CN106596766A - 玛咖超临界co2提取物中玛咖酰胺b含量的分析方法 - Google Patents

玛咖超临界co2提取物中玛咖酰胺b含量的分析方法 Download PDF

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张易
马晋芳
葛发欢
张陈
彭银
叶静
周飞贤
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Sun Yat Sen University
Guangzhou Zhongda Nansha Technology Innovation Industrial Park Co Ltd
National Sun Yat-sen University
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Guangzhou Zhongda Nansha Technology Innovation Industrial Park Co Ltd
National Sun Yat-sen University
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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02Column chromatography

Abstract

本发明涉及玛咖超临界CO2提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,包括以下步骤:溶液的配制、标准线的绘制以及浓度计算。通过N‑苄基十六烷酰胺标准品溶液的浓度与峰面积,拟合出标准线,再根据标准线计算出玛咖超临界提取物中N‑苄基十六烷酰胺的含量。本发明的分析方法不仅精密度高、重复性好,而且稳定性优异,回收率高。另外,本发明所述液相色谱测试N‑苄基十六烷酰胺的峰面积,N‑苄基十六烷酰胺峰的分离度大,选择性好,灵敏度高。

Description

玛咖超临界C〇2提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种玛咖酰胺B含量的分析方法,尤其涉及玛咖超临界C02提取物中玛 咖酰胺B含量的分析方法。
背景技术
[0002] 玛咖是十字花科独行菜属一年生或两年生草本植物。玛咖块根中含有丰富的营养 物质及次生代谢产物。研究结果表明,玛咖具有抗疲劳、改善性功能、提高生育能力、减少前 列腺增生、缓解更年期综合症、等多种功效,超临界C0 2萃取能较好的富集玛咖酰胺。玛咖酰 胺是玛咖中特有的功效成分,N-苄基十六烷酰胺是一种玛咖酰胺类成分,N-苄基十六烷酰 胺又名玛咖酰胺B,N_苄基十六烷酰胺具有延长小鼠负重游泳时间、增强小鼠抗疲劳作用。 然而,目前没有对玛咖提取物中N-苄基十六烷酰胺含量准确分析方法。
发明内容
[0003] 针对上述背景中的问题,本发明提供一种准确性高的玛咖超临界C02提取物中玛 咖酰胺B含量的分析方法。
[0004] 本发明的目的将通过以下技术方案实现:玛咖超临界C〇2提取物中玛咖酰胺B含量 的分析方法,包括以下步骤:
[0005] (1)溶液的配制:包括N-苄基十六烷酰胺标准品溶液和玛咖测试品溶液,N-苄基十 六烷酰胺标准品溶液通过将N-苄基十六烷酰胺溶解在甲醇中制得,玛咖测试品溶液通过将 玛咖超临界C0 2提取物溶解在甲醇中过滤后得到;
[0006] (2)标准线的绘制:测定不同浓度的N-苄基十六烷酰胺标准品溶液的液相色谱,得 出不同浓度的N-苄基十六烷酰胺的峰面积,并根据N-苄基十六烷酰胺的浓度与峰面积,拟 合标准线;
[0007] (3)浓度计算:测定玛咖测试品溶液的液相色谱,得出玛咖测试品中N-苄基十六烷 酰胺的峰面积,通过标准线,从而计算出玛咖超临界提取物中N-苄基十六烷酰胺的含量。
[0008] 优选的,所述的玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,所述玛咖测 试品溶液将玛咖超临界提取物溶解在甲醇中,采用〇. 45mi微孔滤膜进行过滤。
[0009] 优选的,所述的玛咖超临界C〇2提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,所述液相色 谱采用反相C 18色谱柱。
[0010] 优选的,所述的玛咖超临界C〇2提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,所述液相色 谱的流动相为乙腈-水或者乙腈-酸,其中酸的体积分数为〇.5%_1.0%。
[0011] 优选的,所述的玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,所述酸为甲 酸、冰乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或多种。
[0012] 优选的,所述的玛咖超临界C〇2提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,所述液相色 谱的检测波长为210-260nm〇
[0013] 优选的,所述的玛咖超临界C〇2提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,所述液相色 谱的柱温为25-40 °C。
[0014] 优选的,所述的玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,所述液相色 谱的流速为0.6-1 .Oml/min。
[0015] 本发明的有益效果是:本发明的分析方法不仅精密度高、重复性好,而且稳定性优 异,回收率高。另外,本发明所述液相色谱测试N-苄基十六烷酰胺的峰面积,N-苄基十六烷 酰胺峰的分离度大,选择性好,灵敏度高。
附图说明
[0016] 图1为本发明实施例2中玛咖测试品的液相色谱图;
[0017] 图2为本发明实施例3中N-苄基十六烷酰胺标准品溶液的液相色谱图。
具体实施方式
[0018] 为更好地理解本发明,下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述,但不 可理解为对本发明的限定,对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的 改进与调整,也视为落在本发明的保护范围内。
[0019] 实施例1
[0020] 玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,包括以下步骤:
[0021] (1)溶液的配制:包括N-苄基十六烷酰胺标准品溶液和玛咖测试品溶液,N-苄基十 六烷酰胺标准品溶液通过将N-苄基十六烷酰胺溶解在甲醇中制得,玛咖测试品溶液将玛咖 超临界提取物溶解在甲醇中,采用〇. 45mi微孔滤膜进行过滤得到;
[0022] (2)标准线的绘制:测定不同浓度的N-苄基十六烷酰胺标准品溶液的液相色谱,得 出不同浓度的N-苄基十六烷酰胺的峰面积,并根据N-苄基十六烷酰胺的浓度与峰面积,拟 合标准线;
[0023] (3)浓度计算:测定玛咖测试品溶液的液相色谱,得出玛咖测试品中N-苄基十六烷 酰胺的峰面积,通过标准线,从而计算出玛咖超临界提取物中N-苄基十六烷酰胺的含量(即 每克玛咖超临界提取物中N-苄基十六烷酰胺的质量,单位mg/g)。
[0024] 液相色谱采用反相C18色谱柱。液相色谱的流动相为乙腈-水或者乙腈-酸,其中酸 的体积分数为〇.5%-1.0%,酸为甲酸、冰乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或多种。液相色谱 的检测波长为210-26011111,液相色谱的柱温为25-40°(:。液相色谱的流速为0.6-1.01111/1^11。 [0025] 液相色谱的型号为:UltiMate 3000高效液相色谱仪(包括梯度栗SR-3000、自动进 样器WPS-3000、柱恒温系统TCC-3000、检测器DAD-3000、色谱工作站变色龙7.2)(赛默飞世 尔科技公司);色谱柱的型号为:Diamonsil Plus C18(4.6mmX250mm,5iim)〇 [0026]乙腈(色谱纯,德国默克公司);纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司);其他试剂均为 分析纯。
[0027] 实施例2
[0028] 在实施例1的基础上,玛咖测试品通过取玛咖超临界提取物〇. lg,加 KM甲醇超声 溶解,采用0.45M1微孔滤膜过滤得到。液相色谱的流动相为磷酸(A)-乙腈(B),其中,磷酸的 体积分数为1. 〇 %,流速为1. 〇ml/min,柱温为35°C,检测波长210nm,梯度洗脱(如下表1),得 到了玛咖测试品的液相色谱图(如图1)。
[0029] 表 1
[0030]
Figure CN106596766AD00051
[0032]并且根据N-苄基十六烷酰胺标准品溶液的浓度与峰面积的关系,得到了线性拟合 方程,y = 3.9049X-0.0063,相关系数为0.9995,其中,x表示N-苄基十六烷酰胺标准品溶液 中N-苄基十六烷酰胺的浓度,y表示对应N-苄基十六烷酰胺的峰面积。
[0033] 实施例3:精密度实验
[0034] 在实施例2的基础上,N-苄基十六烷酰胺标准品溶液中N-苄基十六烷酰胺的浓度 为0.21mg/ml,采用该浓度连续进样6次,得到其液相色谱图(如图2)并记录N-苄基十六烷酰 胺的峰面积,求出对应的平均值(Average)及相对标准偏差(RSD%),其结果如下表2:
[0035] 表 2
[0036]
Figure CN106596766AD00052
[0037] 由表2可知,平均值(Average)为21.3186,相对标准偏差(RSD%)为0.70,精密度 尚。
[0038] 实施例4:重复性实验
[0039] 在实施例2的基础上,同一批次的玛咖超临界提取物,重复制备六份玛咖测试品溶 液,测定其液相色谱,并且根据实施例2中的线性拟合方程,计算6份样品中N-苄基十六烷酰 胺的含量(w),并求出对应的平均值(Average)及相对标准偏差(RSD%),其结果如表3所示。
[0040] 表 3
[0041]
Figure CN106596766AD00053
[0042] 由表3可知,平均值(Average)为10.7918,相对标准偏差(RSD%)为0.97,符合规 定,重复性好。
[0043] 实施例5:稳定性实验
[0044] 在实施2的基础上,取同一批次的玛咖测试品溶液,进行液相色谱仪分析,分别于 0、2、4、8、12、24h测定其液相图谱,记录N-苄基十六烷酰胺的峰面积(w),并求出平均值 (Average)及相对标准偏差(RSD %),其结果如表4所示。
[0045] 表 4
[0046]
Figure CN106596766AD00061
-
[0047] 由表4可知,平均值(Average)为8.4777,相对标准偏差(RSD%)为2.31,符合规定, 稳定性好。
[0048] 实施例6:回收率实验
[0049] 在实施例2的基础上,计算出玛咖测试品溶液中N-苄基十六烷酰胺的含量,为初始 量,并加入初始量80 %、100 %、120 %的N-苄基十六烷酰胺标准品溶液(加入量),再测试溶 液中N-苄基十六烷酰胺的含量,为实测量。其中,每组含量设置3次平行实验,考察N-苄基十 六烷酰胺的平均值(Average)及相对标准偏差(RSD%),结果如表5所示。
[0050] 其中
Figure CN106596766AD00062
[0051] 表5:
[0052]
Figure CN106596766AD00063
[0053] 由表5可知,三组实验的平均值(Average)分别为98.76、103.23、98.78,相对标准 偏差(RSD%)分别为1.62、1.67、1.10,符合规定,回收率高。
[0054] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精 神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1. 玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,其特征在于,包括以下步骤: (1) 溶液的配制:包括N-苄基十六烷酰胺标准品溶液和玛咖测试品溶液,N-苄基十六烷 酰胺标准品溶液通过将N-苄基十六烷酰胺溶解在甲醇中制得,玛咖测试品溶液通过将玛咖 超临界C0 2提取物溶解在甲醇中过滤后得到; (2) 标准线的绘制:测定不同浓度的N-苄基十六烷酰胺标准品溶液的液相色谱,得出不 同浓度的N-苄基十六烷酰胺的峰面积,并根据N-苄基十六烷酰胺的浓度与峰面积,拟合标 准线; (3) 浓度计算:测定玛咖测试品溶液的液相色谱,得出玛咖测试品中N-苄基十六烷酰胺 的峰面积,通过标准线,从而计算出玛咖超临界提取物中N-苄基十六烷酰胺的含量。
2. 根据权利要求1所述的玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,其特征在 于:所述玛咖测试品溶液将玛咖超临界提取物溶解在甲醇中,采用〇.45μπι微孔滤膜进行过 滤。
3. 根据权利要求1所述的玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺Β含量的分析方法,其特征在 于:所述液相色谱采用反相C 18色谱柱。
4. 根据权利要求1所述的玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,其特征在 于:所述液相色谱的流动相为乙腈-水或者乙腈-酸,其中酸的体积分数为〇.5%-1.0%。
5. 根据权利要求4所述的玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,其特征在 于:所述酸为甲酸、冰乙酸、三氟乙酸、磷酸中的一种或多种。
6. 根据权利要求1所述的玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,其特征在 于:所述液相色谱的检测波长为210_260nm。
7. 根据权利要求1所述的玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,其特征在 于:所述液相色谱的柱温为25-40°C。
8. 根据权利要求1所述的玛咖超临界C02提取物中玛咖酰胺B含量的分析方法,其特征在 于:所述液相色谱的流速为〇. 6-1.0ml/min。
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