CN107641645A - 心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒 - Google Patents
心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107641645A CN107641645A CN201711121223.3A CN201711121223A CN107641645A CN 107641645 A CN107641645 A CN 107641645A CN 201711121223 A CN201711121223 A CN 201711121223A CN 107641645 A CN107641645 A CN 107641645A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sites
- primer
- genes
- gene
- assay type
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 184
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 63
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 45
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 17
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 231100000150 mutagenicity / genotoxicity testing Toxicity 0.000 claims description 104
- 108010026925 Cytochrome P-450 CYP2C19 Proteins 0.000 claims description 39
- 102000019057 Cytochrome P-450 CYP2C19 Human genes 0.000 claims description 38
- 108010001237 Cytochrome P-450 CYP2D6 Proteins 0.000 claims description 24
- 102100021704 Cytochrome P450 2D6 Human genes 0.000 claims description 24
- 108010081668 Cytochrome P-450 CYP3A Proteins 0.000 claims description 21
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 14
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 14
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 13
- 102100024902 Cytochrome P450 4F2 Human genes 0.000 claims description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 12
- 102100039208 Cytochrome P450 3A5 Human genes 0.000 claims description 11
- 101000892264 Homo sapiens Beta-1 adrenergic receptor Proteins 0.000 claims description 11
- 101000780028 Homo sapiens Natriuretic peptides A Proteins 0.000 claims description 11
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 claims description 11
- 101150100998 Ace gene Proteins 0.000 claims description 10
- 102100039205 Cytochrome P450 3A4 Human genes 0.000 claims description 10
- 101150096290 ADRB1 gene Proteins 0.000 claims description 9
- 102200155809 rs28371686 Human genes 0.000 claims description 9
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 8
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 claims description 7
- 102220348908 c.1286A>C Human genes 0.000 claims description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 7
- 102200155813 rs1057910 Human genes 0.000 claims description 7
- 102220005868 rs4986893 Human genes 0.000 claims description 7
- 102220027026 rs587779010 Human genes 0.000 claims description 7
- 102220286369 rs63750443 Human genes 0.000 claims description 7
- 101150059573 AGTR1 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 claims description 6
- 101150096316 5 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150068340 Amelx gene Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 5
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 claims description 5
- 102220005867 rs4244285 Human genes 0.000 claims description 5
- 101150037123 APOE gene Proteins 0.000 claims description 4
- 101150018278 SLCO1B1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 3
- 102100034296 Natriuretic peptides A Human genes 0.000 claims description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 claims description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000006863 thiophosphorylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 102000002269 Cytochrome P-450 CYP2C9 Human genes 0.000 claims 9
- 108010000543 Cytochrome P-450 CYP2C9 Proteins 0.000 claims 9
- 101000742236 Homo sapiens Vitamin K-dependent gamma-carboxylase Proteins 0.000 claims 6
- 239000002585 base Substances 0.000 claims 6
- 108091006731 SLCO1B1 Proteins 0.000 claims 5
- 101000909122 Homo sapiens Cytochrome P450 4F2 Proteins 0.000 claims 3
- 101001116314 Homo sapiens Methionine synthase reductase Proteins 0.000 claims 3
- 101000621945 Homo sapiens Vitamin K epoxide reductase complex subunit 1 Proteins 0.000 claims 3
- 108010009513 Mitochondrial Aldehyde Dehydrogenase Proteins 0.000 claims 3
- 102100023485 Vitamin K epoxide reductase complex subunit 1 Human genes 0.000 claims 3
- 102200155782 rs1799853 Human genes 0.000 claims 3
- 101150072531 10 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101150028074 2 gene Proteins 0.000 claims 1
- KFVINGKPXQSPNP-UHFFFAOYSA-N 4-amino-2-[2-(diethylamino)ethyl]-n-propanoylbenzamide Chemical compound CCN(CC)CCC1=CC(N)=CC=C1C(=O)NC(=O)CC KFVINGKPXQSPNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 14
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 abstract description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 11
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 4
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003741 agents affecting lipid metabolism Substances 0.000 abstract description 2
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 abstract description 2
- AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N Deoxyuridine 5'-triphosphate Chemical compound O1[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N 0.000 abstract 1
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 96
- 102100029358 Cytochrome P450 2C9 Human genes 0.000 description 23
- 101710101953 Cytochrome P450 2C9 Proteins 0.000 description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- 108010013113 glutamyl carboxylase Proteins 0.000 description 10
- 101710102313 Cytochrome P450 4F2 Proteins 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 7
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101150083125 GGCX gene Proteins 0.000 description 6
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 description 5
- 101000690425 Homo sapiens Type-1 angiotensin II receptor Proteins 0.000 description 5
- 229960003009 clopidogrel Drugs 0.000 description 5
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 5
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 5
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 5
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 4
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 4
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N Nitroglycerin Chemical compound [O-][N+](=O)OCC(O[N+]([O-])=O)CO[N+]([O-])=O SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000006 Nitroglycerin Substances 0.000 description 4
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 4
- 229940097320 beta blocking agent Drugs 0.000 description 4
- 102220391121 c.430C>T Human genes 0.000 description 4
- 229960003711 glyceryl trinitrate Drugs 0.000 description 4
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 102200088972 rs1801133 Human genes 0.000 description 4
- 102200017284 rs7412 Human genes 0.000 description 4
- 101150090724 3 gene Proteins 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 3
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 3
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 3
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 3
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 3
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 3
- 102100030988 Angiotensin-converting enzyme Human genes 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 Hydroxymethylglutaryl Chemical group 0.000 description 2
- 102000000853 LDL receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 102100038182 Vitamin K-dependent gamma-carboxylase Human genes 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000003416 augmentation Effects 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- KUTXFBIHPWIDJQ-BTPXSFBUSA-N (1ar,7as)-7a-methyl-1a-[(e,7r,11r)-3,7,11,15-tetramethylhexadec-2-enyl]naphtho[2,3-b]oxirene-2,7-dione Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)[C@@]2(C/C=C(C)/CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@]1(C)O2 KUTXFBIHPWIDJQ-BTPXSFBUSA-N 0.000 description 1
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700038764 5,10-methylenetetrahydrofolate reductases Proteins 0.000 description 1
- 102000011848 5-Methyltetrahydrofolate-Homocysteine S-Methyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010075604 5-Methyltetrahydrofolate-Homocysteine S-Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108010013043 Acetylesterase Proteins 0.000 description 1
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010061623 Adverse drug reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102000005369 Aldehyde Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020002663 Aldehyde Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101710129690 Angiotensin-converting enzyme inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 description 1
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 description 1
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 102000002723 Atrial Natriuretic Factor Human genes 0.000 description 1
- 101800001288 Atrial natriuretic factor Proteins 0.000 description 1
- 101800001890 Atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 description 1
- 101710086378 Bradykinin-potentiating and C-type natriuretic peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000002083 C09CA01 - Losartan Substances 0.000 description 1
- 101100380241 Caenorhabditis elegans arx-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000312 Calcium Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000003922 Calcium Channels Human genes 0.000 description 1
- 229940127291 Calcium channel antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 1
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010030837 Methylenetetrahydrofolate Reductase (NADPH2) Proteins 0.000 description 1
- 102100029684 Methylenetetrahydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 102000003979 Mineralocorticoid Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000375 Mineralocorticoid Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 description 1
- 201000009623 Myopathy Diseases 0.000 description 1
- QSMTUAJDOTXEDZ-UHFFFAOYSA-N N1C=CC=C1.[Cl] Chemical compound N1C=CC=C1.[Cl] QSMTUAJDOTXEDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007990 Organic Anion Transporters Human genes 0.000 description 1
- 108010089503 Organic Anion Transporters Proteins 0.000 description 1
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 description 1
- TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N Pravastatin Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYMZZMVNJRMUDD-UHFFFAOYSA-N SJ000286063 Natural products C12C(OC(=O)C(C)(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102100026803 Type-1 angiotensin II receptor Human genes 0.000 description 1
- WNYFTWLTSLCQLO-UHFFFAOYSA-N [As].N1=CC=CC=C1 Chemical class [As].N1=CC=CC=C1 WNYFTWLTSLCQLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- CUJRVFIICFDLGR-UHFFFAOYSA-N acetylacetonate Chemical compound CC(=O)[CH-]C(C)=O CUJRVFIICFDLGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150092805 actc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 238000007844 allele-specific PCR Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002416 angiotensin derivative Substances 0.000 description 1
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000003288 anthiarrhythmic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004004 anti-anginal agent Substances 0.000 description 1
- 230000000702 anti-platelet effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 108010079452 beta Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000012740 beta Adrenergic Receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000000480 calcium channel blocker Substances 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N carperitide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 1
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- IZEKFCXSFNUWAM-UHFFFAOYSA-N dipyridamole Chemical compound C=12N=C(N(CCO)CCO)N=C(N3CCCCC3)C2=NC(N(CCO)CCO)=NC=1N1CCCCC1 IZEKFCXSFNUWAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- 150000003948 formamides Chemical class 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 229960004773 losartan Drugs 0.000 description 1
- MDMTUGIZSFHDIC-UHFFFAOYSA-N losartan(1-) Chemical compound CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C=2[N-]N=NN=2)C=C1 MDMTUGIZSFHDIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 210000002464 muscle smooth vascular Anatomy 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 229960002965 pravastatin Drugs 0.000 description 1
- TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-M pravastatin(1-) Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)[C@H]2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@H](O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-M 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000036632 reaction speed Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000033904 relaxation of vascular smooth muscle Effects 0.000 description 1
- 230000036454 renin-angiotensin system Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 229960002855 simvastatin Drugs 0.000 description 1
- RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N simvastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)C(C)(C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229960002256 spironolactone Drugs 0.000 description 1
- LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N spironolactone Chemical compound C([C@@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCC(=O)C=C4C[C@H]([C@@H]13)SC(=O)C)C[C@@]21CCC(=O)O1 LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒。本体系涉及定量荧光PCR扩增(Quantitive Fluorescent PCR，QF‑PCR)技术和毛细管电泳检测技术。该体系的特点：1、通过多重PCR，实现一管式扩增17个基因上的27个多态性位点。2、检测结果可实现对抗高血压药、抗血小板药和口服抗凝药、调血脂药等常用药物使用提供参考。3、本体系可以实现血液、血卡样本的直接扩增，免除了提取DNA的步骤；4、本体系可整合UDG‑dUTP防污染措施，可以有效防止产物污染。本发明的优点是检测位点覆盖全面、特异性高、灵敏度高、可靠性强、操作简便、实用性强、成本低，具备大批量检测的能力。
Description
技术领域
本发明涉及一种多重荧光PCR技术和毛细管电泳技术。同时检测27个与心血管疾病个性化用药相关基因位点的多态性，为临床上在治疗心血管相关疾病的个性化用药提供参考。属于生物医学领域中的临床分子诊断检测技术。
背景技术
心血管疾病发病率在全世界都有逐年增高的趋势，已成为影响人类健康的第一杀手。然而目前临床上常用的心血管疾病治疗药物，由于个体差异，不同患者服用相同剂量的药物所获得的治疗效果明显不同，这使临床医生应用该药物进行治疗时存在一定困扰。越来越多的研究发现遗传变异是造成药效个体差异的重要因素之一。研究发现，临床上常用的抗高血压药、抗血小板药、口服抗凝药、调血脂药以及其他抗心律失常药、抗心绞痛药等药物的服用或剂量均与基因多态性相关。下面就临床上常见几大类药物及其可能影响其用药的相关基因进行简单描述。
1、血管紧张素转换酶抑制剂：肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)属于激素系统，在血压调节和维持体液平衡中起重要作用。作用于该系统的常见降压药包括以卡托普利为代表的ACEⅠ，以氯沙坦为代表的血管紧张素Ⅱ受阻断剂(AngⅡ)和醛固酮受体拮抗剂螺内酯。编码血管紧张素转化酶的基因ACE、血管紧张素的基因AGT、肾素的基因REN和血管紧张素Ⅱ1型受体AGTR1是该类药物的重要候选基因。该类药物的药理作用复杂，单基因的多态性很难解释这类药物引起的药代、药动学的差异。
2、β受体阻滞剂：β受体阻滞剂是心血管病常用药物之一，其作用靶点主要是位于心肌细胞上的β1受体(ADRB)。该受体存在两种较常见的突变，ADRB1145A>G和ADRB11165G>C，这两个位点等位基因携带者对β受体阻滞剂的应答较好。CYP2D6是临床上大部分β受体阻滞剂的代谢酶，其基因多态性可显著影响β受体阻滞剂体内清除。在中国人群中，对CYP2D6基因多态性的研究主要集中在CYP2D6*10上。CYP2D6*10酶功能较低，属于中代谢型。
3、钙离子通道阻滞剂：钙通道阻滞剂以二氢砒啶类为代表，通过阻滞L型钙离子通道，抑制血管平滑肌及心肌钙离子内流，使血管平滑肌松弛，心肌收缩力降低，进而使血压下降。研究较多的为代谢酶为CYP3A5，心房利钠肽前体A(NPPA)的多态性对该类药物也有影响。
4、氯吡格雷：氯吡格雷是临床上治疗急性冠状动脉综合征应用最广泛的抗血小板药物，氯吡格雷是药物前体，需经过小肠的吸收和肝脏细胞色素P450的代谢才能转化为有活性的代谢产物。氯吡格雷药物抵抗被认为与遗传因素有关，已有充分研究表明CYP2C19酶在氯吡格雷的代谢中起重要作用。CYP2C19基因存在多个多态性位点，导致个体间CYP2C19酶活存在明显的个体差异。其中CYP2C19*2和CYP2C19*3位点突变均会降低CYP2C19酶的活性，这两种突变可以解释>99％的东方人弱代谢者以及约88％的白种人弱代谢者的表型。而CYP2C19*17位点的突变则使CYP2C19酶活性明显增加，CYP2C19*17携带者有着显著的氯吡格雷强反应性以及出血风险明显增加。
5、华法林：华法林是最古老的口服抗凝药，广泛应用于血栓栓塞性疾病的预防和治疗中。但华法林用药窗口窄，个体用药差异大，故有效地应用华法林并达到最佳抗凝效果，一直是临床上亟待解决的难题。大量的临床研究提示，华法林个体用药剂量的差异与药物代谢能力的差异相关。在研究华法林的药代动力学和药效学时发现，维生素K环氧化物还原酶复合体亚基Ⅰ(VKORC1)、细胞色素P450 2C9(CYP2C9)、γ-谷氨酰羧化酶(GGCX)和细胞色素P450 4F2(CYP4F2)等基因的多态性对华法林的个体用药剂量有较大的影响。
6、他汀类药物：他汀类药物是羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂，为调节血脂药物，用于心血管疾病和中风的一级和二级预防。他汀类的药物相关候选基因主要为影响药动学的溶质载体有机阴离子转运蛋白1B1(SLCO1B1)和影响其药效学的载脂蛋白E(ApoE)。SLCO1B1的基因多态性与辛伐他汀、普伐他汀引起的肌病强相关。ApoE的主要生理功能是通过与LDL受体结合并参与LDL代谢过程，ApoE基因的变异可影响LDL受体结合活性而影响脂质代谢，不同多态性患者服用他汀类药物疗效存在差异。
7、硝酸甘油：硝酸甘油应用于冠心病，心绞痛的治疗及预防，也可用于降低血压或治疗充血性心里衰竭。乙醛脱氢酶2(ALDH2)是硝酸甘油的有效代谢物一氧化氮形成的关键。携带ALDH2 1510G>A突变，ALDH2的硝酸酯酶活性会降低10倍以上，使硝酸甘油无法产生一氧化氮，难以发挥药效。在亚洲人群中，30％～50％的个体都携带ALDH2突变基因。
8、叶酸：同型半胱氨酸(Hcy)是一种含硫的氨基酸，是蛋氨酸代谢的中间产物。高同型半胱氨酸血症患者具有早发闭塞性动脉疾患倾向，提示Hcy可能是动脉粥样硬化的危险因素。也有研究证实高血压和高同型半胱氨酸血症是脑卒中发生最重要的2个危险因素。叶酸能够很好降低血同型半胱氨酸水平，从而显著降低脑卒中发生风险。叶酸代谢途径中的相关酶的基因突变会导致酶的活性降低，主要包括5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)，导致反应速度下降，Hcy降解受阻，浓度升高。
综上，药物遗传多态性可表现为药物代谢酶的多态性、药物转运蛋白的多态性，以及药物作用受体或靶点多态性等。这些多态性可能导致了许多药物治疗中药效和不良反应的个体差异，通过对患者特定药物相关位点基因型的检测，指导制定每个患者的治疗方案，使患者获得最佳治疗效果，避免药物不良反应，达到用药个体化的目的。
目前用于检测基因多态性的方法很多，如直接测序法、荧光定量PCR法、基因芯片法、高通量测序等。这些检测方法均存在各种不同程度的缺陷，如操作过程繁琐、重复性差、结果不易判读、检测位点少、检测通量低、检测周期长、检测费用高等。因此有必要建立一种同时快速检测多个基因多态性位点的方法，对患者来说检测一次终生受益，对医院及其它医疗机构来说可提供一种操作简单、特异性强、灵敏度高、通量高、可靠性强和成本低的检测方案。
发明内容
本发明的目的是提供一种与心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测的复合扩增体系及其使用方法。该体系具有操作简单、特异性强、灵敏度高、通量高、可靠性强和成本低的检测特点。
一种用于检测心血管个性化用药指导的基因检测的PCR体系引物组合物，在该同一PCR体系中能同时对以下21个位点进行扩增：ACE基因I/D位点、ADRB1基因1165G>C位点、ALDH2基因1510G>A位点、ApoE基因388T>C位点、ApoE基因526C>T位点、CYP2C19*2基因681G>A位点、CYP2C19*3基因636G>A位点、CYP2C19*17基因-806C>T位点、CYP3A5*3基因219-237G>A位点、CYP4F2*3基因1297G>A位点、MTHFR基因1286A>C位点、MTRR基因66A>G位点、SLCO1B1基因521T>C位点、ADRB1基因145A>G位点、AGTR1基因*86A>C位点、CYP2C9*2基因430C>T位点、CYP2C9*3基因1075A>C位点、CYP2D6*10基因100C>T位点、MTHFR基因665C>T位点、SLCO1B1基因388A>G位点、VKORC1基因-1639G>A位点；所述扩增该位点的引物分别为：
ACE基因I/D位点：
正向野生型引物：5’-ACCTGCTGCCTATACAGTCACTTTTA-3’，
正向突变型引物：5’-GGGATTACAGGCGTGATACAGTC-3’，
反向共用引物：5’-ATGCCTTGAGCTCCAGCCCTTAGC-3’；
ADRB1基因1165G>C位点：
正向野生型引物：5’-GCGCGCGCAGCAGAGCAGTCC-3’，
正向突变型引物：5’-GCGCGCGCAGCAGAGCAGTCG-3’，
反向共用引物：5’-AACGTGGTGAAGGCCTTCCAC-3’；
ALDH2基因1510G>A位点：
正向野生型引物：5’-GTCCCACACTCACAGTTTTCACTTC-3’，
正向突变型引物：5’-GTCCCACACTCACAGTTTTCACTTT-3’，
反向共用引物：5’-GGTCCTGGGAGTGTAACCCAT-3’；
ApoE基因388T>C位点：
正向野生型引物：5’-GCGCGGACATGGAGGACGTGT-3’，
正向突变型引物：5’-GCGCGGACATGGAGGACGTGC-3’，
反向共用引物：5’-ATGGAGCCCACAGTGGCGG-3’；
ApoE基因526C>T位点：
正向野生型引物：5’-ATGCCGATGACCTGCAGAAGC-3’，
正向突变型引物：5’-ATGCCGATGACCTGCAGAAGT-3’，
反向共用引物：5’-ATGGAGCCCACAGTGGCGG-3’；
CYP2C19*2基因681G>A位点：
正向野生型引物：5’-TTTCCCACTATCATTGATTATTTCCCG-3’，
正向突变型引物：5’-TTTCCCACTATCATTGATTATTTCCCA-3’，
反向共用引物：5’-AACTAGTCAATGAATCACAGATACGC-3’；
CYP2C19*3基因636G>A位点：
正向野生型引物：5’-ATCAGGATTGTAAGCACCCCCTGG-3’，
正向突变型引物：5’-ATCAGGATTGTAAGCACCCCCTGA-3’，
反向共用引物：5’-GATATTCACCCCATGGCTGTCTA-3’；
CYP2C19*17基因-806C>T位点：
正向野生型引物：5’-GCATTATCTCTTACATCAGAGATG-3’，
正向突变型引物：5’-GCATTATCTCTTACATCAGAGATA-3’，
反向共用引物：5’-ATCTCTCGGGCTGTTTTCCTTAGATAA-3’；
CYP3A5*3基因219-237G>A位点：
正向野生型引物：5’-GGTCCAAACAGGGAAGAGATAC-3’，
正向突变型引物：5’-GGTCCAAACAGGGAAGAGATAT-3’，
反向共用引物：5’-ATGGAGAGTGGCATAGGAGA-3’；
CYP4F2*3基因1297G>A位点：
正向野生型引物：5’-GGAACCCATCACAACCCAGCTG-3’，
正向突变型引物：5’-GGAACCCATCACAACCCAGCTA-3’，
反向共用引物：5’-ATGGGCCCTGCCGAGAAGGG-3’；
MTHFR基因1286A>C位点：
正向野生型引物：5’-GGGAGGAGCTGACCAGTGAAGA-3’，
正向突变型引物：5’-GGGAGGAGCTGACCAGTGAAGC-3’，
反向共用引物：5’-CCAGGTGGAGGTCTCCCAACTT-3’；
MTRR基因66A>G位点：
正向野生型引物：5’-CCATGTACCACAGCTTGCTCACAT-3’，
正向突变型引物：5’-CCATGTACCACAGCTTGCTCACAC-3’，
反向共用引物：5’-ATGCCTTGAAGTGATGAGGAG-3’；
SLCO1B1基因521T>C位点：
正向野生型引物：5’-GAATCTGGGTCATACATGTGGATATATGT-3’，
正向突变型引物：5’-GAATCTGGGTCATACATGTGGATATATGC-3’，
反向共用引物：5’-TAGACAAAGGGAAAGTGATCATACA-3’；
ADRB1基因145A>G位点：
正向野生型引物：5’-GTTGCTGCCTCCCGCCAGCGAAA-3’，
正向突变型引物：5’-GTTGCTGCCTCCCGCCAGCGAAG-3’，
反向共用引物：5’-GCCAGGGACATGATGAAGAGGTT-3’；
AGTR1基因*86A>C位点：
正向野生型引物：5’-AGCACTTCACTACCAAATGAGCA-3’，
正向突变型引物：5’-AGCACTTCACTACCAAATGAGCC-3’，
反向共用引物：5’-ACACATTCATCGAGTTTCTGACAT-3’；
CYP2C9*2基因430C>T位点：
正向野生型引物：5’-GGGCTTCCTCTTGAACACG-3’，
正向突变型引物：5’-GGGCTTCCTCTTGAACACA-3’，
反向共用引物：5’-GGGAGGATGGAAAACAGAGACTTAC-3’；
CYP2C9*3基因1075A>C位点：
正向野生型引物：5’-GCTGGTGGGGAGAAGGTCAAT-3’，
正向突变型引物：5’-GCTGGTGGGGAGAAGGTCAAG-3’，
反向共用引物：5’-AACCATCCTCTCTTTAAGTTTGC-3’；
CYP2D6*10基因100C>T位点：
正向野生型引物：5’-ACGCTGGGCTGCACGCTACC-3’，
正向突变型引物：5’-ACGCTGGGCTGCACGCTACT-3’，
反向共用引物：5’-GTAGGGGAGCCTCAGCACCT-3’；
MTHFR基因665C>T位点：
正向野生型引物：5’-AAAGCTGCGTGATGATGAAATCGG-3’，
正向突变型引物：5’-AAAGCTGCGTGATGATGAAATCGA-3’，
反向共用引物：5’-GTTGGAAGGTGCAAGATCAGAGCC-3’；
SLCO1B1基因388A>G位点：
正向野生型引物：5’-ACAGGTATTCTAAAGAAACTAATATCA-3’，
正向突变型引物：5’-ACAGGTATTCTAAAGAAACTAATATCG-3’，
反向共用引物：5’-ACTTTTCCCACTATCTCAGGTG-3’；
VKORC1基因-1639G>A位点：
正向野生型引物：5’-GCGTGAGCCACCGCACCC-3’，
正向突变型引物：5’-GCGTGAGCCACCGCACCT-3’，
反向共用引物：5’-AGCAGGAGAGGGAAATATC-3’。
在该同一PCR体系中还能扩增下述位点：GGCX基因2084+45G>C位点、CYP2C9*5基因1080C>G位点、GGCX基因214+597G>A位点、NPPA基因6773T>C位点；扩增该位点的引物分别为：
CYP2C9*5基因1080C>G位点：
正向野生型引物：5’-GCAGGCTGGTGGGGAGAAGG-3’，
正向突变型引物：5’-GCAGGCTGGTGGGGAGAAGC-3’，
反向共用引物：5’-AACCATCCTCTCTTTAAGTTTGC-3’；
GGCX基因214+597G>A位点：
正向野生型引物：5’-TTGCCCAGAAGACTCAGAGAAACAG-3’，
正向突变型引物：5’-TTGCCCAGAAGACTCAGAGAAACAA-3’，
反向共用引物：5’-GAACTACTGGGCTAAGGGGACT-3’；
GGCX基因2084+45G>C位点：
正向野生型引物：5’-TCCCCAGGGGAAAGTTACCAAGC-3’，
正向突变型引物：5’-TCCCCAGGGGAAAGTTACCAAGG-3’，
反向共用引物：5’-AGAAACAGGGCCTCTACCCC-3’；
NPPA基因6773T>C位点：
正向野生型引物：5’-ATGTCTGTGTTCTCTTTGCAGTACT-3’，
正向突变型引物：5’-ATGTCTGTGTTCTCTTTGCAGTACC-3’，
反向共用引物：5’-ATCAAACCACTTTATCTACAGTTAGC-3’。
在该同一PCR体系中还能扩增下述位点：CYP2D6*5基因片段缺失、CYP3A4*1G基因1026+12G>A位点；扩增该位点的引物分别为：
CYP2D6*5基因缺失位点：
正向引物：5’-GGATGTGCAGCGTGAGCC-3’，
反向引物：5’-CCTGGTCACCCATCTCTGGTC-3’，
CYP3A4*1G基因1026+12G>A位点：
正向野生型引物：5’-ACCCAATAAGGTGAGTGGATGG-3’，
正向突变型引物：5’-ACCCAATAAGGTGAGTGGATGA-3’，
反向共用引物：5’-AATGAGTGTGAGCAACAAATGC-3’。
在该同一PCR体系中还能扩增下述对照位点：性别Amel基因、人类身份识别位点D5S818和Th01，该对照位点的引物分别为：
对照Amel位点：
正向引物：5’-CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAG-3’
反向引物：5’-ATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTG-3’
对照D5S818位点：
正向引物：5’-GTGGTGTCCCAGATAATCTGTAC-3’
反向引物：5’-GGTGAATAACTCCAAATACTCC-3’
对照TH01位点：
正向引物：5’-AGGCTCTAGCAGCAGCTCATG-3’
反向引物：5’-CTGGAAATGACACTGCTACAACTC-3’。
所述引物的序列上添加有修饰或以修饰碱基取代正常碱基，所述修饰为荧光基团修饰、磷酸化修饰、硫代磷酸化修饰、锁核酸修饰或肽核酸修饰。
所述位点分为两组，两组采用两种不同的荧光标记，所述第一组为：MTRR基因66A>G位点、ACE基因I/D位点、CYP3A5*3基因219‐237G>A位点、ApoE基因526C>T位点、ADRB1基因1165G>C位点、CYP2C19*3基因636G>A位点、SLCO1B1基因521T>C位点、ALDH2基因1510G>A位点、CYP2C19*17基因‐806C>T位点、CYP2C19*2基因681G>A位点、MTHFR基因1286A>C位点、GGCX基因2084+45G>C位点、ApoE基因388T>C位点、CYP4F2*3基因1297G>A位点、D5S818位点；
第二组为：Amel位点、SLCO1B1基因388A>G位点、VKORC1基因‐1639G>A位点、CYP2D6*10基因100C>T位点、GGCX基因214+597G>A位点、ADRB1基因145A>G位点、AGTR1基因*86A>C位点、NPPA基因6773T>C位点、MTHFR基因665C>T位点、CYP2C9*2基因430C>T位点、CYP2D6*5基因片段缺失、CYP2C9*3基因1075A>C位点、CYP2C9*5基因1080C>G位点、CYP3A4*1G基因1026+12G>A位点、TH01位点。
所述第一组荧光标记为FAM，第二组荧光标记为HEX，所述FAM或HEX荧光标记位于反向共用引物或反向引物的5’端。
所述引物的序列3’端-2至-15位改动1至3个碱基或者/和在引物3’端-15位之后的序列进行改动，所述改动包括末端增加其他序列、删除部分末端序列、改变部分碱基序列。
所述检测采用毛细管电泳检测，所述扩增采用多重等位基因特异性PCR扩增。
一种心血管个性化用药相关基因检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1—9任一所述PCR引物组合物，并通过同一个扩增反应体系完成对相应位点的检测。
所述的检测试剂盒，还包括酶混合液、扩增缓冲液、阳性对照、阴性对照或毛细管检测所需相关试剂。
心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系，所述体系能同时扩增17个基因的27个多态性位点和3个对照位点。该体系中包含30个位点及在体系中的分组见表1：
表1检测位点列表
所述第一组荧光标记为FAM，第二组荧光标记为HEX，其中所述两组位点从上往下的顺序均为实际检测结果图中从小到大的片段排列顺序。
本发明所述检测体系，采用的是等位基因特性PCR(allele-specific PCR，ASPCR)结合定量荧光PCR(Quantitive Fluorescent PCR，QF-PCR)的方法对目的位点进行扩增，通过毛细管电泳进行扩增产物的检测，完成对目的位点分型的检测。对于每个检测位点设置三条引物，对两种分型分别设置一条不同长度的特异引物，以及一条荧光标记的下游引物。每条特异引物只能与对应基因型的DNA模板结合并进行扩增。完成PCR扩增和毛细管电泳检测后，通过特定荧光标记、特定长度的扩增产物的有无即可判定样本特定位点是否存在特定基因型。
上述心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系所对应的检测试剂盒，包括酶混合液、扩增缓冲液、引物混合物，或以上成分的混合液。
检测试剂盒还包括括阳性对照、阴性对照和毛细管检测所需相关试剂，如内标等。
心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系的使用方法，主要包括以下步骤：PCR扩增、遗传分析仪检测扩增产物、数据分析、检测结果的判断。
本发明方法的特点：
1)使用遗传分析仪通过毛细管电泳检测扩增产物：
遗传分析仪检测平台是广泛使用的主流检测平台之一，通过毛细管电泳对荧光标记的扩增产物进行检测，检测的主要技术优势在于：
①，检测灵敏度高。
毛细管电泳结合使用荧光染料大幅提高了检测灵敏度，比琼脂糖电泳检测灵敏度高100倍以上。能更灵敏地检测到扩增产物，并且明确区分扩增野生型和突变型。另一方面，由于检测灵敏度高，为复合PCR扩增反应提供了更大调整空间。更重要的是，由于检测灵敏度高，降低了对PCR扩增产物量的要求，可以降低PCR反应模板用量、可以降低PCR扩增循环数，节约检材。
②，检测分辨率高。
在通常利用的100-500bp检测范围内可清晰、有效地区分1bp差异。如此高的分辨率使得不会由于产物大小接近而产生误判，也避免了非特异扩增引起的结果误判。另一方面，高分辨率还使得同时检测更多位点成为可能。
③，可以同时对4种荧光信号检测。
更进一步拓展了检测范围，使得同时检测更多位点成为可能。
④，检测速度快(40分钟)、需要操作少、可自动化大批量检测。
⑤，检测结果可利用软件自动分析判型。
2)通过一个多重复合PCR扩增体系能够同时扩增多个位点：
本专利利用一个多重复合PCR扩增体系，实现与心血管个性化用药有关17个基因27个多态性位点的检测。其优势在于：
①，极大降低操作强度和检测成本。只一个PCR扩增和一个遗传分析仪检测反应即可完成全部检测。
②，单管扩增检测，最大程度上避免了污染和样品混淆等错误。
3)位点全面：
本体系涵盖了与心血管疾病个性化用药相关基因多态性位点27个，可以为多种药物的个性化用药提供参考，为临床医生提供了更多的患者信息。
4)直扩体系与防污染措施：
本扩增体系可以直接使用血液、血卡等检材扩增，免除了DNA提取的步骤，操作更加简便，适合于批量操作。另体系中加入了UDG-dUTP防污染措施，可以有效防止产物污染，避免引起假阳性结果。
综上，本专利技术路线应用于心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测。主要优点包括：每个样品只需一个扩增检测反应，一管反应可以得到27个位点的检测结果，相对于市面上的其它检测方法极大降低操作强度；4小时内可得到结果。
附图说明
图1为遗传分析仪的毛细管电泳分离血液样本A的扩增产物检测结果图谱，
图2为遗传分析仪的毛细管电泳分离DNA样本B的扩增产物检测结果图谱。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明。
实施例：以心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测试剂盒对血液和DNA样本进行检测一、检测体系
试剂盒包含PCR Master Mix、阳性对照、阴性对照、内标。其中PCR Master Mix主要组分包含热启动DNA Taq酶、UDG酶、扩增缓冲液及各位点引物等。
根据等位基因特性PCR原理，每条特异引物只能与对应基因型的DNA模板结合并进行扩增。为此目的，对各引物进行了一系列特定的改动或修饰。为了协调扩增效率、改进产物峰型、便于毛细管电泳检测，也对引物进行了一系列特定的改动或修饰。本实施例所采用的经过改进优化的引物序列如下：
ACE基因插入/缺失位点：
正向野生型引物：5’-ACCTGCTGCCTATACAGTCACTTCTA-3’
正向突变型引物：5’-GGGATTACAGGCGTGATACAATC-3’
反向共用引物：5’-FAM-ATGCCTTGAGCTCCAGCCCTTAGC-3’
ADRB1基因145A>G位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-HEX-GCCAGGGACATGATGAAGAGGTT-3’
ADRB1基因1165G>C位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-AACGTGGTGAAGGCCTTCCAC-3’
AGTR1基因*86A>C位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-HEX-ACACATTCATCGAGTTTCTGACAT-3’
ALDH2基因1510G>A位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-GGTCCTGGGAGTGTAACCCAT-3’
APOE基因388T>C位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-ATGGAGCCCACAGTGGCGG-3’
APOE基因526C>T位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-ATGGAGCCCACAGTGGCGG-3’
CYP2C19*2基因681G>A位点：
正向野生型引物：5’-TTTCCCACTATCATTGACTATTTCCAG-3’
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-AACTAGTCAATGAATCACAGATACGC-3’
CYP2C19*3基因636G>A位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-GATATTCACCCCATGGCTGTCTA-3’
CYP2C19*17基因-806C>T位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-ATCTCTCGGGCTGTTTTCCTTAGATAA-3’
CYP2C9*2基因430C>T位点：
正向野生型引物：5’-GGGCTTCCTCTTGAACATG-3’
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-HEX-GGGAGGATGGAAAACAGAGACTTAC-3’
CYP2C9*3基因1075A>C位点：
正向野生型引物：5’-GCTGGTGGGGAGAAGGTCGAT-3’
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-HEX-AACCATCCTCTCTTTAAGTTTGC-3’
CYP2C9*5基因1080C>G位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-HEX-AACCATCCTCTCTTTAAGTTTGC-3’
CYP2D6*10基因100C>T位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-HEX-GTAGGGGAGCCTCAGCACCT-3’
CYP2D6*5基因缺失位点：
正向引物：5’-GGATGTGCAGCGTGAGCC-3’
反向引物：5’-HEX-CCTGGTCACCCATCTCTGGTC-3’
CYP3A4*1G基因1026+12G>A位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-HEX-AATGAGTGTGAGCAACAAATGC-3’
CYP3A5*3基因219-237G>A位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-ATGGAGAGTGGCATAGGAGA-3’
CYP4F2*3基因1297G>A位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-ATGGGCCCTGCCGAGAAGGG-3’
GGCX基因214+597G>A位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：5’-GAAGTTGCCCAGAAGACTCAGAGAAAGAA-3’
反向共用引物：5’-HEX-GAACTACTGGGCTAAGGGGACT-3’
GGCX基因2084+45G>C位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-AGAAACAGGGCCTCTACCCC-3’
MTHFR基因665C>T位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-HEX-GTTGGAAGGTGCAAGATCAGAGCC-3’
MTHFR基因1286A>C位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-CCAGGTGGAGGTCTCCCAACTT-3’
MTRR基因66A>G位点：
正向野生型引物：5’-ATGTACCACAGCTTGCTCAAAT-3’
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-FAM-ATGCCTTGAAGTGATGAGGAG-3’
NPPA基因6773T>C位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-HEX-ATCAAACCACTTTATCTACAGTTAGC-3’
SLCO1B1基因388A>G位点：
正向野生型引物：5’-ACAGGTATTCTAAAGAAACTAATGTCA-3’
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-HEX-ACTTTTCCCACTATCTCAGGTG-3’
SLCO1B1基因521T>C位点：
正向野生型引物：
正向突变型引物：5’-GAATCTGGGTCATACATGTGGATATGTGC-3’
反向共用引物：5’-FAM-TAGACAAAGGGAAAGTGATCATACA-3’
VKORC1基因-1639G>A位点：
正向野生型引物：5’-GCGTGAGCCACCGCTCCC-3’
正向突变型引物：
反向共用引物：5’-HEX-AGCAGGAGAGGGAAATATC-3’
对照Amel位点：
正向引物：5’-CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAG-3’
反向引物：5’-ATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTG-3’
对照D5S818位点：
正向引物：5’-GTGGTGTCCCAGATAATCTGTAC-3’
反向引物：5’-GGTGAATAACTCCAAATACTCC-3’
对照TH01位点：
正向引物：5’-AGGCTCTAGCAGCAGCTCATG-3’
反向引物：
注：1.“－”单下划线代表各引物在引物3’端-2至-15位改动1至3个碱基。
2.“＝”双下划线代表各引物可以在引物3’端-15位之后的序列进行改动，包括末端增加其他序列、删除部分末端序列、改变部分碱基序列。
3.所有反向共用引物均在5’端进行FAM或HEX荧光标记。
二、检测方法
步骤1：PCR扩增反应
1)PCR预混溶液分装(在试剂准备区完成)
振荡混匀PCR预混溶液(PCR Master Mix)，预计进行4个检测数，每个PCR反应管分装19μL。
2)加入模板(在标本制备区完成)
检测模板为血液样本A和DNA样本B，向对应PCR反应管中加入模板，1μL血液样本、1μL DNA样品、1μL阳性对照和1μL阴性对照。
3)PCR扩增(在扩增区完成)
将各反应管放入PCR扩增仪反应槽内，设置反应体系为20μL。
按以下反应程序进行PCR扩增：
步骤2：扩增产物进行毛细血管电泳检测
配制混有分子量内标和甲酰胺的上样混合液：(0.5μL分子量内标+8.5μL甲酰胺)×检测样品数，涡旋振荡混匀10-15秒；用移液器给每个检测孔分装9μL的甲酰胺和内标混合物；取1μL扩增产物加入甲酰胺和内标混合物里，盖上封板胶盖。如果需要可以使用离心机短暂离心将样品中的气泡除掉；把样品放置95℃变性3分钟，迅速放置冰浴上3分钟。按照遗传分析仪用户使用手册步骤进行检测。检测建议设置进样时间为10秒、进样电压为3kV、运行时间为1800秒。
步骤3：数据分析
向GeneMapper软件中导入相关文件，包括Panel、Bin、对应的Analysis Method、ROX500内标。输入样品源数据(.fsa文件)，在相关参数选择栏中选定之前导入的文件，分析数据。
步骤4：检测结果的判定
如图所示，图1为血液样本A的扩增检测结果图，图2为DNA样本B的扩增结果图，其中图中野生型SNP标识为“WT”，突变型则标识为“Mu”。Amel位点男性样本显示为“XY”，女性样本则显示为“X”；另外，CYP2D6*5的基因分型存在野生型(*1/*1)、杂合缺失型(*1/*5)和纯合缺失型(*5/*5)，若D6峰高与D7和D8的峰高比值均在0.5和1.5之间，则为野生型，若小于等于0.5，则为杂合缺失型，若等于0，则为纯合缺失型。
各位点分型结果如下：
由此可分别获得血液样本A和DNA样本B 17个基因27个多态性位点的基因型，根据所检测的基因型对患者使用到的药物进行个性化用药。
综上所述，本发明的技术要领及特点，其目的在于让熟知此技术的业内人士能够了解本发明的内容并能以此实施。本发明的内容并不局限在上述的实施例中，凡根据本发明技术思想实质所作的等效变化或修饰，都在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 北京阅微基因技术有限公司
<120> 心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒
<130> PP17076-YWJ
<160> 86
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 26
<212> DNA
<213> ACE基因I/D位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 1
acctgctgcc tatacagtca ctttta 26
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> ACE基因I/D位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 2
gggattacag gcgtgataca gtc 23
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> ACE基因I/D位点反向共用引物(Unknown)
<400> 3
atgccttgag ctccagccct tagc 24
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> ADRB1基因1165 G>C位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 4
gcgcgcgcag cagagcagtc c 21
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> ADRB1基因1165 G>C位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 5
gcgcgcgcag cagagcagtc g 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> ADRB1基因1165 G>C位点反向共用引物(Unknown)
<400> 6
aacgtggtga aggccttcca c 21
<210> 7
<211> 25
<212> DNA
<213> ALDH2基因1510 G>A位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 7
gtcccacact cacagttttc acttc 25
<210> 8
<211> 25
<212> DNA
<213> ALDH2基因1510 G>A位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 8
gtcccacact cacagttttc acttt 25
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> ALDH2基因1510 G>A位点反向共用引物(Unknown)
<400> 9
ggtcctggga gtgtaaccca t 21
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> ApoE基因388 T>C位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 10
gcgcggacat ggaggacgtg t 21
<210> 11
<211> 21
<212> DNA
<213> ApoE基因388 T>C位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 11
gcgcggacat ggaggacgtg c 21
<210> 12
<211> 19
<212> DNA
<213> ApoE基因388 T>C位点反向共用引物(Unknown)
<400> 12
atggagccca cagtggcgg 19
<210> 13
<211> 21
<212> DNA
<213> ApoE基因526 C>T位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 13
atgccgatga cctgcagaag c 21
<210> 14
<211> 21
<212> DNA
<213> ApoE基因526 C>T位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 14
atgccgatga cctgcagaag t 21
<210> 15
<211> 19
<212> DNA
<213> ApoE基因526 C>T位点反向共用引物(Unknown)
<400> 15
atggagccca cagtggcgg 19
<210> 16
<211> 27
<212> DNA
<213> CYP2C19*2基因681 G>A位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 16
tttcccacta tcattgatta tttcccg 27
<210> 17
<211> 27
<212> DNA
<213> CYP2C19*2基因681 G>A位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 17
tttcccacta tcattgatta tttccca 27
<210> 18
<211> 26
<212> DNA
<213> CYP2C19*2基因681 G>A位点反向共用引物(Unknown)
<400> 18
aactagtcaa tgaatcacag atacgc 26
<210> 19
<211> 24
<212> DNA
<213> CYP2C19*3基因636 G>A位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 19
atcaggattg taagcacccc ctgg 24
<210> 20
<211> 24
<212> DNA
<213> CYP2C19*3基因636 G>A位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 20
atcaggattg taagcacccc ctga 24
<210> 21
<211> 23
<212> DNA
<213> CYP2C19*3基因636 G>A位点反向共用引物(Unknown)
<400> 21
gatattcacc ccatggctgt cta 23
<210> 22
<211> 24
<212> DNA
<213> CYP2C19*17基因-806 C>T位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 22
gcattatctc ttacatcaga gatg 24
<210> 23
<211> 24
<212> DNA
<213> CYP2C19*17基因-806 C>T位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 23
gcattatctc ttacatcaga gata 24
<210> 24
<211> 27
<212> DNA
<213> CYP2C19*17基因-806 C>T位点反向共用引物(Unknown)
<400> 24
atctctcggg ctgttttcct tagataa 27
<210> 25
<211> 22
<212> DNA
<213> CYP3A5*3基因219-237 G>A位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 25
ggtccaaaca gggaagagat ac 22
<210> 26
<211> 22
<212> DNA
<213> CYP3A5*3基因219-237 G>A位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 26
ggtccaaaca gggaagagat at 22
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> CYP3A5*3基因219-237 G>A位点反向共用引物(Unknown)
<400> 27
atggagagtg gcataggaga 20
<210> 28
<211> 22
<212> DNA
<213> CYP4F2*3基因1297 G>A位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 28
ggaacccatc acaacccagc tg 22
<210> 29
<211> 22
<212> DNA
<213> CYP4F2*3基因1297 G>A位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 29
ggaacccatc acaacccagc ta 22
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> CYP4F2*3基因1297 G>A位点反向共用引物(Unknown)
<400> 30
atgggccctg ccgagaaggg 20
<210> 31
<211> 22
<212> DNA
<213> MTHFR基因1286 A>C位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 31
gggaggagct gaccagtgaa ga 22
<210> 32
<211> 22
<212> DNA
<213> MTHFR基因1286 A>C位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 32
gggaggagct gaccagtgaa gc 22
<210> 33
<211> 22
<212> DNA
<213> MTHFR基因1286 A>C位点反向共用引物(Unknown)
<400> 33
ccaggtggag gtctcccaac tt 22
<210> 34
<211> 24
<212> DNA
<213> MTRR基因66 A>G位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 34
ccatgtacca cagcttgctc acat 24
<210> 35
<211> 24
<212> DNA
<213> MTRR基因66 A>G位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 35
ccatgtacca cagcttgctc acac 24
<210> 36
<211> 21
<212> DNA
<213> MTRR基因66 A>G位点反向共用引物(Unknown)
<400> 36
atgccttgaa gtgatgagga g 21
<210> 37
<211> 29
<212> DNA
<213> SLCO1B1基因521 T>C位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 37
gaatctgggt catacatgtg gatatatgt 29
<210> 38
<211> 29
<212> DNA
<213> SLCO1B1基因521 T>C位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 38
gaatctgggt catacatgtg gatatatgc 29
<210> 39
<211> 25
<212> DNA
<213> SLCO1B1基因521 T>C位点反向共用引物(Unknown)
<400> 39
tagacaaagg gaaagtgatc ataca 25
<210> 40
<211> 23
<212> DNA
<213> ADRB1基因145 A>G位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 40
gttgctgcct cccgccagcg aaa 23
<210> 41
<211> 23
<212> DNA
<213> ADRB1基因145 A>G位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 41
gttgctgcct cccgccagcg aag 23
<210> 42
<211> 23
<212> DNA
<213> ADRB1基因145 A>G位点反向共用引物(Unknown)
<400> 42
gccagggaca tgatgaagag gtt 23
<210> 43
<211> 23
<212> DNA
<213> AGTR1基因*86 A>C位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 43
agcacttcac taccaaatga gca 23
<210> 44
<211> 23
<212> DNA
<213> AGTR1基因*86 A>C位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 44
agcacttcac taccaaatga gcc 23
<210> 45
<211> 24
<212> DNA
<213> AGTR1基因*86 A>C位点反向共用引物(Unknown)
<400> 45
acacattcat cgagtttctg acat 24
<210> 46
<211> 19
<212> DNA
<213> CYP2C9*2基因430 C>T位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 46
gggcttcctc ttgaacacg 19
<210> 47
<211> 19
<212> DNA
<213> CYP2C9*2基因430 C>T位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 47
gggcttcctc ttgaacaca 19
<210> 48
<211> 25
<212> DNA
<213> CYP2C9*2基因430 C>T位点反向共用引物(Unknown)
<400> 48
gggaggatgg aaaacagaga cttac 25
<210> 49
<211> 21
<212> DNA
<213> CYP2C9*3基因1075 A>C位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 49
gctggtgggg agaaggtcaa t 21
<210> 50
<211> 21
<212> DNA
<213> CYP2C9*3基因1075 A>C位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 50
gctggtgggg agaaggtcaa g 21
<210> 51
<211> 23
<212> DNA
<213> CYP2C9*3基因1075 A>C位点反向共用引物(Unknown)
<400> 51
aaccatcctc tctttaagtt tgc 23
<210> 52
<211> 20
<212> DNA
<213> CYP2D6*10基因100C>T位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 52
acgctgggct gcacgctacc 20
<210> 53
<211> 20
<212> DNA
<213> CYP2D6*10基因100C>T位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 53
acgctgggct gcacgctact 20
<210> 54
<211> 20
<212> DNA
<213> CYP2D6*10基因100C>T位点反向共用引物(Unknown)
<400> 54
gtaggggagc ctcagcacct 20
<210> 55
<211> 24
<212> DNA
<213> MTHFR基因665 C>T位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 55
aaagctgcgt gatgatgaaa tcgg 24
<210> 56
<211> 24
<212> DNA
<213> MTHFR基因665 C>T位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 56
aaagctgcgt gatgatgaaa tcga 24
<210> 57
<211> 24
<212> DNA
<213> MTHFR基因665 C>T位点反向共用引物(Unknown)
<400> 57
gttggaaggt gcaagatcag agcc 24
<210> 58
<211> 27
<212> DNA
<213> SLCO1B1基因388 A>G位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 58
acaggtattc taaagaaact aatatca 27
<210> 59
<211> 27
<212> DNA
<213> SLCO1B1基因388 A>G位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 59
acaggtattc taaagaaact aatatcg 27
<210> 60
<211> 22
<212> DNA
<213> SLCO1B1基因388 A>G位点反向共用引物(Unknown)
<400> 60
acttttccca ctatctcagg tg 22
<210> 61
<211> 18
<212> DNA
<213> VKORC1基因-1639 G>A位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 61
gcgtgagcca ccgcaccc 18
<210> 62
<211> 18
<212> DNA
<213> VKORC1基因-1639 G>A位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 62
gcgtgagcca ccgcacct 18
<210> 63
<211> 19
<212> DNA
<213> VKORC1基因-1639 G>A位点反向共用引物(Unknown)
<400> 63
agcaggagag ggaaatatc 19
<210> 64
<211> 20
<212> DNA
<213> CYP2C9*5基因1080C>G位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 64
gcaggctggt ggggagaagg 20
<210> 65
<211> 20
<212> DNA
<213> CYP2C9*5基因1080C>G位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 65
gcaggctggt ggggagaagc 20
<210> 66
<211> 23
<212> DNA
<213> CYP2C9*5基因1080C>G位点反向共用引物(Unknown)
<400> 66
aaccatcctc tctttaagtt tgc 23
<210> 67
<211> 25
<212> DNA
<213> GGCX基因214+597 G>A位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 67
ttgcccagaa gactcagaga aacag 25
<210> 68
<211> 25
<212> DNA
<213> GGCX基因214+597 G>A位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 68
ttgcccagaa gactcagaga aacaa 25
<210> 69
<211> 22
<212> DNA
<213> GGCX基因214+597 G>A位点反向共用引物(Unknown)
<400> 69
gaactactgg gctaagggga ct 22
<210> 70
<211> 23
<212> DNA
<213> GGCX基因2084+45 G>C位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 70
tccccagggg aaagttacca agc 23
<210> 71
<211> 23
<212> DNA
<213> GGCX基因2084+45 G>C位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 71
tccccagggg aaagttacca agg 23
<210> 72
<211> 20
<212> DNA
<213> GGCX基因2084+45 G>C位点反向共用引物(Unknown)
<400> 72
agaaacaggg cctctacccc 20
<210> 73
<211> 25
<212> DNA
<213> NPPA基因6773 T>C位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 73
atgtctgtgt tctctttgca gtact 25
<210> 74
<211> 25
<212> DNA
<213> NPPA基因6773 T>C位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 74
atgtctgtgt tctctttgca gtacc 25
<210> 75
<211> 26
<212> DNA
<213> NPPA基因6773 T>C位点反向共用引物(Unknown)
<400> 75
atcaaaccac tttatctaca gttagc 26
<210> 76
<211> 18
<212> DNA
<213> CYP2D6*5基因缺失位点正向引物(Unknown)
<400> 76
ggatgtgcag cgtgagcc 18
<210> 77
<211> 21
<212> DNA
<213> CYP2D6*5基因缺失位点反向引物(Unknown)
<400> 77
cctggtcacc catctctggt c 21
<210> 78
<211> 22
<212> DNA
<213> CYP3A4*1G基因1026+12 G>A位点正向野生型引物(Unknown)
<400> 78
acccaataag gtgagtggat gg 22
<210> 79
<211> 22
<212> DNA
<213> CYP3A4*1G基因1026+12 G>A位点正向突变型引物(Unknown)
<400> 79
acccaataag gtgagtggat ga 22
<210> 80
<211> 22
<212> DNA
<213> CYP3A4*1G基因1026+12 G>A位点反向共用引物(Unknown)
<400> 80
aatgagtgtg agcaacaaat gc 22
<210> 81
<211> 22
<212> DNA
<213> 对照Amel位点正向引物(Unknown)
<400> 81
ccctgggctc tgtaaagaat ag 22
<210> 82
<211> 24
<212> DNA
<213> 对照Amel位点反向引物(Unknown)
<400> 82
atcagagctt aaactgggaa gctg 24
<210> 83
<211> 23
<212> DNA
<213> 对照D5S818位点正向引物(Unknown)
<400> 83
gtggtgtccc agataatctg tac 23
<210> 84
<211> 22
<212> DNA
<213> 对照D5S818位点反向引物(Unknown)
<400> 84
ggtgaataac tccaaatact cc 22
<210> 85
<211> 21
<212> DNA
<213> 对照TH01位点正向引物(Unknown)
<400> 85
aggctctagc agcagctcat g 21
<210> 86
<211> 24
<212> DNA
<213> 对照TH01位点反向引物(Unknown)
<400> 86
ctggaaatga cactgctaca actc 24
Claims (10)
1.一种用于检测心血管个性化用药指导的基因检测的PCR体系引物组合物，在该同一PCR体系中能同时对以下21个位点进行扩增：ACE基因I/D位点、ADRB1基因1165G>C位点、ALDH2基因1510G>A位点、ApoE基因388T>C位点、ApoE基因526C>T位点、CYP2C19*2基因681G>A位点、CYP2C19*3基因636G>A位点、CYP2C19*17基因-806C>T位点、CYP3A5*3基因219-237G>A位点、CYP4F2*3基因1297G>A位点、MTHFR基因1286A>C位点、MTRR基因66A>G位点、SLCO1B1基因521T>C位点、ADRB1基因145A>G位点、AGTR1基因*86A>C位点、CYP2C9*2基因430C>T位点、CYP2C9*3基因1075A>C位点、CYP2D6*10基因100C>T位点、MTHFR基因665C>T位点、SLCO1B1基因388A>G位点、VKORC1基因-1639G>A位点；所述扩增该位点的引物分别为：
ACE基因I/D位点：
正向野生型引物：5’-ACCTGCTGCCTATACAGTCACTTTTA-3’，
正向突变型引物：5’-GGGATTACAGGCGTGATACAGTC-3’，
反向共用引物：5’-ATGCCTTGAGCTCCAGCCCTTAGC-3’；
ADRB1基因1165G>C位点：
正向野生型引物：5’-GCGCGCGCAGCAGAGCAGTCC-3’，
正向突变型引物：5’-GCGCGCGCAGCAGAGCAGTCG-3’，
反向共用引物：5’-AACGTGGTGAAGGCCTTCCAC-3’；
ALDH2基因1510G>A位点：
正向野生型引物：5’-GTCCCACACTCACAGTTTTCACTTC-3’，
正向突变型引物：5’-GTCCCACACTCACAGTTTTCACTTT-3’，
反向共用引物：5’-GGTCCTGGGAGTGTAACCCAT-3’；
ApoE基因388T>C位点：
正向野生型引物：5’-GCGCGGACATGGAGGACGTGT-3’，
正向突变型引物：5’-GCGCGGACATGGAGGACGTGC-3’，
反向共用引物：5’-ATGGAGCCCACAGTGGCGG-3’；
ApoE基因526C>T位点：
正向野生型引物：5’-ATGCCGATGACCTGCAGAAGC-3’，
正向突变型引物：5’-ATGCCGATGACCTGCAGAAGT-3’，
反向共用引物：5’-ATGGAGCCCACAGTGGCGG-3’；
CYP2C19*2基因681G>A位点：
正向野生型引物：5’-TTTCCCACTATCATTGATTATTTCCCG-3’，
正向突变型引物：5’-TTTCCCACTATCATTGATTATTTCCCA-3’，
反向共用引物：5’-AACTAGTCAATGAATCACAGATACGC-3’；
CYP2C19*3基因636G>A位点：
正向野生型引物：5’-ATCAGGATTGTAAGCACCCCCTGG-3’，
正向突变型引物：5’-ATCAGGATTGTAAGCACCCCCTGA-3’，
反向共用引物：5’-GATATTCACCCCATGGCTGTCTA-3’；
CYP2C19*17基因-806C>T位点：
正向野生型引物：5’-GCATTATCTCTTACATCAGAGATG-3’，
正向突变型引物：5’-GCATTATCTCTTACATCAGAGATA-3’，
反向共用引物：5’-ATCTCTCGGGCTGTTTTCCTTAGATAA-3’；
CYP3A5*3基因219-237G>A位点：
正向野生型引物：5’-GGTCCAAACAGGGAAGAGATAC-3’，
正向突变型引物：5’-GGTCCAAACAGGGAAGAGATAT-3’，
反向共用引物：5’-ATGGAGAGTGGCATAGGAGA-3’；
CYP4F2*3基因1297G>A位点：
正向野生型引物：5’-GGAACCCATCACAACCCAGCTG-3’，
正向突变型引物：5’-GGAACCCATCACAACCCAGCTA-3’，
反向共用引物：5’-ATGGGCCCTGCCGAGAAGGG-3’；
MTHFR基因1286A>C位点：
正向野生型引物：5’-GGGAGGAGCTGACCAGTGAAGA-3’，
正向突变型引物：5’-GGGAGGAGCTGACCAGTGAAGC-3’，
反向共用引物：5’-CCAGGTGGAGGTCTCCCAACTT-3’；
MTRR基因66A>G位点：
正向野生型引物：5’-CCATGTACCACAGCTTGCTCACAT-3’，
正向突变型引物：5’-CCATGTACCACAGCTTGCTCACAC-3’，
反向共用引物：5’-ATGCCTTGAAGTGATGAGGAG-3’；
SLCO1B1基因521T>C位点：
正向野生型引物：5’-GAATCTGGGTCATACATGTGGATATATGT-3’，
正向突变型引物：5’-GAATCTGGGTCATACATGTGGATATATGC-3’，
反向共用引物：5’-TAGACAAAGGGAAAGTGATCATACA-3’；
ADRB1基因145A>G位点：
正向野生型引物：5’-GTTGCTGCCTCCCGCCAGCGAAA-3’，
正向突变型引物：5’-GTTGCTGCCTCCCGCCAGCGAAG-3’，
反向共用引物：5’-GCCAGGGACATGATGAAGAGGTT-3’；
AGTR1基因*86A>C位点：
正向野生型引物：5’-AGCACTTCACTACCAAATGAGCA-3’，
正向突变型引物：5’-AGCACTTCACTACCAAATGAGCC-3’，
反向共用引物：5’-ACACATTCATCGAGTTTCTGACAT-3’；
CYP2C9*2基因430C>T位点：
正向野生型引物：5’-GGGCTTCCTCTTGAACACG-3’，
正向突变型引物：5’-GGGCTTCCTCTTGAACACA-3’，
反向共用引物：5’-GGGAGGATGGAAAACAGAGACTTAC-3’；
CYP2C9*3基因1075A>C位点：
正向野生型引物：5’-GCTGGTGGGGAGAAGGTCAAT-3’，
正向突变型引物：5’-GCTGGTGGGGAGAAGGTCAAG-3’，
反向共用引物：5’-AACCATCCTCTCTTTAAGTTTGC-3’；
CYP2D6*10基因100C>T位点：
正向野生型引物：5’-ACGCTGGGCTGCACGCTACC-3’，
正向突变型引物：5’-ACGCTGGGCTGCACGCTACT-3’，
反向共用引物：5’-GTAGGGGAGCCTCAGCACCT-3’；
MTHFR基因665C>T位点：
正向野生型引物：5’-AAAGCTGCGTGATGATGAAATCGG-3’，
正向突变型引物：5’-AAAGCTGCGTGATGATGAAATCGA-3’，
反向共用引物：5’-GTTGGAAGGTGCAAGATCAGAGCC-3’；
SLCO1B1基因388A>G位点：
正向野生型引物：5’-ACAGGTATTCTAAAGAAACTAATATCA-3’，
正向突变型引物：5’-ACAGGTATTCTAAAGAAACTAATATCG-3’，
反向共用引物：5’-ACTTTTCCCACTATCTCAGGTG-3’；
VKORC1基因-1639G>A位点：
正向野生型引物：5’-GCGTGAGCCACCGCACCC-3’，
正向突变型引物：5’-GCGTGAGCCACCGCACCT-3’，
反向共用引物：5’-AGCAGGAGAGGGAAATATC-3’。
2.根据权利要求1所述的PCR体系引物组合物，在该同一PCR体系中还能扩增下述位点：GGCX基因2084+45G>C位点、CYP2C9*5基因1080C>G位点、GGCX基因214+597G>A位点、NPPA基因6773T>C位点；扩增该位点的引物分别为：
CYP2C9*5基因1080C>G位点：
正向野生型引物：5’-GCAGGCTGGTGGGGAGAAGG-3’，
正向突变型引物：5’-GCAGGCTGGTGGGGAGAAGC-3’，
反向共用引物：5’-AACCATCCTCTCTTTAAGTTTGC-3’；
GGCX基因214+597G>A位点：
正向野生型引物：5’-TTGCCCAGAAGACTCAGAGAAACAG-3’，
正向突变型引物：5’-TTGCCCAGAAGACTCAGAGAAACAA-3’，
反向共用引物：5’-GAACTACTGGGCTAAGGGGACT-3’；
GGCX基因2084+45G>C位点：
正向野生型引物：5’-TCCCCAGGGGAAAGTTACCAAGC-3’，
正向突变型引物：5’-TCCCCAGGGGAAAGTTACCAAGG-3’，
反向共用引物：5’-AGAAACAGGGCCTCTACCCC-3’；
NPPA基因6773T>C位点：
正向野生型引物：5’-ATGTCTGTGTTCTCTTTGCAGTACT-3’，
正向突变型引物：5’-ATGTCTGTGTTCTCTTTGCAGTACC-3’，
反向共用引物：5’-ATCAAACCACTTTATCTACAGTTAGC-3’。
3.根据权利要求2所述的PCR体系引物组合物，在该同一PCR体系中还能扩增下述位点：CYP2D6*5基因片段缺失、CYP3A4*1G基因1026+12G>A位点；扩增该位点的引物分别为：
CYP2D6*5基因缺失位点：
正向引物：5’-GGATGTGCAGCGTGAGCC-3’，
反向引物：5’-CCTGGTCACCCATCTCTGGTC-3’，
CYP3A4*1G基因1026+12G>A位点：
正向野生型引物：5’-ACCCAATAAGGTGAGTGGATGG-3’，
正向突变型引物：5’-ACCCAATAAGGTGAGTGGATGA-3’，
反向共用引物：5’-AATGAGTGTGAGCAACAAATGC-3’。
4.根据权利要求1—3任一所述的PCR体系引物组合物，在该同一PCR体系中还能扩增下述对照位点：性别Amel基因、人类身份识别位点D5S818和Th01，该对照位点的引物分别为：
对照Amel位点：
正向引物：5’-CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAG-3’，
反向引物：5’-ATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTG-3’；
对照D5S818位点：
正向引物：5’-GTGGTGTCCCAGATAATCTGTAC-3’，
反向引物：5’-GGTGAATAACTCCAAATACTCC-3’；
对照TH01位点：
正向引物：5’-AGGCTCTAGCAGCAGCTCATG-3’，
反向引物：5’-CTGGAAATGACACTGCTACAACTC-3’。
5.根据权利要求1－4任一所述的PCR体系引物组合物，所述引物的序列上添加有修饰或以修饰碱基取代正常碱基，所述修饰为荧光基团修饰、磷酸化修饰、硫代磷酸化修饰、锁核酸修饰或肽核酸修饰。
6.根据权利要求5所述的PCT体系引物组合物，所述位点分为两组，两组采用两种不同的荧光标记，所述第一组为：MTRR基因66A>G位点、ACE基因I/D位点、CYP3A5*3基因219‐237G>A位点、ApoE基因526C>T位点、ADRB1基因1165G>C位点、CYP2C19*3基因636G>A位点、SLCO1B1基因521T>C位点、ALDH2基因1510G>A位点、CYP2C19*17基因‐806C>T位点、CYP2C19*2基因681G>A位点、MTHFR基因1286A>C位点、GGCX基因2084+45G>C位点、ApoE基因388T>C位点、CYP4F2*3基因1297G>A位点、D5S818位点；
第二组为：Amel位点、SLCO1B1基因388A>G位点、VKORC1基因‐1639G>A位点、CYP2D6*10基因100C>T位点、GGCX基因214+597G>A位点、ADRB1基因145A>G位点、AGTR1基因*86A>C位点、NPPA基因6773T>C位点、MTHFR基因665C>T位点、CYP2C9*2基因430C>T位点、CYP2D6*5基因片段缺失、CYP2C9*3基因1075A>C位点、CYP2C9*5基因1080C>G位点、CYP3A4*1G基因1026+12G>A位点、TH01位点。
7.根据权利要求6所述的PCT体系引物组合物，所述第一组荧光标记为FAM，第二组荧光标记为HEX，所述FAM或HEX荧光标记位于反向共用引物或反向引物的5’端。
8.根据权利要求1－4任一所述的引物，所述引物的序列3’端-2至-15位改动1至3个碱基或者/和在引物3’端-15位之后的序列进行改动，所述改动包括末端增加其他序列、删除部分末端序列、改变部分碱基序列。
9.根据权利要求1－4任一所述的PCR体系引物组合物，其特征在于，所述检测采用毛细管电泳检测，所述扩增采用多重等位基因特异性PCR扩增。
10.一种心血管个性化用药相关基因检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1—9任一所述PCR引物组合物，并通过同一个扩增反应体系完成对相应位点的检测。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711121223.3A CN107641645B (zh) | 2017-11-14 | 2017-11-14 | 心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711121223.3A CN107641645B (zh) | 2017-11-14 | 2017-11-14 | 心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107641645A true CN107641645A (zh) | 2018-01-30 |
| CN107641645B CN107641645B (zh) | 2021-02-19 |
Family
ID=61125311
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711121223.3A Active CN107641645B (zh) | 2017-11-14 | 2017-11-14 | 心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107641645B (zh) |
Cited By (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108220404A (zh) * | 2018-02-06 | 2018-06-29 | 东莞博奥木华基因科技有限公司 | 一种识别dna大片段缺失的方法和系统 |
| CN108531578A (zh) * | 2018-04-26 | 2018-09-14 | 宁波美丽人生医学检验所有限公司 | 一种用于检测高血压用药相关基因的引物组合物及试剂盒 |
| CN109136366A (zh) * | 2018-09-25 | 2019-01-04 | 中国人民解放军海军总医院 | 一种脊髓性肌萎缩症相关基因的检测体系及检测试剂盒 |
| CN109182510A (zh) * | 2018-11-06 | 2019-01-11 | 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 | 高血压个体化药物治疗基因型检测snp位点和配套试剂盒 |
| CN109207586A (zh) * | 2018-11-06 | 2019-01-15 | 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 | 基因snp位点在高血压个体化药物治疗基因型检测中应用和试剂盒 |
| CN109295216A (zh) * | 2018-11-06 | 2019-02-01 | 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 | 预测高血压个体化药物药效的snp位点和检测试剂盒 |
| CN109355368A (zh) * | 2018-10-22 | 2019-02-19 | 江苏美因康生物科技有限公司 | 一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒及方法 |
| CN109457026A (zh) * | 2018-10-22 | 2019-03-12 | 江苏美因康生物科技有限公司 | 一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒及方法 |
| CN109457025A (zh) * | 2018-10-22 | 2019-03-12 | 江苏美因康生物科技有限公司 | 一种同时快速检测SLCO1B1及ApoE基因多态性的试剂盒及方法 |
| CN109457024A (zh) * | 2018-03-23 | 2019-03-12 | 杭州泰领生物技术有限公司 | 高血压基因多态性荧光pcr溶解曲线检测试剂盒及应用 |
| CN109868314A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-06-11 | 浙江迪谱诊断技术有限公司 | 一种检测心血管疾病用药基因的试剂盒及检测方法 |
| CN110423803A (zh) * | 2019-08-07 | 2019-11-08 | 郑州大学第一附属医院 | 氯吡格雷、他汀及阿司匹林相关药物代谢基因分型检测复合扩增体系及试剂盒 |
| WO2020011277A1 (zh) * | 2018-07-10 | 2020-01-16 | 默禾医疗科技（上海）有限公司 | 一种检测cyp3a4、cyp3a5多态性位点的试剂盒及其方法 |
| CN110863042A (zh) * | 2019-10-11 | 2020-03-06 | 济南和合医学检验有限公司 | 一种运用多重pcr技术检测高血压相关基因的方法 |
| CN112080563A (zh) * | 2020-09-01 | 2020-12-15 | 美思睿(北京)生物科技有限公司 | 一种检测慢性病精准用药基因的试剂盒 |
| CN112226494A (zh) * | 2020-10-21 | 2021-01-15 | 上海鼎晶生物医药科技股份有限公司 | 一种AGTR1基因rs5186位点多态性检测用引物组及其应用 |
| CN112538528A (zh) * | 2020-12-25 | 2021-03-23 | 上海美吉逾华生物医药科技有限公司 | 一种检测aldh2基因多态性的引物组及试剂盒 |
| CN112980943A (zh) * | 2021-03-31 | 2021-06-18 | 山东英盛生物技术有限公司 | 一种用于检测他克莫司精准用药的方法及引物、pcr试剂和试剂盒 |
| CN113046430A (zh) * | 2021-03-15 | 2021-06-29 | 北京阅微基因技术股份有限公司 | 一种染色体非整倍体数目异常的扩增组合物及其应用 |
| CN113215244A (zh) * | 2021-05-21 | 2021-08-06 | 广州合一生物科技有限公司 | 一种用于抗血小板药物个体化用药的基因检测试剂盒及其应用 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101560555A (zh) * | 2009-03-18 | 2009-10-21 | 上海中优医药高科技有限公司 | 一种用于儿童个性化教育和健康指导的基因检测方法 |
| CN102251043A (zh) * | 2011-07-27 | 2011-11-23 | 协和干细胞基因工程有限公司 | 检测华法林个体化用药相关snp位点的试剂盒及其多重pcr扩增方法和检测方法 |
| CN102766689A (zh) * | 2012-04-17 | 2012-11-07 | 盛司潼 | 一种增加测序读长的测序方法 |
| CN102858985A (zh) * | 2009-07-24 | 2013-01-02 | 西格马-奥尔德里奇有限责任公司 | 基因组编辑方法 |
| WO2013102442A1 (zh) * | 2012-01-06 | 2013-07-11 | 深圳华大基因科技有限公司 | 药物相关基因型别数据库、基因分型及药物反应检测方法 |
| CN103352080A (zh) * | 2013-07-11 | 2013-10-16 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 一种遗传性耳聋基因检测试剂盒 |
| KR101712463B1 (ko) * | 2015-12-14 | 2017-03-06 | 대한민국 | 혈압강하제 및 동맥 경화용제 대사효소 관련 유전자 snp 지노타이핑 시약, 이를 포함하는 키트 및 유전자형 분석방법 |
-
2017
- 2017-11-14 CN CN201711121223.3A patent/CN107641645B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101560555A (zh) * | 2009-03-18 | 2009-10-21 | 上海中优医药高科技有限公司 | 一种用于儿童个性化教育和健康指导的基因检测方法 |
| CN102858985A (zh) * | 2009-07-24 | 2013-01-02 | 西格马-奥尔德里奇有限责任公司 | 基因组编辑方法 |
| CN102251043A (zh) * | 2011-07-27 | 2011-11-23 | 协和干细胞基因工程有限公司 | 检测华法林个体化用药相关snp位点的试剂盒及其多重pcr扩增方法和检测方法 |
| WO2013102442A1 (zh) * | 2012-01-06 | 2013-07-11 | 深圳华大基因科技有限公司 | 药物相关基因型别数据库、基因分型及药物反应检测方法 |
| CN102766689A (zh) * | 2012-04-17 | 2012-11-07 | 盛司潼 | 一种增加测序读长的测序方法 |
| CN103352080A (zh) * | 2013-07-11 | 2013-10-16 | 无锡中德美联生物技术有限公司 | 一种遗传性耳聋基因检测试剂盒 |
| KR101712463B1 (ko) * | 2015-12-14 | 2017-03-06 | 대한민국 | 혈압강하제 및 동맥 경화용제 대사효소 관련 유전자 snp 지노타이핑 시약, 이를 포함하는 키트 및 유전자형 분석방법 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| NAVEEN L. PEREIRA等: "Genotype-based clinical trials in cardiovascular disease", 《NAT REV CARDIOL.》 * |
| 袁杭等: "遗传因子和个性化分子检测在心血管疾病中的作用", 《中华临床医师杂志(电子版)》 * |
Cited By (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108220404B (zh) * | 2018-02-06 | 2018-11-09 | 东莞博奥木华基因科技有限公司 | 一种识别dna大片段缺失的方法和系统 |
| CN108220404A (zh) * | 2018-02-06 | 2018-06-29 | 东莞博奥木华基因科技有限公司 | 一种识别dna大片段缺失的方法和系统 |
| CN109457024A (zh) * | 2018-03-23 | 2019-03-12 | 杭州泰领生物技术有限公司 | 高血压基因多态性荧光pcr溶解曲线检测试剂盒及应用 |
| CN108531578A (zh) * | 2018-04-26 | 2018-09-14 | 宁波美丽人生医学检验所有限公司 | 一种用于检测高血压用药相关基因的引物组合物及试剂盒 |
| WO2020011277A1 (zh) * | 2018-07-10 | 2020-01-16 | 默禾医疗科技（上海）有限公司 | 一种检测cyp3a4、cyp3a5多态性位点的试剂盒及其方法 |
| CN109136366B (zh) * | 2018-09-25 | 2021-10-12 | 中国人民解放军海军总医院 | 一种脊髓性肌萎缩症相关基因的检测体系及检测试剂盒 |
| CN109136366A (zh) * | 2018-09-25 | 2019-01-04 | 中国人民解放军海军总医院 | 一种脊髓性肌萎缩症相关基因的检测体系及检测试剂盒 |
| CN109457025A (zh) * | 2018-10-22 | 2019-03-12 | 江苏美因康生物科技有限公司 | 一种同时快速检测SLCO1B1及ApoE基因多态性的试剂盒及方法 |
| CN109457026A (zh) * | 2018-10-22 | 2019-03-12 | 江苏美因康生物科技有限公司 | 一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒及方法 |
| CN109355368A (zh) * | 2018-10-22 | 2019-02-19 | 江苏美因康生物科技有限公司 | 一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒及方法 |
| CN109295216A (zh) * | 2018-11-06 | 2019-02-01 | 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 | 预测高血压个体化药物药效的snp位点和检测试剂盒 |
| CN109207586A (zh) * | 2018-11-06 | 2019-01-15 | 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 | 基因snp位点在高血压个体化药物治疗基因型检测中应用和试剂盒 |
| CN109182510A (zh) * | 2018-11-06 | 2019-01-11 | 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 | 高血压个体化药物治疗基因型检测snp位点和配套试剂盒 |
| CN109868314A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-06-11 | 浙江迪谱诊断技术有限公司 | 一种检测心血管疾病用药基因的试剂盒及检测方法 |
| CN109868314B (zh) * | 2018-12-29 | 2020-03-03 | 浙江迪谱诊断技术有限公司 | 一种检测心血管疾病用药基因的试剂盒及检测方法 |
| CN110423803A (zh) * | 2019-08-07 | 2019-11-08 | 郑州大学第一附属医院 | 氯吡格雷、他汀及阿司匹林相关药物代谢基因分型检测复合扩增体系及试剂盒 |
| CN110863042A (zh) * | 2019-10-11 | 2020-03-06 | 济南和合医学检验有限公司 | 一种运用多重pcr技术检测高血压相关基因的方法 |
| CN112080563A (zh) * | 2020-09-01 | 2020-12-15 | 美思睿(北京)生物科技有限公司 | 一种检测慢性病精准用药基因的试剂盒 |
| CN112080563B (zh) * | 2020-09-01 | 2021-04-30 | 美思睿(北京)生物科技有限公司 | 一种检测慢性病精准用药基因的试剂盒 |
| CN112226494A (zh) * | 2020-10-21 | 2021-01-15 | 上海鼎晶生物医药科技股份有限公司 | 一种AGTR1基因rs5186位点多态性检测用引物组及其应用 |
| CN112538528A (zh) * | 2020-12-25 | 2021-03-23 | 上海美吉逾华生物医药科技有限公司 | 一种检测aldh2基因多态性的引物组及试剂盒 |
| CN113046430A (zh) * | 2021-03-15 | 2021-06-29 | 北京阅微基因技术股份有限公司 | 一种染色体非整倍体数目异常的扩增组合物及其应用 |
| CN113046430B (zh) * | 2021-03-15 | 2022-02-01 | 北京阅微基因技术股份有限公司 | 一种染色体非整倍体数目异常的扩增组合物及其应用 |
| CN112980943A (zh) * | 2021-03-31 | 2021-06-18 | 山东英盛生物技术有限公司 | 一种用于检测他克莫司精准用药的方法及引物、pcr试剂和试剂盒 |
| CN113215244A (zh) * | 2021-05-21 | 2021-08-06 | 广州合一生物科技有限公司 | 一种用于抗血小板药物个体化用药的基因检测试剂盒及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107641645B (zh) | 2021-02-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107641645A (zh) | 心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒 | |
| CN112080563B (zh) | 一种检测慢性病精准用药基因的试剂盒 | |
| CN106636337B (zh) | 一种基于多重hrm分析的氯吡格雷耐药基因检测方法 | |
| CN109868314A (zh) | 一种检测心血管疾病用药基因的试剂盒及检测方法 | |
| CN111235272B (zh) | 一次性检测肺癌多重基因突变的组合物及其应用 | |
| CN106498035A (zh) | 一种用于高通量测序检测化疗药物基因snp变异文库的构建方法及其应用 | |
| CN106086192A (zh) | 他克莫司个性化用药相关基因的分型检测试剂盒 | |
| CN103923988B (zh) | 用于检测等位基因cyp2c19*2的引物组合及检测试剂盒 | |
| CN111118138A (zh) | 一种叶酸代谢能力基因mthfr和mtrr多态性检测试剂盒及方法 | |
| CN104404163A (zh) | 检测人类cyp2c9和vkorc1基因多态性的探针及试剂盒 | |
| CN105886606A (zh) | 焦磷酸测序法快速检测华法林代谢酶基因多态性的试剂盒及其应用 | |
| CN110846399A (zh) | 一种心血管疾病个体化用药基因检测体系试剂盒及其应用 | |
| CN112280849B (zh) | 一种抗抑郁症个体化用药基因分型检测的复合扩增体系及试剂盒 | |
| CN108913766A (zh) | 一种检测抑郁症个体化药物治疗基因多位点突变的特异性引物和探针及试剂盒 | |
| CN113549686A (zh) | 一种钙离子拮抗剂代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用 | |
| CN107653317A (zh) | 一种分子信标探针检测人类cyp2c9基因多态性的试剂盒、方法及其应用 | |
| CN109355377B (zh) | 华法林个体化用药相关基因多态性检测试剂盒及其制备方法与应用 | |
| CN103952481A (zh) | 用于检测等位基因cyp2c19*3的引物组合及检测试剂盒 | |
| CN113249459A (zh) | 用于精神分裂症患者用药指导的基因群检测的引物组及相关用途、相应的试剂盒和使用方法 | |
| CN112779322A (zh) | 一种基于非荧光标记探针的高分辨熔解曲线的基因突变检测试剂盒、检测方法及其应用 | |
| CN110438224B (zh) | 一种用于ugt1a1基因多态性检测的引物、试剂盒及检测方法 | |
| CN110423803A (zh) | 氯吡格雷、他汀及阿司匹林相关药物代谢基因分型检测复合扩增体系及试剂盒 | |
| CN112899361A (zh) | 一种基于锁核酸修饰的rma法检测cyp2c9和vkorc1基因多态性的试剂盒 | |
| CN106399565A (zh) | 一种rs12979860基因分型双色荧光PCR快速检测试剂盒 | |
| CN112029851A (zh) | 一种氯吡格雷用药基因多态性检测的方法、试剂盒及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 100044 601, 6th floor, building 10, No.39 courtyard, Sanlihe Road, Haidian District, Beijing Applicant after: Beijing Yuewei Gene Technology Co.,Ltd. Address before: 100044 601, 6th floor, building 10, No.39 courtyard, Sanlihe Road, Haidian District, Beijing Applicant before: BEIJING MICROREAD GENE TECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A system and kit for detecting genetic polymorphisms related to personalized medication for cardiovascular diseases Granted publication date: 20210219 Pledgee: Zhongguancun Branch of Bank of Beijing Co.,Ltd. Pledgor: Beijing Yuewei Gene Technology Co.,Ltd. Registration number: Y2024110000027 |