CN107099525A - 一种北冬虫夏草菌株g5及其诱变选育和培育方法 - Google Patents

一种北冬虫夏草菌株g5及其诱变选育和培育方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107099525A
CN107099525A CN201710471868.3A CN201710471868A CN107099525A CN 107099525 A CN107099525 A CN 107099525A CN 201710471868 A CN201710471868 A CN 201710471868A CN 107099525 A CN107099525 A CN 107099525A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cordyceps militaris
mutagenic
strain
breeding method
breeding
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710471868.3A
Other languages
English (en)
Inventor
赵凤舞
王桂荣
贾国军
王剑虹
马振贵
王春霖
高雪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LANZHOU VOC-TECH COLLEGE
Lanzhou Vocational Technical College
Original Assignee
LANZHOU VOC-TECH COLLEGE
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by LANZHOU VOC-TECH COLLEGE filed Critical LANZHOU VOC-TECH COLLEGE
Priority to CN201710471868.3A priority Critical patent/CN107099525A/zh
Publication of CN107099525A publication Critical patent/CN107099525A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Mushroom Cultivation (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种北冬虫夏草菌株G5及其诱变选育和培育方法，本发明诱变选育方法通过12C6+重离子束按照150Gy辐射剂量辐照对北冬虫夏草出发菌株的菌悬液进行辐照处理，再通过对辐照处理后的菌悬液依次进行初筛、复筛后得到北冬虫夏草菌株G5，该北冬虫夏草菌株G5最佳培育条件为：将北冬虫夏草菌株G5接种在培育基上培养至子实体成熟；其中，培养温度为21℃，散射光照度为500Lx，培养基为80％大米和20％蚕蛹粉。本发明获得的北冬虫夏草菌株G5子实体产量高、多糖含量高、虫草素含量高以及遗传稳定性好。

Description

一种北冬虫夏草菌株G5及其诱变选育和培育方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种北冬虫夏草菌株G5及其诱变选育和培育方法。
背景技术
北冬虫夏草[Cordyceps militaris(L.ex Fr.)Link.]又称北虫草，蛹虫草，隶属于真菌界、子囊菌门、子囊菌纲、肉座菌目、麦角菌科、虫草属，与冬虫夏草是同属不同种，也是一种久负盛名的药用真菌，可全草入药，具特殊的药用价值和滋补功效，含有虫草素、虫草酸、虫草多糖、SOD、和微量元素硒等多种生物活性物质，可促进机体新陈代谢，提高机体的免疫功能。古人就有“宁要虫草一把，不要黄金满车”之说。北虫草所含营养成分的种类、数量与冬虫夏草相同或基本相同，且在某些营养物质的含量上高于冬虫夏草。
北冬虫夏草生理独特，生态复杂，是鳞翅目昆虫的蛹体感染虫草菌后形成的虫与真菌两部分组成的复合体，主要生长在针叶林、阔叶林或混交林地表土层中。北虫草自然资源分布数量很少，价格昂贵，仅靠野生虫草已无法满足市场的需求，且采挖野生虫草，破坏植被，水土流失严重。人工栽培的北虫草作为野生虫草的替代品，市场空间大，效益高。人工培养北虫草子实体影响因子很多，也很复杂，优良菌种的选育和高产培养条件的研究仍是北虫草研究的重点。
近年来，我国关于北虫草人工栽培及规模化生产技术已有很多报道，但是还存在影响北虫草子实体人工培养和工业化生产规模扩大的若干关键的、急需解决的问题，比如说菌种的退化问题、菌种的选育研究、不同地区培养条件的优化研究，以及如何提高子实体的生物产量等问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种北冬虫夏草菌株G5。
本发明的再一目的在于提供上述北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法。
本发明的再一目的在于提供上述北冬虫夏草菌株G5的培育方法。
本发明是这样实现的，一种北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法，该北冬虫夏草菌株通过12C6+重离子束按照150Gy辐射剂量辐照对蛹虫草出发菌株的菌悬液进行辐照处理，再通过对辐照处理后的菌悬液依次进行初筛、复筛后得到北冬虫夏草菌株G5。北虫草高产菌株G5保藏于兰州职业技术学院生物工程系微生物实验室。
优选地，所述初筛为：采用平板分离的方法从辐照处理后的菌悬液进行初筛，并选出有效诱变菌株。
优选地，所述复筛为：对初筛的诱变菌株进行复筛处理，获得符合条件的北冬虫夏草菌株，其中，复筛的项目包括北冬虫夏草菌株子实体产量、多糖含量、虫草素含量以及遗传稳定性。
上述北冬虫夏草菌株G5的培育方法，该方法包括：将北冬虫夏草菌株G5接种在培育基上培养至子实体成熟；其中，培养温度为21℃，散射光照度为500Lx，所述培养基为80％大米和20％蚕蛹粉。
本发明克服现有技术的不足，提供一种北冬虫夏草菌株G5及其诱变选育和培育方法，通过12C6+重离子辐照选育出一种北冬虫夏草高产菌株G5，并对北冬虫夏草高产菌株G5的人工栽培培养基与培养条件进行了探索研究，旨在筛选出北虫草诱变菌株的最佳人工栽培培养基与培养条件，为北虫草产业化、工业化生产提供技术支持。
相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：本发明培育方法简单，诱变与所得菌株之间的重复可再现性强；本发明获得的北冬虫夏草菌株G5子实体产量高、多糖含量高、虫草素含量高以及遗传稳定性好。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
一种北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法，该方法包括以下步骤：
1、重离子束12C6+辐照诱变
用兰州重离子加速器国家重点实验室提的12C6+重离子束按照辐射剂量150Gy对北冬虫夏草出发菌株的菌悬液进行辐照处理。
2、突变菌株的初步筛选
采用平板分离的方法，对经重离子束12C6+剂量150Gy辐照后的菌悬液进行浓度梯度稀释，稀释20倍，涂布到12cm平板上，沿用出发菌株的培养条件，对照辐照前菌株的生长特征，观察辐照后菌丝生长特性及菌落大小、形态、颜色变化等，从中挑选差异性较大的菌落转接到斜面培养基上进行培养；然后在平板培养基上分别接种出发菌株和诱变后初步筛选的菌株菌种块，两者相距2cm，25℃恒温培养，7天后观察是否有明显拮抗线产生。若菌丝能融合生长、连成一片的说明是同种菌丝，若出现拮抗线明显的，则说明菌种性质不同，可能产生了新的性状，为有效诱变菌株。
3、复筛
(1)子实体产量的测定
对出发菌株和经初筛的变异菌株分别接种进行培育至子实体成熟时采收；其中，该培育方法中，培养温度为21℃，散射光照度为500Lx，所述培养基为80％大米和20％蚕蛹粉。将采收的子实体干燥，称重，计算平均产量(g/瓶)。
培养测定方法参考文献：贾国军，赵凤舞，王剑虹.北冬虫夏草高产菌株人工培养条件的研究[J].甘肃农业科技，2016(11)：32-35.
测定结果如下表1所示：
表1子实体的产量的测定结果
表1中，G0为出发菌株，G5为高产变异菌株。由上表1可知，经辐照后的变异菌株子实体产量明显增加，G5的子实体产量是原始出发菌株的提高了55.70％，差异非常明显。
(2)子实体活性物质含量的测定
①多糖含量的测定。测定方法：乙醇沉淀法。②虫草素含量的测定。测定方法：用高效液相色谱法(HPLC)。
参考文献：
孙军德，宋思丹，王颖，等.蛹虫草优良菌株的筛选[J].微生物学杂志，2011，31(2):40-43.
王英娟，李多伟，王义潮，等.蛹虫草中虫草素、虫草多糖综合提取工艺研究[J].西北植物学报，2005，25(9):1863-1867.
Ing-Lung Shih，Kun-Lin Tsai，Chienyan Hsieh.Effects of cultureconditions on the mycelial growth and bioactive metabolite production insubmerged culture of Cordyceps militaris[J].Biochemical Engineering Journal，2007，33(3):193-201.
测定结果如下表2所示：
表2子实体多糖和虫草素含量测定结果
由上表2可知，G5菌株的多糖和虫草素含量均高于出发菌株，多糖含量和虫草素含量比相同条件下提取的出发菌株分别提高了67.71％和96.72％。
4、遗传稳定性测定
将筛选得到的高产突变菌株连续传代10次，每隔两代分别进行栽培实验，测定子实体的产量，以检测菌株的遗传稳定性。
将筛选得到的高产突变菌株G5连续传代10次，每隔两代分别进行栽培实验，测定每株中子实体的产量。结果如下表3所示：
表3北冬虫夏草菌株G5遗传稳定性结果
从表3可知，突变菌株G5经过10次传代，子实体的含量变化不大，可以说明此突变菌株G5均具有稳定高产子实体的遗传特性。其中，G5突变菌株的子实体产量平均为8.21g/瓶，比原始出发菌株G0产子实体(5.26g/瓶)提高了56.08％，具有显著差异。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法，其特征在于，该北冬虫夏草菌株通过12C6+重离子束按照150Gy辐射剂量辐照对北冬虫夏草出发菌株的菌悬液进行辐照处理，再通过对辐照处理后的菌悬液依次进行初筛、复筛后得到北冬虫夏草菌株G5。
2.如权利要求1所述的北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法，其特征在于，所述初筛为：采用平板分离的方法从辐照处理后的菌悬液进行初筛，并选出有效诱变菌株。
3.如权利要求1所述的北冬虫夏草菌株G5的诱变选育方法，其特征在于，所述复筛为：对初筛的诱变菌株进行复筛处理，获得符合条件的北冬虫夏草菌株，其中，复筛的项目包括北冬虫夏草菌株子实体产量、多糖含量、虫草素含量以及遗传稳定性。
4.如权利要求1所述的北冬虫夏草菌株G5的培育方法，其特征在于，该方法包括：将北冬虫夏草菌株G5接种在培育基上培养至子实体成熟；其中，培养温度为21℃，散射光照度为500Lx，所述培养基为80％大米和20％蚕蛹粉。
CN201710471868.3A 2017-06-20 2017-06-20 一种北冬虫夏草菌株g5及其诱变选育和培育方法 Pending CN107099525A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710471868.3A CN107099525A (zh) 2017-06-20 2017-06-20 一种北冬虫夏草菌株g5及其诱变选育和培育方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710471868.3A CN107099525A (zh) 2017-06-20 2017-06-20 一种北冬虫夏草菌株g5及其诱变选育和培育方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107099525A true CN107099525A (zh) 2017-08-29

Family

ID=59664547

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710471868.3A Pending CN107099525A (zh) 2017-06-20 2017-06-20 一种北冬虫夏草菌株g5及其诱变选育和培育方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107099525A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107739720A (zh) * 2017-11-13 2018-02-27 大连春天生物菌业孵化基地有限公司 一种贫泛培养基在紫外线诱变蛹虫草培育新品种的应用
CN115491313A (zh) * 2022-10-09 2022-12-20 辽宁省农业科学院 一株蛹虫草白色菌株及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104560941A (zh) * 2014-12-23 2015-04-29 浙江省农业科学院 一种提高虫草发酵生物量的方法
CN104885931A (zh) * 2015-05-07 2015-09-09 北京市辐射中心 一种离子束注入诱变选育蛹虫草菌株的方法和所育菌株

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104560941A (zh) * 2014-12-23 2015-04-29 浙江省农业科学院 一种提高虫草发酵生物量的方法
CN104885931A (zh) * 2015-05-07 2015-09-09 北京市辐射中心 一种离子束注入诱变选育蛹虫草菌株的方法和所育菌株

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
贾国军等: "北冬虫夏草高产菌株人工培养条件研究", 《甘肃农业科技》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107739720A (zh) * 2017-11-13 2018-02-27 大连春天生物菌业孵化基地有限公司 一种贫泛培养基在紫外线诱变蛹虫草培育新品种的应用
CN115491313A (zh) * 2022-10-09 2022-12-20 辽宁省农业科学院 一株蛹虫草白色菌株及其应用
CN115491313B (zh) * 2022-10-09 2024-01-30 辽宁省农业科学院 一株蛹虫草白色菌株及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104082034B (zh) 一种冬虫夏草子实体人工栽培方法
CN101245361B (zh) 一种生产虫草素的方法及高产蛹虫草菌株byb-08的选育与应用
CN102084780B (zh) 一种高含量生物活性物质的蛹虫草子实体栽培方法
Yang et al. Use of stillage grain from a rice-spirit distillery in the solid state fermentation of Ganoderma lucidum
CN106399132B (zh) 一株白囊耙齿菌及其应用
CN102119631B (zh) 用于米糠和麸皮复合原料生产多糖的灰树花菌株
CN102876587A (zh) 一株高产虫草素的蛹虫草菌株
CN102599005B (zh) 提高虫草素产量的北冬虫夏草的生产方法
CN103160442A (zh) 一株对柑橘木虱具强致病力的淡紫拟青霉菌株
CN103060242B (zh) 一株蓝莓根际促生纺锤芽孢杆菌及其应用
CN103477994A (zh) 用于米糠和麸皮全料液态发酵生产灵芝多糖的菌株
CN103667070A (zh) 蛇足石杉植物内生真菌及其在制备石杉碱甲中的应用
CN105779299A (zh) 一株高产腺苷及甘露醇类物质的蝙蝠蛾拟青霉菌株及应用
CN102816701B (zh) 用于发酵米糠和麸皮提取液生产灰树花多糖的菌株
CN102342218A (zh) 固态发酵生产冬虫夏草菌丝的方法
CN104885787A (zh) 活性物含量高的蛹虫草子实体种植方法
CN107099525A (zh) 一种北冬虫夏草菌株g5及其诱变选育和培育方法
CN104472221B (zh) 一种由天然冬虫夏草子实体发酵菌丝的方法
Pereima et al. Stimulation of growth of species of the fungus of the genus Pleurotus (Fr.) P. Kumm. at a glucose nutrition
CN109699394A (zh) 一种利用液体培养基生产纵条纹炭角菌子实体的方法
CN104396571B (zh) 高虫草素富硒虫草培植方法
Lopez et al. Optimization of mycelial growth of Xylaria papulis Lloyd (Xylariaceae) in indigenous liquid culture conditions, science city of Muñoz, Nueva Ecija, Philippines
CN100567318C (zh) 人工培养蛹虫草中的核苷类活性物质及其制备方法和用途
CN107142256A (zh) 蛹虫草紫外线二次诱变育种的方法
Wang et al. Cultivation of arbuscular mycorrhizal Broussonetia papyrifera seedlings by planting the mycorrhizal nurse plant downwards

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170829

RJ01 Rejection of invention patent application after publication