CN106905447A - 一种加工肝素钠粗品的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种加工肝素钠粗品的方法，将新鲜的猪肺或解冻的猪肺，绞成糊状料，加入细胞活化剂催化，再经生物酶酶解、除杂分离过滤得到含有肝素钠的溶液，再经树脂吸附、洗脱及有机溶剂沉淀、干燥得到肝素钠粗品。本发明肝素钠粗品的提取方法能够提高产品品质及有效获得率、降低生产成本，适用于工业化生产，减少废弃物排放，具有社会、环保、经济效益。

Description

一种加工肝素钠粗品的方法

技术领域

本发明涉及一种加工肝素钠领域，具体而言涉及一种加工肝素钠粗品的方法。

背景技术

肝素是一种天然抗凝血药物，具有溶解血栓和阻止血液凝固的功能，也是世界上迄今为止已知的分子结构最复杂的化合物。由于竞争激烈，导致原料成本价位居高不下，而利用猪肺提取工艺由于传统、落后的盐解、沉淀技术使其纯度无法提升，使其无法快速发展，也造成了大量的资源浪费。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种加工肝素钠粗品的方法，本发明利用高速离心分离技术有效提取肝素钠，从而大力提高生产效率，降低生产成本、提高产品品质和获得率的方法，有利于工业化生产。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种肝素钠粗品的提取方法，包括：将新鲜猪肺或解冻的猪肺经剥离去除气管、脂肪后绞成糊状料，得猪肺浆料，向猪肺浆料中加入0.5倍猪肺浆料重量的去离子水，再分别加入占猪肺浆料重量0.2%的防腐剂及细胞活化剂，在35℃间歇搅拌反应5小时后，得第一猪肺浆料液，向第一猪肺浆料液中加入2倍第一猪肺浆料液重量的去离子水，得第二猪肺浆料液，再加入占第二猪肺浆料液重量5%的氯化钠，用氢氧化钠溶液调pH至10，在30℃下间歇搅拌反应5小时，得猪肺碱解液；将得到的猪肺碱解液缓慢加热至45℃，加氢氧化钠溶液调pH值至9，加入占猪肺碱解液重量0.2%的蛋白复合酶，再加入氯化钠使猪肺碱解液中氯化钠的浓度为15%，搅拌5小时后再缓缓升温至65℃，保温、搅拌反应5小时，得到猪肺酶解液；将得到的猪肺酶解液15分钟快速升温至80℃，保温1.5h后加入占猪肺酶解液重量2%的蛋白沉淀剂，搅拌1小时，静止沉淀，用150目尼龙袋过滤，收集清液；将得到的清液降温至80℃，采用管式离心机液液蛋白分离设备处理，得到肝素钠纯浆液；向得到的肝素钠纯浆液中加入2倍体积的去离子水并升温至60℃，再加入8%的树脂，用氢氧化钠溶液调pH值至9，搅拌6小时使树脂充分吸附，静置1小时后用100目尼龙袋过滤收集所吸附的树脂；向得到的树脂中加入5倍树脂重量的去离子水及与树脂等重量的2.5mol/L的氯化钠溶液，调pH至10，搅拌洗脱树脂，用100目尼龙袋过滤收集滤液作为为第一次滤液，向过滤出的树脂中再加入3倍树脂重量的去离子水及1倍树脂重量的2.5mol/L的氯化钠溶液，再洗脱一次，得到第二次滤液，合并两次滤液；向得到的滤液中加入2倍体积的80%预冷乙醇，搅拌30分钟，静置12小时后吸除乙醇，收集下层沉淀物，滤干，用无水乙醇冲洗脱水，再用丙酮脱水，在70℃下真空干燥得到肝素钠粗品；所述防腐剂为苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、脱氢乙酸钠中一种或任意几种的混合物；所述细胞活化剂为十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲溴化铵、硫代硫酸钠中一种或任意几种的混合物；所述间歇搅拌为搅拌速度小于60转/分，每小时搅拌2次，每次搅拌20分钟，停止20分钟；所述蛋白复合酶为胰蛋白酶、地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、木瓜蛋白酶中任意几种的混合物；所述蛋白沉淀剂为硫酸铵、硫酸亚铁、硫酸铝、三氯化铁、氯化钙中的一种或几种的混合物；所述树脂是指强碱性阴离子交换树脂。本发明方法在提取肝素钠时，以细胞活化剂及酶解剂对猪肺原料进行处理，使其细胞迅速降解、肝素从肺组织的肥大细胞中与纤维蛋白组织分离而获得释放，添加蛋白沉淀剂使其蛋白沉淀避免了强酸、强碱法除蛋白而损害肝素钠活性，采用管式离心机技术，利用不同分子密度的沉降差异,有效分离去除大分子如：蛋白质、脂类、菌体、鞣质等杂质，解决了长期以来肝素钠与杂质难以分离的困扰，降低了杂质对树脂吸附过程中的干扰，相对传统工艺减少了树脂用量，更便于后续树脂的有效吸附、洗脱及有机溶剂沉淀、真空烘干的工艺处理，有效地提高了产品的质量、产品效价和获得率，同时，分离出的蛋白可作为化妆品或饲料的理想原料，分离出的气管可作为软骨素的生产原料，废水可回收再利用，故无废渣、废水排放，有利于规模化生产，社会、环保、经济效益显著。

具体实施方式

1.一种加工肝素钠粗品的方法，其特征在于，包括：将新鲜猪肺或解冻的猪肺经剥离去除气管、脂肪后绞成糊状料，得猪肺浆料，向猪肺浆料中加入0.5倍猪肺浆料重量的去离子水，再分别加入占猪肺浆料重量0.2%的防腐剂及细胞活化剂，在35℃间歇搅拌反应5小时后，得第一猪肺浆料液，向第一猪肺浆料液中加入2倍第一猪肺浆料液重量的去离子水，得第二猪肺浆料液，再加入占第二猪肺浆料液重量5%的氯化钠，用氢氧化钠溶液调pH至10，在30℃下间歇搅拌反应5小时，得猪肺碱解液；将得到的猪肺碱解液缓慢加热至45℃，加氢氧化钠溶液调pH值至9，加入占猪肺碱解液重量0.2%的蛋白复合酶，再加入氯化钠使猪肺碱解液中氯化钠的浓度为15%，搅拌5小时后再缓缓升温至65℃，保温、搅拌反应5小时，得到猪肺酶解液；将得到的猪肺酶解液15分钟快速升温至80℃，保温1.5h后加入占猪肺酶解液重量2%的蛋白沉淀剂，搅拌1小时，静 止沉淀，用150目尼龙袋过滤，收集清液；将得到的清液降温至80℃，采用管式离心机液液蛋白分离设备处理，得到肝素钠纯浆液；向得到的肝素钠纯浆液中加入2倍体积的去离子水并升温至60℃，再加入8%的树脂，用氢氧化钠溶液调pH值至9，搅拌6小时使树脂充分吸附，静置1小时后用100目尼龙袋过滤收集所吸附的树脂；向得到的树脂中加入5倍树脂重量的去离子水及与树脂等重量的2.5mol/L的氯化钠溶液，调pH至10，搅拌洗脱树脂，用100目尼龙袋过滤收集滤液作为为第一次滤液，向过滤出的树脂中再加入3倍树脂重量的去离子水及1倍树脂重量的2.5mol/L的氯化钠溶液，再洗脱一次，得到第二次滤液，合并两次滤液；向得到的滤液中加入2倍体积的80%预冷乙醇，搅拌30分钟，静置12小时后吸除乙醇，收集下层沉淀物，滤干，用无水乙醇冲洗脱水，再用丙酮脱水，在70℃下真空干燥得到肝素钠粗品；所述防腐剂为苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、脱氢乙酸钠中一种或任意几种的混合物；所述细胞活化剂为十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲溴化铵、硫代硫酸钠中一种或任意几种的混合物；所述间歇搅拌为搅拌速度小于60转/分，每小时搅拌2次，每次搅拌20分钟，停止20分钟；所述蛋白复合酶为胰蛋白酶、地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、木瓜蛋白酶中任意几种的混合物；所述蛋白沉淀剂为硫酸铵、硫酸亚铁、硫酸铝、三氯化铁、氯化钙中的一种或几种的混合物；所述树脂是指强碱性阴离子交换树脂。

以上对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

Claims (1)

1.一种加工肝素钠粗品的方法，其特征在于，包括：将新鲜猪肺或解冻的猪肺经剥离去除气管、脂肪后绞成糊状料，得猪肺浆料，向猪肺浆料中加入0.5倍猪肺浆料重量的去离子水，再分别加入占猪肺浆料重量0.2%的防腐剂及细胞活化剂，在35℃间 歇搅拌反应5小时后，得第一猪肺浆料液，向第一猪肺浆料液中加入2倍第一猪肺浆料液重量的去离子水，得第二猪肺浆料液，再加入占第二猪肺浆料液重量5%的氯化钠，用氢氧化钠溶液调pH至10，在30℃下间歇搅拌反应5小时，得猪肺碱解液；将得到的猪肺碱解液缓慢加热至45℃，加氢氧化钠溶液调pH值至9，加入占猪肺碱解液重量0.2%的蛋白复合酶，再加入氯化钠使猪肺碱解液中氯化钠的浓度为15%，搅拌5小时后再缓缓升温至65℃，保温、搅拌反应5小时，得到猪肺酶解液；将得到的猪肺酶解液15分钟快速升温至80℃，保温1.5h后加入占猪肺酶解液重量2%的蛋白沉淀剂，搅拌1小时，静止沉淀，用150目尼龙袋过滤，收集清液；将得到的清液降温至80℃，采用管式离心机液液蛋白分离设备处理，得到肝素钠纯浆液；向得到的肝素钠纯浆液中加入2倍体积的去离子水并升温至60℃，再加入8%的树脂，用氢氧化钠溶液调pH值至9，搅拌6小时使树脂充分吸附，静置1小时后用100目尼龙袋过滤收集所吸附的树脂；向得到的树脂中加入5倍树脂重量的去离子水及与树脂等重量的2.5mol/L的氯化钠溶液，调pH至10，搅拌洗脱树脂，用100目尼龙袋过滤收集滤液作为为第一次滤液，向过滤出的树脂中再加入3倍树脂重量的去离子水及1倍树脂重量的2.5mol/L的氯化钠溶液，再洗脱一次，得到第二次滤液，合并两次滤液；向得到的滤液中加入2倍体积的80%预冷乙醇，搅拌30分钟，静置12小时后吸除乙醇，收集下层沉淀物，滤干，用无水乙醇冲洗脱水，再用丙酮脱水，在70℃下真空干燥得到肝素钠粗品；所述防腐剂为苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、脱氢乙酸钠中一种或任意几种的混合物；所述细胞活化剂为十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲溴化铵、硫代硫酸钠中一种或任意几种的混合物；所述间歇搅拌为搅拌速度小于60转/分，每小时搅拌2次，每次搅拌20分钟，停止20分钟；所述蛋白复合酶为胰蛋白酶、地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶、木瓜蛋白酶中任意几种的混合物；所述蛋白沉淀剂为硫酸铵、硫酸亚铁、硫酸铝、三氯化铁、氯化钙中的一种或几种的混合物；所述树脂是指强碱性阴离子交换树脂。