CN107655879B - 用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统 - Google Patents

用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统 Download PDF

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    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/76Chemiluminescence; Bioluminescence

Abstract

本发明公开了一种用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统,包括底盘和上层芯片;所述上层芯片包括位于上层芯片中心的加样区和七个与所述加样区连通的微流控反应检测通道:睾酮微流控反应检测通道、孕酮微流控反应检测通道、雌二醇微流控反应检测通道、促卵泡激素微流控反应检测通道、促黄体生成素微流控反应检测通道、催乳素微流控反应检测通道和β‑人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道。应用时,所述底盘设置于上层芯片的下方,所述底盘对应各微流控反应检测通道的磁微粒包被区的位置设有磁铁,所述磁铁为永磁铁或电磁铁。

Description

用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统
技术领域
[0001] 本发明属于医学检验领域,尤其涉及一种用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化 学发光检测系统。
背景技术
[0002] 近年来,生物分析技术领域得到了快速的发展,出现了很多重要的研究方向。微流 控芯片分析技术是其中最活跃的一支,在科研和应用领域都获得了广泛的重视。微流控芯 片作为一种新型的分析检测平台,具有高通量、集成化、便携式、易操作、低成本等优点,已 经在众多领域中得到了广泛的应用。
[0003] 目前的化学发光检测适应的样品为血清,在检测的过程中需要对样本进行离心分 离来获得血清,过程复杂繁琐并且耗时。缺乏充分洗脱、以消除非特异性吸附造成的干扰。
[0004] 目前用于生化分析的磁微粒具有以下特点:1)超强的顺磁性,就是指在磁场的存 在下能迅速聚集,离开磁场能够均匀分散,不出现聚集显现现象;2)合适的粒径且粒径分 布范围窄,使微球有足够强的磁响应性,又不会因粒径太大而发生沉降;3)具有丰富的表 面活性基团,以便微球可以和生化物质偶联,并在外磁场的作用下实现与被待测样品的分 离。
[0005] 睾酮(T)、孕酮(P)、雌二醇(E«、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、催乳素 (PRL)、β-人绒毛膜促性腺激素(β — HCG)同属于性腺检测系列。睾酮(T)可用于诊断多囊卵 巢综合征、高睾酮血症。孕酮(P)可用于诊断黄体功能不全、排卵型功能失调性子宫出血。雌 二醇(E2)可用于诊断卵巢功能低下、卵巢功能早衰、席汉氏综合征。促卵泡激素(FSH)可用 于诊断席汉氏综合征、卵巢早衰、卵巢不敏感综合征、原发性闭经。促黄体生成素(LH)可用 于诊断席汉氏综合征,高FSH如再加高LH,则卵巢功能衰竭已十分肯定,LH/FSH彡3可用于确 诊多囊卵巢综合征。催乳素(PRL)可用于诊断高催乳素血症。β-人绒毛膜促性腺激素(β — HCG)可用于早孕、异位妊娠的辅助诊断。通过性激素七项的检查能够了解内分泌功能和诊 断与内分泌失调相关的疾病。病人往往需要检测性腺中的一系列项目,而现实中都采用的 都是单个检测项目独立包装,按照目前的方式,化验医师需要逐项进行化验操作,工作量 大,检测过程重复、繁琐,占用大量的人力物力资源。此外,同一系列检测项目有中所使用的 底物试剂、清洗液都是一样的,如果该系列试剂盒都重复配备同样的底物试剂、清洗液,会 造成试剂和试剂瓶的浪费,这在无形中增加了生产成本。
发明内容
[0006] 为了解决上述技术问题,本发明用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检 测系统,其包括底盘和上层芯片;
[0007] 所述上层芯片包括位于上层芯片中心的加样区和七个与所述加样区连通的微流 控反应检测通道:
[0008] 睾酮微流控反应检测通道、孕酮微流控反应检测通道、雌二醇微流控反应检测通 道、促卵泡激素微流控反应检测通道、促黄体生成素微流控反应检测通道、催乳素微流控反 应检测通道和β-人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道;
[0009] 其中,所述睾酮微流控反应检测通道、孕酮微流控反应检测通道和雌二醇微流控 反应检测通道包括:样本分离区,其与加样区连通;抗原包被区,其通过毛细管微通道与所 述样本分离区连通;抗体包被区,其通过毛细管微通道与所述抗原包被区连通;磁微粒包被 区,其通过毛细管微通道与所述抗体包被区连通;废液收集区,其通过毛细管微通道与所述 磁微粒包被区连通;
[0010] 睾酮微流控反应检测通道的抗原包被区包被有发光物质标记的睾酮,抗体包被区 包被有具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗睾酮抗体;孕酮微流控反应检测通道 的抗原包被区包被有发光物质标记的孕酮,抗体包被区包被有具有特异亲和性的一对物质 中的一个标记的抗孕酮抗体;雌二醇微流控反应检测通道的抗原包被区包被有发光物质标 记的雌二醇,抗体包被区具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗雌二醇抗体;
[0011] 所述促卵泡激素微流控反应检测通道、促黄体生成素微流控反应检测通道、催乳 素微流控反应检测通道和β-人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道均包括:样本分离 区,其与加样区连通;第一抗体包被区,其通过毛细管微通道与所述样本分离区连通;第二 抗体包被区,其通过毛细管微通道与所述第一抗体包被区连通;磁微粒包被区,其通过毛细 管微通道与所述第二抗体包被区连通;废液收集区,其通过毛细管微通道与所述磁微粒包 被区连通;
[0012] 所述促卵泡激素微流控反应检测通道的第一抗体包被区包被有发光物质标记的 促卵泡激素的一株抗体,第二抗体包被区包被的是具有特异亲和性的一对物质中的一个标 记的促卵泡激素的另一株抗体;所述促黄体生成素微流控反应检测通道的第一抗体包被区 包被有发光物质标记的促黄体生成素的一株抗体,第二抗体包被区包被的是具有特异亲和 性的一对物质中的一个标记的促黄体生成素的另一株抗体;所述催乳素微流控反应检测通 道的第一抗体包被区包被有发光物质标记的催乳素的一株抗体,第二抗体包被区包被的是 具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的催乳素的另一株抗体;所述β-人绒毛膜促性腺 激素微流控反应检测通道的第一抗体包被区包被有发光物质标记的β-人绒毛膜促性腺激 素的一株抗体,第二抗体包被区包被的是具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的β-人 绒毛膜促性腺激素的另一株抗体;
[0013] 应用时,所述底盘设置于上层芯片的下方,所述底盘对应各微流控反应检测通道 的磁微粒包被区的位置设有磁铁,所述磁铁为永磁铁或电磁铁。
[0014] 作为优选技术方案,所述加样区通过加样通道与各微流控反应检测通道的样本分 离区连通;所述加样通道为围绕加样区形成的环形通道,加样通道的一端与所述加样区连 通,加样通道的侧壁连通各微流控反应检测通道的样本分离区。
[0015] 作为优选技术方案,所述发光物质为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶 或吖啶酯;所述具有特异亲和性的一对物质为生物素和链霉亲和素,生物素和亲和素,或者 为荧光素和抗荧光素。
[0016] 作为优选技术方案,磁微粒的平均粒径在0.5〜2μπι。
[0017] 作为优选技术方案,所述睾酮微流控反应检测通道、孕酮微流控反应检测通道和 雌二醇微流控反应检测通道中:抗原包被区与样本分离区之间的毛细管微通道的入口直径 Al小于出口直径BI;抗体包被区与抗原包被区之间的毛细管微通道的入口直径A2小于出口 直径B2;磁微粒包被区与抗体包被区之间的毛细管微通道的入口直径A3小于出口直径B3; 废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道的入口直径A4小于出口直径M;抗原包被 区与样本分离区之间的毛细管微通道的入口直径AU抗体包被区与抗原包被区之间的毛细 管微通道的入口直径A2、磁微粒包被区与抗体包被区之间的毛细管微通道的入口直径和废 液收集区A3与磁微粒包被区之间的毛细管微通道的入口直径依次缩小A4;
[0018] 所述促卵泡激素微流控反应检测通道、促黄体生成素微流控反应检测通道、催乳 素微流控反应检测通道和β-人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道中:第一抗体包被区 与样本分离区之间的毛细管微通道的入口直径Α1’小于出口直径Β1’ ;第二抗体包被区与第 一抗体包被区之间的毛细管微通道的入口直径Α2’小于出口直径Β2’ ;磁微粒包被区与第二 抗体包被区之间的毛细管微通道的入口直径A3’小于出口直径Β3’ ;废液收集区与磁微粒包 被区之间的毛细管微通道的入口直径Α4’小于出口直径Μ’ ;第一抗体包被区与样本分离区 之间的毛细管微通道的入口直径Α1’、第二抗体包被区与第一抗体包被区之间的毛细管微 通道的入口直径Α2’、磁微粒包被区与第二抗体包被区之间的毛细管微通道的入口直径A3’ 和废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道的入口直径Α4’依次缩小。
[0019] 作为另一优选技术方案(图中为示出),所述睾酮微流控反应检测通道、孕酮微流 控反应检测通道和雌二醇微流控反应检测通道中:抗原包被区与样本分离区之间的毛细管 微通道的入口直径的大于出口直径;抗体包被区与抗原包被区之间的毛细管微通道的入口 直径大于出口直径;磁微粒包被区与抗体包被区之间的毛细管微通道的入口直径大于出口 直径;废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道的入口直径大于出口直径;抗原包 被区与样本分离区之间的毛细管微通道的出口直径、抗体包被区与抗原包被区之间的毛细 管微通道的出口直径、磁微粒包被区与抗体包被区之间的毛细管微通道的出口直径和废液 收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道的出口直径依次缩小;
[0020] 所述促卵泡激素微流控反应检测通道、促黄体生成素微流控反应检测通道、催乳 素微流控反应检测通道和人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道中:第一抗体包被区 与样本分离区之间的毛细管微通道的入口直径大于出口直径;第二抗体包被区与第一抗体 包被区之间的毛细管微通道的入口直径大于出口直径;磁微粒包被区与第二抗体包被区之 间的毛细管微通道的入口直径大于出口直径;废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微 通道的入口直径大于出口直径;第一抗体包被区与样本分离区之间的毛细管微通道的出口 直径、第二抗体包被区与第一抗体包被区之间的毛细管微通道的出口直径、磁微粒包被区 与第二抗体包被区之间的毛细管微通道的出口直径和废液收集区与磁微粒包被区之间的 毛细管微通道的出口直径依次缩小。
[0021] 作为优选技术方案,所述上层芯片与所述底盘为形状相同的圆形,所述加样区位 于上层芯片的圆心,所述微流控反应检测通道沿所述上层芯片的半径方向形成;底盘的中 心设有通孔。
[0022] 作为优选技术方案,所述底盘上的磁铁为圆环形,对应位于磁微粒包被区的下方。
[0023] 本发明还提供上述的用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统的 制备方法,包括如下步骤:
[0024] 1)在芯片基板上开设所述加样区和7个微流控反应检测通道;
[0025] 2)将发光物质标记的睾酮溶液覆于所述睾酮微流控反应检测通道的抗原包被区, 将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗睾酮抗体溶液覆于所述睾酮微流控反应 检测通道的抗体包被区;将发光物质标记的孕酮溶液覆于所述孕酮微流控反应检测通道的 抗原包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗孕酮抗体溶液覆于所述孕酮 微流控反应检测通道的抗体包被区;将发光物质标记的雌二醇溶液覆于所述雌二醇微流控 反应检测通道的抗原包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗雌二醇抗体 溶液覆于所述雌二醇微流控反应检测通道的抗体包被区;
[0026] 将发光物质标记的促卵泡激素的一株抗体溶液覆于所述促卵泡激素微流控反应 检测通道的第一抗体包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的促卵泡激素的 另一株抗体溶液覆于所述促卵泡激素微流控反应检测通道的第二抗体包被区;将发光物质 标记的促黄体生成素的一株抗体溶液覆于所述促黄体生成素微流控反应检测通道的第一 抗体包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的促黄体生成素的另一株抗体溶 液覆于所述促黄体生成素微流控反应检测通道的第二抗体包被区;将发光物质标记的催乳 素的一株抗体溶液覆于所述催乳素微流控反应检测通道的第一抗体包被区,将具有特异亲 和性的一对物质中的一个标记的催乳素的另一株抗体溶液覆于所述催乳素微流控反应检 测通道的第二抗体包被区;将发光物质标记的人绒毛膜促性腺激素的一株抗体溶液覆于 所述人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道的第一抗体包被区,将具有特异亲和性的 一对物质中的一个标记的人绒毛膜促性腺激素的另一株抗体溶液覆于所述人绒毛膜 促性腺激素微流控反应检测通道的第二抗体包被区;
[0027] 干燥;
[0028] 3)将表面标记有具有特异亲和性的一对物质中的另一个的磁微粒的溶液覆于磁 微粒包被区,干燥;
[0029] 4)底盘对应所述磁微粒包被区的位置设置磁铁。
[0030] 本发明还提供上述的用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统的 应用方法,包括如下步骤:
[0031] 1)上层芯片固定在检测仪器的自转轴上部;当底盘上的磁铁为永磁铁时,将底盘 套设在自转轴的下部远离上层芯片底面;当底盘上的磁铁为电磁铁时,底盘贴附在上层芯 片底面,电磁铁对应位于上层芯片的磁微粒包被区下方,电磁铁不通电;从加样区加入全血 样本,启动仪器,自转轴自转,在离心力的作用下,全血经设置在加样区的抗红细胞滤血膜 过滤,进入各微流控反应检测通道的样本分离区;
[0032] 2)待全血样本流动稳定后,通过增加自转轴自转转速以加大离心作用使样本分离 区的血样样本冲破毛细管微通道的毛细管微阀作用而流向各微流控通道的抗原包被区或 第一抗体包被区:
[0033] 在睾酮微流控反应检测通道中,在抗原包被区,血样样本中的睾酮不与发光物质 标记的睾酮反应;孕酮微流控反应检测通道中,在抗原包被区,血样样本中的孕酮不与发光 物质标记的孕酮反应;雌二醇微流控反应检测通道中,在抗原包被区,血样样本中的雌二醇 不与发光物质标记的雌二醇反应;在促卵泡激素微流控反应检测通道中,在第一抗体包被 区,血液样本中的促卵泡激素与发光物质标记的促卵泡激素的一株抗体发生反应形成一抗 免疫复合物;在促黄体生成素微流控反应检测通道中,在第一抗体包被区,血液样本中的促 黄体生成素与发光物质标记的促黄体生成素的一株抗体发生反应形成一抗免疫复合物;在 催乳素微流控反应检测通道中,在第一抗体包被区,血液样本中的催乳素与发光物质标记 的催乳素的一株抗体发生反应形成一抗免疫复合物;在β-人绒毛膜促性腺激素微流控反应 检测通道中,在第一抗体包被区,血液样本中的β-人绒毛膜促性腺激素与发光物质标记的 β-人绒毛膜促性腺激素的一株抗体发生反应形成一抗免疫复合物;
[0034] 3)随后加大离心力使抗原或一抗免疫复合物进入各微流控通道的抗体包被区或 第二抗体包被区:
[0035] 在睾酮微流控反应检测通道中,在抗体包被区,血样样本中的睾酮与发光物质标 记的睾酮构成竞争关系,分别与具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗睾酮抗体发 生反应形成免疫复合物;在孕酮微流控反应检测通道中,在抗体包被区,血样样本中的孕酮 与发光物质标记的孕酮构成竞争关系,分别与具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的 抗孕酮抗体发生反应形成免疫复合物;在雌二醇微流控反应检测通道中,在抗体包被区,血 样样本中的雌二醇与发光物质标记的雌二醇构成竞争关系,分别与具有特异亲和性的一对 物质中的一个标记的抗雌二醇抗体发生反应形成免疫复合物;在促卵泡激素微流控反应检 测通道中,在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一对物质中的一个标 记的促卵泡激素的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物;在促黄体生成素微流控反应检 测通道中,在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一对物质中的一个标 记的促黄体生成素的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物;在催乳素微流控反应检测通 道中,在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的 催乳素的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物;在人绒毛膜促性腺激素微流控反应检 测通道中,在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一对物质中的一个标 记的人绒毛膜促性腺激素的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物;
[0036] 4)通过再次加大离心力使各微流控反应检测通道中的免疫复合物或二抗免疫复 合物冲破毛细管微通道的毛细管微阀作用进入到磁微粒包被区,标记在磁微粒表面的具有 特异亲和性的一对物质中的另一个与免疫复合物或二抗免疫复合物中的具有特异亲和性 的一对物质中的一个快速发生反应形成结合磁微粒的免疫复合物,然后,将带永磁铁的底 盘向上移动至贴合上层芯片的底面,永磁铁对应位于上层芯片的磁微粒包被区下方;或者 对带电磁铁的底盘的电磁铁通电使其富有磁性;由于磁铁的磁吸力,结合磁微粒的免疫复 合物或二抗免疫复合物在磁场的作用下富集到磁微粒包被区的底端,然后通过再次加大离 心力使未参加反应的样本经毛细管微通道流向废液收集区;
[0037] 5)从加样区加入清洗液洗涤结合磁微粒的免疫复合物或二抗免疫复合物,清洗液 移动到磁微粒包被区时,将带永磁铁的底盘向下移动远离上层芯片,或者断开通电装置使 电磁铁失去磁性,超声振荡,结合磁微粒的免疫复合物或二抗免疫复合物得到充分洗涤,然 后将带永磁铁的底盘向上层芯片处运动,或者对带电磁铁的底盘的电磁铁通电使其富有磁 性,将结合磁微粒的免疫复合物或二抗免疫复合物富集到磁微粒包被区的底端,通过加大 离心力使清洗液流入废液收集区;
[0038] 6)从加样区加入发光基底液,通过离心将发光基底液转移至磁微粒包被区,将带 磁铁的底盘向下移动远离上层芯片,或者断开通电装置使电磁铁失去磁性,超声振荡后,仪 器检测系统检测发光信号的强度,从而实现待测物的定量检测。
[0039] 本发明能够达到如下效果:
[0040] 1、本发明将微流控技术和磁微粒化学发光技术巧妙地结合,实现目标物质的快 速、高度灵敏、准确定量检测。
[0041] 2、采用磁微粒免疫富集分离反应,简化了分离过程,提高样品检测的灵敏度。磁微 粒的分离效应,有效捕捉待测样本中低浓度待测样品,结合化学发光检测方式,使灵敏度大 幅度提尚。
[0042] 3、本发明的用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统可同时进行 多项检测,节约时间、提高效率。
[0043] 4、本发明的用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统可以用于全 血检测,克服了传统化学发光只能进行血清检测的,而不能进行全血检测的缺陷,简化操作 过程。
[0044] 5、在反应和洗涤的过程中采用超声振荡的方式,有效地提高了反应速度以及消除 非特异性吸附造成的干扰。
附图说明
[0045] 图IA为用于检测性腺功能的磁微粒的微流控化学发光检测系统的上层芯片结构 示意图一。
[0046] 图IB为用于检测性腺功能的磁微粒的微流控化学发光检测系统的上层芯片结构 示意图二。
[0047] 图2为用于检测性腺功能的磁微粒的微流控化学发光检测系统的底盘部分结构示 意图。
[0048] 图3A是T、P、E2微流控反应检测通道的截面结构示意图;图3B是FSH、LH、PRL、f3 — HCG微流控反应检测通道的截面结构示意图。
[0049] 图4A是用于检测性腺功能的磁微粒的微流控化学发光检测系统T、P、E^j流控反 应检测通道的应用方法的步骤1的过程示意图;图4B是用于检测性腺功能的磁微粒的微流 控化学发光检测系统FSH、LH、PRL、β — HCG微流控反应检测通道的应用方法的步骤1的过程 示意图。
[0050] 图5Α是用于检测性腺功能的磁微粒的微流控化学发光检测系统T、P、E:^j流控反 应检测通道的应用方法的步骤2的过程示意图;图5B是用于检测性腺功能的磁微粒的微流 控化学发光检测系统T、P、E2微流控反应检测通道的应用方法的步骤3的过程示意图。
[0051] 图6A是用于检测性腺功能的磁微粒的微流控化学发光检测系统FSH、LH、PRL、β — HCG微流控反应检测通道的应用方法的步骤2的过程示意图;图6Β是用于检测性腺功能的 磁微粒的微流控化学发光检测系统FSH、LH、PRL、β—HCG微流控反应检测通道的应用方法的 步骤3的过程示意图。
[0052] 图7Α是用于检测性腺功能的磁微粒的微流控化学发光检测系统T、P、E:^j流控反 应检测通道的应用方法的步骤4的过程示意图;图7B是用于检测性腺功能的磁微粒的微流 控化学发光检测系统FSH、LH、PRL、β — HCG微流控反应检测通道的应用方法的步骤4的过程 示意图。
[0053] 图8是用于检测性腺功能的磁微粒的微流控化学发光检测系统FSH、LH、PRL、i3 — HCG微流控反应检测通道的应用方法的步骤5的过程示意图。
[0054] 图9是用于检测性腺功能的磁微粒的微流控化学发光检测系统FSH、LH、PRL、i3 — HCG微流控反应检测通道的应用方法的步骤6的过程示意图。
具体实施方式
[0055] 下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明,以使本领域的技术人员可以 更好的理解本发明并能予以实施,但所举实施例不作为对本发明的限定。
[0056] 结合图IA〜IB所示,一种用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统, 包括底盘2和上层芯片;
[0057] 上层芯片包括位于上层芯片中心的加样区10和七个与加样区连通的微流控反应 检测通道,在优选的实施方式中,加样区10的孔口上方可覆盖有抗红细胞滤血膜(图中未示 出),抗红细胞滤血膜上可覆盖有血液盖(图中未示出)。该7个微流控反应检测通道分别为: 睾酮微流控反应检测通道11a、孕酮微流控反应检测通道11b、雌二醇微流控反应检测通道 11c、促卵泡激素微流控反应检测通道IlcU促黄体生成素微流控反应检测通道lie、催乳素 微流控反应检测通道Ilf和β-人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道Ilg;
[0058] 如图3Α所示,睾酮微流控反应检测通道11a、孕酮微流控反应检测通道Ilb和雌二 醇微流控反应检测通道IlC均包括:样本分离区100,其与加样区10连通;抗原包被区102,其 通过毛细管微通道101与样本分离区100连通;抗体包被区104,其通过毛细管微通道103与 抗原包被区102连通;磁微粒包被区106,其通过毛细管微通道105与抗体包被区104连通;废 液收集区108,其通过毛细管微通道107与磁微粒包被区106连通;
[0059] 睾酮微流控反应检测通道的抗原包被区包被有发光物质标记的睾酮,抗体包被区 包被有具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗睾酮抗体;孕酮微流控反应检测通道 的抗原包被区包被有发光物质标记的孕酮,抗体包被区包被有具有特异亲和性的一对物质 中的一个标记的抗孕酮抗体;雌二醇微流控反应检测通道的抗原包被区包被有发光物质标 记的雌二醇,抗体包被区具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗雌二醇抗体;
[0060] 如图3B所示,促卵泡激素微流控反应检测通道IlcU促黄体生成素微流控反应检测 通道lie、催乳素微流控反应检测通道Ilf和β-人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道 I Ig均包括:样本分离区200,其与加样区10连通;第一抗体包被区202,其通过毛细管微通道 201与样本分离区200连通;第二抗体包被区204,其通过毛细管微通道203与第一抗体包被 区202连通;磁微粒包被区206,其通过毛细管微通道205与第二抗体包被区204连通;废液收 集区208,其通过毛细管微通道207与磁微粒包被区206连通;
[0061] 促卵泡激素微流控反应检测通道的第一抗体包被区包被有发光物质标记的促卵 泡激素的一株抗体,第二抗体包被区包被的是具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的 促卵泡激素的另一株抗体;促黄体生成素微流控反应检测通道的第一抗体包被区包被有发 光物质标记的促黄体生成素的一株抗体,第二抗体包被区包被的是具有特异亲和性的一对 物质中的一个标记的促黄体生成素的另一株抗体;催乳素微流控反应检测通道的第一抗体 包被区包被有发光物质标记的催乳素的一株抗体,第二抗体包被区包被的是具有特异亲和 性的一对物质中的一个标记的催乳素的另一株抗体;人绒毛膜促性腺激素微流控反应检 测通道的第一抗体包被区包被有发光物质标记的人绒毛膜促性腺激素的一株抗体,第二 抗体包被区包被的是具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的β-人绒毛膜促性腺激素 的另一株抗体;
[0062] 如图2所示,应用时,底盘2设置于上层芯片的下方,底盘(塑料盘)对应磁微粒包被 区的位置设有磁铁20,磁铁20可为永磁铁或电磁铁。
[0063] 在本发明的优选实施方式中,上层芯片与底盘2为形状相同的圆形,加样区10位于 上层芯片的圆心,各微流控反应检测通道沿上层芯片的半径方向形成;底盘2的中心设有通 孔。
[0064] 结合图1Β,在本发明的另一优选实施方式中,加样区10通过加样通道12与各微流 控反应检测通道的样本分离区连通;加样通道12为围绕加样区10形成的环形通道,加样通 道12的一端与加样区10连通,加样通道的侧壁连通各微流控反应检测通道的样本分离区。
[0065] 本发明中,发光物质为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶或吖啶酯;具 有特异亲和性的一对物质为生物素和链霉亲和素,生物素和亲和素,或者为荧光素和抗荧 光素。
[0066] 磁微粒的平均粒径在0.5〜2μπι。
[0067] 为了形成毛细管微阀效应,在本发明的一具体实施方式中,睾酮微流控反应检测 通道、孕酮微流控反应检测通道和雌二醇微流控反应检测通道中:抗原包被区与样本分离 区之间的毛细管微通道的入口直径Al小于出口直径Bl,抗体包被区与抗原包被区之间的毛 细管微通道的入口直径A2小于出口直径B2,磁微粒包被区与抗体包被区之间的毛细管微通 道的入口直径A3小于出口直径B3,废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道的入口 直径A4小于出口直径B4;抗原包被区与样本分离区之间的毛细管微通道的入口直径AU抗 体包被区与抗原包被区之间的毛细管微通道的入口直径A2、磁微粒包被区与抗体包被区之 间的毛细管微通道的入口直径A3和废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道的入 口直径A4依次缩小;
[0068] 促卵泡激素微流控反应检测通道、促黄体生成素微流控反应检测通道、催乳素微 流控反应检测通道和β-人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道中:第一抗体包被区与样 本分离区之间的毛细管微通道的入口直径Α1’小于出口直径Β1’,第二抗体包被区与第一抗 体包被区之间的毛细管微通道的入口直径Α2’小于出口直径Β2’,磁微粒包被区与第二抗体 包被区之间的毛细管微通道的入口直径A3’小于出口直径Β3’,废液收集区与磁微粒包被区 之间的毛细管微通道的入口直径Α4’小于出口直径Μ’ ;第一抗体包被区与样本分离区之间 的毛细管微通道的入口直径Α1’、第二抗体包被区与第一抗体包被区之间的毛细管微通道 的入口直径Α2’、磁微粒包被区与第二抗体包被区之间的毛细管微通道的入口直径A3’和废 液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道的入口直径Α4’依次缩小。
[0069] 为了形成毛细管微阀效应,在本发明的另一具体实施方式中(图中未示出),睾酮 微流控反应检测通道、孕酮微流控反应检测通道和雌二醇微流控反应检测通道中:抗原包 被区与样本分离区之间的毛细管微通道的入口直径的大于出口直径;抗体包被区与抗原包 被区之间的毛细管微通道的入口直径大于出口直径;磁微粒包被区与抗体包被区之间的毛 细管微通道的入口直径大于出口直径;废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道的 入口直径大于出口直径;抗原包被区与样本分离区之间的毛细管微通道的出口直径、抗体 包被区与抗原包被区之间的毛细管微通道的出口直径、磁微粒包被区与抗体包被区之间的 毛细管微通道的出口直径和废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道的出口直径 依次缩小;
[0070] 促卵泡激素微流控反应检测通道、促黄体生成素微流控反应检测通道、催乳素微 流控反应检测通道和人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道中:第一抗体包被区与样 本分离区之间的毛细管微通道的入口直径大于出口直径;第二抗体包被区与第一抗体包被 区之间的毛细管微通道的入口直径大于出口直径;磁微粒包被区与第二抗体包被区之间的 毛细管微通道的入口直径大于出口直径;废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道 的入口直径大于出口直径;第一抗体包被区与样本分离区之间的毛细管微通道的出口直 径、第二抗体包被区与第一抗体包被区之间的毛细管微通道的出口直径、磁微粒包被区与 第二抗体包被区之间的毛细管微通道的出口直径和废液收集区与磁微粒包被区之间的毛 细管微通道的出口直径依次缩小。
[0071] 本发明的用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统的制备方法,包 括如下步骤:
[0072] 1)在芯片基板上开设加样区和7个微流控反应检测通道;
[0073] 2)将发光物质标记的睾酮溶液覆于睾酮微流控反应检测通道的抗原包被区,将具 有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗睾酮抗体溶液覆于睾酮微流控反应检测通道 的抗体包被区;将发光物质标记的孕酮溶液覆于孕酮微流控反应检测通道的抗原包被区, 将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗孕酮抗体溶液覆于孕酮微流控反应检测 通道的抗体包被区;将发光物质标记的雌二醇溶液覆于雌二醇微流控反应检测通道的抗原 包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗雌二醇抗体溶液覆于雌二醇微流 控反应检测通道的抗体包被区;
[0074] 将发光物质标记的促卵泡激素的一株抗体溶液覆于促卵泡激素微流控反应检测 通道的第一抗体包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的促卵泡激素的另一 株抗体溶液覆于促卵泡激素微流控反应检测通道的第二抗体包被区;将发光物质标记的促 黄体生成素的一株抗体溶液覆于促黄体生成素微流控反应检测通道的第一抗体包被区,将 具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的促黄体生成素的另一株抗体溶液覆于促黄体 生成素微流控反应检测通道的第二抗体包被区;将发光物质标记的催乳素的一株抗体溶液 覆于催乳素微流控反应检测通道的第一抗体包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一 个标记的催乳素的另一株抗体溶液覆于催乳素微流控反应检测通道的第二抗体包被区;将 发光物质标记的人绒毛膜促性腺激素的一株抗体溶液覆于人绒毛膜促性腺激素微流 控反应检测通道的第一抗体包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的人绒 毛膜促性腺激素的另一株抗体溶液覆于人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道的第 二抗体包被区;
[0075] 干燥;
[0076] 3)将表面标记有具有特异亲和性的一对物质中的另一个的磁微粒的溶液覆于磁 微粒包被区,干燥;
[0077] 4)底盘对应磁微粒包被区的位置设置磁铁。
[0078] 本发明的用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统的应用方法,包 括如下步骤:
[0079] 1)结合图2所示,上层芯片固定在检测仪器的自转轴3上部;当底盘上的磁铁为永 磁铁时,将底盘2套设在自转轴的下部远离上层芯片底面;当底盘上的磁铁为电磁铁时,底 盘2贴附在上层芯片底面,电磁铁对应位于上层芯片的磁微粒包被区下方,电磁铁不通电; 如图4A和图4B所示,从加样区10加入全血样本,启动仪器,自转轴3自转,在离心力的作用 下,全血经设置在加样区的抗红细胞滤血膜过滤,进入各微流控反应检测通道的样本分离 区;
[0080] 2)如图5A和图6A所示,待全血样本流动稳定后,通过增加自转轴自转转速以加大 离心作用使样本分离区的血样样本冲破毛细管微通道的毛细管微阀作用而流向各微流控 通道的抗原包被区或第一抗体包被区:
[0081] 如图5A所示,在睾酮微流控反应检测通道中,在抗原包被区,血样样本中的睾酮不 与发光物质标记的睾酮反应;孕酮微流控反应检测通道中,在抗原包被区,血样样本中的孕 酮不与发光物质标记的孕酮反应;雌二醇微流控反应检测通道中,在抗原包被区,血样样本 中的雌二醇不与发光物质标记的雌二醇反应。如图6A,在促卵泡激素微流控反应检测通道 中,在第一抗体包被区,血液样本中的促卵泡激素与发光物质标记的促卵泡激素的一株抗 体发生反应形成一抗免疫复合物;在促黄体生成素微流控反应检测通道中,在第一抗体包 被区,血液样本中的促黄体生成素与发光物质标记的促黄体生成素的一株抗体发生反应形 成一抗免疫复合物;在催乳素微流控反应检测通道中,在第一抗体包被区,血液样本中的催 乳素与发光物质标记的催乳素的一株抗体发生反应形成一抗免疫复合物;在人绒毛膜促 性腺激素微流控反应检测通道中,在第一抗体包被区,血液样本中的人绒毛膜促性腺激 素与发光物质标记的人绒毛膜促性腺激素的一株抗体发生反应形成一抗免疫复合物;
[0082] 3)如图5Β和图6Β所示,随后加大离心力使抗原或一抗免疫复合物进入各微流控 通道的抗体包被区或第二抗体包被区:
[0083] 如图5Β,在睾酮微流控反应检测通道中,在抗体包被区,血样样本中的睾酮与发光 物质标记的睾酮构成竞争关系,分别与具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗睾酮 抗体发生反应形成免疫复合物;在孕酮微流控反应检测通道中,在抗体包被区,血样样本中 的孕酮与发光物质标记的孕酮构成竞争关系,分别与具有特异亲和性的一对物质中的一个 标记的抗孕酮抗体发生反应形成免疫复合物;在雌二醇微流控反应检测通道中,在抗体包 被区,血样样本中的雌二醇与发光物质标记的雌二醇构成竞争关系,分别与具有特异亲和 性的一对物质中的一个标记的抗雌二醇抗体发生反应形成免疫复合物。如图6Β,在促卵泡 激素微流控反应检测通道中,在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一 对物质中的一个标记的促卵泡激素的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物;在促黄体生 成素微流控反应检测通道中,在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一 对物质中的一个标记的促黄体生成素的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物;在催乳素 微流控反应检测通道中,在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一对物 质中的一个标记的催乳素的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物;在β-人绒毛膜促性腺 激素微流控反应检测通道中,在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一 对物质中的一个标记的人绒毛膜促性腺激素的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物;
[0084] 4)如图7Α和图7Β所示,通过再次加大离心力使各微流控反应检测通道中的免疫复 合物或二抗免疫复合物冲破毛细管微通道的毛细管微阀作用进入到磁微粒包被区,标记在 磁微粒表面的具有特异亲和性的一对物质中的另一个与免疫复合物或二抗免疫复合物中 的具有特异亲和性的一对物质中的一个快速发生反应形成结合磁微粒的免疫复合物,然 后,将带永磁铁的底盘向上移动至贴合上层芯片的底面,永磁铁对应位于上层芯片的磁微 粒包被区下方;或者对带电磁铁的底盘的电磁铁通电使其富有磁性;由于磁铁的磁吸力,结 合磁微粒的免疫复合物或二抗免疫复合物在磁场的作用下富集到磁微粒包被区的底端,然 后通过再次加大离心力使未参加反应的样本经毛细管微通道流向废液收集区;
[0085] 5)如图8所示,从加样区加入清洗液洗涤结合磁微粒的免疫复合物或二抗免疫复 合物,清洗液移动到磁微粒包被区时,将带永磁铁的底盘向下移动远离上层芯片,或者断开 通电装置使电磁铁失去磁性,超声振荡,结合磁微粒的免疫复合物或二抗免疫复合物得到 充分洗涤,然后将带永磁铁的底盘向上层芯片处运动,或者对带电磁铁的底盘的电磁铁通 电使其富有磁性,将结合磁微粒的免疫复合物或二抗免疫复合物富集到磁微粒包被区的底 端,通过加大离心力使清洗液流入废液收集区;
[0086] 6)如图9所示,从加样区加入发光基底液,通过离心将发光基底液转移至磁微粒包 被区,将带磁铁的底盘向下移动远离上层芯片,或者断开通电装置使电磁铁失去磁性,超声 振荡后,仪器检测系统检测发光信号的强度,从而实现待测物的定量检测。
[0087] 本发明的用于检测性腺功能的磁微粒的微流控化学发光检测系统的检测过程需 要的离心力来自于配套的检测仪器。自转轴不属于微流控化学发光检测系统的一部分,而 是与微流控化学发光检测系统配套使用的仪器中的一部分,轴承与芯片托盘相连接固定; 芯片可以夹在芯片托盘上;底盘不依附于自转轴,其通过通孔套设在自转轴上而自由上下 移动。
[0088] 磁场产生装置的磁场由磁铁提供,永磁铁可以通过移动与芯片的相对位置(电磁 铁通过通电或断电),使磁微粒处于或脱离磁铁的磁场,来实现收集磁微粒技术效果。
[0089] —下提供一具体实施方式以对本发明进行说明:
[0090] 步骤1从加样口(此处有抗红细胞滤血膜)加入35〜350yL全血样本,盖上血液盖, 将微流控化学发光检测系统放入配套的仪器中,启动仪器,在离心力的作用下,全血经抗红 细胞滤血膜过滤,随后通过加样通道依次填满七个样本分离区,剩余的样本流入到剩余样 本分离区;
[0091] 步骤2待样本流动稳定后,通过加大离心作用使样本分离区的样本冲破毛细管微 阀流向三个抗原包被区(T、P、E2)和四个第一抗体包被区(FSH、LH、PRL、fi-HCG),样本将烘干 后形成的粉末状的碱性磷酸酶标记的抗原或抗体进行复溶,T反应检测体系中样本中的睾 酮不与碱性磷酸酶标记的睾酮发生反应,P反应检测体系中样本中的孕酮不与碱性磷酸酶 标记的孕酮发生反应,E2K应检测体系中样本中的雌二醇不与碱性磷酸酶标记的雌二醇发 生反应,FSH反应检测体系中样本中的促卵泡激素与碱性磷酸酶标记的抗促卵泡激素抗体 发生反应形成一抗免疫复合物,LH反应检测体系中样本中的促黄体生成素与碱性磷酸酶标 记的抗促黄体生成素抗体发生反应形成一抗免疫复合物,PRL反应检测体系中样本中的催 乳素与碱性磷酸酶标记的抗催乳素抗体发生反应形成一抗免疫复合物,β—HCG反应检测体 系中样本中的人绒毛膜促性腺激素与碱性磷酸酶标记的抗人绒毛膜促性腺激素抗体 发生反应形成一抗免疫复合物,随后通过再次加大离心力使抗原或一抗免疫复合物冲破毛 细管微阀流向相应的抗体包被区或第二抗体包被区,T反应检测体系样本中的睾酮和碱性 磷酸酶标记的睾酮构成竞争关系分别与生物素标记的抗睾酮抗体发生反应形成免疫复合 物,P反应检测体系样本中的孕酮和碱性磷酸酶标记的孕酮构成竞争关系分别与生物素标 记的抗孕酮抗体发生反应形成免疫复合物,扮反应检测体系样本中的雌二醇和碱性磷酸酶 标记的雌二醇构成竞争关系分别与生物素标记的抗雌二醇抗体发生反应形成免疫复合物, FSH反应检测体系中的一抗免疫复合物与生物素标记的另一株抗促卵泡激素抗体发生反应 形成二抗免疫复合物,LH反应检测体系中的一抗免疫复合物与生物素标记的另一株抗促黄 体生成素抗体发生反应形成二抗免疫复合物,PRL反应检测体系中的一抗免疫复合物与生 物素标记的另一株抗催乳素抗体发生反应形成二抗免疫复合物,β—HCG反应检测体系中的 一抗免疫复合物与生物素标记的另一株抗β-人绒毛膜促性腺激素抗体发生反应形成二抗 免疫复合物,
[0092] 步骤3通过加大离心力使免疫复合物或二抗免疫复合物冲破毛细管微阀进入到 各自的磁微粒包被区,复溶在该区域的链霉亲和素标记的微磁粒(平均粒径1 μπι),链霉亲 和素与免疫复合物中的生物素快速发生反应形成结合磁微粒的免疫复合物,1〜5 min后,将 带永磁铁的底盘向上层芯片处运动,结合磁微粒的免疫复合物在磁场的作用下富集到磁微 粒包被区的底端,然后通过再次加大离心力使未参加反应的样本经毛细管微阀流向废液收 集区;
[0093] 步骤4从加样口加入两次清洗液洗涤结合磁微粒的免疫复合物,清洗液移动到磁 微粒包被区时,将带永磁铁的底盘向下移动远离上层芯片,超声振荡,结合磁微粒的免疫复 合物或二抗免疫复合物得到充分洗涤,将带永磁铁的底盘向上层芯片处运动,将结合磁微 粒的免疫复合物或二抗免疫复合物富集到磁微粒包被区的底端,通过加大离心力使清洗液 流入废液收集区;
[0094] 步骤5从加样口加入碱性磷酸酶发光底物,通过离心将发光基底液转移至磁微粒 包被区,将带永磁铁的底盘向下移动远离上层芯片,超声振荡后,仪器检测系统检测发光信 号的强度,从而实现分析物的定量检测。
[0095] 在全血样本中T的结果如下表1所示,检测灵敏度范围为0〜32 ng/mL,并且在此范 围的检测CV值低于10%。
[0096] 表I T
[0097]
Figure CN107655879BD00181
[0098] 在全血样本中P的结果如下表2所示,检测灵敏度范围为0〜80 ng/mL,并且在此范 围的检测CV值低于10%。
[0099] 表2 P
[0100]
Figure CN107655879BD00191
[0101] 在全血样本中E2的结果如下表3所示,检测灵敏度范围为0〜3000 pg/mL,并且在此 范围的检测CV值低于10%。
[0102] 表 3 E2
[0103]
Figure CN107655879BD00192
[0104] 在全血样本中FSH的结果如下表4所示,检测灵敏度范围为O〜100 IU/L,并且在此 范围的检测CV值低于10%。
[0105] 表 4 FSH
[0106]
Figure CN107655879BD00193
[0107] 在全血样本中LH的结果如下表5所示,检测灵敏度范围为O〜200 mIU/mL,并且在此 范围的检测CV值低于10%。
[0108] 表 5 LH
[0109]
Figure CN107655879BD00194
Figure CN107655879BD00201
[0110] 在全血样本中PRL的结果如下表6所示,检测灵敏度范围为0〜1500 mIU/L,并且在 此范围的检测CV值低于10%。
[0111] 表 6 PRL
[0112]
Figure CN107655879BD00202
[0113] 在全血样本中β — HCG的结果如下表7所示,检测灵敏度范围为O〜1000 mIU/mL,并 且在此范围的检测CV值低于10%。
[0114] 表 7 β—HCG
[0115]
Figure CN107655879BD00203
[0116] 1.碱性磷酸酶标记的抗原或抗体
[0117] (1)碱性磷酸酶标记的睾酮
[0118] 将2 · 5mg的碱性磷酸酶(50IU/mg)加入到200yL IOOmM的PBS缓冲溶液(ρΗ=6 · 8)中, 其中含有1.25%的戊二醛,搅拌混匀,4°C下活化24小时,透析至50mM(ρΗ=7.2),18小时,换液 3次;将1.8mg的睾酮溶于120yL IM的碳酸盐溶液(ρΗ=9)中;将活化的碱性磷酸酶加入到配 置的睾酮溶液中,混合均匀,4°C下反应24h,然后再加入20yL 100 mM的赖氨酸溶液,混合均 匀,在20°C下反应4h;4°C下透析12h至50 mM PBS(pH=7.2),换液3次;离心去上层清液,用 50mM TB7.4+0.6% BSA+0.05%NaN3稀释,在_20°C 下保存。
[0119] (2)碱性磷酸酶标记的孕酮
[0120] 将2 · 5mg的碱性磷酸酶(50IU/mg)加入到200yL IOOmM的PBS缓冲溶液(pH=6 · 8)中, 其中含有1.25%的戊二醛,搅拌混匀,4°C下活化24小时,透析至50mM(pH=7.2),18小时,换液 3次;将1.8mg的孕酮溶于120yL IM的碳酸盐溶液(pH=9)中;将活化的碱性磷酸酶加入到配 置的孕酮溶液中,混合均匀,4°C下反应24h,然后再加入20yL 100 mM的赖氨酸溶液,混合均 匀,在20°C下反应4h;4°C下透析12h至50 mM PBS(pH=7.2),换液3次;离心去上层清液,用 50mM TB7.4+0.6% BSA+0.05%NaN3稀释,在_20°C 下保存。
[0121] (3)碱性磷酸酶标记的雌二醇
[0122] 将2.5mg的碱性磷酸酶(50IU/mg)加入到200yL IOOmM的PBS缓冲溶液(pH=6.8)中, 其中含有1.25%的戊二醛,搅拌混匀,4°C下活化24小时,透析至50mM(pH=7.2),18小时,换液 3次;将1.8mg的雌二醇溶于120yL IM的碳酸盐溶液(pH=9)中;将活化的碱性磷酸酶加入到 配置的雌二醇溶液中,混合均匀,4°C下反应24h,然后再加入20yL 100 mM的赖氨酸溶液,混 合均匀,在20°C下反应4h;4°C下透析12h至50 mM PBS(pH=7.2),换液3次;离心去上层清液, 用50mM TB7.4+0.6% BSA+0.05%NaN3稀释,在_20°C 下保存。
[0123] (4)碱性磷酸酶标记的一株抗促卵泡激素抗体
[0124] 将2 · 5mg的碱性磷酸酶(50IU/mg)加入到200yL IOOmM的PBS缓冲溶液(pH=6 · 8)中, 其中含有1.25%的戊二醛,搅拌混匀,4°C下活化24小时,透析至50mM(pH=7.2),18小时,换液 3次;将1.8mg的一株鼠抗FSH单克隆抗体溶于120yL IM的碳酸盐溶液(pH=9)中;将活化的碱 性磷酸酶加入到配置的鼠抗FSH单克隆抗体的溶液中,混合均匀,4°C下反应24h,然后再加 入20yL 100 mM的赖氨酸溶液,混合均匀,在20°C下反应4h;4°C下透析12h至50 mM PBS(pH= 7.2) ,换液3次;离心去上层清液,用50mM TB7.4+0.6% BSA+0.05%NaN3稀释,在-20°C下保 存。
[0125] (5)碱性磷酸酶标记的一株抗促黄体生成素抗体
[0126] 将2.5mg的碱性磷酸酶(50IU/mg)加入到200yL IOOmM的PBS缓冲溶液(pH=6.8)中, 其中含有1.25%的戊二醛,搅拌混匀,4°C下活化24小时,透析至50mM(pH=7.2),18小时,换液 3次;将1.8mg的一株鼠抗LH单克隆抗体溶于120yL IM的碳酸盐溶液(pH=9)中;将活化的碱 性磷酸酶加入到配置的鼠抗LH单克隆抗体的溶液中,混合均匀,4°C下反应24h,然后再加入 20yL 100 mM的赖氨酸溶液,混合均匀,在20°C下反应4h;4°C下透析12h至50 mM PBS(pH= 7.2) ,换液3次;离心去上层清液,用50mM TB7.4+0.6% BSA+0.05%NaN3稀释,在-20°C下保 存。
[0127] (6)碱性磷酸酶标记的一株抗催乳素抗体
[0128] 将2.5mg的碱性磷酸酶(50IU/mg)加入到200yL IOOmM的PBS缓冲溶液(pH=6.8)中, 其中含有1.25%的戊二醛,搅拌混匀,4°C下活化24小时,透析至50mM(pH=7.2),18小时,换液 3次;将1.8mg的一株鼠抗PRL单克隆抗体溶于120yL IM的碳酸盐溶液(pH=9)中;将活化的碱 性磷酸酶加入到配置的鼠抗PRL单克隆抗体的溶液中,混合均匀,4°C下反应24h,然后再加 入20yL 100 mM的赖氨酸溶液,混合均匀,在20°C下反应4h;4°C下透析12h至50 mM PBS(pH= 7.2) ,换液3次;离心去上层清液,用50mM TB7.4+0.6% BSA+0.05%NaN3稀释,在-20°C下保 存。
[0129] (7)碱性磷酸酶标记的一株抗β-人绒毛膜促性腺激素抗体
[0130] 将2 · 5mg的碱性磷酸酶(50IU/mg)加入到200yL IOOmM的PBS缓冲溶液(ρΗ=6 · 8)中, 其中含有1.25%的戊二醛,搅拌混匀,4°C下活化24小时,透析至50mM(ρΗ=7.2),18小时,换液 3次;将1.8mg的一株抗β-HCG单克隆抗体溶于120yL IM的碳酸盐溶液(ρΗ=9)中;将活化的碱 性磷酸酶加入到配置的鼠抗β-HCG单克隆抗体的溶液中,混合均匀,4°C下反应24h,然后再 加入20yL 100 mM的赖氨酸溶液,混合均匀,在20°C下反应4h;4°C下透析12h至50 mM PBS (ρΗ=7·2),换液3次;离心去上层清液,用50mM TB7.4+0.6% BSA+0.05%NaN3稀释,在_20°C下 保存。
[0131] 2.生物素标记的抗体
[0132] (1)生物素标记的抗睾酮抗体
[0133] 先用碳酸钠缓冲液将鼠抗T单克隆抗体稀释成lmg/mL,并用碳酸钠缓冲液室温(25 °C ±5°C)避光搅拌4小时透析;随后用N,N-二甲基酰胺(DMF)将6-氨基己酸-N轻基琥珀酰亚 胺-生物素(BCNHS)配置成lmg/mL;在ImL鼠抗T单克隆抗体溶液中加入上述DMF溶液125yL〜 66.7yL,玻璃瓶中混合,室温(25°C ± 5°C)避光搅拌2小时;加入Imo 1/L氯化铵溶液9.6yL, 室温(25°C ± 5Ό避光搅拌10分钟;然后混合溶液转入透析袋,用磷酸缓冲液4 °C透析过夜; 最后取出加等量甘油-20°C保存即可。
[0134] (2)生物素标记的抗孕酮抗体
[0135] 先用碳酸钠缓冲液将另一株鼠抗P单克隆抗体稀释成lmg/mL,并用碳酸钠缓冲液 室温(25°C ±5°C)避光搅拌4小时透析;随后用N,N-二甲基酰胺(DMF)将6-氨基己酸-N羟基 琥珀酰亚胺-生物素(BCNHS)配置成lmg/mL;在ImL另一株鼠抗P单克隆抗体溶液中加入上述 DMF溶液125yL〜66 · 7yL,玻璃瓶中混合,室温(25。。± 5。。)避光搅拌2小时;加入Imo 1/L氯化 铵溶液9.6yL,室温(25°C ± 5°C)避光搅拌10分钟;然后混合溶液转入透析袋,用磷酸缓冲液 4°C透析过夜;最后取出加等量甘油-20°C保存即可。
[0136] (3)生物素标记的抗雌二醇抗体
[0137] 先用碳酸钠缓冲液将另一株鼠抗E2单克隆抗体稀释成lmg/mL,并用碳酸钠缓冲液 室温(25°C ±5°C)避光搅拌4小时透析;随后用N,N-二甲基酰胺(DMF)将6-氨基己酸-N羟基 琥珀酰亚胺-生物素(BCNHS)配置成lmg/mL;在ImL另一株鼠抗E2单克隆抗体溶液中加入上 述DMF溶液125yL〜66.7yL,玻璃瓶中混合,室温(25°C ± 5°C)避光搅拌2小时;加入lmol/L氯 化铵溶液9.6yL,室温(25°C ± 5°C)避光搅拌10分钟;然后混合溶液转入透析袋,用磷酸缓冲 液4 °C透析过夜,最后取出加等量甘油-20 °C保存即可。
[0138] (4)生物素标记的另一株抗促卵泡激素抗体
[0139] 先用碳酸钠缓冲液将另一株鼠抗FSH单克隆抗体稀释成lmg/mL,并用碳酸钠缓冲 液室温(25°C±5°C)避光搅拌4小时透析;随后用N,N-二甲基酰胺(DMF)将6-氨基己酸-N羟 基琥珀酰亚胺-生物素(BCNHS)配置成lmg/mL;在ImL另一株鼠抗FSH单克隆抗体溶液中加入 上述DMF溶液125yL〜66.7yL,玻璃瓶中混合,室温(25°C ± 5°C)避光搅拌2小时;加入lmol/L 氯化铵溶液9.6yL,室温(25 °C ± 5°C)避光搅拌10分钟;然后混合溶液转入透析袋,用磷酸缓 冲液4 °C透析过夜,最后取出加等量甘油-20°C保存即可。
[0140] (5)生物素标记的另一株抗促黄体生成素抗体
[0141] 先用碳酸钠缓冲液将另一株鼠抗LH单克隆抗体稀释成lmg/mL,并用碳酸钠缓冲液 室温(25°C ±5°C)避光搅拌4小时透析;随后用N,N-二甲基酰胺(DMF)将6-氨基己酸-N羟基 琥珀酰亚胺-生物素(BCNHS)配置成lmg/mL;在ImL另一株鼠抗LH单克隆抗体溶液中加入上 述DMF溶液125yL〜66.7yL,玻璃瓶中混合,室温(25°C ± 5°C)避光搅拌2小时;加入lmol/L氯 化铵溶液9.6yL,室温(25°C ± 5°C)避光搅拌10分钟;然后混合溶液转入透析袋,用磷酸缓冲 液4 °C透析过夜,最后取出加等量甘油-20 °C保存即可。
[0142] (6)生物素标记的另一株抗催乳素抗体
[0143] 先用碳酸钠缓冲液将另一株鼠抗PRL单克隆抗体稀释成lmg/mL,并用碳酸钠缓冲 液室温(25°C±5°C)避光搅拌4小时透析;随后用N,N-二甲基酰胺(DMF)将6-氨基己酸-N羟 基琥珀酰亚胺-生物素(BCNHS)配置成lmg/mL;在ImL另一株鼠抗PRL单克隆抗体溶液中加入 上述DMF溶液125yL〜66.7yL,玻璃瓶中混合,室温(25°C ± 5°C)避光搅拌2小时;加入lmol/L 氯化铵溶液9.6yL,室温(25 °C ± 5°C)避光搅拌10分钟;然后混合溶液转入透析袋,用磷酸缓 冲液4 °C透析过夜,最后取出加等量甘油-20°C保存即可。
[0144] (7)生物素标记的另一株抗β-人绒毛膜促性腺激素抗体
[0145] 先用碳酸钠缓冲液将另一株鼠抗β—HCG单克隆抗体稀释成lmg/mL,并用碳酸钠缓 冲液室温(25°C±5°C)避光搅拌4小时透析;随后用N,N-二甲基酰胺(DMF)将6-氨基己酸-N 羟基琥珀酰亚胺-生物素(BCNHS)配置成lmg/mL;在ImL另一株鼠抗β — HCG单克隆抗体溶液 中加入上述DMF溶液125yL〜66.7yL,玻璃瓶中混合,室温(25°C ± 5°C)避光搅拌2小时;加入 lmol/L氯化铵溶液9.6yL,室温(25°C ± 5°C)避光搅拌10分钟;然后混合溶液转入透析袋, 用磷酸缓冲液4°C透析过夜,最后取出加等量甘油_20°C保存即可。
[0146] 3.加样孔处抗红细胞滤血膜的处理
[0147] 所选材料为玻璃纤维素膜或者聚酯纤维膜,浸泡于浓度为30 mg/L的鼠抗人红细 胞单克隆抗体溶液,浸泡时长为1〜6 h;随后将其置于湿度〈35%的环境中沥干水分,时长8 · 16小时;最后将抗红细胞滤血膜裁剪成相应规格,用仪器将其贴于加样孔处。
[0148] 4.抗体和抗原包被区的处理
[0149] 将碱性磷酸酶标记的抗原或抗体5〜50yg于抗原包被区或第一抗体包被区,将生 物素标记的抗体于5〜50yg抗体包被区或第二抗体包被区,置于湿度〈35%环境中干燥8〜16 小时。
[0150] 5.磁微粒包被区的处理
[0151] 磁微粒溶液的的配置:选用表面标记有链霉亲和素的具有超顺磁性的生物纳米磁 珠,直径Ιμπι,将其用磁微粒稀释液溶解成1〜20 mg/mL。
[0152] 磁微粒包被区的干燥:取5〜15yL配置好的微磁粒溶液置于芯片上的微磁粒包被 区,置于湿度〈35%环境中干燥8〜16小时。
[0153] 6.检测
[0154] 取35-350yL全血滴于样本区,在毛细管或者离心力的作用下,样本流经芯片。5-20 分钟后,在化学发光免疫分析仪下检测磁微粒包被区的发光强度,即可反算出样本中相应 物质的浓度。
[0155] 附:所需溶液配制
[0156] (1)鼠抗人红细胞单克隆抗体浸泡液
[0157] 磷酸二氢钠 0.99g
[0158] 磷酸氢二钠 5.16g
[0159] 牛血清蛋白 Ig
[0160] 氯化钠 〇.9g
[0161]鼠抗人红细胞单克隆抗体 34mg
[0162] 叠氮钠 Ig
[0163] 纯化水定容至 I OOOmL。
[0164] (2)磁微粒稀释液
[0165] 磷酸二氢钠 0.99g
[0166] 磷酸氢二钠 5.16g
[0167] 氯化钠 〇.9g
[0168] 牛血清蛋白 5g
[0169] 十六烷基三甲基氯化铵0.224g
[0170] 叠氮钠 〇.5g
[0171] Proclin300 ImL
[0172] 罗氏清洁抗体(HBR-3) 50mg
[0173] 纯化水定容至 I OOOmL。
[0174] (3)清洗液
[0175] 磷酸二氢钠 0.99g
[0176] 磷酸氢二钠 5.16g
[0177] 吐温-20 Iml
[0178] Proclin300 lmL。
[0179] 以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例,本发明的保护范 围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换,均在本发明 的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (6)

1. 一种用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统,其特征在于,包括底 盘和上层芯片; 所述上层芯片包括位于上层芯片中心的加样区和七个与所述加样区连通的微流控反 应检测通道: 睾酮微流控反应检测通道、孕酮微流控反应检测通道、雌二醇微流控反应检测通道、促 卵泡激素微流控反应检测通道、促黄体生成素微流控反应检测通道、催乳素微流控反应检 测通道和β-人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道; 其中,所述睾酮微流控反应检测通道、孕酮微流控反应检测通道和雌二醇微流控反应 检测通道包括:样本分离区,其与加样区连通;抗原包被区,其通过毛细管微通道与所述样 本分离区连通;抗体包被区,其通过毛细管微通道与所述抗原包被区连通;磁微粒包被区, 其通过毛细管微通道与所述抗体包被区连通;废液收集区,其通过毛细管微通道与所述磁 微粒包被区连通; 睾酮微流控反应检测通道的抗原包被区包被有发光物质标记的睾酮,抗体包被区包被 有具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗睾酮抗体;孕酮微流控反应检测通道的抗 原包被区包被有发光物质标记的孕酮,抗体包被区包被有具有特异亲和性的一对物质中的 一个标记的抗孕酮抗体;雌二醇微流控反应检测通道的抗原包被区包被有发光物质标记的 雌二醇,抗体包被区包被有具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗雌二醇抗体; 所述促卵泡激素微流控反应检测通道、促黄体生成素微流控反应检测通道、催乳素微 流控反应检测通道和β-人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道均包括:样本分离区,其 与加样区连通;第一抗体包被区,其通过毛细管微通道与所述样本分离区连通;第二抗体包 被区,其通过毛细管微通道与所述第一抗体包被区连通;磁微粒包被区,其通过毛细管微通 道与所述第二抗体包被区连通;废液收集区,其通过毛细管微通道与所述磁微粒包被区连 通; 所述促卵泡激素微流控反应检测通道的第一抗体包被区包被有发光物质标记的促卵 泡激素的一株抗体,第二抗体包被区包被的是具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的 促卵泡激素的另一株抗体;所述促黄体生成素微流控反应检测通道的第一抗体包被区包被 有发光物质标记的促黄体生成素的一株抗体,第二抗体包被区包被的是具有特异亲和性的 一对物质中的一个标记的促黄体生成素的另一株抗体;所述催乳素微流控反应检测通道的 第一抗体包被区包被有发光物质标记的催乳素的一株抗体,第二抗体包被区包被的是具有 特异亲和性的一对物质中的一个标记的催乳素的另一株抗体;所述β-人绒毛膜促性腺激素 微流控反应检测通道的第一抗体包被区包被有发光物质标记的β-人绒毛膜促性腺激素的 一株抗体,第二抗体包被区包被的是具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的β-人绒毛 膜促性腺激素的另一株抗体; 所述睾酮微流控反应检测通道、孕酮微流控反应检测通道和雌二醇微流控反应检测通 道中:抗原包被区与样本分离区之间的毛细管微通道的入口直径小于出口直径;抗体包被 区与抗原包被区之间的毛细管微通道的入口直径小于出口直径;磁微粒包被区与抗体包被 区之间的毛细管微通道的入口直径小于出口直径;废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细 管微通道的入口直径小于出口直径;抗原包被区与样本分离区之间的毛细管微通道的入口 直径、抗体包被区与抗原包被区之间的毛细管微通道的入口直径、磁微粒包被区与抗体包 被区之间的毛细管微通道的入口直径和废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道 的入口直径依次缩小; 所述促卵泡激素微流控反应检测通道、促黄体生成素微流控反应检测通道、催乳素微 流控反应检测通道和β-人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道中:第一抗体包被区与样 本分离区之间的毛细管微通道的入口直径小于出口直径;第二抗体包被区与第一抗体包被 区之间的毛细管微通道的入口直径小于出口直径;磁微粒包被区与第二抗体包被区之间的 毛细管微通道的入口直径小于出口直径;废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道 的入口直径小于出口直径;第一抗体包被区与样本分离区之间的毛细管微通道的入口直 径、第二抗体包被区与第一抗体包被区之间的毛细管微通道的入口直径、磁微粒包被区与 第二抗体包被区之间的毛细管微通道的入口直径和废液收集区与磁微粒包被区之间的毛 细管微通道的入口直径依次缩小; 或者, 所述睾酮微流控反应检测通道、孕酮微流控反应检测通道和雌二醇微流控反应检测通 道中:抗原包被区与样本分离区之间的毛细管微通道的入口直径的大于出口直径;抗体包 被区与抗原包被区之间的毛细管微通道的入口直径大于出口直径;磁微粒包被区与抗体包 被区之间的毛细管微通道的入口直径大于出口直径;废液收集区与磁微粒包被区之间的毛 细管微通道的入口直径大于出口直径;抗原包被区与样本分离区之间的毛细管微通道的出 口直径、抗体包被区与抗原包被区之间的毛细管微通道的出口直径、磁微粒包被区与抗体 包被区之间的毛细管微通道的出口直径和废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通 道的出口直径依次缩小; 所述促卵泡激素微流控反应检测通道、促黄体生成素微流控反应检测通道、催乳素微 流控反应检测通道和β-人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道中:第一抗体包被区与样 本分离区之间的毛细管微通道的入口直径大于出口直径;第二抗体包被区与第一抗体包被 区之间的毛细管微通道的入口直径大于出口直径;磁微粒包被区与第二抗体包被区之间的 毛细管微通道的入口直径大于出口直径;废液收集区与磁微粒包被区之间的毛细管微通道 的入口直径大于出口直径;第一抗体包被区与样本分离区之间的毛细管微通道的出口直 径、第二抗体包被区与第一抗体包被区之间的毛细管微通道的出口直径、磁微粒包被区与 第二抗体包被区之间的毛细管微通道的出口直径和废液收集区与磁微粒包被区之间的毛 细管微通道的出口直径依次缩小; 应用时,所述底盘设置于上层芯片的下方,所述底盘对应各微流控反应检测通道的磁 微粒包被区的位置设有磁铁,所述磁铁为永磁铁或电磁铁,所述上层芯片与所述底盘为形 状相同的圆形,所述加样区位于上层芯片的圆心,所述微流控反应检测通道沿所述上层芯 片的半径方向形成;底盘的中心设有通孔;所述底盘上的磁铁为圆环形,对应位于磁微粒包 被区的下方; 在所述加样区的孔口上方覆盖有抗红细胞滤血膜,所述抗红细胞滤血膜上覆盖有血液 盖;所述加样区通过加样通道与各微流控反应检测通道的样本分离区连通;所述加样通道 为围绕加样区形成的环形通道。
2.根据权利要求1所述的用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统,其 特征在于,所述加样通道的一端与所述加样区连通,加样通道的侧壁连通各微流控反应检 测通道的样本分离区。
3. 根据权利要求1所述的用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统,其 特征在于,所述发光物质为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶或吖啶酯;所述具 有特异亲和性的一对物质为生物素和链霉亲和素,生物素和亲和素,或者为荧光素和抗荧 光素。
4. 根据权利要求1所述的用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统,其 特征在于,磁微粒的平均粒径在0.5〜2μηι。
5. 权利要求1〜4任一项所述的用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统 的制备方法,其特征在于,包括如下步骤: 1) 在芯片基板上开设所述加样区和7个微流控反应检测通道; 2) 将发光物质标记的睾酮溶液覆于所述睾酮微流控反应检测通道的抗原包被区,将具 有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗睾酮抗体溶液覆于所述睾酮微流控反应检测 通道的抗体包被区;将发光物质标记的孕酮溶液覆于所述孕酮微流控反应检测通道的抗原 包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗孕酮抗体溶液覆于所述孕酮微流 控反应检测通道的抗体包被区;将发光物质标记的雌二醇溶液覆于所述雌二醇微流控反应 检测通道的抗原包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗雌二醇抗体溶液 覆于所述雌二醇微流控反应检测通道的抗体包被区; 将发光物质标记的促卵泡激素的一株抗体溶液覆于所述促卵泡激素微流控反应检测 通道的第一抗体包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的促卵泡激素的另一 株抗体溶液覆于所述促卵泡激素微流控反应检测通道的第二抗体包被区;将发光物质标记 的促黄体生成素的一株抗体溶液覆于所述促黄体生成素微流控反应检测通道的第一抗体 包被区,将具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的促黄体生成素的另一株抗体溶液覆 于所述促黄体生成素微流控反应检测通道的第二抗体包被区;将发光物质标记的催乳素的 一株抗体溶液覆于所述催乳素微流控反应检测通道的第一抗体包被区,将具有特异亲和性 的一对物质中的一个标记的催乳素的另一株抗体溶液覆于所述催乳素微流控反应检测通 道的第二抗体包被区;将发光物质标记的人绒毛膜促性腺激素的一株抗体溶液覆于所述 人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道的第一抗体包被区,将具有特异亲和性的一对 物质中的一个标记的人绒毛膜促性腺激素的另一株抗体溶液覆于所述人绒毛膜促性 腺激素微流控反应检测通道的第二抗体包被区; 干燥; 3) 将表面标记有具有特异亲和性的一对物质中的另一个的磁微粒的溶液覆于磁微粒 包被区,干燥; 4) 底盘对应所述磁微粒包被区的位置设置磁铁。
6. 权利要求1〜4任一项所述的用于检测性腺系列的磁微粒的微流控化学发光检测系统 的应用方法,其特征在于,包括如下步骤: 1)上层芯片固定在检测仪器的自转轴上部;当底盘上的磁铁为永磁铁时,将底盘套设 在自转轴的下部远离上层芯片底面;当底盘上的磁铁为电磁铁时,底盘贴附在上层芯片底 面,电磁铁对应位于上层芯片的磁微粒包被区下方,电磁铁不通电;从加样区加入全血样 本,启动仪器,自转轴自转,在离心力的作用下,全血经设置在加样区的抗红细胞滤血膜过 滤,进入各微流控反应检测通道的样本分离区; 2) 待全血样本流动稳定后,通过增加自转轴自转转速以加大离心作用使样本分离区的 血样样本冲破毛细管微通道的毛细管微阀作用而流向各微流控通道的抗原包被区或第一 抗体包被区: 在睾酮微流控反应检测通道中,在抗原包被区,血样样本中的睾酮不与发光物质标记 的睾酮反应;孕酮微流控反应检测通道中,在抗原包被区,血样样本中的孕酮不与发光物质 标记的孕酮反应;雌二醇微流控反应检测通道中,在抗原包被区,血样样本中的雌二醇不与 发光物质标记的雌二醇反应;在促卵泡激素微流控反应检测通道中,在第一抗体包被区,血 液样本中的促卵泡激素与发光物质标记的促卵泡激素的一株抗体发生反应形成一抗免疫 复合物;在促黄体生成素微流控反应检测通道中,在第一抗体包被区,血液样本中的促黄体 生成素与发光物质标记的促黄体生成素的一株抗体发生反应形成一抗免疫复合物;在催乳 素微流控反应检测通道中,在第一抗体包被区,血液样本中的催乳素与发光物质标记的催 乳素的一株抗体发生反应形成一抗免疫复合物;在人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测 通道中,在第一抗体包被区,血液样本中的β-人绒毛膜促性腺激素与发光物质标记的β-人 绒毛膜促性腺激素的一株抗体发生反应形成一抗免疫复合物; 3) 随后加大离心力使抗原或一抗免疫复合物进入各微流控通道的抗体包被区或第二 抗体包被区: 在睾酮微流控反应检测通道中,在抗体包被区,血样样本中的睾酮与发光物质标记的 睾酮构成竞争关系,分别与具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗睾酮抗体发生反 应形成免疫复合物;在孕酮微流控反应检测通道中,在抗体包被区,血样样本中的孕酮与发 光物质标记的孕酮构成竞争关系,分别与具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的抗孕 酮抗体发生反应形成免疫复合物;在雌二醇微流控反应检测通道中,在抗体包被区,血样样 本中的雌二醇与发光物质标记的雌二醇构成竞争关系,分别与具有特异亲和性的一对物质 中的一个标记的抗雌二醇抗体发生反应形成免疫复合物;在促卵泡激素微流控反应检测通 道中,在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的 促卵泡激素的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物;在促黄体生成素微流控反应检测通 道中,在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的 促黄体生成素的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物;在催乳素微流控反应检测通道中, 在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的催乳素 的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物;在人绒毛膜促性腺激素微流控反应检测通道 中,在第二抗体包被区,一抗免疫复合物与具有特异亲和性的一对物质中的一个标记的β_ 人绒毛膜促性腺激素的另一株抗体反应,形成二抗免疫复合物; 4) 通过再次加大离心力使各微流控反应检测通道中的免疫复合物或二抗免疫复合物 冲破毛细管微通道的毛细管微阀作用进入到磁微粒包被区,标记在磁微粒表面的具有特异 亲和性的一对物质中的另一个与免疫复合物或二抗免疫复合物中的具有特异亲和性的一 对物质中的一个快速发生反应形成结合磁微粒的免疫复合物,然后,将带永磁铁的底盘向 上移动至贴合上层芯片的底面,永磁铁对应位于上层芯片的磁微粒包被区下方;或者对带 电磁铁的底盘的电磁铁通电使其富有磁性;由于磁铁的磁吸力,结合磁微粒的免疫复合物 或二抗免疫复合物在磁场的作用下富集到磁微粒包被区的底端,然后通过再次加大离心力 使未参加反应的样本经毛细管微通道流向废液收集区; 5) 从加样区加入清洗液洗涤结合磁微粒的免疫复合物或二抗免疫复合物,清洗液移动 到磁微粒包被区时,将带永磁铁的底盘向下移动远离上层芯片,或者断开通电装置使电磁 铁失去磁性,超声振荡,结合磁微粒的免疫复合物或二抗免疫复合物得到充分洗涤,然后将 带永磁铁的底盘向上层芯片处运动,或者对带电磁铁的底盘的电磁铁通电使其富有磁性, 将结合磁微粒的免疫复合物或二抗免疫复合物富集到磁微粒包被区的底端,通过加大离心 力使清洗液流入废液收集区; 6) 从加样区加入发光基底液,通过离心将发光基底液转移至磁微粒包被区,将带磁铁 的底盘向下移动远离上层芯片,或者断开通电装置使电磁铁失去磁性,超声振荡后,仪器检 测系统检测发光信号的强度,从而实现待测物的定量检测。
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