CN107365639B

CN107365639B - 一种胶体金平台清洗液

Info

Publication number: CN107365639B
Application number: CN201710209566.9A
Authority: CN
Inventors: 廖玲妮; 陆亮
Original assignee: Shanghai I Reader Biological Technology Co ltd
Current assignee: Shanghai I Reader Biological Technology Co ltd
Priority date: 2017-03-31
Filing date: 2017-03-31
Publication date: 2020-04-24
Anticipated expiration: 2037-03-31
Also published as: CN107365639A

Abstract

本发明提供了一种胶体金平台清洗液，所述清洗液包括：(1)0.25～2g/L碱金属氢氧化物；(2)0.25～30g/L非离子表面活性剂；(3)2～11g/L缓冲剂；(4)0.1～4g/L抑菌剂。所述清洗液价格低廉，稳定性好，不易残留，不影响胶体金平台的测定。

Description

一种胶体金平台清洗液

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及到一种胶体金平台清洗液。

背景技术

胶体金试纸是一类临床应用多年、以操作便捷、定性检测、报告速度快、适应性广为特点的干式免疫分析类产品。随着近年来国内临床诊断行业对于定量、准确、高通量等方面的需求逐年增加，胶体金类诊断试纸条正朝着准确定量、全自动化检测、小型化POCT方向演变。在临床实验室中，胶体金类POCT的样本一般以血清、血浆、全血等为主，因此，全自动的液路系统容易被血细胞、蛋白、结晶等污染，滋生细菌，引起检测中的异常结果。由此可见，有效的清洗效果对保证检测结果的准确性、全自动设备的正常运行至关重要。

综上所述，国内市场上少有胶体金干式免疫的全自动设备，相应也缺乏专用的清洗液。本发明提供了一种价格低廉、不易残留、对全自动设备管道无影响、不影响测定的清洗液。

发明内容

本发明的目的是提供一种胶体金平台清洗液，所述清洗液价格低廉，稳定性好，不易残留，不影响胶体金平台的测定。同时，该清洗采用低泡、低盐、低腐蚀的配方，降低设备液路故障的风险。

在本发明的第一方面，提供了一种胶体金平台清洗液，所述清洗液包括：

(1)0.25～2g/L碱金属氢氧化物；

(2)0.25～30g/L非离子表面活性剂；

(3)2～11g/L缓冲剂；

(4)0.1～4g/L抑菌剂。

在另一优选例中，所述清洗液是由以下组分组成的：(1)0.25～2g/L碱金属氢氧化物；(2)0.25～30g/L非离子表面活性剂；(3)2～11g/L缓冲剂；(4)0.1～4g/L抑菌剂，和去离子水。

在另一优选例中，所述清洗液包括：

(1)0.5～1.5g/L碱金属氢氧化物；

(2)0.5～25g/L非离子表面活性剂；

(3)3.75～10g/L缓冲剂；

(4)0.2～2g/L抑菌剂。

在另一优选例中，所述缓冲剂选自下组：甘氨酸、碳酸钠、碳酸钾，或其组合。

在另一优选例中，所述缓冲剂选自下组：甘氨酸、碳酸钠，或其组合。

在另一优选例中，所述缓冲剂为甘氨酸与碳酸钠的组合，且其中m(Na₂CO₃)：m(Gly)＝5:5～1:9。

在另一优选例中，当所述缓冲剂为甘氨酸与碳酸钠的组合时，所述缓冲剂在体系中的用量为0.375-1％。

在另一优选例中，当所述缓冲剂为甘氨酸与碳酸钠的组合时，所述缓冲剂在体系中的用量为0.375-0.5％。

在另一优选例中，所述非离子表面活性剂选自下组：脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO-9)、聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(Tween80)、聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween20)，或其组合。

在另一优选例中，所述的非离子表面活性剂包括脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO-9)，和聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(Tween80)或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween20)；且所述的脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO-9)的用量m(AEO-9)和聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(Tween80)或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween20)的用量m(Tween)之比为：m(AEO-9)：m(Tween)＝1：0.5-4。

在另一优选例中，当所述m(AEO-9)：m(Tween)＝1：0.5-4，复配活性剂的总体添加量不超过2.5％。

在另一优选例中，所述碱金属氢氧化物选自下组：氢氧化钠、氢氧化钾，或其组合。

在另一优选例中，所述抑菌剂选自下组：叠氮钠、甲基异噻唑啉酮，或其组合。

在另一优选例中，所述方法包括步骤：

将碱金属氢氧化物、非离子表面活性剂、缓冲剂、抑菌剂混合于去离子水中，得到所述清洗液。

在本发明的第二方面，提供了一种胶体金平台清洗方法，所述方法包括步骤：在上样操作完成后，用第一方面所述的清洗液对进样针和混匀池中残留样本进行冲洗；

或所述方法包括步骤：在进样针取样稀释一次后，第二次稀释前，对进样针和混匀池进行冲洗。

在本发明的第三方面，提供了一种胶体金平台清洗液的用途，所述清洗液用于清洗全自动胶体金免疫分析平台。

在本发明的第四方面，提供了一种胶体金试剂盒，所述的试剂盒中包括如第一方面任一所述的胶体金平台清洗液。

应理解，在本发明范围内，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入地研究，意外地发现了一种胶体金平台清洗液，所述清洗液价格低廉、不易残留、对全自动设备管道无影响、不影响测定。在此基础上，完成了本发明。

胶体金平台清洗液及其清洗方法

本发明提供了一种胶体金平台清洗液，所述清洗液包括：(1)0.25～2g/L碱金属氢氧化物；(2)0.25～30g/L非离子表面活性剂；(3)2～11g/L缓冲剂；(4)0.1～4g/L抑菌剂。

在优选的实施方案中，所述清洗液包括：(1)0.5～1.5g/L碱金属氢氧化物；(2)0.5～25g/L非离子表面活性剂；(3)3.75～10g/L缓冲剂；(4)0.2～2g/L抑菌剂。

其中，所述缓冲剂优选地选自下组：甘氨酸、碳酸钠，或其组合。

所述非离子表面活性剂优选地选自下组：脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO-9)、聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(Tween80)、聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween20)，或其组合。

优选地，所述非离子表面活性剂为：脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO-9)、或者脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO-9)与聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(Tween80)、或者脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO-9)与聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween20)。

所述碱金属氢氧化物没有特别的限制，优选地选自下组：氢氧化钠、氢氧化钾，或其组合。

所述抑菌剂没有特别的限制，优选地选自下组：叠氮钠、甲基异噻唑啉酮，或其组合。

所述的胶体金平台清洗液根据胶体金平台的实际需要进行了组分优化，相较于市售的通用清洗液，所述的胶体金平台清洗液可以有效避免胶体金平台测试中特有的携带污染，且不易导致相关设备的液路系统出现故障。

特别地，所述的清洗液对于胶体金一步法和两步法测试装置均适用。在一步法胶体金产品中，是将抗体标记的胶体金示踪物进行干燥，测试时只需要加入临床样本即可；而在二步法胶体金测试中，是将未将抗体标记的胶体金示踪物进行干燥，测试时，示踪物与样本先混匀再进行加样，在二步法胶体金测试中，其示踪物会与进样针直接接触并残留在进样针里。本发明的清洗液由于针对胶体金平台测试装置进行了优化，因此可以适用于上述两种测试装置的液路清洗。

所述的清洗液可以通过常规方法，例如厂商所推荐的方法对胶体金平台进行清洗。在本发明的一个优选实施方式中，所述的清洗方法包括步骤：在上样操作完成后，对进样针和混匀池中残留样本进行3～5次冲洗，每次冲洗时间为2～3秒，可有效去除样本残留；或者在进样针取样稀释一次后，第二次稀释前，对进样针和混匀池进行1～2次冲洗，去除高浓度的样本残留，确保高浓度样本在二次稀释模式下依然有较好的重复性。

本发明的优点包括：

(1)本发明的清洗液专用于胶体金类干式免疫分析仪的清洗，清洗效果好，且不影响胶体金试纸的检测准确性及精密度。

(2)本发明的清洗液能有效清除临床样本，如血清、血浆、全血等样本的残留，具有低残留和低交叉污染等优点。

(3)本发明的所述清洗液具有很好的稳定性，在本发明的优选实施例中，在经过18个月的保存后，清洗效果与新制清洗液基本相似，经过清洗液处理过的胶体金的污染率显著降低。

(4)本发明的清洗液适用性广，对一步法或两步法的胶体金产品普遍适用。

(5)本发明的清洗液选用特别的非离子活性剂，在保证清洗性能的同时，有较好的低起泡性，能降低设备的液路系统故障的风险。

以下结合具体实施例，进一步说明本发明。需理解，以下的描述仅为本发明的最优选实施方式，而不应当被认为是对于本发明保护范围的限制。在充分理解本发明的基础上，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件，本领域技术人员可以对本发明的技术方案作出非本质的改动，这样的改动应当被视为包括于本发明的保护范围之中的。

实施例1

用天平称取5g甘氨酸，2.5g AEO-9，10g Tween 80，1g氢氧化钠，1g叠氮化钠，用900mL的去离子水搅拌溶解，最后定容至1L，即得到1L稳定的碱性清洗液。

实施例2

用天平称取1.5g碳酸钠，7.5g甘氨酸，5g AEO-9，5g Tween 20，0.5g氢氧化钠，1g叠氮化钠，用900mL的去离子水搅拌溶解，最后定容至1L，即得到1L稳定的碱性清洗液。

实施例3

用天平称取2g碳酸钠，2g甘氨酸，10g AEO-9，1g氢氧化钠，1g甲基异噻唑啉酮，用900mL的去离子水搅拌溶解，最后定容至1L，即得到1L稳定的碱性清洗液。

实施例4

在i-Reader S干式免疫分析仪，分别使用下述溶液作为清洗液：

1)使用去离子水作为清洗液，测试配套的C反应蛋白胶体金试纸条，携带污染率>10％，不能达到有效清洗的目的。

2)使用市售某种血凝仪清洗液，测试配套的C反应蛋白胶体金试纸条，批间批内重复性，尤其是低值样本的重复性CV>15％，虽然能有效清洗样本残留，但对于胶体金测试产生明显的干扰。

3)使用市售的某全自动化学发光仪配套清洗液，携带污染率>0.1％，批内批间重复性CV<15％，作为清洗液的性能优于前两者；但泡沫较多，在样品混匀池里有明显的挂壁现象，对全自动液路的稳定性有一定风险；

4)使用本发明清洗液(实施例1～3)清洗实验装置，测试配套的CRP胶体金试纸条，携带污染率<10^-5，批间及批内重复性CV<15％，混匀池未见明显的清洗液挂壁现象，说明该清洗液不但清洗性能优于前三者，且对于液路系统的风险也是最小的。

实施例5

将配置好的清洗液分成三等份(实施例1～3)，分别置于4℃、室温、37℃保存1个月，外观、pH值、电导率均没有明显变化。用i-Reader S干式免疫分析仪测试配套CRP胶体金试纸条，携带污染率<10^-5，批间及批内重复性CV<15％，说明该清洗液在37℃加速处理条件下，至少可以稳定保存1个月。

实施例6

将配置好的清洗液分成两等份(实施例1～3)，分别处于开瓶敞口、密闭条件下室温保存2个月，外观、pH值、电导率均没有明显变化。用i-Reader S干式免疫分析仪测试配套CRP胶体金试纸条，携带污染率<10^-5，批间及批内重复性CV<15％，说明该清洗液在敞口条件下至少可以稳定保存2个月。

实施例7

将配置好的清洗液分成两等份(实施例1～3)，分别置于4℃、室温条件下保存18个月，外观、pH值、电导率均没有明显变化。用i-Reader S干式免疫分析仪测试配套CRP胶体金试纸条，携带污染率<10^-5，批间及批内重复性CV<15％，说明该清洗液在18个月内稳定。

实施例8

按实施例1～3配制清洗液，用i-Reader S干式免疫分析仪测试配套CRP胶体金试纸条，同时对二步法CRP胶体金试纸条进行测试，两者携带污染率均<10^-5，同一个样本在两种不同的测试方法下进行测试，并对结果进行T检验，P>0.5，两者无显著差异，说明即使进样针直接接触高浓度的胶体金示踪物，依然可以达到有效的清洗效果。

实施例9

按实施例1～3配制清洗液，用i-Reader S干式免疫分析仪测试配套CRP胶体金试纸条，对同样的血浆及全血样本进行测试，两者携带污染率均<10^-5，其批间批内重复性均<15％，对结果进行比对，相关性R>0.95，斜率在0.9～1.1之间。

实施例10

用天平称取5g甘氨酸，1g氢氧化钠，1g叠氮化钠，用900mL的去离子水搅拌溶解，最后定容至1L，得到1L稳定的碱性清洗液的母液。在母液基础上，分别添加AEO-9、L61、L64、LAS、SLES、TritonX-100、Tween20、Tween80一系列活性剂同时做比较，比例含量从0.05％～2％，在全自动i-Reader S干式免疫分析仪上测试CRP胶体金试纸条，考察低值样本的重复性，及携带污染率，结果显示：

1)发现LAS、SLES、L61、L64四种活性剂对样本的重复性造成比较大的影响，CV>15％；

2)同时发现使用Triton X-100的配方比较容易起泡，并伴有溶血现象；

3)添加0.5％～1％的Tween，对清洗性能进行测试，携带污染率伴随添加量的增高逐渐降低，携带污染率最低在10^-3～10^-4之间，样本重复性CV<15％；提高活性剂的添加量至2％并不能有效改善清洗效果，携带污染率仍维持在10^-3～10^-4之间，且样本重复性变差，CV上升至20％；

4)AEO-9具有低泡、高效清洗的优点，可降低设备因液路管道有气泡而故障的风险，添加0.5％～2％的AEO-9，可以达到携带污染率<10^-5的效果，且样本重复性CV<15％。

5)将AEO-9分别与Tween20、Tween80进行复配测试，分别添加0.02％～2％，做交叉分析，对携带污染率、样本重复性进行评估，发现m(AEO-9)和m(Tween)之比为：m(AEO-9)：m(Tween)＝1:0.5-4，且总活性剂含量≤2.5％时，携带污染率<10^-5，且样本重复性CV<15％。

当总活性剂含量超过2.5％时，样本重复性CV>20％；

当m(AEO-9)：m(Tween)<1:0.5时，携带污染率>10^-5；

当m(AEO-9)：m(Tween)>1:4时，会产生较多的泡沫且重复性CV>20％

实施例11

用天平称5g AEO-9，5g Tween 20，1g氢氧化钠，1g叠氮化钠，用900mL的去离子水搅拌溶解，最后定容至1L，得到1L稳定的碱性清洗液的母液。在母液基础上，分别添加0.2％的磷酸氢二钠缓冲液(Na₂HPO₄)、三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液(Tris)、碳酸盐缓冲液(Na₂CO₃)、硼砂缓冲液(Na₂B₄O₇)、甘氨酸缓冲液(Gly)在全自动i-Reader S干式免疫分析仪上测试CRP胶体金试纸条，考察低值样本的重复性

结果显示：

1)硼砂、磷酸盐缓冲液易于产生沉淀，对免疫测试产生较大的干扰。

2)三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液(Tris)会大幅度的降低免疫信号，同时造成样本重复性较差。

3)碳酸盐缓冲及甘氨酸缓冲液作为清洗剂的缓冲组分，不影响免疫测试，样本重复性CV<15％，且携带污染率<10^-5，说明碳酸盐和甘氨酸缓冲液是比较理想的缓冲体系。

实施例12

用天平称5g AEO-9，5g Tween 20，1g氢氧化钠，1g叠氮化钠，用900mL的去离子水搅拌溶解，最后定容至1L，得到1L稳定的碱性清洗液的母液。按0.2％～1％的比例添加甘氨酸缓冲组分或碳酸钠缓冲组分，将配制好的溶液分成五等份，分别置于4℃密封、室温密封、37℃密封、室温敞口、37℃敞口，从pH值、电导率两方面考察溶液稳定性。发现0.375％～1％(即3.75～10g/L)的比例的缓冲液在上述5种条件下可以稳定放置4周，认为该配制比例是比较合理的缓冲液添加比例。

实施例13

实施例12中配制的溶液在全自动i-Reader S干式免疫分析仪上测试CRP胶体金试纸条，考察低值样本的重复性，发现0.375％～1％(即3.75～10g/L)的比例的缓冲液在测试低值样本重复性CV<15％，携带污染率均<10^-5。

实施例14

用天平称5g AEO-9，5g Tween 20，1g氢氧化钠，1g叠氮化钠，用900mL的去离子水搅拌溶解，最后定容至1L，得到1L稳定的碱性清洗液的母液。按照0.5％总缓冲液添加量，测试m(Na₂CO₃)：m(Gly)＝9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、3:7、2:8、1:9。

在全自动i-Reader S干式免疫分析仪上测试CRP胶体金试纸条，考察低值样本的重复性，及携带污染率，结果发现m(Na₂CO₃)：m(Gly)＝5:5～1:9的比例下，低值样本重复性CV<15％；携带污染率<10^-5。

实施例15

用天平称10g AEO-9，1g氢氧化钠，1g叠氮化钠，用900mL的去离子水搅拌溶解，最后定容至1L，得到1L稳定的碱性清洗液的母液。按照0.375％总缓冲液添加量，测试m(Na₂CO₃)：m(Gly)＝9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、3:7、2:8、1:9。

在全自动i-Reader S干式免疫分析仪上测试CRP胶体金试纸条，考察低值样本的重复性，及携带污染率，结果发现m(Na₂CO₃)：m(Gly)＝5:5～1:9的比例下，低值样本重复性CV<15％；携带污染率<10^-5，该实施例结论与实施例14基本一致。

实施例16

用天平称10g AEO-9，1g氢氧化钠，1g叠氮化钠，用900mL的去离子水搅拌溶解，最后定容至1L，得到1L稳定的碱性清洗液的母液。按照0.75％总缓冲液添加量，测试m(Na₂CO₃)：m(Gly)＝9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、3:7、2:8、1:9。

在全自动i-Reader S干式免疫分析仪上测试CRP胶体金试纸条，考察低值样本的重复性，及携带污染率，结果发现m(Na₂CO₃)：m(Gly)＝5:5～1:9的比例下，低值样本重复性CV>15％；携带污染率<10^-5，显示复配缓冲液体系总添加量不应超过0.5％。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种胶体金平台清洗液，其特征在于，所述清洗液包括：

(1)0.25～2g/L碱金属氢氧化物；

(2)0.25～30g/L非离子表面活性剂；

(3)2～11g/L缓冲剂；

(4)0.1～4g/L抑菌剂；

所述非离子表面活性剂为脂肪醇聚氧乙烯醚AEO-9，所述脂肪醇聚氧乙烯醚AEO-9的添加量为0.5％～2％；或所述的非离子表面活性剂包括脂肪醇聚氧乙烯醚AEO-9，和聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(Tween80)或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween20)；且所述的脂肪醇聚氧乙烯醚AEO-9的用量m(AEO-9)和聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(Tween80)或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween20)的用量m(Tween)之比为：m(AEO-9)：m(Tween)＝1：0.5-4；当所述m(AEO-9)：m(Tween)＝1：0.5-4，复配活性剂的总体添加量不超过2.5％；

所述缓冲剂为甘氨酸与碳酸钠的组合；

所述缓冲剂为甘氨酸与碳酸钠的组合，所述缓冲剂在体系中的用量为0.375-0.5％；

所述缓冲剂为甘氨酸与碳酸钠的组合，且其中m(Na₂CO₃)：m(Gly)＝5:5～1:9。

2.如权利要求1所述的清洗液，其特征在于，所述碱金属氢氧化物选自下组：氢氧化钠、氢氧化钾，或其组合。

3.如权利要求1所述的清洗液，其特征在于，所述抑菌剂选自下组：叠氮钠、甲基异噻唑啉酮，或其组合。

4.一种如权利要求1所述的清洗液的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

5.一种胶体金平台清洗方法，其特征在于，所述方法包括步骤：在上样操作完成后，用如权利要求1所述的清洗液对进样针和混匀池中残留样本进行冲洗；

或所述方法包括步骤：在进样针取样稀释一次后，第二次稀释前，对进样针和混匀池用如权利要求1所述的清洗液进行冲洗。

6.一种如权利要求1所述的胶体金平台清洗液的用途，其特征在于，所述清洗液用于清洗全自动胶体金免疫分析平台。

7.一种胶体金试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包括如权利要求1-4任一所述的胶体金平台清洗液。