CN107746878B - 一种游离基因固定液 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种游离基因固定液，由以下重量份(％)的原料组成：柠檬酸钠2.6‑2.7；柠檬酸0.3‑0.4；葡萄糖3‑3.5；腺嘌呤0.02‑0.04；磷酸二氢钠0.2‑0.3；二巯基丙磺酸钠0.75‑0.85；多聚甲醛3.85‑4.20；甘氨酸4.85‑5.15；海藻糖0.1‑0.2；戊二醛1.85‑2.15；水80.51‑82.48。本发明的游离基因固定液是目前医学检验界用低温或用化学介质保护血液标本的基因；本发明首次釆用保护细胞内基因、固定游离基因片段综合的技术。本发明游离基因固定液保护了标本中的细胞膜的完整性，防止有核细胞内的基因逸出；实现了降解和抑制基因酶的活性，使无细胞游离基因在2‑8℃的环境下保存15天以内，游离基因的含量无显著性变异。

Description

一种游离基因固定液
技术领域
本发明涉及检验医学基因实验室：孕妇外周血胎儿游离基因产前筛查标本的釆集、运输、保存的专用无创基因釆血管添加剂，具体是一种游离基因固定液。
背景技术
现在临床医学基因检测的研究表明：在基因上没有人是完美的，平均每个人都会携带30个遗传病基因的缺陷。因此研究寻找遗传学病因，确定检测标志和治疗靶点，开展遗传病基因的检测与分析、进行遗传学病因咨询和科研服务，具有广泛的临床应用价值。随着临床检验中基因检测技术的日新月异，现在已经有了高通量基因检测技术：QPCR、ddPCR、基因芯片等技术。国家卫计委笫一批四领域的试点名单巳经出台，其中有：遗传病诊断、产前筛查与诊断、植入前胚胎遗传学诊断、肿瘤基因测序等。特别是产前筛査与诊断顼目：按规定孕妇在孕后15周-20周做一次血清筛查：测AFP(甲胎蛋白)、Free hcgβ(游离-β_亚基-促绒毛膜性腺激素、μE3游离雌三醇)、A Ihn A(抑制素)，以此筛查胎儿发生神经管缺损和唐氏儿的风险几率，简称为”唐氏筛查”。如果”唐氏筛查”结果显示风险几率为高危，则孕妇还需进一步做羊水穿刺来明确，而羊水穿刺需要医生在超声波探头的引导下，用细长穿刺针穿到孕妇羊膜腔内抽取20毫升至30毫升的羊水样本进行检测。这种侵入性检查虽然为常规医疗行为，但是具有极大的导致流产的风险。
最新技术无创产前基因检查，只要釆集5毫升至10毫升孕妇静脉血，从中提取源于血浆的胎儿游离基因，利用测序仪和试剂盒进行测序和分析，可得出胎儿发生21-三体综合症(唐氏综合症)、18-三体综合症(爱徳华氏综合症)、13-三体综合症(帕陶氏综合症)的风险几率。目前基因测序只在大城市的三甲医院检验科以及第三方检验机构的中心实验室开展；根据<<孕妇外周血胎儿游离基因产前筛查与诊断技术规范>>标本釆集及运转的规定：釆用常规柠檬酸葡萄糖(ACD)釆血管采集的标本应当自离体后8小时内完成血浆分离，在干冰冷链状态下暂时保存及运转；而釆用专用血浆保存管的，可在室温下完成暂时保存与运转，此操作环节须双人复核。无创产前基因检査是在毌亲血液中提取源于胎儿的游离片段一般在100-350bp之间，这种短片段基因游离基因标本在送往实验室的贮存、输运和检测前的标本处理过程中在血液的基因酶作用下很快下降并消失。为保护送检标本的游离基因基因不被酶解，是本研究发明无创基因采血管一种添加剂：游离基因固定液的价值和解决了临床产前无创基因测序一个重要难题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种游离基因固定液，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种游离基因固定液，由以下重量份(％)的原料组成：
Figure DEST_PATH_GDA0001519533260000021
Figure DEST_PATH_GDA0001519533260000031
一种游离基因固定液，由以下重量份(％)的原料组成：
Figure DEST_PATH_GDA0001519533260000032
一种游离基因固定液的制备方法，包括以下步骤：将上述重量份原料经超声波中超声20分钟，要求工作频率大于40KHZ，水温为30℃，经0.1μ膜抽滤，得到溶液即为游离基因固定液，将溶液置于密封塑料软桶中备用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的游离基因固定液是目前医学检验界用低温或用化学介质保护血液标本的基因；本发明首次釆用保护细胞内基因、固定游离基因片段综合的技术。本发明从四个方面进行了研究：1)血液标本防腐：戊二醛血液防腐和细胞膜醛化作用；2)血液标本细胞膜膜化技术：海藻糖在细胞膜表面形成玻璃态结构水膜保护层；3)游离基因基因片段固定：多聚甲醛在游离基因固定液的介质中释放甲醛，从而使标本中游离基因片段固定，剩余的甲醛会被甘氨酸中和，维持甲醛释放量与作用浓度的平衡。
本发明游离基因固定液实现了以下功能：1)保护了标本中的细胞膜的完整性，防止有核细胞内的基因逸出；2)实现了降解和抑制基因酶的活性，使无细胞游离基因在2-8℃的环境下保存15天以内，游离基因的含量无显著性变异。游离基因固定液的无创基因釆血管所采血液
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种游离基因固定液，由以下重量份(％)的原料组成：
Figure DEST_PATH_GDA0001519533260000041
Figure DEST_PATH_GDA0001519533260000051
一种游离基因固定液的制备方法，包括以下步骤：将上述重量份原料经超声波中超声20分钟，要求工作频率大于40KHZ，水温为30℃，经0.1μ膜抽滤，得到溶液即为游离基因固定液，将溶液置于密封塑料软桶中备用。
试验对照
随机选取25例做“唐氏筛查”的15周-20周孕妇(不分所孕男婴或女婴)作静脉血采集，分别用普通的柠檬酸葡萄糖(ACD)釆血管和添加剂是本发明游离基因固定液的无创基因采血管各采集10mL血液样本1支，做好标记，每5支为一组排列。
将柠檬酸葡萄糖(ACD)釆血管所釆血液样本为对照组：标记为B组；将本发明游离基因固定液的无创基因釆血管所釆血液样本为试验组：标记为T组；样本采集后储存于4-8℃冰箱中。样本采集当日4小时内分别取出对照组血液样本一支标记为B1，试验组血液样本一支标记为T1，高速离心，分离血浆，分别保存于零下40℃以下低温冰箱中备用。同样操作，分别在第3天、第5天、第8天、第15天取对照组和试验组血液标本各一支标记为(B3、T3)、(B5、T5)、(B8、T8)、(B15、T15)，高速离心、分离血浆后保存于零下40℃以下低温冰箱中备用。
利用柱吸收方法提取血浆游离基因(cff基因)，收集小于0.3Kb基因片段；用紫外吸收法测定基因含量：根据小牛胸腺基因核酸的摩尔消光系数(ρ)(介质PH7.0)即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm波长处的消光值：6600、每毫升溶液中含1.0μg基因的光密度为0.02。
25例15周-20周孕妇用普通的柠檬酸葡萄糖(ACD)釆血管采集血液标本和用本发明游离基因固定液无创基因采血管所釆血液标本、在4-8℃的冰箱或冷链允许的温度保存1-15天。
游离基因的变异程度：
Figure DEST_PATH_GDA0001519533260000061
试验对照结果表明：相同的人群例数、相同的样本、相同的试验条件(样本贮存时间、温度、紫外分光光度计、分离柱、分离液)，只有釆血管中添加剂不伺(对照组釆血管添加剂：柠檬酸葡萄糖(ACD)；试验组釆血管添加剂：游离基因固定液)。结果：对照组与实验组所釆血液在2-4℃冰箱或冷链允许温度中贮存或运输中随着时间的延长，游离基因含量出现明显差异。结论：孕妇游离基因检测用普通的柠檬酸葡萄糖(ACD)采血管所采血液标本，必须在釆血当天8小时内高速离心、分离血清，于零下40℃以下低温冰箱保存备用。用本发明游离基因固定液的无创基因釆血管所采血液在2-4℃的冰箱或冷链允许温度中保存15天，游离基因含量无明显差异性变化。

Claims (2)

1.一种游离基因固定液，其特征在于，由以下重量份(％)的原料组成：
Figure FDA0002807158900000011
所述的游离基因固定液采用如下方法制备而成：将上述重量份原料经超声波中超声20分钟，要求工作频率大于40KHZ，水温为30℃，经0.1μ膜抽滤，得到溶液即为游离基因固定液，将溶液置于密封塑料软桶中备用。
2.根据权利要求1所述的游离基因固定液，其特征在于，由以下重量份(％)的原料组成：
Figure FDA0002807158900000012
Figure FDA0002807158900000021
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101672853A (zh) * 2009-09-28 2010-03-17 江西特康科技有限公司 血细胞分析仪校准品及其制备工艺
CN104830830A (zh) * 2015-03-25 2015-08-12 厦门艾德生物医药科技有限公司 一种用于保护游离dna的血液抗凝剂及其应用
CN105985904A (zh) * 2015-02-26 2016-10-05 付士明 循环游离dna真空采集管
CN106662512A (zh) * 2014-06-10 2017-05-10 生物马特里卡公司 在环境温度下稳定血液样品中的非变性多肽、核酸和外来体
CN106987646A (zh) * 2017-05-17 2017-07-28 广州和实生物技术有限公司 一种血液游离dna保护剂及其制备方法与应用
CN107083382A (zh) * 2017-05-25 2017-08-22 广州奇辉生物科技有限公司 一种用于保护游离dna的血液保存剂及其应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101672853A (zh) * 2009-09-28 2010-03-17 江西特康科技有限公司 血细胞分析仪校准品及其制备工艺
CN106662512A (zh) * 2014-06-10 2017-05-10 生物马特里卡公司 在环境温度下稳定血液样品中的非变性多肽、核酸和外来体
CN105985904A (zh) * 2015-02-26 2016-10-05 付士明 循环游离dna真空采集管
CN104830830A (zh) * 2015-03-25 2015-08-12 厦门艾德生物医药科技有限公司 一种用于保护游离dna的血液抗凝剂及其应用
CN106987646A (zh) * 2017-05-17 2017-07-28 广州和实生物技术有限公司 一种血液游离dna保护剂及其制备方法与应用
CN107083382A (zh) * 2017-05-25 2017-08-22 广州奇辉生物科技有限公司 一种用于保护游离dna的血液保存剂及其应用

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