CN106701666A - 一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液及方法 - Google Patents
一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液及方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106701666A CN106701666A CN201710053619.2A CN201710053619A CN106701666A CN 106701666 A CN106701666 A CN 106701666A CN 201710053619 A CN201710053619 A CN 201710053619A CN 106701666 A CN106701666 A CN 106701666A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dmem
- mesenchymal stem
- liquid
- induction
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 51
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 51
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 32
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 24
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims abstract description 45
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims abstract description 38
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 102000005862 Angiotensin II Human genes 0.000 claims abstract description 17
- NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 5-azacytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims abstract description 10
- CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N Ile(5)-angiotensin II Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=[NH2+])NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC([O-])=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 59
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 claims description 41
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 20
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 12
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 10
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 7
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 6
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 claims description 5
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 claims description 5
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 4
- 229940099456 transforming growth factor beta 1 Drugs 0.000 claims description 4
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 claims 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 claims 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 abstract description 7
- 230000035897 transcription Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 5-Azacytidine Natural products O=C1N=C(N)N=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 3
- 229960002756 azacitidine Drugs 0.000 abstract 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 abstract 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 abstract 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 abstract 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 description 5
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 5
- 102000013394 Troponin I Human genes 0.000 description 5
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 description 5
- 102000004987 Troponin T Human genes 0.000 description 5
- 108090001108 Troponin T Proteins 0.000 description 5
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 description 5
- 241001597008 Nomeidae Species 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 4
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 4
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 4
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 4
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 3
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 3
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 3
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 3
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 3
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 description 3
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 3
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 3
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 3
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 229960003712 propranolol Drugs 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 2
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 2
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N (+)-haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@]2(O)[C@H]1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N 0.000 description 1
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Natural products C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 241001062009 Indigofera Species 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010042434 Sudden death Diseases 0.000 description 1
- 208000033774 Ventricular Remodeling Diseases 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003425 amniotic epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 230000009194 climbing Effects 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006160 differential media Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 210000004409 osteocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0657—Cardiomyocytes; Heart cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/40—Nucleotides, nucleosides or bases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/15—Transforming growth factor beta (TGF-β)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
- C12N2501/32—Angiotensins [AT], angiotensinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/13—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells
- C12N2506/1346—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells from mesenchymal stem cells
- C12N2506/1392—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells from mesenchymal stem cells from mesenchymal stem cells from other natural sources
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及医学领域，公开了一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液及方法。本发明所述诱导液为包括胎牛血清、5‑氮杂胞苷、血管紧张素II和转录生长因子β1的DMEM/F12培养液。本发明在传统的诱导剂5‑氮杂胞苷基础上，额外添加了血管紧张素II和转录生长因子β1两种适宜组分，利用三者的联合作用共同诱导羊膜间充质干细胞分化为心肌样细胞，能够显著提高羊膜间充质干细胞的诱导分化率。
Description
技术领域
本发明涉及医学领域，具体的说是涉及一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液及方法。
背景技术
心肌梗死是由于冠状动脉循环改变引起冠脉血流和心肌需求之间不平衡而导致的心肌损坏，是临床上一种严重的缺血性心脏病。坏死后的心肌细胞逐渐被瘫痕组织所取代，由于瘫痕组织缺乏弹性,难以满足心脏收舒功能的要求,为代偿损失心肌细胞的功能,心脏逐渐发生退行性左心室重塑，心功能下降，最终导致充血性心力衰竭,甚至猝死。临床药物和介入治疗虽可以改善症状，但却不能挽回受损的心肌细胞。心脏移植虽可以从根本上解决心室重构问题，但因为其供体受限，医疗费用太高而难以广泛应用。近年来的研究表明，心肌细胞也具有再生能力，在心肌梗死后，心肌细胞也可以发生分裂和增殖。但是，由于其增殖能力较弱，不能满足弥补丧失心肌细胞数量的要求而逆转心室重构过程。近年来随着干细胞技术和组织工程学研究的不断深入，干细胞移植治疗心肌梗死成为临床研究的热点。
干细胞的多向分化潜能及可塑性使心肌梗死心肌细胞再生成为可能，在人体的微环境作用下，干细胞定向归巢至损伤处，可以多项分化成各种组织细胞及血管。目前用于心肌梗死治疗研究的干细胞主要有骨髓间充质干细胞、胚胎干细胞、脐带间充质干细胞、脂肪干细胞等。如专利CN105176920A、CN1536076A分别公开了脐带间充质干细胞和骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞的方法。目前研究表明，在体外常用5-氮杂胞苷，骨形态发生蛋白-2等作为诱导剂诱导间充质干细胞向心肌样细胞分化，如上述所提到的两个专利均是采用5-氮杂胞苷作为诱导剂。
人胎盘来源的羊膜组织作为孕妇分娩后的废弃物，来源广、增殖快且不受伦理道德限制，是近几年的研究热点。羊膜是胎盘包裹胎儿面的一层半透明膜，其表面没有神经、血管、肌肉和淋巴等组织，可分离出羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞。早在50多年前，科学家和临床医生们就已经认识到羊膜拥有一定的生物学作用。早期羊膜曾被用作覆盖皮肤伤口的敷料，可以抗感染、减轻炎症的发生，并且抑制细胞的免疫反应，还可以刺激血管的生成。这些特点使它在多种疾病的辅助治疗中得到了较为广泛的应用，例如治疗烧伤，覆盖手术伤口，更重要的是用于眼表重建术。其中人胎盘羊膜来源的间充质干细胞(humanamnion mesenchymal cells,hAMSCs)来自于原条期的胚外中胚层，具有在一定条件下向多个细胞系分化潜能，向内胚层分化，如肝细胞、胰岛样细胞；向中胚层分化，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞；向外胚层分化，如神经细胞等。
hAMSCs不仅具有干细胞的特征，且不排斥性及免疫效果，是细胞移植和组织工程的理想种子细胞。hAMSCs在体外使用合适的诱导剂同样具有分化为心肌样细胞的能力。hAMSCs这种功能特性极大地吸引了来自基础医学和临床医学的研究者，给基础科学的研究者们提供了一种研究发展生物学的模式，hAMSCs所具有的修复、替代和再生能力也为临床医学提供了一个发展新疗法的机会。
然而，目前对于hAMSCs向心肌样细胞分化诱导的研究报道尚少。由于生物体是一个复杂的存在多诱导因素的有机体，不同的干细胞有不同的微环境，采用现有常规的诱导方法并不能使hAMSCs具有较高的诱导分化率。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液，使得所述诱导液能够使人胎盘羊膜来源的间充质干细胞在向心肌样细胞分化时具备较高的诱导分化率。同时，基于该诱导液本发明还提供了一种诱导分化方法。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种诱导羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液，该诱导液为包括胎牛血清、5-氮杂胞苷、血管紧张素II和转录生长因子β1的DMEM/F12培养液。
针对现有技术中人胎盘羊膜来源的间充质干细胞(hAMSCs)向心肌样细胞分化的诱导分化率较低的问题，本发明在常用的5-氮杂胞苷(5-aza)基础上，选择血管紧张素II(Ang-II)和转录生长因子β1(TGFβ1)作为新的组分，三者相互作用提高了hAMSCs的诱导分化率。
作为优选，本发明所述诱导液为包括10％胎牛血清、5-10μmol/L 5-氮杂胞苷、5-10μmol/L血管紧张素II和5-10μg/L转录生长因子β1的DMEM/F12培养液。
在本发明具体实施方式中，所述诱导液以DMEM/F12培养液为基础组分，同时包含如下之一组分：
(1)10％胎牛血清、5μmol/L 5-氮杂胞苷、5μmol/L血管紧张素II和5μg/L转录生长因子β1；
(2)10％胎牛血清、10μmol/L 5-氮杂胞苷、5μmol/L血管紧张素II和10μg/L转录生长因子β1；
(3)10％胎牛血清、10μmol/L 5-氮杂胞苷、10μmol/L血管紧张素II和5μg/L转录生长因子β1；
(4)10％胎牛血清、5μmol/L 5-氮杂胞苷、5μmol/L血管紧张素II和10μg/L转录生长因子β1。
在hAMSCs诱导分化的试验中，采用本发明诱导液的诱导分化率均在30％以上，最高可达到43％；而作为对照的诱导液，其诱导分化率均未超过25％。基于此技术效果，本发明提出了所述诱导液在诱导羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化和/或制备诱导羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导试剂中的应用。
同时，本发明提供了一种诱导羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，将羊膜间充质干细胞先进行贴壁培养，然后接种于权利要求3任意一项所述诱导液中诱导培养，期间定期更换诱导液。
作为优选，所述方法为将羊膜间充质干细胞按1×104cells/mL密度接种于含10％胎牛血清DMEM/F12培养液中贴壁培养24h，然后更换本发明所述诱导液，在37℃、5％CO2、饱和湿度环境下静置诱导培养4周，期间2-3天换液一次。
作为优选，本发明所述羊膜间充质干细胞为人羊膜间充质干细胞。
本发明所述羊膜间充质干细胞可参照本领域常规方法制备获得，在本发明中给出了较佳的制备方法：
用剪刀将羊膜从胎盘上剪下并清洗，然后剪成小块加入胰蛋白酶消化，消化后再次剪碎，加入Ⅰ型胶原酶消化，消化后过筛，加入含10％FBS的DMEM/F12完全培养基重悬细胞并进行培养，至细胞长满80-90％传代，定期更换新鲜的含10％FBS的DMEM/F12完全培养基。
更为具体地，制备过程按照如下方法进行：
取材：无菌条件下取38-40周正常剖宫产胎盘，无肝炎、梅毒、HIV等传染性疾病，产妇及其家属对胎盘可能用于科学研究均签署了知情同意书。
漂洗：用手术剪把整个羊膜从胎盘上剪下来放入15cm玻璃培养皿中，去除血块和损伤较严重的部位，PBS缓冲液漂洗3-4次。
剪碎：用手术剪将羊膜剪成(30-50)cm2大小的组织，分装到50mL离心管中(体积10-15ml)。
胰酶消化：加入三倍体积的0.25％胰蛋白酶，置37℃、200R恒温振荡器中消化30min，每10min取出用手剧烈摇晃。
二次漂洗：消化结束后，用镊子将消化好的组织块转移至装有PBS缓冲液的250mL储液瓶中，盖紧盖子用手剧烈摇晃，PBS缓冲液漂洗2-3次。
二次剪碎：用手术剪将羊膜剪成(10-30)cm2大小的组织。
Ⅰ型胶原酶消化：加入20mL的0.5％Ⅰ型胶原酶，补加DMEM/F12培养基至终体积为100mL。置37℃、200R恒温振荡器中消化，每10min取出用手剧烈摇晃，直到组织块完全消化。
过筛：消化完成后，消化好的组织液分装至50mL离心管，每管20-25mL，加入等体积的PBS缓冲液，2000rpm离心5min。弃上清后加入10mLPBS缓冲液重悬细胞沉淀，200μm细胞筛网过滤。2000rpm离心5min。弃上清，加入5-10mL含10％FBS的DMEM/F12完全培养基重悬细胞。
细胞计数与接种：对细胞悬液进行细胞计数，根据计数结果调整细胞悬液密度到1.0-1.5×105cell/mL接种于培养皿中，5％CO2培养箱37℃培养。
原代培养：细胞接种48h后，对原代细胞进行换液，更换新鲜的含10％FBS的DMEM/F12完全培养基，放置5％CO2培养箱37℃培养至细胞长满80-90％传代。
作为优选，所述传代为待原代细胞长满80-90％，用吸管吸弃旧培养液，加入胰蛋白酶消化，镜下观察细胞收缩变圆时，立即加入含10％FBS的DMEM/F12培养液终止消化，离心收集细胞，加入适量含10％FBS的DMEM/F12完全培养基传代培养，每隔3-4天传代一次。
更为具体地，待细胞长满80-90％，用吸管吸弃旧培养液，加入2-3mL0.25％胰蛋白酶，消化1-3分钟，镜下观察细胞收缩变圆时，立即加入适量含10％FBS的DMEM/F12培养液终止消化，收集细胞，1500rpm离心5min，弃上清。加入适量含10％FBS的DMEM/F12完全培养基，进行细胞计数，按1×105cell/mL密度接种于培养皿中进行传代培养，5％CO2培养箱37℃培养，每隔3-4天传代一次。
由以上技术方案可知，本发明在传统的诱导剂5-氮杂胞苷基础上，额外添加了血管紧张素II和转录生长因子β1两种适宜组分，利用三者的联合作用共同诱导羊膜间充质干细胞分化为心肌样细胞，能够显著提高羊膜间充质干细胞的诱导分化率。
附图说明
图1所示为hAMSCs各表面抗原流式细胞术检测结果；
图2所示为hAMSCs各组诱导分化率结果比较。
具体实施方式
本发明实施例公开了一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液及方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。本发明产品和方法已通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品和方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
以下就本发明所提供的一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液及方法做进一步说明。
实施例1：hAMSCs原代分离培养、鉴定及传代
取材：无菌条件下取38-40周正常剖宫产胎盘，无肝炎、梅毒、HIV等传染性疾病，产妇及其家属对胎盘可能用于科学研究均签署了知情同意书。
漂洗：用手术剪把整个羊膜从胎盘上剪下来放入15cm玻璃培养皿中，去除血块和损伤较严重的部位，PBS缓冲液漂洗3-4次。
剪碎：用手术剪将羊膜剪成(30-50)cm2大小的组织，分装到50mL离心管中(体积10-15ml)。
胰酶消化：加入三倍体积的0.25％胰蛋白酶，置37℃、200R恒温振荡器中消化30min，每10min取出用手剧烈摇晃。
二次漂洗：消化结束后，用镊子将消化好的组织块转移至装有PBS缓冲液的250mL储液瓶中，盖紧盖子用手剧烈摇晃，PBS缓冲液漂洗2-3次。
二次剪碎：用手术剪将羊膜剪成(10-30)cm2大小的组织。
Ⅰ型胶原酶消化：加入20mL的0.5％Ⅰ型胶原酶，补加DMEM/F12培养基至终体积为100mL。置37℃、200R恒温振荡器中消化，每10min取出用手剧烈摇晃，直到组织块完全消化。
过筛：消化完成后，消化好的组织液分装至50mL离心管，每管20-25mL，加入等体积的PBS缓冲液，2000rpm离心5min。弃上清后加入10mLPBS缓冲液重悬细胞沉淀，200μm细胞筛网过滤。2000rpm离心5min。弃上清，加入5-10mL含10％FBS的DMEM/F12完全培养基重悬细胞。
细胞计数与接种：对细胞悬液进行细胞计数，根据计数结果调整细胞悬液密度到1.0-1.5×105cell/mL接种于培养皿中，5％CO2培养箱37℃培养。
原代培养：细胞接种48h后，对原代细胞进行换液，更换新鲜的含10％FBS的DMEM/F12完全培养基，放置5％CO2培养箱37℃培养。
传代：待细胞长满80-90％，用吸管吸弃旧培养液，加入2-3mL0.25％胰蛋白酶，消化1-3分钟，镜下观察细胞收缩变圆时，立即加入适量含10％FBS的DMEM/F12培养液终止消化，收集细胞，1500rpm离心5min，弃上清。加入适量含10％FBS的DMEM/F12完全培养基，进行细胞计数，按1×105cell/mL密度接种于培养皿中进行传代培养，5％CO2培养箱37℃培养，每隔3-4天传代一次。
hAMSCs鉴定：取第2代对数生长期细胞，流式细胞术检测表面抗原CD105、CD90、CD73、CD45、CD34、HLA-DR表达情况，Cell-Quest软件分析结果。每个样本分析8000～10000个细胞。
流式细胞术检测结果显示，细胞表面抗原CD105、CD90、CD73表达阳性，而CD45、CD34、HLA-DR表达阴性，说明本发明中得到的hAMSCs属来源于中胚层的间充质干细胞(表1，图1)。
表1 hAMSCs表面抗原阳性表达率
| 细胞表型 | CD105 | CD90 | CD73 | HLA-DR | CD34 | CD45 |
| 阳性表达率(％) | 99.60 | 99.50 | 100.00 | 0.00 | 0.00 | 0.20 |
实施例2：本发明诱导液诱导hAMSCs分化为心肌样细胞
1、诱导液组成
(1)含10％FBS、5μmol/L 5-aza、5μg/L TGFβ1、5μmol/L Ang-II的DMEM/F12培养液。
(2)含10％FBS、10μmol/L 5-aza、10μg/L TGFβ1、5μmol/L Ang-II的DMEM/F12培养液。
(3)含10％FBS、10μmol/L 5-aza、5μg/L TGFβ1、10μmol/L Ang-II的DMEM/F12培养液。
(4)含10％FBS、5μmol/L 5-aza、10μg/L TGFβ1、5μmol/L Ang-II的DMEM/F12培养液。
2、诱导分化方法
选取实施例1中第3代hAMSCs，按1×104cells/mL密度接种于放有多聚赖氨酸处理的无菌盖玻片的六孔板中，每孔加入2mL含10％FBS的DMEM/F12培养基，贴壁培养24h后更换诱导液，在37℃、5％CO2、饱和湿度静置培养，每隔2-3天更换新的诱导液。
实施例3：不同诱导液诱导分化对比试验
为了对比不同诱导液对诱导分化的影响，本实施例设置了如表2中的各个诱导液处理组，其中实验组为本发明诱导液。
表2各组分化诱导液配方
| 组别 | 基础培养基 | FBS | 5-aza | TGFβ1 | Ang-II |
| 实验组1 | DMEM/F12 | 10％ | 5μmol/L | 5μg/L | 5μmol/L |
| 实验组2 | DMEM/F12 | 10％ | 10μmol/L | 10μg/L | 5μmol/L |
| 实验组3 | DMEM/F12 | 10％ | 10μmol/L | 5μg/L | 10μmol/L |
| 实验组4 | DMEM/F12 | 10％ | 5μmol/L | 10μg/L | 5μmol/L |
| 对照组1 | DMEM/F12 | 10％ | —— | —— | —— |
| 对照组2 | DMEM/F12 | 10％ | 10μmol/L | —— | —— |
| 对照组3 | DMEM/F12 | 10％ | —— | 10μg/L | —— |
| 对照组4 | DMEM/F12 | 10％ | —— | —— | 5μmol/L |
| 对照组5 | DMEM/F12 | 10％ | 5μmol/L | 5μg/L | 1μmol/L |
| 对照组6 | DMEM/F12 | 10％ | 15μmol/L | 15μg/L | 10μmol/L |
根据表2设置的各诱导液，按照实施例2中的诱导分化方法对相同来源、代数的hAMSCs进行诱导分化4周，然后通过取出细胞爬片，按照免疫组化染色试剂盒的说明书进行肌间线蛋白(desmin)、心肌肌钙蛋白I(troponin I)和心肌肌钙蛋白T(troponin T)的免疫组化染色，DAB显色。
将各组放有盖玻片6孔培养板内培养液吸出，PBS缓冲液漂洗细胞铺片5分钟，重复3次。用4％多聚甲醛固定15分钟，PBS缓冲液漂洗后甩干，中性树胶粘附于载玻片上，4℃冰箱过夜。滴加3％过氧化氢孵育15分钟，消除内源性过氧化物酶的活性，PBS缓冲液漂洗5分钟，重复3次。分别滴加适量一抗(desmin、troponin I、troponin T)，37℃湿盒内孵育1小时，4℃过夜。次日取出后PBS缓冲液漂洗5分钟，滴加二抗，37℃湿盒内孵育40分钟，PBS缓冲液漂洗5分钟，重复3次，滴加新鲜配制的DAB溶液显色5-10分钟，在光镜下观察，用自来水进行冲洗终止显色。将甩干片子后，苏木素复染1分钟，分化返蓝，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。对各组所得细胞经免疫组化检测后，对desmin、troponin I、troponin T染色的细胞按公式：
诱导分化率＝染色阳性细胞数/细胞总数×100％
进行计数，计算出各组的分化率进行比较。每组取样3次，分别检测后统计数据。统计结果如表3和图2。
表3各组细胞分化率(*表示p<0.05，**表示p<0.01)
表3、图2结果显示，对照组1为阴性对照组，细胞无着色；其余各组中，三种蛋白均有细胞着色，表明desmin、troponin I、troponin T均表达阳性。其中实验组1、实验组2、实验组3和实验组4与对照组1-6之间分化率有极显著性差异(**，p<0.01)；实验组2与实验组1、实验组3、实验组4均有显著性差异(*，p<0.05)，实验组2中细胞着色最多，诱导分化率为43.36±1.01％，显著高于其他各组，说明本发明所用分化培养基能有效的诱导hAMSCs向心肌样细胞分化，并具有较高的诱导分化率。
以上所述只是用于理解本发明的方法及其核心思想，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利的保护范围。
Claims (9)
1.一种诱导羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液，其特征在于，该诱导液为包括胎牛血清、5-氮杂胞苷、血管紧张素II和转录生长因子β1的DMEM/F12培养液。
2.根据权利要求1所述诱导液，其特征在于，该诱导液为包括10％胎牛血清、5-10μmol/L 5-氮杂胞苷、5-10μmol/L血管紧张素II和5-10μg/L转录生长因子β1的DMEM/F12培养液。
3.根据权利要求1所述诱导液，其特征在于，该诱导液为包括10％胎牛血清、5μmol/L5-氮杂胞苷、5μmol/L血管紧张素II和5μg/L转录生长因子β1的DMEM/F12培养液；或包括10％胎牛血清、10μmol/L 5-氮杂胞苷、5μmol/L血管紧张素II和10μg/L转录生长因子β1的DMEM/F12培养液；或包括10％胎牛血清、10μmol/L 5-氮杂胞苷、10μmol/L血管紧张素II和5μg/L转录生长因子β1的DMEM/F12培养液；或包括10％胎牛血清、5μmol/L 5-氮杂胞苷、5μmol/L血管紧张素II和10μg/L转录生长因子β1的DMEM/F12培养液。
4.权利要求1-3任意一项所述诱导液在诱导羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化和/或制备诱导羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导试剂中的应用。
5.一种诱导羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，其特征在于，将羊膜间充质干细胞先进行贴壁培养，然后更换权利要求1-3任意一项所述诱导液诱导培养，期间定期更换诱导液。
6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，将羊膜间充质干细胞按1×104cells/mL密度接种于含10％胎牛血清DMEM/F12培养液中贴壁培养24h，然后更换权利要求1-3任意一项所述诱导液，在37℃、5％CO2、饱和湿度环境下静置诱导培养4周，期间2-3天换液一次。
7.根据权利要求5或6所述方法，其特征在于，所述羊膜间充质干细胞为人羊膜间充质干细胞。
8.根据权利要求5或6所述方法，其特征在于，所述羊膜间充质干细胞由以下方法制备获得：
用剪刀将羊膜从胎盘上剪下并清洗，然后剪成小块加入胰蛋白酶消化，消化后再次剪碎，加入I型胶原酶消化，消化后过筛，加入含10％FBS的DMEM/F12完全培养基重悬细胞并进行培养，至细胞长满80-90％传代，定期更换新鲜的含10％FBS的DMEM/F12完全培养基。
9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述传代按照如下方法进行：
待原代细胞长满80-90％，用吸管吸弃旧培养液，加入胰蛋白酶消化，镜下观察细胞收缩变圆时，立即加入含10％FBS的DMEM/F12培养液终止消化，离心收集细胞，加入适量含10％FBS的DMEM/F12完全培养基传代培养，每隔3-4天传代一次。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710053619.2A CN106701666A (zh) | 2017-01-22 | 2017-01-22 | 一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液及方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710053619.2A CN106701666A (zh) | 2017-01-22 | 2017-01-22 | 一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液及方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106701666A true CN106701666A (zh) | 2017-05-24 |
Family
ID=58908891
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710053619.2A Pending CN106701666A (zh) | 2017-01-22 | 2017-01-22 | 一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液及方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106701666A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112342189A (zh) * | 2020-11-11 | 2021-02-09 | 江苏省苏北人民医院 | 一种诱导脂肪来源间充质干细胞肌源性分化的方法 |
| CN113088488A (zh) * | 2021-04-14 | 2021-07-09 | 贵州医科大学附属医院 | 一种人羊膜间充质干细胞悬液的制备与应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104450611A (zh) * | 2014-11-28 | 2015-03-25 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种人羊膜间充质干细胞原代分离及培养方法 |
| CN106244530A (zh) * | 2016-09-30 | 2016-12-21 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种细胞培养液及其应用和诱导骨骼肌干细胞向心肌样细胞分化的方法 |
| CN106318903A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-01-11 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种细胞培养液及其应用和诱导牙周膜干细胞向心肌样细胞分化的方法 |
-
2017
- 2017-01-22 CN CN201710053619.2A patent/CN106701666A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104450611A (zh) * | 2014-11-28 | 2015-03-25 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种人羊膜间充质干细胞原代分离及培养方法 |
| CN106244530A (zh) * | 2016-09-30 | 2016-12-21 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种细胞培养液及其应用和诱导骨骼肌干细胞向心肌样细胞分化的方法 |
| CN106318903A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-01-11 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种细胞培养液及其应用和诱导牙周膜干细胞向心肌样细胞分化的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 姜珊: "羊水间充质干细胞体外联合诱导分化为心肌细胞的效果研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
| 孙国栋: "不同浓度胎牛血清培养下骨髓间充质干细胞诱导为心肌样细胞的比较", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
| 王静: "血管紧张素Ⅱ联合5-氮杂胞苷对小鼠脂肪间充质干细胞向心肌细胞和内皮细胞分化的影响", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112342189A (zh) * | 2020-11-11 | 2021-02-09 | 江苏省苏北人民医院 | 一种诱导脂肪来源间充质干细胞肌源性分化的方法 |
| CN113088488A (zh) * | 2021-04-14 | 2021-07-09 | 贵州医科大学附属医院 | 一种人羊膜间充质干细胞悬液的制备与应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Adult bone-marrow-derived mesenchymal stem cells contribute to wound healing of skin appendages | |
| Danoviz et al. | Skeletal muscle satellite cells: background and methods for isolation and analysis in a primary culture system | |
| Sharma et al. | Comparative analysis of human-derived feeder layers with 3T3 fibroblasts for the ex vivo expansion of human limbal and oral epithelium | |
| CN104630144B (zh) | 一种脐血间充质干细胞的分离及培养方法 | |
| CN107022521A (zh) | 壁蜕膜组织冻存、复苏及分离培养间充质干细胞的方法 | |
| JP2007524411A (ja) | 角膜輪部由来の未分化幹細胞を有する組織系 | |
| CN105779395A (zh) | 一种永生化的犬脂肪间充质干细胞系及其构建方法 | |
| CN104342402B (zh) | 一种骨髓去分化间充质干细胞的培养方法 | |
| CN108685948B (zh) | 一种医用细胞修复剂的制备方法 | |
| Collins et al. | Isolation and grafting of single muscle fibres | |
| Akhavan-Tavakoli et al. | In vitro differentiation of menstrual blood stem cells into keratinocytes: a potential approach for management of wound healing | |
| CN105331579A (zh) | 人睾丸间质干细胞的分离、培养方法及其用途 | |
| CN109234229A (zh) | 从胎盘血管分离间充质干细胞的方法和所用消化酶组合物 | |
| CN108103016A (zh) | 一种从脐带中提取间充质干细胞的制备方法 | |
| CN104212763A (zh) | 一种睾丸间质干细胞的分离、培养方法及其用途 | |
| CN105850979A (zh) | 一种骨髓间充质干细胞的冻存保护液及冻存方法 | |
| Schneider et al. | Differentiating the stem cell pool of human hair follicle outer root sheath into functional melanocytes | |
| Borzou et al. | The effect of age and type of media on growth kinetics of human amniotic fluid stem cells | |
| CN106119191A (zh) | 一种胎盘绒毛板间充质干细胞及临床化制备方法 | |
| CN106244530A (zh) | 一种细胞培养液及其应用和诱导骨骼肌干细胞向心肌样细胞分化的方法 | |
| CN106701666A (zh) | 一种诱导人羊膜间充质干细胞向心肌样细胞分化的诱导液及方法 | |
| CN105112359A (zh) | 小鼠脐带间充质干细胞的分离培养方法 | |
| CN109628388A (zh) | 用消化酶组合物从胎盘血管分离间充质干细胞 | |
| CN108715831A (zh) | 间充质干细胞条件培养基在改善缺氧/复氧诱导的细胞损伤中的应用 | |
| CN108148806A (zh) | 一种胎盘造血干细胞的快速分离方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170524 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |