CN107050426A

CN107050426A - Fgfr1胞外域组合疗法

Info

Publication number: CN107050426A
Application number: CN201710017991.8A
Authority: CN
Inventors: L·隆; T·布伦南
Original assignee: Five Prime Therapeutics Inc
Current assignee: Five Prime Therapeutics Inc
Priority date: 2010-11-15
Filing date: 2011-11-14
Publication date: 2017-08-18
Also published as: WO2012068032A1; KR20180053420A; JP6178240B2; SG190248A1; MX349293B; JP2013543870A; NZ610538A; WO2012068030A1; CN103347514A; AU2011329125B2; IL226252B; EA025828B1; MX2013005387A; BR112013012041A2; SG190788A1; AU2011329125A1; CA2817537A1; MX2013005388A; JP2017019843A; AU2011329127B2

Abstract

本申请涉及FGFR1胞外域组合疗法。提供了治疗癌症的方法，所述方法包括施用与选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5‑氟尿嘧啶(5‑FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞和贝伐单抗中的至少一种另外的治疗剂组合的成纤维细胞生长因子受体1(FGR1)胞外域(ECD)和/或FGFR1 ECD融合分子。还提供了剂量包，所述剂量包包含FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和/或选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5‑氟尿嘧啶(5‑FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞和贝伐单抗中的至少一种另外的治疗剂。在一些实施方案中，剂量包包含用于施用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子与至少一种另外的治疗剂的说明书。

Description

FGFR1胞外域组合疗法

本申请是申请日为2011年11月14日、中国申请号为201180064851.7、发明名称为“FGFR1胞外域组合疗法”的发明申请的分案申请。

相关申请

本申请要求于2010年11月15日提交的美国临时申请第61/413,940号和于2010年12月9日提交的美国临时申请第61/421,462的优先权，所述美国临时申请的内容通过引用并入本文。

发明背景

已显示成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)的可溶形式在体外和体内抑制肿瘤细胞生长。参见例如，美国专利第7,678,890号。将抗癌治疗分子，诸如FGFR1的可溶形式与另一抗癌治疗分子组合可对每种抗癌治疗剂的功效产生拮抗的、加成的或协同的作用。

发明概述

本发明人已发现在非小细胞肺癌的小鼠异种移植模型中施用FGFR1 ECD和多西他赛显示了治疗剂的协同抗肿瘤活性。而且，本发明人已发现在某些小鼠异种移植模型中施用FGFR1 ECD和选自紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂(oxaliplatin)、多柔比星(doxorubicin)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞(pemetrexed)和贝伐单抗(bevacizumab)中的至少一种另外的治疗分子相对于单独施用的每种分子具有至少加成活性。

在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)胞外域(ECD)和选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、索拉非尼(sorafenib)、依托泊苷(etoposide)、拓扑替康(topotecan)、血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂、VEGF trap、抗VEGF抗体和贝伐单抗中的至少一种另外的治疗剂。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是多西他赛。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是培美曲塞。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是顺铂。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是紫杉醇。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是5-FU。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是拓扑替康。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是长春新碱(viscristine)。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是VEGF拮抗剂，诸如抗VEGF抗体或VEGF trap。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是贝伐单抗。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是索拉非尼。在一些实施方案中，FGFR1 ECD包括选自SEQID NO：1至4的序列。

在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)胞外域(ECD)融合分子和选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、索拉非尼、依托泊苷、拓扑替康、血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂、VEGF trap、抗VEGF抗体和贝伐单抗中的至少一种另外的治疗剂，其中所述FGFR1 ECD融合分子包含FGFR1 ECD和融合伴侣。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是多西他赛。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是培美曲塞。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是顺铂。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是紫杉醇。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是5-FU。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是长春新碱(viscristine)。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是拓扑替康。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是VEGF拮抗剂，诸如抗VEGF抗体或VEGF trap。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是贝伐单抗。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是索拉非尼。

在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1ECD或FGFR1 ECD融合分子和选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、索拉非尼、依托泊苷、拓扑替康、血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂、VEGF trap、抗VEGF抗体和贝伐单抗中的至少两种另外的治疗剂，其中所述FGFR1 ECD融合分子包含FGFR1 ECD和融合伴侣。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂中的至少一种是紫杉醇。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂中的至少一种是顺铂。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂中的至少一种是卡铂。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂中的至少一种是奥沙利铂。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂中的至少一种是5-FU。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂中的至少一种是多柔比星。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂中的至少一种是依托泊苷。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂中的至少一种是拓扑替康。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂中的至少一种是VEGF拮抗剂，诸如抗VEGF抗体或VEGF trap。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂中的至少一种是贝伐单抗。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂是紫杉醇和卡铂。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂是多柔比星和紫杉醇。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂是顺铂和依托泊苷。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂是奥沙利铂和5-FU。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂是5-FU和甲酰四氢叶酸。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂是5-FU和贝伐单抗。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂是紫杉醇和贝伐单抗。在一些实施方案中，两种另外的治疗剂是顺铂和依托泊苷。

在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1ECD或FGFR1 ECD融合分子和选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、索拉非尼、VEGF拮抗剂、抗VEGF抗体、VEGF trap和贝伐单抗中的至少三种另外的治疗剂，其中所述FGFR1 ECD融合分子包含FGFR1 ECD和融合伴侣。在一些实施方案中，三种另外的治疗剂中的至少一种是奥沙利铂。在一些实施方案中，三种另外的治疗剂中的至少一种是5-FU。在一些实施方案中，三种另外的治疗剂中的至少一种是甲酰四氢叶酸。在一些实施方案中，三种另外的治疗剂中的至少一种是卡铂。在一些实施方案中，三种另外的治疗剂中的至少一种是紫杉醇。在一些实施方案中，三种另外的治疗剂中的至少一种是贝伐单抗。在一些实施方案中，三种另外的治疗剂是奥沙利铂、5-FU和甲酰四氢叶酸。在一些实施方案中，三种另外的治疗剂是贝伐单抗、5-FU和甲酰四氢叶酸。在一些实施方案中，三种另外的治疗剂中的至少两种是顺铂和依托泊苷。

在一些实施方案中，本发明还涉及FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子和选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、索拉非尼、依托泊苷、拓扑替康、血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂、VEGF trap、抗VEGF抗体和贝伐单抗中的至少一种另外的治疗剂的组合，以用于癌症的治疗。在一些实施方案中，本发明还涉及FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子和选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、索拉非尼、依托泊苷、拓扑替康、血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂、VEGF trap、抗VEGF抗体和贝伐单抗中的至少两种另外的治疗剂的组合，以用于癌症的治疗。在一些实施方案中，本发明还涉及FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子和选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、索拉非尼、VEGF拮抗剂、抗VEGF抗体、VEGF trap和贝伐单抗中的至少三种另外的治疗剂的组合，以用于癌症的治疗。

在一些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子与至少一种、至少两种或至少三种另外的治疗剂分开包装。在一些实施方案中，在施用前，FGFR1 ECD和/或FGFR1ECD融合分子不与至少一种、至少两种或至少三种另外的治疗剂混合。

在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛，其中所述FGFR1-ECD.339-Fc包括SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛，其中所述FGFR1-ECD.339-Fc由SEQ ID NO:6的氨基酸序列组成。

在一些实施方案中，FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子是糖基化的和/或唾液酸化的。在一些实施方案中，FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子的多肽部分在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达。在一些实施方案中，FGFR1 ECD包括选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3的氨基酸序列。

在一些实施方案中，至少一个剂量的FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和至少一个剂量的至少一种另外的治疗剂共同施用。在一些实施方案中，至少一个剂量的FGFR1ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和至少一个剂量的至少一种另外的治疗剂同时施用。

在一些实施方案中，FGFR1 ECD包括选自SEQ ID NO:1至4的氨基酸序列。在一些实施方案中，至少一种融合伴侣选自Fc、白蛋白和聚乙二醇。在一些实施方案中，至少一种融合伴侣是Fc。在一些实施方案中，Fc包括选自SEQ ID NO:8至10的氨基酸序列。在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子包括选自SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的序列。在一些实施方案中，至少一种融合伴侣是Fc和聚乙二醇。在一些实施方案中，至少一种融合伴侣是聚乙二醇。在一些实施方案中，融合分子包含FGFR1 ECD和一个或多个融合伴侣之间的接头。在一些实施方案中，FGFR1 ECD包括信号肽。在一些实施方案中，信号肽包括SEQ ID NO：7的氨基酸序列。

在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子为约0.5mg/kg体重至约20mg/kg体重的范围内的量，诸如约8至约16mg/kg体重的范围内的量。在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子的治疗有效量是约8mg/kg体重的剂量，而在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子的治疗有效量是约16mg/kg体重的剂量(或者当使用1.11mL/mg*cm的消光系数来计算时，分别为约10mg/kg体重或约20mg/kg体重)。在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子的治疗有效量是约20mg/kg体重的剂量。在一些实施方案中，剂量可每周施用两次、每周施用一次、每隔一周施用一次、以每周一次和每隔一周一次之间的频率施用、每三周施用一次、每四周施用一次或每月施用一次。

在一些实施方案中，本发明还涉及剂量包。在一些实施方案中，提供了剂量包，所述剂量包包含选自以下的至少一种组分：(i)成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)胞外域(ECD)，(ii)成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)胞外域(ECD)融合分子，和(iii)选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、拓扑替康、VEGF拮抗剂、抗VEGF抗体、VEGF trap、贝伐单抗和索拉非尼中的至少一种另外的治疗剂；和向患者施用FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子和至少一种另外的治疗剂的说明书。在一些实施方案中，剂量包所含的说明书包括施用治疗有效量的FGFR1 ECD融合分子的说明。在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子的治疗有效量是约0.5mg/kg体重至约20mg/kg体重的范围内的量，诸如约8至约16mg/kg体重的范围内的量。在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子的治疗有效量是约8mg/kg体重的剂量。在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子的治疗有效量是约16mg/kg体重的剂量。在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子的治疗有效量是约20mg/kg体重的剂量。在一些实施方案中，剂量可一周施用两次、每周施用一次、每隔一周施用一次、以每周一次和每隔一周一次之间的频率施用、每三周施用一次、每四周施用一次或每月施用一次。

在一些实施方案中，剂量包包含FGFR1 ECD且不包含至少一种另外的治疗剂，例如，多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、拓扑替康、VEGF拮抗剂、抗VEGF抗体、VEGF trap、贝伐单抗或索拉非尼。在一些实施方案中，剂量包包含FGFR1 ECD融合分子且不包含至少一种另外的治疗剂，例如，多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、拓扑替康、VEGF拮抗剂、抗VEGF抗体、VEGFtrap、贝伐单抗或索拉非尼。在一些实施方案中，剂量包包含至少一种另外的治疗剂，但不包含FGFR1 ECD或FGFR1ECD融合分子。在一些实施方案中，剂量包包含：(i)FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子，和(ii)至少一种另外的治疗剂。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、拓扑替康,VEGF拮抗剂、抗VEGF抗体、VEGF trap、贝伐单抗或索拉非尼。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是多西他赛。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是培美曲塞。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是顺铂。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是紫杉醇。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是5-FU。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是长春新碱(viscristine)。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是贝伐单抗。在一些实施方案中，至少一种另外的治疗剂是索拉非尼。在一些实施方案中，剂量包包含至少两种另外的治疗剂，但不包含FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子。在一些实施方案中，至少两种另外的治疗剂选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、拓扑替康、VEGF拮抗剂、抗VEGF抗体、VEGF trap、贝伐单抗和索拉非尼。

在以上所描述的一些实施方案中，FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子的FGFR1 ECD部分包括选自SEQ ID NO：1至4的序列。在一些实施方案中，至少一种融合伴侣选自Fc、白蛋白和聚乙二醇。在一些实施方案中，至少一种融合伴侣是Fc。在一些实施方案中，Fc包括选自SEQ ID NO：8至10的氨基酸序列。在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子包括选自SEQID NO:5和SEQ ID NO:6的序列。在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子由选自SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6的序列组成。在一些实施方案中，至少一种融合伴侣是Fc和聚乙二醇。在一些实施方案中，至少一种融合伴侣是聚乙二醇。

在某些实施方案中，癌症是前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、肺癌、子宫内膜癌、头颈癌、喉癌、肝癌、肾癌、成胶质细胞瘤或胰腺癌。在某些实施方案中，癌症是肺癌。在某些实施方案中，癌症是肾癌。在某些实施方案中，癌症是结肠癌。在某些实施方案中，癌症是乳腺癌。在某些实施方案中，癌症是子宫内膜癌。在某些实施方案中，癌症是前列腺癌。

本文所描述的任何实施方案或其另外的治疗剂的任何组合应用于本文所描述的本发明的任何和所有方法。

附图简述

图1示出如实施例1中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用多西他赛、相继施用FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛和共同施用FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的小鼠中的平均肿瘤体积。

图2A-2B示出如实施例2中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用培美曲塞(62.5mg/kg剂量)或施用FGFR1-ECD.339-Fc和培美曲塞(62.5mg/kg剂量)的小鼠的平均肿瘤体积(A)和体重(B)。

图3A-3B示出如实施例2中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用培美曲塞(125mg/kg剂量)或施用FGFR1-ECD.339-Fc和培美曲塞(125mg/kg剂量)的小鼠的平均肿瘤体积(A)和体重(B)。

图4A-4B示出如实施例2中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用培美曲塞(250mg/kg剂量)或施用FGFR1-ECD.339-Fc和培美曲塞(250mg/kg剂量)的小鼠的平均肿瘤体积(A)和体重(B)。

图5示出如实施例3A中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用顺铂或施用FGFR1-ECD.339-Fc和顺铂的组合的小鼠中的平均肿瘤体积。

图6示出如实施例3B中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用紫杉醇或施用FGFR1-ECD.339-Fc和紫杉醇的组合的小鼠中的平均肿瘤体积。

图7示出如实施例3C中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用5-FU或施用FGFR1-ECD.339-Fc和5-FU的组合的小鼠中的平均肿瘤体积。

图8A-8B示出如实施例3D中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用多西他赛或以两种不同的剂量的多西他赛，3mg/kg(A)和10mg/kg(B)，施用FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的组合的小鼠中的平均肿瘤体积。

图9A-9C示出如实施例3E中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用长春新碱或以两种不同的剂量的长春新碱，从第1天开始1mg/kg(A)和从第19天开始1.5mg/kg(B)施用FGFR1-ECD.339-Fc和长春新碱的组合的小鼠中的平均肿瘤体积。还示出了从第19天开始施用1.5mg/kg的小鼠的平均体重(C)。

图10示出如实施例3F中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用卡铂、单独施用紫杉醇、施用卡铂和紫杉醇的组合和施用FGFR1-ECD.339-Fc、卡铂和紫杉醇的组合的小鼠中的平均肿瘤体积。

图11A-11E示出如实施例4A中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、施用5-FU(10mg/kg)和甲酰四氢叶酸(10mg/kg)的组合以及施用FGFR1-ECD.339-Fc、5-FU(10mg/kg)和甲酰四氢叶酸(10mg/kg)的组合的小鼠中的平均肿瘤体积(A)；单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、施用5-FU(20mg/kg)和甲酰四氢叶酸(20mg/kg)的组合以及施用FGFR1-ECD.339-Fc、5-FU(20mg/kg)和甲酰四氢叶酸(20mg/kg)的组合的小鼠中的平均肿瘤体积(B)；单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、施用5-FU(30mg/kg)和甲酰四氢叶酸(30mg/kg)的组合以及施用FGFR1-ECD.339-Fc、5-FU(30mg/kg)和甲酰四氢叶酸(30mg/kg)的组合的小鼠中的平均肿瘤体积(C)；单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用贝伐单抗和施用FGFR1-ECD.339-Fc和贝伐单抗的组合的小鼠中的平均肿瘤体积(D)；和单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、施用贝伐单抗、5-FU和甲酰四氢叶酸的组合以及施用FGFR1-ECD.339-Fc、贝伐单抗、5-FU和甲酰四氢叶酸的组合的小鼠中的平均肿瘤体积(E)。

图12A-12C示出如实施例4B中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用施用奥沙利铂加5-FU和甲酰四氢叶酸(LV)，以及以不同的剂量的奥沙利铂，5mg/kg(A)、10mg/kg(B)和15mg/kg(C)施用FGFR1-ECD.339-Fc和奥沙利铂加5-FU/LV的组合的小鼠中的平均肿瘤体积。

图13示出如实施例5中所描述，单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、施用多柔比星和紫杉醇的组合以及施用FGFR1-ECD.339-Fc、多柔比星和紫杉醇的组合的小鼠中的平均肿瘤体积。

图14示出单独施用FGFR1-ECD.339-Fc、单独施用激酶插入域受体(KDR)-ECD融合分子和施用FGFR1-ECD.339-Fc和KDR-ECD融合分子的组合的小鼠中的平均肿瘤体积。

详述

本文所用的章节标题仅出于组织的目的且不被解释为限制所描述的主题。

定义

除非另外定义，关于本发明所用的科学和技术术语应具有本领域中的普通技术人员所通常理解的含义。并且，除非上下文另外需要，单数的术语应包括复数，并且复数的术语应包括单数。

关于重组DNA所使用的某些技术、寡核苷酸合成、组织培养和转化(例如，电穿孔、脂质转染)、酶促反应和纯化技术是本领域中已知的。许多此类技术和程序尤其描述在例如，Sambrook等Molecular Cloning:A Laboratory Manual(分子克隆：实验室手册)(第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989))。并且，用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者的治疗的某些技术也是本领域中已知的。

在本申请中，除非另外说明，“或”的使用意为“和/或”。在多个从属权利要求的情况下，“或”的使用重新提及仅作为选择性的多于一个的前述独立权利要求或从属权利要求。同样，除非另外明确说明，术语诸如“元素”或“组分”涵盖组成一个单元的元素和组分和组成多于一个子单元的元素和组分二者。

如本文所用的，所有的数字是近似的，并且可由于测量误差和有效数字的舍入而有差异。某些测量的数量前“约”的使用包括由于样本杂质、测量误差、人为误差和统计差异以及有效数字的舍入而导致的变化。

如根据本公开内容所用的，除非另外指明，以下术语应被理解为具有以下含义：

术语“核酸分子”和“多核苷酸”可互换地使用，并且指核苷酸的聚合物。核苷酸的此类聚合物可包含天然的和/或非天然的核苷酸，并且包括但不限于，DNA、RNA和PNA。“核酸序列”指组成核酸分子或多核苷酸的核苷酸的线性序列。

术语“多肽”和“蛋白质”互换地使用以指氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。氨基酸残基的此类聚合物可包含天然的或非天然的氨基酸残基，并且包括但不限于，肽、寡肽、氨基酸残基的二聚体、三聚体和多聚体。全长蛋白质和其片段均为该定义所涵盖。该术语还包括多肽的表达后修饰，例如，糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。并且，为本发明的目的，“多肽”指包括修饰的蛋白质，所述修饰诸如对于天然序列缺失、添加和取代(通常在性质上是保守的)，只要蛋白质保持需要的活性。这些修饰可以是有意的，如通过定点诱变，或可以是偶然的，诸如通过产生蛋白质的宿主的突变或由于PCR扩增产生的错误。当多肽“由特定的氨基酸序列组成”时，其可仍包含翻译后修饰，诸如糖基化和唾液酸化。

术语“FGFR1胞外域”(“FGFR1 ECD”)包括全长FGFR1 ECD、FGFR1 ECD片段和FGFR1ECD变体。如本文所用的，术语“FGFR1 ECD”指FGFR1多肽，其缺少胞内域和跨膜域，具有或没有信号肽。在一些实施方案中，FGFR1 ECD是人全长FGFR1 ECD，其具有选自SEQ ID NO:1和2的氨基酸序列。如本文所用的，术语“全长FGFR1 ECD”指延伸至胞外域的最后氨基酸的FGFR1 ECD，并且可以包括或不包括N-末端信号肽。如本文所定义的，全长FGFR1 ECD的最后氨基酸在第353位。因此，人全长FGFR1 ECD可由对应于SEQ ID NO.:2(成熟形式)或对应于SEQ ID NO.:1(具有信号肽)的氨基酸序列组成。如本文所用的，术语“FGFR1 ECD片段”指从全长ECD的N和/或C末端缺失一个或多个残基并保持与FGF-2结合的能力的FGFR1 ECD。FGFR1 ECD片段可以包括或不包括N-末端信号肽。在一些实施方案中，FGFR1 ECD片段是具有对应于SEQ ID NO.:4(成熟形式)或对应于SEQ ID NO.:3(具有信号肽)的氨基酸序列的人FGFR1 ECD片段。

如本文所用的，术语“FGFR1 ECD变体”指含有氨基酸添加、缺失和取代并保持能够与FGF-2结合的FGFR1 ECD。此类变体可与亲代FGFR1 ECD具有至少90％、92％、95％、97％、98％或99％同一性。两个多肽的％同一性可通过相似性得分来测量，所述相似性得分通过使用确定相似性的具有缺省设置的Bestfit程序来比较两个多肽的氨基酸序列所确定。Bestfit使用Smith和Waterman,Advances in Applied Mathematics 2:482-489(1981)的局部同源性算法来寻找两个序列之间的最佳相似性片段。在一些实施方案中，FGFR1 ECD变体与SEQ ID NO：4的序列具有至少95％同一性。

具有与FGFR1 ECD多肽的参考氨基酸序列具有至少，例如，95％同一性的氨基酸序列的多肽是这样的多肽：其中除了该多肽序列可包括参考多肽的每100个氨基酸多达5个氨基酸改变之外，该多肽的氨基酸序列与参考序列相同。换言之，为获得具有与参考氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列的多肽，参考序列中多达5％的氨基酸残基可缺失或被另一氨基酸取代，或者多个氨基酸，多达参考序列中的总氨基酸残基的5％可被插入到参考序列中。参考序列的这些改变可发生在参考氨基酸序列的N-末端或C-末端位置或所述末端位置之间的任何地方，在参考序列中的残基中单独的散布，或在参考序列中成一个或多个连续的组。

作为实际问题，使用已知的计算机程序，诸如Bestfit程序可照惯常确定任何特定的多肽与例如由序列表中所列的核酸序列编码的氨基酸序列或多肽序列是否具有至少70％、80％、90％或95％同一性。当使用Bestfit或其他序列比对程序来确定特定的序列是否与例如根据本发明的参考序列具有95％同一性时，当然，设置参数从而在参考氨基酸序列的全长计算同一性的百分比，并且允许参考序列中的氨基酸残基的总数的多达5％的同源性中的空位。

如本文所用的，术语“hFGFR1-ECD.353”和“hFGFR1.353”可互换地使用以指对应于SEQ ID NO:1(具有信号肽)或对应于SEQ ID NO:2(不具有信号肽；成熟形式)的全长人FGFR1 ECD。

如本文所用的，术语“hFGFR1-ECD.339”和“hFGFR1.339”可互换地使用以指对应于SEQ ID NO:3(具有信号肽)或对应于SEQ ID NO:4(不具有信号肽；成熟形式)的人FGFR1ECD。

另外的hFGFR1 ECD描述在例如美国专利第7,678,890号中，为任何目的将所述专利的全部内容以引用的方式并入本文。

术语“FGFR1 ECD融合分子”指包含FGFR1 ECD和一个或多个“融合伴侣”的分子。在一些实施方案中，FGFR1 ECD和融合伴侣是共价连接的(“融合的”)。若融合伴侣也是多肽(“融合伴侣多肽”)，则FGFR1 ECD和融合伴侣多肽可以是连续的氨基酸序列的部分，且融合伴侣多肽可与FGFR1 ECD的N末端或C末端相连接。在这样的情况下，FGFR1 ECD和融合伴侣多肽可自编码FGFR1 ECD和融合伴侣多肽两者的编码序列被翻译为单一的多肽(“FGFR1ECD融合蛋白”)。在一些实施方案中，FGFR1 ECD和融合伴侣通过其他方式共价连接，诸如，例如，除肽键外的化学键。可使用将多肽与其他分子(例如，融合伴侣)共价连接的许多已知方法。在另外的实施方案中，FGFR1 ECD和融合伴侣可通过“接头”来融合，所述接头由至少一个氨基酸或化学部分组成。

在一些实施方案中，FGFR1 ECD多肽和融合伴侣是非共价连接的。在一些这样的实施方案中，可例如使用结合对(binding pair)将它们连接。示例性的结合对包括但不限于，生物素和亲和素或链霉亲和素、抗体和其抗原等。

示例性的融合伴侣包括但不限于，免疫球蛋白Fc结构域、白蛋白和聚乙二醇。一些示例性的Fc结构域的氨基酸序列示于SEQ ID NO：8至10。在一些实施方案中，与Fc融合的FGFR1 ECD被称作“hFGFR1 ECD-Fc”。在一些实施方案中，Fc结构域选自IgG1 Fc、IgG2 Fc、IgG3 Fc和IgG4 Fc。

如本文所用的，术语“hFGFR1-ECD.339-Fc”和“hFGFR1.339-Fc”可互换地使用以指选自SEQ ID NO：6(不具有信号肽，成熟形式)和SEQ ID NO：5(具有信号肽)的氨基酸序列。可利用hFGFR1-ECD.339-Fc治疗的非限制性的示例性癌症包括但不限于，非小细胞肺癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、头颈癌、前列腺癌、子宫内膜癌、肉瘤、小细胞肺癌、卵巢癌、卡波济氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、霍奇金氏病(Hodgkin’s disease)、白血病、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)、成神经细胞瘤(脑癌)、横纹肌肉瘤、维尔姆斯氏肿瘤(Wilms’tumor)、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、膀胱癌、睾丸癌、淋巴瘤、生殖细胞肿瘤、结肠和直肠癌、胃肠癌、甲状腺癌、多发性骨髓瘤、胰腺癌、间皮瘤、恶性胸膜间皮瘤、血液/淋巴癌、恶性腹膜间皮瘤、食管癌、肾细胞癌、多形性成胶质细胞瘤和肝癌。

术语“信号肽”指位于多肽的N末端的氨基酸残基的序列，其促进多肽从哺乳动物细胞中分泌。在将多肽从哺乳动物细胞中运出之后可将信号肽裂解，形成成熟蛋白质。信号肽可以是天然的或合成的，并且它们其对于其所连接的蛋白质可以是异源的或同源的。示例性的信号肽包括，但不限于，FGFR1信号肽，诸如，例如，SEQ ID NO：7的氨基酸序列。示例性的信号肽还包括来自异源蛋白的信号肽。“信号序列”指编码单一的肽的多核苷酸序列。在一些实施方案中，FGFR1 ECD缺少信号肽。在一些实施方案中，FGFR1 ECD包括至少一个信号肽，其可以是天然的FGFR1信号肽或异源的信号肽。

术语“载体”用于描述可经工程化以含有克隆的多核苷酸的多核苷酸或可在宿主细胞中扩增的多核苷酸。载体可包括以下元件中的一个或多个：复制起点、调节目标多肽的表达的一个或多个调控序列(诸如，例如，启动子和/或增强子)，和/或一种或多种可选择的标记基因(诸如，例如，抗生素抗性基因和可用于比色测定中的基因，例如，β-半乳糖苷酶)。术语“表达载体”指用于在宿主细胞中表达目标多肽的载体。

“宿主细胞”指可以是或已经是载体或分离的多核苷酸的受体的细胞。宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞。示例性的真核细胞包括哺乳动物细胞，诸如灵长类或非灵长类动物细胞；真菌细胞；植物细胞；和昆虫细胞。示例性的哺乳动物细胞包括但不限于，293和CHO细胞，和其衍生物，诸如分别为293-6E和DG44细胞。

如本文所用的术语“分离的”指已从在自然界中通常与其一起发现组分中的至少一些中分离的分子。例如，当多肽从产生其的细胞的组分中的至少一些中被分离时，多肽被称作“分离的”。在多肽在表达后由细胞分泌的情况中，从产生其的细胞中物理分离含有多肽的上清液被认为是“分离”多肽。相似地，当多核苷酸不是在自然界中在其中通常发现其的较大的多核苷酸(诸如，例如，在DNA多核苷酸的情况下，基因组DNA或线粒体DNA)的部分，或从产生其的细胞的组分的至少一些中分离时(例如，在RNA多核苷酸的情况下)，多核苷酸被称作“分离的”。这样，含于宿主细胞内的载体中的DNA多核苷酸可被称作“分离的”，只要在自然界中该多核苷酸未发现于该载体。

术语“抗肿瘤组合物”指用于治疗癌症的组合物，其包含至少一种活性治疗剂，例如，“抗癌剂”。治疗剂(抗癌剂)的例子包括但不限于，例如，化学治疗剂，生长抑制剂、细胞毒性剂、用于放射疗法的药剂、抗血管生成剂、凋亡剂、抗微管蛋白剂和治疗癌症的其他药剂，诸如抗VEGF抗体(例如，贝伐单抗、)、抗HER2抗体(例如，曲妥单抗(trastuzumab)、)、抗-CD20抗体(例如，利妥西单抗(rituximab)、)、表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂(例如，酪氨酸激酶抑制剂)、HER1/EGFR抑制剂(例如，厄洛替尼(erlotinib))、血小板衍生生长因子抑制剂(例如，(甲磺酸伊马替尼))、COX-2抑制剂(例如，塞来昔布(celecoxib))、干扰素、细胞因子、与以下靶标中的一种或多种结合的拮抗剂(例如，中和抗体)：ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-β、BlyS、APRIL、BCMA或VEGF受体、TRAIL/Apo2和其他生物活性剂和有机化学剂等。其组合也包括在本发明中。

“化学治疗剂”指用于治疗癌症的化学化合物。化学治疗剂的例子包括烷化剂，诸如噻替派(thiotepa)和环磷酰胺烷基磺酸盐诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶诸如benzodopa、卡波醌(carboquone)、meturedopa和uredopa；乙撑亚胺类和甲基蜜胺类，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺、三亚乙基膦酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和六甲蜜胺(trimethylomelamine)；多聚乙酰类(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙素；桦木酸；喜树碱(包括合成的类似物拓扑替康CPT-11(依立替康(irinotecan)，)、乙酰基喜树碱，莨菪亭(scopolectin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bzelesin)合成的类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷(teniposide)；念珠藻环肽(cryptophycin)(特别是念珠藻环肽1和念珠藻环肽8)；多拉司他汀(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成的类似物，KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodctyin)；海绵素(spongistatin)；氮芥诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、cholophosphamide、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑(melphalan)、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀(prednmustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素诸如烯二炔抗生素(例如，加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素γI和加利车霉素ωI1(参见，例如，Nicolaou等,Angew.Chem Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；CDP323，口服的α-4整联蛋白抑制剂；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A、埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新抑癌蛋白生色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素生色团)、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素、authrarnycin、偶氮丝氨酸、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉-多柔比星、盐酸多柔比星脂质体注射剂多柔比星脂质体TLC D-99聚乙二醇化的多柔比星脂质体和脱氧多柔比星)，表柔比星(epirubcin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素诸如丝裂霉素C、麦考酚酸、诺拉霉素(nogalarnycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星(streotizocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicn)；抗代谢物诸如氨甲蝶呤、吉西他滨(gemcitabine)培美曲塞喃氟啶(tegafur)卡培他滨(capecitabine)埃博霉素(epothilone)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物诸如二甲叶酸(denopterin)、氨甲蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物诸如安西他滨(anctabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖孢苷(cytarabine)、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷；雄激素诸如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺诸如氨鲁米特(aminoglutethmide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trlostane)；叶酸补充剂诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶；bestrabucil；比生群(bisantrene)；edatraxate；defofamine；秋水仙胺；地吖醌；elformithine；依利醋铵；埃博霉素；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidainine)；美坦生类(maytansinods)诸如美登素(maytansine)和美登木素(ansamitocin)；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidanmol)；胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubcin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖复合物(JHSNatural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；利索新(rhzoxin)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2，2′,2′-三氯三乙胺；单端孢霉烯类(尤其是T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；噻替派(thotepa)；紫杉烷，例如，紫杉醇白蛋白-工程化的紫杉醇纳米颗粒制剂(ABRAXANE^TM)，和多西他赛苯丁酸氮芥；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨蝶呤；铂剂诸如顺铂、奥沙利铂(例如，)和卡铂；长春花，其阻止微管蛋白聚合形成微管，包括长春花碱长春新碱长春地辛和长春瑞滨(vinorelbine)依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；甲酰四氢叶酸；米托蒽醌(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；柔红霉素；氨基蝶呤；伊班膦酸盐；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维甲酸类诸如维甲酸，包括贝沙罗汀(bexarotene)二碳磷酸盐类诸如氯膦酸盐(例如，或)、依替膦酸盐(etidronate)NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐阿伦膦酸盐氨羟二磷酸二钠替鲁膦酸盐(tiludronage)或利塞膦酸盐(risedronate)曲沙他滨(troxactabine)(1,3-二氧戊环核苷酸胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，尤其是抑制参与异常细胞增殖的信号传导通路中的基因表达的那些，诸如，例如，PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗诸如疫苗和基因治疗疫苗，例如，疫苗、疫苗和疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如，)；rmRH(例如，)；BAY439006(索拉非尼，Bayer)；SU-11248(舒尼替尼(sunitinib)，Pfizer)；哌立福辛(perifosine)，COX-2抑制剂(例如，塞来昔布或依托考昔(etoricoxib))，蛋白体抑制剂(例如，PS341)；硼替佐米(bortezomib)CCI-779；替吡法尼(tipifarnib)(R11577)；索拉非尼(orafenib)，ABT510；Bcl-2抑制剂诸如奥利默森钠(oblimersen sodium)匹杉琼(pixantrone)；EGFR抑制剂(参见以下定义)；酪氨酸激酶抑制剂(参见以下定义)；丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂诸如雷帕霉素(西罗莫司，)；法呢酰基转移酶抑制剂诸如洛那法尼(lonafarnib)(SCH 6636,SARASAR^TM)；和以上的任何的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及以上的两种或多种的组合诸如CHOP，环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和强的松龙(prednisolone)的组合疗法的缩写；和FOLFOX，利用与5-FU和甲酰四氢叶酸组合的奥沙利铂(ELOXATIN^TM)的治疗方案的缩写。

如本文所定义的化学治疗剂包括“抗激素剂”或“内分泌治疗剂”，其起作用以调节、降低、阻断或抑制可促进癌症的生长的激素的作用。它们可以是激素本身，包括但不限于，具有混合的激动剂/拮抗剂谱的抗雌激素，包括他莫昔芬(tamoxifen)4-羟基他莫昔芬、托瑞米芬(toremifene)吲哚昔酚(idoxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、雷洛昔芬(raloxifene)曲沃昔芬(trioxifene)、keoxifene和选择性雌激素受体调节剂(SERM)诸如SERM3；不具有激动剂性质的纯抗雌激素，诸如氟维司群(fulvestrant)和EM800(这样的药剂可阻止雌激素受体(ER)二聚化，抑制DNA结合，提高ER转换和/或抑制ER水平)；芳香酶抑制剂，包括甾族芳香酶抑制剂诸如福美坦(formestane)和依西美坦(exemestane)和非甾族芳香酶抑制剂诸如阿那曲唑(anastrazole)来曲唑(letrozole)和氨鲁米特(aminoglutethimide)，和其他芳香酶抑制剂包括伏氯唑(vorozole)醋酸甲地孕酮法倔唑(fadrozole)和4(5)-咪唑；促黄体素释放激素激动剂，包括亮丙瑞林(leuprolide)(和)、戈舍瑞林(goserelin)、布舍瑞林(buserelin)和曲普瑞林(tripterelin)；性甾体，包括孕酮诸如醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮，雌激素类诸如乙烯雌酚和普雷马林(premarin)，和雄激素类/维甲酸类诸如氟羟甲睾酮，所有反式视黄酸和芬维A胺；奥那司酮(onapristone)；抗孕酮；雌激素受体降低调节剂(ERD)；抗雄激素类诸如氟他米特(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)和比卡鲁胺(bicalutamide)；和以上任何的药学上可接受的盐、酸或衍生物；以及以上的两种或多种的组合。

“血管生成因子或剂”指刺激血管的发育例如，促进血管生成、内皮细胞生长、血管的稳定性和/或血管发生等的生长因子。例如，血管生成因子，包括但不限于，例如，VEGF和VEGF家族的成员(VEGF-B、VEGF-C和VEGF-D)、PlGF、PDGF家族、成纤维细胞生长因子家族(FGF)、TIE配体(血管生成素)，肝配蛋白(ephrin)、δ-样配体4(DLL4)、del-1、成纤维细胞生长因子：酸性的(aFGF)和碱性的(bFGF)、卵泡抑素、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、肝细胞生长因子(HGF)/散射因子(SF)、白介素-8(IL-8)、瘦素(leptin)、肝素结合细胞因子(midkine)、神经毡蛋白(neuropilin)、胎盘生长因子、血小板衍生内皮细胞生长因子(PD-ECGF)、血小板衍生生长因子，尤其是PDGF-BB或PDGFR-β、多效蛋白(PTN)、颗粒蛋白前体、增殖蛋白、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等。还将包括加速创伤愈合的因子，诸如生长激素、胰岛素样生长因子I(IGF-I)、VIGF、表皮生长因子(EGF)、CTGF和其家族的成员，和TGF-α和TGF-β。参见例如，Klagsbrun和D’Amore(1991)Annu.Rev.Physiol.53：217-39；Streit和Detmar(2003)Oncogene 22∶3172-3179；Ferrara&Alitalo(1999)Nature Medicine 5(12):1359-1364；Tonini等(2003)Oncogene 22：6549-6556(例如，表1列出了已知的血管生成因子)；和Sato(2003)Int.J.Clin.Oncol.8:200-206。

“抗血管生成剂”或“血管生成抑制剂”指直接地或间接地抑制血管生成、血管发生或不需要的血管渗透性的小分子量物质、多核苷酸(包括例如，抑制性RNA(RNAi或siRNA))、多肽、分离的蛋白质、重组蛋白、抗体或其缀合物或融合蛋白。应理解抗血管生成剂包括结合血管生成因子或其受体并阻遏其血管生成活性的那些药剂。例如，抗血管生成剂是如上所定义的血管生成剂的抗体或其他拮抗剂，例如，与VEGF-A结合的融合蛋白诸如ZALTRAP^TM(阿柏西普(Aflibercept))、VEGF-A的抗体诸如(贝伐单抗)或VEGF-A受体(例如，KDR受体或Flt-1受体)的抗体，抗PDGFR抑制剂诸如(甲磺酸伊马替尼)，阻断VEGF受体信号传导的小分子(例如，PTK787/ZK2284、SU6668、/SU11248(苹果酸舒尼替尼)、AMG706或于例如国际专利申请WO 2004/113304中所描述的那些)。抗血管生成剂还包括天然的血管生成抑制剂，例如，血管抑素(angiostatin)、内皮他丁(endostatin)等。参见例如，Klagsbrun和D’Amore(1991)Annu.Rev.Physiol.53：217-39；Streit和Detmar(2003)Oncogene 22:3172-3179(例如，表3列出了恶性黑素瘤中的抗血管生成疗法)；Ferrara&Alitalo(1999)Nature Medicine 5(12):1359-1364；Tonini等(2003)Oncogene 22:6549-6556(例如，表2列出了已知的抗血管生成因子)；和Sato(2003)Int.J.Clin.dOncol.8:200-206(例如，表1列出了临床试验中所用的抗血管生成剂)。

“多西他赛”指1,7β,10β-三羟基-9-氧-5β,20-环氧紫杉烷-11-烯-2α,4,13α-三基4-乙酸酯2-苯甲酸酯13-{(2R,3S)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-羟基-3-苯基丙酸酯}，在一些实施方案中，其可以商品名出售。在一些实施方案中，多西他赛对于治疗选自乳腺癌和非小细胞肺癌的至少一种癌症是有效的。可用多西他赛治疗的非限制性的示例性的癌症包括乳腺癌、结直肠癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌、肾癌、胃癌、头颈癌和黑素瘤。

“紫杉醇”指(2α,4α,5β,7β,10β,13α)-4,10-二(乙酰氧基)-13-{[(2R,3S)-3-(苯甲酰氨基)-2-羟基-3-苯基丙酰基]氧基}-1,7-二羟基-9-氧-5,20-环氧紫杉烷-11-烯-2-基苯甲酸酯，在一些实施方案中，其可以商品名来出售。可用紫杉醇治疗的非限制性的示例性的癌症包括乳腺癌、肺癌和卡波济氏肉瘤。

“卡铂”指顺-二氨(环丁烷-1,1-二羧酸二乙酯-O,O')铂(II)，在一些实施方案中，其可以商品名来出售。可用紫杉醇治疗的非限制性的示例性癌症包括卵巢癌、非小细胞肺癌、睾丸癌、胃癌和膀胱癌。

“奥沙利铂”指[(1R,2R)-环己烷-1,2-二氨](乙二酸-O,O')铂(II)，在一些实施方案中，其可以商品名来出售。可用奥沙利铂治疗的非限制性的示例性的癌症包括结直肠癌、胃癌和卵巢癌。

“顺铂”指(SP-4-2)-二氯二氨合铂。可用顺铂治疗的非限制性的示例性的癌症包括肉瘤、小细胞肺癌、卵巢癌、膀胱癌、睾丸癌、淋巴瘤和生殖细胞肿瘤。

“长春新碱”指甲基(1R,9R,10S,11R,12R,19R)-11-(乙酰氧基)-12-乙基-4-[(13S,15S,17S)-17-乙基-17-羟基-13-(甲氧羰基)-1,11-二氮杂四环[13.3.1.0^4,12.0^5,10]十九-4(12),5,7,9-四烯-13-基]-8-甲酰基-10-羟基-5-甲氧基-8,16-二氮杂五环[10.6.1.0^1,9.0^2,7.0^16,19]十九-2,4,6,13-四烯-10-羧酸酯，在一些实施方案中，其可以商品名来出售。可用长春新碱治疗的非限制性的示例性的癌症包括霍奇金氏病、白血病、非霍奇金氏淋巴瘤、成神经细胞瘤、横纹肌肉瘤、急性成淋巴细胞性白血病和维尔姆斯氏肿瘤。

“培美曲塞”指(S)-2-[4-[2-(4-氨基-2-氧-3,5,7-三氮杂二环[4.3.0]九-3,8,10-三烯-9-基)乙基]苯甲酰基]氨基戊二酸，在一些实施方案中，其可以商品名出售。可用培美曲塞治疗的非限制性的示例性的癌症包括非小细胞肺癌、间皮瘤和食管癌。

“多柔比星”指(8S,10S)-10-(4-氨基-5-羟基-6-甲基-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-6,8,11-三羟基-8-(2-羟基乙酰基)-1-甲氧基-7,8,9,10-四氢并四苯-5,12-二酮，在一些实施方案中，其可以商品名出售。可用多柔比星治疗的非限制性的示例性的癌症包括膀胱癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、甲状腺癌、软组织肉瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金氏病、白血病、非霍奇金氏淋巴瘤、成神经细胞瘤、肉瘤和维尔姆斯氏肿瘤。

“5-FU”和“5-氟尿嘧啶”指5-氟-1H-嘧啶-2,4-二酮，在一些实施方案中，其可以商品名出售。可用5-FU治疗的非限制性的示例性的癌症包括结直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、头颈癌、肝癌和卵巢癌。

“甲酰四氢叶酸”也称作亚叶酸，且指(S)-2-[4-[(2-氨基-5-甲酰基-4-氧-5,6,7,8-四氢-1H-蝶啶-6-基)甲氨基]苯甲酰基]氨基戊二酸。在一些实施方案中，甲酰四氢叶酸与5-氟尿嘧啶一起施用。

如本文所用的术语“VEGF”或“VEGF-A”指165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子和相关的121个、189个和206个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子，如由Leung等(1989)Science 246：1306和Houck等(1991)Mol.Endocrin,5:1806所描述的，以及天然存在的等位基因形式和经加工的形式。术语“VEGF”还指来自非人物种诸如小鼠、大鼠或灵长类的VEGF。有时通过诸如用于人VEGF的hVEGF、用于鼠VEGF的mVEGF等术语来指示来自特定物种的VEGF。术语“VEGF”还用于指包含165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子的第8位至第109位氨基酸或第1位至第109位氨基酸的多肽的截短形式。对于本申请中的VEGF的任何此类形式可例如通过“VEGF(8-109)”、“VEGF(1-109)、“VEGF-A₁₀₉”或“VEGF165”来标识。“截短”的天然VEGF的氨基酸位置按天然的VEGF序列中所指定的来编号。例如，截短的天然VEGF中的第17位氨基酸(蛋氨酸)也是天然VEGF的第17位(蛋氨酸)。截短的天然VEGF具有对于KDR和Flt-1受体与天然VEGF相当的结合亲和力。

“VEGF拮抗剂”指能够中和、阻断、抑制、废除、降低或干扰VEGF活性的分子，所述VEGF活性包括但不限于，其与一种或多种VEGF受体的结合。VEGF拮抗剂包括但不限于，与VEGF特异性结合从而隔绝其与一种或多种受体结合的抗VEGF抗体和其抗原结合片段、受体分子和衍生物，抗VEGF受体抗体、VEGF受体拮抗剂诸如VEGF酪氨酸激酶的小分子抑制剂和与VEGF结合的免疫粘附素诸如VEGF trap(例如，阿柏西普)。如本文所用的，术语“VEGF拮抗剂”尤其包括与VEGF结合并能够中和、阻断、抑制、废除、降低或干扰VEGF活性的分子，包括抗体、抗体片段、其他结合多肽、肽和非肽小分子。这样，术语“VEGF活性”尤其包括VEGF介导的VEGF的生物活性。

如本文所用的术语“VEGF trap”意为蛋白质，诸如与VEGF结合并能够中和、阻断、抑制、废除、降低或干扰VEGF活性的融合分子。VEGF trap的例子是阿柏西普。

术语“抗VEGF抗体”或“与VEGF结合的抗体”指能够以足够的亲和力和特异性与VEGF结合的抗体，从而该抗体用作靶向VEGF的诊断和/或治疗剂。抗VEGF抗体在裸鼠中抑制多个人肿瘤细胞系的生长(Kim等,Nature 362：841-844(1993)；Warren等，J.Clin.Invest.95:1789-1797(1995)；等，Cancer Res.56：4032-4039(1996)；Melnyk等,Cancer Res.56：921-924(1996))且在缺血性视网膜疾患的模型中还抑制眼内血管生成。Adamis等，Arch.Ophthalmol.114∶66-71(1996)。例如，抗VEGF抗体可在靶向和干扰涉及VEGF活性的疾病或病症中用作治疗剂。参见例如，美国专利6,582,959、6,703,020；WO98/45332；WO 96/30046；WO94/10202、WO2005/044853；EP 0666868B1；美国专利申请20030206899、20030190317、20030203409、20050112126、20050186208和20050112126；Popkov等，Journal of Immunological Methods 288:149-164(2004)；和WO2005012359。所选择的抗体将通常具有对于VEGF的足够强的结合亲和力。例如，抗体可以100nM-1pM的K_d值结合hVEGF。抗体亲和力可例如通过基于表面等离子体共振的测定(诸如如PCT申请公布第WO2005/012359号中所描述的BIAcore测定)；酶联免疫吸附测定(ELISA)；和竞争测定(例如，RIA的)来确定。还可对抗体进行其他生物活性测定，例如，以评估其作为治疗剂的效力。此类测定是本领域中已知的且取决于靶抗原和抗体的预期用途。例子包括HUVEC抑制测定；肿瘤细胞生长抑制测定(例如，如WO 89/06692中所描述的)；抗体依赖性细胞毒性(ADCC)测定和补体介导细胞毒性(CDC)测定(美国专利5,500,362)；和拮抗活性或血细胞生成测定(参见WO 95/27062)。抗VEGF抗体将通常不与其他VEGF同源物诸如VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或VEGF-E结合，或不与其他生长因子诸如PlGF、PDGF或bFGF结合。

在一个实施方案中，抗VEGF抗体包括与由杂交瘤ATCC HB 10709所产生的单克隆抗VEGF抗体A4.6.1结合相同的表位的单克隆抗体；重组人源化抗VEGF单克隆抗体(参见Presta等(1997)Cancer Res.57：4593-4599)，包括但不限于称作“贝伐单抗”的抗体，也称作“rhuMAb VEGF”或目前是商业上可获得的。可利用贝伐单抗治疗的非限制性的示例性的癌症包括非小细胞肺癌、结直肠癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌、多形性成胶质细胞瘤、小儿骨肉瘤、胃癌和胰腺癌。贝伐单抗包含突变的人IgG₁框架区和来自阻断人VEGF与其受体的结合的鼠抗体A.4.6.1的抗原结合互补决定区。贝伐单抗和其他人源化抗VEGF抗体还描述于美国专利第6,884,879号和第7,169,901号中。另外的抗VEGF抗体描述于PCT申请公布第WO2005/012359号和第WO2009/073160号；美国专利第7,060,269号、第6,582,959号、第6,703,020号；第6,054,297号；WO98/45332；WO 96/30046；WO94/10202；EP 0666868B1；美国专利申请公布第2006009360号、第20050186208号、第20030206899号、第20030190317号、第20030203409号和第20050112126号；以及Popkov等,Journal of Immunological Methods 288：149-164(2004)。

术语“受治疗者”和“患者”在本文互换地使用以指哺乳动物。在一些实施方案中，受治疗者或患者是人。在其他实施方案中，也提供了治疗其他哺乳动物的方法，所述其他哺乳动物包括但不限于，啮齿类、猿猴类、猫科类、犬类、马类、牛类、猪类、牛类、山羊类、哺乳动物实验室动物、哺乳动物家畜、哺乳动物运动动物和哺乳动物宠物。

如本文所用的，“癌症”和“肿瘤”是可互换的术语，指动物中的任何异常细胞或组织生长或增殖。如本文所用的，术语“癌症”和“肿瘤”涵盖实体癌和血液/淋巴癌并且还涵盖恶性、恶性前和良性生长，诸如发育异常。癌症的例子包括但不限于，癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。此类癌症的更具体的非限制性例子包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食管癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、非小细胞肺癌、肺的腺癌、肺的鳞状细胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney cancer)、肾癌(renal cancer)、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑素瘤和多种类型的头颈癌。

如本文所用的，“治疗”包括用于哺乳动物(包括人)中的病症的治疗剂的任何施用或应用，且包括抑制病症或病症的进展，抑制或减缓病症或其进展、阻止其发展、部分或完全减轻病症或治愈病症，例如，通过引起衰退、或重建或修复丢失的、缺少的或缺陷的功能；或刺激无效的进程。在一些实施方案中，“治疗”指临床干预以试图改变正在被治疗的个体或细胞的自然进程，且可进行以用于预防或在临床病理过程中进行。治疗的期望作用包括防止疾病的发生或复发、症状的减轻、疾病的任何直接或间接的病理结果的减少、防止转移、降低疾病进展的速度、改善或减轻疾病状态和缓解或改善的预后。

分子或分子的组合的“有效量”或“治疗有效量”意为当单独给药或与其他治疗组合给药时在受治疗者的至少一个亚群中足以治疗病症和/或抑制肿瘤细胞的生长的量。在某些实施方案中，治疗有效量指以必要的剂量并持续必要的时间段而有效达到期望的治疗或预防结果的量。本发明的FGFR1融合蛋白的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及FGFR1融合蛋白在个体中引起期望的应答的能力的因素而不同。治疗有效量还是其中FGFR1融合蛋白的任何毒性或有害作用远远不及治疗有益效果的量。在癌症的情况下，药物的有效量可降低癌细胞的数目；降低肿瘤大小；抑制(即，减缓至某种程度并通常停止)癌细胞浸润到周围器官；抑制(即，减缓至某种程度并通常停止)肿瘤转移；在某种程度抑制肿瘤生长；允许肿瘤的治疗，和/或在某种程度减轻与疾患相关的一种或多种症状。药物达到可能阻止生长和/或杀死生存的癌细胞的程度，其可为细胞生长抑制的和/或细胞毒性的。

“预防有效量”指以必要的剂量并持续必要时间段而有效达到期望的预防结果的量。通常但不必须地是，因为预防剂量在疾病之前或疾病的早期阶段用于受治疗者中，所以预防有效量将小于治疗有效量。

术语“抑制(inhibition)”或“抑制(inhibit)”指降低或终止任何表型特征或指降低或终止该特征的发生、程度或可能性。非限制性的示例性的抑制包括肿瘤生长的抑制。

在本文中，“共同”给药指两种治疗分子在8小时时间段的施用。在一些实施方案中，两种治疗分子同时施用。若每种治疗分子的剂量的至少一部分在1小时内施用，则两种治疗分子被认为同时(即，同时地)施用。若至少一个剂量被共同施用，即使一个或多个其他剂量未被共同施用，则两种治疗分子共同施用。在一些实施方案中，共同施用包括这样的给药方案，在停止一种或多种其他治疗分子的施用后一种或多种治疗分子的施用继续进行。

与一种或多种另外的治疗剂“组合”施用包括以任何顺序的共同(包括同时)和连续(即，顺序)施用。

“药学上可接受的载体”指用于与治疗剂一起构成用于施用于受治疗者的“药物组合物”的本领域中常用的非毒性的固体、半固体或液体填充物、稀释剂、包封材料、制剂助剂或载体。药学上可接受的载体在所采用的剂量和浓度时对接受者无毒性并与制剂的其他成分相容。药学上可接受的载体适合于所采用的制剂。例如，若治疗剂将以口服施用，载体可以是凝胶胶囊。若治疗剂将以皮下施用，载体理想地对皮肤为非过敏性的并不会导致注射部位反应。

治疗组合物和方法

使用与其他治疗剂组合的FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子治疗癌症的方法

本发明的特征在于成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)胞外域(ECD)或FGFR1 ECD融合分子与一种或多种另外的抗癌疗法的组合和此类组合用于癌症治疗的用途。另外的抗癌疗法的例子包括但不限于，外科手术、放射疗法(放疗)、生物疗法、免疫疗法和化学疗法或这些疗法的组合。此外，细胞毒性剂、抗血管生成剂和抗增殖剂可与FGFR1 ECD或FGFR1ECD融合分子组合使用。在任何所述方法和用途中的某些方面，本发明提供了治疗癌症，所述治疗癌症通过向被诊断患有或罹患先前未治疗的癌症的受治疗者施用治疗有效量的FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和一种或多种化学治疗剂来进行。多种化学治疗剂可用于本发明的组合治疗方法和用途中。本文在“定义”和“发明概述”中提供了所涵盖的化学治疗剂的示例性和非限制性列表。在另一方面，本发明提供了治疗癌症，所述治疗癌症通过向被诊断患有先前未治疗的癌症的受治疗者施用治疗有效量的FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和一种或多种抗血管生成剂来进行。在另一方面，本发明提供了治疗癌症，所述治疗癌症通过向被诊断患有先前未治疗的癌症的受治疗者施用治疗有效量的FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和一种或多种VEGF拮抗剂来进行。在又一个另外的方面，本发明提供了治疗癌症，所述治疗癌症通过向被诊断患有先前未治疗的癌症的受治疗者施用与一种或多种化学治疗剂组合的治疗有效量的FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和一种或多种VEGF拮抗剂来进行。在一些实施方案中，一种或多种VEGF拮抗剂是抗VEGF抗体和/或VEGFtrap。

在一个例子中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用与选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、索拉非尼、依托泊苷、拓扑替康、VEGF拮抗剂、抗VEGF抗体、VEGF trap和贝伐单抗中的至少一种另外的治疗剂组合的FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1 ECD和/或FGFR1ECD融合分子和多西他赛。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和培美曲塞。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和紫杉醇。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和顺铂。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和长春新碱。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和5-FU。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和依托泊苷。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和拓扑替康。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和VEGF拮抗剂。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和抗VEGF抗体。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和VEGFtrap。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和贝伐单抗。在一些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子的至少一个剂量与至少一种另外的治疗剂的至少一个剂量共同施用。在一些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子的至少一个剂量与至少一种另外的治疗剂的至少一个剂量同时(即，同时地)施用。在一些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子的至少一个剂量与至少两种另外的治疗剂的至少一个剂量共同施用或同时施用。在一些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子的至少一个剂量与至少三种另外的治疗剂的至少一个剂量共同施用或同时施用。在另一个例子中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用与选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞和依托泊苷、拓扑替康、VEGF拮抗剂、抗VEGF抗体、VEGF trap、索拉非尼和贝伐单抗中的至少一种另外的治疗剂组合的FGFR1-ECD.339-Fc。在一些实施方案中，提供了治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛。在一些实施方案中，FGFR1-ECD.339-Fc的至少一个剂量和至少一种另外的治疗剂的至少一个剂量共同施用。在一些实施方案中，FGFR1-ECD.339-Fc的至少一个剂量和至少一种另外的治疗剂的至少一个剂量同时施用。

将包含FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子(例如，FGFR1-ECD.339-Fc)的药物组合物以治疗有效量施用以用于特定的适应症。治疗有效量通常取决于正在被治疗的受治疗者的体重、其身体状况或健康状况、待治疗的病症的范围，和/或正在被治疗的受治疗者的年龄。通常，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子(例如，FGFR1-ECD.339-Fc)将以每剂量约50μg/kg体重至约100mg/kg体重的范围内的量来施用。任选地，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子(例如，FGFR1-ECD.339-Fc)可以每剂量约100μg/kg体重至约30mg/kg体重的范围内的量来施用。还任选地，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子(例如，FGFR1-ECD.339-Fc)可以每剂量约0.5mg/kg体重至约20mg/kg体重的范围内的量来施用。在某些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子(例如，FGFR1-ECD.339-Fc)以约8mg/kg体重至约20mg/kg体重的剂量来施用。在一些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子(例如，FGFR1-ECD.339-Fc)以约8mg/kg体重、约10mg/kg体重、约11mg/kg体重、约12mg/kg体重、约13mg/kg体重、约14mg/kg体重、约15mg/kg体重、约16mg/kg体重、约17mg/kg体重、约18mg/kg体重、约19mg/kg体重或约20mg/kg体重的剂量来施用。FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子还可以范围从以上剂量中的一个至另一个来施用。在一些实施方案中，剂量可每周施用两次、每周施用一次、每隔一周施用一次、以每周一次和每隔一周一次之间的频率施用、每三周施用一次、每四周施用一次或每月施用一次。

在某些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子的剂量可取决于所用的消光系数(EC)以两种方式来计算。根据是否考虑蛋白质的糖基化消光系数不同。在一个实施方案中，基于FGFR1-ECD.339-Fc的氨基酸组成的消光系数，例如为1.42mL/mg*cm。在另一个实施方案中，当考虑FGFR1-ECD.339-Fc的碳水化合物部分以及氨基酸部分时，消光系数是1.11mL/mg*cm。如表1中所示，使用1.11mL/mg*cm的EC对FGFR1-ECD.339-Fc剂量的计算使所计算的剂量增加了28％。虽然使用两个消光系数计算的剂量是不同的，但是摩尔浓度或施用的药物的实际的量是相同的。除非另外说明，本文所公开的剂量是使用不考虑糖基化的消光系数各自计算的。表1中示出这些剂量与利使用考虑FGFR1-ECD.339-Fc的糖基化的消光系数计算的那些相比较如何。如从表1中可见，本文使用1.42mL/mg*cm的EC的约8mg/kg(例如，7.8和8.0)的剂量对应于当使用1.11mL/mg*cm的EC计算的约10mg/kg(例如，10.0和10.2)的剂量。本文使用1.42mL/mg*cm的EC的约16mg/kg(例如，15.6和16.0mg/kg)的剂量对应于当使用1.11mL/mg*cm的EC计算的约20mg/kg(例如，20.0和20.5)的剂量。如以上“定义”章节中所说明的，本文所提供的测量的数字是近似的且涵盖具有经舍入的额外有效数字的值。例如，8mg/kg涵盖具有两个有效数字的值，诸如7.6、7.8、8.0、8.2、8.4和8.45，其每一个四舍五入为8。相似地，值诸如16mg/kg涵盖具有三个四舍五入为16的有效数字的值，诸如，例如，15.6和16.0。

表1 FGFR1-ECD.339-Fc剂量的转换

^a剂量以mg/kg示出

可按需要向受治疗者施用包含FGFR1 ECD、FGFR1 ECD融合分子和/或至少一种另外的治疗剂的药物组合物。在某些实施方案中，向受治疗者一次或多次施用有效剂量的治疗分子。在不同的实施方案中，向受治疗者至少每两月一次、至少一月一次、至少一月两次、一周一次、一周两次或一周三次施用有效剂量的治疗分子。在不同的实施方案中，向受治疗者施用有效剂量的治疗分子持续至少一周、至少一个月、至少三个月、至少六个月或至少一年。

在某些实施方案中，FGFR1 ECD、FGFR1 ECD融合分子和至少一种另外的治疗剂的组合施用包括使用分开的制剂或单一的药物制剂的共同施用(包括同时施用)，以及以任意顺序的连续施用。任选地，当两种(或全部)活性剂同时发挥其生物活性时存在时间段。与FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子(例如，FGFR1-ECD.339-Fc)组合施用的治疗有效量的治疗剂将在医师或兽医的指导下进行。进行剂量施用和调整以达到待治疗的病症的最大程度的处理。剂量还将取决于诸如待使用的治疗剂的类型、正在被治疗的特定的患者、疾病的状态和治疗方案所需要的攻击性的因素。

在某些实施方案中，用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子(例如，FGFR1-ECD.339-Fc)和VEGF拮抗剂的组合来治疗患者。在一些实施方案中，VEGF拮抗剂是VEGFtrap(例如，阿柏西普)。在一些实施方案中，VEGF拮抗剂是抗VEGF抗体。在一些实施方案中，VEGF抗体是贝伐单抗。贝伐单抗的一个示例性剂量在约0.05mg/kg至约20mg/kg的范围内。这样，可向患者施用约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg(或其任何组合)中的一个或多个剂量。这样的剂量可间歇地施用，例如，每周、每两周或每三周施用。

在一些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子(例如，FGFR1-ECD.339-Fc)与另一种治疗剂诸如化学治疗剂或抗血管生成剂以该治疗剂的推荐的或规定的剂量和/或频率组合施用。

施用途径和载体

在一些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子可静脉内和/或皮下施用。在一些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子可通过另一途径来施用，诸如动脉内、胃肠外、鼻内、肌肉内、心脏内、心室内、气管内、口腔、直肠、腹膜内、皮内、局部、透皮或鞘内途径，或另外通过植入或吸入来施用。在不同的实施方案中，至少一种另外的治疗剂可通过多种途径来在体内施用，包括静脉内、动脉内、皮下、胃肠外、鼻内、肌肉内、心脏内、心室内、气管内、口腔、直肠、腹膜内、皮内、局部、透皮或鞘内途径或另外通过植入或吸入来施用。主题组合物的每种可单独配制或组合为固体、半固体、液体或气体形式的制剂，诸如片剂、胶囊、粉剂、颗粒、软膏、溶液、栓剂、灌肠剂、注射剂、吸入剂和气雾剂。

在不同的实施方案中，提供了与药学上可接受的载体一起配制的包含FGFR1 ECD、FGFR1 ECD融合分子和/或至少一种另外治疗剂的组合物，多种所述药学上可接受的载体是本领域中已知的(参见例如，Gennaro,Remington：The Science and Practice ofPharmacy with Facts and Comparisons：Drugfacts Plus,第20版(2003)；Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第7版,LippencottWilliams and Wilkins(2004)；Kibbe等，Handbook of Pharmaceutical Excipients,第3版，Pharmaceutical Press(2000))。多种药学上可接受的载体，包括媒介物、辅剂、载体和稀释剂，是公众可获得的。并且，多种药学上可接受的辅助物质，诸如pH调节剂和缓冲剂、张力调节剂、稳定剂、湿润剂等也是公众可获得的。某些非限制的示例性载体包括盐水，缓冲盐水、葡萄糖、水、甘油、乙醇和其组合。在一些实施方案中，治疗剂配制为在定义章节中以上所指出的商品名药物。在一些实施方案中，多西他赛配制为(SanofiAventis)或仿制等同物。

在不同的实施方案中，可配制包含FGFR1 ECD、FGFR1 ECD融合分子和/或至少一种另外的治疗剂的组合物以用于注射，方式是通过将其溶解、悬浮或乳化于水溶剂或非水溶剂，诸如植物油或其他油、合成的脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸的酯或聚乙二醇；且若需要，含有常规的添加剂，诸如增溶剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂。在不同的实施方案中，例如使用加压可接受的推进剂诸如二氯二氟甲烷、丙烷、氮等可配制组合物以用于吸入。在不同的实施方案中，还可将组合物配制为缓释微胶囊，诸如用生物可降解或非生物可降解聚合物来配制。非限制的示例性生物可降解的制剂包括聚乳酸-羟基乙酸聚合物。非限制的示例性的非生物可降解的制剂包括聚甘油脂肪酸酯。制作此类制剂的某些方法描述于，例如，EP 1 125 584 A1中。

还提供了剂量包，所述剂量包包括一个或多个容器，每个含有FGFR1 ECD、FGFR1ECD融合分子和/或至少一种另外的治疗剂的一个或多个剂量。在一些实施方案中，剂量包含有FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子但不含有任何另外的治疗剂诸如多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、拓扑替康、索拉非尼、VEGF拮抗剂、抗VEGF抗体、VEGF trap或贝伐单抗。在其他实施方案中，剂量包含有至少一种另外的治疗剂但不含有FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子。在其他实施方案中，剂量包含有FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和至少一种另外的治疗剂，其中FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子在与至少一种另外的治疗剂分开的容器中。在其他实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子在与至少一种另外的治疗剂相同的容器中。在其中提供了两种或更多种另外的治疗剂的某些实施方案中，所述两种或更多种另外的治疗剂可以在分开的容器中或在相同的容器中。在某些实施方案中，提供了单位剂量，其中所述单位剂量含有预定量的包含FGFR1 ECD、FGFR1 ECD融合分子和/或至少一种另外的治疗剂以及或没有一种或多种另外的药剂的组合物。在某些实施方案中，这样的单位剂量提供在用于注射的一次性使用的载药注射器中。在不同的实施方案中，单位剂量中所含有的组合物可包含盐水、蔗糖等；缓冲液，诸如磷酸盐等；和/或在稳定且有效的pH范围内配制。可选地，在某些实施方案中，可将组合物提供为在添加适当的液体例如无菌水后可复水的冻干粉末。在某些实施方案中，组合物包含一种或多种抑制蛋白质聚集的物质，该物质包括但不限于，蔗糖和精氨酸。在某些实施方案中，本发明的组合物包含肝素和/或蛋白多糖。在一些实施方案中，剂量包包括FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和/或选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、拓扑替康、索拉非尼、VEGF拮抗剂、抗VEGF抗体、VEGF trap和贝伐单抗的中的至少一种另外的治疗剂。

在一些实施方案中，剂量包还包括用于向患者施用FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子和至少一种另外的治疗剂的说明书。在一些实施方案中，说明书指出FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子的至少一个剂量应与至少一种另外的治疗剂共同施用。在一些实施方案中，说明书指出FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子的至少一个剂量应与至少一种另外的治疗剂同时施用。

如本文所用的术语“说明书”包括但不限于，标签、包装说明书、可以电子形式诸如在计算机可读介质(例如，软盘、光盘或DVD)上获得的说明书、可远程地诸如通过互联网等获得的说明书。当剂量包提供使用说明书的机会、关于说明书的链接(诸如统一资源定位符，或url)或用于获得说明书的拷贝的其他机构(诸如返回回复卡、可由其请求索要说明书的物理地址、可由其请求索要说明书的电子邮件地址、可打电话以获得说明书的电话号码等)时，则认为剂量包包括说明书。

FGFR1 ECD和FGFR1 ECD融合分子

非限制性的FGFR1 ECD包括全长FGFR1 ECD、FGFR1 ECD片段和FGFR1 ECD变体。FGFR1 ECD可包括或缺少信号肽。示例性的FGFR1 ECD包括但不限于，具有选自SEQ ID NO.：1、2、3和4的氨基酸序列的FGFR1 ECD。

非限制性的示例性FGFR1 ECD片段包括在第339位氨基酸处终止的人FGFR1 ECD(从不含信号肽的成熟形式的第一个氨基酸计数)。在一些实施方案中，FGFR1 ECD片段终止于第339位氨基酸和第360位氨基酸之间的氨基酸(从不含信号肽的成熟形式的第一个氨基酸计数)。示例性的FGFR1 ECD片段包括但不限于，具有选自SEQ ID NO.:3和4的氨基酸序列的FGFR1 ECD片段。

在一些实施方案中，FGFR1 ECD包括选自SEQ ID NO:1至4的序列。在一些实施方案中，FGFR1 ECD由选自SEQ ID NO:1至4的序列组成。当FGFR1 ECD“由”选自SEQ ID NO：1至4的序列“组成”时，FGFR1 ECD可含有或不含有多种翻译后修饰，诸如糖基化和唾液酸化。换言之，当FGFR1 ECD由特定的氨基酸序列组成时，其在连续的氨基酸序列中不含有另外的氨基酸，但可能含有对氨基酸侧链、N末端氨基和/或C-末端羧基的修饰。

在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子包含信号肽。在一些实施方案中，FGFR1ECD融合分子缺少信号肽。在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子的FGFR1 ECD部分包括选自SEQ ID NO：1至4的序列。在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子的FGFR1 ECD部分由选自SEQ ID NO：1至4的序列组成。当FGFR1 ECD融合分子的FGFR1 ECD部分“由”选自SEQ IDNO：1至4的序列“组成”时，FGFR1 ECD融合分子的FGFR1 ECD部分可含有或不含有多种翻译后修饰，诸如糖基化或唾液酸化。换言之，当FGFR1 ECD融合分子的FGFR1 ECD部分由特定的氨基酸序列组成时，其在连续的氨基酸序列中不含有来自FGFR1的另外的氨基酸，但可含有对氨基酸侧链、N末端氨基和/或C末端羧基的修饰。并且，因为FGFR1 ECD与融合分子相连接，在FGFR1 ECD的N末端和/或C末端可能存在另外的氨基酸，但那些氨基酸并非来自FGFR1序列，但可来自，例如，接头序列或融合伴侣序列。

在一些实施方案中，FGFR1 ECD融合分子的融合伴侣部分选自Fc、白蛋白和聚乙二醇。本文讨论了非限制性的示例性融合伴侣。

本发明人已发现FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子与选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、索拉非尼、依托泊苷、拓扑替康、血管内皮生长因子(VEGF)激动剂、VEGF trap、抗VEGF抗体和贝伐单抗中的至少一种另外的治疗剂的施用对于治疗癌症是有用的。在一些实施方案中，FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子与多西他赛一起施用。

融合伴侣和缀合物

如本文所讨论的，可将FGFR1 ECD与至少一种融合伴侣组合，产生FGFR1 ECD融合分子。这些融合伴侣可促进纯化，且FGFR1 ECD融合分子可显示体内增加的半衰期。FGFR1ECD的合适的融合伴侣包括例如，聚合物，诸如水溶性聚合物，免疫球蛋白的恒定结构域；人血清白蛋白(HSA)的全部或部分；胎球蛋白A；胎球蛋白B；亮氨酸拉链结构域；四连接素三聚化结构域；甘露糖结合蛋白(也称作甘露糖结合凝集素)，例如，甘露糖结合蛋白1；和Fc区，如本文所描述，且进一步描述于美国专利第6,686,179号。非限制性的示例性FGFR1 ECD融合分子描述于例如美国专利第7,678,890号。

FGFR1 ECD融合分子可通过将聚氨基酸或分支点氨基酸与FGFR1 ECD连接来制备。例如，聚氨基酸可以是用于增加FGFR1 ECD的循环半衰期(除通过融合分子获得的优点之外)的载体蛋白。为了本发明的治疗目的，此类聚氨基酸应理想地为具有或不会产生中和抗原性反应或其他不利反应的那些聚氨基酸。此类聚氨基酸可选自血清白蛋白(诸如HSA)、另外的抗体或其部分(例如Fc区)、胎球蛋白A、胎球蛋白B、亮氨酸拉链核因子红系衍生物-2(NFE2)、神经视网膜亮氨酸拉链、四连接素或其他聚氨基酸，例如赖氨酸。如本文所描述的，聚氨基酸的连接的位置可在N末端或C末端，或其间的其他位置，且还可通过化学接头部分与所选择的分子相连接。

聚合物

聚合物，例如，水溶性的聚合物，可作为融合伴侣来使用以降低FGFR1 ECD融合分子在水性环境中(诸如通常见于生理环境中)的沉淀。本发明所采用的聚合物将是药学上可接受的用于治疗产品或组合物的制备。

合适的、临床上可接受的、水溶性的聚合物包括但不限于，聚乙二醇(PEG)、聚乙二醇丙醛、乙二醇/丙二醇的共聚物、单甲氧基-聚乙二醇、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯基吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三氧杂环己烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚(β-氨基酸)(无论是均聚物或无规共聚物)、聚(正乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物(PPG)和其他聚氧化烯(polyakylene oxide)、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化的多元醇(POG)(例如，甘油)和其他聚氧乙烯化的多元醇、聚氧乙烯化山梨糖醇或聚氧乙烯化葡萄糖、结肠酸或其他碳水化合物聚合物，聚蔗糖(Ficoll)或葡聚糖及其混合物。

如本文所用的，聚乙二醇(PEG)意在涵盖已用于衍生其他蛋白质的任何形式，诸如单-(C₁-C₁₀)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性可能具有生产上的优点。

如本文所用的聚合物，例如水可溶性的聚合物，可具有任何分子量并且可以是分支的或未分支的。在一些实施方案中，聚合物具有介于约2kDa至约100kDa之间的平均分子量(术语“约”表示在聚合物的制备物中，一些分子将比所标明的分子量更重，一些更轻)。每种聚合物的平均分子量可介于约5kDa和约50kDa之间，或介于约12kDa和约25kDa之间。通常，分子量越高或分支越多，聚合物：蛋白质比率越高。其他大小也可使用，取决于所期望的治疗状况(therapeutic profile)；例如，持续释放的持续时间；对生物活性的作用(若有的话)；操作的简易性；抗原性的程度或缺少；和聚合物对FGFR1 ECD的其他已知作用。

通常将本发明中所采用的聚合物与FGFR1 ECD连接，并考虑对多肽的功能性或抗原性结构域的作用。通常，可在用于使蛋白质与活化的聚合物分子反应的任何合适的条件下进行化学衍生。可用于将聚合物与活性部分连接的活化的基团包括砜、马来酰亚胺、巯基、硫醇、三氟甲基磺酸盐、三氟乙基磺酸酯、氮丙啶(azidirine)、环氧乙烷和5-吡啶基。

通常将本发明的聚合物在氨基酸的α或ε氨基或反应性硫醇基上与异源多肽连接，但还设想可将聚合物基团与蛋白质的任何反应性基团连接，所述反应性基团在合适的反应条件下具有足够反应性以变得与聚合物基团连接。这样，聚合物可通过反应性基团，诸如游离的氨基或羧基与FGFR1 ECD共价结合。具有游离氨基的氨基酸残基可包括赖氨酸残基和N-末端氨基酸残基。具有游离羧基的那些氨基酸残基可包括天冬氨酸残基、谷氨酸残基和C-末端氨基酸残基。具有反应性硫醇基的那些氨基酸残基包括半胱氨酸残基。

用于制备与聚合物诸如水溶性聚合物缀合的融合分子的方法将各自通常涉及(a)在多肽由此变得与一个或多个聚合物连接的条件下使FGFR1 ECD与聚合物反应和(b)获得反应产物。每种缀合的反应条件可选自本领域中已知的那些中的任何条件或随后设定的那些条件，但应选择以避免或限制暴露于将使待修饰的蛋白质失活的反应条件诸如温度、溶剂和pH水平。通常，将根据已知的参数和所期望的结果个别地确定反应的最佳反应条件。例如，聚合物：多肽缀合物的比率越大，缀合产物的百分比越高。最佳比率(依据反应的效率，由于不存在过量的未反应的多肽或聚合物)可通过诸如所期望的衍生程度(例如，单-、二聚-、三聚-等)、所选择的聚合物的分子量、聚合物是否是分支的或不分支的和所用的反应条件的因素来确定。聚合物(例如，PEG)与多肽的比率的范围通常将从1:1至100:1。通过标准纯化技术，其中包括，透析、盐析、超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析和电泳可从每种混合物中制备一种或多种纯化的缀合物。

可能特别期望N-末端化学修饰的FGFR1 ECD。可通过分子量、分支等，反应混合物中聚合物与FGFR1 ECD分子的比例、待进行的反应类型和获得所选择的N-末端化学修饰的FGFR1 ECD的方法来选择聚合物。获得N-末端化学修饰的FGFR1 ECD制备物(如果必要的话，将该部分与其他单衍生的部分相分离)的方法可以是通过从化学修饰的蛋白质分子群中纯化N-末端化学修饰的FGFR1 ECD物质。

选择性N-末端化学修饰可通过还原性烷基化来实现，其利用了对于特定蛋白质中的衍生化可用的不同类型的伯氨基(赖氨酸对比N-末端)的差异反应性。在适当的反应条件下，实现了利用含羧基的聚合物蛋白质在N末端的基本上选择性衍生化。例如，可通过在允许利用蛋白质的赖氨酸残基的ε-氨基和N-末端残基的α-氨基之间的pKa差异的pH下进行反应而选择性地将聚合物与蛋白质的N末端连接。通过这样的选择性衍生化，控制了聚合物与蛋白的连接：与聚合物的缀合可主要发生在蛋白质的N末端并对其他反应基团诸如赖氨酸侧链氨基没有明显的修饰。使用还原性烷基化，聚合物可以是以上所描述的类型并且应具有用于与蛋白质偶联的单独的反应性醛。还可使用包含单独的反应性醛的聚乙二醇丙醛。

在一个实施方案中，本发明设想化学衍生的FGFR1 ECD包括单-或聚-(例如，2-4个)PEG部分。可通过可利用的任何聚乙二醇反应来进行聚乙二醇化。用于制备聚乙二醇化的蛋白质产物的方法通常将包括(a)在蛋白质由此变得与一个或多个PEG基团连接的条件下使多肽与聚乙二醇(诸如PEG的反应性酯或醛衍生物)反应；和(b)获得该反应产物。通常，将根据已知的参数和所期望的结果个别地确定最佳反应条件。

存在本领域已知的许多PEG连接方法。参见例如，EP 0 401 384；Malik等，Exp.Hematol.,20：1028-1035(1992)；Francis,Focus on Growth Factors,3(2):4-10(1992)；EP 0 154 316；EP 0 401 384；WO 92/16221；WO 95/34326；和本文所引用的关于聚乙二醇化的其他出版物。

聚乙二醇化可例如通过与反应性聚乙二醇分子的酰化反应或或烷基化反应来进行。这样，根据本发明的蛋白质产物包括聚乙二醇化的蛋白质，其中PEG基团通过酰基或烷基连接。此类产物可以是单-聚乙二醇化的或聚-聚乙二醇化的(例如，含2-6个或2-5个PEG基团的那些)。通常将PEG基团在氨基酸的α-或ε-氨基处与蛋白质连接，但还设想可将PEG基团与和蛋白质相连的任何氨基连接，所述氨基在合适的反应条件下具有足够反应性以变得与PEG基团连接。

通过酰化进行的聚乙二醇化通常涉及使聚乙二醇(PEG)的活性酯衍生物与FGFR1ECD反应。为进行酰化反应，所选择的聚合物通常具有单独的反应性酯基团。任何已知的或随后发现的反应性PEG分子可用于进行聚乙二醇化反应。合适的活化PEG酯的例子是酯化为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的PEG。如本文所用的，设想酰化包括但不限于治疗性蛋白和聚合物(诸如PEG)之间的以下类型的连接：酰胺、氨基甲酸酯、尿烷等，参见例如，Chamow,Bioconjugate Chem.,5∶133-140(1994)。反应条件可选自目前已知的条件中的任何者或随后设定的那些，但应避免将使待修饰的多肽失活的条件，诸如温度、溶剂和pH。

通过酰化进行的聚乙二醇化将通常导致聚-聚乙二醇化的蛋白质。连接键可以是酰胺。所得的产物可以是基本上仅(例如，>95％)单-、二聚-或三聚-聚乙二醇化的。然而，可生成根据所用的特定的反应条件而不同的量的具有较高程度的聚乙二醇化的一些物质。若需要，可通过其中包括透析、盐析、超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析和电泳的标准纯化技术，将更加纯化的聚乙二醇化的物质从混合物(特别是未反应的物质)中分离。

通过烷基化进行的聚乙二醇化通常涉及在还原剂的存在下使PEG的末端醛衍生物与多肽反应。为进行还原性烷基化反应，所选择的聚合物应具有单独的反应性醛基。示例性的反应性PEG醛是聚乙二醇丙醛，其是水溶性的，或其单C₁-C₁₀烷氧基或芳氧基衍生物，参见例如，美国专利第5,252,714号。

标记物

此外，可将本发明的FGFR1 ECD与标记物序列(诸如促进融合的多肽的纯化的肽)融合。标记物氨基酸序列可以是六聚组氨酸肽其中诸如在pQE载体(Qiagen,Mississauga,Ontario,Canada)中提供的标签，其许多是商业上可获得的。如在Gentz等，Proc.Natl.Acad.Sci.86：821-824(1989)中所描述的，例如，六聚组氨酸为融合蛋白的纯化提供了便利。另一用于纯化的肽标签，血凝素(HA)标签，对应于来源于流感HA蛋白的表位。(Wilson等,Cell 37:767(1984))。这些以上融合中的任何者可使用本文所描述的FGFR1ECD来进行工程化。

寡聚化结构域融合伴侣

在不同的实施方案中，寡聚化对融合蛋白提供了一些功能优点，包括但不限于，多价、增加的结合强度和不同的结构域的组合功能。因此，在一些实施方案中，融合伴侣包含寡聚化结构域，例如，二聚化结构域。示例性的寡聚化结构域包括但不限于，卷曲螺旋结构域，包括α-螺旋卷曲螺旋结构域；胶原蛋白结构域；胶原蛋白样结构域；和某些免疫球蛋白结构域。示例性的卷曲螺旋多肽融合伴侣包括但不限于，四连接素卷曲螺旋结构域；软骨寡聚基质蛋白的卷曲螺旋结构域；血管生成素卷曲螺旋结构域；和亮氨酸拉链结构域。示例性的胶原蛋白或胶原蛋白样寡聚化结构域包括但不限于，见于胶原蛋白、甘露糖结合凝集素、肺表面活性物质蛋白A和D、脂联素、纤维胶凝蛋白(ficolin)、共凝集素、巨噬细胞消除受体和emilin中的那些。

抗体Fc免疫球蛋白结构域融合伴侣

可用作融合伴侣的许多Fc结构域是本领域中已知的。在一些实施方案中，融合伴侣是Fc免疫球蛋白结构域。Fc融合伴侣可以是在天然存在的抗体中发现的野生型Fc、其变体或其片段。非限制性的示例性Fc融合伴侣包括包含人IgG(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)的铰链结构域以及CH2和CH3恒定结构域的Fc。另外的示例性Fc融合伴侣包括但不限于，人IgA和IgM。在一些实施方案中，Fc融合伴侣包含C237S突变，例如，在IgG1中(参见例如，SEQ ID NO：8)。在一些实施方案中，Fc融合伴侣包含具有P331S突变的人IgG2的铰链结构域、CH2结构域和CH3结构域，如美国专利第6,900,292号中所描述的。某些示例性的Fc结构融合伴侣示出在SEQ ID NO：8至10中。

白蛋白融合伴侣和白蛋白结合分子融合伴侣

在一些实施方案中，融合伴侣是白蛋白。示例性的白蛋白包括但不限于，人血清白蛋白(HSA)和能够增加与其融合的多肽的血清半衰期或生物利用率的HSA片段。在一些实施方案中，融合伴侣是白蛋白结合分子，诸如，例如，结合白蛋白的肽或与结合白蛋白的脂质或其他分子缀合的分子。在一些实施方案中，如例如在美国专利第6,686,179号中所描述来制备包含HSA的融合分子。

融合伴侣的示例性的连接

可将融合伴侣共价地或非共价地与FGFR1 ECD的N末端或C末端连接。连接还可发生在FGFR1 ECD中除N末端或C末端的位置，例如，通过氨基酸侧链(诸如，例如，半胱氨酸、赖氨酸、丝氨酸或苏氨酸的侧链)来连接。

在共价的或非共价的连接的实施方案中，接头可含于融合伴侣和FGFR1 ECD之间。此类接头可以由至少一个氨基酸或化学部分组成。将融合伴侣与FGFR1 ECD共价连接的示例性方法包括但不限于，将融合伴侣和FGFR1 ECD作为单一的氨基酸序列来翻译和将融合伴侣与FGFR1 ECD化学连接。当融合伴侣和FGFR1 ECD作为单一的氨基酸序列来翻译时，在融合伴侣和FGFR1 ECD之间可包括另外的氨基酸作为接头。在一些实施方案中，基于编码接头的多核苷酸序列来选择接头，以有利于将融合伴侣和/或FGFR1 ECD克隆到单个表达构建体中(例如，可将含有特定的限制位点的多核苷酸置于编码融合伴侣的多核苷酸和编码FGFR1 ECD的多核苷酸之间，其中含有限制位点的多核苷酸编码短的氨基酸接头序列)。当通过化学方式将融合伴侣和FGFR1 ECD共价偶联时，在偶联反应过程中通常可包括不同大小的接头。

将融合伴侣与FGFR1 ECD非共价连接的示例性方法包括但不限于，通过结合对的连接。示例性的结合对包括但不限于，生物素和亲和素或链霉亲和素、抗体和其抗原等。

共翻译修饰和翻译后修饰

本发明涵盖FGFR1 ECD和FGFR1 ECD融合分子的施用，所述FGFR1 ECD和FGFR1 ECD融合分子在翻译过程中或翻译后被不同地修饰，例如，通过经由已知的保护基/阻断基、溶蛋白性裂解或与抗体分子或其他细胞配体的连接进行的糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、衍生化来修饰。大量的化学修饰中的任何者可以通过已知的技术来进行，这些技术包括但不限于，经由溴化氰、胰蛋白酶、糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、V8蛋白酶而进行的特定的化学裂解；NABH₄；乙酰化；甲酰化；氧化；还原；和/或在衣霉素存在下的代谢合成。

本发明所涵盖的另外的翻译后修饰包括，例如，例如，N-连接的或O-连接的碳水化合物链、N-末端或C-末端的加工、化学部分与氨基酸骨架的连接、N-连接的或O-连接的碳水化合物链的化学修饰和作为原核宿主细胞表达的结果的N-末端蛋氨酸残基的添加或缺失。FGFR1 ECD和FGFR1 ECD融合分子的多种翻译后修饰的非限制性的讨论可见于，例如，美国专利第7,678,890号中。

FGFR1 ECD和FGFR1 ECD融合分子表达和生产载体

提供了包含编码FGFR1 ECD的多核苷酸的载体。还提供了包含编码FGFR1 ECD融合分子的多核苷酸的载体。此类载体包括但不限于，DNA载体、噬菌体载体、病毒载体、逆转录病毒载体等。

在一些实施方案中，选择的载体对于多肽在CHO或CHO来源的细胞中的表达是优化的。示例性的此类载体描述于，例如，Running Deer等,Biotechnol.Prog.20：880-889(2004)中。

在一些实施方案中，选择载体以用于FGFR1 ECD和/或FGFR1 ECD融合分子在动物(包括人)中的体内表达。在一些此类实施方案中，多肽的表达在以组织特异性方式起作用的启动子的控制之下。例如，肝特异性的启动子描述于，例如，PCT公布第WO 2006/076288号中。多种表达载体的非限制性讨论可见于，例如，美国专利第7,678,890号中。

宿主细胞

在不同的实施方案中，FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子可在原核细胞中表达，诸如细菌细胞；或在真核细胞中表达，诸如真菌细胞、植物细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。这样的表达可例如根据本领域中已知的程序来进行。可用于表达多肽的示例性真核细胞包括但不限于，COS细胞，包括COS 7细胞；293细胞，包括293-6E细胞；CHO细胞，包括CHO-S和DG44细胞；和NSO细胞。在一些实施方案中，根据其对FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子作出某些期望的翻译后修饰的能力来选择特定的真核宿主细胞。例如，在一些实施方案中，CHO细胞产生比在293细胞中产生的相同的多肽具有更高的唾液酸化水平的FGFR1 ECD和/或FGFR1ECD融合分子。

将核酸导入到期望的宿主细胞中可通过本领域中已知的任何方法来实现，这些方法包括但不限于，磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、阳离子脂质介导的转染、电穿孔、转导、感染等。非限制性的示例性的方法描述于，例如Sambrook等,Molecular Cloning,ALaboratory Manual,第三版Cold Spring Harbor Laboratory Press(2001)中。根据本领域中已知的方法，可在期望的宿主细胞中瞬时转染或稳定转染核酸。宿主细胞和宿主细胞中的多肽的方法的非限制性讨论可见于，例如，美国专利第7,678,890号中。

在一些实施方案中，根据本领域中已知的方法，可在已经工程化或用编码多肽的核酸分子转染的动物中体内产生多肽。

FGFR1 ECD多肽的纯化

可通过本领域中已知的多种方法纯化FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子。此类方法包括但不限于，亲和基质或疏水作用色谱的使用。合适的亲和配体包括FGFR1 ECD或融合伴侣的任何配体。在结合FGFR1的抗体的情况下，合适的亲和配体包括但不限于，FGFR1自身和其片段。并且，蛋白A、蛋白G、蛋白A/G或抗体亲和柱可用于与Fc融合伴侣结合以纯化FGFR1ECD融合分子。FGFR1 ECD的抗体还可用于纯化FGFR1 ECD或FGFR1 ECD融合分子。疏水作用色谱，例如，丁基或苯基柱，也可适用于纯化一些多肽。纯化多肽的许多方法是本领域中已知的。纯化多肽的不同方法的非限制性讨论可见于，例如，美国专利第7,678,890号中。

实施例

以下讨论的实施例目的仅为本发明的示例，且不应被认为以任何方式限制本发明。实施例并不旨在表示以下的实验是所进行的全部或唯一的实验。已作出努力以保证关于所用的数字(例如，量、温度等)的准确性，但应考虑到一些实验误差和偏差。除非另外指明，份数为按重量计的份数，分子量为重量平均分子量，温度单位为摄氏度，并且压力为大气压或近似大气压。

实施例1：FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛在H1703非小细胞肺癌(NSCLC)异种移植模型中的施用

6周龄的雌性SCID小鼠购自Charles River Laboratories(Wilmington,MA)并在研究开始前使其适应环境1周。人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系H1703用作肿瘤模型并购自ATCC(Manassas,VA；目录号CRL-5889)。在含5％CO₂的潮湿的空气中在37℃下在RPMI+10％FBS+1％L-谷氨酰胺中培养细胞三代。当培养的细胞达到85-90％汇合时，收获细胞并以每毫升2.5×10⁷个细胞将细胞重悬于含有50％基质胶的冷的无Ca²⁺和Mg²⁺的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。然后将细胞以2.5×10⁶个细胞/100μl/小鼠皮下植入到小鼠的右侧腹部。肿瘤植入1天后，以每组10只小鼠根据体重对小鼠进行随机分组。

在PBS中以3mg/ml配制FGFR1-ECD.339-Fc并以15mg/kg(300μg/100μl/小鼠)腹膜内(i.p.)施用，一周两次，持续四周。多西他赛购自Toronto Research Chemicals(NorthYork,Ontario,Canada；目录号D494420)并在含有5％Tween 80和5％葡萄糖的H₂O中配制。以25mg/kg(相当于在人中约75mg/m²)腹膜内施用多西他赛，每三周一次，持续两个剂量。在组合组中，FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛共同施用或在施用多西他赛前一天施用FGFR1-ECD.339-Fc或反之来相继施用。人白蛋白购自Grifols USA(Los Angeles,CA；目录号NDC61953-0002-1)，以3mg/mL在PBS中配制并以300μg/100μL/小鼠(15mg/kg)用作阴性对照。对于每组小鼠的给药计划(dosing schedule)示于表2中。

表2：给药计划

贯穿整个研究，一周两次监测小鼠的肿瘤体积和体重。通过外部的卡尺测量肿瘤体积以确定最大的纵径(长度)和最大的横径(宽度)。然后利用下式计算肿瘤体积

肿瘤体积(mm³)＝(长度×宽度²)/2

在第38天，当白蛋白组的平均肿瘤体积达到850mm³时，通过异氟烷吸入和颈脱位法使小鼠安乐死。

贯穿整个研究，每组小鼠的平均肿瘤体积示于图1中。在该实验中，FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的相继施用比单独的每种药物更多地抑制了肿瘤生长。并且，在该实验中，在抑制肿瘤生长上，FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的共同施用比相继施用更有效。在研究过程中未观察到体重减轻。(数据未示出)

通过单向ANOVA和随后的图基检验(Tukey’s test)分析了第38天每组小鼠的肿瘤体积。分析的结果显示于表3中。

表3.第38天的肿瘤体积分析

单独的FGFR1-ECD.339-Fc的施用引起33％(p<0.01)的肿瘤生长抑制，并且单独的多西他赛的施用引起74％(p<0.001)的肿瘤生长抑制。首先施用FGFR1-ECD.339-Fc的相继施用引起88％(p<0.001)的肿瘤生长抑制，并且首先施用多西他赛的相继施用引起91％(p<0.001)的肿瘤生长抑制。最终，FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的共同给药引起96％(p<0.001)的肿瘤生长抑制。

使用分级肿瘤体积分析(fractional tumor volume analysis)评估在FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的相继组合和共同组合中增强的(加成的或协同的)或降低的(拮抗的)肿瘤生长抑制的程度。该分析的结果显示于表4中。

表4.第38天的分级肿瘤体积^a的分析

^a分级肿瘤体积(FTV)＝(所处理的平均肿瘤体积(TV))/(平均TV对照)

^b期望值＝(FTV药物1)x(FTV药物2)

^c期望值与观察值比率，>2＝协同；约1＝加成；<0.5＝拮抗。

那些结果表明FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的共同施用引起肿瘤生长的协同抑制，而FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的相继施用引起加成抑制。

实施例2：FGFR1-ECD.339-Fc和培美曲塞在H520非小细胞肺癌(NSCLC)异种移植模型中的施用

6至8周龄的雌性SCID小鼠购自Charles River Laboratories(Wilmington,MA)并在研究开始前使其适应环境1周。鳞状细胞肺癌细胞系NCI-H520用作肿瘤模型并购自ATCC(Manassas,VA；目录号HTB-182)。在含5％CO₂的潮湿的空气中在37℃下在RPMI+10％FBS+1％L-谷氨酰胺中培养细胞三至四代。当培养的细胞达到85-90％汇合时，收获细胞并以3.5×10⁷个细胞/ml将细胞重悬于含有50％基质胶的冷的无Ca²⁺和Mg²⁺的PBS中。然后将细胞以3.5×10⁶个细胞/100μl/小鼠皮下植入到小鼠的右侧腹部。肿瘤植入1天后，以每组10只小鼠根据体重对小鼠进行随机分组。对所有组的给药开始于肿瘤植入1天后。

在PBS中以3mg/ml配制FGFR1-ECD.339-Fc并以15mg/kg(300μg/100μl/小鼠)腹膜内(i.p.)施用，一周两次，持续六周。培美曲塞二钠购自Fisher Scientific(Pittsburgh,PA；目录号NC9564691)并以12.5mg/mL、25mg/mL和50mg/mL在盐水USP中配制。以三个不同的剂量水平腹膜内施用培美曲塞：62.6mg/kg(1.25mg/100μl/小鼠)；125mg/kg(2.5mg/100μl/小鼠)；和250mg/kg(5mg/100μl/小鼠)，在第一周每天施用持续5天，且在第二周每天施用持续5天。在组合组中，当作为单独的药剂施用时，FGFR1-ECD.339-Fc和培美曲塞以相同的计划施用，并在第1天、第4天、第8天和第11天共同施用。人白蛋白购自Grifols USA(LosAngeles,CA；目录号NDC 61953-0002-1)，以3mg/mL在PBS中配制并以300μg/100μL/小鼠(15mg/kg)用作阴性对照。对于每组小鼠的给药计划显示于表5中。

表5：给药计划

贯穿整个研究，一周两次监测小鼠的肿瘤体积和体重。使用实施例1中所描述的方法和公式测量并计算肿瘤体积。

在研究结束之前当观察到以下体征中的任何者时使动物安乐死：体重减轻为初始体重的≥15％；肿瘤破溃为肿瘤表面积的≥30％；小鼠为垂死的；或单独的肿瘤体积≥2000mm³。通过异氟烷吸入和颈脱位法使动物安乐死。

图2A、3A和4A分别显示了在整个研究过程中低培美曲塞剂量组、中等培美曲塞剂量组和高培美曲塞剂量组的平均肿瘤体积。图2B、3B和4B显示了在研究的过程中在每组中小鼠的体重。根据该剂量的施用后的体重减轻，似乎250mg/kg培美曲塞接近小鼠中的最大耐受剂量。参见图4B。

在研究过程中，FGFR1-ECD.339-Fc或培美曲塞单独以低剂量或中等剂量施用引起肿瘤抑制。单独培美曲塞的最高剂量似乎不抑制肿瘤生长。FGFR1-ECD.339-Fc和培美曲塞的共同给药引起肿瘤生长的较大的抑制，虽然用FGFR1-ECD.339-Fc和培美曲塞的最高剂量的组合所观察到的肿瘤抑制在统计学上是不显著的。

体重图表显示小鼠对培美曲塞的低剂量和中等剂量耐受良好。在培美曲塞的高剂量时，小鼠开始显著的体重减轻。因此在前5天给药后停止给药。这样，在高剂量组中，动物仅接受了前五次给药并且未进行第二轮的五次给药。

在第49天，通过单向ANOVA和随后的图基检验分析了每组小鼠的肿瘤体积。分析的结果显示于表6中。

表6：第49天的肿瘤体积分析

单独的FGFR1-ECD.339-Fc的施用引起31％(p>0.05)的肿瘤生长抑制，并且以62.5、125或250mg/kg单独的培美曲塞的施用分别引起40、24或1％(p>0.05)的肿瘤生长抑制。FGFR1-ECD.339-Fc(15mg/kg)和62.5、125或250mg/kg的培美曲塞的共同给药分别引起68％(p<0.01)、57％(p<0.05)或46％(p>0.05)的肿瘤生长抑制。

使用分级肿瘤体积分析评估在FGFR1-ECD.339-Fc和培美曲塞施用后增强的(加成的或协同的)或降低的(拮抗的)肿瘤生长抑制的程度。该分析的结果显示于表7中。

表7：第49天的分级肿瘤体积^a的分析

^b期望值＝(FTV药物1)x(FTV药物2)

^c期望值与观察值比率，>2＝协同；约1＝加成；<0.5＝拮抗。

那些结果表明FGFR1-ECD.339-Fc和培美曲塞的施用引起肿瘤生长的加成抑制。

实施例3：与多种化学治疗剂组合的FGFR1-ECD.339-Fc在A549非小细胞肺癌(NSCLC)异种移植模型中的施用

6周龄的雌性SCID小鼠购自Charles River Laboratories(Wilmington,MA)并在研究开始前使其适应环境1周。A549细胞购自ATCC(Manassas,VA；目录号CCL-185)并在含5％CO₂的潮湿的空气中在37℃下在RPMI+10％FBS+1％L-谷氨酰胺中培养细胞三代。当培养的细胞达到85-90％汇合时，收获细胞并以每毫升5×10⁷个细胞重悬于含50％基质胶的冷的无Ca²⁺和Mg²⁺的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。然后将细胞以5×10⁶个细胞/100μl/小鼠皮下植入到小鼠的右侧腹部。肿瘤植入1天后，以每组10只小鼠根据体重对小鼠进行随机分组。

贯穿每个研究，一周两次监测小鼠的肿瘤体积和体重。使用实施例1中所描述的方法和公式测量并计算肿瘤体积。

在每个研究的末期通过单向ANOVA和随后的图基检验分析每组小鼠的肿瘤体积。然后使用分级肿瘤体积分析评估在施用FGFR1-ECD.339-Fc和一种或多种另外的化学治疗分子后达到的增强的(加成的或协同的)或降低的(拮抗的)肿瘤生长抑制的程度。

以下讨论了每个组合的某些研究细节和结果。

A.FGFR1-ECD.339-Fc和顺铂

在0.9％氯化钠注射液USP(Henry Schein,Inc.,Melville,NY；目录号1533826)中以4mg/ml配制FGFR1-ECD.339-Fc并以20mg/kg(400μg/100μl/小鼠)腹膜内(i.p.)施用，每周两次，持续6周。顺铂购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO；目录号P4394)，在0.9％盐水中配制，并以3.5mg/kg(每只小鼠17μg/100μl)腹膜内施用，每周一次，持续6周。盐水用作阴性对照并以每只小鼠100μl进行腹膜内施用，每周两次，持续6周。

在第42天，当媒介物组中的平均肿瘤体积达到1300mm³时，通过异氟烷吸入和颈脱位法使小鼠安乐死。

贯穿整个研究，每组小鼠的平均肿瘤体积显示于图5。在该实验中，FGFR1-ECD.339-Fc和顺铂的施用比单独的每种药物更多抑制了肿瘤生长。并且，在该研究过程中小鼠体重未减轻。(数据未示出。)

通过单向ANOVA和随后的图基检验分析第42天每组小鼠的肿瘤体积。该分析的结果显示于图8A-8B中。

表8.第42天的肿瘤体积分析

为确定FGFR1-ECD.339-Fc和顺铂的组合是否引起增强的(加成的或协同的)或降低的(拮抗的)抗肿瘤活性，如实施例1中所描述分析分级肿瘤体积。该分析的结果显示于表9中。

表9.第42天相对于对照的分级肿瘤体积^a的分析

^b期望值＝(FTV药物1)x(FTV药物2)

^c期望值与观察值比率，>2＝协同；约1＝加成；<0.5＝拮抗。

那些结果显示在该实验中FGFR1-ECD.339-Fc和顺铂的组合引起肿瘤生长的加成抑制。

B.FGFR1-ECD.339-Fc和紫杉醇

如以上所描述的在A549人非小细胞肺癌异种移植模型中测试FGFR1-ECD.339-Fc和紫杉醇的组合。FGFR1-ECD.339-Fc在0.9％注射用盐水USP中以3mg/ml配制。紫杉醇购自Bedford Laboratories(Bedford,OH；目录号1075029)并在含有5％葡萄糖的0.9％注射用盐水中以3.6mg/ml进行配制，以用于18mg/kg的剂量。以15mg/kg腹膜内(i.p.)施用FGFR1ECD.339-Fc，一周两次，持续5周。在第8天、第12天和第15天以18mg/kg腹膜内施用紫杉醇。

当媒介物组中的平均肿瘤体积达到约500mm³时，通过异氟烷吸入和颈脱位法使小鼠安乐死。

贯穿整个研究，每组小鼠的平均肿瘤体积显示于图6。在该实验中，FGFR1-ECD.339-Fc和紫杉醇的组合比单独的每种药物更多抑制了肿瘤生长。并且，在该研究过程中小鼠体重未减轻。(数据未示出。)

为确定FGFR1-ECD.339-Fc和紫杉醇的组合是否引起加成的、协同的或拮抗的活性，如实施例1中所描述分析第31天和第38天的分级肿瘤体积。该分析的结果显示于表10中。

表10.第31天和第38天分级肿瘤体积^a的分析

天	FGFR1-ECD.339-Fc	紫杉醇	期望值^b	观察值	期望值/观察值^c
						31	0.84	0.57	0.48	0.26	1.81
38	0.89	0.50	0.45	0.39	1.13

^b期望值＝(FTV药物1)x(FTV药物2)

^c期望值与观察值比率，>2＝协同；约1＝加成；<0.5＝拮抗。

那些结果显示FGFR1-ECD.339-Fc和紫杉醇的组合引起肿瘤生长的加成抑制。

C.FGFR1-ECD.339-Fc和5-FU

如以上所描述，在A549人非小细胞肺癌异种移植模型中测试FGFR1-ECD.339-Fc和5-氟尿嘧啶(5-FU)的组合。FGFR1-ECD.339-Fc在0.9％注射用盐水USP中以3mg/ml配制。5-FU购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO；目录号F6627)并最初以50mg/ml的浓度溶于二甲亚砜(DMSO，Sigma-Aldrich,St.Louis,MO；目录号D8418-50)中作为储备溶液。将储备溶液进一步在0.9％氯化钠注射液USP中稀释至6.6mg/ml(以用于33mg/kg给药)。以15mg/kg腹膜内(i.p.)施用FGFR1-ECD.339-Fc，每周两次，持续4周。以33mg/kg腹膜内施用5-FU，一周两次，持续三周。

在第31天通过异氟烷吸入和颈脱位法使小鼠安乐死。

贯穿整个研究，每组小鼠的平均肿瘤体积显示于图7中。在该实验中，FGFR1-ECD.339-Fc和5-FU的组合比单独的每种药物更多地抑制了肿瘤生长。并且，在该研究过程中，小鼠体重未减轻(数据未示出。)

为确定FGFR1-ECD.339-Fc和5-FU的组合是否引起加成的、协同的或拮抗的活性，如实施例1中所描述分析第31天的分级肿瘤体积。该分析的结果显示于表11中。

表11.第31天分级肿瘤体积^a的分析

天	FGFR1-ECD.339-Fc	5-FU	期望值^b	观察值	期望值/观察值^c
						31	0.84	1.04	0.89	0.38	2.33

^b期望值＝(FTV药物1)x(FTV药物2)

^c期望值与观察值比率，>2＝协同；约1＝加成；<0.5＝拮抗。

那些结果表明FGFR1-ECD.339-Fc和5-FU的施用在该实验中引起肿瘤生长的协同抑制。本发明人注意到使用20mg/kg或50mg/kg5-FU的相似的实验未引起协同。(数据未示出。)

D.FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛

如以上所描述，在A549人非小细胞肺癌异种移植模型中测试FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的组合。FGFR1-ECD.339-Fc在PBS中以3mg/ml配制并以15mg/kg(300μg/100μl/小鼠)腹膜内(i.p.)施用，一周两次，持续4周。以3mg/kg或10mg/kg腹膜内施用多西他赛，一周两次，持续四周。

当白蛋白对照组中的平均肿瘤体积达到1000mm³时，通过异氟烷吸入和颈脱位法在第32天使该组的小鼠安乐死。

贯穿整个研究，每组小鼠的平均肿瘤体积显示于图8A(3mg/kg多西他赛)和图8B(10mg/kg多西他赛)中。在该实验中，以多西他赛的任一剂量，FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的组合比单独的每种药物更多地抑制了肿瘤生长。并且，在该研究的过程中，在多西他赛的任一剂量下小鼠体重未减轻。(数据未示出。)

为确定FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的组合是否引起加成的、协同的或拮抗的活性，如实施例1中所描述分析第32天的分级肿瘤体积。该分析的结果显示于表12中。

表12.第32天分级肿瘤体积^a的分析

^b期望值＝(FTV药物1)x(FTV药物2)

^c期望值与观察值比率，>2＝协同；约1＝加成；<0.5＝拮抗。

那些结果显示了在该实验中FGFR1-ECD.339-Fc和多西他赛的施用引起肿瘤生长的加成抑制。

E.FGFR1-ECD.339-Fc和长春新碱

如以上所描述，在A549人非小细胞肺癌异种移植模型中测试FGFR1-ECD.339-Fc和长春新碱的组合。FGFR1-ECD.339-Fc在0.9％注射用盐水USP中以1.5mg/ml配制，以用于以15mg/kg(每只小鼠300μg/200μl)进行施用，或以2mg/ml配制以用于以20mg/kg(每只小鼠400μg/200μl/进行施用。长春新碱获自Fluka-Sigma(St.Louis,MO 63103,目录号#V8879)并以0.1mg/ml或0.15mg/mL在0.9％注射用盐水USP中配制以用于分别以1mg/kg(每只小鼠0.02μg/100μl)或1.5mg/kg(每只小鼠0.03μg/200μl)进行施用。

在第一次实验中，从第1天开始以15mg/kg腹膜内(i.p.)施用FGFR1-ECD.339-Fc，每周两次，持续6周，并且在第8天、第15天和第22天以1mg/kg腹膜内施用长春新碱。在第二次实验中，从第19天起始以20mg/kg腹膜内(i.p.)施用FGFR1-ECD.339-Fc，每周两次，持续7周，并且和在第27天、第34天和第41天以1.5mg/kg腹膜内施用长春新碱。

在肿瘤植入后46天使来自第一次实验的小鼠安乐死。在第二次研究中，在肿瘤植入后70天使白蛋白对照组中的小鼠和FGFR1-ECD.339-Fc组中的小鼠安乐死，而在肿瘤植入后77天使长春新碱处理的组中的小鼠安乐死。通过异氟烷吸入和颈脱位法使所有小鼠安乐死。

贯穿整个研究，每组小鼠的平均肿瘤体积显示于图9A(1mg/kg长春新碱；在第1天开始给药)和9B(1.5mg/kg长春新碱；在第19天开始给药)中。在该实验中，以长春新碱的任一剂量，和以任何一种给药计划，FGFR1-ECD.339-Fc和长春新碱的组合比单独的每种药物更多地抑制了肿瘤生长。并且，在长春新碱较的低剂量时，小鼠体重未减轻。(数据未示出。)在长春新碱的较高剂量时，小鼠体重减轻，表明较高的剂量更接近于最大耐受剂量。参见图9C。

为确定FGFR1-ECD.339-Fc和长春新碱的组合是否引起加成的、协同的或拮抗的活性，如实施例1中所描述分析对于第一次实验的第39天和第46天的分级肿瘤体积和对于第二次实验的第70天的分级肿瘤体积。分析的结果显示于表13中。

表13.分级肿瘤体积^a的分析

^b期望值＝(FTV药物1)x(FTV药物2)

^c期望值与观察值比率，>2＝协同；约1＝加成；<0.5＝拮抗。

那些结果显示了FGFR1-ECD.339-Fc和长春新碱的施用在长春新碱的较低剂量时引起肿瘤生长的加成抑制，和在长春新碱的较高剂量时引起肿瘤生长的协同抑制。

F.FGFR1-ECD.339-Fc、卡铂和紫杉醇

如以上所描述，在A549人非小细胞肺癌异种移植模型中测试FGFR1-ECD.339-Fc、卡铂和紫杉醇的组合。FGFR1-ECD.339-Fc在0.9％注射用盐水USP中以3mg/ml配制(用于以15mg/kg进行施用)。卡铂获自Sigma-Aldrich(St.Luis,MO 63103，目录号#C2538)并在0.9％注射用盐水USP中以2.5mg/mL配制，以用于以25mg/kg(每只小鼠500μg/200μL)进行施用。紫杉醇获自LC Laboratories(Woburn,MA 01801；目录号#P-9600)，并在50.3％和49.7％无水乙醇的溶液中以20mg/mL配制作为储备溶液。将储备溶液进一步以3mg/mL稀释于含5％葡萄糖的0.9％注射用盐水USP中以用于以30mg/kg(每只小鼠600μg/200μL)进行施用。

从第7天开始以15mg/kg腹膜内(i.p.)施用FGFR1-ECD.339-Fc，每周两次，持续3周。从第7天开始以25mg/kg腹膜内施用卡铂，每周两次，持续3周。从第8天开始以30mg/kg腹膜内施用紫杉醇，每周两次，持续3周。

在第34天使单独药剂组中的小鼠安乐死和在第41天使组合组中的小鼠安乐死。通过异氟烷吸入和颈脱位法使小鼠安乐死。

贯穿整个研究，每组小鼠的平均肿瘤体积显示于图10中。在该实验中，FGFR1-ECD.339-Fc、卡铂和紫杉醇的组合比任何单独的药物更多地抑制了肿瘤生长，且还比卡铂和紫杉醇的组合更多地抑制了肿瘤生长。在研究的过程中未观察到体重减轻。(数据未示出。)

为确定FGFR1-ECD.339-Fc、卡铂和紫杉醇的组合是否引起加成的、协同的或拮抗的活性，如实施例1中所描述分析第28天的分级肿瘤体积。该分析的结果显示于表14中。

表14.分级肿瘤体积的分析^a

^b期望值＝(FTV药物1)x(FTV药物2)

^c期望值与观察值比率，>2＝协同；约1＝加成；<0.5＝拮抗。

那些结果显示了在该实验中FGFR1-ECD.339-Fc、卡铂和紫杉醇的施用引起肿瘤生长的加成抑制。

实施例4：与不同的化学治疗剂组合的FGFR1-ECD.339-Fc在Colo205结肠癌异种移植物模型中的施用

Colo205细胞购自ATCC(Manassas,VA；目录号CCL-222)并在含5％CO₂的潮湿的空气中在37℃下在RPMI1640培养基、10％FBS和1％L-谷氨酰胺中培养细胞三代。将细胞以2.5×10⁷个细胞/ml的浓度重悬于50％/v PBS和50％/v基质胶的溶液中。在植入前一直在冰上保持重悬的细胞。6周龄的雌性SCID小鼠购自Charles River Laboratories(Wilmington,MA)并在研究开始前使其适应环境1周。在第0天，使用27G1/2针将2.5×10⁶个细胞/100μl植入到每只小鼠的右侧腹部。肿瘤植入1天后，根据体重对小鼠进行随机分组。

贯穿每个研究，每周两次监测小鼠的肿瘤体积和体重。使用实施例1中所描述的方法和公式测量并计算肿瘤体积。

在每个研究的末期，通过单向ANOVA和随后的图基检验分析每组小鼠的肿瘤体积。然后使用分级肿瘤体积分析评估在施用FGFR1-ECD.339-Fc和一种或多种另外的化学治疗分子后达到的增强的(加成的或协同的)或降低的(拮抗的)肿瘤生长抑制的程度。

以下讨论了每个组合的某些研究细节和每个组合的结果。

A.FGFR1-ECD.339-Fc、5-FU、甲酰四氢叶酸和贝伐单抗

FGFR1-ECD.339-Fc在0.9％氯化钠注射液USP(Henry Schein,Inc,Melville,NY；目录号1533826)中以2mg/ml配制并在-80℃下贮存在螺旋帽微量离心管中。阴性对照试剂，人白蛋白，购自Grifols USA(Los Angeles,CA；目录号NDC 61953-0002-1)并在PBS中以3mg/ml配制。5-FU购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO；目录号F6627)并以50mg/ml的浓度最初溶解于二甲亚砜(DMSO,Sigma-Aldrich,St.Louis,MO；目录号D8418-50)中作为储备溶液。将储备溶液进一步在0.9％氯化钠注射液USP中稀释至2mg/ml(用于10mg/kg给药)，稀释至4mg/ml(用于20mg/kg给药)和稀释至6mg/ml(用于30mg/kg给药)。甲酰四氢叶酸(LV)也购自Sigma-Aldrich(目录号F8259)并在0.9％氯化钠注射液USP中以2mg/ml配制(用于10mg/kg给药)，以4mg/ml配制(用于20mg/kg给药)，和以6mg/ml配制(用于30mg/kg给药)。贝伐单抗购自Genentech,Inc(South San Francisco,CA；目录号15734)并在0.9％氯化钠注射液USP中稀释至0.2mg/ml(用于1mg/kg给药)。

在第一次实验中，将FGFR1-ECD.339-Fc与三种不同浓度的5-FU/甲酰四氢叶酸组合。在第二次实验中，将FGFR1-ECD.339-Fc与贝伐单抗或5-FU/甲酰四氢叶酸或二者组合。实验的分组和给药计划显示于表15中。双线将来自两次实验的组分开。

表15.给药计划(在肿瘤植入后1天开始给药)

当组中的平均肿瘤体积为近似600mm³时，通过异氟烷吸入和颈脱位法使该组中的小鼠安乐死。贯穿整个研究，每组小鼠的平均肿瘤体积显示于图11A-11E。在20mg/kg 5-FU/甲酰四氢叶酸和30mg/kg5-FU/甲酰四氢叶酸时，小鼠体重减轻分别约3克和约4克(分别约14％和19％)(数据未示出。)在其余的任何组中未观察到小鼠体重减轻(数据未示出。)

以两种方式评估不同的处理的效力的顺序：1)单一时间点(天)每组中的平均肿瘤体积；和2)每组中平均肿瘤体积达到500mm³的时间(参见图11E中的虚线)。

根据两种方法的实验的结果显示不同的治疗组的抗肿瘤作用为以下的顺序：FGFR1-ECD.339-Fc、贝伐单抗和5-Fu/甲酰四氢叶酸>FGFR1-ECD.339-Fc和贝伐单抗>贝伐单抗和5-Fu/甲酰四氢叶酸＝贝伐单抗>FGFR1-ECD.339-Fc>媒介物。

通过单向ANOVA和随后的图基检验分析第24天在第二次实验中的每组小鼠的平均肿瘤体积。该分析的结果显示于表16。

表16.第24天的肿瘤体积分析

为确定FGFR1-ECD.339-Fc和不同浓度的5-FU/甲酰四氢叶酸；FGFR1-ECD.339-Fc和贝伐单抗；或FGFR1-ECD.339-Fc、贝伐单抗和5-Fu/甲酰四氢叶酸的施用是否引起加成的、协同的或拮抗的活性，如实施例1中所描述分析分级肿瘤体积。该分析的结果显示于表17中。

表17.分级肿瘤体积^a的分析

^b期望值＝(FTV药物1)x(FTV药物2)

^c期望值与观察值比率，>2＝协同；约1＝加成；<0.5＝拮抗。

那些结果显示FGFR1-ECD.339-Fc和不同浓度的5-FU/甲酰四氢叶酸；FGFR1-ECD.339-Fc和贝伐单抗；或FGFR1-ECD.339-Fc、贝伐单抗和5-Fu/甲酰四氢叶酸的施用引起肿瘤生长的加成抑制。

B.FGFR1-ECD.339-Fc、5-FU、甲酰四氢叶酸和奥沙利铂

如以上所描述，在Colo205人结肠癌异种移植模型中测试FGFR1-ECD.339-Fc、5-FU、甲酰四氢叶酸和奥沙利铂的组合。FGFR1-ECD.339-Fc在PBS中以3mg/ml配制(用于以15mg/kg进行施用)。5-FU购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO；目录号F6627)并最初以50mg/ml的浓度溶于二甲亚砜(DMSO，Sigma-Aldrich,St.Louis,MO；目录号D8418-50)中作为储备溶液。将储备溶液进一步在0.9％氯化钠注射液USP中稀释至2mg/ml(用于10mg/kg给药)。甲酰四氢叶酸也购自Sigma-Aldrich(目录号F8259)并以2mg/ml在0.9％氯化钠注射液USP中配制(用于10mg/kg给药)。奥沙利铂获自LC laboratories(Woburn,MA 01801；目录号#O-7111)并以1mg/mL、2mg/mL和3mg/ml在5％葡萄糖注射液(Baxter,Deerfield,IL 60015；目录号#2B0082)中配制，以用于以5mg/kg(每只小鼠100μg/100μL)、10mg/kg(每只小鼠200μg/100μL)和15mg/kg(每只小鼠300μg/100μl)进行施用。

从第1天开始以15mg/kg腹膜内(i.p.)施用FGFR1-ECD.339-Fc，每周两次，持续4周。5-FU和甲酰四氢叶酸每种以10mg/kg每天施用，持续5天。在第1天在一次给药中以5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg腹膜内施用奥沙利铂。

在第28天通过异氟烷吸入和颈脱位法使小鼠安乐死。

贯穿整个研究，每组小鼠的平均肿瘤体积显示于图12A-12C中。在该实验中，FGFR1-ECD.339-Fc、5-FU、甲酰四氢叶酸和奥沙利铂的组合比单独的FGFR1-ECD.339-Fc或5-FU、甲酰四氢叶酸和奥沙利铂的组合更多地抑制肿瘤生长。在5mg/kg奥沙利铂时观察到小鼠极少体重减轻(0.78克，或4％体重)；在10mg/kg时观察到中度体重减轻(2.6克，或13％体重)；和在15mg/kg奥沙利铂时观察到较严重的体重减轻(3.7克，或19％体重)。(数据未示出)。

为确定FGFR1-ECD.339-Fc、5-FU、甲酰四氢叶酸和奥沙利铂的组合是否引起加成的、协同的或拮抗的活性，如实施例1中所描述分析第17天的分级肿瘤体积。该分析的结果显示于表18中。

表18.第17天分级肿瘤体积^a的分析

^b期望值＝(FTV药物1)x(FTV药物2)

^c期望值与观察值比率，>2＝协同；约1＝加成；<0.5＝拮抗。

那些结果显示在该实验中FGFR1-ECD.339-Fc、5-FU、甲酰四氢叶酸和奥沙利铂的施用引起肿瘤生长的加成抑制。

实施例5：FGFR1-ECD.339-Fc、多柔比星和紫杉醇在JIMT-1乳腺癌异种移植模型中的施用

6周龄的雌性SCID小鼠购自Charles River Laboratories(Wilmington,MA)并在研究开始前使其适应环境1周。人乳腺癌细胞系JIMT-1用作肿瘤模型并购自DeutscheSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DMSZ,Braunschweig,Germany；目录号ACC 589)。在含5％CO₂的潮湿的空气中在37℃下在DMEM+10％FBS、1％L-谷氨酰胺和1％青霉素/链霉素中培养细胞10代。当培养的细胞达到85-90％汇合时，收获细胞并以每毫升5×10⁷个细胞重悬于含有50％基质胶的冷的无Ca²⁺和Mg²⁺的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。然后将细胞以5×10⁶细胞/100μl/小鼠皮下植入到小鼠的右侧腹部上。肿瘤植入1天后，以每组10只小鼠根据体重对小鼠进行随机分组。

FGFR1-ECD.339-Fc在0.9％注射用盐水USP中以3mg/ml配制并在第7天开始以15mg/kg(300μg/100μl/小鼠)腹膜内(i.p.)施用，每周两次，持续5周。多柔比星获自Sigma-Aldrich(St.Luis,MO；目录号#44583)并在0.9％注射用盐水USP中以0.05mg/mL配制以用于从第7天开始以0.5mg/kg(每只小鼠10μg/200μL)进行施用，每周一次，持续5周。紫杉醇获自Bedford Laboratories(Bedford,OH：目录号1075029)并在50.3％和49.7％无水乙醇的溶液中配制。将储备溶液在5％葡萄糖/0.9％注射用盐水USP中稀释至以下终浓度：16.8％16.6％无水乙醇、3.3％葡萄糖、0.6％注射用盐水中的3mg/mL紫杉醇。在第7天开始以30mg/kg(每只小鼠60μg/200μL)施用紫杉醇，每周两次，持续5周。

贯穿整个研究，每周两次监测小鼠的肿瘤体积和体重。使用实施例1中所描述的方法和公式测量并计算肿瘤体积。

在第42天通过异氟烷吸入和颈脱位法使小鼠安乐死。

贯穿整个研究，每组小鼠的平均肿瘤体积显示于图13中。在该实验中，FGFR1-ECD.339-Fc、多柔比星和紫杉醇的组合比单独的FGFR1-ECD.339-Fc或无FGFR1-ECD.339-Fc时的多柔比星和紫杉醇的组合更多地抑制了肿瘤生长。在研究过程中未观察到体重减轻(数据未示出)。

使用分级肿瘤体积分析评估由FGFR1-ECD.339-Fc、多柔比星和紫杉醇的组合引起的增强的(加成的或协同的)或降低的(拮抗的)肿瘤生长抑制的程度。该分析的结果显示于表19中。

表19.第21天分级肿瘤体积^a的分析

^b期望值＝(FTV药物1)x(FTV药物2)

^c期望值与观察值比率，>2＝协同；约1＝加成；<0.5＝拮抗。

那些结果表明在该实验中FGFR1-ECD.339-Fc、多柔比星和紫杉醇的组合引起肿瘤生长的加成抑制。

实施例6：在具有H520肺异种移植肿瘤细胞的小鼠中用FGFR1-ECD.339-Fc和KDRECD-Fc处理显示肿瘤抑制

通过流体力学尾静脉转染(TVT)对8周龄的SCID CB17小鼠施用媒介物、激酶插入结构域受体(KDR)cDNA(Five Prime Therapeutics,South San Francisco,CA)(其表达作为VEGF拮抗剂和VEGF trap的蛋白质)、FGFR1cDNA(Five Prime Therapeutics,South SanFrancisco,CA)或KDR和FGFR1的组合，基本上如Chen等,Human Gene Therapy 16(1):126-131(2005)中所描述，且然后4天后在腹部皮下接种5×10⁶个H520肺异种移植肿瘤细胞，其中细胞在100μl总体积的基质胶的1:1混合物中。KDR和FGFR1cDNA构建体每种含有其各自与IgG1Fc结构域融合的胞外域。在约10天的间隔进行肿瘤体积测量。在第29天，相对于媒介物用单独的药剂处理的组中肿瘤体积减小(曼-惠特尼检验(Mann Whitney test)P<0.05)。在第29天，相对于用单独的剂处理的组，组合组中的肿瘤体积减小(曼-惠特尼检验P<0.001)。

实施例7：FGFR1-ECD.339-Fc和顺铂/依托泊苷在DMS 53小细胞肺癌(SCLC)异种移植模型中的施用

6周龄的雌性SCID小鼠购自Charles River Laboratories(Wilmington,MA)并在研究开始前使其适应环境1周。人小细胞肺癌(SCLC)细胞系DMS 53用作肿瘤模型并购自ATCC(Manassas,VA；目录号CRL-2062)。在含5％CO₂的潮湿的空气中在37℃下在Waymouth’sMB 752/1培养基+10％FBS+2mM L-谷氨酰胺中培养细胞3代。当培养的细胞达到85-90％汇合时，收获细胞并以每毫升5×10⁷个细胞重悬于含有50％基质胶的冷的无Ca²⁺和Mg²⁺的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。然后将细胞以5×10⁶个细胞/100μl/小鼠皮下植入到小鼠的右侧腹部上。在肿瘤达到100-125mm³的大小时，对小鼠进行分类和随机分组，从而每组(n＝10)具有大约相同的平均肿瘤体积，并根据以下表20开始处理。

FGFR1-ECD.339-Fc在PBS中以3mg/ml配制并以15mg/kg(300μg/100μl/小鼠)腹膜内(i.p.)施用，每周两次，持续4周。顺铂购自Amatheon,Inc.,Miami,FL(目录号5539-0112-50)，以1mg/ml的浓度进行预配制。将0.45ml的顺铂储备溶液(1mg/ml)添加到1.05ml的5％葡萄糖溶液中，以用作浓度为0.3mg/ml的1.5ml工作液。根据组的不同，每7天或每21天每只小鼠接受100μl的工作液(0.3mg/ml)以提供3mg/kg的剂量。依托泊苷购自Amatheon,Inc(目录号5539-0291-01)，以20mg/ml的浓度预配制。将0.140ml的储备溶液(20mg/ml)添加到3.36ml的5％的葡萄糖溶液中，以用作浓度为0.8mg/ml的3.5ml工作液。每只小鼠接受50μl的工作液(0.8mg/ml)以提供4mg/kg的剂量，连续持续3天。根据组的不同每7天或每21天重复依托泊苷给药。在组合组中，FGFR1-ECD.339-Fc和顺铂/依托泊苷共同施用。人白蛋白购自Grifols USA(Los Angeles,CA：目录号NDC 61953-0002-1)，用0.9％氯化钠稀释为工作储备溶液(3mg/ml)，并以300μg/100μl/小鼠(15mg/kg)用作阴性对照。每组小鼠的给药计划显示于表20中。

表20

实施例8：FGFR1-ECD.339-Fc和拓扑替康在DMS 53小细胞肺癌(SCLC)异种移植模型中的施用

6周龄的雌性SCID小鼠购自Charles River Laboratories(Wilmington,MA)并在研究开始前使其适应环境1周。人小细胞肺癌(SCLC)细胞系DMS 53用作肿瘤模型并购自ATCC(Manassas,VA；目录号CRL-2062)。在含5％CO₂的潮湿的空气中在37℃下在Waymouth’sMB 752/1培养基+10％FBS+2mM L-谷氨酰胺中培养细胞3代。当培养的细胞达到85-90％汇合时，收获细胞并以每毫升5×10⁷个细胞重悬于含有50％基质胶的冷的无Ca²⁺和Mg²⁺的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。然后将细胞以5×10⁶个细胞/100μl/小鼠皮下植入到小鼠的右侧腹部上。在肿瘤达到100-125mm³的大小时，对小鼠进行分类和随机分组，从而每组(n＝10)具有大约相同的平均肿瘤体积，并根据以下表21开始处理。

FGFR1-ECD.339-Fc在PBS中以3mg/ml配制并以15mg/kg(300μg/100μl/小鼠)腹膜内(i.p.)施用，每周两次，持续4周。拓扑替康粉末购自Sigma-Aldrich,Inc.(目录号T2705-50MG)并在5％葡萄糖溶液中制备5mg/ml储备溶液。还用5％葡萄糖溶液制备稀释液。将0.6ml的储备溶液(5mg/ml)添加到5.4ml的5％葡萄糖溶液中，以用作浓度为0.5mg/ml的6ml工作液。每只小鼠接受100μl的工作液(0.5mg/ml)以得到2.5mg/kg的剂量。根据组的不同每7天或每21天重复拓扑替康给药。在组合组中，FGFR1-ECD.339-Fc和拓扑替康共同施用。人白蛋白购自Grifols USA(Los Angeles,CA：目录号NDC 61953-0002-1)，用0.9％氯化钠稀释至工作储备溶液(3mg/ml)，并以300μg/100μl/小鼠(15mg/kg)用作阴性对照。每组小鼠的给药计划显示于表21中。

表21

序列表

表22列出了本文所讨论的某些序列。除非另外指明，显示无信号肽的FGFR1序列。

表22：序列和描述

序列表

<110> 戊瑞治疗有限公司

<120> FGFR1胞外域组合疗法

<130> P1004

<150> US 61/413,940

<151> 2010-11-15

<150> US 61/421,462

<151> 2010-12-09

<160> 10

<170> PatentIn 3.5 版

<210> 1

<211> 374

<212> PRT

<213> 人

<400> 1

Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala

1 5 10 15

Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln

20 25 30

Pro Trp Gly Ala Pro Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly

35 40 45

Asp Leu Leu Gln Leu Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile

50 55 60

Asn Trp Leu Arg Asp Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg

65 70 75 80

Ile Thr Gly Glu Glu Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser

85 90 95

Gly Leu Tyr Ala Cys Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr

100 105 110

Tyr Phe Ser Val Asn Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp

115 120 125

Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr

130 135 140

Lys Pro Asn Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu

145 150 155 160

Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys

165 170 175

Pro Ser Ser Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly

180 185 190

Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr

195 200 205

Ala Thr Trp Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly

210 215 220

Asn Tyr Thr Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr

225 230 235 240

Tyr Gln Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln

245 250 255

Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu

260 265 270

Phe Met Cys Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu

275 280 285

Lys His Ile Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro

290 295 300

Tyr Val Gln Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu

305 310 315 320

Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu

325 330 335

Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala

340 345 350

Trp Leu Thr Val Leu Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Val Met Thr

355 360 365

Ser Pro Leu Tyr Leu Glu

370

<210> 2

<211> 353

<212> PRT

<213> 人

<400> 2

Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln Pro Trp Gly Ala Pro

1 5 10 15

Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly Asp Leu Leu Gln Leu

20 25 30

Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile Asn Trp Leu Arg Asp

35 40 45

Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg Ile Thr Gly Glu Glu

50 55 60

Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys

65 70 75 80

Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Phe Ser Val Asn

85 90 95

Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp

100 105 110

Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr Lys Pro Asn Pro Val

115 120 125

Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu Lys Lys Leu His Ala

130 135 140

Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys Pro Ser Ser Gly Thr

145 150 155 160

Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro

165 170 175

Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr Ala Thr Trp Ser Ile

180 185 190

Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Ile

195 200 205

Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr Gln Leu Asp Val

210 215 220

Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala

225 230 235 240

Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu Phe Met Cys Lys Val

245 250 255

Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Glu Val

260 265 270

Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gln Ile Leu

275 280 285

Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val Leu His

290 295 300

Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala

305 310 315 320

Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu

325 330 335

Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Val Met Thr Ser Pro Leu Tyr Leu

340 345 350

Glu

<210> 3

<211> 360

<212> PRT

<213> 人

<400> 3

Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala

1 5 10 15

Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln

20 25 30

Pro Trp Gly Ala Pro Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly

35 40 45

Asp Leu Leu Gln Leu Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile

50 55 60

Asn Trp Leu Arg Asp Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg

65 70 75 80

Ile Thr Gly Glu Glu Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser

85 90 95

Gly Leu Tyr Ala Cys Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr

100 105 110

Tyr Phe Ser Val Asn Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp

115 120 125

Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr

130 135 140

Lys Pro Asn Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu

145 150 155 160

Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys

165 170 175

Pro Ser Ser Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly

180 185 190

Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr

195 200 205

Ala Thr Trp Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly

210 215 220

Asn Tyr Thr Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr

225 230 235 240

Tyr Gln Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln

245 250 255

Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu

260 265 270

Phe Met Cys Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu

275 280 285

Lys His Ile Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro

290 295 300

Tyr Val Gln Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu

305 310 315 320

Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu

325 330 335

Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala

340 345 350

Trp Leu Thr Val Leu Glu Ala Leu

355 360

<210> 4

<211> 339

<212> PRT

<213> 人

<400> 4

Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln Pro Trp Gly Ala Pro

1 5 10 15

Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly Asp Leu Leu Gln Leu

20 25 30

Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile Asn Trp Leu Arg Asp

35 40 45

Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg Ile Thr Gly Glu Glu

50 55 60

Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys

65 70 75 80

Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Phe Ser Val Asn

85 90 95

Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp

100 105 110

Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr Lys Pro Asn Pro Val

115 120 125

Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu Lys Lys Leu His Ala

130 135 140

Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys Pro Ser Ser Gly Thr

145 150 155 160

Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro

165 170 175

Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr Ala Thr Trp Ser Ile

180 185 190

Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Ile

195 200 205

Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr Gln Leu Asp Val

210 215 220

Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala

225 230 235 240

Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu Phe Met Cys Lys Val

245 250 255

Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Glu Val

260 265 270

Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gln Ile Leu

275 280 285

Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val Leu His

290 295 300

Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala

305 310 315 320

Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu

325 330 335

Glu Ala Leu

<210> 5

<211> 592

<212> PRT

<213> 人

<400> 5

Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala

1 5 10 15

Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln

20 25 30

Pro Trp Gly Ala Pro Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly

35 40 45

Asp Leu Leu Gln Leu Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile

50 55 60

Asn Trp Leu Arg Asp Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg

65 70 75 80

Ile Thr Gly Glu Glu Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser

85 90 95

Gly Leu Tyr Ala Cys Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr

100 105 110

Tyr Phe Ser Val Asn Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp

115 120 125

Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr

130 135 140

Lys Pro Asn Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu

145 150 155 160

Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys

165 170 175

Pro Ser Ser Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly

180 185 190

Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr

195 200 205

Ala Thr Trp Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly

210 215 220

Asn Tyr Thr Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr

225 230 235 240

Tyr Gln Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln

245 250 255

Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu

260 265 270

Phe Met Cys Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu

275 280 285

Lys His Ile Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro

290 295 300

Tyr Val Gln Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu

305 310 315 320

Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu

325 330 335

Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala

340 345 350

Trp Leu Thr Val Leu Glu Ala Leu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr

355 360 365

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

370 375 380

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

385 390 395 400

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

405 410 415

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

420 425 430

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

435 440 445

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

450 455 460

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

465 470 475 480

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

485 490 495

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

500 505 510

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

515 520 525

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

530 535 540

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

545 550 555 560

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

565 570 575

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

580 585 590

<210> 6

<211> 571

<212> PRT

<213> 人

<400> 6

Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln Pro Trp Gly Ala Pro

1 5 10 15

Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly Asp Leu Leu Gln Leu

20 25 30

Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile Asn Trp Leu Arg Asp

35 40 45

Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg Ile Thr Gly Glu Glu

50 55 60

Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys

65 70 75 80

Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Phe Ser Val Asn

85 90 95

Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp

100 105 110

Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr Lys Pro Asn Pro Val

115 120 125

Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu Lys Lys Leu His Ala

130 135 140

Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys Pro Ser Ser Gly Thr

145 150 155 160

Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro

165 170 175

Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr Ala Thr Trp Ser Ile

180 185 190

Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Ile

195 200 205

Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr Gln Leu Asp Val

210 215 220

Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala

225 230 235 240

Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu Phe Met Cys Lys Val

245 250 255

Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile Glu Val

260 265 270

Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gln Ile Leu

275 280 285

Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val Leu His

290 295 300

Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala

305 310 315 320

Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu

325 330 335

Glu Ala Leu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

340 345 350

Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

355 360 365

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

370 375 380

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

385 390 395 400

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

405 410 415

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

420 425 430

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

435 440 445

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

450 455 460

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp

465 470 475 480

Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

485 490 495

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

500 505 510

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

515 520 525

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

530 535 540

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

545 550 555 560

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

565 570

<210> 7

<211> 21

<212> PRT

<213> 人

<400> 7

Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala

1 5 10 15

Thr Leu Cys Thr Ala

20

<210> 8

<211> 232

<212> PRT

<213> 人

<400> 8

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

35 40 45

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

50 55 60

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

65 70 75 80

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

85 90 95

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

100 105 110

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

115 120 125

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr

130 135 140

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

145 150 155 160

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

165 170 175

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

180 185 190

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

195 200 205

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 9

<211> 228

<212> PRT

<213> 人

<400> 9

Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val

1 5 10 15

Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

20 25 30

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

35 40 45

His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

50 55 60

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

65 70 75 80

Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn

85 90 95

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro

100 105 110

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

115 120 125

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

130 135 140

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145 150 155 160

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

165 170 175

Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

180 185 190

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

195 200 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

210 215 220

Ser Pro Gly Lys

225

<210> 10

<211> 229

<212> PRT

<213> 人

<400> 10

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys

225

Claims

1.一种治疗癌症的方法，所述方法包括向受治疗者施用成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)胞外域(ECD)和选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、拓扑替康、VEGF拮抗剂、VEGFtrap、抗VEGF抗体和贝伐单抗中的至少一种另外的治疗剂。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述FGFR1 ECD还包含融合伴侣。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗剂是多西他赛。

4.如权利要求1或2所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗剂是紫杉醇。

5.如权利要求1或2所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗剂是顺铂。

6.如权利要求1或2所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗剂是培美曲塞。

7.如权利要求1或2所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗剂是长春新碱。

8.如权利要求1或2所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗剂是5-FU。

9.如权利要求1或2所述的方法，其中所述至少一种另外的治疗剂是拓扑替康。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述方法包括向所述受治疗者施用选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、拓扑替康、VEGF拮抗剂、VEGF trap、抗VEGF抗体和贝伐单抗中的至少两种另外的治疗剂。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述至少两种另外的治疗剂中的一种是紫杉醇、奥沙利铂、5-FU或贝伐单抗。

12.如权利要求10所述的方法，其中所述至少两种另外的治疗剂是紫杉醇和卡铂。

13.如权利要求10所述的方法，其中所述至少两种另外的治疗剂是奥沙利铂和5-FU。

14.如权利要求10所述的方法，其中所述至少两种另外的治疗剂是多柔比星和紫杉醇。

15.如权利要求10所述的方法，其中所述至少两种另外的治疗剂是5-FU和甲酰四氢叶酸。

16.如权利要求10所述的方法，其中所述至少两种另外的治疗剂是贝伐单抗和5-FU。

17.如权利要求10所述的方法，其中所述至少两种另外的治疗剂是顺铂和依托泊苷。

18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述FGFR1 ECD包括选自SEQ ID NO:1至4的氨基酸序列。

19.如权利要求2-18中任一项所述的方法，其中所述FGFR1 ECD还包含融合伴侣并且所述融合伴侣是Fc。

20.如权利要求19所述的方法，其中所述FGFR1 ECD和Fc包括选自SEQ ID NO:5和SEQID NO:6的序列。

21.一种剂量包，其包含选自以下的至少一种组分：(i)成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)胞外域(ECD)，(ii)成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)胞外域(ECD)融合分子，和(iii)选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、依托泊苷、拓扑替康、VEGF拮抗剂、VEGF trap、抗VEGF抗体和培美曲塞中的至少一种另外的治疗剂，其中所述剂量包还包含用于和向患者施用FGFR1 ECD或FGFR1ECD融合分子和所述至少一种另外的治疗剂的说明书。

22.一种成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)胞外域(ECD)和至少一种另外的治疗剂的组合，所述至少一种另外的治疗剂选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、拓扑替康、和贝伐单抗，以用于癌症的治疗。

23.一种成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)胞外域(ECD)和至少两种另外的治疗剂的组合，所述至少两种另外的治疗剂选自多西他赛、紫杉醇、长春新碱、卡铂、顺铂、奥沙利铂、多柔比星、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲酰四氢叶酸、培美曲塞、依托泊苷、拓扑替康、VEGF拮抗剂、VEGF trap、抗VEGF抗体和贝伐单抗，以用于癌症的治疗。