CN106226431A - 一种王族海棠叶茶抗氧化成分组成及品质分析方法 - Google Patents

一种王族海棠叶茶抗氧化成分组成及品质分析方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种王族海棠叶茶抗氧化成分组成及品质分析方法,该方法以海棠叶制成的茶为材料,采用Folin‑Ciocalteau法、紫外可见分光光度计、清除二苯代苦味酰基自由基等方法对其进行抗氧化活性及品质差异性分析,并按照《GB/T23776‑2009茶叶感官评审方法》对海棠叶茶进行感官评价。结果表明:王族海棠叶茶色泽均匀,香气浓耐闻,口感醇香,具有茶涩味,整体品质佳,说明王族海棠茶抗氧化能力强,品质佳,开发成新型茶叶潜力大。

Description

一种王族海棠叶茶抗氧化成分组成及品质分析方法
技术领域
[0001] 本发明属于农业技术领域,涉及一种王族海棠叶茶抗氧化成分组成及品质分析方 法。
背景技术
[0002] 小麦是小麦系植物的统称,是单子叶植物,是一种在世界各地广泛种植的禾本科 植物,小麦的颖果是人类的主食之一,磨成面粉后可制作面包、馒头、饼干、面条等食物;发 酵后可制成啤酒、酒精、白酒(如伏特加),或生质燃料。小麦富含淀粉、蛋白质、脂肪、矿物 质、钙、铁、硫胺素、核黄素、烟酸、维生素 A及维生素 C等。
[0003] 随着社会的发展,人们对茶的认识已经涵盖了可用来冲泡、保健的一切饮品,例如 近年研制成的枸杞叶茶、梨枣叶茶、香椿叶茶等。梨枣叶与香椿叶之所以能开发成茶叶,与 其富含多酚及较强的抗氧化能力密不可分。多酚是植物体中重要的次生代谢产物,具有生 物活性及药理功能,其含量与抗氧化能力具有相关性,长期饮用富含多酚的茶叶能改善老 龄化神经细胞,降低癌症发病率及死亡率。据记载,海棠叶作为茶饮已有400多年历史,在三 峡地区广为饮用。其中湖北海棠又名茶海棠、花海茶,俗称花红茶,属于无毒物质,国家卫计 委于2014年批准其叶为新食品原料,但对湖北海棠叶茶多酚含量及抗氧化能力研究鲜有报 道。
发明内容
[0004] 本发明的目的在于克服上述技术存在的缺陷,提供一种王族海棠叶茶抗氧化成分 组成及品质分析方法,对王族海棠(Malus'R 〇yalty')成色色素分析中发现,其叶也富含多 酚成分且比湖北海棠叶茶高,这些研究为多种海棠叶开发成保健茶提供了可能性。将王族 海棠叶制作茶,测定其总酸、单体酸、清除DPPH ·自由基能力、ABTS+'清除能力、总还原能 力、水浸出物、可溶性糖、氨基酸的含量多少,并对海棠叶茶感观品质进行评价,为海棠叶茶 的制作进一步提供理论依据。
[0005] 其具体技术方案为:
[0006] -种王族海棠叶茶抗氧化成分组成及品质分析方法,包括以下步骤:
[0007] 步骤1、抗氧化活性物质提取
[0008] 抗氧化活性物质提取称取茶叶5g,450mL沸水冲泡IOmin,室温下冷却过滤后定容 到500mL,6000r/min离心5min,取上清液冷藏备用。
[0009] 步骤2、总酚含量测定
[0010] 取5μ1 提取液于试管中,分别加入 1.58ml (ΜΗ2〇、100μ1 FC,Folin-ciocalteu:H2〇 = 1:1,混匀充分反应lmin,再加入300μ120%水合碳酸钠 W/V混匀,室温黑暗中放置30min, 于波长765nm处测量混合液的吸光度,总酚以没食子酸当量mg GAE/100g DW表示;
[0011] 步骤3、酚类物质分析
[0012] 酸类物质分析液相色谱检测参数:Inertsil 0DS-3柱:4 · 6mmX 250mm,5ym(GL, Japan),柱温30°C,流速1.0 mL/min。流动相参数;A: 10 %的甲酸水溶液,B:色谱级乙腈包含 10%的甲酸,1.36%的水。采用梯度洗脱,洗脱程序为;95%A(0min),85%A(25min),78%A (42min),64%A(60min),95%A(75min)。酚类物质检测波长280,320,365 和 525nm。
[0013]步骤4、抗氧化活性测定
[0014] 取IOyL甲醇提取液和2mL的62.5μπιο I/L DPPH溶液,混匀后立即测517nm波长下的 吸光度Al,将其在室温黑暗下放置30min,再次测定吸光度A2,以Trolox为标准品,样品 DPPH ·清除能力以100g干样中所含Trolox的当量毫摩尔数表示μπιοί Trolox eq./100g Dff ;
[0015] 步骤5、ABTS+·清除能力测定
[0016] 配制7111111〇1/1的48了5+溶液,用0.2111 〇1/1?!14.5的醋酸钠缓冲液将其稀释至吸光 度为0.7 ± 0.02,取ImL稀释后的ABTS+ ·溶液和5yL甲醇提取液,混匀后于734nm波长下测定 吸光度Al,反应2min后,再次测定吸光度A2,以Trolox水溶性VE作为标准品,结果以每100g 茶样样品中含有Trolox的当量μ molΤΕ/lOOg表示;
[0017] 步骤7、总还原力测定:将IOyL的样品溶液与0.2mo I/L的磷酸钠溶液pH = 6.6 2mL 和I %铁氰化钾溶液2mL混合后,于50°C水浴锅下保温反应20min,再快速冷却后加入10 %三 氯乙酸21111^混勾,于300〇1'/1]1;[11离心101]1;[11,得到上清液。取111^上清液,然后加入0.1%的三氯 化铁溶液0.2mL和ImL蒸馏水混匀于试管中,反应30min后于700nm下测定吸光值,以维生素 C 为标准品,样品中所含维生素 C的当量毫克数表示mg vitamin C eq./100gDW;
[0018] 步骤8、海棠叶茶滋味品质分析
[0019] 包括水浸出物含量测定、可溶性糖含量测定、氨基酸含量测定、茶多酚含量测定;
[0020] 步骤9、海棠叶茶感官品质审评
[0021] 冲泡方式为:样品4克,放入200mL透明的茶杯中,倒入开水冲泡,封口静置4min,由 具有感官评价技能的7人组成评价小组对海棠叶茶进行感官评价,采用权重值对香气、滋 味、汤色进行评分,观察评判后记录数据,感官品质计算公式:百分制X权重值U,U={香气 (30 % ),滋味(40 % ),汤色(30 % )},总分=香气+滋味+汤色。
[0022] 进一步,步骤8中所述茶多酚含量测定方法具体为:
[0023] 称取2g,精确到0.00Ig,茶叶样品于250mL锥形瓶中,加入200mL煮沸蒸馏水,90°C 水浴中浸提lOmin,过滤,残渣用热蒸馏水洗涤2~3次,合并滤液,冷却至室温、定容,准确吸 取茶叶提取液2mL,注入25mL的容量瓶中,加入蒸馏水4mL,酒石酸盐溶液5mL,用pH7.5磷酸 盐缓冲溶液稀释定容至25mL,混匀后,在540nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度; [0024]茶多酚(% ) =3 · 914 XE X V。X 100/1000/Vi/W
[0025] 式中:E:吸光值;Vo:茶叶浸提液总体积(250mL) ;V1:测定所用茶叶浸提液体积 (2mL) ;W:茶叶样品的干物质质量。
[0026]与现有技术相比,本发明的有益效果:
[0027]本发明对王族海棠(Malus'R〇yalty')成色色素分析中发现,其叶也富含多酚成分 且比湖北海棠叶茶高,这些研究为多种海棠叶开发成保健茶提供了可能性。将王族海棠叶 制作茶,测定其总酸、单体酸、清除DPPH ·自由基能力、ABTS+·清除能力、总还原能力、水浸 出物、可溶性糖、氨基酸的含量多少,并对海棠叶茶感观品质进行评价,为海棠叶茶的制作 进一步提供理论依据。实验结果表明,王族海棠与湖北海棠叶茶相比较,具有色泽均匀,其 具备香气浓耐闻,口感醇香,具茶涩味的特点,适宜制茶。
附图说明
[0028]图1是海棠叶茶制作工艺流程图;
[0029]图2是HPLC分析王族海棠叶茶酚类物质,其中,1.没食子酸;2.原花青素 B2; 3.根皮 苷;4.绿原酸;5.芦丁;6.栎素;7.矢车菊素半乳糖苷;A.标准样品;B.样品。
具体实施方式
[0030]下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细说明。
[0031 ]如图1所示,海棠叶茶制作工艺,包括以下步骤:
[0032] (1)嫩叶采摘:由西北农林科技大学海棠园提供王族海棠(经西北农林科技大学教 授李厚华鉴定),取其无病虫害的鲜嫩叶(一茎两叶),长度大约3~5cm。根据我国每年采摘 茶叶时间,一般来说在每年的3月下旬至5月中旬之前采摘的茶叶为春茶,8月中旬以后采摘 的茶叶为秋茶。采摘时间在早上比较适宜,因为叶子比较鲜嫩。为使海棠茶达到香气醇正, 质地甘醇的效果,应该采摘那些无病害、无虫咬、叶片肥厚、色泽好的嫩叶。
[0033] (2)嫩叶清洗:把挑选好的王族海棠叶及时用水涮洗,清除次数以嫩叶表面无灰尘 及其他物质即可,涮洗时注意力度,以免破坏嫩叶组织影响后期成品茶效果。
[0034] (3)沥干萎蔫:将涮洗好了的王族海棠叶放在篓孔或纸板上控水,尽量沥干其表面 可见的水分,在通风且干燥地方均匀摊晾,避免太阳光照晒,自然摊晾2~4h使叶片萎蔫,期 间可以将嫩叶翻动1~2次加快沥干萎蔫,失水率控制在5%~15%。
[0035] (4)杀青:酶的活性随着温度的升高,酶的活性渐渐增强,在40-50°C时酶活性最 强,当温度升到70°C时酶活性完全被钝化。杀青破坏嫩叶细胞中的酶活性,使酶的活性钝 化,抑制酶类在高温下的氧化作用,避免嫩叶在加工制作过程中被氧化分解。因此杀青是制 作工艺茶中不可缺少的程序,是至关重要的一步,对后期茶品质影响大。将萎蔫的嫩叶短时 间内进行70°C杀青,以去涩保鲜,破坏嫩叶表层细胞,促进嫩叶中的水分的蒸发为目的,待 王族海棠叶散发出醇香的气味,叶子表面褪色成紫黑色即可。
[0036] (5)揉捻摊晾:揉捻是为了杀青后使叶片成团,揉捻的时间以杀青后的嫩叶散热至 常温再揉,揉捻的力度和时间使其不易散落即可。揉捻后,要对成团的海棠叶进行解团,要 使揉捻成团的海棠叶均匀松散铺开。
[0037] (6)烘干冷却:茶的干燥标准是含水量在6%~7%以下。解团之后,把海棠叶平摊 厚度约Icm放置干纸张的燥箱内进行烘干,烘烤的温度50°C~60°C,烘烤时间以达到干燥标 准即可。将烘烤好的海棠叶茶进行冷却,冷却时注意防潮防湿,时间不宜过长。
[0038] (7)检查包装:烘干冷却后进行色、香、味品质检验,将符合品质要求的立刻包装密 封,防止产品变质影响其价值。
[0039] 1材料与方法
[0040] 1.1材料与仪器
[0041 ]海棠嫩叶均采摘于西北农林科技大学海棠种质资源圃,4月初采摘各品种嫩叶,当 天制茶。色谱级甲醇及乙腈购自品谱公司;标准品没食子酸、原花青素 B2、根皮苷、绿原酸、 芦丁、栎素、矢车菊素半乳糖苷购自天津金测分析技术有限公司;福林酚试剂、DPPH购自西 格玛奥德里奇公司,ABTS购自沃尔森公司;TroIox购自Sigma公司;乙酸乙酯、无水甲醇、盐 酸、无水乙醇、碳酸钠、氢氧化钠、硝酸铝及亚硝酸钠等分析纯试剂购自品谱公司。
[0042] SIGMA3-18K高速冷冻离心机(美国西格玛);JD200-3电子天平(沈阳龙腾电子有限 公司);UV-2450分光光度计(日本岛津);L-2000高效液相色谱仪(日本日立);LGJ-100冷冻 干燥机(北京四环仪器公司);MS-100恒温混匀仪(美国赛默飞);HH-4数显恒温水浴锅国华 电器有限公司;
[0043] 1.2海棠叶茶感官品质审评
[0044] 制作工艺:如图1所示。按对海棠叶茶冲泡及评价评分。冲泡方式为:每样品4克,放 入200mL透明的茶杯中,倒入开水冲泡,封口静置4min,样品匿名。由具有感官评价技能的7 人组成评价小组对海棠叶茶进行感官评价,采用权重值对香气、滋味、汤色进行评分。观察 评判后记录数据。感官品质计算公式:百分制X权重值(U),U={香气(30%),滋味(40%), 汤色(30 % )},总分=香气+滋味+汤色,评分标准如表1所示。
[0045] 表1感官评价标准
[0046] Table I Sensory evaluation standard
Figure CN106226431AD00071
[0049] 1.3实验方法
[0050] 1.3.1抗氧化活性物质提取称取茶叶5g,450mL沸水冲泡IOmin,室温下冷却过滤 后定容到500mL,6000r/min离心5min,取上清液冷藏备用。
[0051 ] 1.3.2总酚含量测定取5μ1提取液于试管中,分别加入1.58ml ddH20、100yl FC $〇1丨11-(^〇〇31七611:!120=1:1),混匀充分反应11^11,再加入30(^120%水合碳酸钠(1八)混 匀,室温黑暗中放置30min,于波长765nm处测量混合液的吸光度。总酚以没食子酸当量(mg GAE/100g DW)表示。
[0052] 1.3.3酚类物质分析酚类物质分析液相色谱检测参数:InertsiI 0DS-3柱:4.6mm X 250mm,5ym(GL,Japan),柱温30°C,流速1.0 mL/min。流动相参数;A: 10%的甲酸水溶液,B: 色谱级乙腈包含10 %的甲酸,1.36 %的水。采用梯度洗脱,洗脱程序为;95 % A (Omin ),85 % A (25min),78%A(42min),64%A(60min),95%A(75min)。酚类物质检测波长280,320,365和 525nm〇
[0053] 1.3.4抗氧化活性测定取IOyL甲醇提取液和2mL的62.5ymol/L DPPH溶液,混匀后 立即测517nm波长下的吸光度A1。将其在室温黑暗下放置30min,再次测定吸光度A2。以 Trolox为标准品,样品DPPH ·清除能力以100g干样中所含Trolox的当量毫摩尔数表示(μ mol Trolox eq./l〇〇g Dff)〇
[0054] 1.3.5 ABTS+·清除能力测定
[0055] 配制7111111〇1/1的48了5+溶液,用0.2111 〇1/1^!14.5的醋酸钠缓冲液将其稀释至吸光 度为0.7 ± 0.02。取ImL稀释后的ABTS+ ·溶液和5yL甲醇提取液,混匀后于734nm波长下测定 吸光度A1。反应2min后,再次测定吸光度A2。以Trolox(水溶性VE)作为标准品,结果以每 100g茶样样品中含有Trolox的当量(μ molΤΕ/lOOg)表示。
[0056] 1.3.6总还原力测定
[0057] 将IOyL的样品溶液与0.2mol/L的磷酸钠溶液(pH = 6.6)2mL和1%铁氰化钾溶液 211^混合后,于50°(:水浴锅下保温反应2〇1^11,再快速冷却后加入10%三氯乙酸21^混匀,于 3000r/min离心10min,得到上清液。取ImL上清液,然后加入0.1%的三氯化铁溶液0.211^和 ImL蒸馏水混勾于试管中,反应30min后于700nm下测定吸光值。以维生素 C为标准品,样品中 所含维生素 C的当量毫克数表示(mg vitamin C eq./g DW)。
[0058] 1.4海棠叶茶滋味品质分析
[0059] 1.4.1水浸出物含量测定参照GB/T 8305-2002《茶水浸出物测定》
[0060] 1.4.2可溶性糖含量测定蒽酮比色法
[00611 1.4.3氨基酸含量测定参照GB/T 8314-2002《茶游离氨基酸总量测定》采用茚三 酮比色法测定
[0062] 1.4.4茶多酚含量测定称取2g(精确到0.OOlg)茶叶样品于250mL锥形瓶中,加入 200mL煮沸蒸馏水,90 °C水浴中浸提I Omi η,过滤,残渣用热蒸馏水洗涤2~3次,合并滤液,冷 却至室温、定容。准确吸取茶叶提取液2mL,注入25mL的容量瓶中,加入蒸馏水4mL,酒石酸盐 溶液5mL,用pH7.5磷酸盐缓冲溶液稀释定容至25mL,混匀后,在540nm处,以试剂空白溶液作 参比,测定吸光度。
[0063]茶多酚(% ) =3 · 914 XE X V。X 100/1000/Vi/W
[0064] 式中:E:吸光值;Vo:茶叶浸提液总体积(250mL) ;V1:测定所用茶叶浸提液体积 (2mL) ;W:茶叶样品的干物质质量。
[0065] 1.5数据处理与分析
[0066] 采用Excel 2003进行数据处理、SPSS Statisticsl9进行显著性分析,0·01<ρ< 〇. 05为差异显著,p<0.0 l为差异极显著,所有样品进行3次重复。
[0067] 2结果与分析
[0068] 2.1总酚含量分析
[0069] 如图2所示,王族海棠叶茶含量范围为(83 · 18 ± 3 · 59 )mg/g。
[0070] 2.2王族海棠叶茶单体酚类物质成分定性分析
[0071]经高效液相色谱仪定性分析,在不同的波长检测下,王族海棠还存在未知的酚类 物质,说明王族海棠叶茶中酚类物质成分比较复杂。其中,王族海棠叶茶中已检测到的酚类 物质有:没食子酸、原花青素 B2、根皮苷、绿原酸、芦丁、栎素、矢车菊素半乳糖苷。5种海棠叶 茶已知的单体酚中,根皮苷含量最高,芦丁与矢车菊素半乳糖苷含量其次,栎素、绿原酸、没 食子酸、原花青素 B2含量较少。没食子酸能有效降低食管癌细胞的增殖与侵袭;原花青素 B2 对脂多糖诱导的细胞凋亡具有保护作用;绿原酸能辅助降血糖;芦丁能保护硝普钠诱导神 经细胞损伤;栎素具有止泻作用的一种黄酮类化合物;矢车菊素半乳糖苷是红色叶的主要 色素,在食品与药品方面开发具有广阔前景;(表2)。
[0072] 表2王族海棠叶茶单体酚含量
[0073] Table 2 Comparative contents of polyphenols in Malus'Royalty'leaf tea
Figure CN106226431AD00091
[0075] 2.3王族海棠叶茶抗氧化能力分析
[0076] 由DPPH自由基清除、ABTS+·清除能力与总还原能力三者呈正相关。DPPH自由基清 除为(85.3±3.67)%,厶8了3+'清除能力为(224.56±3.98)111111〇111^/^,总还原能力为 (224.56±3.98)mg/g。
[0077] 2.4海棠叶茶主要品质分析
[0078]茶叶水浸出物的含量在30%_47%与茶叶品质呈正相关,且可溶性糖使茶汤具有 甜味,对茶汤的滋味影响呈负相关,王族海棠叶茶浸出物在40%上,说明浸出物含量比较丰 富。王族海棠可溶性糖含量较低,这有利于其提高品质。茶多酚使茶汤呈苦涩,氨基酸含量 越多,茶汤越呈鲜爽性,茶叶品质越高,茶多酚和氨基酸的比值(酚氨比)反映茶汤的生化指 标。因此,王族海棠具有低含量茶多酚、高氨基酸的特点,这使王族海棠茶汤具有了苦涩味 较轻,滋味鲜爽,品质优良的物质保证。
[0079]表3王族海棠叶茶主要品质分析
[0080] Table·3 Malus'Royalty'leaf tea major quality analysis
Figure CN106226431AD00092
[0082] 2.5王族海棠叶茶总酚及酚类物质含量与抗氧化活性的相关分析
[0083] 总酚及酚类物质含量与抗氧化活性的相关分析见。王族海棠叶茶酚类物质含量与 抗氧化活性差异性大,总酚含量与还原力相关性明显(P<〇.01),r值为0.91,其他单体酚相 关性未见显著,这表明海棠叶茶中的多酚与对抗氧化起主要作用(表4)。
[0084] 表4王族海棠叶茶总酚及酚类物质含量与抗氧化活性的相关分析
[0085] Tab.4 Correlation analysis of five kinds Malus'Royalty'leaf total phenols,flavonoids and polyphenols content and antioxidant activity
Figure CN106226431AD00093
[0087] 注:.相关性在0.05水平显著;.相关性在0.01水平显著。
[0088] 2.6王族海棠叶茶感官评价
[0089]对王族海棠叶茶在同一条件下冲泡,分别按照茶汤香气、滋味和汤色3项因子评 分,结果表明王族海棠叶茶在评分中总分达到81.54,其色泽均匀,香气浓耐闻,口感醇香具 茶湿味,品质最佳,同时具有相对$父1¾的抗氧化能力D
[0090] 表5王族海棠叶荼感官评分结果
[0091] Table.5 Results for the sensory evaluation o ffive tea ofleaves Malus iRovaltv5
Figure CN106226431AD00101
[0093]以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,本发明的保护范围不限于此,任何熟 悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内,可显而易见地得到的技术方案的简 单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (2)

1. 一种王族海棠叶茶抗氧化成分组成及品质分析方法,其特征在于,包括以下步骤: 步骤1、抗氧化活性物质提取 称取茶叶5g,450mL沸水冲泡lOmin,室温下冷却过滤后定容到500mL,6000r/min离心 5min,取上清液冷藏备用; 步骤2、总酚含量测定 取5μ1 提取液于试管中,分别加入 1.58ml (ΜΗ20、100μ1 FC,Folin-ciocalteu:H20=l: 1,混匀充分反应lmin,再加入300μ1 20 %水合碳酸钠 W/V混匀,室温黑暗中放置30min,于波 长765nm处测量混合液的吸光度,总酚以没食子酸当量mg GAE/100g DW表示; 步骤3、酚类物质分析 液相色谱检测参数:Inertsil 0DS-3柱:4 · 6mm X 250mm,5μηι,柱温30°C,流速 1 · OmL/ min;流动相参数;A: 10 %的甲酸水溶液,B:色谱级乙腈包含10 %的甲酸,1.36 %的水;采用 梯度洗脱,洗脱程序为;95%A 0min,85%A 25min,78%A 42min,64%A 60min,95%A 75min,酚类物质检测波长280,320,365和525nm; 步骤4、抗氧化活性测定 取1 OyL甲醇提取液和2mL的62.5μπιο 1 /L DPPH溶液,混匀后立即测517nm波长下的吸光 度A1,将其在室温黑暗下放置30min,再次测定吸光度A2,以Trolox为标准品,样品DPPH·清 除能力以l〇〇g干样中所含Trolox的当量毫摩尔数表示μπιοί Trolox eq./100gDW; 步骤5、ABTS+·清除能力测定 配制7mmol/L的ABTS+溶液,用0.2mol/L pH 4.5的醋酸钠缓冲液将其稀释至吸光度为 0.7 ± 0.02,取lmL稀释后的ABTS+·溶液和5yL甲醇提取液,混匀后于734nm波长下测定吸光 度A1,反应2min后,再次测定吸光度A2,以Trolox水溶性VE作为标准品,结果以每100g茶样 样品中含有Trolox的当量μ molΤΕ/lOOg表示; 步骤7、总还原力测定:将10yL的样品溶液与0 · 2mol/L的MI3P〇4溶液pH = 6 · 6 2mL和1 % 铁氰化钾溶液2mL混合后,于50 °C水浴锅下保温反应20min,再快速冷却后加入10%三氯乙 酸2mL混匀,于3000r/min离心10min,得到上清液;取lmL上清液,然后加入0.1 %的三氯化铁 溶液0.2mL和lmL蒸馏水混匀