CN107163149B - 一种莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种莲子淀粉‑蛋白复合物的制备方法，包括以下步骤：将莲子淀粉溶于酸性溶液中，加入淀粉酶进行酶解反应24～48h，接着调节体系为碱性，然后离心去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，干燥并粉碎得到莲子多孔淀粉；将磷脂与莲子多孔淀粉混合后后用微波‑超声波联合处理16～20min，得粗制的莲子多孔淀粉‑磷脂复合物；将蛋白、粗制的莲子多孔淀粉‑磷脂复合物及水混合后进行超高压处理，然后离心去除上清液得湿态的莲子淀粉‑蛋白复合物，接着将湿态的莲子淀粉‑蛋白复合物干燥至恒重后粉碎、过筛，得到终产品。本发明能制备出复合指数高的莲子淀粉‑茶多酚复合物。
Description
技术领域
本发明涉及改性蛋白加工技术领域，特别涉及一种莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法。
背景技术
淀粉和蛋白质是两类重要的天然高分子聚合物，具有廉价易得、可降解和良好的生物相容性等特性。长期以来世界各国都十分重视淀粉和蛋白质资源的开发利用，尤其是二者的改性修饰一直是研究热点。在两者共存，一些物理化学条件适宜时，则发生共聚改性现象，即大分子上的部分基团可以互相连接复合，从而改善和赋予体系一些独特的功能性质、加工特性和及品质特性，最终扩大其在食品工业和其他工业中的应用，如可用作可食用膜、可用于开发低脂肪食品、药物缓释体系等。
目前，淀粉-蛋白复合物的制备，主要有如下4种方法：
(1)干法反应通过控制自发美拉德反应来实现，将淀粉与蛋白粉以一定质量比混合后用去离子水溶解后冷冻干燥，冻干样品置于底部装有饱和KBr溶液，湿度为79％的反应器中，于60℃下反应数小时至几周；
(2)湿法反应淀粉与蛋白质的水溶液在一定条件下进行反应，蛋白质和淀粉按一定质量比混合，缓冲溶液稀释后置于密封离心管水浴加热接枝；
(3)电合成带有两根不锈钢电极的电池槽中装满质量分数淀粉和蛋白水溶液，通电后不时取下复合物凝胶，干燥即得复合物；
(4)挤压法淀粉与蛋白质按一定比例混合后采用螺杆机压机处理，并选择合适的挤压温度、水分含量、螺杆转速等相关技术参数。
但是上述方法由于仅凭自发的美拉德反应，淀粉与蛋白不能充分复合，并且一般的制备法淀粉表面可与蛋白复合的颗粒成分(蛋白和脂质)较少，再加之条件要求严格，导致所制得的淀粉-蛋白复合物的复合率低，不便于用于复合物后期的使用与加工。
发明内容
本发明的目的在于克服了上述缺陷，提供一种莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，该方法制备出的莲子淀粉-蛋白复合物的复合率高。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
本发明提供了一种莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：将莲子淀粉溶于酸性溶液中，加入淀粉酶进行酶解反应24～48h，接着调节体系为碱性，然后离心去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，干燥并粉碎得到莲子多孔淀粉；
步骤2：将磷脂与步骤1的莲子多孔淀粉混合后后用微波-超声波联合处理16～20min，得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物；
步骤3：将蛋白、步骤2所得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物及水混合后进行超高压处理，然后离心去除上清液得湿态的莲子淀粉-蛋白复合物，接着将湿态的莲子淀粉-蛋白复合物干燥至恒重后粉碎、过筛，得到终产品。
本发明还提供了一种莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：将莲子淀粉溶于pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，于53～57℃条件下加热8～12min后加入α-淀粉酶与葡萄糖淀粉酶的复合酶，保温反应24～48h，接着利用1mol/L的氢氧化钠溶液调节体系为碱性，然后于5000r/min的转速下离心15min去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，将离心所得物于48～52℃常压条件下干燥至恒重然后粉碎、过筛得到莲子多孔淀粉，其中莲子淀粉与pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的料液比为1∶1.5～2.5，料液比的单位为g/mL，所述1mol/L的氢氧化钠溶液与pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的体积比为1∶10；
步骤2：将磷脂与步骤1的莲子多孔淀粉混合后后用微波-超声波联合处理16～20min，得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，用无水乙醇洗涤粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，然后冷冻干燥至恒重，得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，其中，所述莲子多孔淀粉与磷脂的质量比为1∶5～7，微波-超声波联合处理的条件包括微波功率为150～160W，超声波功率为350～400W，温度为70～90℃；
步骤3：将莲子蛋白与步骤2所得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物分别溶解于蒸馏水后再混合得混合液，向混合液中添加pH为4.7的磷酸盐缓冲溶液，接着将添加有pH为4.7的磷酸盐缓冲溶液的混合液进行间歇式超高压处理20～30min，再进行洗涤，然后离心去除上清液得湿态的莲子淀粉-蛋白复合物，接着将湿态的莲子淀粉-蛋白复合物于48～52℃常压条件下干燥至恒重后粉碎、过筛，得到终产品，其中，所述莲子多孔淀粉-磷脂复合物与莲子蛋白的混合的质量比为1∶5～7，所述间歇式超高压处理的条件包括压力为200～250MPa，温度为60～80℃，每运行5min停歇30s。
本发明的有益效果在于：(1)利用淀粉酶将普通莲子淀粉制备成莲子多孔淀粉来增大淀粉的表面积，利用微波-超声波联合处理辅助多孔淀粉吸附磷脂以增加淀粉表面的脂质成分，并利用非热力技术超高压提高蛋白质的表面疏水作用，大大增加淀粉与蛋白的复合指数，制备出高复合率的莲子淀粉-蛋白复合物；(2)本发明的制备方法未采用高温操作，可以有效保持淀粉与蛋白的结构，制备出的莲子淀粉-蛋白复合物的性能更佳，方便后续的使用与加工。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合实施方式详予说明。
本发明最关键的构思在于：通过将酶法制备的莲子多孔淀粉置于微波-超声波条件下来吸附磷脂以增大淀粉对蛋白质的吸附量，并利用超高压作用使淀粉与蛋白相互作用，进而制得复合率高的莲子淀粉-蛋白复合物。
一种莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：将莲子淀粉溶于酸性溶液中，加入淀粉酶进行酶解反应24～48h，接着调节体系为碱性，然后离心去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，干燥并粉碎得到莲子多孔淀粉；
步骤2：将磷脂与步骤1的莲子多孔淀粉混合后后用微波-超声波联合处理16～20min，得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物；
步骤3：将蛋白、步骤2所得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物及水混合后进行超高压处理，然后离心去除上清液得湿态的莲子淀粉-蛋白复合物，接着将湿态的莲子淀粉-蛋白复合物干燥至恒重后粉碎、过筛，得到终产品。
本发明的工作原理及过程为：由于经申请人研究发现脂质有利于淀粉颗粒表面吸附更多的蛋白质，而极性的磷脂相比中性的糖脂、甘油三酸脂能吸附更多的蛋白质，故而，将莲子淀粉通过一定条件酶解制备成多孔淀粉，利用多孔淀粉表面积更大的优点来增加淀粉表面的脂质含量，进而增加淀粉对蛋白的吸附。微波-超声波联合处理辅助多孔淀粉吸附磷脂，使得纯磷脂通过渗透、扩散作用进入到多孔淀粉内部，增加淀粉表面的脂质成分，以利于淀粉表面吸附更多的蛋白质。超高压作为非热力技术在不破坏小分子物质的前提之下对蛋白质结构和性质产生影响，极大地提高蛋白质的表面疏水作用，结合淀粉得到高复合指数(高复合率)的复合物。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：(1)利用淀粉酶将普通莲子淀粉制备成莲子多孔淀粉来增大淀粉的表面积，利用微波-超声波联合处理辅助多孔淀粉吸附磷脂以增加淀粉表面的脂质成分，并利用非热力技术超高压提高蛋白质的表面疏水作用，大大增加淀粉与蛋白的复合指数，制备出高复合率的莲子淀粉-蛋白复合物；(2)本发明的制备方法未采用高温操作，可以有效保持淀粉与蛋白的结构，制备出的莲子淀粉-蛋白复合物的性能更佳，方便后续的使用与加工。
进一步的，所述步骤1的酸性溶液为pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，所述淀粉酶为α-淀粉酶与葡萄糖淀粉酶的复合酶，其中复合酶中α-淀粉酶的酶活为10 000U·g-1，葡萄糖淀粉酶的酶活为3 700U·g-1。
由上述描述可知，选择pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液作为酶解条件可以减小pH值的波动对酶解反应的影响，选择α-淀粉酶与葡萄糖淀粉酶的复合酶使得莲子淀粉被酶解得更充分。
进一步的，所述步骤1的具体操作为：将莲子淀粉溶于pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，于53～57℃条件下加热8～12min后加入中温α-淀粉酶(10 000U·g-1)与葡萄糖淀粉酶(3 700U·g-1)的复合酶，保温反应24～48h，接着利用1mol/L的氢氧化钠溶液调节体系为碱性，然后离心去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，干燥至恒重然后粉碎、过筛得到莲子多孔淀粉，其中莲子淀粉与pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的料液比为1∶1.5～2.5，料液比的单位为g/mL。
由上述描述可知，上述条件有助于酶解更充分且提高酶解效率，同时利用强碱溶液——氢氧化钠溶液调节体系pH以终止酶解反应，使用方便。
进一步的，步骤2中，微波-超声波联合处理的条件包括：微波功率为150～160W，超声波功率为350～400W，温度为70～90℃。
由上述描述可知，将微波-超声波间歇处理的条件控制在上述范围有利于莲子多孔淀粉吸附更多磷脂且增加吸附的牢固性，进而便于后期吸附更多蛋白，进一步提高莲子淀粉-蛋白复合物的复合率。
进一步的，在步骤2与步骤3之间还包括利用无水乙醇洗涤粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，然后冷冻干燥至恒重，得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物。
由上述描述可知，利用游离磷脂与莲子多孔-磷脂复合物在无水乙醇的溶解度的不同，将未游离磷脂洗去，避免游离磷脂直接与蛋白复合，以提高莲子淀粉-蛋白复合物的纯度。
进一步的，步骤3中，所述超高压处理为间歇式超高压处理，所述间歇式超高压处理的条件包括：压力为200～250MPa，温度为60～80℃，处理时间为20～30min，每运行5min停歇30s。
其中，处理时间为每次运行时间之和。
由上述描述可知，采用间歇式超高压处理及控制其处理条件在上述范围不仅可以提高蛋白的表面疏水作用增加后续复合率，还能起到杀菌效果。
进一步的，步骤3中，所述蛋白为莲子蛋白，所述莲子多孔淀粉-磷脂复合物与莲子蛋白的混合的质量比为1∶5～7。
由上述描述可知，采用莲子蛋白作为复合物的蛋白质，进一步提高莲子淀粉-蛋白复合物的复合率。
进一步的，步骤1及步骤3的干燥为于48～52℃常压条件下进行干燥。
由上述描述可知，于48～52℃常压条件下进行干燥避免温度太高破坏淀粉及复合物的结构以保持复合物的性能的稳定性。
本发明还提供一种莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：将莲子淀粉溶于pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，于53～57℃条件下加热8～12min后加入中温α-淀粉酶(10 000U·g-1)与葡萄糖淀粉酶(3 700U·g-1)的复合酶，保温反应24～48h，接着利用1mol/L的氢氧化钠溶液调节体系为碱性，然后于5000r/min的转速下离心15min去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，将离心所得物于48～52℃常压条件下干燥至恒重然后粉碎、过筛得到莲子多孔淀粉，其中莲子淀粉与pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的料液比为1∶1.5～2.5，料液比的单位为g/mL，所述1mol/L的氢氧化钠溶液与pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的体积比为1∶10；
步骤2：将磷脂与步骤1的莲子多孔淀粉混合后后用微波-超声波联合处理16～20min，得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，用无水乙醇洗涤粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，然后冷冻干燥至恒重，得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，其中，所述莲子多孔淀粉与磷脂的质量比为1∶5～7，微波-超声波联合处理的条件包括微波功率为150～160W，超声波功率为350～400W，温度为70～90℃；
步骤3：将莲子蛋白与步骤2所得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物分别溶解于蒸馏水后再混合得混合液，向混合液中添加pH为4.7的磷酸盐缓冲溶液，接着将添加有pH为4.7的磷酸盐缓冲溶液的混合液进行间歇式超高压处理20～30min，再进行洗涤，然后离心去除上清液得湿态的莲子淀粉-蛋白复合物，接着将湿态的莲子淀粉-蛋白复合物于48～52℃常压条件下干燥至恒重后粉碎、过筛，得到终产品，其中，所述莲子多孔淀粉-磷脂复合物与莲子蛋白的混合的质量比为1∶5～7，所述间歇式超高压处理的条件包括压力为200～250MPa，温度为60～80℃，每运行5min停歇30s。
本发明的工作原理及过程为：由于经申请人研究发现脂质有利于淀粉颗粒表面吸附更多的蛋白质，而极性的磷脂相比中性的糖脂、甘油三酸脂能吸附更多的蛋白质，故而，将莲子淀粉通过一定条件酶解制备成多孔淀粉，利用多孔淀粉表面积更大的优点来增加淀粉表面的脂质含量，进而增加淀粉对蛋白的吸附。微波-超声波联合处理辅助多孔淀粉吸附磷脂，使得纯磷脂通过渗透、扩散作用进入到多孔淀粉内部，增加淀粉表面的脂质成分，以利于淀粉表面吸附更多的蛋白质。超高压作为非热力技术在不破坏小分子物质的前提之下对蛋白质结构和性质产生影响，极大地提高蛋白质的表面疏水作用，结合淀粉得到高复合指数(高复合率)的复合物。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：(1)利用淀粉酶将普通莲子淀粉制备成莲子多孔淀粉来增大淀粉的表面积，利用微波-超声波联合处理辅助多孔淀粉吸附磷脂以增加淀粉表面的脂质成分，并利用非热力技术超高压提高蛋白质的表面疏水作用，大大增加淀粉与蛋白的复合指数，制备出高复合率的莲子淀粉-蛋白复合物；(2)本发明的制备方法未采用高温操作，可以有效保持淀粉与蛋白的结构，制备出的莲子淀粉-蛋白复合物的性能更佳，方便后续的使用与加工。
实施例1
1材料与方法
1.1材料
莲子蛋白、莲子淀粉、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、中温α-淀粉酶(10 000U·g-1)与葡萄糖淀粉酶(3 700U·g-1)、l mol/L氢氧化钠、磷脂、无水乙醇、pH为4.7的磷酸盐缓冲溶液
1.2主要仪器
DK-S24型电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；
TU-1901紫外-可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；
5L-HPP-600MPa型超高压处理装置，包头科发高压科技有限责任公司；
SL-SM型微波超声波联合反应系统，南京顺流仪器制造有限公司；
TG16-WS型离心机，常州市金坛高科仪器厂；
BAS224S型电子分析天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司。
1.3试验方法
1.3.1一种莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：称取25g莲子淀粉于于250mL三角瓶中，加入50mL pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，配制成淀粉乳悬液，于55℃条件下加热10min后加入中温α-淀粉酶(10000U·g-1)与葡萄糖淀粉酶(3 700U·g-1)的复合酶，保温反应24h，接着加入1mol/L的氢氧化钠溶液5mL以终止反应，然后于5000r/min的转速下离心15min去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，将离心所得物于50℃常压条件下干燥至恒重然后粉碎、过筛得到莲子多孔淀粉；
步骤2：将磷脂与步骤1的莲子多孔淀粉按5∶1的质量比混合后后用微波-超声波联合处理(微波-超声波联合处理的微波功率为150W，超声波功率为350W，温度为70℃)16min，得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，用无水乙醇洗涤粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，然后冷冻干燥至恒重，得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物；
步骤3：将莲子蛋白与步骤2所得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物分别溶解于蒸馏水后再混合得混合液，向混合液中添加pH为4.7的磷酸盐缓冲溶液进行稀释，置于聚丙烯真空袋中用真空包装机封口，充分摇匀后放入进行间歇式超高压处理(间歇式超高压处理的压力为200MPa，温度为60℃，每运行5min停歇30s)20min，再进行洗涤，然后离心去除上清液得湿态的莲子淀粉-蛋白复合物，接着将湿态的莲子淀粉-蛋白复合物于50℃常压条件下干燥至恒重后粉碎、过筛，得到终产品，其中，所述莲子多孔淀粉-磷脂复合物与莲子蛋白的混合的质量比为1∶5。
1.3.2产品复合指数(复合率)的测定
通过测定离心后上清液中的莲子蛋白的量。用初始莲子蛋白的量与上清液中的莲子蛋白量的差值可计算出聚合物的复合率。上清液中莲子蛋白的浓度测定：
将超高压处理后的溶液离心得上清液，取1mL上清液用蒸馏水定容至100mL，以标准蛋白溶液做校正标准定量蛋白质，用分光光度计测278nm处吸收。
根据下式计算莲子淀粉-蛋白复合物的复合指数：
CI＝(M initial-M supernatant)/M initial×100；
式中:CI为莲子淀粉-蛋白复合物的复合指数；M initial为初始莲子蛋白的质量；M supernatant为上清液中莲子蛋白的质量。
其中蛋白质含量M(mg)＝A×V×d/SLOPEstd×103；
式中A为样品测试吸光度；V为样品提取体积；d为稀释因子，通常为1mL稀释成100mL，即稀释因子为100；SLOPEstd为蛋白溶液标准曲线的斜率。
所测结果均重复测定三次，取均值，产品复合指数的测定结果见表1。
实施例2
其他同实施例1，不同之处在于莲子淀粉-蛋白复合物的制备，具体如下：
步骤1：称取25g莲子淀粉于于250mL三角瓶中，加入50mL pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，配制成淀粉乳悬液，于55℃条件下加热10min后加入中温α-淀粉酶(10000U·g-1)与葡萄糖淀粉酶(3 700U·g-1)的复合酶，保温反应24h，接着加入1mol/L的氢氧化钠溶液5mL以终止反应，然后于5000r/min的转速下离心15min去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，将离心所得物于50℃常压条件下干燥至恒重然后粉碎、过筛得到莲子多孔淀粉；
步骤2：将磷脂与步骤1的莲子多孔淀粉按6∶1的质量比混合后后用微波-超声波联合处理(微波-超声波联合处理的微波功率为155W，超声波功率为375W，温度为80℃)18min，得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，用无水乙醇洗涤粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，然后冷冻干燥至恒重，得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物；
步骤3：将莲子蛋白与步骤2所得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物分别溶解于蒸馏水后再混合得混合液，向混合液中添加pH为4.7的磷酸盐缓冲溶液进行稀释，置于聚丙烯真空袋中用真空包装机封口，充分摇匀后放入进行间歇式超高压处理(间歇式超高压处理的压力为225MPa，温度为70℃，每运行5min停歇30s)25min，再进行洗涤，然后离心去除上清液得湿态的莲子淀粉-蛋白复合物，接着将湿态的莲子淀粉-蛋白复合物于50℃常压条件下干燥至恒重后粉碎、过筛，得到终产品，其中，所述莲子多孔淀粉-磷脂复合物与莲子蛋白的混合的质量比为1∶6。
复合指数的评价方法同实施例1，产品复合指数的测定结果见表1。
实施例3
步骤1：称取25g莲子淀粉于于250mL三角瓶中，加入50mL pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，配制成淀粉乳悬液，于55℃条件下加热10min后加入中温α-淀粉酶(10000U·g-1)与葡萄糖淀粉酶(3 700U·g-1)的复合酶，保温反应24h，接着加入1mol/L的氢氧化钠溶液5mL以终止反应，然后于5000r/min的转速下离心15min去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，将离心所得物于50℃常压条件下干燥至恒重然后粉碎、过筛得到莲子多孔淀粉；
步骤2：将磷脂与步骤1的莲子多孔淀粉按7∶1的质量比混合后后用微波-超声波联合处理(微波-超声波联合处理的微波功率为160W，超声波功率为400W，温度为90℃)20min，得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，用无水乙醇洗涤粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，然后冷冻干燥至恒重，得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物；
步骤3：将莲子蛋白与步骤2所得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物分别溶解于蒸馏水后再混合得混合液，向混合液中添加pH为4.7的磷酸盐缓冲溶液进行稀释，置于聚丙烯真空袋中用真空包装机封口，充分摇匀后放入进行间歇式超高压处理(间歇式超高压处理的压力为250MPa，温度为80℃，每运行5min停歇30s)30min，再进行洗涤，然后离心去除上清液得湿态的莲子淀粉-蛋白复合物，接着将湿态的莲子淀粉-蛋白复合物于50℃常压条件下干燥至恒重后粉碎、过筛，得到终产品，其中，所述莲子多孔淀粉-磷脂复合物与莲子蛋白的混合的质量比为1∶7。
复合指数的评价方法同实施例1，产品复合指数的测定结果见表1。
对比例
淀粉-蛋白复合物的干法反应制备：
通过控制自发美拉德反应来实现。将淀粉与蛋白粉按1:7混合后用去离子水溶解调至6％(m/V))后冷冻干燥。冻干样品置于底部装有饱和KBr溶液，湿度为79％的反应器中，干热反应控制在60℃进行，反应持续5d。
复合指数的评价方法同实施例1，产品复合指数的测定结果见表1。
表1莲子淀粉-蛋白复合物复合指数(复合率)的测定结果
| 复合物 | 复合指数 |
| 实施例1 | 52.76％ |
| 实施例2 | 58.16％ |
| 实施例3 | 60.22％ |
| 对比例 | 29.30％ |
由表1可知，本发明制备的莲子淀粉-蛋白复合物相比于对比例，其复合指数提高了1倍。
综上所述，本发明提供的莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，利用淀粉酶将普通莲子淀粉制备成莲子多孔淀粉来增大淀粉的表面积，利用微波-超声波联合处理辅助多孔淀粉吸附磷脂以增加淀粉表面的脂质成分，并利用非热力技术超高压提高蛋白质的表面疏水作用，大大增加淀粉与蛋白的复合指数，制备出高复合率的莲子淀粉-蛋白复合物；本发明的制备方法未采用高温操作，可以有效保持淀粉与蛋白的结构，制备出的莲子淀粉-蛋白复合物的性能更佳，方便后续的使用与加工。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (5)
1.一种莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将莲子淀粉溶于酸性溶液中，加入淀粉酶进行酶解反应24～48h，接着调节体系为碱性，然后离心去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，干燥并粉碎得到莲子多孔淀粉；
步骤2：将磷脂与步骤1的莲子多孔淀粉混合后用微波-超声波联合处理16～20min，得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物；
步骤3：将蛋白、步骤2所得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物及水混合后进行超高压处理，然后离心去除上清液得湿态的莲子淀粉-蛋白复合物，接着将湿态的莲子淀粉-蛋白复合物干燥至恒重后粉碎、过筛，得到终产品；
所述步骤1的酸性溶液为pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，所述淀粉酶为α-淀粉酶与葡萄糖淀粉酶的复合酶；
步骤2中，微波-超声波联合处理的条件包括：微波功率为150～160W，超声波功率为350～400W，温度为70～90℃；
步骤3中，所述超高压处理为间歇式超高压处理，所述间歇式超高压处理的条件包括：压力为200～250MPa，温度为60～80℃，处理时间为20～30min，每运行5min停歇30s；
步骤3中，所述蛋白为莲子蛋白，所述莲子多孔淀粉-磷脂复合物与莲子蛋白的混合的质量比为1∶5～7。
2.根据权利要求1所述的莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，其特征在于，所述步骤1的具体操作为：将莲子淀粉溶于pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，于53～57℃条件下加热8～12min后加入α-淀粉酶与葡萄糖淀粉酶的复合酶，保温反应24～48h，接着利用1mol/L的氢氧化钠溶液调节体系为碱性，然后离心去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，干燥至恒重然后粉碎、过筛得到莲子多孔淀粉，其中莲子淀粉与pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的料液比为1∶1.5～2.5，料液比的单位为g/mL。
3.根据权利要求1所述的莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，其特征在于，在步骤2与步骤3之间还包括利用无水乙醇洗涤粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，然后冷冻干燥至恒重，得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物。
4.根据权利要求1所述的莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，其特征在于，步骤1及步骤3的干燥为于48～52℃常压条件下进行干燥。
5.一种莲子淀粉-蛋白复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将莲子淀粉溶于pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，于53～57℃条件下加热8～12min后加入α-淀粉酶与葡萄糖淀粉酶的复合酶，保温反应24～48h，接着利用1mol/L的氢氧化钠溶液调节体系为碱性，然后于5000r/min的转速下离心15min去除上清液得沉淀，将沉淀进行洗涤后去除上清液，将离心所得物于48～52℃常压条件下干燥至恒重然后粉碎、过筛得到莲子多孔淀粉，其中莲子淀粉与pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的料液比为1∶1.5～2.5，料液比的单位为g/mL，所述1mol/L的氢氧化钠溶液与pH值为5.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的体积比为1∶10；
步骤2：将磷脂与步骤1的莲子多孔淀粉混合后后用微波-超声波联合处理16～20min，得粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，用无水乙醇洗涤粗制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，然后冷冻干燥至恒重，得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物，其中，所述莲子多孔淀粉与磷脂的质量比为1∶5～7，微波-超声波联合处理的条件包括微波功率为150～160W，超声波功率为350～400W，温度为70～90℃；
步骤3：将莲子蛋白与步骤2所得精制的莲子多孔淀粉-磷脂复合物分别溶解于蒸馏水后再混合得混合液，向混合液中添加pH为4.7的磷酸盐缓冲溶液，接着将添加有pH为4.7的磷酸盐缓冲溶液的混合液进行间歇式超高压处理20～30min，再进行洗涤，然后离心去除上清液得湿态的莲子淀粉-蛋白复合物，接着将湿态的莲子淀粉-蛋白复合物于48～52℃常压条件下干燥至恒重后粉碎、过筛，得到终产品，其中，所述莲子多孔淀粉-磷脂复合物与莲子蛋白的混合的质量比为1∶5～7，所述间歇式超高压处理的条件包括压力为200～250MPa，温度为60～80℃，每运行5min停歇30s。
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