CN107106520B - 治疗和预防关节炎的方法和组合物 - Google Patents

Abstract

提供了用于治疗或预防关节炎、特别是骨关节炎的方法和制剂，其中待施用于受试者以治疗或预防关节炎的制剂包含香芹酚、姜黄素、表没食子儿茶素‑3‑没食子酸酯和低聚原花青素。本发明提供了治疗或预防有需要的受试者的关节炎如骨关节炎的方法，该方法包括向该受试者施用包含有效治疗或预防关节炎的量的香芹酚、姜黄素、表没食子儿茶素‑3‑没食子酸酯和低聚原花青素的制剂或组合物。

Description

治疗和预防关节炎的方法和组合物

相关申请的交叉引用

本申请要求2014年11月7日提交的美国临时专利申请第62/076,842号的权益，该申请的内容通过引用的方式并入本文。

政府支持声明

本发明是在美国国立卫生研究院授予的批准号AR050968项下的政府支持下进行的。政府具有本发明的某些权利。

发明背景

在本申请的全篇中，各种出版物在括号中引用。这些参考文献的完整引用可以在权利要求书之前的说明书结尾处找到。这些出版物的公开内容在此以其整体通过引用的方式被并入到本申请中，以便更完整地描述本申请所属的领域。

关节炎是疼痛和残疾的主要原因。骨关节炎(OA)累及超过2700万美国人(1,2)，并且在美国是一项大的经济负担，每年医疗支出超过$1855亿(3-7)。到2030年患有关节炎的受试者数量预期增长至超过6700万。该增长归因于增长的老年群体和增长的肥胖率。在这一群体内，45-64岁组有29.8％报告具有经医生诊断的关节炎，而在65岁及以上人中有50％被诊断患有骨关节炎。虽然16.4％的低/正常体重成年人报告具有经医生诊断的关节炎，而52.5％的关节炎患者超重或肥胖。而且，患有关节损伤的患者目前占所有OA病例的12％，这在美国大约为560万。

一些治疗可用于骨关节炎，包括物理疗法；药物疗法如硫酸氨基葡萄糖、硫酸软骨素、非甾体类抗炎药(NSAID)、皮质类固醇、弱阿片类药物或其他镇痛药；以及最后的晚期疾病管理和外科手术(8)。然而，目前并不能治愈骨关节炎，并且目前的疗法也不能有效地减缓或停止其进展(5,9)。而且，用于治疗骨关节炎的许多药理学制剂在长期使用时与不利的胃肠、肾和心血管副作用相关(10-12)。也有许多在售的基于营养品的化合物(例如，姜黄/姜黄素、绿茶、氨基葡萄糖、透明质酸)用于治疗关节疼痛和关节炎，但它们治疗OA的有效性尚未得到明确的证实，并且这些补充剂均未经FDA批准用于治疗或治愈疾病(13)。虽然目前的治疗方法可以缓解疼痛和一些疾病症状，它们可能不能预防或减缓骨关节炎的进展，因为它们在对这种疾病负责的具体细胞和分子途径中不能充分矫正病理变化。

本发明解决了对关节炎(如骨关节炎和类风湿性关节炎)的改进治疗的需要，其中所述治疗是安全、有效且适合长达数十年的治疗。

发明概述

本发明提供治疗或预防有需要的受试者的关节炎(如骨关节炎)的方法，该方法包括向该受试者施用一种制剂或组合物，所述制剂或组合物包含有效治疗或预防关节炎的量的香芹酚、姜黄素、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯和低聚原花青素。

本发明还提供用于治疗或预防关节炎的制剂或组合物，其包含香芹酚、姜黄素、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯和低聚原花青素，以及药学上可接受的载体。

本发明优于已有的技术，原因在于其阻止骨关节炎的发展，而这是目前市场上的产品均不能声称实现的。

附图简要说明

图1：与C’-CEO的个体各组分相比，C’-CEO制剂(香芹酚、姜黄素、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯和低聚原花青素的组合)在增加CITED2(一种新的软骨/软骨细胞保护分子靶标)的表达方面发挥最高效力。通过实时PCR对在IL-1β(10ng/μl)的存在下用香芹酚(C’，1μΜ)、姜黄素(C，1μΜ)、EGCG(E，100μΜ)、OPC(O，50μg/ml)或C’-CEO处理的人软骨细胞(C28/I2)进行分析。柱体表示平均CITED2表达±SEM。*p<0.05，使用单向方差分析(one-wayANOVA)及图基事后检验(Tukey post-hoc test)与对照比较或所示的比较，n＝6/组。

图2A-2E：与C’-CEO的各个组分相比，C’-CEO在抑制软骨降解酶MMP-1(A)、MMP-3(B)、MMP-13(C)、ADAMTS5(D)和促炎性介质TNF-α(E)的表达方面发挥最高功效。在IL-1β(10ng/μl)的存在下(一种骨关节炎细胞培养模型)将人软骨细胞(C28/I2)用香芹酚(C’，1μΜ)、姜黄素(C，1μΜ)、EGCG(E，100μΜ)、OPC(O，50μg/ml)或C’-CEO(所有化合物的组合)处理3小时。通过实时PCR对数据进行分析。柱体表示MMP-1、MMP-3、MMP-13、ADAMTS5、TNF-α的平均基因表达±SEM。*p<0.05，使用单向方差分析及图基事后检验与对照比较或所示的比较，n＝6/组。

图3：与C’-CEO的各个组分相比，用C’-CEO制剂处理的小鼠显示出最少量的组织学软骨损伤。每天(7天/周)经由口服强饲对DMM小鼠(C57BL/6，雄性，6个月，n＝8/组)施用香芹酚(C’：50mg/kg)、姜黄素(C：50mg/kg)、EGCG(E：5mg/kg)、OPC(O：50mg/kg)、C’-CEO(所有化合物的组合)或溶媒，持续8周，并采用原始态小鼠

作为另一对照。OA严重程度基于番红O(Safranin O)染色。

图4A-4B：C’-CEO制剂在OA小鼠模型中预防软骨细胞外基质的分解，抑制蛋白水解酶MMP-13和ADAMTS5，并增加CITED2的表达。A.溶媒处理或C’-CEO处理的DMM小鼠和原始态对照的关节软骨中的变性II型胶原蛋白(Col2 3/4M)、裂解聚集蛋白聚糖(NITEGE)、MMP-13和ADAMTS-5的免疫组织化学。B.溶媒处理或C’-CEO处理的DMM小鼠和原始态对照的关节软骨中的CITED2的免疫组织化学和CITED2阳性软骨细胞的％。

图5A-5C：在创伤后OA动物模型中采用充分建立的疼痛评估，C’-CEO对疼痛缓解发挥最大的作用。如图3所述在处理的DMM OA小鼠中评估关节痛。在DMM后8周时，采用测定法(A)von Frey(机械性触诱发痛)、和(B)行进的距离和(C)后肢竖立来评估OA相关的疼痛。von Frey测试由按递增顺序使后爪暴露于von Frey丝组成。使用相对于它们的基线标准化的回缩反应次数评价各组。旷场行为测试测量在6min的时间里行进的距离(cm)和竖立(依靠后肢站立)次数。柱体表示平均值±SEM。*p<0.05，使用单向方差分析及图基事后检验与对照比较或所示的比较，n＝8/组。

发明详述

本发明提供治疗或预防有需要的受试者的关节炎的方法，所述方法包括向该受试者施用一种制剂或组合物，所述制剂或组合物包含有效治疗或预防关节炎的量的香芹酚、姜黄素、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯和低聚原花青素。

关节炎可以是例如骨关节炎，其可例如继发于关节损伤。在另一实施方式中，关节炎可以是例如类风湿性关节炎。

如本文所用，“治疗”关节炎意指改善关节炎的体征和/或症状和/或阻止关节炎的发展。优选地，向受试者施用所述制剂或组合物阻止或减缓受关节炎所累的关节组织的分解。优选地，向受试者施用所述制剂或组合物减少与关节炎相关的炎症。优选地，向受试者施用所述制剂或组合物减轻关节炎的疼痛症状。优选地，向受试者施用所述制剂或组合物改善对机械刺激的敏感性、关节运动和关节功能中的一种或多种。

“预防”关节炎意指预防具有关节炎发展风险的受试者的关节炎的发展。在一个实施方式中，例如，受试者持续具有关节损伤并服用所述制剂或组合物以预防创伤后骨关节炎的发展。

本发明还提供用于治疗或预防关节炎的制剂或组合物，其包含四种营养物：香芹酚(C’)、姜黄素(C)、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(E)和低聚原花青素(O)(“C’-CEO”制剂或组合物)，以及药学上可接受的载体。在一个实施方式中，所述制剂或组合物的活性成分由香芹酚、姜黄素、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯和低聚原花青素组成。

如本文所用，“药学上可接受的载体”是(i)与组合物的其他成分相容，不会导致组合物不适用于其预期目的，和(ii)适合供本文所提供的受试者使用而无过度的不良副作用(如毒性、刺激和过敏反应)。当副作用的危险超过组合物所提供的益处时，副作用是“过度的”。药学上可接受的载体的非限制性实例包括任何标准药用载体，如磷酸盐缓冲盐水溶液、水和乳液(如油/水乳液和微乳液)。

可使用本领域已知的给药途径向受试者施用所述制剂或组合物。优选的给药途径包括口服给药、关节内注射和局部给药。C’-CEO制剂的一种或多种组分可被纳米封装以改善其溶解度。C’-CEO制剂可被封装在肠溶包衣的胶囊中用于口服递送以限制胃肠道降解。

在一个实施方式中，所述制剂或组合物中香芹酚、姜黄素、EGCG和OPC的摩尔比为1:1:100:50。在一个实施方式中，所述制剂或组合物中香芹酚、姜黄素、EGCG和OPC的重量比为10:10:1:10。

根据随后的实验详述将更好地理解本发明。然而，本领域技术人员将容易理解所论述的具体方法和结果仅仅是其后随附的权利要求中更完整描述的发明的示例。

实验详述

材料和方法

诱导小鼠骨关节炎。所有的研究均经过阿尔伯特爱因斯坦大学医学院动物管理委员会(Albert Einstein College of Medicine Institutional Animal Care and UseCommittee)批准。在成年C57BL/6小鼠(雄性，5-6个月)中通过外科手术横切右后肢的内侧半月板胫骨韧带(MMTL)建立内侧半月板失稳(DMM)(36)。简言之，切开紧邻髌腱内侧的关节囊，随后钝剥离脂肪垫，以提供内侧半月板的MMTL的可视化。横切MMTL，导致DMM。在假外科手术中，使MMTL可视化但不横切。用缝线缝合关节囊和皮肤。

免疫组织化学、番红O染色和OARSI分数评价。使动物安乐死，将后肢固定在福尔马林中，在甲酸中脱钙，包埋在石蜡中并进行组织学和免疫组织化学切片。将切片与抗裂解聚集蛋白聚糖(NITEGE，Ibex)和裂解II型胶原蛋白(Col2-3/4M，Ibex)、MMP-13(Abcam)和ADAMTS5(Abcam)的抗体一起在4℃下孵育过夜，随后与抗小鼠或抗兔二级抗体(BiocareMedical)一起孵育，并用DAB显色剂(DAB chromagen，Vector Laboratories)可视化。阴性对照用无关同种型匹配抗体(Biocare Medical)染色。使用番红O固绿染色以使关节软骨中的蛋白聚糖可视化。采用国际骨关节炎研究学会(Osteoarthritis Research SocietyInternational，OARSI)评分系统对每只小鼠评价OA的严重程度(34)。通过测定染色的关节软骨基质的“相互强度(reciprocal intensity)”来量化II型胶原蛋白或聚集蛋白聚糖裂解表位的免疫染色强度。简言之，在Adobe Photoshop中使用颜色选择器来测量股骨踝和胫骨踝从后往前方向上的区域(azone)内的随机位置的光强度值(37)。通过计算免疫染色细胞的数目并除以通过苏木精复染色(Vector Laboratories)可视化的软骨细胞的总数来确定阳性MMP-13和ADAMTS5软骨细胞的百分比。

触觉敏感性测试。在von Frey测试之前使小鼠在栅网平台上的个体隔室中适应30分钟。用上升的von Frey丝(Stoelting)的力强度刺激后爪的跖面以测定触觉敏感性。阳性反应被定义为当施加刺激时后爪的快速回缩，并记录对每次刺激的阳性反应的次数。触觉阈值被定义为对于给定刺激强度10次试验中5次的回缩反应(38)。该阈值对每只动物计算一次。

旷场行为试验。在进行旷场行为测试之前使小鼠适应测试房30分钟。将小鼠放置在个体普列克斯玻璃方形隔室(45cm x 45cm)的中央，并允许在整个测试阶段的持续期间自由探索该隔室。用摄影机记录小鼠的运动。当实验完成时，使每只小鼠返回到它的居住笼中(39)。手动追查小鼠运动以计算小鼠在笼内在6min时间里行进的距离(用cm表示)。每只小鼠竖立(依靠其后肢站立)的次数由两个对治疗组分配设盲的观察者记录。

结果

对C’-CEO制剂组分的选择。通过创新性的筛选策略识别C’-CEO制剂；其由诱导软骨保护性转录调控因子CITED2(具有富含ED尾2的Cbp/p300相互作用反式激活因子)(一种潜在的骨关节炎治疗靶标)的表达的营养化合物配制而成(29-32)。CITED2介导一种新途径，该途径至少部分地通过抑制软骨降解酶MMP-13和ADAMTS-5的表达和活性而在软骨保护中起到关键作用(29,31)。值得注意的是，CITED2缺乏与人骨关节炎软骨的降解和创伤后骨关节炎小鼠相关。根据实验，在滑液关节组织中CITED2表达的减少引起骨关节炎(29,31)。CITED2的基因转移有效地减缓小鼠创伤后疾病的发作和进展(30)。

因为骨关节炎的慢性性质以及需要长期治疗，发明人在非毒性营养化合物中寻找CITED2(一种用于骨关节炎治疗的新靶标)的激活剂。首次发现绿茶提取物EGCG通过诱导CITED2抑制MMP-13和ADAMTS-5(35)。为了增强这一潜在药物的效能，识别了以协同方式增强CITED2诱导和其他抗关节炎作用的三种其他化合物。C’-CEO制剂是设计用于显示出疾病改善和症状改善这两种性质并用于有效预防和治疗关节炎(如骨关节炎)的产品。

C’-CEO制剂对CITED2(一种新的软骨/软骨细胞保护分子靶标)的表达的影响。实验在体外OA模型(在促炎性细胞因子IL-1β的存在下培养的软骨细胞)中进行，该模型模拟人的OA状况。该体系已被充分认可并常用作OA的药物筛选的验证。将人软骨细胞(C28/I2)在IL-1β(10ng/μl)的存在下(一种骨关节炎细胞培养模型)用香芹酚(C，1μΜ)、姜黄素(C，1μΜ)、EGCG(E，100μΜ)、OPC(O，50μg/ml)或C’-CEO(所有化合物的组合)处理3小时。通过实时PCR对数据进行分析。

与每个个体化合物香芹酚(C’)、姜黄素(C)、EGCG(E)和低聚原花青素(O)相比，C’-CEO发挥最高的CITED2表达增加(图1)。C’-CEO制剂以协同方式增加CITED2表达的程度高于每个个体化合物单用时增加的程度。

C’-CEO制剂对在OA发展中起关键作用的蛋白水解酶(MMP1、MMP3、MMP13、ADAMTS5)和促炎性介质TNF-α的表达的影响。为了测定C’-CEO的潜在疗效，在体外测试C’-CEO制剂减少蛋白水解酶和促炎性细胞因子的表达的能力。蛋白水解酶(如基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3、MMP-13)和具有血小板反应蛋白基序的解聚蛋白和金属蛋白酶(A Disintegrin AndMetalloproteinase with Thrombospondin Motifs，ADAMTS5)在关节炎软骨中高度表达，并直接裂解软骨细胞外基质。已证实具有MMP或ADAMTS敲除的小鼠对于OA的发展具有抗性，表明靶向这些酶将具有治疗益处。此外，促炎性细胞因子(如IL-1β和TNF-α)的表达在关节炎组织中增加，并上调MMP/ADAMTS的表达。

将人软骨细胞(C28/I2)在IL-Ιβ(10ng/μl)的存在下(一种骨关节炎细胞培养模型)用香芹酚(C，1μΜ)、姜黄素(C，1μΜ)、EGCG(E，100μΜ)、OPC(O，50μg/ml)或C’-CEO(所有化合物的组合)处理3小时。通过实时PCR对数据进行分析。

每个个体化合物在抑制MMP-1、MMP-3、MMP-13、ADAMTS5和促炎性细胞因子TNF-α的表达方面发挥一些效力。然而，在总体上，与每个个体化合物和溶媒对照相比，C’-CEO在抑制这些靶标的表达方面最有效(图2)。C’-CEO有效抑制多种软骨降解酶和促炎性介质的表达，表明其对治疗OA具有治疗潜力。

C’-CEO制剂在体内减缓OA进展的效力。为了测定C’-CEO制剂在体内减缓OA进展的效力，使用充分建立的创伤后OA小鼠模型。这些OA小鼠每天经口服施用C’-CEO、个体化合物或安慰剂。在诱导OA后8周，使用充分建立的且FDA推荐的软骨完整性染色剂番红O和半定量国际骨关节炎研究学会(OARSI)评分系统评价OA的严重程度。此外，因为软骨降解是OA的标志，通过检查两种主要软骨基质蛋白(II型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖)的分解水平来验证C’-CEO制剂的效力。通过检查这些OA小鼠的关节软骨中的CITED2表达来进一步考查C’-CEO制剂如何通过靶向CITED2而具有此种作用。

因为如上所述C’-CEO制剂在增加CITED2的表达以及抑制OA发作和发展所涉及的主要蛋白水解酶和促炎性介质的表达方面比其各个组分更有效，在创伤后OA小鼠模型中测定C’-CEO制剂减缓OA进展的效力。

所有的研究均经过阿尔伯特爱因斯坦大学医学院动物管理委员会批准。在成年C57BL/6小鼠(雄性，5-6个月)中通过外科手术横切右后肢的内侧半月板胫骨韧带(MMTL)建立内侧半月板失稳(DMM)。外科手术后立即对小鼠施用香芹酚(C’)、姜黄素(C)、EGCG(E)、OPC(O)、C’-CEO或溶媒对照8周。在外科手术后8周时，使动物安乐死，将后肢固定在福尔马林中，在甲酸中脱钙，包埋在石蜡中并进行组织学切片。使用番红O(一种充分建立的软骨染色剂)来可视化关节软骨的完整性以及关节软骨中的聚集蛋白聚糖。使用OARSI评分系统来评价OA的严重程度。

虽然个体化合物–香芹酚(C’)、姜黄素(C)、EGCG(E)和OPC(O)显示出一些软骨降解减少，但是以C’-CEO制剂喂养的小鼠显示出最少量的软骨损伤(纤维化、侵蚀、聚集蛋白聚糖损失)，如以组织学方法采用番红O染色测定的(图3)。与用每个个体化合物单独处理相比，C’-CEO小鼠的软骨还在数量上显示出最低的OA分数，通过OA评分系统(OARSI分数)建立的(表1)。因此，虽然用个体化合物处理表现出一些软骨保护效力，用所有四种营养物的组合C’-CEO制剂处理在创伤后OA动物模型中发挥最大的减缓OA进展的效力。

C’-CEO制剂在体内对防止软骨细胞外基质的分解(OA的一个标志)和增加CITED2表达的效力。软骨细胞外基质主要由两种蛋白组成：II型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖。这些基质蛋白的分解是OA的一个标志。因此，考查C’-CEO制剂对防止这些蛋白分解的效力以及其对CITED2(C’-CEO的分子靶标)的表达的作用。

当与溶媒处理的小鼠相比，C’-CEO-处理的小鼠的关节软骨显示出更少的裂解II型胶原蛋白(Col2 3/4M)和裂解聚集蛋白聚糖(NITEGE)的阳性免疫染色。还考查了表达MMP-13和ADAMTS5(其分别裂解II型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖)的软骨细胞的数目。当与溶媒对照相比，C’-CEO-处理的小鼠的关节软骨中具有更少的表达MMP-13和ADAMTS5的软骨细胞(图4A)。将来自实验动物后肢的组织切片与抗裂解聚集蛋白聚糖(NITEGE，Ibex)和裂解II型胶原蛋白(Col2-3/4M,Ibex)、MMP-13(Abcam)和ADAMTS5(Abcam)的抗体一起在4℃下孵育过夜，随后与抗小鼠或抗兔二级抗体(Biocare Medical)一起孵育，并用DAB显色剂(Vector Laboratories)可视化。阴性对照用无关同种型匹配抗体染色。C’-CEO-处理的小鼠也含有更高百分比的表达CITED2的软骨细胞(图4B)。C’-CEO制剂可以通过减缓两种主要的软骨细胞外基质蛋白(II型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖)的降解以及上调关节软骨中的CITED2来发挥软骨保护的效力。

C’-CEO制剂在充分建立的创伤后OA动物模型中缓解OA相关疼痛的效力。OA的进展伴随着继发性临床症状，最显著的是疼痛。除了评价C’-CEO制剂的疾病改善作用外，在OA诱导后8周时，还测定了C’-CEO在这一OA动物模型中是否发挥疼痛缓解的作用。为了测定疼痛缓解，采用三种动物行为评估：1)von Frey，其测定对机械刺激的敏感性[OA动物倾向于对机械刺激具有更低的疼痛阈值]；2)行进的距离–关节运动的量度[OA动物与非OA动物相比倾向于移动更短的距离]；3)竖立–关节功能的量度[OA动物倾向于竖立或依靠它们的后肢站立的次数少于非OA动物]。

与溶媒对照相比，用个体化合物处理没有改善小鼠对机械刺激的敏感性(图5A)，没有增加行进的距离(图5B)，并且没有增加后肢竖立的次数(图5C)。相比之下，C’-CEO-处理的DMM小鼠，跟原始态对照一样，需要更高的力引起爪回缩(p<0.05，图5A)，行进更长的距离(p<0.05，图5B)，并增加竖立/依靠其后肢站立的次数(p<0.05，图5C)。

用个体化合物香芹酚、姜黄素、EGCG或OPC经口服施用进行处理没有导致OA相关疼痛的疼痛缓解的统计学改善。然而，C’-CEO-处理的OA小鼠显示出疼痛缓解的统计学改善，机械敏感性、关节运动和功能的水平类似于原始态的非OA动物。

表1.用C’-CEO制剂处理的小鼠显示出最低的OA组织学分数。OARSI分数是半定量的基于组织学的评分系统，0表示健康软骨，6表示严重的软骨侵蚀。显示8只动物/组的平均OARSI分数±标准偏差。*p<0.05，单向方差分析，与溶媒处理的动物比较。**p<0.05，单向方差分析，与个体化合物处理比较。

讨论

本结果提供了明显的证据：当与每个个体化合物单独处理以及溶媒对照进行比较时，在体内本发明的C’-CEO制剂不仅对骨关节炎疾病的发作和进展发挥统计学上显著的协同作用，而且对缓解疼痛症状以及改进移动性也发挥统计学上显著的协同作用。当小鼠在DMM损伤后立即开始口服施用时，C’-CEO制剂显著减缓创伤后骨关节炎的发展。预防或降低骨关节炎的严重程度是极其有价值的，因为组织损伤的逆转非常困难。大约50％的患有ACL损伤的患者在10-15年内发展骨关节炎(15)。口服预防对于患有ACL撕裂或半月板损伤以及其他无症状的患者是方便的。

C’-CEO制剂不仅可以直接改变疾病的进程，而且还可以缓解疼痛症状以及改善移动性。采用创伤后骨关节炎小鼠研究的结果使得C’-CEO制剂是潜在的极其有价值的，因为疼痛缓解和改善的移动性是临床治疗的重要目标。不受控制的疼痛是患者选择关节置换手术的主要原因(16)。

C’-CEO制剂还可以用于治疗其他形式的关节炎，包括类风湿性关节炎。炎症、软骨退化和慢性疼痛是所有形式的关节炎(包括骨关节炎和类风湿性关节炎)的常见标志(17)。C’-CEO制剂的抗炎、抗分解代谢和镇痛作用有可能对所有形式的关节炎疾病具有有益的作用。

通过对刺激具有一些软骨保持(软骨保护)性质的调节蛋白的产生的能力进行分子筛选来选择C’-CEO制剂的组分。这些包括抑制骨关节炎的病理生理学所涉及的一些组织降解酶的表达。C’-CEO制剂的组分是诱导软骨保护性转录调控因子CITED2(具有富含ED尾2的Cbp/p300相互作用反式激活因子)(一种潜在的骨关节炎治疗靶标)的个体营养化合物(29-32)。这些研究表明CITED2不仅调节与软骨细胞内稳态的信号途径，而且还保护软骨完整性。

此外，C’-CEO制剂的组分特别选自在慢性病治疗的长期过程中可能被良好耐受的一类食物产品(“营养物”)。营养物，作为食物或饮食补充剂，在传统上被认为提供医学或健康益处并被认为是对标准药物疗法的潜在安全的替代物(18-27)。在许多情况中，提议用于骨关节炎治疗的营养物来源于传统替代医学(28)或基于它们的普遍的抗炎作用(18)。在本研究之前，营养物在预防或减缓骨关节炎进展方面的有效性尚未被充分建立起来(13)。

组成C’-CEO制剂的化合物被FDA视为是安全的(GRAS)。这是特别重要的，因为骨关节炎在超过40岁的成年人中变得越来越普遍，并且包括关节损伤、肥胖和糖尿病的风险因素可能在甚至更低的年龄段导致疾病发展(14)。非毒性营养物可在数十年期间在个体患者中安全使用，提供必要的有意义的益处(13)。

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Claims (31)

1.协同制剂在制造用于治疗或预防有需要的受试者的骨关节炎或类风湿性关节炎的药物中的用途，其中所述制剂包含由治疗有效量的香芹酚、治疗有效量的姜黄素、治疗有效量的表没食子儿茶素-3-没食子酸酯和治疗有效量的低聚原花青素组成的活性成分，其中香芹酚、姜黄素、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯和低聚原花青素以1:1:100:50的摩尔比或以10:10:1:10的重量比存在。

2.权利要求1所述的用途，其中所述药物用于治疗骨关节炎。

3.权利要求2所述的用途，其中骨关节炎继发于关节的损伤。

4.权利要求1所述的用途，其中所述药物用于治疗类风湿性关节炎。

5.权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述药物停止或减缓受骨关节炎或类风湿性关节炎所累的关节组织的分解。

6.权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述药物减少与骨关节炎或类风湿性关节炎相关的炎症。

7.权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述药物缓解骨关节炎或类风湿性关节炎的疼痛症状。

8.权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述药物改善对机械刺激的敏感性、关节运动和关节功能中的一种或多种。

9.权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述药物预防创伤后骨关节炎的发展。

10.权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述药物被配制用于口服给药。

11.权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述药物被配制用于关节内注射。

12.权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述药物被配制用于局部给药。

13.用于治疗或预防骨关节炎或类风湿性关节炎的协同药物组合物，其包含由治疗有效量的香芹酚、治疗有效量的姜黄素、治疗有效量的表没食子儿茶素-3-没食子酸酯和治疗有效量的低聚原花青素组成的活性成分，以及药学上可接受的载体，其中香芹酚、姜黄素、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯和低聚原花青素以1:1:100:50的摩尔比或以10:10:1:10的重量比存在。

14.权利要求13所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于治疗骨关节炎。

15.权利要求13所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于治疗类风湿性关节炎。

16.权利要求13至15中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于关节内注射。

17.权利要求13至15中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于局部给药。

18.权利要求13至15中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于口服给药。

19.权利要求18所述的药物组合物，其中所述药物组合物位于肠溶包衣的胶囊中。

20.权利要求13至15中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的一种或多种组分被纳米封装。

21.权利要求1至4中任一项所述的用途，其中香芹酚的治疗有效量是1μM，姜黄素的治疗有效量是1μM，表没食子儿茶素-3-没食子酸酯的治疗有效量是100μM，且低聚原花青素的治疗有效量是0.5μg/ml。

22.权利要求1至4中任一项所述的用途，其中香芹酚的治疗有效量是50mg/kg，姜黄素的治疗有效量是50mg/kg，表没食子儿茶素-3-没食子酸酯的治疗有效量是5mg/kg，且低聚原花青素的治疗有效量是50mg/kg。

23.权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述药物包含药学上可接受的载体，所述药学上可接受的载体是磷酸盐缓冲盐水溶液。

24.权利要求23所述的用途，其中药学上可接受的载体将所述活性成分封装在肠溶衣中。

25.权利要求23所述的用途，其中药学上可接受的载体将所述活性成分封装在纳米胶囊中。

26.权利要求13至15中任一项所述的药物组合物，其中香芹酚、姜黄素、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯和低聚原花青素以10:10:1:10的重量比存在。

27.权利要求13至15中任一项所述的药物组合物，其中香芹酚的治疗有效量是1μM，姜黄素的治疗有效量是1μM，表没食子儿茶素-3-没食子酸酯的治疗有效量是100μM，且低聚原花青素的治疗有效量是0.5μg/ml。

28.权利要求13至15中任一项所述的药物组合物，其中香芹酚的治疗有效量是50mg/kg，姜黄素的治疗有效量是50mg/kg，表没食子儿茶素-3-没食子酸酯的治疗有效量是5mg/kg，且低聚原花青素的治疗有效量是50mg/kg。

29.权利要求13至15中任一项所述的药物组合物，其中药学上可接受的载体是磷酸盐缓冲盐水溶液。

30.权利要求13至15中任一项所述的药物组合物，其中药学上可接受的载体将所述活性成分封装在肠溶衣中。

31.权利要求13至15中任一项所述的药物组合物，其中药学上可接受的载体将所述活性成分封装在纳米胶囊中。

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