CN107254523A - 一种酿酒糯高粱常规种品种或种质纯度鉴定的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于分子生物学领域，涉及一种酿酒高粱常规种品种和种质纯度鉴定的方法，该方法依据基因组简单序列重复标记(SSR，Simple Sequence Repeats)的基本原理，根据数据库提供信息合成特异性标记引物，利用提取的高粱品种DNA扩增并筛选分子标记位点，最终获得“红缨子”等酿酒高粱品种基因组特异性条带。根据高粱品种特异性条带图谱取样分析并进行统计，可以鉴定酒厂原料的种质纯度。该方法操作简便、效果明显、可行性高。

Description

一种酿酒糯高粱常规种品种或种质纯度鉴定的方法

技术领域

本发明属分子生物学技术领域，具体涉及一种基因组分子标记技术鉴定酿酒高粱原料的应用研究，该发明涉及方法可用于不同酿酒高粱品种和种质纯度的鉴定。

背景技术

随着中国白酒酿造行业的深度调整，酿酒专用高粱发展迅速。近年来酱香酒高粱原料的需求量很大，其中贵州省的“红缨子”高粱推广面积最大。如何判断专用高粱种质的真伪是酒厂实际原料收购中需要面对的一个重要问题。以往酒厂的原料鉴定常常根据理化指标含量(如总淀粉、支链淀粉、单宁含量等)来判定种质真伪，这种鉴定方法具有工作量较大，耗时长，鉴定灵敏度不高等因素的局限。

高粱是二倍体作物，基因组共10对染色体。高粱基因组上均匀分布着一类短的串联重复序列，根据这些串联重复序列两侧保守位点设计引物进行PCR扩增并电泳分析或测序，可以进行种质鉴定或遗传多样性分析，这是简单序列重复标记(SSR，Simple SequenceRepeats)或微卫星(Microsatellite)标记的基本原理。通过分子标记技术构建不同酿酒高粱品种的DNA指纹图谱，可以发掘高粱品种基因组特异位点的多态性特征，为实际的原料品种来源的鉴定提供依据。目前高粱基因组已开发出大量的SSR分子标记(http://archive.gramene.org/cmap/)，利用这种分子标记技术可以有效地解决争议，判定高粱种质真伪。然而我国高粱常规种遗传基础比较狭窄，以红缨子为代表的高粱常规种部分基因组位点间相似性很高，大部分扩增出的SSR分子标记位点条带大小很相似，因此怎样筛选出鉴定品种所对应的特异性SSR标记，是本发明的一个重点，也是一个难点。目前，还没有关于酿酒高粱尤其是酱香酒用糯高粱种质分子标记技术鉴定方法的报道。综上所述，对于酿酒高粱种质的鉴定，亟待找到合适的SSR位点以及引物，鉴定尽可能多的高粱种质类别。

发明内容

本发明的目的在于提供一组高粱的SSR分子标记位点用于高粱品种或种质纯度的鉴定。

本发明的目的在于还提供一组引物，用于鉴定高粱品种或种质纯度。

本发明的目的还在于提供一种高效、灵敏、应用范围广的高粱品种和种质纯度的鉴定方法。

一方面，本发明提供了高粱的SSR分子标记位点txp36和txp287在鉴定高粱品种/种质纯度中的应用

另一方面，本发明提供了高粱SSR分子标记位点的引物组，其包含两对SSR引物：

1)txp36位点的引物，作为优选的实施方式，其由SEQ.ID NO.1所示的左引物和SEQ.ID NO.2所示的右引物组成；；

2)txp287位点的引物，作为优选的实施方式，其由SEQ.ID NO.3所示的左引物和SEQ.ID NO.4所示的右引物组成；。

另一方面，本发明还提供了上述位点以及引物组在高粱品种鉴定或者是种质纯度鉴定中的应用。

作为优选的实施方式，本发明的引物组或者应用，其中，待鉴定的高粱品种为酿酒高粱，其中主要为酿酒糯高粱；或者，作为优选的实施方式，鉴定的高粱品种为红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号、晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号、两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号中的一种或多种；更优选红缨子、黔高7号、辽杂37号；尤其优选的是红缨子，因为红缨子的推广面积在贵州最大，且为主要的专用酿酒品种，其鉴定具有重要的意义。

另一方面，本发明还提供了一种高粱品种或种质纯度的方法，其特征在于：包含以下步骤：

1)提取待鉴定高粱的DNA；

2)扩增txp36和txp287两个SSR分子标记位点；

3)根据txp36和txp287位点的扩增条带，鉴定高粱品种或种质纯度。

其中，步骤1)中，提取的DNA为高粱种子或植株叶片；种子和植株叶片中都有完整的高粱基因组。作为优选的实施方式，提取植株叶片中的DNA，因为种子中淀粉含量高，胚中DNA所占比例低。

其中，步骤2)中，可以在不同的PCR反应体系中，分别扩增txp36和txp287两个SSR分子标记位点；或者是在同一反应体系中，采用多重PCR同时扩增txp36和txp287两个SSR分子标记位点。作为优选的实施方式，步骤2)中，所述的用于扩增txp36分子标记位点的引物为：SEQ.ID NO.1所示的左引物和SEQ.ID NO.2所示的右引物；txp287分子标记位点的引物为：SEQ.ID NO.3所示的左引物和SEQ.ID NO.4所示的右引物。当然，除了这两对引物，其他能够扩增出待鉴定高粱txp36和txp287位点的引物也可以用于该方法。

作为优选的实施方式，该方法用于鉴定的高粱品种为酿酒高粱，其中主要为酿酒糯高粱；或者优选的高粱品种为红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号、晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号、两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号中的一种或几种；更优选地，所述的高粱为红缨子、黔高7号、辽杂37号；更为优选红缨子。

其中，红缨子高粱其txp36位点的特应性条带为190bp和195bp，其txp287位点的特应性条带为250bp；黔高7号在txp36位点扩增出条带只有190bp，在txp287位点特异条带为250bp和240bp；黔高8号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp；泸州红1号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和240bp；国窖红1号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和240bp；晋杂22号在txp36位点扩增出条带有190bp和195bp两条，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；晋杂23号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；晋杂35号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；晋杂103号在txp36位点扩增出条带有190bp和195bp两条，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；晋杂104号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；晋糯3号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；两糯1号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和240bp；辽粘3号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和280bp；辽杂15号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp；辽杂18号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和240bp；辽杂19号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp；辽杂37号在txp36位点扩增出条带只有195bp，在txp287位点特异条带为250bp和260bp。

上述各个品种的扩增条带同样证实了，现有的高粱的种质遗传是很窄的，基因位点相似性很大，很多品种的SSR分子标记位点条带大小很相似甚至是相同。本发明研究过程中，筛选了150多个SSR分子标记，除了txp36和txp287位点及其对应的引物，其余位点和引物在各个高粱品种间均没有好的特异性，不能有效地区分出红缨子。令人意外的是，其中，采用了txp36和txp287两个分子标记位点，可以特异性地区分红缨子、黔高7号、辽杂37号；尤其是可以区分红缨子，红缨子高粱在贵州推广面积最大，解决了酒厂原料收购中判断专用高粱种质的真伪问题。

需要说明的是，进行高粱种质纯度鉴定时，需要随机抽取不同高粱品种籽粒，以单个种子为单位催芽提取DNA，将不同的种子的指纹图谱比对，判定是否有其他高粱材料混杂，达到鉴定种质纯度的目的。

此外，由于“红缨子”高粱的txp36标记对应条带为“显性”(190bp条带只有少数几个品种具有)，而txp287标记对应条带为“隐性”(250bp条带所有品种都有)，因此在对混合品种进行鉴定时应分单株或种子提取DNA。

另一方面，为了确保“红缨子”等高粱原料的种质纯度，本发明还提供了一种针对高粱基因组特异性条带开发的方法。该方法操作简便、效果明显，实际生产中，可根据基因组特异性条带图谱直接判定高粱种质的来源。

具体是通过以下技术方案得以实现的：

步骤1，根据Gramene数据库(http://archive.gramene.org/cmap/)上已公布高粱SSR分子标记信息合成引物，要求在高粱的10条染色体上随机均匀选择引物进行合成；

步骤2，收集全国主要的酿酒高粱品种，分别提取高粱品种材料基因组DNA；

步骤3，品种特异性引物的筛选，用合成好的引物对不同高粱品种的基因组DNA进行PCR(Polymerase Chain Reaction)扩增并电泳分析，统计条带最终筛选出可用于酿酒高粱品种鉴定的特异性SSR分子标记。

本发明旨在开发酿酒专用高粱“红缨子”等品种的基因组特异性条带图谱，用于实际的高粱品种和种质纯度鉴定。用分子生物学的技术鉴定原料种质结果稳定可靠，丰富了酿酒用高粱原料的鉴定手段。本发明开发出的高粱品种和种质纯度鉴定可用于酒厂实际的原料采购环节，与现推行的鉴定技术相比，具有以下优点：

(1)本发明筛选得到的两个SSR标记位点txp36和txp287可以鉴定多个高粱品种或种质纯度，尤其是主要的酿酒专用品种“红缨子”；

(2)本发明的引物组扩增的两个分子标记多态好，引物扩增稳定，扩增结果清晰，重复性好，可用于大规模检测酿酒高粱的品种和种质纯度。且仅需检测两个位点，就可以区分出“红缨子”等十多个高粱品种，操作简便，鉴定范围广；

(3)SSR分子标记结果稳定可靠，可重复性好，针对原料的鉴定可在种子或活体植株上应用；该类型分子标记是对原料的基因组进行检测分析，受外界干扰小；

(4)本发明同时对17种全国主要的酿酒高粱品种基因组条带大小进行比对，筛选出的“红缨子”基因组特异性条带图谱特异性较强；

(5)本发明涉及方法的灵敏度很高，当对混合品种进行鉴定时，即使有少量的混杂品种也可以进行结果判定。

附图说明

图1为分子标记引物txp287扩增的SSR条带图谱；

其中M为分子量标准物Marker，1-5号高粱品种分别对应红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号；6号、7号和14号为高粱对照材料1、2、3；8-13号高粱品种分别对应晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号，15-20号高粱品种分别对应两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号。(对照1为一个粳高粱材料(品系)，对照2为一个糯高粱材料(品系)，对照3为红缨子高粱的一个亲本材料)。

图2为分子标记引物txp36扩增的SSR条带图谱；

其中M为分子量标准物Marker，1-5号高粱品种分别对应红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号；6号、7号和20号为对照1、2、3；8-19号高粱品种分别对应晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号、两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号(注：对照1为一个粳高粱材料(品系)，对照2为一个糯高粱材料(品系)，对照3为红缨子高粱的一个亲本材料)。

图3为分子标记引物txp17扩增的SSR条带图谱；

注：图3-图12中M为分子量标准物Marker，1-5号高粱品种分别对应红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号；6号、7号和14号为高粱对照材料1、2、3；8-13号高粱品种分别对应晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号，15-20号高粱品种分别对应两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号(对照1为一个粳高粱材料(品系)，对照2为一个糯高粱材料(品系)，对照3为红缨子高粱的一个亲本材料)。

图4为分子标记引物txp18扩增的SSR条带图谱；

图5为分子标记引物txp57扩增的SSR条带图谱；

图6为分子标记引物txp120扩增的SSR条带图谱；

图7为分子标记引物txp304扩增的SSR条带图谱；

图8为分子标记引物cup36扩增的SSR条带图谱；

图9为分子标记引物msbcir246扩增的SSR条带图谱；

图10为分子标记引物txp21扩增的SSR条带图谱；

图11为分子标记引物txp51扩增的SSR条带图谱；

图12为分子标记引物txp177扩增的SSR条带图谱；

图13为实施例2中不同高粱混合样品的引物txp287扩增的SSR条带图谱；图14为实施例3中不同高粱混合样品的引物txp36扩增的SSR条带图谱；

图15不同高粱品种txp287和txp36基因组分子标记指纹图谱；

其中1号-17号高粱品种分别对应红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号、晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号、两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号、辽杂37号，18-20号为对照1(粳高粱材料)、对照2(糯高粱材料)、对照3(红缨子的亲本系)材料。

具体实施方式

以下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案，具体实施例不代表对本发明保护范围的限制。其他人根据本发明理念所做出的一些非本质的修改和调整仍属于本发明的保护范围。

本发明中，高粱品种为“红缨子”(贵州省农作物品种审定委员会审定)，其余高粱品种为现全国主要推广的其他酿酒高粱品种，具体为黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号、晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号、两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号和辽杂37号。

实施例1SSR分子标记位点和引物的筛选

实验步骤：

步骤1，根据Gramene数据库(http://archive.gramene.org/cmap/)上已公布高粱SSR分子标记信息合成引物，要求在高粱的10条染色体上随机均匀选择SSR位点和引物进行合成，合成的引物见表1；

步骤2，收集全国主要的酿酒高粱品种，分别提取高粱品种基因组DNA；

步骤3，品种特异性引物的筛选，用合成好的引物(表1)对不同高粱品种的基因组DNA进行PCR(Polymerase Chain Reaction)扩增并电泳分析，统计条带最终筛选出可用于酿酒高粱品种鉴定的特异性SSR分子标记；

其中，高粱基因组DNA的提取具体为：

分别提取红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号、晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号、两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号共17份高粱(种子)的DNA，同时提取另外三个高粱材料的DNA作对照(对照1为一个粳高粱材料(品系)，对照2为一个糯高粱材料(品系)，对照3为红缨子高粱一个亲本材料)；

分别取几粒高粱种子种于小营养钵中催芽，取植株幼嫩叶片0.5-1.0克放入研钵，加入液氮后迅速研磨成粉末；把粉末转入2mL带盖离心管中，然后加入600μL预热的CTAB缓冲液(现用现配)，并摇匀；65℃水浴加热40分钟，每10分钟取出摇匀一次；水浴完后，取出离心管，冷却至室温；在通风橱下小心加入400μL氯仿/异戊醇(24:1)，混匀，8000r/min离心10分钟，取上清液转入新的2mL带盖离心管中，重复此步骤；打开离心管，加入1.5mL在-20℃的预冷的异丙醇，上下轻摇几下，常温或4℃条件下静置一段时间后，直到DNA凝集，12000r/min离心10分钟，弃上清，用1.5mL的70％无水乙醇洗涤两次，重复离心倒掉上清；40℃恒温干燥，加0.5-1.0mL 1×TE(pH8.0)，将DNA溶解，用紫外分光光度仪检测DNA浓度及纯度，-20℃下保存备用。

2)PCR反应在ABI Veriti PCR仪上进行：94℃预热5分钟，65-55℃降落PCR 30个循环，最后72℃延伸10分钟，再4℃保存。反应体系为25μL，包括10×的PCR buffer 2.5μL，dNTP(2.5μmol each)0.4μL，左右引物各1μL，Taq酶(5U/μL)0.2μL，DNA模板5μL，ddH2O 14.9μL。

3)PCR产物用9％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，银染显色。用具有序列多态性的分子标记进行群体分析，筛选出“红缨子”等17种高粱对应的特异性分子标记，统计条带，绘制DNA指纹图谱。

本发明涉及分子标记数量较多，所有用于筛选的分子标记位点和引物信息如下表1所示。

表1 SSR分子标记引物信息

实验结果：多数分子标记扩增出的DNA条带多态性很低(如图5、图8、图9等所示)，为了避免篇幅冗余，在结果中选择了12个具有代表性的标记扩增电泳图进行展示(图1-图12)。由图可知大部分SSR分子标记引物扩增出的多态性条带有2-6条，其中红缨子高粱品种与黔高7号、黔高8号和国窖红1号等糯高粱在部分基因组位点具有一定的相似性；单个分子标记只能对糯高粱与粳高粱两个大类种质进行区分。而只有对txp36和txp287两对分子标记图谱进行组合，才能有效鉴定出具体的高粱品种。

因此，最终筛选出的位于7号染色体(SBI-07)上分子标记txp36扩增结果如下：在红缨子、晋杂22号和晋杂103号共三个高粱品种基因组同时扩增出195bp和190bp两条条带，在黔高7号品种基因组上只扩增出190bp条带，其余13个高粱品种基因组只扩增出195bp条带(图2)。

以及筛选出的位于9号染色体(SBI-09)上分子标记txp287扩增结果如下：在红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号、两糯1号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号共十个高粱品种基因组上只扩增出250bp条带，而其余7个高粱品种能够同时扩增出250bp和280bp两条条带。以“红缨子”高粱品种为例，其基因组对应的两个分子标记位点(txp36和txp287)特异性条带图谱组成为250bp、195bp和190bp三条条带(图1)。

最终，采用txp36和txp287两对分子标记位点检测获得的17种高粱的基因组标记指纹图谱如图15所示。其中：

txp36分子标记位点的扩增引物对为：

SEQ.ID NO.1

左引物F序列(5'-3')：ATGGGACGGAAATGCAGGAG

SEQ.ID NO.2

右引物R序列(5'-3')：TTATGCCTGCCAGCAACTTG

txp287分子标记位点的扩增引物对为：

SEQ.ID NO.3

左引物F序列(5'-3')：GCAAGCGAGCTGACTTATGTAACGAGA

SEQ.ID NO.4

右引物R序列(5'-3')：CAAAGTGCTACTAAACCTATGCAGGGTGAA

对于本发明而言，仅进行txp36或txp287分子标记位点检测是难以有效区分高粱品种的，需同时采用txp36和txp287两对分子标记图谱进行品种或种质纯度鉴定。因为不同品种同一个分子标记位点会出现相同的条带，且用一个分子标记位点的条带去区分多个高粱品种是不现实和不可靠的。中国目前推广种植的高粱常规种遗传基础比较狭窄，基因组相似性大，难以区分。本发明仅通过两个分子标记位点，就可以明显区分多个高粱品种，尤其是酿酒应用价值高的红缨子高粱，具有简便、灵敏度高、应用范围广的优势。

实施例2不同高粱混合样品中的品种/种质纯度鉴定

为了说明单个分子标记在两个高粱混合样品中的扩增情况，发明人为将不同高粱品种两两混合后催芽，再提取DNA，用标记txp287扩增并凝胶电泳分析，结果如图13所示。

表2

编号1-5号为两个高粱品种按1:1比例进行混合，编号6-14号为两个高粱品种按4:1比例进行混合。

以红缨子高粱为例，含有红缨子高粱品种的6、7号混合样品结果表明即使有少量成分存在，也能扩增出明显的差异性条带。其中红缨子和辽杂37号在txp287标记位点只能扩增出250bp大小条带，而对照1可同时扩增出250bp和280bp大小条带；6号与7号的对比结果表明，即使有少量(20％左右)的混合品种，该方法也能够清晰扩增出目标品种的特异性条带。

实施例3不同高粱混合样品中的品种/种质纯度鉴定

为了说明单个分子标记在不同高粱混合样品中的扩增情况，发明人为将不同高粱品种两两混合或三三混合后催芽，再提取DNA，用标记txp36扩增并凝胶电泳分析，结果如图14所示。

表3

编号1-4号为两个高粱品种按1:1比例进行混合，编号5-10号为三个高粱品种按1:1:1比例进行混合。

图14中编号1、3两个混合样品只扩增出了195bp条带，编号2中190bp条带为晋杂22标记结果，编号4中190bp条带为晋杂103号扩增结果，编号5中红缨子和晋杂22号都能够同时扩增出190bp和195bp条带。编号6中190bp和195bp条带为对照3标记结果；编号7中190bp条带为黔高7号标记结果，而195bp条带为晋杂35号和辽杂18号标记结果。编号8中190bp条带为晋杂103号标记结果，而195bp条带为黔高8号和辽杂19号标记结果。三个高粱品种1:1:1混合结果表明不同品种基因组间对鉴定结果没有相互干扰，都可同时扩增出目标条带。

由于中国酿酒高粱整体的遗传多样性水平较低，而以红缨子为代表的高粱常规种部分基因组位点间相似性很高，因此在对混合样品进行鉴定时建议以单株为单位提取样品的DNA，再对照本方法描述绘制DNA指纹图谱，最终可达到鉴定原料品种和种质纯度的目的。

SEQUENCE LISTING

<110> 贵州茅台酒股份有限公司

<120> 一种酿酒糯高粱常规种品种或种质纯度鉴定的方法

<130> PT20170925-DD-P

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atgggacgga aatgcaggag 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ttatgcctgc cagcaacttg 20

<210> 3

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

gcaagcgagc tgacttatgt aacgaga 27

<210> 4

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

caaagtgcta ctaaacctat gcagggtgaa 30

Claims (10)

1.高粱的SSR分子标记位点txp36和txp287在鉴定高粱品种/种质纯度中的应用。

2.高粱SSR分子标记位点的引物组，其特征在于，包含两对SSR引物：

1)txp36位点的引物；

2)txp287位点的引物；

优选地，txp36位点的引物由SEQ.ID NO.1所示的左引物和SEQ.ID NO.2所示的右引物组成；txp287位点的引物由SEQ.ID NO.3所示的左引物和SEQ.ID NO.4所示的右引物组成。

3.权利要求2所述的引物组在高粱品种/种质纯度鉴定中的应用。

4.根据权利要求1、2或3所述的应用/引物组，其特征在于，所述的高粱为酿酒高粱；

或者优选地，所述的高粱为红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号、晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号、两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号中的一种或几种；更优选地，所述的高粱为红缨子、黔高7号、辽杂37号。

5.根据权利要求1、2或3所述的应用/引物组，其特征在于，所述的高粱为红缨子。

6.一种鉴定高粱品种/种质纯度的方法，其特征在于，包含以下步骤：

1)提取待鉴定高粱的DNA；

2)扩增txp36和txp287两个SSR分子标记位点；

3)根据txp36和txp287位点的扩增条带，鉴定高粱品种或种质纯度。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤1)中，提取的DNA为高粱种子或植株叶片。

8.根据权权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)中，采用PCR可以分别扩增txp36和txp287两个SSR分子标记位点；或者是采用多重PCR同时扩增txp36和txp287两个SSR分子标记位点；

优选地，txp36位点的扩增引物由SEQ.ID NO.1所示的左引物和SEQ.ID NO.2所示的右引物组成；txp287位点的扩增引物由SEQ.ID NO.3所示的左引物和SEQ.ID NO.4所示的右引物组成。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的高粱为酿酒高粱；

或者优选地，所述的高粱为红缨子、黔高7号、黔高8号、泸州红1号、国窖红1号、晋杂22号、晋杂23号、晋杂35号、晋杂103号、晋杂104号、晋糯3号、两糯1号、辽粘3号、辽杂15号、辽杂18号、辽杂19号和辽杂37号中的一种或几种；更优选地，所述的高粱为红缨子、黔高7号、辽杂37号；更优选红缨子。

10.根据权利6所述方法，其特征在于，所述的高粱为红缨子，其txp36位点的特应性条带为190bp和195bp，其txp287位点的特应性条带为250bp；

优选地，所述的高粱为黔高7号，其在txp36位点扩增出条带为190bp，在txp287位点特异条带为250bp和240bp；

优选地，所述的高粱为辽杂37号，其在txp36位点扩增出条带为195bp，在txp287位点特异条带为250bp和260bp。