/homozygous)。
根据图1所示的毛细管电泳图可以看出,本发明的包含多个引物的MLPA探针对一个样本进行检测的峰图清晰,无噪音,可见,本发明提供MLPA探针特异性好、灵敏度高,而且多对MLPA探针可以同时对一个样本进行检测,效率高,成本低廉。
应用实施例
采集19份患有先天性心脏病的患者的血液样本,采用常规方法提取其全基因组DNA,获得19份待检测的样本。先将19份待检测的样本采用常规的荧光原位杂交方法进行基因检测,得到如表1所示的检测结果,再将19份待检测的样本采用本发明实施例2所述的方法进行检测,获得如表2所示的计算结果。
表1常规方法检测结果
表2本发明方法检测结果
注:图中斜体字体表示微重复,斜体加黑字体表示微缺失。
根据表1和表2所示的检测结果可知,本发明方法所检测的结果与常规方法检测结果相同,均检测出样本F1、H9、A11、G12发生了微缺失,G2既发生了微缺失也发生了微重复,其他样本发生了微重复,而且,根据表2所示的检测结果,还可以根据实施例2步骤5中的判断标准直接判断样本中微重复或微缺失发生的具体基因以及发生类型。
并且,在试验中还发现,采用常规方法进行需要对样本进行多次的不同基因检测才能判定样本是否发生了微重复或/和微缺失,检测时间长达2天以上,而本发明方法一次性就可以检测一个样本是否发生了微重复或微缺失,而且可以判断该样本中发生了微重复或微缺失的具体基因及发生类型,仅需8小时。
可见,本发明方法具有与常规方法同样的检测效果,而且检测效率高,准确率好。
Claims (4)
1.一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合,其特征在于,由如SEQIDNO.1-66所示的核苷酸序列组成。
2.一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的MLPA探针组合,其特征在于,由如SEQID NO.1-66所示的核苷酸序列以及通用引物组成,所述探针其上具有荧光标记;
其中,所述通用引物依次具有如SEQ ID NO.67-68所示的核苷酸序列。
3.一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的基因芯片,包括由SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列组成的MLPA探针,以及用于承载所述MLPA探针的固相载体。
4.一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的试剂盒,其特征在于,其具有权利要求1所述的引物组合或权利要求2所述的MLPA探针组合或权利要求3所述的基因芯片。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710963634.0A CN107841552B (zh) | 2017-10-17 | 2017-10-17 | 一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合、mlpa探针、基因芯片及试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710963634.0A CN107841552B (zh) | 2017-10-17 | 2017-10-17 | 一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合、mlpa探针、基因芯片及试剂盒 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107841552A CN107841552A (zh) | 2018-03-27 |
CN107841552B true CN107841552B (zh) | 2021-04-30 |
Family
ID=61662397
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710963634.0A Active CN107841552B (zh) | 2017-10-17 | 2017-10-17 | 一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合、mlpa探针、基因芯片及试剂盒 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107841552B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109880895A (zh) * | 2019-01-30 | 2019-06-14 | 中国人民解放军总医院 | 一种探针组及其应用 |
CN110857451B (zh) * | 2019-11-19 | 2023-01-17 | 国家卫生健康委科学技术研究所 | 一种检测复发性流产的微缺失或/和微重复的引物组合、mlpa探针、基因芯片及试剂盒 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101575647B (zh) * | 2009-06-19 | 2012-02-15 | 成都军区昆明总医院 | 一种y染色体微缺失的基因检测方法 |
CN103374625B (zh) * | 2012-04-27 | 2016-04-13 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 先天性心脏病相关基因dlc1及其应用 |
CN104651516B (zh) * | 2015-03-02 | 2020-04-10 | 苏州市立医院 | 新的染色体微缺失/微重复综合征检测体系及试剂盒 |
-
2017
- 2017-10-17 CN CN201710963634.0A patent/CN107841552B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN107841552A (zh) | 2018-03-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2021200925B2 (en) | Assays for single molecule detection and use thereof | |
US20220033909A1 (en) | Methods for simultaneous amplification of target loci | |
US20200123612A1 (en) | Methods for simultaneous amplification of target loci | |
JP6328934B2 (ja) | 非侵襲性出生前親子鑑定法 | |
US9738924B2 (en) | Method of DNA detection and quantification by single-molecule hybridization and manipulation | |
TR201807917T4 (tr) | Maternal numunelerde fetal nükleik asitlerin fraksiyonunu belirleme yöntemleri. | |
JP2015526073A (ja) | 高度多重pcr法および組成物 | |
KR20070031923A (ko) | 염색체 이상의 검출방법 | |
CN106755329B (zh) | 基于二代测序技术检测α和β地中海贫血点突变的试剂盒 | |
CN107488711B (zh) | 点突变的基因型检测的方法及其试剂盒 | |
Konings et al. | Microarray analysis of copy number variation in single cells | |
CN113502335A (zh) | 一种与绵羊生长性状相关的分子标记及其应用 | |
CN106939334B (zh) | 一种孕妇血浆中胎儿dna含量的检测方法 | |
CN107841552B (zh) | 一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合、mlpa探针、基因芯片及试剂盒 | |
CN115948532A (zh) | 基于数字pcr技术的sma检测试剂盒 | |
Rahil et al. | Rapid detection of common autosomal aneuploidies by quantitative fluorescent PCR on uncultured amniocytes | |
CN109182493B (zh) | 人16p11.2微缺失综合征检测的引物和试剂盒及其检测方法 | |
CN107988385B (zh) | 一种检测肉牛PLAG1基因Indel标记的方法及其专用试剂盒 | |
CN111334568A (zh) | 一种先天性心脏病基因拷贝数变异及易感者筛选的多重连接探针扩增探针组合及试剂盒 | |
WO2008070249A2 (en) | A method of detecting genomic aberrations for prenatal diagnosis | |
Sun et al. | Rapid prenatal diagnosis of aneuploidy for chromosomes 21, 18, 13, X, and Y using segmental duplication quantitative fluorescent PCR (SD-QF-PCR) | |
WO2017185758A1 (zh) | 用于微嵌合检测和个体识别的引物、探针、试剂盒及方法 | |
CN101671736B (zh) | 一种用于检测细胞嵌合状态或个体识别的基因检测试剂盒 | |
CN116665774A (zh) | 一种家系全基因组单体型连锁分析方法、装置、存储介质和设备 | |
CN110857451B (zh) | 一种检测复发性流产的微缺失或/和微重复的引物组合、mlpa探针、基因芯片及试剂盒 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |