CN107803189B - 以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质 - Google Patents

以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质 Download PDF

Info

Publication number
CN107803189B
CN107803189B CN201711277738.2A CN201711277738A CN107803189B CN 107803189 B CN107803189 B CN 107803189B CN 201711277738 A CN201711277738 A CN 201711277738A CN 107803189 B CN107803189 B CN 107803189B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pyrimidine
chromatography
aminopyrrolo
medium
chromatography matrix
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201711277738.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107803189A (zh
Inventor
瞿欢欢
朱至放
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Bogen Bioseparation Technology Co ltd
Original Assignee
Suzhou Bogen Bioseparation Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Bogen Bioseparation Technology Co ltd filed Critical Suzhou Bogen Bioseparation Technology Co ltd
Priority to CN201711277738.2A priority Critical patent/CN107803189B/zh
Publication of CN107803189A publication Critical patent/CN107803189A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107803189B publication Critical patent/CN107803189B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

本案涉及一种以4‑氨基吡咯并[3,2‑D]嘧啶为功能配基的层析介质，其特征在于，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，配基为经3‑氯苯基环氧乙烷活化后偶联的4‑氨基吡咯并[3,2‑D]嘧啶。本发明所研制的新型层析介质，以4‑氨基吡咯并[3,2‑D]嘧啶为功能配基，具有显著的疏水性电荷诱导层析分离特点，对抗体具有很高的吸附能力，可以用于抗体的规模化制备。

Description

以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质
技术领域
本发明涉及一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，属于生物化工领域中的蛋白层析分离技术。
背景技术
免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)即抗体(antibody，Ab)，是血液和组织液中的一类糖蛋白，是由B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生，是体液免疫的重要效应分子。
抗体的制备技术多种多样，但无论采用何种技术制备的抗体，都需要后期采用不同的分离纯化手段，获得符合要求的抗体产品，抗体的分离纯化应该遵循在满足要求的情况下尽可能减少纯化步骤，提高每一步分离效率，从而提高产率，节约成本。抗体产品往往纯度要求较高，同时还必须保持生物活性，因此传统的分离过程往往难以满足要求。蛋白A或蛋白G亲和层析介质能够特异性结合抗体，但蛋白类亲和配基易被料液中蛋白酶降解脱落，污染产品，且重复使用次数低，介质价格昂贵，操作成本极高，限制了其大规模应用。而传统的离子交换层析和疏水相互作用层析等方法虽然能够结合抗体，但是特异性和选择性较差，分离步骤多，纯化效果有限。因此，开发具有抗体选择性的非蛋白类配基成为研究热点。
发明内容
针对现有技术中存在的技术问题，本案提供一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质。
为实现上述目的，本案通过以下技术方案实现：
一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，其中，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，配基为经3-氯苯基环氧乙烷活化后偶联的4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶。
优选的是，所述的以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，其中，所述的层析基质为羟基化甲基丙烯酸亲水聚合物微球为基质。
优选的是，所述的以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，其中，所述的层析介质的配基密度为30-100μmol/ml。
一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质的制备方法，其其中，包括如下步骤：
1)将层析基质抽干后，加入0.1-0.5倍层析基质质量的30％(v/v)二甲基亚砜、0.5-1.0倍层析基质质量的3-氯苯基环氧乙烷和0.2-0.6倍层析基质质量的氢氧化钠，25℃下200rpm摇床中活化10-40小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；
2)将活化层析基质和0.1-0.4倍层析基质质量的6-氨基乙酸混合进行反应，30℃下200rpm摇床中反应3-10小时，抽滤，用去离子水洗涤得到氨基活化的基质；
3)将氨基活化的基质和0.3-0.6倍层析基质质量的4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶以及0.5-1M碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的pH为10-12，30℃下200rpm摇床中反应10-30小时，得到4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质；
4)将4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有1-10倍层析基质质量的三乙胺中，30℃下200rpm摇床中反应1-5小时，去离子水洗涤，得到以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。
本发明的有益效果是：
本发明研制的以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，可以用于疏水性电荷诱导层析分离，具有以下优点：(1)抗体吸附容量大，饱和吸附容量可达150mg/ml湿介质，处理能力强；(2)吸附过程不受盐影响，在很宽的电导率范围(0-100mS/cm)内，吸附容量基本保持不变，无需对料液进行稀释或加盐处理，可以直接捕获蛋白，减少了操作步骤；(3)配基密度高，电荷诱导效应强，通过配基上的伯氨基位点偶联配基，偶联效率高；(4)介质性质稳定，采用3-氯苯基环氧乙烷活化并偶联配基，所得介质的配基稳定，清洗再生方便；本发明所研制的新型层析介质，以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基，具有显著的疏水性电荷诱导层析分离特点，对抗体具有很高的吸附能力，可以用于抗体的规模化制备。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例1
一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质的制备方法，其其中，包括如下步骤：取羟基化甲基丙烯酸亲水聚合物微球10g，加入3g 30％(v/v)二甲基亚砜、5g3-氯苯基环氧乙烷和2g的氢氧化钠，25℃下200rpm摇床中活化15小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；将活化层析基质和2g 6-氨基乙酸混合进行反应，30℃下200rpm摇床中反应3-10小时，抽滤，用去离子水洗涤得到氨基活化的基质；将氨基活化的基质和3g 4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶以及0.5M碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的pH为10，30℃下200rpm摇床中反应15小时，得到4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质；将4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有20g的三乙胺中，30℃下200rpm摇床中反应2小时，去离子水洗涤，得到以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质，层析介质的配基密度为50μmol/ml。
实施例2
一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质的制备方法，其其中，包括如下步骤：取羟基化甲基丙烯酸亲水聚合物微球10g，加入2g的30％(v/v)二甲基亚砜、6g的3-氯苯基环氧乙烷和4g的氢氧化钠，25℃下200rpm摇床中活化25小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；将活化层析基质和1g的6-氨基乙酸混合进行反应，30℃下200rpm摇床中反应6小时，抽滤，用去离子水洗涤得到氨基活化的基质；将氨基活化的基质和5g的4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶以及0.5M碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的pH为10，30℃下200rpm摇床中反应20小时，得到4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质；将4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有30g的三乙胺中，30℃下200rpm摇床中反应4小时，去离子水洗涤，得到以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质，层析介质的配基密度为80μmol/ml。
实施例3
一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质的制备方法，其其中，包括如下步骤：取羟基化甲基丙烯酸亲水聚合物微球10g，加入5g的30％(v/v)二甲基亚砜、8g的3-氯苯基环氧乙烷和4g的氢氧化钠，25℃下200rpm摇床中活化40小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；将活化层析基质和3g的6-氨基乙酸混合进行反应，30℃下200rpm摇床中反应8小时，抽滤，用去离子水洗涤得到氨基活化的基质；将氨基活化的基质和6g的4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶以及0.5M碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的pH为10，30℃下200rpm摇床中反应20小时，得到4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质；将4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有40g的三乙胺中，30℃下200rpm摇床中反应1小时，去离子水洗涤，得到以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质，层析介质的配基密度为100μmol/ml。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。

Claims (4)

1.一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，其特征在于，包括：
层析基质、配基，所述层析基质经3-氯苯基环氧乙烷活化后偶联配基形成层析介质；
所述层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球；
所述配基为4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶。
2.如权利要求1所述的以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，其特征在于，所述的层析基质为羟基化甲基丙烯酸亲水聚合物微球。
3.如权利要求1所述的以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，其特征在于，所述的层析介质的配基密度为30-100μmol/ml。
4.一种如权利要求1所述的以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将层析基质抽干后，加入0.1-0.5倍层析基质质量的30％(v/v)二甲基亚砜、0.5-1.0倍层析基质质量的3-氯苯基环氧乙烷和0.2-0.6倍层析基质质量的氢氧化钠，25℃下200rpm摇床中活化10-40小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；
2)将活化层析基质和0.1-0.4倍层析基质质量的6-氨基乙酸混合进行反应，30℃下200rpm摇床中反应3-10小时，抽滤，用去离子水洗涤得到氨基活化的基质；
3)将氨基活化的基质和0.3-0.6倍层析基质质量的4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶以及0.5-1M碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的pH为10-12，30℃下200rpm摇床中反应10-30小时，得到4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质；
4)将4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有1-10倍层析基质质量的三乙胺中，30℃下200rpm摇床中反应1-5小时，去离子水洗涤，得到以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。
CN201711277738.2A 2017-12-06 2017-12-06 以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质 Active CN107803189B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711277738.2A CN107803189B (zh) 2017-12-06 2017-12-06 以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711277738.2A CN107803189B (zh) 2017-12-06 2017-12-06 以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107803189A CN107803189A (zh) 2018-03-16
CN107803189B true CN107803189B (zh) 2020-07-14

Family

ID=61579609

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711277738.2A Active CN107803189B (zh) 2017-12-06 2017-12-06 以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107803189B (zh)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104096544B (zh) * 2014-05-13 2016-06-01 浙江大学 以氨基苯并咪唑为功能配基的层析介质及其制备方法
CN104117345B (zh) * 2014-05-13 2016-09-14 浙江大学 具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质及其制备方法
CN104624171B (zh) * 2014-12-30 2016-08-17 浙江大学 一种聚合物接枝型疏水性电荷诱导层析介质及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107803189A (zh) 2018-03-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104096544B (zh) 以氨基苯并咪唑为功能配基的层析介质及其制备方法
CN102329846A (zh) 复合酶水解法制备大豆与蚕蛹复合寡肽的清洁生产方法
CN108431015B (zh) 一种nadph的纯化工艺
CN100363483C (zh) 重金属吸附剂组合物
Ke et al. Preparation of the immobilized metal affinity membrane with high amount of metal ions and protein adsorption efficiencies
CN101906126B (zh) 一种疏水层析分离纯化胞二磷胆碱的方法
CN103805671A (zh) 一种制备头孢氨苄的方法
JP7274170B2 (ja) 被処理液の再生方法および被処理液の再生装置
CN103464092B (zh) 一种TiO2/硅藻土复合材料的制备及其纯化卵黄高磷蛋白磷酸肽的方法
CN107803189B (zh) 以4-氨基吡咯并[3,2-d]嘧啶为功能配基的层析介质
CN1733680A (zh) 一种从有机酸发酵液和相应有机酸产品母液中分离残糖以提纯有机酸的方法
CN104941463A (zh) 反相胶体晶体膜制备方法及其在分离蛋白中的应用
CN112725395B (zh) 一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法
CN116287077A (zh) 一种硒多肽的提取方法
CN107999035A (zh) 以色胺为功能配基的层析介质
CN110681362B (zh) 以羧基和吲哚基为功能基团的混合模式层析介质
CN112645994B (zh) 一种红景天苷的提取工艺
CN111849959B (zh) 一种利用共固定双酶催化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法
CN109836468A (zh) 一种从微生物发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法
CN107803187B (zh) 以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质
CN107876017B (zh) 具有双功能基团的疏水性电荷诱导层析介质的制备方法
CN110714043A (zh) 一种固定化酶法制备三磷酸鸟苷的方法
CN102146369A (zh) 一种基于配位作用的固相介质提取dna的方法
CN1768893A (zh) 一种螯合型中空纤维亲和膜色谱及其制造方法和用途
JPH1169974A (ja) 固定化酵素担体および固定化酵素

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant