CN107753527A - 茯茶提取物及其在调节血脂和肝脏脂肪中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种茯茶提取物及其在调节血脂和肝脏脂肪中的应用。本发明提供的制备茯茶提取物的方法，包括如下步骤：以茯茶为原料，利用有机溶剂或CO2提取，提取完毕得到所述茯茶提取物。药效试验表明，本发明提供的茯茶提取物，经过在高脂饲料饲喂的ICR小鼠模型上治疗性给药四周，受试提取物在高剂量500mg/kg时均具有明显的降低血清中血脂相关重要指标总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的作用；该提取物在200mg/kg和500mg/kg时对小鼠肝脏中脂质相关指标总胆固醇、甘油三酯都有显著的降低作用，且基本无毒副作用。该提取物在制备降脂药物方面有很大应用潜力。

Description

茯茶提取物及其在调节血脂和肝脏脂肪中的应用
技术领域
本发明属于保健品领域，特别涉及一种茯茶提取物及其在调节血脂和肝脏脂肪中的应用。
背景技术
血脂是指血浆内甘油三酯、胆固醇和脂肪酸等脂质的总称。当血清中血脂浓度超过临床正常水平的上限时，即为高脂血症。高脂血症是一种常见且多发性代谢疾病。临床上高脂血症主要表现为血清甘油三酯(TG，成人正常值0.22-1.21mmol/L(20-110mg/dl)、总胆固醇(TC，成人正常值2.86-5.98mmol/L或110-230mg/dl)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C，成人正常值<3.12mmol/L(120mg/dl)水平过高，或者血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C，成人正常值0.9-2.19mmol/L(35-85mg/dI)水平过低。除了遗传因素和其他疾病(如肾病综合症、糖尿病、精神疾病)引起并发症外，临床上高脂血的病因主要是由于现代生活水平的提高和生活习惯的改变，比如饮食不规律、暴饮暴食、嗜酒等不良饮食习惯造成的。发病过程中由于脂质代谢紊乱，血浆内脂质浓度超出正常范围，累积在血管内壁，导致血管内壁形成粥样硬化斑块，从而引起一系列不良反应，导致糖尿病、肥胖、脂肪肝(肝细胞内脂肪堆积过多)以及高血压等相关疾病的形成，并进一步造成心脑血管疾病的高频率发生。
随着我国人民饮食习惯的改变和生活、工作节奏的加快，高脂血症发病率呈急剧升高的趋势。高脂血不仅能导致冠心病、动脉硬化、心肌梗死的发生，并且还能进一步加重糖尿病、高血压和脂肪肝甚至肝硬化等疾病的发展，因此血脂异常已成为当今社会普遍关心的健康问题。据2002年我国第一次全国范围血脂流行病学调查显示，我国大于18岁人群总血脂异常率高达18.6％。2007年到2008年中国居民血脂异常调查结果显示，与2002年相比，成年人总胆固醇(TC)平均水平升高了23.9％。2014年发布的《中国心血管病报告2014》数据显示，全国有心血管病患者2.9亿，其中高血压患者2.7亿，平均每30秒就有一个人死于心脑血管疾病。我国每年用于心血管疾病的治疗费用达到了3000亿元。2011年度《北京市卫生与人群健康状况报告》数据显示，北京常住居民超过一半血脂异常，尤其值得关注的是18至30岁男性的血脂异常率已经达到58.5％。由此可见，血脂异常已经成为我国居民的一个重要公共卫生问题，由于血脂异常引发的相关疾病的发生对公民是一种长期的并且还在逐渐增加的威胁，高血脂和脂肪肝的预防及治疗研究也是当今科学亟待解决的问题。
茯茶是由冠突散囊菌(Eurotiumcristatum)(又称冠突曲霉(Aspergilluscristatus)，通称茯茶金花菌)发酵而成的一种后发酵茶。迄今为止，未见有关茯茶用有机试剂提取或者超临界萃取后的提取物具有降低血脂和肝脏脂肪的研究和工作的相关报道。
发明内容
本发明的目的是一种茯茶提取物及其在调节血脂和肝脏脂肪中的应用。
本发明提供的制备茯茶提取物的方法，包括如下步骤：
以茯茶为原料，利用有机溶剂或CO2提取，提取完毕得到所述茯茶提取物。
上述方法中，所述茯茶，可为各种常见的茯茶。
所述有机溶剂选自乙醇、甲醇和乙酸乙酯中的至少一种；
所述有机溶剂的用量为所述原料重量的3-20倍，具体为8倍。
所述利用有机溶剂提取中，还向体系中加水；
所述水的用量为所述有机溶剂体积用量的0.1-20倍，具体为1倍。
所述利用有机溶剂提取中，提取方式为浸泡冷提、热提或超声提取。
所述浸泡冷提、热提和超声提取步骤中，提取的次数为2-6，具体为3次；
每次提取的时间为1-10小时，具体为5小时；
所述浸泡冷提步骤中，提取温度为室温，如25-30℃；
所述热提步骤中，提取温度为所述有机溶剂的回流温度；如65-100℃，具体可为75℃；
所述超声提取步骤中，超声功率为300-3000W，具体500W。
所述方法还包括如下步骤：在利用有机溶剂提取完毕后，取上清液过滤收集样品。
利用CO2提取步骤中，提取方式为超临界CO2流体萃取。
具体的所述超临界CO2流体萃取中，萃取时间为1-3h，具体可为2h；萃取压力为15-30MPa，具体可为20MPa；萃取温度为40℃-60，℃具体可为50℃。
另外，按照上述方法制备得到的茯茶提取物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物及茯茶提取物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物在如下至少一种中的应用，也属于本发明的保护范围：
1)降低血脂；
2)降低肝脏脂肪；
3)降低血清中的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇中的至少一种；
4)降低肝脏中的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇中的至少一种；
5)制备降低血脂的产品；
6)制备降低肝脏脂肪的产品；
7)制备降低血清中的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇中的至少一种的产品或药物或药物制剂；
8)制备降低肝脏中的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇中的至少一种的产品或药物或药物制剂。
上述应用中，所述降低针对的对象为动物。
此外，本发明还要求保护以上述本发明提供的茯茶提取物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物以及它们的混合物为活性成分的降低血脂或降低肝脏脂肪的产品；所述产品具体可为药物或药物制剂。
上述本发明提供的茯茶提取物的给药途径为口服。需要的时候，在上述茯茶提取物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、增效剂。该药物可以制成片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂的形式使用。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。每日给药剂量具体可为200mg/kg-500mg/kg体重。
药效试验表明，本发明提供的茯茶提取物，提取率显著高于用其他溶剂提取的提取率。经过在高脂饲料饲喂的ICR小鼠模型上治疗性给药四周，受试提取物在高剂量500mg/kg时均具有明显的降低血清中血脂相关重要指标总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)的作用；该提取物在每日给药剂量200mg/kg和500mg/kg时对小鼠肝脏中脂质相关指标总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)都有显著的降低作用，且基本无毒副作用。该提取物在制备降脂药物方面有很大应用潜力。
附图说明
图1为受试药物对ICR小鼠血清TC的影响。
图2是受试药物对ICR小鼠血清TG的影响。
图3是受试药物对ICR小鼠血清LDL-c的影响。
图4是受试药物对ICR小鼠肝脏中TC含量的影响。
图5是受试药物对ICR小鼠肝脏中TG含量的影响。
图6为实施例1所得提取物利用Agilent1200高效液相色谱分析所得色谱图。
图7为实施例2-4所得提取物的色谱图。
具体实施方式
下面将详细描述本发明的具体实施方式，这仅用于解释本发明，而不能解释为对本发明的限制。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从普通商业途径得到。下述实施例所用茯茶均购自湖南省益阳茶厂有限公司。
实施例1
乙醇提取：将茯茶按照重量比加入8倍乙醇进行热提，提取温度为乙醇的回流温度，每次提取5小时，共提取3次，提取完毕后取上清液过滤浓缩备用，即得本发明提供的茯茶提取物。其中，茯茶提取物的提取率为15％。
乙醇和水以等体积比混合提取：发酵好的茯茶，按照重量比加入8倍乙醇和8倍水混合进行热提，提取温度为乙醇的回流温度，每次提取5小时，共提取3次，提取完毕后取上清液过滤浓缩备用，即得本发明提供的茯茶提取物。其中，茯茶提取物的提取率为13％。
实施例2
甲醇提取：将茯茶按照重量比加入8倍甲醇于室温25℃进行浸泡冷提，每次提取5小时，共提取3次，提取完毕后取上清液过滤浓缩备用，即得本发明提供的茯茶提取物。其中，茯茶提取物的提取率为12％。
实施例3
乙酸乙酯提取：将茯茶按照重量比加入8倍乙酸乙酯进行超声提取，每次提取5小时，每次提取时超声的功率均为500W，共提取3次，取上清液过滤浓缩备用，即得本发明提供的茯茶提取物。其中，茯茶提取物的提取率为11％。
实施例4
超临界流体萃取：将茯茶采用超临界CO2流体萃取技术，萃取时间为2h，萃取压力20MPa，萃取温度50℃，提取物干燥备用，即得本发明提供的茯茶提取物。其中，茯茶提取物的提取率为15％。
实施例1-4所得提取物的化学表征
将实施例1所得提取物利用Agilent1200高效液相色谱分析进行分析，所用色谱柱为Agilent反向C8(ZORBAX Eclipse XDB-C8，5μm)，洗脱溶剂为水和已腈(0.01％三氟乙酸)梯度洗脱。
具体洗脱方法如下：起始为10％已腈，梯度洗脱至15分钟时为100％已腈，100％已腈维持5分钟，21分钟时梯度变化为10％已腈，并维持至25分钟。该提取物的高效液相色谱图里面包括了14个保留时间不同的色谱峰。保留时间如图6所示。
由图6可知，实施例1所得茯茶提取物中的主要成分为高极性(保留时间为4.54分钟)和低极性(保留时间为：13.98，14.80，15.41，15.89和16.10分钟)的化合物，根据化学分析鉴定保留时间为4.54分钟的化合物为咖啡因。
实施例2-4所得提取物的色谱图如图7所示。由图可知，实施例2-4所得提取物中的成分与实施例1无实质性区别。
提取物对ICR小鼠高血脂模型的影响
(1)实验材料
①实验动物：ICR小鼠，体重20-25g，雄性，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供。
②高脂饲料：北京华阜康生物科技股份有限公司。
③受试品：实施例1所得茯茶提取物，记为S1。S1-200为每日给药剂量200mg/kg体重；S1-500为每日给药剂量500mg/kg体重。
④阳性对照药物：辛伐他汀片(舒降之)，杭州默沙东制药有限公司。
(2)试验方法：
取ICR小鼠50只，体重20-25g，雄性。随机分为5组，其中空白对照组10只，其余40只建立高脂模型。空白对照组喂食普通饲料，其余40只均喂食高脂饲料(配方：78.6％基础饲料，10％猪油，10％蛋黄粉，1％胆固醇，0.4％胆盐)，自由饮水。三周后，所有动物禁食12h后，眼底静脉丛采血，测定血清内TC、TG含量，确认造模情况。随后将成模动物随机分组，每组10只，饲养情况同前。每日一次灌胃给药，共给药四周。各给药组的给药剂量分别为：S1：200mg/kg体重；S2：500mg/kg体重；辛伐他汀，4mg/kg体重；空白对照组和模型组均给予相同体积的蒸馏水。给药4周于末次给药后禁食12h眼底静脉丛采血，按血清TC、TG和LDL-C试剂盒说明书的测试方法，利用半自动生化。分析仪检测血清中这三个指标含量。
实验过程中，实时观察ICR小鼠行为、活动，并记录体重及死亡情况，给药四周后处死并收集血样及肝脏样本。实验七周内，受试动物无一死亡，摄食、饮水、粪便均正常。
所得结果见图1至图5。
由图可知，本发明提供的茯茶提取物，经过在高脂饲料饲喂的ICR小鼠模型上治疗性给药四周，受试提取物在高剂量500mg/kg时均具有明显的降低血清中血脂相关重要指标总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)的作用；该提取物在200mg/kg和500mg/kg是对小鼠肝脏中脂质相关指标总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)都有显著的降低作用，且基本无毒副作用。

Claims (10)

1.一种制备茯茶提取物的方法，包括如下步骤：
以茯茶为原料，利用有机溶剂或CO2提取，提取完毕得到所述茯茶提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述有机溶剂选自乙醇、甲醇和乙酸乙酯中的至少一种；
所述有机溶剂的用量为所述原料重量的3-20倍或8倍。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：利用有机溶剂提取中，还向体系中加水；
所述水的用量为所述有机溶剂体积用量的0.1-20倍或1倍。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述利用有机溶剂提取中，提取方式为浸泡冷提、热提或超声提取。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述浸泡冷提、热提和超声提取步骤中，提取的次数为2-6次或3次；
每次提取的时间为1-10小时或5小时；
所述浸泡冷提步骤中，温度为室温；
所述热提步骤中，提取温度为所述有机溶剂的回流温度或65-100℃或75℃；
所述超声提取步骤中，超声功率为300-3000W或500W。
6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：
在利用有机溶剂提取完毕后，取上清液过滤收集样品。
7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：利用CO2提取步骤中，提取方式为超临界CO2流体萃取。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述超临界CO2流体萃取中，萃取时间为1-3h或2h，萃取压力为15-30MPa或20MPa，萃取温度为40℃-60℃或50℃。
9.权利要求1-8任一所述方法制备得到的茯茶提取物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物。
10.权利要求9所述茯茶提取物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物在如下至少一种中的应用：
1)降低血脂；
2)降低肝脏脂肪；
3)降低血清中的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇中的至少一种；
4)降低肝脏中的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇中的至少一种；
5)制备降低血脂的产品；
6)制备降低肝脏脂肪的产品；
7)制备降低血清中的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇中的至少一种的产品或药物或药物制剂；
8)制备降低肝脏中的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇中的至少一种的产品或药物或药物制剂；
以权利要求9所述茯茶提取物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物以及它们的混合物为活性成分的降低血脂的产品或药物或药物制剂；
以权利要求9所述茯茶提取物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物以及它们的混合物为活性成分的降低肝脏脂肪的产品或药物或药物制剂。
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